使用Helicobacter.spp檢測(cè)高脂性食品的方法
【專(zhuān)利摘要】本發(fā)明提供了一種檢測(cè)高脂性食品的產(chǎn)品，檢測(cè)高脂性食品的方法，以及控制脂肪合理攝入量的方法。使用本發(fā)明的產(chǎn)品和方法，可檢測(cè)高脂性食品，控制合適的油脂攝入和脂肪積累。
【專(zhuān)利說(shuō)明】使用Hel icobacter. spp檢測(cè)高脂性食品的方法

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及高脂性食品檢測(cè)，具體的說(shuō)，涉及使用化licobacter. spp檢測(cè)高脂性 食品的方法。

【背景技術(shù)】
[0002] 脂肪和糖類(lèi)、蛋白質(zhì)共同構(gòu)成了人體生命活動(dòng)所需能量的H大來(lái)源，但長(zhǎng)期攝入 過(guò)多的脂肪，則容易導(dǎo)致脂肪積累，不但會(huì)引起服胖，還會(huì)引發(fā)各種疾病，例如，血液中過(guò)高 的血脂，很可能是誘發(fā)高血壓和也臟病的主要因素。因此，對(duì)于每一名消費(fèi)者而言，攝入合 適量的脂肪，都極為重要。
[0003] 但由于個(gè)體差異，在食用同一種產(chǎn)品時(shí)，不同的消費(fèi)者會(huì)表現(xiàn)出不同的效果，例 女口，對(duì)于部分消費(fèi)者而言的正常的脂肪攝入量，對(duì)于另一部分消費(fèi)者而言，可能會(huì)導(dǎo)致其過(guò) 高的脂肪攝入量，進(jìn)而導(dǎo)致脂肪積累。
[0004] MLCT (中長(zhǎng)鏈甘油H醋）是W普通食用油和中碳鏈甘油H醋為原料通過(guò)醋交換 人工合成的一種新型結(jié)構(gòu)油脂，與傳統(tǒng)的油脂相比其分子結(jié)構(gòu)中多了中鏈脂肪酸(MCFA)。 中鏈脂肪酸易消化吸收、可迅速分解轉(zhuǎn)化為能量、不易造成脂肪的積累，是一種重要的功 能食品。MLCT與傳統(tǒng)食用油和中碳鏈甘油H醋（MCT)相比，既能充分發(fā)揮減少體脂肪 積累和保持體重的作用，又適合于烹巧。很多研究表明MLCT可W有效的減輕體重，減 少體內(nèi)脂肪積累（Matsuo T，et aLTlie thermic effect is greater for struc化red medium-and long-chain triacylglycerols versus long-chain triacylglycerols in healthy young women. Metabolism2001, 50:125 - 30 ;0gawa A,et al. Dietary medium-and long-chain triacylglycerols accelerate diet-induced thermogenesis in humans.J Oleo Sci2007, 56:283 - 7 ;Tatsuhiro Matsuo, et al. Effects of structured medium-and long-chain triacylglycerols in diets with various levels of fat on body fat accumulation in rats. British Journal of Nutrition. 2004,91:219-225)。
[0005] 因此，尋找一種合適的標(biāo)志物，W檢測(cè)導(dǎo)致宿主脂肪積累的脂肪攝入量則顯得極 為重要。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0006] 本發(fā)明的發(fā)明人在研究中發(fā)現(xiàn)，當(dāng)小鼠攝入正常量的油脂時(shí)，其腸道菌群中的 化licobacter. spp的豐度極低，當(dāng)小鼠在攝食高脂飼料化CT)后的3天，其腸道菌群中 的化licobacter. spp的豐度就有明顯上升，在3w、6w達(dá)到顯著水平。而攝食MLCT的 所有組都可W顯著降低化licobacter. spp的豐度，有效阻止因攝食長(zhǎng)鏈脂肪酸引起的 Helicobacter, spp的上升。因此，可基于Helicobacter, spp的豐度，進(jìn)行個(gè)性化的食譜設(shè) 計(jì)，從而控制合適的油脂攝入和脂肪積累。
[0007] 因此，本發(fā)明的第一個(gè)目的在于，提供一種檢測(cè)高脂性食品的產(chǎn)品。
[0008] 本發(fā)明提供的檢測(cè)高脂性食品的產(chǎn)品，包括用于檢測(cè)化licobacter. spp的試劑。
[000引在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中，所述產(chǎn)品為試劑盒，優(yōu)選為ELISA試劑盒或PCR試劑 盒。
[0010] 本發(fā)明還提供了 一種用于檢測(cè)高脂性食品的方法。
[0011] 本發(fā)明提供的方法包括檢測(cè)化licobacter. spp的豐度。
