化學品的制造方法
【專利摘要】本發(fā)明的課題是提供以六碳糖與五碳糖的混合糖為發(fā)酵原料的高收率的化學品的制造方法。作為本發(fā)明的解決問題的方法是，提供化學品的制造方法，是通過連續(xù)發(fā)酵來制造化學品的方法，包括：將微生物的培養(yǎng)液用分離膜過濾，將未過濾液保持在或回流至培養(yǎng)液中，在培養(yǎng)液中補加發(fā)酵原料，和回收過濾液中的生產(chǎn)物，所述發(fā)酵原料包含五碳糖和六碳糖，所述微生物是具有使用戊糖還原酶和五醇脫氫酶來代謝五碳糖的途徑的微生物。
【專利說明】化學品的制造方法
【技術領域】
[0001]本發(fā)明涉及使用了包含六碳糖和五碳糖的發(fā)酵原料的通過連續(xù)發(fā)酵來制造化學品的方法。
【背景技術】
[0002]以乳酸等生物分解性聚合物原料、乙醇等生物燃料為代表的來源于生物質(zhì)的化學品作為二氧化碳向大氣中的排放問題和/或能源問題的顯在化、以及可持續(xù)性(sustainability)和生命周期評估(LCA)對應型制品，受到強烈關注。作為這些生物分解性聚合物原料、生物燃料的制造方法，一般使用從玉米等可食性生物質(zhì)純化而得的六碳糖葡萄糖作為微生物的發(fā)酵原料，作為發(fā)酵產(chǎn)物得到，但如果使用可食性生物質(zhì)，則可能由于與食物競爭而引起價格高漲，不能實現(xiàn)穩(wěn)定的原料供應。于是，進行了使用來源于稻秸等非可食性生物質(zhì)的糖作為微生物的發(fā)酵原料的嘗試(參照專利文獻I)。
[0003]使用來源于非可食性生物質(zhì)的糖作為發(fā)酵原料時，將非可食生物質(zhì)所含的纖維素、半纖維素等通過糖化酶分解成糖，但此時不僅得到葡萄糖等六碳糖，還同時得到木糖等五碳糖，在使用來源于非可食性生物質(zhì)的糖作為微生物的發(fā)酵原料的情況下，需要使用六碳糖與五碳糖的混合糖作為發(fā)酵原料(參照專利文獻I)。在使用六碳糖與五碳糖的混合糖時，需要使用除了六碳糖的代謝途徑之外還具有五碳糖的代謝途徑的微生物。作為五碳糖的代謝途徑，已知通過 戊糖還原酶和五醇脫氫酶的代謝途徑，已知作為第一階段，戊糖還原酶與五碳糖作用而生成五醇，作為第二階段，五醇脫氫酶與五醇作用。然而，實際上第一階段所生成的五醇不進入第二階段以后的代謝途徑而蓄積在培養(yǎng)液中，因而存在生產(chǎn)收率不提高這樣的課題。
[0004]作為以作為六碳糖與五碳糖的混合糖的來源于非可食性生物質(zhì)的糖為微生物的發(fā)酵原料的發(fā)酵方法，可采用連續(xù)發(fā)酵，但實際對于連續(xù)發(fā)酵時的發(fā)酵收率并未確認(參照專利文獻I)。另一方面，還已知將六碳糖與五碳糖的混合糖作為發(fā)酵原料進行連續(xù)發(fā)酵時，與分批發(fā)酵相比發(fā)酵收率顯著降低(參照非專利文獻I)。
[0005]因此，想要在以六碳糖與五碳糖的混合糖為發(fā)酵原料的具有通過戊糖還原酶和五醇脫氫酶的五碳糖的代謝途徑的微生物的發(fā)酵中提高發(fā)酵收率時，到目前為止的技術常識是認為，需要通過突變導入和/或基因?qū)雭磉M行木糖代謝途徑的改良。
[0006]現(xiàn)有技術文獻
[0007]專利文獻
[0008]專利文獻1:W02010/067785
[0009]非專利文獻
[0010]非專利文獻1:Susan T.Toon 等，Enhanced Cofermentat1n of Glucose andXylose by Recombinant Saccharomyces Yeast Strains in batch and Continuous OperatingModes., Applied B1chemistry and B1technology.，(1997)，63-65，243-255.
