一組肺癌早期診斷用microRNA生物標(biāo)志物及其應(yīng)用的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及生物檢測(cè)領(lǐng)域，特別是涉及一組肺癌早期診斷用microRNA生物標(biāo)志物及其應(yīng)用。本發(fā)明提供一組肺癌早期診斷用miRNA生物標(biāo)志物，所述miRNA生物標(biāo)志物包括：hsa-miR-125a-5p，hsa-miR-193a-5p，hsa-miR-25，hsa-miR-126和hsa-miR-34a。本發(fā)明所提供的這5個(gè)miRNAs組成的血清miRNA生物標(biāo)志物不僅可以特別適用于肺癌早期檢測(cè)，還可以用于晚期肺癌的檢測(cè)。
【專利說(shuō)明】—組肺癌早期診斷用microRNA生物標(biāo)志物及其應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及生物檢測(cè)領(lǐng)域，特別是涉及一組肺癌早期診斷用microRNA生物標(biāo)志物及其應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002]肺癌是造成全世界癌癥死亡率的首要原因，在過(guò)去的3年中，其5年生存率只有輕微改善。在到達(dá)晚期之前，肺癌沒(méi)有明顯的臨床癥狀。超過(guò)75%的肺癌患者確診的時(shí)候已經(jīng)是肺癌局部晚期或轉(zhuǎn)移性肺癌，四分之三肺癌病人的晚期診斷是造成生存率低下的主要原因。早期非小細(xì)胞肺癌(NSCLC)患者的5年生存率約是50%-70%，相比之下，III期和IV期NSCLC患者的生存率分別為5%-15%和低于2%。早期診斷肺癌患者能有效的降低其死亡率。胸部X射線和痰細(xì)胞學(xué)檢查已用于檢測(cè)某些早期肺癌，但靈敏度低。雖然計(jì)算機(jī)斷層掃描(CT)可以無(wú)創(chuàng)性檢測(cè)早期小體積NSCLC的檢測(cè)，它具有較高的假陽(yáng)性率。此外，CT掃描可能會(huì)使患者暴露于有害的輻射之中，導(dǎo)致更多的腫瘤發(fā)生。幾種蛋白標(biāo)志物，如細(xì)胞角蛋白19片段(CYFRA21-1)，癌胚抗原(CEA)，神經(jīng)元特異性烯醇化酶(NSE)等用來(lái)對(duì)肺癌進(jìn)行無(wú)手術(shù)診斷，但是這些標(biāo)志物的靈敏度和特異性都不高。因此，需要尋找新型無(wú)創(chuàng)、高靈敏度和特異性的標(biāo)志物來(lái)對(duì)肺癌進(jìn)行早期檢測(cè)。
[0003]microRNAs (miRNAs)是一類小的、高度保守的非編碼的RNA，它們?cè)诙喾N發(fā)展過(guò)程中都有作用，并且可以作為轉(zhuǎn)錄后調(diào)節(jié)因子調(diào)芐基因表達(dá)。它們調(diào)節(jié)多種生物學(xué)過(guò)程，包括分化、增殖和凋亡。miRNA表達(dá)水平的改變和多種癌癥相關(guān)，它們作為致癌基因或腫瘤抑制基因。據(jù)報(bào)道，miRNA以一種高度穩(wěn)定的形式存在人類血清中，能抵抗RNA酶的消化作用和苛刻的條件。由于血清比較容易獲取，循環(huán)生物標(biāo)志物有希望作為非侵入式的標(biāo)志物用于癌癥的檢測(cè)。為了發(fā)展非侵入式的標(biāo)志物用于早期檢測(cè)肺癌，我們?cè)u(píng)估早期肺癌病人和健康對(duì)照人群中的血清miRNAs的表達(dá)水平，來(lái)驗(yàn)證miRNA可以作為生物標(biāo)志物區(qū)分這兩組人群。