[0012] 在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中，檢測(cè)化licobacter. spp的豐度為檢測(cè)食用者腸道 中的 Helicobacter, spp 的豐度。
[0013] 在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中，檢測(cè)化licobacter. spp的豐度為檢測(cè)食用者糞便 中 Helicobacter, spp 的豐度。
[0014] 本發(fā)明還提供了一種用于控制脂肪合理攝入量的方法。
[0015] 本發(fā)明提供的控制脂肪合理攝入量的方法包括：
[0016] A)檢測(cè) Helicobacter, spp 的豐度；
[0017] B)維持或調(diào)節(jié)脂肪攝入量。
[0018] 在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中，檢測(cè)化licobacter. spp的豐度為檢測(cè)食用者腸道 中的 Helicobacter, spp 的豐度。
[0019] 在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中，檢測(cè)化licobacter. spp的豐度為檢測(cè)食用者糞便 中 Helicobacter, spp 的豐度。
[0020] 在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中，Helicobacter, spp的豐度升高，貝Ij減少脂肪的攝入。
[0021] 在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中，Helicobacter, spp的豐度維持于低水平(例如與低 脂飲食的化licobacter. spp的豐度水平)，則可不減少(例如維持或增加）脂肪的攝入。
[0022] 本發(fā)明還提供了化licobacter. spp用作高脂性食品標(biāo)志物的用途。
[0023] 在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中，根據(jù)化licobacter. spp的豐度，確定所述食品是否 是局脂性食品。
[0024] 本發(fā)明還提供了一種抑制化licobacter. spp生長(zhǎng)的方法。
[00巧]本發(fā)明提供的抑制化licobacter. spp生長(zhǎng)的方法為在食品或培養(yǎng)基中使用 MLCT。
[0026] 在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中，在所述食品的油脂中，W總甘油H醋體積計(jì)，MLCT含 量不小于30%，且MCFA占總脂肪酸比例不小于10%。
[0027] 在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中，在所述食品的油脂中，W總甘油H醋體積計(jì)，所述 MLCT含量不小于60%,且MCFA占總脂肪酸比例不小于20%。
[0028] 在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中，在所述食品的油脂中，W總甘油H醋體積計(jì)，所述 MLCT含量不小于90%,且MCFA占總脂肪酸比例不小于30%。
[0029] 本發(fā)明還提供了 MLCT用于抑制Helicobacter, spp生長(zhǎng)的用途。
[0030] 本發(fā)明還提供了化licobacter. spp用于調(diào)節(jié)食品中油脂含量的標(biāo)志物的用途。
[0031] 本發(fā)明還提供了化licobacter. spp用于檢測(cè)食用油脂中MLCT的用途。
[0032] 在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中，所述油脂中，W總甘油H醋體積計(jì)，MLCT含量不小于 30%，且MCFA占總脂肪酸比例不小于10%。
[0033] 在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中，所述油脂中，W總甘油H醋體積計(jì)，所述MLCT含量 不小于60%，且MCFA占總脂肪酸比例不小于20%。
[0034] 在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中，所述油脂中，W總甘油H醋體積計(jì)，所述MLCT含量 不小于90%，且MCFA占總脂肪酸比例不小于30%。

【專(zhuān)利附圖】

【附圖說(shuō)明】
[00巧]圖1顯示喂養(yǎng)6周后各組小鼠腸道菌群屬水平上的變化結(jié)果。
[0036] 圖2顯示小鼠在實(shí)驗(yàn)第0天至第6周中，Helicobacter, spp的變化結(jié)果。

【具體實(shí)施方式】
