一種通過(guò)發(fā)酵乳桿菌生產(chǎn)蝦青素的方法
【專(zhuān)利摘要】本發(fā)明涉及化合物制備【技術(shù)領(lǐng)域】，具體公開(kāi)了一種通過(guò)發(fā)酵乳桿菌生產(chǎn)蝦青素的方法。所述方法為通過(guò)在發(fā)酵培養(yǎng)基中添加α-蒎烯及維生素B12就可以有效地誘導(dǎo)原來(lái)不產(chǎn)蝦青素的乳桿菌大量生產(chǎn)蝦青素，其生產(chǎn)蝦青素產(chǎn)量和生物量分別高達(dá)約600mg/L和26g/L。本發(fā)明所述方法是一個(gè)生物合成法生產(chǎn)天然蝦青素的新途徑，其卓越的生產(chǎn)性能使其有望成為一種替代紅法夫酵母及雨生紅球藻生產(chǎn)蝦青素的蝦青素制造方法。
【專(zhuān)利說(shuō)明】一種通過(guò)發(fā)酵乳桿菌生產(chǎn)蝦青素的方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及化合物制備【技術(shù)領(lǐng)域】，具體地涉及一種通過(guò)發(fā)酵乳桿菌生產(chǎn)蝦青素的方法。
【背景技術(shù)】
[0002]蝦青素(3，3’ - 二羥基-4，4’ - 二酮基一 β β ’ -胡蘿卜素)是一種非維生素A源的酮式類(lèi)胡蘿卜素。擁有艷麗的紅色及極強(qiáng)的色素沉積能力，最初在歐美一些發(fā)達(dá)國(guó)家是作為色素被用做水產(chǎn)業(yè)的餌料添加劑。蝦青素具有很強(qiáng)的抗氧化性，動(dòng)物實(shí)驗(yàn)表明它有抑制腫瘤發(fā)生，增強(qiáng)免疫功能等多方面的生理作用，作為功能性色素在水產(chǎn)業(yè)，醫(yī)藥，食品，化妝品等行此有著廣闊的應(yīng)用前景。
[0003]目前市場(chǎng)上蝦青素大部分通過(guò)化學(xué)合成，也有少量天然蝦青素。化學(xué)合成蝦青素主要用途是作為魚(yú)類(lèi)飼料添加劑，其工業(yè)化生產(chǎn)由瑞士羅氏公司，即現(xiàn)在的帝斯曼公司控制，商品名為加麗素粉紅(Carophyllpink),奸青素含量為5-10%,目前為止美國(guó)食品衛(wèi)生管理局(FDA)不準(zhǔn)任何化學(xué)·合成新產(chǎn)品進(jìn)入保健食品市場(chǎng)。
[0004]天然蝦青素存在于動(dòng)植物及微生物中，盡管提取來(lái)源廣泛，但含量極低。如在蝦、蟹的廢殼中的含量只有約80ug/g,法夫酵母(Phaffia thodozyma)中含量一般在1500?5000ug/g之間，在淡水單細(xì)胞綠藻一雨生紅球藻(Haematococcus pluvialis)中，奸青素的含量可達(dá)10000?40000ug/g，曾經(jīng)被認(rèn)為是自然界中天然蝦青素含量最高的生物。天然蝦青素的工業(yè)化生產(chǎn)，目前也主要是采用法夫酵母發(fā)酵和雨生紅球藻的大規(guī)模養(yǎng)殖來(lái)進(jìn)行的，例如美國(guó)紅星公司(3000?4000g/t干酵母)及Igene Biotechnology Inc、日本富士化學(xué)、美國(guó)Cyanotech公司、以色列Algatech公司等，由于生產(chǎn)成本及技術(shù)難度高,天然蟲(chóng)下青素的產(chǎn)量有限，國(guó)際市場(chǎng)上的價(jià)格很高，這也一定程度上制約了天然蝦青素的應(yīng)用。
