一種蜂花粉活性益生菌飲料及其制備方法
【專利摘要】本發(fā)明提供一種蜂花粉活性益生菌飲料及其制備方法。該蜂花粉活性益生菌飲料是以蜂花粉為原料，配以一定比例的麥芽糖和/或半乳糖，經(jīng)乳桿菌BL1和乳桿菌BL2兩種益生菌混合發(fā)酵，再經(jīng)調(diào)配而成。本發(fā)明針對(duì)蜂花粉原料酸性較強(qiáng)，不易被微生物利用的特點(diǎn)，優(yōu)選兩個(gè)耐酸性強(qiáng)并且有多種優(yōu)良性狀的菌株，通過(guò)控制發(fā)酵工藝使產(chǎn)品30天內(nèi)益生菌活菌數(shù)保持在1011cfu/L以上，并能生物轉(zhuǎn)化蜂花粉黃酮苷得到大量黃酮苷元，提高蜂花粉黃酮的生物利用率。同時(shí)富含其它蜂花粉和益生菌發(fā)酵產(chǎn)物，營(yíng)養(yǎng)豐富，香味濃郁，酸甜適口，同時(shí)具有美容養(yǎng)顏、增強(qiáng)免疫力、降低膽固醇、調(diào)節(jié)腸道菌群及預(yù)防便秘等功能。
【專利說(shuō)明】一種蜂花粉活性益生菌飲料及其制備方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及一種具有保健功能的蜂花粉活性益生菌飲料及其制備方法，屬于保健食品【技術(shù)領(lǐng)域】。
【背景技術(shù)】
[0002]隨著人們健康意識(shí)的提高，保健食品越來(lái)越引起人們的關(guān)注。食用蜂花粉在我國(guó)歷史悠久，蜂花粉富含人體所必需的氨基酸、有機(jī)酸、不飽和脂肪酸、核酸、酶、礦物元素、維生素等營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)及黃酮、多糖等保健成分，對(duì)人體有極高的營(yíng)養(yǎng)保健和藥用價(jià)值?，F(xiàn)代研究表明，蜂花粉具有抗氧化、抗疲勞、抗衰老、提高免疫力、改善記憶等多種功效，目前保健品市場(chǎng)上的蜂花粉產(chǎn)品比較單一，多為粉劑的形式，食用適口性較差，多種有效成分的生物利用率較低。因此，研究開(kāi)發(fā)高技術(shù)含量的蜂花粉產(chǎn)品，具有重要意義。
[0003]益生菌是指改善宿主微生態(tài)平衡而發(fā)揮有益作用，達(dá)到提高宿主健康水平和健康狀態(tài)的活菌制劑及其代謝產(chǎn)物，益生菌存在于地球上的各個(gè)角落，動(dòng)物體內(nèi)有益的細(xì)菌或真菌主要有:乳酸菌、雙歧桿菌、酵母菌等。乳酸菌是重要的益生菌，活性乳酸菌在生長(zhǎng)時(shí)會(huì)分泌對(duì)人體健康有益的物質(zhì)，因此對(duì)人體有較多的好處:1、有促進(jìn)胃液分泌、提高食欲、力口強(qiáng)消化的功效；益生菌能將牛奶中的乳糖和蛋白質(zhì)分解，使人體更易消化和吸收；2、維護(hù)腸道菌群生態(tài)平衡，形成生物屏障，抑制有害菌對(duì)腸道的入侵；3、能減少某些致癌物質(zhì)的產(chǎn)生，因而有防癌作用；4、能抑制腸道內(nèi)腐敗菌的繁殖，并減弱腐敗菌在腸道內(nèi)產(chǎn)生的毒素；通過(guò)產(chǎn)生大量的短鏈脂肪酸促進(jìn)腸道蠕動(dòng)及菌體大量生長(zhǎng)改變滲透壓而防止便秘；5、有降低膽固醇的作用，特別適宜高血脂的人飲用；6、提高人體免疫功能，乳酸菌可以產(chǎn)生一些增強(qiáng)免疫功能的物質(zhì)，可以提高人體免疫，防止疾病。一般來(lái)說(shuō)，無(wú)論是手術(shù)后，還是急性、慢性病愈后的病人，為了治療疾病或防止感染都曾服用或注射了大量抗生素，使腸道菌叢發(fā)生很大改變，一些有益的腸道菌被抑制或殺死，造成菌群失調(diào)。每天服用一定量的益生性乳酸菌，可以維持腸道菌群平衡，調(diào)節(jié)腸道有益菌群到正常水平。