[0037] 本文所公開(kāi)的"范圍"W下限和上限的形式?？蒞分別為一個(gè)或多個(gè)下限，和一個(gè) 或多個(gè)上限。給定范圍是通過(guò)選定一個(gè)下限和一個(gè)上限進(jìn)行限定的。選定的下限和上限限 定了特別范圍的邊界。所有可W該種方式進(jìn)行限定的范圍是包含和可組合的，即任何下限 可W與任何上限組合形成一個(gè)范圍。例如，針對(duì)特定參數(shù)列出了 60-120和80-110的范圍， 理解為60-110和80-120的范圍也是預(yù)料到的。此外，如果列出的最小范圍值1和2,和如 果列出了最大范圍值3,4和5,則下面的范圍可全部預(yù)料到；1-3、1-4、1-5、2-3、2-4、和2-5。
[0038] 在本發(fā)明中，除非有其他說(shuō)明，組合物的各組分的含量范圍W及其優(yōu)選范圍之間 可W相互組合形成新的技術(shù)方案。
[003引在本發(fā)明中，除非有其他說(shuō)明，"其組合"表示所述各元件的多組分混合物，例如兩 種、H種、四種W及直到最大可能的多組分混合物。
[0040] 在本發(fā)明中，除非有其他說(shuō)明，所有"份"和百分?jǐn)?shù)（％)都指重量百分?jǐn)?shù)。
[0041] 在本發(fā)明中，除非有其他說(shuō)明，所有組合物中各組分的百分?jǐn)?shù)之和為100%。
[0042] 在本發(fā)明中，除非有其他說(shuō)明，數(shù)值范圍"a-b"表示a到b之間的任意實(shí)數(shù)組合的 縮略表示，其中a和b都是實(shí)數(shù)。例如數(shù)值范圍"0-5"表示本文中已經(jīng)全部列出了 "0-5" 之間的全部實(shí)數(shù)，"0-5"只是該些數(shù)值組合的縮略表示。
[0043] 在本發(fā)明中，除非有其他說(shuō)明，整數(shù)數(shù)值范圍"a-b"表示a到b之間的任意整數(shù)組 合的縮略表示，其中a和b都是整數(shù)。例如整數(shù)數(shù)值范圍"1-N"表示1、2……N，其中N是 整數(shù)。
[0044] 如果沒(méi)有特別指出，本說(shuō)明書(shū)所用的術(shù)語(yǔ)"一種"指"至少一種"。
[0045] 如果沒(méi)有特別指出，本發(fā)明所述的百分?jǐn)?shù)(包括重量百分?jǐn)?shù)）的基準(zhǔn)都是所述組合 物的總重量。
[0046] 在本文中，除非另有說(shuō)明，各組分的比例或者重量都指干重。
[0047] 在本發(fā)明中，如果沒(méi)有特別的說(shuō)明，本文所提到的所有實(shí)施方式W及優(yōu)選實(shí)施方 式可W相互組合形成新的技術(shù)方案。
[0048] 在本發(fā)明中，如果沒(méi)有特別的說(shuō)明，本文所提到的所有技術(shù)特征W及優(yōu)選特征可 W相互組合形成新的技術(shù)方案。
[0049] 在本發(fā)明中，如果沒(méi)有特別的說(shuō)明，本文所提到的所有步驟可W順序進(jìn)行，也可W 隨機(jī)進(jìn)行，但是優(yōu)選是順序進(jìn)行的。例如，所述方法包括步驟（a )和（b )，表示所述方法可包 括順序進(jìn)行的步驟（a)和（b)，也可W包括順序進(jìn)行的步驟（b)和（a)。例如，所述提到所述 方法還可包括步驟（C)，表示步驟（C)可W任意順序加入到所述方法，例如，所述方法可W 包括步驟（a)、（b)和（C)，也可包括步驟（a)、（C)和（b)，也可W包括步驟（C)、（a)和（b)等。
[0050] 在本發(fā)明中，如果沒(méi)有特別的說(shuō)明，本文所提到的"包括"表示開(kāi)放式，也可W是封 閉式。例如，所述"包括"可w表示還可w包含沒(méi)有列出的其他元件，也可w僅包括列出的 元件。
[0051] 在本發(fā)明中，如果沒(méi)有特別的說(shuō)明，本文實(shí)施例中的具體數(shù)值W及具體物質(zhì)可與 本文描述部分的其他特征結(jié)合。例如，本文描述部分提到反應(yīng)的溫度為l〇-l〇(TC，而實(shí) 施例提到的反應(yīng)溫度為2(TC，那么可W認(rèn)為本文已經(jīng)具體公開(kāi)了 l〇-2(TC的范圍，或者 20-10(TC的范圍，且該范圍可W描述部分的其他特征結(jié)合起來(lái)形成新的技術(shù)方案。又例如， 本文描述部分提到一類(lèi)化合物醇，而實(shí)施例提到的具體的醇為己醇，那么己醇可W與描述 部分的其他特征結(jié)合起來(lái)形成新的技術(shù)方案。
[0052] 在本發(fā)明中，術(shù)語(yǔ)"高脂性"指的是食品對(duì)于食用者而言是高脂肪性食品，當(dāng)食用 者食用該食品后，脂肪酸攝入過(guò)高，長(zhǎng)期食用會(huì)引起服胖等疾病。同一種食品，對(duì)于不同的 食用者而言，是否屬于"高脂性"食品可能是不同的。當(dāng)食用者食用該食品，如不導(dǎo)致"脂肪 酸攝入過(guò)高，長(zhǎng)期食用會(huì)引起服胖等疾病"等問(wèn)題，則對(duì)于該食用者而言，該食品不為"高脂 性"食品，相反，如食用者食用該食品，導(dǎo)致"脂肪酸攝入過(guò)高，長(zhǎng)期食用會(huì)引起服胖等疾病" 等問(wèn)題，則對(duì)于該食用者而言，該食品是一種"高脂性"食品。