[0004]肺腫瘤是一種異質(zhì)性疾病，由復(fù)雜和多重過(guò)程發(fā)展而來(lái)。因此，我們推測(cè)，同時(shí)評(píng)估多個(gè)腫瘤相關(guān)的血清miRNA可以為早期肺癌提供一個(gè)高度敏感和特異的診斷測(cè)試。為了驗(yàn)證這一假設(shè)，我們?cè)u(píng)估了早期肺癌患者中5個(gè)miRNAs的表達(dá)水平，并且評(píng)估它們用于早期肺癌的診斷價(jià)值。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005]鑒于以上所述現(xiàn)有技術(shù)的缺點(diǎn)，本發(fā)明的目的在于提供一組肺癌早期診斷用microRNA生物標(biāo)志物及其應(yīng)用，并進(jìn)一步提供其相關(guān)的miRNA探針和診斷試劑盒,用于解決現(xiàn)有技術(shù)中的問(wèn)題。
[0006]為實(shí)現(xiàn)上述目的及其他相關(guān)目的，本發(fā)明第一方面提供一組肺癌診斷用miRNA生物標(biāo)志物，所述miRNA生物標(biāo)志物包括:hsa-miR-125a_5p (MIMAT0000443),hsa-miR-193a-5p (MIMAT0004614), hsa-miR-25 (MIMAT0000081), hsa-miR-126(MIMAT0000445)和 hsa_miR-34a (MIMAT0000255)。
[0007]所述hsa-miR-125a_5p 的序列如表 ISeq ID N0.1 所不；
[0008]所述hsa-miR-193a_5p 的序列如表 ISeq ID N0.2 所不；
[0009]所述hsa-miR-25的序列如表1Seq ID N0.3所不；
[0010]所述hsa-miR-126 的序列如表 ISeq ID N0.4 所不；
[0011]所述hsa_miR-34a 的序列如表 ISeq ID N0.5 所不。
[0012]優(yōu)選的，所述miRNA組合為血清miRNA生物標(biāo)志物。
[0013]本發(fā)明的血清miRNA生物標(biāo)志物，聯(lián)合起來(lái)可以用于人肺癌的檢測(cè)，包括I_IV期人肺癌，特別適合于早期人肺癌的檢測(cè)，所述早期人肺癌具體指I/II期人肺癌。
[0014]本發(fā)明第二方面提供所述miRNA生物標(biāo)志物在制備或篩選人肺癌的腫瘤診斷藥物中的用途。
[0015]優(yōu)選的，所述miRNA生物標(biāo)志物在制備或篩選早期人肺癌的腫瘤診斷藥物中的用途。
[0016]本發(fā)明第三方面提供一組肺癌早期診斷用miRNA引物、探針的組合，所述miRNA引物、探針的組合包括:hsa-miR-125a-5p引物、探針，hsa-miR-193a_5p引物、探針，hsa-miR-25 引物、探針，hsa-miR-126 引物、探針，hsa_miR-34a 引物、探針。
[0017]所述各miRNA引物具體包括各miRNA的反轉(zhuǎn)錄引物、定量PCR前引物、定量PCR后引物。
[0018]優(yōu)選的,所述hsa-miR-125a_5p的反轉(zhuǎn)錄引物序列如Seq ID N0.7所述、定量PCR前引物序列如Seq ID N0.13所述、定量PCR后引物序列如Seq ID N0.19所述。
[0019]優(yōu)選的,所述hsa-miR-193a_5p的反轉(zhuǎn)錄引物序列如Seq ID N0.8所述、定量PCR前引物序列如Seq ID N0.14所述、定量PCR后引物序列如Seq ID N0.19所述。
[0020]優(yōu)選的,所述hsa-miR-25的反轉(zhuǎn)錄引物序列如Seq ID N0.9所述、定量PCR前引物序列如Seq ID N0.15所述、定量PCR后引物序列如Seq ID N0.19所述。
[0021]優(yōu)選的，所述hsa-miR-126的反轉(zhuǎn)錄引物序列如Seq ID N0.10所述、定量PCR前引物序列如Seq ID N0.16所述、定量PCR后引物序列如Seq ID N0.19所述。
[0022]優(yōu)選的,所述hsa-miR_34a的反轉(zhuǎn)錄引物序列如Seq ID N0.11所述、定量PCR前引物序列如Seq ID N0.17所述、定量PCR后引物序列如Seq ID N0.19所述。
[0023]優(yōu)選的，所述各miRNA探針的探針序列如Seq ID N0.20所示。
[0024]本發(fā)明第四方面提供所述miRNA引物、探針的組合在制備或篩選人肺癌的腫瘤診斷藥物中的用途。
[0025]本發(fā)明第五方面提供一種人肺癌的腫瘤診斷試劑盒，包括所述miRNA引物、探針的組合。
