一種低腎上腺素型肥胖基因體質(zhì)評估的方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種低腎上腺素型肥胖基因體質(zhì)評估方法，其特征在于，通過同時檢測分析個體的AGT基因、AGTR1基因、NOS3基因SNPs位點基因攜帶型為所有的受檢者提供低腎上腺素型肥胖體質(zhì)評估，可以讓受檢者在考慮以飲食和運動方式進行瘦身之前，先了解自身基因體質(zhì)情況，了解個人的肥胖潛能成因，選擇最適合的個體化營養(yǎng)及運動瘦身方式，將各種肥胖基因表現(xiàn)的型態(tài)一一擊破，達到最有效健康的減重效果。
【專利說明】一種低腎上腺素型肥胖基因體質(zhì)評估的方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及一種低腎上腺素型肥胖基因體質(zhì)評估方法，可用于評估低腎上腺素型肥胖基因體質(zhì)情況，針對性的提示受檢者根據(jù)遺傳體質(zhì)選擇不同的減肥策略，屬于分子生物學【技術(shù)領(lǐng)域】。
【背景技術(shù)】
[0002]肥胖癥是一種熱量代謝障礙，攝入熱量超過消耗的熱量，引起體內(nèi)脂肪積聚過多所致。一般認為超過按身高所測標準體重20%即可成為肥胖。肥胖癥是一種與遺傳因素及生活方式密切相關(guān)的慢性疾病，它會引發(fā)血脂升高，容易造成脂肪肝、動脈血管病變、心臟病、糖尿病，肥胖的兒童還會引發(fā)性功能發(fā)育不良并導致成人期各種疾病發(fā)病率和死亡率上升。因此，若通過有效的方法來預防，就能避免過早地出現(xiàn)高血壓、冠心病、糖尿病、腦血管病等疾患，從而提聞人們的生存質(zhì)量。
[0003]由于至少有40%軀體脂肪量的差異是由遺傳因素引起的，所以很容易明確遺傳對肥胖有很大影響。遺傳體質(zhì)不同的人在患肥胖癥時應采取不同的減肥策略，利用現(xiàn)代科學研究成果，開發(fā)一項基于分子遺傳基礎(chǔ)的體重管理分子檢測產(chǎn)品會對減肥者的減肥計劃提供基因減肥概念的個性化體重管理建議，具有較強的社會意義和市場前景。目前肥胖癥的臨床治療方法主要是飲食和運動療法，但存在著碳水化合物、脂肪以及蛋白質(zhì)攝入量控制“一刀切”和盲目采用減肥藥物的非個體化治療方式。原因主要在于無法明確地將患者區(qū)分成為不同的減重體質(zhì)，從而對不同患者是否需要嚴格控制碳水化合物的攝入，是否需要控制脂肪的攝入，是否需要使用減肥藥物，以及應該使用哪類減肥藥物的治療措施選擇上沒有明確指導。
[0004]腎上 腺主要負責人體對于災難的反應。當腎上腺素分泌時，人體血壓上升、口干舌燥、心跳加快、血管擴張等等，都是為了對抗外界的壓力。而這些現(xiàn)象需要消耗大量的熱量來維持。當體重增加時，就會激活某些基因，這些基因會導致體內(nèi)鹽分和水分的潴留，升高血壓，并引起進一步的增重。
[0005]研究發(fā)現(xiàn)，低腎上腺素型肥胖相關(guān)基因變異因反復節(jié)食而造成新陳代謝緩慢，是造成水腫型肥胖的主要兇手。許多人在減重期間的飲食控制以不合理的節(jié)食來進行。須知道人體有一定的基礎(chǔ)代謝率，熱量長期攝取低下的結(jié)果，會導致身體的基礎(chǔ)代謝率下降，使身體進入類似冬眠狀態(tài)以減低能量消耗，當減重過后恢復正常飲食，一旦攝取熱量增加，便輕易形成脂肪且不易消耗，若是長期如此體重減輕而又回復，會使減重變得更不容易。
[0006]研究發(fā)現(xiàn)AGT，AGTRl, N0S3基因與低腎上腺素型肥胖體質(zhì)有關(guān)。