【發(fā)明內(nèi)容】

[0011]發(fā)明要解決的課題
[0012]本發(fā)明的課題是，提高以六碳糖與五碳糖的混合糖作為具有通過戊糖還原酶和五醇脫氫酶的五碳糖代謝途徑的微生物的發(fā)酵原料進行發(fā)酵時的發(fā)酵收率。
[0013]用于解決課題的方法
[0014]本
【發(fā)明者】們對上述課題進行了深入研究，結(jié)果通過在使用具有戊糖還原酶和戊糖脫氫酶的微生物時，用包含六碳糖和五碳糖的發(fā)酵原料進行使用分離膜的連續(xù)發(fā)酵，從而解決了上述課題，實現(xiàn)了從六碳糖與五碳糖的混合糖中的收率提高，完成了本發(fā)明。
[0015]即，本發(fā)明如以下(I)~(7)。
[0016](I)化學品的制造方法，是通過連續(xù)發(fā)酵來制造化學品的方法，包括:將微生物的培養(yǎng)液用分離膜過濾，將未過濾液保持在或回流至培養(yǎng)液中，在培養(yǎng)液中補加發(fā)酵原料，和回收過濾液中的生產(chǎn)物，
[0017]所述發(fā)酵原料包含五碳糖和六碳糖，所述微生物是具有使用戊糖還原酶和五醇脫氫酶來代謝五碳糖的途徑的微生物。
[0018](2)根據(jù)(I)所述的化學品的制造方法，在體積傳氧系數(shù)即KLa為5~300小時―1的條件下進行連續(xù)發(fā)酵。 [0019](3)根據(jù)(I)或(2)所述的化學品的制造方法，所述發(fā)酵原料中所含的五碳糖與六碳糖的比率為1:9~9:1。
[0020](4)根據(jù)⑴或⑵所述的化學品的制造方法，所述發(fā)酵原料包含來源于生物質(zhì)的糖液。
[0021](5)根據(jù)(I)~(4)的任一項所述的化學品的制造方法，五碳糖是木糖。
[0022](6)根據(jù)(I)~(5)的任一項所述的化學品的制造方法，戊糖還原酶是木糖還原酶。
[0023](7)根據(jù)(I)~(6)的任一項所述的化學品的制造方法，五醇脫氫酶是木糖醇脫氫酶。
[0024]發(fā)明的效果
[0025]根據(jù)本發(fā)明，可以大幅提高使用包含五碳糖和六碳糖的發(fā)酵原料的具有戊糖還原酶和戊糖脫氫酶的微生物的各種化學品的發(fā)酵生產(chǎn)的效率收率。
【具體實施方式】
[0026]本發(fā)明的化學品的制造方法的特征在于，是作為發(fā)酵原料使用包含五碳糖和六碳糖的混合糖的發(fā)酵原料，培養(yǎng)具有戊糖還原酶和戊糖脫氫酶的微生物，將其培養(yǎng)液用分離膜過濾，將未過濾液保持在或回流至培養(yǎng)液中，并且在培養(yǎng)液中補加發(fā)酵原料，回收過濾液中的生產(chǎn)物的連續(xù)發(fā)酵。
[0027]五碳糖是指構(gòu)成糖的碳的數(shù)為5的糖，也稱為戊糖(Pentose)。有I位具有醛基的戊醛糖和2位具有酮基的戊酮糖。作為戊醛糖，可列舉木糖、阿拉伯糖、核糖、來蘇糖，作為戊酮糖，可列舉核酮糖、木酮糖。作為本發(fā)明中使用的五碳糖，只要是微生物能夠同化的五碳糖則可以是任一種，從自然界的存在比例和/或獲得的容易性等觀點出發(fā)，優(yōu)選木糖、阿拉伯糖，更優(yōu)選木糖。[0028]六碳糖是構(gòu)成糖的碳的數(shù)為6的糖,也稱為己糖(Hexose)。有I位具有醒基的醒糖和2位具有酮基的酮糖。作為醛糖，可列舉葡萄糖、甘露糖、半乳糖、阿洛糖、古洛糖、塔羅糖等，作為酮糖，可列舉果糖、阿洛酮糖、山梨糖等。作為本發(fā)明中使用的六碳糖，只要是微生物能夠同化的六碳糖就可以是任一種，從自然界中的存在比例和/或獲得容易性等觀點出發(fā)，優(yōu)選葡萄糖、甘露糖、半乳糖，更優(yōu)選葡萄糖。