[0026]優(yōu)選的，所述試劑盒還包括Taq酶、dNTP，MgCl2和PCR緩沖液。
[0027]本發(fā)明發(fā)明人通過(guò)研究證實(shí)，早期肺癌病人的肺癌血清與正常對(duì)照相比，hsa-miR-125a_5p, hsa-miR-193a_5p，hsa-miR-25 和 hsa-miR-126 下調(diào)表達(dá),hsa_miR-34a 上調(diào)表達(dá)(p〈0.0001)，5個(gè)miRNAs的表達(dá)水平變化0.23-2.55倍(表2)。這5個(gè)miRNAs聯(lián)合起來(lái)的AUC可以達(dá)到0.966，靈敏度和特異性分別為92.3%和90.7%。
[0028]進(jìn)一步的，本發(fā)明發(fā)明人通過(guò)研究亦證實(shí)，III/IV期肺癌病人的肺癌血清中，hsa-miR-125a_5p, hsa-miR-193a_5p，hsa-miR-25 和 hsa-miR-126 下調(diào)表達(dá)，hsa_miR-34a 上調(diào)表達(dá)(p〈0.0Ol )，且III/IV期肺癌病人中和I/II期病人中的這5個(gè)miRNAs的表達(dá)水平無(wú)顯著性差異，同時(shí)，兩組對(duì)照之間的miRNAs表達(dá)水平也無(wú)顯著性差異(p>0.05)。5個(gè)miRNAs區(qū)分III/IV期肺癌病人和正常對(duì)照的AUC為0.710-0.911，靈敏度為66.7%_96.7%，特異性為70.0%-87.5%。這5個(gè)miRNAs聯(lián)合起來(lái)區(qū)分III/IV肺癌病人和正常對(duì)照的AUC為0.972，靈敏度和特異性分別為91.7%和90.7%，與檢測(cè)早期肺癌相比，在靈敏度和特異性方面無(wú)顯著性差異(p>0.05)。
[0029]可見(jiàn)，本發(fā)明所提供的這5個(gè)miRNAs組成的血清miRNA生物標(biāo)志物不僅可以特別適用于肺癌早期檢測(cè)，還可以用于晚期肺癌的檢測(cè)。另外，將肺癌病人按照年齡、性別及吸煙史進(jìn)行分層比較，顯示這些臨床因素均與miRNAs的表達(dá)水平無(wú)關(guān)(p>0.05)。因此，這5個(gè)miRNAs聯(lián)合起來(lái)可以用于肺癌的早期和晚期的檢測(cè)，尤其對(duì)早期肺癌具有很高的診斷價(jià)值。
【專利附圖】

【附圖說(shuō)明】
[0030]圖1為探針?lè)ǘ縋CR檢測(cè)miRNA的原理圖。
[0031]圖2A-M顯示為初步篩選中13個(gè)miRNAs的表達(dá)水平變化示意圖(由于hsa-miR-200b, hsa_miR-34c 和 hsa-miR-34c_3p 的 Cp 值大于 36,所以不予統(tǒng)計(jì))。
[0032]圖3A-E顯示為本發(fā)明5個(gè)miRNAs在52例早期肺癌血清和54例正常對(duì)照血清中的表達(dá)水平變化示意圖(所有p〈0.0OODo
[0033]圖4A-E顯示為本發(fā)明5個(gè)miRNAs用于區(qū)分早期肺癌樣本和正常對(duì)照的ROC曲線圖。圖4F顯示為4個(gè)蛋白標(biāo)志物和5個(gè)血清miRNAs區(qū)分早期肺癌樣本和正常對(duì)照的ROC曲線圖，虛線代表4個(gè)蛋白標(biāo)志物聯(lián)合檢測(cè)早期肺癌的ROC曲線圖，實(shí)線代表5個(gè)miRNAs聯(lián)合檢測(cè)早期肺癌的ROC曲線圖 。
【具體實(shí)施方式】
[0034]以下通過(guò)特定的具體實(shí)例說(shuō)明本發(fā)明的實(shí)施方式，本領(lǐng)域技術(shù)人員可由本說(shuō)明書所揭露的內(nèi)容輕易地了解本發(fā)明的其他優(yōu)點(diǎn)與功效。本發(fā)明還可以通過(guò)另外不同的【具體實(shí)施方式】加以實(shí)施或應(yīng)用，本說(shuō)明書中的各項(xiàng)細(xì)節(jié)也可以基于不同觀點(diǎn)與應(yīng)用，在沒(méi)有背離本發(fā)明的精神下進(jìn)行各種修飾或改變。