[0053] 術(shù)語(yǔ)"標(biāo)志物"，指與生物學(xué)現(xiàn)象存在相關(guān)性的物質(zhì)。例如，在本發(fā)明中，由于使用 MLCT能使得Helicobacter, spp的豐度為低水平，因此，Helicobacter, spp的豐度的低水平 與使用MLCT相關(guān)，化licobacter. spp可作為MLCT的標(biāo)志物。同樣的，由于使用高脂性食 品，Helicobacter, spp的豐度上升，因此，Helicobacter, spp的豐度的高水平與攝入的脂 肪過(guò)多相關(guān)，化licobacter. spp也可作為高脂性食品的標(biāo)志物，化licobacter. spp也可作 為調(diào)節(jié)食品的油脂含量的標(biāo)志物或作為調(diào)節(jié)飲食中攝入的脂肪量的標(biāo)志物。
[0054] 術(shù)語(yǔ)"豐度"，指的是特定物質(zhì)巧日本發(fā)明中的Helicobacter, spp)的相對(duì)含量，例 女口，在本發(fā)明的實(shí)施例中，每個(gè)樣本中化licobacter. spp測(cè)序所得的序列條數(shù)占該樣本總 序列條數(shù)的百分比。
[0055] 本發(fā)明提供了一種檢測(cè)高脂性食品的產(chǎn)品。
[0056] 本發(fā)明提供的檢測(cè)高脂性食品的產(chǎn)品，包括用于檢測(cè)化licobacter. spp的試劑。
[0057] 在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中，所述產(chǎn)品為試劑盒，該試劑盒包括但不限于為化ISA 試劑盒或PCR試劑盒。
[0058] 在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中，用于檢測(cè)Helicobacter, spp的產(chǎn)品，為ELISA試劑 盒。在一個(gè)實(shí)施方案中，用于檢測(cè)化licobacter. spp的化ISA試劑盒包括化licobacter. spp表面抗原的特異性抗體。
[0059] 在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中，用于檢測(cè)化licobacter. spp的產(chǎn)品，為PCR試劑 盒。在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中，用于檢測(cè)化licobacter. spp的產(chǎn)品，為英光定量PCR產(chǎn) 品。在一個(gè)實(shí)施方案中，用于檢測(cè)化licobacter. spp的英光定量PCR產(chǎn)品包括英光染料 sybrgreen，Taq聚合酶，緩沖液，化licobacter. spp特異性引物；優(yōu)選的，所述PCR產(chǎn)品還 包括，正對(duì)照（包括但不限于含有化licobacter特定片段的質(zhì)粒，或含有化licobacter的 樣品）和負(fù)對(duì)照(包括但不限于滅菌的蒸觸水、雙蒸水等)。在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中，英 光定量PCR產(chǎn)品檢測(cè)化licobacter. spp時(shí)，可在96孔板或8聯(lián)管中加入相應(yīng)溶液，然后于 英光定量PCR儀中進(jìn)行PCR及英光檢測(cè)，并通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線進(jìn)行絕對(duì)定量，或通過(guò)內(nèi)標(biāo)進(jìn)行相 對(duì)定量。
[0060] 本發(fā)明還提供了 一種用于檢測(cè)高脂性食品的方法。
[0061] 本發(fā)明提供的方法包括檢測(cè)化licobacter. spp的豐度。
[0062] 在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中，檢測(cè)化licobacter. SPP的豐度為檢測(cè)食用者腸道 中的 Helicobacter, spp 的豐度。
[0063] 在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中，檢測(cè)化licobacter. spp的豐度為檢測(cè)食用者糞便 中 Helicobacter, spp 的豐度。
[0064] 在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中，食用者糞便中化licobacter. spp的豐度上升，則表 明對(duì)于該食用者而言，該食品為高脂性食品。
[0065] 本發(fā)明還提供了一種用于控制脂肪合理攝入量的方法。
[0066] 本發(fā)明提供的控制脂肪合理攝入量的方法包括：
