一種用thrsp基因預(yù)示秦川牛肌肉嫩度和系水力的分子標(biāo)記方法
【專(zhuān)利摘要】本發(fā)明涉及一種用THRSP基因預(yù)示秦川牛肌肉嫩度和系水力的分子標(biāo)記方法，根據(jù)牛THRSP基因序列設(shè)計(jì)一對(duì)引物，對(duì)秦川牛全血基因組DNA進(jìn)行PCR擴(kuò)增后進(jìn)行SSCP帶型檢測(cè)，通過(guò)分析帶型確定秦川牛肌肉嫩度和系水力。該方法采用PCR-SSCP技術(shù)相結(jié)合，通過(guò)變異位點(diǎn)基因型的分析、比較，從而預(yù)測(cè)和確定該牛的肉質(zhì)優(yōu)劣，操作簡(jiǎn)單、費(fèi)用低、精確度高，可進(jìn)行快速檢測(cè)。
【專(zhuān)利說(shuō)明】—種用THRSP基因預(yù)示秦川牛肌肉嫩度和系水力的分子標(biāo)記方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于動(dòng)物分子生物學(xué)與基因工程領(lǐng)域，涉及一種用THRSP基因預(yù)示秦川牛肌肉嫩度和系水力的分子標(biāo)記方法。
【背景技術(shù)】
[0002]秦川牛具有體軀高大、役用能力強(qiáng)、肉用性能好、遺傳穩(wěn)定、適應(yīng)性好等優(yōu)點(diǎn)。它的起源可追溯到公元前的8000~6000年的新石器時(shí)代，其野生祖先可能就是短角型的亞洲原牛。秦川牛的形成，與長(zhǎng)期飼喂具有“牧草之王”美稱(chēng)的紫花苜蓿有重要關(guān)系。目前，陜西關(guān)中地區(qū)秦川牛及其改良牛的飼養(yǎng)量約150萬(wàn)頭左右，對(duì)當(dāng)?shù)剞r(nóng)業(yè)生產(chǎn)的發(fā)展和農(nóng)村經(jīng)濟(jì)的繁榮具有重要的促進(jìn)作用。近年來(lái)，秦川牛數(shù)量和質(zhì)量都有了大幅度的提高。尤其是實(shí)施《省標(biāo)》和《國(guó)標(biāo)》以來(lái)，秦川牛的體質(zhì)外貌發(fā)生了明顯變化，體格普遍增大，膘肥體壯，結(jié)構(gòu)勻稱(chēng)，紫紅及紅色被毛顯著增加，但是，秦川牛還存在著生長(zhǎng)較慢，肌肉脂肪沉積能力較差、母牛乳房發(fā)育較差，產(chǎn)奶量不高等缺陷。秦川牛的發(fā)展方向應(yīng)堅(jiān)持本品種選育，保留原有風(fēng)味特點(diǎn)，改善肉質(zhì)、糾正尻部尖斜等缺點(diǎn)，提高產(chǎn)肉性能，向肉用方向發(fā)展。本品種選育，并不是單純的保持原種的一切特征特性，不管它有沒(méi)有缺點(diǎn)，而是在保留其固有優(yōu)點(diǎn)的基礎(chǔ)上，糾正其缺點(diǎn)，使之更上一層樓，成為經(jīng)濟(jì)價(jià)值較高的品種。
[0003]肉質(zhì)性狀是評(píng)價(jià)黃牛品種優(yōu)劣和生產(chǎn)性能高低的重要指標(biāo)，而且關(guān)于牛品質(zhì)的研究已經(jīng)目前世界范圍肉牛育種工作者的重點(diǎn)和熱點(diǎn)內(nèi)容。在長(zhǎng)期的選育過(guò)程中，隨著秦川牛從役用到肉役兼用，直至育成最終的肉用品種，秦川牛的肉用性能正逐步得到改善。利用分子生物學(xué)技術(shù)，對(duì)影 響肉質(zhì)性狀的基因進(jìn)行多態(tài)性研究，目的在于探索該基因?qū)θ馀Ｈ赓|(zhì)性狀的影響，找到可用于肉質(zhì)性狀分子標(biāo)記輔助選擇的有效基因，為我國(guó)地方良種黃牛的肉用改良提供一定的理論依據(jù)。