[0004]目前有關(guān)蜂花粉發(fā)酵產(chǎn)品的報(bào)道如下。喬琳(2005)開(kāi)展了蜂花粉固態(tài)發(fā)酵營(yíng)養(yǎng)強(qiáng)化劑的研制，通過(guò)酵母菌、乳酸菌、納豆芽孢桿菌對(duì)花粉進(jìn)行單菌、混菌固態(tài)發(fā)酵試驗(yàn)，最終確定了蜂花粉固態(tài)發(fā)酵的最適菌株是納豆芽孢桿菌和嗜酸乳桿菌，兩菌按1:1比例混合；最適發(fā)酵方式為淺層好氧發(fā)酵，接種方式為先接納豆芽孢桿菌，發(fā)酵第3d再接入嗜酸乳桿菌；接種量為10%，花粉含水量為35?40%，發(fā)酵溫度為30°C，發(fā)酵周期為8d，同時(shí)開(kāi)展了放大試驗(yàn)。發(fā)酵后的花粉氣味鮮香，酸甜可口，花粉中納豆芽孢桿菌的活菌數(shù)為4.5X107cfu/g，嗜酸乳桿菌的活菌數(shù)為2.7X107cfu/go粗蛋白增加了 5.9%，粗脂肪降低了
1.57%，游離氨基酸增加了 0.02%，總有機(jī)酸增加了 0.79g/100g, pH值降到4.2，乳酸增加量最大達(dá)到0.20g/100g。楊文超等(2012)進(jìn)行了蜂糧源乳酸菌發(fā)酵油菜蜂花粉的工藝優(yōu)化，采用固態(tài)發(fā)酵，乳酸菌接種量13%，紅曲霉發(fā)酵液添加量10%，加水量25%，發(fā)酵溫度33°C。發(fā)酵后蜂花粉適口性得以改善，提高了營(yíng)養(yǎng)價(jià)值。王翠華等(2009)研制了一種含蜂花粉的功能性酸奶，在酸奶制作中添加了 0.1%?2%的蜂花粉，益生菌在21天內(nèi)可保持在IO6?109cfu/ml。孫士堯(2008 )、陳湖南(2011)還各自研究了蜂蜜花粉酒。
[0005]但是上述研究中蜂花粉固態(tài)發(fā)酵普遍接種量大、發(fā)酵時(shí)間長(zhǎng)，接種量在10%以上，發(fā)酵時(shí)間也要I周左右，同時(shí)固態(tài)發(fā)酵存在產(chǎn)品品質(zhì)不穩(wěn)定的缺點(diǎn)，容易受環(huán)境的影響而感染雜菌。液態(tài)發(fā)酵中不管是將蜂花粉添加到酸奶還是用于釀酒，一般蜂花粉添加量都比較少，蜂花粉用量一般不超過(guò)2%。我們測(cè)定了蜂花粉的自然pH在4.5?5.0之間，在此較低的PH值下微生物容易受到酸性抑制而難以生長(zhǎng)和發(fā)酵?？赡芤舱沁@個(gè)原因，現(xiàn)有以固態(tài)發(fā)酵方式進(jìn)行發(fā)酵時(shí)需要比較大的接種量和比較長(zhǎng)的發(fā)酵時(shí)間，同時(shí)PH下降也不大明顯。而液態(tài)發(fā)酵時(shí)蜂花粉用量不能太大，否則會(huì)抑制微生物生長(zhǎng)而達(dá)不到發(fā)酵效果。所以，選擇適用于蜂花粉發(fā)酵的菌劑顯得非常重要。