[0029]關于本發(fā)明中使用的混合糖不特別限定，但由于包含六碳糖與五碳糖兩者，因而優(yōu)選使用來源于含纖維素的生物質(zhì)的糖液。含纖維素的生物質(zhì)可列舉甘蔗渣、柳枝稷、玉米秸、稻秸、麥秸等草木系生物質(zhì)、和樹木、廢建材等木質(zhì)系生物質(zhì)等為例。含纖維素的生物質(zhì)含有作為糖脫水縮合而成的多糖的纖維素或者半纖維素，通過將這樣的多糖水解來制造可作為發(fā)酵原料利用的糖液。來源于含纖維素的生物質(zhì)的糖液的制備方法可以是任何方法，作為這樣的糖的制造方法，公開了使用濃硫酸將生物質(zhì)進行酸水解來制造糖液的方法(日本特表平11-506934號公報、日本特開2005-229821號公報)，將生物質(zhì)用稀硫酸進行水解處理后進一步進行纖維素酶等的酶處理從而制造糖液的方法(A.Aden等，“LignocellulosicB1mass to Ethanol Process Design and Economics UtilizingCo-Current Dilute Acid Prehydrolysis and Enzymatic Hydrolysis for Corn Stover,?NRELTechnical R印ort (2002))。另外作為不使用酸的方法，公開了使用250~500°C左右的亞臨界水將生物質(zhì)進行水解來制造糖液的方法(日本特開2003-212888號公報)，以及將生物質(zhì)進行亞臨界水處理后進一步進行酶處理從而制造糖液的方法(日本特開2001-95597號公報)，將生物質(zhì)用240~280°C的加壓熱水進行水解處理后進一步進行酶處理從而制造糖液的方法(日本特許3041380號公報)。如以上那樣的處理之后，還可以將所得的糖液進行純化。其方法在例如W02010/067785中公開。
[0030]作為混合糖所含的五碳糖與六碳糖的重量比率，可以是任何比率，但如果作為混合糖中的五碳糖與六碳糖的重量比率表示為(五碳糖):(六碳糖)，則優(yōu)選為1:9~9:1。這是假定來源于含纖維素的生物質(zhì)的糖液為混合糖時的糖比率。
[0031]作為混合糖的總糖濃度，在微生物不受到底物抑制的程度內(nèi)優(yōu)選為高濃度。如果糖濃度過低，則生產(chǎn)效率差，因而優(yōu)選為20g/L以上。作為優(yōu)選的總糖濃度的范圍，為20~500g/L。鑒于上述，則五碳糖的濃度優(yōu)選為5g/L以上，六碳糖的濃度優(yōu)選為5g/L以上。
[0032]另外，作為發(fā)酵原料所含的氮源可使用氨氣、氨水、銨鹽類、尿素、硝酸鹽類、其他輔助使用的有機氮源例如油柏類、大豆水解液、酪蛋白分解物、其他氨基酸、維生素類、玉米漿、酵母或酵母提取物、肉提取物、胨等肽類、各種發(fā)酵菌體及其水解物等。作為無機鹽類，可適宜添加使用磷酸鹽、鎂鹽、鈣鹽、鐵鹽和錳鹽等。
[0033]本發(fā)明中使用的微生物為了生長繁殖而需要特定的營養(yǎng)素時，可以將其營養(yǎng)物作為標準品或含有該營養(yǎng)物的天然物添加。另外，還可以根據(jù)需要使用消泡劑。在本發(fā)明中，培養(yǎng)液是指微生物在發(fā)酵原料中增殖而得的液體。補加的發(fā)酵原料的組成可以由培養(yǎng)開始時的發(fā)酵原料組成適宜變更，以使目的化學品的生產(chǎn)性變高。