[0007]AGT為血管緊張素原(angiotensinogen)的編碼基因，由該基因編碼的蛋白是血管緊張素前體，其作為唯一的腎素作用底物，在腎素一血管緊張素系統(tǒng)(reninangiotensin system ,RAS)中，對調(diào)節(jié)血管張力、心臟和血管重構(gòu)起到重要作用。腎素血管緊張素系統(tǒng)在血管生長和血管病變的調(diào)節(jié)中起重要作用，它由一系列激素及相應的酶組成，通過對血容量和外周阻力的控制調(diào)節(jié)人體血壓和水、電解質(zhì)平衡。AGT基因是此系統(tǒng)一個重要基因，國內(nèi)外的眾多研究表明AGT基因上的多態(tài)現(xiàn)象與該系統(tǒng)密切相關(guān)。研究表明，該基因與原發(fā)性高血壓的相關(guān)性與體重指數(shù)有關(guān)，體重正常的男性基因型攜帶者易患高血壓病。
[0008] AGTRl 為 I 型血管緊張素 II 受體(Angiotensin II receptor type I, AGTRl)的一些多態(tài)位點與高血壓有關(guān)。目前已認識到，Ang II不僅是一種血管活性物質(zhì)，可引起機體血流動力學改變，導致高血壓的發(fā)生，而且更為重要的是它是一種生長因子，在一些以組織器官進行性纖維化為特征的慢性心血管、腎臟疾病的進展中也起著非常重要的作用。攜帶風險基因時，機體對血管緊張素敏感性增高，血管壁張力增加、醛固酮釋放增多，易造成水鈉潴留，引發(fā)高血壓,并引起體重進一步的增加。
[0009]N0S3 即 nitric oxide synthase 3 (endothelial cell),中文名稱內(nèi)皮一氧化氮合成酶。內(nèi)皮型一氧化氮合成酶(N0S3)主要分布于冠狀血管及心腔面的內(nèi)膜，主要功能是參與精氨酸和脯氨酸代謝，并催化生成(NO)。一氧化氮是一種內(nèi)皮松弛因子，具有舒張血管、調(diào)節(jié)血流、抑制血管平滑肌細胞增殖、抑制血小板和白細胞粘附等重要功能，參與了多種疾病的病理生理過程。現(xiàn)有的研究表明，N0S3基因的多態(tài)，與個體罹患心血管疾病，如高血壓、冠心病等疾病的易感性相關(guān)。功能受損的N0S3基因?qū)黾釉擃惣膊』疾〉娘L險。基因變異影響了細胞膜內(nèi)外鈉氫離子的交換，進而影響了細胞內(nèi)的酸堿度，改變血管阻力，增加了高血壓的發(fā)病風險。
[0010]目前的基礎(chǔ)研究已能從理論上證明基因分型檢測可以用于判斷肥胖體質(zhì)的類型，而且檢測方法簡便、檢測成本在可接受程度中、檢測結(jié)果可信。因此，基因分型檢測用于評估肥胖體質(zhì)的可行性是明確的。根據(jù)基因檢測結(jié)果結(jié)合體重管理測評系統(tǒng)建立個性化體重健康評估報告，有針對的解決體重控制問題，提高人們生活質(zhì)量。因此利用現(xiàn)有科學、技術(shù)研究成果來開發(fā)這樣一個產(chǎn)品，時機是成熟的。
[0011]本發(fā)明的目的是提供一種低腎上腺素型肥胖基因體質(zhì)評估方法，可以讓受檢者在考慮以飲食和運動方式進行瘦身之前，先了解自身基因體質(zhì)情況，了解個人的肥胖潛能成因，選擇最適合的個體化營養(yǎng)及運動瘦身方式，將各種肥胖基因表現(xiàn)的型態(tài)一一擊破，達到最有效健康的減重效果。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0012]本發(fā)明的目的是提供一種低腎上腺素型肥胖基因體質(zhì)評估方法，可以讓受檢者在考慮以飲食和運動方式進行瘦身之前，先了解自身基因體質(zhì)情況，了解個人的肥胖潛能成因，選擇最適合的個體化營養(yǎng)及運動瘦身方式，將各種肥胖基因表現(xiàn)的型態(tài)一一擊破，達到最有效健康的減重效果。