[0006]乳桿菌BL1、BL2是由本發(fā)明專利的 申請(qǐng)人:山東省農(nóng)業(yè)科學(xué)院農(nóng)產(chǎn)品研究所從泡菜中分離鑒定并保存的兩株耐酸性乳酸細(xì)菌(劉孝永，裘紀(jì)瑩，孫欣，等.泡菜中兩株乳酸菌的分離鑒定及其混合培養(yǎng)初探.山東農(nóng)業(yè)科學(xué)[J]，2012，44(9):85-89.)。上述文章僅對(duì)上述兩株菌株的分離鑒定進(jìn)行了報(bào)道。但是沒(méi)有報(bào)道該菌株的功能和用途。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0007]本發(fā)明克服了上述蜂花粉產(chǎn)品發(fā)酵過(guò)程中存在的不足，提供了一種蜂花粉活性益生菌飲料及其制備方法。蜂花粉經(jīng)過(guò)乳桿菌BLl和乳桿菌BL2兩種優(yōu)良菌株混合培養(yǎng)，主要黃酮苷被部分生物轉(zhuǎn)化成相應(yīng)的苷元——山奈酚，提高了蜂花粉黃酮的生物利用率。同時(shí)含有大量其它蜂花粉功能成分及益生菌發(fā)酵產(chǎn)物，具有抗氧化、抗疲勞、抗衰老、提高免疫力、降膽固醇及調(diào)節(jié)胃腸平衡等功能。
[0008]本發(fā)明的目的之一是提供一種具有抗氧化、抗疲勞、抗衰老、提高免疫力、改善記憶、調(diào)節(jié)胃腸平衡等功能的蜂花粉活性益生菌飲料；目的之二是提供該蜂花粉活性益生菌飲料的制備方法。
[0009]本發(fā)明的目的之一可通過(guò)如下技術(shù)措施來(lái)實(shí)現(xiàn):一種蜂花粉活性益生菌飲料，其特征是，由下述重量份的原料制成:蜂花粉3?10，麥芽糖和/或半乳糖3?5，水100，甜蜜素0.030?0.065，安賽蜜0.020?0.030 ；以蜂花粉以及麥芽糖和/或半乳糖為原料，加入水制成發(fā)酵培養(yǎng)基，經(jīng)乳桿菌BL1、乳桿菌BL2兩種益生菌等體積比混合液態(tài)發(fā)酵，后熟，并添加用水溶解的甜蜜素和安賽蜜調(diào)配而成。前后兩次用水總量為100重量份，其中制成發(fā)酵培養(yǎng)基的水用量> 50份；二者優(yōu)選的重量比為99:1。
[0010]本發(fā)明的目的之二可通過(guò)如下技術(shù)措施來(lái)實(shí)現(xiàn):
(1)按上述重量份取各原料；
(2)發(fā)酵培養(yǎng)基的配制:蜂花粉除雜并粉碎過(guò)40?80目篩，麥芽糖和/或半乳糖粉碎過(guò)40目篩；將蜂花粉和麥芽糖和/或半乳糖混勻，邊攪拌邊緩慢加入99重量份的水，攪拌均勻并用紗網(wǎng)或4層紗布過(guò)濾；
(3)發(fā)酵:將發(fā)酵培養(yǎng)基于115°C保溫15?30分鐘殺菌，并冷卻到37°C以下；加入發(fā)酵培養(yǎng)基體積3?5% (優(yōu)選4 %)的混合菌種擴(kuò)大液，30?37°C密封靜置培養(yǎng)18?30小時(shí)；待發(fā)酵液pH降至3.10?3.30，總酸(以乳酸計(jì))達(dá)到5?7 g/L,菌落總數(shù)達(dá)到IO11 cfu/L時(shí)為發(fā)酵終點(diǎn)；
其中混合菌種擴(kuò)大液是以乳桿菌BLl菌種擴(kuò)大液和乳桿菌BL2菌種擴(kuò)大液按等體積混勻后加入；
(4)后熟及調(diào)味:將達(dá)到發(fā)酵終點(diǎn)的產(chǎn)品于4~8°C靜置8~12小時(shí)進(jìn)行后熟，以利于香味的形成；將甜蜜素和安賽蜜預(yù)先用I重量份的水溶解，95°C保溫20分鐘殺菌，以無(wú)菌操作方式加入到發(fā)酵產(chǎn)品中并混合均勻。