[0034] 接下來，對于可以在本發(fā)明的化學品的制造方法中使用的微生物進行說明。對于本發(fā)明的微生物，只要是具有戊糖還原酶和戊糖脫氫酶的微生物就不特別限定。進而，使用的微生物可以是從自然環(huán)境中分離的微生物，也可以是通過突變和/或基因重組而部分性質(zhì)被改變的微生物。[0035]戊糖還原酶是還原酶的一種，是指以NADH或NADPH為輔酶具有將戊醛糖轉(zhuǎn)換為糖醇的活性的酶。例如，木糖還原酶相當于例如ECl.1.1.307,ECl.1.1.21，是將木糖轉(zhuǎn)換為木糖醇的酶。阿拉伯糖還原酶相當于例如ECl.1.1.21，是將阿拉伯糖轉(zhuǎn)換為阿糖醇的酶。另外，即使不是以上述EC編號分類的酶，只要是具有上述活性的酶，也包含在本發(fā)明中的戊糖還原酶中。
[0036]五醇脫氫酶是脫氫酶的一種，是以NAD+作為輔酶將五醇轉(zhuǎn)換為戊酮糖的酶。例如，木糖醇脫氫酶相當于例如ECl.1.1.9,ECl.1.1.10，是將木糖醇轉(zhuǎn)換為木酮糖的酶。阿糖醇脫氫酶相當于例如ECl.1.1.11、ECl.1.1.12，是將阿糖醇轉(zhuǎn)換為核糖的酶。即使是分類上與五醇脫氫酶不同的酶，只要是具有上述活性的酶，也包含在本發(fā)明中的五醇脫氫酶中。
[0037]能代謝戊糖的微生物作為具有戊糖還原酶和戊糖脫氫酶的微生物而已知。例如，畢赤酵母(Pichia)屬、假絲酵母(Candida)屬、管囊酵母(Pachysolen)屬、克魯維酵母屬(Kluyveromyces)、漢遜酵母屬(Hansenula)球擬酵母屬(Torulopsis)、德巴利氏酵母屬(Debaryomyces)、伊薩酵母屬(Issachenkia)、酒香酵母屬(Brettanomyces)、1J ^ K木9屬(Lindnera)、威克漢姆酵母屬(Wickerhamomyces)等。具體可列舉樹干畢赤酵母(Pichia stipitis)、匕。3一于(Pichia mexcana)、休哈塔假絲酵母(Candidashehatae)、產(chǎn)I元假絲酵母(Candida utilis)、熱帶假絲酵母(Candida tropicalis)、纖維假絲酵母(Candida tenuis)、博伊丁假絲酵母(Candida boidinii)、^ ^ 'y r ^ 9' * ^V 'y 'y 7- (Candida sonorensis) > ^ ^ ^ r ? 夕'.r ? 'y r ν (Candida diddensiae)、中間假絲酵母(Candida intermedia)、近平滑假絲酵母菌(Candida parapsilosis)、今^
>于.'彳夕'.J 夕 7 乂 ;l.一寸(Candida methanosorbosa)、今弋 > 夕'.々彳力一,、^ ?1 (Candida wickerhamii)、嗜鞋管囊酵母(Pachysolen tannophilus)、馬克斯克魯維酵母(Kluyveromyces mar xianus)、乳酸克魯維酵母(Kluyveromyces lactis)、^ 寸子二