[0005]能夠產(chǎn)生蝦青素的微生物菌株并不多。除雨生紅球藻和紅發(fā)夫酵母生產(chǎn)蝦青素夕卜，一些文獻(xiàn)也已報(bào)道其他微生物菌株。但有些菌生長(zhǎng)較慢且蝦青素含量低，無(wú)工業(yè)應(yīng)用前景。微生物細(xì)胞內(nèi)蝦青素的生物合成基本上由它們的遺傳特性所控制，通過(guò)誘變育種技術(shù)，改變微生物的遺傳特征，可得到高產(chǎn)蝦青素的微生物菌株，Girard等對(duì)紅發(fā)夫酵母(Phaffia thodozyma)進(jìn)行誘變處理,發(fā)現(xiàn)從無(wú)色到紅色的誘變突變菌株。分析突變菌株的蝦青素合成中間產(chǎn)物，可以發(fā)現(xiàn)，番茄紅素環(huán)化形成胡蘿卜素這一步驟不會(huì)受到誘變處理的影響，但誘變處理能影響到其他的步驟，即誘變處理主要影響β —胡蘿卜素合成之前的步驟。同時(shí)，微生物胞內(nèi)蝦青素的積累也受各種環(huán)境因子的影響，會(huì)隨發(fā)酵培養(yǎng)基的改變而改變。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006]本發(fā)明要解決的技術(shù)問(wèn)題是針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)中發(fā)酵菌株生產(chǎn)蝦青素受菌株資源限制的缺陷，提供一種通過(guò)發(fā)酵乳桿菌生產(chǎn)蝦青素的方法。
[0007]本發(fā)明的目的通過(guò)以下技術(shù)方案予以實(shí)現(xiàn):一種生產(chǎn)蝦青素的方法，將乳桿菌種子液接種在含有a -菔烯及維生素B12產(chǎn)蝦青素的培養(yǎng)基中，發(fā)酵得菌體，菌體破碎后經(jīng)萃取即得蝦青素。只要在產(chǎn)蝦青素的培養(yǎng)基中加入a -菔烯及維生素B12就可以誘導(dǎo)原來(lái)不產(chǎn)蝦青素的乳桿菌大量生產(chǎn)蝦青素。a -薇烯及維生素B12具體在產(chǎn)蝦青素的培養(yǎng)基中的加入量可以根據(jù)乳桿菌的種類(lèi)和代謝需要就行優(yōu)化得到。
[0008]優(yōu)選地，所述a -菔烯在產(chǎn)蝦青素的培養(yǎng)基中的加入量為100?500 ML/L，維生素B12在產(chǎn)蝦青素的培養(yǎng)基中的加入量為0.1?5Pg/L。
[0009]更優(yōu)選地，所述a -菔烯在產(chǎn)蝦青素的培養(yǎng)基中的加入量為350 ML/L，維生素B12在產(chǎn)蝦青素的培養(yǎng)基中的加入量為0.9Pg/L。
[0010]現(xiàn)有技術(shù)中，乳桿菌在普通的發(fā)酵培養(yǎng)基中是不能代謝生產(chǎn)蝦青素，本發(fā)明通過(guò)在發(fā)酵培養(yǎng)基中加入a-菔烯及維生素B12，就可以有效地誘導(dǎo)乳桿菌大量生產(chǎn)蝦青素。
[0011]乳桿菌產(chǎn)蝦青素除了受a-菔烯及維生素B12的絕對(duì)誘導(dǎo)之外，各種環(huán)境因子也會(huì)稍微影晌乳桿菌產(chǎn)蝦青素的產(chǎn)量，但是不會(huì)決定乳桿菌產(chǎn)不產(chǎn)蝦青素。例如乳桿菌產(chǎn)蝦青素的產(chǎn)量會(huì)受培養(yǎng)基碳源、氮源種類(lèi)、發(fā)酵溫度、PH和溶氧等因素的影響。
