一種嗜氯節(jié)桿菌海藻糖合成酶及其編碼基因和應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明一種嗜氯節(jié)桿菌（AriAroAacier SK33. 001)的海藻糖 合成酶及其編碼基因和應(yīng)用，屬于基因工程和現(xiàn)代酶工程技術(shù)領(lǐng)域。
【背景技術(shù)】
[0002] 海藻糖是一種安全、穩(wěn)定的非還原性二糖，在自然界中廣泛存在，如百余種植物、 藻類、真菌、酵母、細(xì)菌和無脊椎動物如蝦、昆蟲、線蟲等中都含有一定量的海藻糖。特別是 在酵母、霉菌等真菌中，含量可高達(dá)生物體干重的20%以上。海藻糖由兩個吡喃環(huán)葡萄糖以 α-1，1-糖苷鍵連結(jié)而成。海藻糖存在3種光學(xué)異構(gòu)體，但α，α型是最為常見的海藻糖， 其他兩種α，β和β，β型在自然界中很少存在。α，α型海藻糖結(jié)構(gòu)式如式（I)所示。
[0003] 式（I)
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種海藻糖合成酶，其氨基酸序列如SEQ ID NO. 2所示。
2. 權(quán)利要求1所述的海藻糖合成酶的編碼基因，其特征在于：所述的海藻糖合成酶的 編碼基因從嗜氯節(jié)桿菌（ArtAroAacter SK33. 001)克隆得到，具有下述 核苷酸序列之一： (1) 序列表中的SEQ ID NO. 1的核苷酸序列； (2) 編碼序列表中SEQ ID NO. 2氨基酸序列的多核苷酸。
3. 含有權(quán)利要求2所述的海藻糖合成酶編碼基因的重組表達(dá)載體、轉(zhuǎn)基因細(xì)胞系或轉(zhuǎn) 基因重組菌。
4. 根據(jù)權(quán)利要求3所述的重組表達(dá)載體，其特征在于所述的重組表達(dá)載體為將權(quán)利要 求2所述的海藻糖合成酶編碼基因插入到大腸桿菌表達(dá)載體中得到的表達(dá)海藻糖合成酶 的重組表達(dá)載體；所述的大腸桿菌表達(dá)載體優(yōu)選為pET-28a載體。
5. 根據(jù)權(quán)利要求3所述的轉(zhuǎn)基因重組菌，其特征在于所述的轉(zhuǎn)基因重組菌是將權(quán)利要 求4所述重組表達(dá)載體導(dǎo)入大腸桿菌中，篩選得到表達(dá)海藻糖合成酶的轉(zhuǎn)基因重組菌；所 述的大腸桿菌優(yōu)選為大腸桿菌BL21 (DE3)。
6. 權(quán)利要求2說述的海藻糖合成酶編碼基因的應(yīng)用，其特征在于在表達(dá)海藻糖合成酶 中的應(yīng)用。
7. 權(quán)利要求1所述的海藻糖合成酶的應(yīng)用，其特征在于在制備海藻糖中的應(yīng)用。
8. -種表達(dá)權(quán)利要求1所述的海藻糖合成酶的方法，其特征在于是培養(yǎng)權(quán)利要求3或 5所述的轉(zhuǎn)基因重組菌得到海藻糖合成酶。
9. 一種制備海藻糖的方法，其特征在于是以麥芽糖為底物，用權(quán)利要求1所述的海藻 糖合成酶進(jìn)行催化反應(yīng)，得到海藻糖；反應(yīng)底物麥芽糖濃度為l〇〇mM，適合反應(yīng)溫度20~ 40 °C，適合反應(yīng)pH在6~7. 5。
10. 根據(jù)權(quán)利要求9所述的制備海藻糖的方法，其特征在于酶反應(yīng)的最適反應(yīng)溫度為 30°C ;最適反應(yīng)pH為7. 5。
【專利摘要】本發(fā)明公開一種嗜氯節(jié)桿菌海藻糖合成酶及其編碼基因和應(yīng)用，屬于基因工程和現(xiàn)代酶工程技術(shù)領(lǐng)域。該海藻糖合成酶的編碼基因從嗜氯節(jié)桿菌（Arthrobacter Chlorophenolicus SK33.001）克隆得到，該海藻糖合成酶能一步轉(zhuǎn)化麥芽糖生成海藻糖，酶的適合反應(yīng)溫度為20～40℃，酶的適合反應(yīng)pH在6～7.5。在最適溫度下，轉(zhuǎn)化率可達(dá)到65%左右。該海藻糖合成酶能用于轉(zhuǎn)化麥芽糖或麥芽糖漿制備海藻糖，為海藻糖的工業(yè)化生產(chǎn)提供了新的方法。
【IPC分類】C12P19-12, C12N1-21, C12N9-90, C12R1-19, C12N15-61, C12N15-70, C12P19-24
【公開號】CN104877984
【申請?zhí)枴緾N201510256646
【發(fā)明人】江波, 沐萬孟, 蔡雪, 張濤
【申請人】江南大學(xué)
【公開日】2015年9月2日
【申請日】2015年5月20日