>今 7*.才丨>夕丨J 7 (Issachenkia orientalis)、漢遜德巴利氏酵母(Debaryomyceshansenii)、多形漢遜酵母(Hansenula po Iymorpha)、球擬酵母(Torulopsis bomb i col a) >納氏酒香酵母(Brettanomyces naardenensis)、1J ^ K ^ 7.口夕' 才、> 7 (Lindnerarhodanensis)、々< '7 力一廠乇 S 七八(ffickerhamomyces rabaulensis)等。它們具有戍糖還原酶和戍糖脫氫酶，可以通過利用KEGG(Kyoto Encyclopedia of Genesand Genomes,京都基因與基因組百科全書)、GenBank等的Web所公開的數(shù)據(jù)庫進行檢索而簡單地獲知。
[0038]另外，即使是數(shù)據(jù)庫中無信息的微生物，也可以通過以下[I]、[2]所示的酶活性測定來獲知。
[0039][I]戊糖還原酶活性測定
[0040]在包含200mM的木糖(或阿拉伯糖等的戊糖)、和100 μ L的1.5mM的NAD(P)H的50mM的磷酸緩沖液(900 μ L)中添加培養(yǎng)微生物的菌體提取液，在30°C監(jiān)測反應所生成的NAD(P) +特異的340nM的吸光度的減少，從而可以測定戊糖還原酶活性。
[0041][2]五醇脫氫酶活性測定
[0042]在包含50mM的MgCl2、300mM的木糖醇(或阿拉伯糖等的戊糖)和100 μ L的1mM的NAD⑵+的50mM的Tris-HCl緩沖液900 μ L中添加培養(yǎng)微生物的菌體提取液，在35°C監(jiān)測反應所生成的NAD(P)H特異的340nM的吸光度的增加，從而可以測定五醇脫氫酶活性。[0043]進而，即使是細菌、面包酵母等本來不具有戊糖還原酶和戊糖脫氫酶活性的微生物，只要通過基因重組使其表達該酶，則也包含在本發(fā)明中。作為本來不具有戊糖還原酶和戍糖脫氫酶活性的微生物已知的可列舉，大腸菌(Escherichia coli)、釀酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)、光滑假絲酵母(Candida glabrata)、谷氛酸棒狀桿菌(Corynebacterium glutamicum)、凝結(jié)芽抱桿菌(Bacillus coagulans)、枯草芽胞桿菌(Bacillus subtillis)、7 *?？?9外K子卟z.9工術9夕亍^力義(Sporolactobacillus Iaevolacticus)、多粘類芽抱桿菌(Paenibacillus polymixa)、運動發(fā)酵單孢菌(Zymomonas mobilis)、棕櫚發(fā)酵單孢菌(Zymobacterpalmae)等。作為通過基因重組來制作表達該酶的微生物的方法，在日本特開2009-112289等中公開。
[0044]進而，還可以將具有該酶的微生物通過突變導入和/或基因重組而強化發(fā)酵能力，和/或?qū)胪鈦砘蚨a(chǎn)本來不產(chǎn)生的物質(zhì)。具體地，是除了木糖還原酶和木糖醇脫氫酶之外還導入木糖異構(gòu)酶，使作用于木糖醇的代謝物木酮糖的木酮糖激酶高表達，或?qū)Σ簧a(chǎn)D-乳酸的微生物導入D-乳酸脫氫酶，等等。
[0045]接下來，對于在本發(fā)明中作為分離膜使用的多孔性膜進行說明。
[0046]對于本發(fā)明中使用的多孔質(zhì)膜不特別限定，只要具有將在微生物的利用攪拌型培養(yǎng)器或者攪拌型生物反應器的培養(yǎng)中所得的培養(yǎng)液從微生物進行分離過濾的功能即可，可以使用例如多孔質(zhì)陶瓷膜、多孔質(zhì)玻璃膜、多孔質(zhì)有機高分子膜、金屬纖維編織體、無紡布等。其中特別是多孔質(zhì)有機高分子膜或陶瓷膜是合適的。