[0012]在發(fā)酵培養(yǎng)中，所述培養(yǎng)基包括碳源、氮源及無(wú)機(jī)鹽等，碳源是構(gòu)成微生物的主要成分，是細(xì)胞內(nèi)貯藏物質(zhì)和生成各種代謝物來(lái)源，同時(shí)也是微生物生長(zhǎng)中的主要能量來(lái)源。優(yōu)選地，所述產(chǎn)蝦青素的培養(yǎng)基是以察氏培養(yǎng)基為基礎(chǔ)經(jīng)改良而成的，其中所述碳源為蔗糖、葡萄糖、糖蜜、果糖或麥芽糖中的ー種或ー種以上，優(yōu)選為蔗糖，碳源的質(zhì)量濃度40?120g/L，更優(yōu)選為60g/L，所述氮源為硫酸銨、尿素、蛋白胨、酵母膏或豆餅粉；優(yōu)選為硫酸銨，氮源的質(zhì)量濃度1.5?5g/L，更優(yōu)選為4.5g/L。
[0013]本發(fā)明通過(guò)優(yōu)化實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)乳桿菌在含有a -菔烯及維生素B12的產(chǎn)蝦青素的培養(yǎng)基中接種量為5?10%(v/v)，隨.著接種量的増加，生物量及蝦青素含量均呈上升趨勢(shì)，但當(dāng)接種量大于10% (v/v)時(shí),兩者增加不太明顯,優(yōu)選接種量在6% (v/v)左右。
[0014]反應(yīng)溫度對(duì)發(fā)酵過(guò)程中產(chǎn)生的生物量及蝦青素影響，隨著發(fā)酵溫度的上升，細(xì)胞生物量及蝦青素產(chǎn)量都不斷的増加，溫度30°C后兩者均有下降，通常采用反應(yīng)溫度26?30°C，優(yōu)選 28°C。
[0015]由于乳桿菌是好氧微生物，可以通過(guò)搖床轉(zhuǎn)速和裝液量來(lái)調(diào)節(jié)種子培養(yǎng)液及發(fā)酵培養(yǎng)液中的溶氧量，搖床轉(zhuǎn)速一般為50?250r/min，隨著轉(zhuǎn)速提高，生物量和蝦青素合成量都呈上升趨勢(shì)，當(dāng)搖床轉(zhuǎn)速為150 r/min以上上升趨向平穩(wěn)，優(yōu)選取150?200 r/min，更優(yōu)選為180 r/min。對(duì)于發(fā)酵罐進(jìn)行間歇發(fā)酵中，發(fā)酵罐罐壓和攪拌速率以及空氣通氣量等決定溶氧量，溶氧量越高，色素合成量越大，低溶氧條件下，色素合成減少，通常采用40?60%的相對(duì)溶氧量。
[0016]培養(yǎng)基中的H—和0H —能對(duì)微生物代謝產(chǎn)生影響，它作用于胞外的可解離的弱酸，形成易透過(guò)細(xì)胞膜的游離態(tài)進(jìn)入胞內(nèi)再作用于參與代謝的各種酶類(lèi)，從而影響菌體的生長(zhǎng)合產(chǎn)物合成，通常采用起始pH值為6?8，優(yōu)選起始pH為7.5。
[0017]本發(fā)明所述的乳桿菌為普通市售乳桿菌，本發(fā)明具體實(shí)施方案中所用的乳桿菌為植物乳桿菌、戊糖乳桿菌、干酪乳桿菌、短乳桿菌、布氏乳桿菌等，但不會(huì)對(duì)本發(fā)明做任何形式的限定。只要是乳桿菌屬的菌株都可以應(yīng)用于本發(fā)明來(lái)生產(chǎn)蝦青素。
[0018]與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明具有以下先進(jìn)性:1、現(xiàn)有技術(shù)中，乳桿菌是無(wú)法通過(guò)發(fā)酵來(lái)生產(chǎn)蝦青素，本發(fā)明通過(guò)在發(fā)酵培養(yǎng)基中加入α-菔烯及維生素B12，就可以有效地誘導(dǎo)乳桿菌大量生產(chǎn)蝦青素。蝦青素產(chǎn)量和生物量分別高達(dá)約600mg/L和26 g/L，是一個(gè)生物合成法生產(chǎn)天然蝦青素的新途徑，其卓越的生產(chǎn)性能使其有望成為一種替代紅法夫酵母及雨生紅球藻生產(chǎn)蝦青素的蝦青素制造方法。