[0067] A)檢測(cè) Helicobacter, spp 的豐度；
[0068] B)維持或調(diào)節(jié)脂肪攝入量。
[0069] 在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中，檢測(cè)化licobacter. spp的豐度為檢測(cè)食用者腸道 中的 Helicobacter, spp 的豐度。
[0070] 在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中，檢測(cè)化licobacter. spp的豐度為檢測(cè)食用者糞便 中 Helicobacter, spp 的豐度。
[0071] 在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中，Helicobacter, spp的豐度升高，貝Ij減少脂肪的攝入。
[0072] 在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中，Helicobacter, spp的豐度維持于低水平(例如與低 脂飲食的化licobacter. spp的豐度水平基本相當(dāng))，則可不減少（例如維持或增加）脂肪的 攝入。
[0073] 在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中，在增加脂肪的攝入后，Helicobacter, spp的豐度上 升，則需要減少脂肪的攝入，但攝入的脂肪高于增加前的脂肪攝入量，經(jīng)一次或多次調(diào)整 后，攝入合適量的脂肪。
[0074] 本發(fā)明還提供了化licobacter. spp用作高脂性食品標(biāo)志物的用途。
[00巧]在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中，檢測(cè)化licobacter. spp的豐度，從而確定該食品是 否是局脂性食品。
[0076] 在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中，檢測(cè)化licobacter. spp的豐度為檢測(cè)食用者腸道 中的 Helicobacter, spp 的豐度。
[0077] 在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中，檢測(cè)化licobacter. spp的豐度為檢測(cè)食用者糞便 中 Helicobacter, spp 的豐度。
[007引在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中，食用者糞便中化licobacter. spp的豐度上升，則表 明對(duì)于該食用者而言，該食品為高脂性食品。
[0079] 本發(fā)明還提供了一種抑制化licobacter. spp生長(zhǎng)的方法。
[0080] 本發(fā)明提供的抑制化licobacter. spp生長(zhǎng)的方法為在食品或培養(yǎng)基中使用 MLCT。
[0081] 在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中，在所述食品的油脂中，W總甘油H醋體積計(jì)，MLCT含 量不小于30%，且MCFA占總脂肪酸比例不小于10%。
[0082] 在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中，在所述食品的油脂中，W總甘油H醋體積計(jì)，所述 MLCT含量不小于60%,且MCFA占總脂肪酸比例不小于20%。
[0083] 在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中，在所述食品的油脂中，W總甘油H醋體積計(jì)，所述 MLCT含量不小于90%，且MCFA占總脂肪酸比例不小于30%。
[0084] 本發(fā)明還提供了 MLCT用于抑制化licobacter. S卵生長(zhǎng)的用途。
[0085] 本發(fā)明還提供了化licobacter. SPP用于調(diào)節(jié)食品中油脂含量的標(biāo)志物的用途。
[0086] 本發(fā)明還提供了化licobacter. SPP用于檢測(cè)食用油脂中MLCT的用途。
[0087] 在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中，所述油脂中，W總甘油H醋體積計(jì)，MLCT含量不小于 30%,且MCFA占總脂肪酸比例不小于10%。
[0088] 在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中，所述油脂中，W總甘油H醋體積計(jì)，所述MLCT含量 不小于60%,且MCFA占總脂肪酸比例不小于20%。
[0089] 在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中，所述油脂中，W總甘油H醋體積計(jì)，所述MLCT含量 不小于90%，且MCFA占總脂肪酸比例不小于30%。