[0047]對于本發(fā)明中作為分離膜使用的多孔性膜的構(gòu)成進行說明。本發(fā)明中使用的多孔性膜優(yōu)選具有適應被處理水的水質(zhì)和/或用途的分離性能和透水性能。
[0048]多孔性膜從阻擋性能和透水性能、分離性能、例如耐污染性的觀點出發(fā)，優(yōu)選為包含多孔質(zhì)樹脂層的多孔性膜。
[0049]包含多孔質(zhì)樹脂層的多孔性膜優(yōu)選在多孔質(zhì)基材的表面具有作為分離功能層發(fā)揮作用的多孔質(zhì)樹脂層。多孔質(zhì)基材支撐多孔質(zhì)樹脂層而賦予分離膜以強度。
[0050]本發(fā)明中使用的多孔性膜在多孔質(zhì)基材的表面具有多孔質(zhì)樹脂層時，無論多孔質(zhì)樹脂層滲透到多孔質(zhì)基材中，還是多孔質(zhì)樹脂層不滲透到多孔質(zhì)基材中，任一者均可，可根據(jù)用途選擇。
[0051]多孔質(zhì)基材的平均厚度優(yōu)選為50 μ m~3000 μ m。
[0052]多孔質(zhì)基材的材質(zhì)包含有機材料和/或無機材料等，期望使用有機纖維。優(yōu)選的多孔質(zhì)基材是由纖維素纖維、三乙酸纖維素纖維、聚酯纖維、聚丙烯纖維和聚乙烯纖維等有機纖維制成的紡織布和/或無紡布，更優(yōu)選使用密度的控制比較容易、制造也容易且廉價的無紡布。
[0053]多孔質(zhì)樹脂層可以適合使用有機高分子膜。作為有機高分子膜的材質(zhì)，可列舉例如，聚乙稀系樹脂、聚丙稀系樹脂、聚氣乙稀系樹脂、聚偏_1，1- 二氣乙稀系樹脂、聚諷系樹月旨、聚醚砜系樹脂、聚丙烯腈系樹脂、纖維素系樹脂和三乙酸纖維素系樹脂等。有機高分子膜也可以是以這些樹脂為主成分的樹脂的混合物。這里主成分是指該成分含有50重量％以上、優(yōu)選60重量％以上。有機高分子膜的材質(zhì)優(yōu)選使用利用溶液的制膜容易且物理耐久性和/或耐化學性也優(yōu)異的聚氯乙烯系樹脂、聚偏-1，1- 二氟乙烯系樹脂、聚砜系樹脂、聚醚砜系樹脂和聚丙烯腈系樹脂，最優(yōu)選使用聚偏-1，1- 二氟乙烯系樹脂或以其為主成分的樹脂。
[0054]這里，作為聚偏-1，1-二氟乙烯系樹脂，優(yōu)選使用偏-1，1-二氟乙烯的均聚物。進而，聚偏-1，1-二氟乙烯系樹脂還優(yōu)選使用與可與偏-1，1-二氟乙烯共聚的乙烯基系單體的共聚物。作為可與偏-1，1-二氟乙烯共聚的乙烯基系單體，可例示四氟乙烯、六氟丙烯和
三氯氟乙烯等。
[0055]對本發(fā)明中作為分離膜使用的多孔性膜不特別限定，只要發(fā)酵中使用的微生物能夠通過即可，但期望不易發(fā)生由發(fā)酵中使用的微生物的分泌物和/或發(fā)酵原料中的微粒造成的堵塞、且過濾性能為長時間穩(wěn)定地繼續(xù)的范圍。因此，優(yōu)選多孔性分離膜的平均細孔徑為0.01 μ m以上且小于5 μ m。另外，進一步優(yōu)選如果多孔性膜的平均細孔徑為0.01 μ m以上且小于I μ m，則可以兼?zhèn)湮⑸飼恍孤┑母吲懦屎透咄杆?，可以具有更高的精度和再現(xiàn)性地實現(xiàn)長時間保持透水性。
[0056]如果與微生物的大小接近，則有時這些物質(zhì)直接塞住孔,所以多孔性膜的平均細孔徑優(yōu)選小于I μ m。為了防止微生物的漏出、即排除率降低的不良狀況發(fā)生，多孔性膜的平均細孔徑優(yōu)選與微生物的大小相比不過大。在使用微生物中細胞較小的細菌等時，作為平均細孔徑優(yōu)選為0.4 μ m以下，如果小于0.2 μ m，則可以更適合地實施。
