可抑制iPS細胞的腫瘤化的分化誘導(dǎo)方法
【專利摘要】本發(fā)明的目的在于提供一種抑制iPS細胞的腫瘤化，使之分化誘導(dǎo)為目標分化細胞的技術(shù)。通過使用他汀和分化誘導(dǎo)劑，使iPS細胞分化為目標分化細胞，能夠使之分化為腫瘤化被抑制了的分化細胞。
【專利說明】可抑制i PS細胞的腫瘤化的分化誘導(dǎo)方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及在抑制iPS細胞的腫瘤化的情況下使iPS細胞分化為目標分化細胞的技術(shù)。
【背景技術(shù)】
[0002]人的iPS細胞已被建立(例如，參見非專利文獻I以及專利文獻I)，人們期待其向再生醫(yī)療的應(yīng)用。iPS細胞是指也被稱為人工多功能性干細胞或者誘導(dǎo)多功能性干細胞的、獲得了分化多能性的細胞，通過向體細胞(例如，成纖維細胞等)導(dǎo)入編碼賦予分化多能性的多種類的轉(zhuǎn)錄因子，例如，Oct家族(0ct3/4)、Sox家族(Sox2、Soxl、Sox3、Soxl5以及 Soxl7 等)、Klf 家族(Klf4、Klf2 等)、Myc 家族(c_Myc、N-Myc、L-Myc 等)、Nanog、LIN28等的基因，獲得分化多能性的細胞。
[0003]具有分化多能性的細胞除了 iPS細胞以外，眾所周知還有ES細胞，然而ES細胞因其起源為胚胎而具有生命倫理的問題，在以再生醫(yī)療作為目的的使用中存在問題。另一方面，由于iPS細胞可從採取比較容易的皮膚、血液建立，能夠避免這樣的問題。并且，由于能從需要治療的患者自身組織獲得iPS細胞，而無免疫排斥的問題，期待使再生醫(yī)療大步前進。
[0004]近年，在牙科、整形外科的領(lǐng)域中，進行了使iPS細胞分化誘導(dǎo)獲得成骨細胞，利用于牙槽骨、軟骨的再生的嘗試。例如，在牙科領(lǐng)域，由于失去了牙的患者下顎消瘦，因此有大量牙科種植治療、義齒治療變得困難的情況。在這種情況下，通過將成骨細胞移植至下顎的骨缺損部位，使牙槽骨再生，從而使進行種植埋入等成為可能。從患者本人的體細胞建立iPS細胞、并將其分化誘導(dǎo)而得到的成骨細胞也沒有必要擔(dān)心免疫排斥。并且，已經(jīng)由本
【發(fā)明者】們確認到若利用口腔內(nèi)上皮細胞、口腔內(nèi)成纖維細胞，則iPS細胞的建立効率非常高(例如，參考專利文獻2)。
但是，iPS細胞正由于其多功能性，在移植后腫瘤化的情況成為重大問題。為了解決該課題，現(xiàn)在提出了以下方法:以iPS細胞的腫瘤形成標記為指標分選腫瘤形成細胞而除去的方法(例如，參考非專利文獻2)，通過在試驗管內(nèi)使用FACS等對定向為目標組織的iPS細胞進行細胞分選，選擇目標細胞，將其用于移植的方法。然而，這些技術(shù)中存在難于確保細胞數(shù)量、伴有污染的危險性這些缺點。
[0006]這樣，雖然人們非常期待iPS細胞向再生醫(yī)療的應(yīng)用，但由于存在上述那樣的問題而現(xiàn)在并未被實用化。即，為了 iPS細胞的臨床應(yīng)用，人們非常期望解決腫瘤化抑制這一課題。
[0007]另一方面，HMG-CoA還原酶抑制劑(他汀)介由膽固醇合成抑制作用而作為高脂血癥治療藥被廣泛在臨床中使用。近年，確認了他汀對于各種細胞的分化、增殖具有多種多樣的藥理作用。但是，本領(lǐng)域并不知曉將iPS細胞在他汀的存在下進行培養(yǎng)則腫瘤化被抑制。
先行技術(shù)文獻非專利文獻
[0008]非專利文獻1:Takahashi K., et al.(2007)."Induct1nof Pluripotent StemCells from Adult Human Fibroblasts by Defined Factors' Cel1131:861-872.非專利文獻 2: Tang C et al, An antibody against SSEA_5glycan on human pluripotentstem cells enables removal of teratoma-forming cells.Nat B1technol.2011 ；29(9):829-34.專利文獻
[0009]專利文獻l:W02007/069666 專利文獻 2:W02011/024550

【發(fā)明內(nèi)容】

發(fā)明所要解決的課題
[0010]本發(fā)明的目的在于提供一種在抑制iPS細胞的腫瘤化的情況下使iPS細胞分化誘導(dǎo)為目標分化細胞的技術(shù)。
用于解決課題的手段
[0011]本
【發(fā)明者】為了解決上述課題進行了銳意地研究，結(jié)果發(fā)現(xiàn)通過在他汀的存在下培養(yǎng)iPS細胞，能夠抑制iPS細胞的腫瘤化。進而，本
【發(fā)明者】確認了通過使用他汀和分化誘導(dǎo)劑，使iPS細胞分化誘導(dǎo)為分化細胞，從而獲得了腫瘤化被抑制的分化細胞。本發(fā)明是基于這樣的見解，進而不斷研究 的結(jié)果而完成的。即，本發(fā)明提供下述形態(tài)的方法、腫瘤化抑制劑、培養(yǎng)基、腫瘤化被抑制了的iPS細胞、組織再生方法等。
[0012]項1.一種iPS細胞的分化誘導(dǎo)方法，所述方法為抑制腫瘤化、同時分化誘導(dǎo)iPS細胞的方法，所述方法包括以下工序:
使用他汀、以及使iPS細胞分化為目標分化細胞的分化誘導(dǎo)劑，使iPS細胞分化為目標分化細胞的工序。
項2.根據(jù)項I所述的分化誘導(dǎo)方法，其中，所述他汀為下述通式(A)所示的化合物: 通式㈧:
[化I]
【權(quán)利要求】
1.一種iPS細胞的分化誘導(dǎo)方法，所述方法為抑制腫瘤化、同時分化誘導(dǎo)iPS細胞的方法，所述方法包括以下工序: 使用他汀、以及使iPS細胞分化為目標分化細胞的分化誘導(dǎo)劑，使iPS細胞分化為目標分化細胞的工序。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的分化誘導(dǎo)方法，其中，所述他汀為下述通式(A)所示的化合物: 通式㈧: [化I]
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的分化誘導(dǎo)方法，其中， 所述他汀為選自由辛伐他汀、氟伐他汀、洛伐他汀、阿托伐他汀、匹伐他汀、普伐他汀以及瑞舒伐他汀組成的組中的至少I種。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的分化誘導(dǎo)方法，其中， 通過在含有所述他汀和所述分化誘導(dǎo)劑的培養(yǎng)基中培養(yǎng)iPS細胞，使iPS細胞分化為目標分化細胞。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的分化誘導(dǎo)方法，其中，通過在以含有所述他汀的培養(yǎng)基培養(yǎng)iPS細胞后，再以含有所述分化誘導(dǎo)劑的培養(yǎng)基進行培養(yǎng)，使iPS細胞分化為目標分化細胞。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的分化誘導(dǎo)方法，其中， 所述他汀的濃度為0.01~10 μ M。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的分化誘導(dǎo)方法，其中， 所述iPS細胞源自口腔粘膜的上皮細胞或口腔粘膜的成纖維細胞。
8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的分化誘導(dǎo)方法，其中， 使用他汀、以及使iPS細胞分化為成骨細胞的分化誘導(dǎo)劑，使iPS細胞分化為成骨細胞。
9.一種含有腫瘤化被抑制了的分化細胞的細胞制劑的制備方法，所述方法包括以下工序: 使用他汀、以及使iPS細胞分化為目標分化細胞的分化誘導(dǎo)劑，使iPS細胞分化為目標分化細胞的工序，以及 使用在前述工序中得到的分化細胞，制備細胞制劑的工序。
10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的細胞制劑的制備方法，其中， 所述分化細胞為成骨細胞。
11.一種培養(yǎng)基，其用于從iPS細胞獲得腫瘤化被抑制了的分化細胞，所述培養(yǎng)基含有: 他汀，以及 使iPS細胞分化為目標分化細胞的分化誘導(dǎo)劑。
12.他汀在培養(yǎng)基的制造中的用途，所述培養(yǎng)基為用于從iPS細胞獲得腫瘤化被抑制了的分化細胞的培養(yǎng)基。
13.一種腫瘤化抑制方法，所述方法為在使iPS細胞分化為分化細胞時抑制腫瘤化的方法，所述方法包含以下工序: 使用他汀、以及使iPS細胞分化為目標分化細胞的分化誘導(dǎo)劑，使iPS細胞分化為目標分化細胞的工序。
14.一種iPS細胞的腫瘤化抑制方法，所述方法為抑制iPS細胞的腫瘤化的方法，所述方法包括以下工序: 在他汀的存在下培養(yǎng)iPS細胞的工序。
15.—種iPS細胞的腫瘤化抑制劑，其含有他汀作為有効成分。
16.根據(jù)權(quán)利要求15所述的腫瘤化抑制劑，其中， 所述抑制劑在使iPS細胞分化為成骨細胞時使用。
17.他汀在iPS細胞的腫瘤化抑制劑的制造中的用途。
18.一種腫瘤化被抑制了的iPS細胞，所述細胞通過將iPS細胞在他汀的存在下進行培養(yǎng)而獲得。
19.一種他汀，其用于抑制iPS細胞的腫瘤化。
20.一種細胞凋亡誘導(dǎo)劑，其以他汀作為有効成分， 用于在分化誘導(dǎo)iPS細胞時，對于具有未分化的性質(zhì)的iPS細胞誘導(dǎo)細胞凋亡。
21.一種骨再生劑，其包含成骨細胞，所述成骨細胞為通過在他汀、以及向成骨細胞分化誘導(dǎo)的分化誘導(dǎo)劑的存在下培養(yǎng)iPS細胞而獲得的成骨細胞。
22.—種組織再生方法，其包括下述工序: (i)使用他汀、以及使iPS細胞分化為目標分化細胞的分化誘導(dǎo)劑，使iPS細胞分化為目標分化細胞的工序， (?)使用在前述工序中得到的分化細胞，制備細胞制劑的工序，以及 (iii)將前述工序(ii )中得到的細胞制劑向需要組織再生的患者給藥的工序。
【文檔編號】C12N5/10GK104039954SQ201280063680
【公開日】2014年9月10日 申請日期:2012年12月27日 優(yōu)先權(quán)日:2011年12月27日
【發(fā)明者】江草宏 申請人:國立大學(xué)法人大阪大學(xué)