[0011](5)包裝及保存:無(wú)菌灌裝并于4~8°C流通、貯存，飲用前搖勻。保質(zhì)期30天，保質(zhì)期內(nèi)PH≤3.0，總酸(以乳酸計(jì))5~9 g/L，菌落總數(shù)IO11 cfu/L。
[0012]所述乳桿菌BLl菌種擴(kuò)大液的制備方法為:
(1)乳桿菌BLl益生菌活化:將乳桿菌BLl在MRS固體培養(yǎng)基上劃線培養(yǎng)，分離單菌落轉(zhuǎn)接MRS斜面培養(yǎng)基，37°C培養(yǎng)24~72小時(shí)備用；
(2)乳桿菌BLl液體菌種的制備:由斜面接種于液體MRS培養(yǎng)基，37°C培養(yǎng)18~24小時(shí)，得液體菌種；
(3)乳桿菌BLl菌種擴(kuò)大液的制備:配制濃度為3~5wt%的蜂花粉水溶液，115°C滅菌15~20min，冷卻至常溫，以3~5%的體積比接種液體菌種，37°C靜置培養(yǎng)I~2天，得乳桿菌BLl菌種擴(kuò)大液。
[0013]所述乳桿菌BL2菌種擴(kuò)大液的制備方法同乳桿菌BLl菌種擴(kuò)大液的制備方法。
[0014]本發(fā)明選用乳桿菌BLl和乳桿菌BL2兩個(gè)優(yōu)良菌株，以較高濃度蜂花粉為主要原料進(jìn)行液態(tài)混合發(fā)酵，充分發(fā)揮了兩個(gè)菌在蜂花粉發(fā)酵中的作用。本發(fā)明通過(guò)研究表明，乳桿菌BLl和乳桿菌BL2耐酸性強(qiáng)，可利用較高濃度的蜂花粉進(jìn)行快速液態(tài)發(fā)酵。乳桿菌BL2產(chǎn)酸快，但是單菌發(fā)酵蜂花粉時(shí)后酸化比較嚴(yán)重，保存期短，乳桿菌BLl產(chǎn)酸比乳桿菌BL2慢，兩者混合發(fā)酵并控制發(fā)酵工藝，可保證30天內(nèi)益生菌數(shù)保持在IO11 cfu/L以上。乳桿菌BLl具有很強(qiáng)的黃酮苷轉(zhuǎn)化能力，可將蜂花粉中豐富的黃酮苷轉(zhuǎn)化為相應(yīng)的苷元，從而提高人體對(duì)蜂花粉的生物利用率。同時(shí)，乳桿菌BLl和乳桿菌BL2具有抗菌特性，對(duì)沙門氏菌、大腸桿菌、金黃色葡萄球菌和副溶血性弧菌等食源性致病菌均有一定的抑制作用；兩菌株均具有降解膽固醇的能力，乳桿菌BLl和乳桿菌BL2的體外膽固醇降解率分別為38.53%和 32.09%ο
[0015]總體來(lái)說(shuō)，本發(fā)明提供的蜂花粉活性益生菌飲料復(fù)合并強(qiáng)化了蜂花粉和益生菌的保健功能，通過(guò)生物轉(zhuǎn)化強(qiáng)化了蜂花粉的抗氧化、抗疲勞、抗衰老、提高免疫力、改善記憶等多種功效，又具有高含量的益生菌數(shù)，能調(diào)節(jié)胃腸平衡，降低膽固醇，集保健與治療于一體，迎合人們預(yù)防、保健、治療與康復(fù)相結(jié)合的醫(yī)學(xué)觀點(diǎn)，并且保質(zhì)期長(zhǎng)達(dá)30天，市場(chǎng)前景更為廣泛。
【專利附圖】

【附圖說(shuō)明】
[0016]圖1蜂花粉益生菌發(fā)酵過(guò)程主要黃酮苷降解情況。
【具體實(shí)施方式】
[0017]下面結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明做進(jìn)一步說(shuō)明，但不限于此。
[0018]實(shí)施例1:
乳桿菌BLl菌種擴(kuò)大液的制備；