[0057]另外，有時微生物生產(chǎn)除了作為所期望的生產(chǎn)物的化學品以外的物質(zhì)，例如，蛋白質(zhì)和/或多糖類等易凝集的物質(zhì)，進而，有時由于培養(yǎng)液中的微生物的一部分死亡而生成細胞的破碎物，為了避免這些物質(zhì)造成的多孔性膜的堵塞，平均細孔徑更適合為0.Ιμπι以下。
[0058]如果平均細孔徑過小，則多孔性膜的透水性能降低，即使膜不污染也不能有效地運轉(zhuǎn)，因而本發(fā)明中的多孔性膜的平均細孔徑優(yōu)選為0.01 μ m以上，更優(yōu)選為0.02 μ m以上，進一步優(yōu)選為0.04 μ m以上。
[0059]這里，平均細孔徑可以通過測定在倍率10，000倍的掃描型電子顯微鏡觀察中能夠在9.2 μ mX 10.4μπι的范圍內(nèi)觀察到的全部細孔的直徑，并進行平均來求得。平均細孔徑或者也可以使用掃描型電子顯微鏡以倍率10，000倍將膜表面拍攝照片，隨機選擇10個以上、優(yōu)選20個以上的細孔測定它們的細孔直徑，并進行數(shù)平均而求得。在細孔不是圓形時，通過用圖像處理裝置等求出具有與細孔所具有的面積相等的面積的圓(等價圓)，以等價圓直徑作為細孔的直徑的方法來求得。
[0060]本發(fā)明中使用的多孔性膜的平均細孔徑的標準偏差σ優(yōu)選為Ο.?μπι以下。平均細孔徑的標準偏差σ越小越好。平均細孔徑的標準偏差σ可以將上述的能夠在9.2 μ mX 10.4 μ m的范圍內(nèi)觀察到的細孔數(shù)作為N，將測定的各個直徑作為Xk，將細孔直徑的平均作為X(ave)，通過下述式(I)算出。
【權(quán)利要求】
1.化學品的制造方法，是通過連續(xù)發(fā)酵來制造化學品的方法，包括:將微生物的培養(yǎng)液用分離膜過濾，將未過濾液保持在或回流至培養(yǎng)液中，在培養(yǎng)液中補加發(fā)酵原料，和回收過濾液中的生產(chǎn)物， 所述發(fā)酵原料包含五碳糖和六碳糖，所述微生物是具有使用戊糖還原酶和五醇脫氫酶來代謝五碳糖的途徑的微生物。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的化學品的制造方法，在體積傳氧系數(shù)即KLa為5~300小時―1的條件下進行連續(xù)發(fā)酵。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的化學品的制造方法，所述發(fā)酵原料中所含的五碳糖與六碳糖的比率為1:9~9:1。
4.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的化學品的制造方法，所述發(fā)酵原料包含來源于生物質(zhì)的糖液。
5.根據(jù)權(quán)利要求1~4的任一項所述的化學品的制造方法，五碳糖是木糖。
6.根據(jù)權(quán)利要求1~5的任一項所述的化學品的制造方法，戊糖還原酶是木糖還原酶。
7.根據(jù)權(quán)利要求1~6的任一項所述的化學品的制造方法，五醇脫氫酶是木糖醇脫氫酶。
【文檔編號】C12P7/06GK104039969SQ201380005123
【公開日】2014年9月10日 申請日期:2013年1月11日 優(yōu)先權(quán)日:2012年1月13日
【發(fā)明者】渡邊志緒美, 小林宏治, 磯部匡平, 澤井健司, 羅景洙, 平松紳吾, 山田勝成 申請人:東麗株式會社