[0004]THRSP 基因，即甲狀腺激素應(yīng)答蛋白 Spotl4 (thyroid hormone responsiveSpotl4, THRSP)是在研究甲狀腺素在脂肪組織中的反應(yīng)時(shí)被發(fā)現(xiàn)。THRSP基因主要在脂肪生成組織如肝臟、腹脂和乳腺內(nèi)表達(dá)。由于該蛋白對(duì)甲狀腺素的刺激和高葡萄糖水平產(chǎn)生應(yīng)答反應(yīng)，而且該基因所在的染色體區(qū)域與肥胖癥有關(guān)，因此被認(rèn)為對(duì)脂肪生成具有重要的作用。人上的研究結(jié)果表明，THRSP基因定位在與肥胖有關(guān)的染色體區(qū)域，Zhu等研究發(fā)現(xiàn)，小鼠THRSP敲除后，其乳中甘油三脂的含量顯著減少，主要是由于乳腺脂類(lèi)物質(zhì)從頭合成速率降低所致，具體表現(xiàn)為甘油三酯池中的中鏈脂肪酸含量明顯減少，Cogburn等2003年詳述了雞肝臟代謝途徑，揭示脂肪生成途徑中的FAS、LFABP, C/EBPa等主要酶的表達(dá)量隨THRSP表達(dá)的增強(qiáng)而提高，且THRSP對(duì)哺乳動(dòng)物和雞肝臟脂肪生成酶的激活機(jī)制可能相同。牛的THRSP基因位于第29號(hào)染色體上，包含兩個(gè)外顯子，一個(gè)內(nèi)含子，且只有第一外顯子編碼蛋白。
[0005]鑒于此，可以考慮將THRSP基因作為候選基因，研究其預(yù)示和檢測(cè)中國(guó)黃牛宰前活重、胴體重、胴體長(zhǎng)、背膘厚、眼肌面積、系水力、大理石花紋、嫩度等肉質(zhì)性狀的方法，為我國(guó)黃牛的肉質(zhì)改良提供了理論依據(jù)。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006]本發(fā)明的目的是提供一種用THRSP基因預(yù)示秦川牛肌肉嫩度和系水力的分子標(biāo)記方法，采用PCR-SSCP技術(shù)相結(jié)合，通過(guò)變異位點(diǎn)基因型的分析、比較，從而預(yù)測(cè)和確定該牛的肉質(zhì)優(yōu)劣。
[0007]本發(fā)明通過(guò)以下技術(shù)方案來(lái)實(shí)現(xiàn):一種用THRSP基因預(yù)示秦川牛肌肉嫩度和系水力的分子標(biāo)記方法，該方法包括以下步驟:
[0008](I)秦川牛全血基因組DNA的獲??；
[0009](2)根據(jù)牛THRSP基因序列設(shè)計(jì)一對(duì)引物THRSP-F和THRSP-R，其中:
【權(quán)利要求】
1.一種用THRSP基因預(yù)示秦川牛肌肉嫩度和系水力的分子標(biāo)記方法，其特征在于:該方法包括以下步驟: (1)秦川牛全血基因組DNA的獲??； (2)根據(jù)牛THRSP基因序列設(shè)計(jì)一對(duì)引物THRSP-F和THRSP-R，其中:
THRSP-F:5’ -3’:CGCCTCCGATCTCTACAACT (SEQ ID N0.1)
THRSP-R:5，-3，:CCAGCTTCAGTCTCAGCTCC (SEQ ID N0.2) (3)利用該對(duì)引物對(duì)秦川牛全血基因組DNA進(jìn)行PCR擴(kuò)增； (4)所得的PCR產(chǎn)物進(jìn)行SSCP帶型檢測(cè)。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的用THRSP基因預(yù)示秦川牛肌肉嫩度和系水力的分子標(biāo)記方法，其特征在于:步驟(4)中的SSCP帶型分為AA、AB和BB三種，AA型預(yù)示秦川牛肌肉嫩度顯著高于AB型，BB型預(yù)示秦川牛肌肉系水力顯著高于AB型，秦川牛宰前活重、胴體重、背膘厚、眼肌面積、系水力大小變化為BB>AA>AB。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的用THRSP基因預(yù)示秦川牛肌肉嫩度和系水力的分子標(biāo)記方法，其特征在于:所述的AA帶型表示的核苷酸序列如SEQ ID N0.3所示。
4.根據(jù)權(quán)利要求2所述的用THRSP基因預(yù)示秦川牛肌肉嫩度和系水力的分子標(biāo)記方法，其特征在于:所述的BB帶型表示的核苷酸序列的突變位點(diǎn)為C — T突變，位于第一外顯子184bp處。
【文檔編號(hào)】C12Q1/68GK103740830SQ201410014627
【公開(kāi)日】2014年4月23日 申請(qǐng)日期:2014年1月13日 優(yōu)先權(quán)日:2014年1月13日
【發(fā)明者】王洪寶, 昝林森, 張小白, 張鶯鶯 申請(qǐng)人:西北農(nóng)林科技大學(xué)