[0090] 在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中，所述油脂中，W總甘油H醋體積計(jì)，所述MLCT含量 為 30%，31%，32%，33%，34%，35%，36%，37%，38%，39%，40%，41%，42%，43%，44%，45%，46%，47〇/〇， 48%,49%,50%,51%,52%,53%,54%,55%,56%,57%,58%,59%,60%,61%,62%,63%,64%,65%,66%, 67%,68%,69%,70%,71%,72%,73%,74%,75%,76%,77%,78%,79%,80%,81%,82%,83%,84%,85%, 86〇/〇, 87%，88%，89%，90%，91%，92%，93%，94%，95%，96%，97%，98%，99%，或 100〇/〇。
[0091] 在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中，所述油脂中，MCFA占總脂肪酸比例為10%，11%，12%， 13%,14%,15%,16%,17%,18%,19%,20%,21%,22%,23%,24%,25%,26%,27%,28%,29%,30%,31%, 32%,33%,34%,35%,36%,37%,38%,39%,40%,41%,42%,43%,44%, 45%, 46%, 47%, 48%, 49%, 50%, 51%,52%,53%,54%,55%,56%,57%,58%,59%,60%,61%,62%,63%,64%,65%,66%,67%,68%,69%, 70%,71%,72%,73%,74%,75%,76%,77%,78%,79%,80%,81%,82%,83%,84%,85%,86%,87%,88%, 89〇/〇, 90%，91%，92%，93%，94%，95%，96%，97%，98%，99%，或 100〇/〇。
[0092] 本發(fā)明的方法，可W作為一種進(jìn)行食譜設(shè)計(jì)的科學(xué)方法，從而控制合適的油脂攝 入。在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中，可使用本發(fā)明的方法針對(duì)個(gè)人進(jìn)行個(gè)性化的食譜設(shè)計(jì)。 [009引本發(fā)明的下述實(shí)施例中，使用的MLCT通過(guò)W下方法制備：
[0094] MCFA含量為30%的MLCT ;將菜巧油和MCT按摩爾比0. 75:1混合均勻后，加入 lOwt%原料總重的Lipozyme TL IM，反應(yīng)化，過(guò)濾除去化酶，經(jīng)200°C分子蒸觸，脫色，脫莫， 得到MCFA含量為30%的MLCT。
[0095] 含MCFA含量為10%和20%的MLCT ;將上述制備的MCFA含量為30%的MLCT與菜 巧油分別W相應(yīng)比例混合，獲得相應(yīng)MLCT。
[009引本發(fā)明的下述實(shí)施例中，使用的小鼠為7周齡健康雄性C57化/6小鼠，購(gòu)自上海斯 萊克實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限責(zé)任公司。
[0097] 本發(fā)明的下述實(shí)施例中，使用的進(jìn)口無(wú)脂飼料購(gòu)自美國(guó)Research Diets公司，其 貨號(hào)為 D04112303 ;
[0098] 在本發(fā)明的下述實(shí)施例中，實(shí)驗(yàn)中給小鼠喂食的飼料為在進(jìn)口無(wú)脂飼料中加入 4. 3%或20%菜巧油，10%，20%或30%MCFA的油脂，具體如下：
[0099] 1)正常對(duì)照飼料；菜巧油占飼料質(zhì)量的4. 3% ;
[0100] 2)模型對(duì)照飼料；菜巧油占飼料質(zhì)量的20% ;
[010。 3)含10%MCFA飼料：含10%MCFA油脂占飼料質(zhì)量的20%，其中MLCT占總甘油H醋 30面積％，MCFA占總脂肪酸比例為10% ;
[010引 4)含20%MCFA飼料；含20%MCFA油脂占飼料質(zhì)量的20%，其中MLCT占總甘油H醋 60面積％，MCFA占總脂肪酸比例為20% ;
[010引 5)含30%MCFA飼料；含30%MCFA油脂占飼料質(zhì)量的20%，其中MLCT占總甘油H醋 90面積％，MCFA占總脂肪酸比例為30%。
[0104] W上各組飼料除油脂外，其余配料均相同。
[0105] 連施例1、動(dòng)物暇養(yǎng)
[010引將雄性C57化/6小鼠隨機(jī)分成5組，每組12化分組情況如下：
[0107] 1)正常對(duì)照組（NC);飼W正常對(duì)照飼料；
[0108] 2)模型對(duì)照組（MC);飼W模型對(duì)照飼料
[0109] 3) 10%MCFA 組（10%);飼 W含 l〇%MCFA 飼料；
[0110] 4) 20%MCFA 組（20%);飼 W含 20%MCFA 飼料；
[01 川 5) 30%MCFA 組（30%);飼 W含 30%MCFA 飼料。
