專利名稱：一種活體檢測豬肉風味的方法及其應用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及畜牧學和分子生物學領(lǐng)域，具體涉及一種活體檢測豬肉風味的方法及其應用。
背景技術(shù)：
豬肉風味是衡量豬肉口感、多汁性以及是否好吃的重要指標,也是豬肉品質(zhì)的重要性狀，更是消費者關(guān)注的豬肉品質(zhì)消費的基本問題。豬肉風味包括鮮味、甜味、酸味、膻味等等，受品種、年齡、性別、飼養(yǎng)工藝、飼料原料與配方、屠宰加工工藝及烹飪條件等影響。在相同環(huán)境條件下，不同品種的豬肉風味不同，烹調(diào)后的色、香、味及口感差之明顯。因此，如何探測和準確選擇有較好風味的種豬已成為豬遺傳育種學研究的熱點之一。目前，通過獲得畜禽經(jīng)濟性狀的功能基因及其標記，并利用其來加速畜禽重要經(jīng)濟性狀的育種進展是動物遺傳育種領(lǐng)域的重要創(chuàng)新。由于豬肉風味是影響豬肉消費者取舍的重要因素，采用分子生物學方法獲得風味俱佳的豬育種方法還沒有實質(zhì)性突破。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明要解決的技術(shù)問題是提供一種可用于活體檢測豬肉風味的方法及其在育種上的應用。一種用于活體檢測豬肉風味的引物對，其核苷酸序列如序列表中SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:2 所示。一種活體檢測豬肉風味的方法，包括如下步驟:(I)分別提取待測豬的基因組DN`A ；(2)以待測豬基因組DNA為模板，以序列表中SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:2所示的DNA分子為引物對，進行PCR擴增，NspI限制性內(nèi)切酶酶切PCR擴增產(chǎn)物；(3)檢測NspI限制性內(nèi)切酶酶切產(chǎn)物的大小，確定待測豬的基因型；若酶切產(chǎn)物含有一條DNA片段，大小在200bp以上，則待測豬為BB基因型；若酶切產(chǎn)物含有二條DNA片段，大小分別在100 200bp和小于lOObp，則待測豬為AA基因型；若酶切產(chǎn)物含有三條DNA片段，分別在200bp以上、100 200bp和小于lOObp，則待測豬為AB基因型；(4)確定豬肉風味與豬的基因型之間的相關(guān)性；所述AA基因型的豬肉風味優(yōu)于所述BB基因型和所述AB基因型的豬肉風味，表現(xiàn)為豬肉多汁、味香、口感好。本發(fā)明所述活體檢測豬肉風味的方法，其中所述檢測NspI限制性內(nèi)切酶酶切產(chǎn)物的大小的方法為瓊脂糖凝膠電泳。本發(fā)明所述活體檢測豬肉風味的方法在豬的育種中的應用。一種培育豬肉風味較佳的豬品系的方法，包括如下步驟:采用本發(fā)明所述活體檢測豬肉風味的方法檢測豬肉風味，獲得AA基因型的豬，以所述AA基因型的豬為親本進行育種獲得豬肉風味較佳的豬。本發(fā)明所述引物對在豬的育種中的應用。含有本發(fā)明所述引物對的試劑盒，其中包括本發(fā)明所述方法的引物對，所述引物對如序列表中SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:2所示，所述試劑盒還包括常用的10XPCR緩沖液、dNTPs、Taq DNA聚合酶、NspI限制性內(nèi)切酶、超純水等。本發(fā)明活體檢測豬肉風味的方法，能通過簡單的PCR擴增和酶切確定待測豬的基因型，AA基因型豬的風味顯著高于BB基因型和AB基因型(P < 0.01)，根據(jù)檢測結(jié)果以AA基因型的豬進行育種可獲得候選的優(yōu)質(zhì)風味的豬品系。本發(fā)明所述活體檢測豬肉風味的方法簡單易行，檢測結(jié)果準確，精確度高，能很快地選出風味較佳的豬品系。通過本發(fā)明所述方法選出風味較佳的豬，可以避免直接宰殺豬，只需取得一部分組織(如表皮、耳組織、血液、毛發(fā)等)測定待測豬的基因型就可以知道其風味如何，在待測豬的任何發(fā)育時期都可以進行，省時省力，還可以早期選種，也避免了不必要的宰殺造成的浪費，也可為生豬產(chǎn)業(yè)活體按質(zhì)定價提供依據(jù)。下面結(jié)合附圖及具體實施例對本發(fā)明所述方法作進一步說明。


圖1為NspI限制性內(nèi)切酶對PCR產(chǎn)物進行酶切的圖譜。
具體實施例方式實施例一種可用于活體檢測豬肉風味的`方法，具體包括如下步驟:一、分別提取待測豬的基因組DNA分別提取地方品種豬和引入品種豬的基因組DNA，其中所述地方品種豬包括皖南黑豬、淮豬、皖南花豬、圩豬和太湖豬，引入品種豬包括長白豬、大白豬和杜洛克豬。試驗所用地方品種豬共97頭(體重為80 85kg的肥育豬)、引入品種豬共66頭(體重為95 IOOkg的肥育豬)，所述待檢測豬采用同一飼養(yǎng)標準進行飼養(yǎng)。二、基因型鑒定以提取的基因組DNA為模板，以序列表中SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:2所示的DNA分子為引物對進行PCR擴增。PCR 擴增體系:總體系 25 μ L，10 μ M/L SEQ ID NO:1 所示引物 L O μ L，10 μ M/LSEQ ID NO:2 所示引物 1.0μ L，10XPCR 緩沖液 2.5μ L，2mM/L dNTPs2.0 μ L, 5U/ μ L TaqDNA聚合酶0.5 μ L，IOOng/ μ L模板1.0yL,其余用超純水補齊。PCR擴增條件:94°C預變性 5min ;94°C變性 30s，61°C退火 18s，72°C延伸 40s，35 個循環(huán)，最后72°C延伸8min，4°C保存。用NspI限制性內(nèi)切酶對PCR產(chǎn)物進行酶切。15 μ L酶切反應體系:IOOng PCR產(chǎn)物，5U的NspI限制性內(nèi)切酶，1.5 μ L的IOX緩沖液，加超純水至15 μ L。37°C過夜消化，3%的瓊脂糖凝膠電泳檢測，凝膠成像儀分析和拍照，統(tǒng)計基因型。