[0035]在進(jìn)一步描述本發(fā)明【具體實(shí)施方式】之前，應(yīng)理解，本發(fā)明的保護(hù)范圍不局限于下述特定的具體實(shí)施方案；還應(yīng)當(dāng)理解，本發(fā)明實(shí)施例中使用的術(shù)語(yǔ)是為了描述特定的具體實(shí)施方案，而不是為了限制本發(fā)明的保護(hù)范圍；在本發(fā)明說(shuō)明書和權(quán)利要求書中，除非文中另外明確指出，單數(shù)形式“一個(gè)”、“一”和“這個(gè)”包括復(fù)數(shù)形式。
[0036]當(dāng)實(shí)施例給出數(shù)值范圍時(shí)，應(yīng)理解，除非本發(fā)明另有說(shuō)明，每個(gè)數(shù)值范圍的兩個(gè)端點(diǎn)以及兩個(gè)端點(diǎn)之間任何一個(gè)數(shù)值均可選用。除非另外定義，本發(fā)明中使用的所有技術(shù)和科學(xué)術(shù)語(yǔ)與本【技術(shù)領(lǐng)域】技術(shù)人員通常理解的意義相同。除實(shí)施例中使用的具體方法、設(shè)備、材料外，根據(jù)本【技術(shù)領(lǐng)域】的技術(shù)人員對(duì)現(xiàn)有技術(shù)的掌握及本發(fā)明的記載，還可以使用與本發(fā)明實(shí)施例中所述的方法、設(shè)備、材料相似或等同的現(xiàn)有技術(shù)的任何方法、設(shè)備和材料來(lái)實(shí)現(xiàn)本發(fā)明。[0037]除非另外說(shuō)明，本發(fā)明中所公開(kāi)的實(shí)驗(yàn)方法、檢測(cè)方法、制備方法均采用本【技術(shù)領(lǐng)域】常規(guī)的分子生物學(xué)、生物化學(xué)、染色質(zhì)結(jié)構(gòu)和分析、分析化學(xué)、細(xì)胞培養(yǎng)、重組DNA技術(shù)及相關(guān)領(lǐng)域的常規(guī)技術(shù)。這些技術(shù)在現(xiàn)有文獻(xiàn)中已有完善說(shuō)明，具體可參見(jiàn)SambiOOk等 MOLECULAR CLONING:A LABORATORY MANUAL, Second edition, Cold Spring HarborLaboratory Press,1989and Third edition, 2001 ；Ausubel 等，CURRENT PROTOCOLS INMOLECULAR BIOLOGY,John ffiley&Sons,New York,1987and periodic updates ;the seriesMETHODS IN ENZYM0L0GY,Academic Press,San Diego ;WoIffe，CHROMATIN STRUCTURE ANDFUNCTION, Third edition, Academic Press, San Diego,1998 ；METH0DS IN ENZYM0L0GY,Vol.304,Chromatin(P.M.Wassarman and A.P.ffolffe,eds.),Academic Press,San Diego,1999 ;和 METHODS IN MOLECULAR BIOLOGY, Vol.119，Chromatin Protocols(P.B.Becker,ed.)Humana Press, Totowa, 1999 等。
[0038] 本發(fā)明中的肺癌樣本是由上海中山醫(yī)院收集的。取血的時(shí)候同時(shí)收集每個(gè)病人的臨床信息。腫瘤的形態(tài)學(xué)根據(jù)WHO標(biāo)準(zhǔn)來(lái)確定，根據(jù)第7版惡性腫瘤--Μ分類標(biāo)準(zhǔn)對(duì)這些病人進(jìn)行分期。所有病人的血都是在肺癌診斷的時(shí)候收集的，先于腫瘤切除或治療。健康對(duì)照樣本取于上海瑞金醫(yī)院，根據(jù)驗(yàn)血、胸部X線檢查和腹部超聲檢測(cè)的陰性結(jié)果來(lái)收集。收集的血清立刻保存于_80°C，直到使用。
[0039]血清RNA的抽提和定量