[0112] 在喂養(yǎng)的0山1(1，3(1，1巧，3巧，6巧收集小鼠糞便樣品，-801：保存，^用于后續(xù)腸道菌 群DNA提取。
[0113] 實(shí)施例2、腸道菌群DNA提取、454測(cè)序及數(shù)據(jù)分析
[0114] 按廠商提供的方法，使用虹viMag? Stool DNA kit/KFmL(購(gòu)自德國(guó)Invitek公 司）試劑盒，分別提取喂養(yǎng)Od，Id, 3d，Iw，3w，6w收集的小鼠糞便樣品中的腸道菌群總DM， 分別用作后續(xù)PCR擴(kuò)展的模板。
[0115] 使用帶有A、B接頭（A端帶有標(biāo)記序列IDtag)的通用引物進(jìn)行PCR，W擴(kuò)增16S rRNA基因的V1-V3區(qū)，其中，
[0116] 上游引物序列（B-27F)為
[0117] 5 > -CCTATCCCCTGTGTGCCTTGGCAGTCTCAGAGAGTTTGATCCTGGCTCAG-3' ；
[0118] 下游引物序列（A-533R)為
[0119] 5' -CCATCTCATCCCTGCGTGTCTCCGACTCAGNNNNNNNNNNTTACCGCGGCTGCTGGCAC-3';
[0120] 其中，引物A-533R和B-27F中的下劃線分別為454測(cè)序A，B接頭，未用下劃線標(biāo) 示的NNNNNNW^為用于區(qū)別不同樣本的8個(gè)隨機(jī)組合的核巧酸堿基（I化ag)。
[0121 ] PCR反應(yīng)體系（20 ill)包括：上下游引物各0. 5uM，模板DNAlOng，5 X Fas巧fu Buffer4ul，F(xiàn)astPfu PolymerasePfu DNA Polymerase (TRANGEN)IU, 2. 5mM dNTPs ;其中模板 DNA為腸道菌群總DM。
[0122] PCR反應(yīng)程序過(guò)程；95°C預(yù)變性2min ;95°C變性30S，55°C退火30S，72°C延伸30S， 共20個(gè)循環(huán)；最后72°C延伸5min。
[0123] 每個(gè)模板進(jìn)行3次PCR擴(kuò)增，將同一樣本的PCR產(chǎn)物混合后用2%瓊脂糖凝膠電泳， 按廠商提供的方法，使用AXYGEN公司的AxyPrepDNA凝膠回收試劑盒切膠回收PCR產(chǎn)物； 按廠商提供的方法，使用Promega公司的如antiFluor?-ST英光定量系統(tǒng)，用PicoGreen⑩ dsDNA定量試劑盒（PicoGreen⑩dsDNA Quantitation Reagent)進(jìn)行定量，按每個(gè)樣品的 測(cè)序量比例混合，按廠商提供的方法，在Roche Genome Sequencer FLX上機(jī)測(cè)序，試劑使用 Roche 指定的 GS 化X+_Sequencing Method Manual_XL+Kit。
[0124] 測(cè)序得到的有效序列（即包含任一 IDtag的序列）通過(guò)IDtag劃分到相應(yīng)模板 的樣本中，然后按 Shangong Wu, et al. , Composition, Diversity, and Origin of the Bacterial Community in Grass Ca巧 Intestine.化oS one, 2012. 7(2): e30440 的優(yōu)化原 則對(duì)序列進(jìn)行優(yōu)化，獲得優(yōu)化后序列。
[0125] 將得到的優(yōu)化后序列中完全相同的序列進(jìn)行合并，將合并后的序列Wkmer searching (http://www. mothur. org/wiki/Align. seqs)方法與 silva 庫(kù)(http://www. arb-silva.de/) (silva SSUlll 版）中的 ali即ed(16S/18S, SSU)核糖體序列數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行 比對(duì)；使用UCHIME化ttp://化ive5. com/uchime)檢測(cè)并去除嵌合體序列（Qiimeric序列）； 計(jì)算比對(duì)對(duì)齊后的序列間非校正配對(duì)距離（uncorrected pairwise距離），根據(jù)比對(duì)序列 中的堿基差異等進(jìn)行距離計(jì)算；使用化dhest nei曲bor方法化ttp://www. mothur. org/ w;Lki/Cluste;r)聚類(lèi)生成操作分類(lèi)單兀（operational taxonomic units，0TU),即當(dāng)任意兩 條reads的相似度均達(dá)到97% W上，將該序列聚類(lèi)成一個(gè)OTU。為了獲得每個(gè)OTU的分類(lèi)學(xué) 信息，將97%相似水平下每個(gè)0TU中的所有序列優(yōu)質(zhì)序列均與SILVA (SSU111版)的小亞基 核糖體RNA (SS化RNA)數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行比對(duì)進(jìn)行一致性分析，找出同一個(gè)0TU中的不同序列的 最近祖先的種屬信息作為該0TU的種屬信息（n、綱、目、科、屬、種5個(gè)水平)。并在屬水平 上比較不同組的統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，統(tǒng)計(jì)方法為Mann-Whitney test。結(jié)果如圖1所示。