[0019]2、本技術(shù)所采用的乳桿菌動(dòng)物安全性好，既具備雨生紅球藻蝦青素高含量，又具備紅發(fā)夫酵母易于培養(yǎng)的特點(diǎn)，且培養(yǎng)條件溫和，易于控制，蝦青素提取分離時(shí)，只需二甲基亞砜一步破碎即可。
[0020]3、本發(fā)明提供的由乳桿菌產(chǎn)蝦青素一紅色色素在一般理化環(huán)境作用下(避免光照)有著良好的穩(wěn)定性，及較高的抗氧化特性，可用作高檔化妝品、高級(jí)食品和飼料添加劑。
[0021]說(shuō)明書(shū)附圖
圖1.蝦青素標(biāo)準(zhǔn)品高效液相色譜圖。
[0022]圖2.乳桿菌色素高效液相色譜圖。
【具體實(shí)施方式】·
[0023]下面結(jié)合說(shuō)明書(shū)附圖具體實(shí)施例進(jìn)一步詳細(xì)說(shuō)明本發(fā)明。除非特別說(shuō)明，本發(fā)明采用的試劑、設(shè)備為本【技術(shù)領(lǐng)域】常規(guī)試劑和設(shè)備。
[0024]實(shí)施例中所使用到的植物乳桿菌ATCC8014、戊糖乳桿菌ATCC8041及干酪乳桿菌ATCC334購(gòu)自美國(guó)菌種保藏中心、植物乳桿菌GMl.140、短乳桿菌GMl.288購(gòu)自廣東省微生物菌種保藏中心；布氏乳桿菌ASl.13購(gòu)自中國(guó)普通微生物菌種保藏管理中心。
[0025]實(shí)施例1
S1.植物乳桿菌ATCC8014發(fā)酵培養(yǎng):將植物乳桿菌ATCC8014的菌體挑起菌苔一環(huán)接種于裝有12.5mL種子培養(yǎng)基的250mL三角瓶中，30°C、180r/min條件搖床培養(yǎng)24h得種子液，以此種子液5mL接種于裝有45mL種子液的500mL三角瓶中，30°C、180r/min條件搖床培養(yǎng)18h得二級(jí)種子液，再以6 % (v/v)接種量接種到發(fā)酵罐中(IOL罐裝有7L產(chǎn)蝦青素發(fā)酵培養(yǎng)基)于30°C條件下培養(yǎng)，采用恒pH，保持相對(duì)溶氧量40?60%，得細(xì)胞干重26 g/L蟲(chóng)下青素產(chǎn)量598mg/L。
[0026]所述產(chǎn)蝦青素發(fā)酵培養(yǎng)基含有的60g/L蔗糖、10g/L糖蜜、5g/L硫酸銨和350μ?7La-菔烯，0.9 μ g/L維生素B12。，培養(yǎng)基pH為7.0。
[0027]S2.色素粗品的制備與純化:
取上述制備得到酵母菌體粉末，加入二甲基亞砜(每克菌粉加入8ml 二甲基亞砜)置于60°C水浴條件下破壁60min，加入等體積丙酮提取至菌體呈白色，離心(4000r/min，20min)取上清液，石油醚萃取，37°C避光減壓蒸餾濃縮得色素粗制品，_20°C避光保存。
[0028]取色素固體粗制品溶于二氯甲烷，加入40g/L的KOH-乙醇溶液，于15°C皂化15min,加入蒸餾水使混合液分相，低溫靜置后收集二氯甲烷相，濃縮干燥。經(jīng)皂化后的提取物用石油醚溶解，上自裝聚酰胺(100-200目)層析柱進(jìn)行梯度洗脫純化。石油醚、石油醚:乙酸乙酯(1:0 ;4:1 ;2:1 ;1:1)、二氯甲烷共分6個(gè)梯度洗脫，收集紫紅色組分樣品，37°C水浴下真空減壓濃縮蒸干。