[0040]使用mirVana miRNA抽提試劑盒，根據(jù)說(shuō)明書從200 μ L血清中抽提總RNA，最終的洗脫體積為100 μ L。
[0041]由于RNA濃度較低，我們使用固定的體積用于后續(xù)的反轉(zhuǎn)錄反應(yīng)。反轉(zhuǎn)錄反應(yīng)使用Taqman MicroRNA反轉(zhuǎn)錄試劑盒,根據(jù)說(shuō)明書操作。定量PCR反應(yīng)使用Taqman PCR試劑盒，儀器為L(zhǎng)ightCycler480。所有的定量PCR反應(yīng)都設(shè)有三個(gè)復(fù)孔，每次反應(yīng)都設(shè)有陰性對(duì)照。我們使用一段線蟲的RNA (cel-miRNA-39,MIMAT0000010,Seq ID N0.6)作為定量的內(nèi)參。
[0042]血清miRNA生物標(biāo)志物的選擇
[0043]我們使用定量PCR在一批血清樣本中(24例早期肺癌樣本和24例正常對(duì)照)檢測(cè) 16 個(gè) miRNAs (has-miR-21, has-miR-155, has-miR-205, has-miR-20a, hsa_miR-200b,hsa-miR-375, hsa-miR-486_5p, hsa-miR-186, hsa-miR-186_3p, hsa_miR-34c,hsa-miR-34c_3p, hsa-miR-126, hsa_miR-34a, hsa-miR-125a_5p, hsa-miR-193a_5p 和hsa-miR-25)的表達(dá)情況。有顯著性表達(dá)差異的miRNA進(jìn)一步用樣本進(jìn)行驗(yàn)證其表達(dá)情況。
[0044]數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析
[0045]使用GraphPad Prism5.01和SPSS17.0對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。數(shù)據(jù)以平均值土標(biāo)準(zhǔn)誤的形式表示，除非有特殊的說(shuō)明。血清miRNA表達(dá)水平以相對(duì)于正常對(duì)照的倍數(shù)變化形式呈現(xiàn)。Mann-Whitney U檢驗(yàn)用于比較肺癌病人組和正常對(duì)照組中血清miRNA的表達(dá)差異。所有P值均為雙側(cè)，P<0.05被認(rèn)為有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
[0046]實(shí)施例1
[0047]小部分血清樣本中初步選擇標(biāo)志物
[0048]我們首先在48例血清(24例肺癌早期病人和24例正常對(duì)照)中檢測(cè)16個(gè) miRNAs (has-miR-21, has-miR-155, has-miR-205, has_miR-20a, hsa_miR-200b,hsa-miR-375, hsa-miR-486_5p, hsa-miR-186, hsa-miR-186_3p, hsa_miR-34c,hsa-miR-34c_3p, hsa-miR-126, hsa_miR-34a, hsa-miR-125a_5p, hsa-miR-193a_5p 和hsa-miR-25)的表達(dá)。結(jié)果表明，與正常對(duì)照相比，在肺癌血清中，hsa-miR-125a_5p，hsa-miR-193a_5p, hsa-miR-25 和 hsa-miR-126 下調(diào)表達(dá)，hsa_miR-34a 上調(diào)表達(dá)(ρ〈0.001)。hsa-miR-200b, hsa_miR-34c 和 hsa-miR-34c_3p 在血清中表達(dá)水平太低(Cp>36),不能進(jìn)行準(zhǔn)確定量。has-miR-21, has-miR-155, has-miR-205, has_miR-20a,hsa-miR-375,hsa-miR-486-5p,hsa-miR-186-3p 和 hsa-miR-186 在肺癌早期血清樣本與正常血清樣本中兩組表達(dá)沒(méi)有顯著性差異(p>0.05)(圖2)。