[0126] 圖1結(jié)果顯示；在屬水平上，NC、20%、30%組的RC9_gut_group的豐度顯著高于MC 組；NC組的Bacteroides、Alistipes的豐度顯著高于MC組；NC、20%組的Allobaculum的豐 度顯著低于MC組；10%組的Lachnospiraceae_un州hured {genus}的豐度顯著低于MC組； 20%組的Clostridium的豐度顯著低于MC組；NC、10%、20%、30%組的Helicobacter的豐度 顯著低于MC組。
[0127] 分別比較第Od，ld，3d，lw，3w，6w中Helicobacter, spp的量，結(jié)果如圖2所示。
[0128] 圖2結(jié)果顯示，攝食高脂飼料化CT)后的3d，MC組的化licobacter. spp的豐度有 明顯上升，在3w、6w達(dá)到顯著水平。而攝食MLCT的所有組都可W顯著降低化licobacter. spp的豐度，有效阻止因攝食長(zhǎng)鏈脂肪酸引起的化licobacter. spp的上升。
[0129] 根據(jù)上述結(jié)果，由于攝入正常量的油脂時(shí)，Helicobacter, spp豐度極低，而在攝入 高脂飼料化CT)后，Helicobacter, spp的豐度上升明顯，因此，Helicobacter, spp的豐度可 用于判斷攝入的油脂量是否合理。MLCT可W引起化1 icobacter. spp顯著降低，該菌對(duì)MLCT 極為敏感，因此，可用于檢測(cè)MLCT。
[0130] W上所述僅為本發(fā)明的較佳實(shí)施例而已，并非用W限定本發(fā)明的實(shí)質(zhì)技術(shù)內(nèi)容范 圍，本發(fā)明的實(shí)質(zhì)技術(shù)內(nèi)容是廣義地定義于申請(qǐng)的權(quán)利要求范圍中，任何他人完成的技術(shù) 實(shí)體或方法，若是與申請(qǐng)的權(quán)利要求范圍所定義的完全相同，也或是一種等效的變更，均將 被視為涵蓋于該權(quán)利要求范圍之中。
[0131] 在本發(fā)明提及的所有文獻(xiàn)都在本申請(qǐng)中引用作為參考，就如同每一篇文獻(xiàn)被單獨(dú) 引用作為參考那樣。此外應(yīng)理解，在閱讀了本發(fā)明的上述內(nèi)容之后，本領(lǐng)域技術(shù)人員可W對(duì) 本發(fā)明作各種改動(dòng)或修改，該些等價(jià)形式同樣落于本申請(qǐng)所附權(quán)利要求書(shū)所限定的范圍。
【權(quán)利要求】
1. 一種檢測(cè)高脂性食品的產(chǎn)品，其特征在于，所述產(chǎn)品包括用于檢測(cè)Helicobacter, spp的試劑。
2. -種用于檢測(cè)高脂性食品的方法，其特征在于，所述方法包括檢測(cè)Helicobacter, spp的豐度。
3. -種用于控制脂肪合理攝入量的方法，其特征在于，所述方法包括： A) 檢測(cè) Helicobacter, spp 的豐度； B) 維持或調(diào)節(jié)脂肪攝入量。
4. 如權(quán)利要求2或3所述的方法，其特征在于，所述檢測(cè)Helicobacter, spp的豐度為 檢測(cè)食用者糞便中Helicobacter, spp的豐度。 5. Helicobacter, spp用作高脂性食品標(biāo)志物的用途。
6. -種抑制Helicobacter, spp生長(zhǎng)的方法，其特征在于，在食品或培養(yǎng)基中使用 MLCT。 7. MLCT用于抑制Helicobacter, spp生長(zhǎng)的用途。 8. Helicobacter, spp用于調(diào)節(jié)食品中油脂含量的標(biāo)志物的用途。 9. Helicobacter, spp用于檢測(cè)食用油脂中的MLCT的用途。
10. 如權(quán)利要求9所述的用途，其特征在于，所述油脂中，以總甘油三酯體積計(jì)，MLCT含 量不小于30%，且MCFA占總脂肪酸比例不小于10%，優(yōu)選的，所述MLCT含量不小于60%，且 MCFA占總脂肪酸比例不小于20% ;更優(yōu)選，所述MLCT含量不小于90%，且MCFA占總脂肪酸 比例不小于30%。
【文檔編號(hào)】C12Q1/06GK104422767SQ201310395648
【公開(kāi)日】2015年3月18日 申請(qǐng)日期:2013年9月3日 優(yōu)先權(quán)日:2013年9月3日
【發(fā)明者】許駿, 孫麗鳳, 楊紅舟, 張余權(quán), 蔡南海 申請(qǐng)人:豐益(上海)生物技術(shù)研發(fā)中心有限公司