[0029]色素成分的薄層層析及高壓液相色譜分析(見(jiàn)圖1和圖2)，色素樣品主要成分為蝦青素，蝦青素占總色素含量為47.35%。[0030]實(shí)施例2
S1.植物乳桿菌ATCC8014發(fā)酵培養(yǎng):將植物乳桿菌ATCC8014的菌體挑起菌苔ー環(huán)接種于裝有12.5mL種子培養(yǎng)基的250mL三角瓶中，30°C、180r/min條件搖床培養(yǎng)24h得種子液，以此種子液5mL接種于裝有45mL種子液的500mL三角瓶中，30°C、180r/min條件搖床培養(yǎng)18h得ニ級(jí)種子液，再以8 % (v/v)接種量接種到發(fā)酵罐中(10L罐裝有7L產(chǎn)蝦青素發(fā)酵培養(yǎng)基)于28°C條件下培養(yǎng)，采用恒pH，保持相對(duì)溶氧量40-60%，得細(xì)胞干重28 g/L蟲(chóng)下青素產(chǎn)量456mg/L。
[0031]所述產(chǎn)蝦青素發(fā)酵培養(yǎng)基含有的60g/L蔗糖、10g/L糖蜜、5g/L硫酸銨和150ML/La-菔烯，0.2 iig/L維生素B12，培養(yǎng)基pH為7.0。
[0032]S2.色素粗品的制備與純化:同實(shí)施例1。
[0033]色素成分的薄層層析及高壓液相色譜分析，色素樣品主要成分為蝦青素，蝦青素占總色素含量為46.44%。
[0034]實(shí)施例3
S1.植物乳桿菌ATCC8014發(fā)酵培養(yǎng):將植物乳桿菌ATCC8014的菌體挑起菌苔ー環(huán)接種于裝有12.5mL種子培養(yǎng)基的250mL三角瓶中，30°C、180r/min條件搖床培養(yǎng)24h得種子液，以此種子液5mL接種于裝有45mL種子液的500mL三角瓶中，30°C、180r/min條件搖床培養(yǎng)18h得ニ級(jí)種子液，再以10 % (v/v)接種量接種到發(fā)酵罐中(10L罐裝有7L產(chǎn)蝦青素發(fā)酵培養(yǎng)基)于26°C條件下培養(yǎng)，采用恒pH，保持相對(duì)溶氧量40-60%，得細(xì)胞干重19 g/L蟲(chóng)下青素產(chǎn)量513mg/L。
[0035]所述產(chǎn)蝦青素發(fā)酵培養(yǎng)基含有的120蔗糖、4.5g/L尿素和500ML/L a -菔烯，
0.8μg/L維生素B12,培養(yǎng)基pH為6。
[0036]S2.色素粗品的制備與純化:同實(shí)施例1。
[0037]色素成分的薄層層析及高壓液相色譜分析，色素樣品主要成分為蝦青素，蝦青素占總色素含量為50.02%。
[0038]實(shí)施例4
S1.植物乳桿菌ATCC8014發(fā)酵培養(yǎng):將植物乳桿菌ATCC8014的菌體挑起菌苔ー環(huán)接種于裝有12.5mL種子培養(yǎng)基的250mL三角瓶中，30°C、180r/min條件搖床培養(yǎng)24h得種子液，以此種子液5mL接種于裝有45mL種子液的500mL三角瓶中，30°C、180r/min條件搖床培養(yǎng)18h得ニ級(jí)種子液，再以5 % (v/v)接種量接種到發(fā)酵罐中(IOL罐裝有7L產(chǎn)蝦青素發(fā)酵培養(yǎng)基)于28°C條件下培養(yǎng)，采用恒pH，保持相對(duì)溶氧量40-60%，得細(xì)胞干重21 g/L蝦青素產(chǎn)量542mg/L。
[0039]所述產(chǎn)蝦青素發(fā)酵培養(yǎng)基含有的50g/L蔗糖、2g/L硫酸銨和300ML/L a -菔烯，
2.0u g/L維生素B12,培養(yǎng)基pH為8.0。