[0049]實(shí)施例2
[0050]miRNA標(biāo)志物的進(jìn)一步驗(yàn)證
[0051]為了驗(yàn)證初步篩選出來(lái)的 5 個(gè) miRNAs (hsa-miR-125a_5p, hsa-miR-193a_5p，hsa-miR-25, hsa-miR-126和hsa_miR-34a)的診斷價(jià)值，在106例血清樣本中進(jìn)一步驗(yàn)證這5個(gè)miRNAs的表達(dá)水平。初步篩選步驟中的48例樣本也包含在驗(yàn)證步驟的統(tǒng)計(jì)分析中(此處的106例血清樣本包括52例I/II期肺癌病人血清樣本和54例正常對(duì)照血清樣本)。
[0052]探針?lè)ǘ縋CR檢測(cè)miRNA的原理如圖1所示，各miRNA定量PCR時(shí)所用引物與探針如下:
[0053]表1.miRNA序列，反轉(zhuǎn)錄引物、定量PCR前引物、通用后引物及探針序列
[0054]
【權(quán)利要求】
1.一組肺癌早期診斷用miRNA生物標(biāo)志物，所述miRNA生物標(biāo)志物包括:hsa-miR-125a_5p, hsa-miR-193a_5p, hsa-miR-25, hsa-miR-126 和 hsa-miR-34a。
2.如權(quán)利要求1所述的一組miRNA生物標(biāo)志物，其特征在于，所述miRNA生物標(biāo)志物為血清miRNA生物標(biāo)志物。
3.如權(quán)利要求1-2任一權(quán)利要求所述的miRNA生物標(biāo)志物在制備或篩選人肺癌的腫瘤診斷藥物中的用途。
4. 一組肺癌診斷用miRNA引物、探針的組合，所述miRNA引物、探針的組合包括:hsa-miR-125a-5p 引物、探針，hsa-miR-193a_5p 引物、探針，hsa-miR-25 引物、探針，hsa-miR-126 引物、探針，hsa_miR-34a 引物、探針。
5.如權(quán)利要求4所述的一組肺癌診斷用miRNA引物、探針的組合，其特征在于，所述各miRNA弓丨物具體包括各miRNA的反轉(zhuǎn)錄弓丨物、定量PCR前引物、定量PCR后引物。
6.如權(quán)利要求5所述的一組肺癌診斷用miRNA引物、探針的組合，其特征在于，所述hsa-miR-125a_5p的反轉(zhuǎn)錄引物序列如Seq ID N0.7所述、定量PCR前引物序列如Seq IDN0.13所述、定量PCR后引物序列如Seq ID N0.19所述;所述hsa-miR-193a_5p的反轉(zhuǎn)錄引物序列如Seq ID N0.8所述、定量PCR前引物序列如Seq ID N0.14所述、定量PCR后引物序列如Seq ID N0.19所述；所述hsa-miR-25的反轉(zhuǎn)錄引物序列如Seq ID N0.9所述、定量PCR前引物序列如Seq ID N0.15所述、定量PCR后引物序列如Seq ID N0.19所述；所述hsa-miR-126的反轉(zhuǎn)錄引物序列如Seq ID N0.10所述、定量PCR前引物序列如Seq IDN0.16所述、定量PCR后引物序列如Seq ID N0.19所述；所述hsa_miR-34a的反轉(zhuǎn)錄引物序列如Seq ID N0.11所述、定量PCR前引物序列如Seq ID N0.17所述、定量PCR后引物序列如Seq ID N0.19所述；所述各miRNA探針的探針序列如Seq ID N0.20所示。
7.如權(quán)利要求4-6任一權(quán)利要求所述的miRNA引物、探針的組合在制備或篩選人肺癌的腫瘤診斷藥物中的用途。
8.一種人肺癌的腫瘤診斷試劑盒,包括權(quán)利要求4-6任一權(quán)利要求所述的miRNA引物、探針的組合。
【文檔編號(hào)】C12Q1/68GK103484550SQ201310462150
【公開(kāi)日】2014年1月1日 申請(qǐng)日期:2013年9月30日 優(yōu)先權(quán)日:2013年9月30日
【發(fā)明者】毛紅菊, 王萍, 張宏蓮, 楊大偉, 洪群英, 金慶輝, 白春學(xué), 趙建龍 申請(qǐng)人:中國(guó)科學(xué)院上海微系統(tǒng)與信息技術(shù)研究所