[0013]為實現(xiàn)以上目的，本發(fā)明提供一種低腎上腺素型肥胖基因體質(zhì)評估方法。其具體步驟為:
步驟1:檢測的樣品類型與采樣方法
用采樣拭在口腔中分別左右兩腮至少需要各上下刮40次以上，以保證采集到足量的細胞樣本；
步驟2:基因組DNA的抽提方法
采用硅膠吸附法抽提每一個口腔上皮細胞樣本的基因組DNA，時間為2小時一 2.5小時，經(jīng)電泳檢測后，用肉眼可見清晰白色條帶即可判斷獲得的DNA能進入下一步檢測；
步驟3:熒光定量PCR反應
將每一個被測者樣本分別放入3個反應孔，同時檢測3個位點，即血管緊張素原基因(AGT) rs5051 ;血管緊張素II I型受體基因(AGTR1) rs5186 ;內(nèi)皮型一氧化氮合成酶基因(N0S3) rsl799983，另外根據(jù)實驗需要增設(shè)不含DNA模版的NTC空白對照孔；
每一個反應孔的基因分型可以根據(jù)下表的引物和探針設(shè)計，采用TaqMan?_MGB技術(shù)，進行檢測試劑合成；
在每一個反應孔中加入試劑為熒光定量PCR反應體系，總體積為10μ1,即濃度為20ng/μ? 的 DNA 模板 2μ1、?μ1 IOX 熒光定量 PCR 反應緩沖液 ABI Taqman ? MGB、0.?μ? 25mMd NTP合成DNA的四種脫氧核苷酸底物、0.5μ1 25mM MgCl2溶液、0.02μ1 (5unitsM) TaqDNA聚合酶、去離子水4.98μ1、4個位點分別采用不同的正向引物(20μΜ, 0.225μ1 )、反向弓丨物(20μΜ，0.225卜1)、￥1(:熒光探針(1(^]\1，0.25μ1)和 FAM 熒光探針(ΙΟμΜ，0.25μ1)工具進行檢測(詳見下表)；
【權(quán)利要求】
1.一種低腎上腺素型肥胖基因體質(zhì)評估方法，其特征在于，具體步驟為步驟1:檢測的樣品類型與采樣方法用采樣拭在口腔中分別左右兩腮至少需要各上下刮40次以上，以保證采集到足量的細胞樣本；步驟2:基因組DNA的抽提方法采用硅膠吸附法抽提每一個口腔上皮細胞樣本的基因組DNA，時間為2小時一 2.5小時，經(jīng)電泳檢測后，用肉眼可見清晰白色條帶即可判斷獲得的DNA能進入下一步檢測；步驟3:熒光定量PCR反應將每一個被測者樣本分別放入3個反應孔，同時檢測3個位點，即血管緊張素原基因(AGT) rs5051 ;血管緊張素II I型受體基因(AGTR1) rs5186 ;內(nèi)皮型一氧化氮合成酶基因(N0S3) rsl799983，另外根據(jù)實驗需要增設(shè)不含DNA模版的NTC空白對照孔；每一個反應孔的基因分型可以根據(jù)下表的引物和探針設(shè)計，采用TaqMan?_MGB技術(shù)，進行檢測試劑合成；在每一個反應孔中加入試劑為熒光定量PCR反應體系，總體積為10μ1,即濃度為20ng/μ? 的 DNA 模板 2μ1、?μ1 IOX 熒光定量 PCR 反應緩沖液 ABI Taqman ? MGB、0.?μ? 25mMd NTP合成DNA的四種脫氧核苷酸底物、0.5μ1 25mM MgCl2溶液、0.02μ1 (5unitsM) TaqDNA聚合酶、去離子水4.98 μ1、4個位點分別采用不同的正向引物(20μΜ, 0.225μ1 )、反向弓丨物(20μΜ，0.225卜1)、￥1(:熒光探針(1(^]\1，0.25μ1)和 FAM 熒光探針(ΙΟμΜ，0.25μ1)工具進行檢測，引物探針如下:
2.權(quán)利要求書I中的 所述的三個基因的組合檢測模式。
【文檔編號】C12Q1/68GK103602750SQ201310645961
【公開日】2014年2月26日 申請日期:2013年12月5日 優(yōu)先權(quán)日:2013年12月5日
【發(fā)明者】王校, 毛丹丹, 傅詠南 申請人:上海中優(yōu)醫(yī)藥高科技有限公司