[0040]S2.色素粗品的制備與純化:同實(shí)施例1。
[0041]色素成分的薄層層析及高壓液相色譜分析，色素樣品主要成分為蝦青素，蝦青素占總色素含量為45.68%o
[0042]實(shí)施例5
S1.植物乳桿菌GIM1.140發(fā)酵培養(yǎng):將植物乳桿菌ATCC8014的菌體挑起菌苔ー環(huán)接種于裝有12.5mL種子培養(yǎng)基的250mL三角瓶中，30°C、180r/min條件搖床培養(yǎng)24h得種子液，以此種子液5mL接種于裝有45mL種子液的500mL三角瓶中，30°C、180r/min條件搖床培養(yǎng)18h得ニ級(jí)種子液，再以6 % (v/v)接種量接種到發(fā)酵罐中(IOL罐裝有7L產(chǎn)蝦青素發(fā)酵培養(yǎng)基)于28°C條件下培養(yǎng)，采用恒pH，保持相對(duì)溶氧量40?60%，得細(xì)胞干重23 g/L蝦青素產(chǎn)量527mg/L。
[0043]所述產(chǎn)蝦青素發(fā)酵培養(yǎng)基含有的60g/L蔗糖、10g/L葡萄糖、3g/L蛋白胨和350ML/La-菔烯，0.9 ii g/L維生素B12，培養(yǎng)基pH為7.0。
[0044]S2.色素粗品的制備與純化:同實(shí)施例1。
[0045]色素成分的薄層層析及高壓液相色譜分析，色素樣品主要成分為蝦青素，蝦青素占總色素含量為42.19%。
[0046]實(shí)施例6
S1.植物乳桿菌ATCC8014發(fā)酵培養(yǎng):將植物乳桿菌ATCC8014的菌體挑起菌苔ー環(huán)接種于裝有12.5mL種子培養(yǎng)基的250mL三角瓶中，30°C、180r/min條件搖床培養(yǎng)24h得種子液，以此種子液5mL接種于裝有45mL種子液的500mL三角瓶中，30°C、180r/min條件搖床培養(yǎng)18h得ニ級(jí)種子液，再以6 % (v/v)接種量接種到發(fā)酵罐中(IOL罐裝有7L產(chǎn)蝦青素發(fā)酵培養(yǎng)基)于30°C條件下培養(yǎng)，采用恒pH，保持相對(duì)溶氧量40?60%，得細(xì)胞干重28 g/L,蟲(chóng)下青素產(chǎn)量0 mg/L。
[0047]所述產(chǎn)蝦青素發(fā)酵培養(yǎng)基含有的60g/L蔗糖、10g/L糖蜜、5g/L硫酸銨，培養(yǎng)基pH為 7.0。
[0048]S2.色素粗品的制備與純化:同實(shí)施例1。
[0049]實(shí)施例1
51.戊糖乳桿菌ATCC8041發(fā)酵培養(yǎng):同實(shí)施例1;
52.色素粗品的制備與純化:同實(shí)施例1。
[0050]通過(guò)本方法得細(xì)胞干重21g/L蝦青素產(chǎn)量495mg/L。色素成分的薄層層析及高壓液相色譜分析:色素樣品主要成分為奸青素，奸青素占總色素含量為52.32%。
[0051]實(shí)施例8
51.干酪乳桿菌ATCC334發(fā)酵培養(yǎng):同實(shí)施例1;
52.色素粗品的制備與純化:同實(shí)施例1。
[0052]通過(guò)本方法得細(xì)胞干重8g/L蝦青素產(chǎn)量25mg/L。色素成分的薄層層析及高壓液相色譜分析:色素樣品主要成 分為奸青素，奸青素占總色素含量為37.15%。
[0053]實(shí)施例9
51.短乳桿菌GMl.288發(fā)酵培養(yǎng):同實(shí)施例1 ；
52.色素粗品的制備與純化:同實(shí)施例1。
[0054]通過(guò)本方法得細(xì)胞干重13g/L蝦青素產(chǎn)量176mg/L。色素成分的薄層層析及高壓液相色譜分析:色素樣品主要成分為奸青素，奸青素占總色素含量為40.25%。