MRS固體培養(yǎng)基為:蛋白胨5 g，牛肉膏5 g，酵母膏2.5 g，葡萄糖2.5 g，檸檬酸三銨1.0 g，乙酸鈉1.56 g，乙酸鉀1.125 g，磷酸氫二鈉0.815 g，四水硫酸錳0.125 g，七水硫酸鎂0.29 g，吐溫80為0.5 ml，瓊脂10 g，蒸餾水500 ml,pH6.5，121°C滅菌20
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[0019]MRS斜面培養(yǎng)基為:同MRS固體培養(yǎng)基。
[0020]液體MRS培養(yǎng)基為:為MRS固體培養(yǎng)基組分中去掉瓊脂。
[0021](I)益生菌活化:將乳桿菌BLl在MRS固體培養(yǎng)基上劃線培養(yǎng)，分離單菌落轉(zhuǎn)接MRS斜面培養(yǎng)基，37°C培養(yǎng)48小時(shí)備用；
(2)液體菌種:由斜面接種于液體MRS培養(yǎng)基，37°C培養(yǎng)20小時(shí)，得液體菌種；
(3)菌種擴(kuò)大液:配制3%重量的蜂花粉水溶液，115°C滅菌15min，冷卻至常溫，以4%的體積比接種液體菌種，37°C靜置培養(yǎng)I天，得乳桿菌BLl菌種擴(kuò)大液；
所述乳桿菌BL2菌種擴(kuò)大液的制備方法同上。
[0022]實(shí)施例2:
(1)發(fā)酵培養(yǎng)基的配制:蜂花粉除雜并粉碎過(guò)40目篩，麥芽糖和半乳糖粉碎過(guò)40目篩。將5kg蜂花粉、2kg麥芽糖和2kg半乳糖混勻,邊攪拌邊緩慢加入99kg的水,攪拌均勻并用紗網(wǎng)或4層紗布過(guò)濾；
(2)發(fā)酵:將發(fā)酵培養(yǎng) 基于 115°C保溫20分鐘殺菌，并冷卻到37°C以下。加入發(fā)酵培養(yǎng)基的4%體積的混合菌種擴(kuò)大液，其中混合菌種擴(kuò)大液是以乳桿菌BLl和乳桿菌BL2兩個(gè)益生菌的菌種擴(kuò)大液按1:1的體積比混勻后加入。37°C密封靜置培養(yǎng)24小時(shí)，待發(fā)酵液pH降至3.10~3.20，總酸(以乳酸計(jì))達(dá)到5~7 g/L，菌落總數(shù)達(dá)到IO11 cfu/L時(shí)為發(fā)酵終
占.(3)后熟及調(diào)味:將達(dá)到發(fā)酵終點(diǎn)的產(chǎn)品于4°C靜置12小時(shí)進(jìn)行后熟，以利于香味的形成。將0.065kg的甜蜜素和0.030kg的安賽蜜預(yù)先用Ikg的水溶解，95°C保溫20分鐘殺菌，以無(wú)菌操作方式加入到發(fā)酵產(chǎn)品中并混合均勻；
(4)包裝及保存:無(wú)菌灌裝并4°C流通、貯存，飲用前搖勻。保質(zhì)期30天，保質(zhì)期內(nèi)pH ^ 3.0，總酸(以乳酸計(jì))5~9 g/L，菌落總數(shù)IO11 cfu/L。
[0023]蜂花粉益生菌發(fā)酵過(guò)程主要黃酮苷降解情況見(jiàn)圖1和表1。
【權(quán)利要求】
1.一種蜂花粉活性益生菌飲料，其特征是，由下述重量份的原料制成:蜂花粉3~10，麥芽糖和/或半乳糖3~5，水100，甜蜜素0.030~0.065，安賽蜜0.020~0.030 ；以蜂花粉以及麥芽糖和/或半乳糖為原料，加入水制成發(fā)酵培養(yǎng)基，經(jīng)乳桿菌BLl乳桿菌BL2兩種益生菌等體積比混合液態(tài)發(fā)酵，后熟，并添加用水溶解的甜蜜素和安賽蜜調(diào)配而成，所述制成發(fā)酵培養(yǎng)基及溶解甜蜜素和安賽蜜的水的總用量為100重量份，其中制成發(fā)酵培養(yǎng)基的水用量> 50重量份。