三、檢測NspI限制性內(nèi)切酶酶切產(chǎn)物的大小，確定待測豬的基因型凝膠成像結(jié)果如圖1所示，酶切后的PCR產(chǎn)物，在瓊脂糖凝膠上呈現(xiàn)一條帶，大小在200bp以上，該豬為BB基因型(圖1的泳道I)；酶切后的PCR產(chǎn)物，在瓊脂糖凝膠上呈現(xiàn)二條帶，一條帶的大小在100 200bp、另一條帶小于lOObp，該豬為AA基因型(圖1的泳道3)；酶切后的PCR產(chǎn)物，在瓊脂糖凝膠上呈現(xiàn)三條帶，三條帶的大小分別在200bp以上、100 200bp和小于lOObp，該豬為AB基因型(圖1的泳道2)。檢測結(jié)果見表I，可以看出，地方品種豬和弓丨入品種豬都具有AA、AB和BB 二種基因型；地方品種豬中，AA基因型占53.61%，AB基因型占37.11%, BB基因型占9.28% ;弓|入品種豬中，AA基因型占6.06%, AB基因型占21.21%，BB基因型占72.73%。四、基因型與豬肉風味的相關(guān)性用步驟(一)的方法鑒定基因型，各取眼肌300g，用相同的方法制成肉丸，讓15個年齡在30-35歲的女性食客盲品打分(10分為風味最佳，O分為風味最差)，具體結(jié)果見表
1結(jié)果表明，在同樣的飼養(yǎng)條件下，無論是地方品種豬還是引入品種豬，基因型都與豬肉風味緊密相關(guān)，AA基因型豬肉的風味顯著好于BB基因型和AB基因型(P < 0.01)，地方品種中風味較好的AA基因型所占比重較大。在實際的豬育種中，采用上述方法檢測待測豬的基因型，選擇AA基因型的豬進行育種可獲得候選的優(yōu)質(zhì)風味的豬品系。表1.不同基因型與豬肉風味之關(guān)聯(lián)性
權(quán)利要求
1.一種用于活體檢測豬肉風味的引物對，其特征在于:所述引物對的核苷酸序列如序列表中 SEQ ID NO:1 和 SEQ ID NO:2 所示。
2.一種活體檢測豬肉風味的方法，其特征在于:包括如下步驟: (1)分別提取待測豬的基因組DNA； (2)以待測豬基因組DNA為模板，以序列表中SEQID NO:1和SEQ ID NO:2所示的DNA分子為引物對，進行PCR擴增，NspI限制性內(nèi)切酶酶切PCR擴增產(chǎn)物； (3)檢測NspI限制性內(nèi)切酶酶切產(chǎn)物的大小，確定待測豬的基因型； 若酶切產(chǎn)物含有一條DNA片段，大小在200bp以上，則待測豬為BB基因型； 若酶切產(chǎn)物含有二條DNA片段，大小分別在100 200bp和小于lOObp，則待測豬為AA基因型； 若酶切產(chǎn)物含有三條DNA片段，分別在200bp以上、100 200bp和小于lOObp，則待測豬為AB基因型； (4)確定豬肉風味與豬的基因型之間的相關(guān)性。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述活體檢測豬肉風味的方法，其特征在于:所述檢測NspI限制性內(nèi)切酶酶切產(chǎn)物的大小的方法為瓊脂糖凝膠電泳。
4.根據(jù)權(quán)利要求2或3所述活體檢測豬肉風味的方法在豬的育種中的應用。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述活體檢測豬肉風味的方法在豬的育種中的應用，其特征在于:包括如下步驟:采用權(quán)利要求2或3所述的方法檢測豬肉風味，獲得AA基因型的豬，以所述AA基因型的豬為親本進行育種獲得豬肉風味較佳的豬。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所 述引物對在豬的育種中的應用。
7.含有權(quán)利要求1所述引物對的試劑盒。
全文摘要
本發(fā)明提供了一種活體檢測豬肉風味的方法，包括如下步驟(1)分別提取待測豬的基因組DNA；(2)以待測豬基因組DNA為模板，以序列表中SEQ ID NO1和SEQ ID NO2所示的DNA分子為引物對，進行PCR擴增，NspI限制性內(nèi)切酶酶切PCR擴增產(chǎn)物；(3)檢測NspI限制性內(nèi)切酶酶切產(chǎn)物的大小，確定待測豬的基因型；(4)確定豬肉風味與豬的基因型之間的相關(guān)性。本發(fā)明活體檢測豬肉風味的方法，能通過簡單的PCR擴增和酶切確定待測豬的基因型，AA基因型豬的風味顯著高于BB基因型和AB基因型(P＜0.01)，根據(jù)檢測結(jié)果以AA基因型的豬進行育種可獲得候選的優(yōu)質(zhì)風味的豬品系。
文檔編號C12N15/11GK103146815SQ201310043880
公開日2013年6月12日 申請日期2013年2月4日 優(yōu)先權(quán)日2013年2月4日
發(fā)明者陳宏權(quán), 陳華 申請人:安徽農(nóng)業(yè)大學