[0055]實(shí)施例10
51.布氏乳桿菌ASl.13發(fā)酵培養(yǎng):同實(shí)施例1 ;
52.色素粗品的制備與純化:同實(shí)施例1。
[0056]通過(guò)本方法得細(xì)胞干重10 g/L蝦青素產(chǎn)量97mg/L。色素成分的薄層層析及高壓液相色譜分析:色素樣品主要成分為奸青素，奸青素占總色素含量為27.88%o
【權(quán)利要求】
1.一種生產(chǎn)蝦青素的方法，其特征在于，將乳桿菌種子液接種在含有a-菔烯及維生素B12的產(chǎn)蝦青素的培養(yǎng)基中，發(fā)酵得菌體，菌體破碎后經(jīng)萃取即得蝦青素。
2.根據(jù)權(quán)利要I所述生產(chǎn)蝦青素的方法，其特征在于，所述a-菔烯在產(chǎn)蝦青素的培養(yǎng)基中的加入量為100?500 ML/L，維生素B12在產(chǎn)蝦青素的培養(yǎng)基中的加入量為0.1?5Mg/L。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述生產(chǎn)蝦青素的方法，其特征在于，所述a-菔烯在產(chǎn)蝦青素的培養(yǎng)基中的加入量為350 ML/L，維生素B12在產(chǎn)蝦青素的培養(yǎng)基中的加入量為0.9呢/し
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述生產(chǎn)蝦青素的方法，其特征在于，所述產(chǎn)蝦青素的培養(yǎng)基是以察氏培養(yǎng)基為基礎(chǔ)經(jīng)改良而成的，培養(yǎng)基含有40?120g/L碳源和1.5?5g/L的氮源；所述碳源為蔗糖、葡萄糖、糖蜜、果糖或麥芽糖中的ー種或ー種以上，所述氮源為硫酸銨、尿素、蛋白胨、酵母膏或豆餅粉中的ー種或ー種以上。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述生產(chǎn)蝦青素的方法，其特征在干，所述產(chǎn)蝦青素的培養(yǎng)基含有60g/L碳源和4.5g/L的氮源。
6.根據(jù)權(quán)利要求4或5所述生產(chǎn)蝦青素的方法，其特征在于，所述碳源為蔗糖，所述氮源為硫酸銨。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述生產(chǎn)蝦青素的方法，其特征在于，所述發(fā)酵的條件為:將乳桿菌種子液按5?10% (v/v)接種量接種在培養(yǎng)基中，pH值為6?8，26?30°C，120?200 r/min搖床培養(yǎng)48?72小時(shí)。
8.根據(jù)權(quán)利要求·1所述生產(chǎn)蝦青素的方法，其特征在于，所述發(fā)酵的條件為:將乳桿菌按6% (v/v)接種量接種在培養(yǎng)基中，pH值為7.5，28°C，180 r/min搖床培養(yǎng)48?72小時(shí)。
9.根據(jù)權(quán)利要求1所述生產(chǎn)蝦青素的方法，其特征在于，所述乳桿菌為植物乳桿菌、戊糖乳桿菌、干酪乳桿菌、短乳桿菌或布氏乳桿菌。
【文檔編號(hào)】C12R1/245GK103436585SQ201310394145
【公開(kāi)日】2013年12月11日 申請(qǐng)日期:2013年9月3日 優(yōu)先權(quán)日:2013年9月3日
【發(fā)明者】廖美德, 蹇華麗, 宋光均 申請(qǐng)人:廣州元大生物科技發(fā)展有限公司