2.如權(quán)利要求1所述的一種蜂花粉活性益生菌飲料，其特征是，取99重量份的水制成發(fā)酵培養(yǎng)基，加入I重量份的水溶解甜蜜素和安賽蜜。
3.一種制備權(quán)利要求1所述蜂花粉活性益生菌飲料的方法，其特征是， (1)按權(quán)利要求1所述重量份取原料； (2)發(fā)酵培養(yǎng)基的配制:將蜂花粉以及麥芽糖和/或半乳糖混勻后加入水，攪拌均勻并用紗網(wǎng)或4層紗布過(guò)濾； (3)發(fā)酵:將發(fā)酵培養(yǎng)基高溫殺菌，并冷卻到37°C以下；然后加入發(fā)酵培養(yǎng)基體積3~5%的混合菌種擴(kuò)大液，30~37°C密封靜置培養(yǎng)；待發(fā)酵液pH降至3.10~3.30，總酸達(dá)到5~7 g/L，菌落總數(shù)達(dá)到IO11 cfu/L時(shí)為發(fā)酵終點(diǎn)； 其中混合菌種擴(kuò)大液是以乳桿菌BLl菌種擴(kuò)大液和乳桿菌BL2菌種擴(kuò)大液按等體積混勻后加入； (4)后熟及調(diào)味:將達(dá)到發(fā)酵終點(diǎn)的產(chǎn)品于4~8°C靜置8~12小時(shí)進(jìn)行后熟；將甜蜜素和安賽蜜預(yù)先水溶解，高溫殺菌，以無(wú)菌操作方式加入到發(fā)酵產(chǎn)品中并混合均勻后無(wú)菌灌裝。
4.如權(quán)利要求3所述的制備方法，其特征是，所述乳桿菌BLl菌種擴(kuò)大液的制備方法為: (1)乳桿菌BLl益生菌活化:將乳桿菌BLl在MRS固體培養(yǎng)基上劃線培養(yǎng)，分離單菌落轉(zhuǎn)接MRS斜面培養(yǎng)基，37°C培養(yǎng)24~72小時(shí)備用； (2)乳桿菌BLl液體菌種的制備:由斜面接種于液體MRS培養(yǎng)基，37°C培養(yǎng)18~24小時(shí)，得液體菌種； (3)乳桿菌BLl菌種擴(kuò)大液的制備:配制濃度為3~5wt%的蜂花粉水溶液，115°C滅菌15~20min，冷卻至常溫，以3~5%的體積比接種液體菌種，37°C靜置培養(yǎng)I~2天，得乳桿菌BLl菌種擴(kuò)大液； 所述乳桿菌BL2菌種擴(kuò)大液的制備方法同乳桿菌BLl菌種擴(kuò)大液的制備方法。
5.如權(quán)利要求3或4所述的制備方法，其特征是，所述混合菌種擴(kuò)大液的接種體積比為4% ο
6.如權(quán)利要求3或4所述的制備方法，其特征是，所述蜂花粉除雜并粉碎過(guò)40~80目篩，麥芽糖和/或半乳糖粉碎過(guò)40目篩。
7.如權(quán)利要求3或4所述的制備方法，其特征是，所述發(fā)酵培養(yǎng)基于115°C保溫15~30分鐘進(jìn)行高溫殺菌。
8.如權(quán)利要求3或4所述的制備方法，其特征是，所述將甜蜜素和安賽蜜預(yù)先用水溶解后，于95°C保溫20分鐘進(jìn)行高溫殺菌。
【文檔編號(hào)】A23L2/38GK103598654SQ201310578456
【公開(kāi)日】2014年2月26日 申請(qǐng)日期:2013年11月19日 優(yōu)先權(quán)日:2013年11月19日
【發(fā)明者】裘紀(jì)瑩, 陳蕾蕾, 陳相艷, 劉孝永, 王未名, 張奇志 申請(qǐng)人:山東省農(nóng)業(yè)科學(xué)院農(nóng)產(chǎn)品研究所