檸檬酸廢水回流發(fā)酵生產(chǎn)檸檬酸的方法
【專利摘要】檸檬酸廢水回流發(fā)酵生產(chǎn)檸檬酸的方法：（1）淀粉質(zhì)原料與檸檬酸廢水混合均勻，加入高溫α-淀粉酶；（2）將混合液經(jīng)兩次噴射，經(jīng)碘試合格得到液化混液；再將液化混液經(jīng)過板框壓濾得到液化清液；（3）將液化清液與液化混液混合，加入檸檬酸廢水進行補水得到種子培養(yǎng)基，進行菌種的種子培養(yǎng)；（4）將液化清液與液化混液混合，加入檸檬酸廢水進行補水得到發(fā)酵營養(yǎng)液，進行發(fā)酵培養(yǎng)；（5）發(fā)酵結(jié)束后經(jīng)固液分離除去菌體，經(jīng)氫鈣法或色譜法提取得到檸檬酸，產(chǎn)生的廢水回到步驟（1）和步驟（3）、（4），如此循環(huán)。本方法發(fā)酵穩(wěn)定且與原工藝技術(shù)水平相當(dāng)，節(jié)約了工藝用水和蒸汽用量，節(jié)省了污水處理成本，具有重要的環(huán)境效益、經(jīng)濟效益。
【專利說明】
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及發(fā)酵工程【技術(shù)領(lǐng)域】，尤其是涉及一種檸檬酸廢水不經(jīng)過任何處理，直 接回流發(fā)酵生產(chǎn)檸檬酸的方法。 檸檬酸廢水回流發(fā)酵生產(chǎn)檸檬酸的方法

【背景技術(shù)】
[0002] 檸檬酸因其具有令人愉悅的酸味、入口爽快、無后酸味、安全無毒的特點，所以廣 泛應(yīng)用于食品、醫(yī)藥及化工等領(lǐng)域，已成為當(dāng)前世界上生成量和消費量最大的食用有機酸。 中國是世界上最大的檸檬酸出口國，2012年的產(chǎn)能已經(jīng)超過110萬噸，大約90%的檸檬酸出 口國外，占世界總產(chǎn)量70%左右。檸檬酸生產(chǎn)主要采用液體深層發(fā)酵，提取過程中會產(chǎn)生大 量的廢水，其中含有一些有機酸、糖、蛋白質(zhì)膠體、礦物質(zhì)等物質(zhì)，C0D高達350kg/t檸檬酸， 濃度高達10000?15000ppm。這些廢水若不經(jīng)處理或處理不當(dāng)，不僅造成嚴(yán)重的環(huán)境污染， 也造成大量水資源的浪費，同時增加了企業(yè)生產(chǎn)成本。因此如何有效地處理檸檬酸發(fā)酵產(chǎn) 生的高濃度有機廢水，是檸檬酸行業(yè)亟待解決的問題。
[0003] 現(xiàn)行檸檬酸廢水的主要處理方法：厭氧生物法、好氧生物法、厭氧-好氧組合法， 它們是利用好氧或者厭氧微生物在適宜的條件下降解污水中的有機物，同時將部分有機物 轉(zhuǎn)化為自身細(xì)胞成分，從而降低廢水的C0D。從目前檸檬酸行業(yè)廢水處理現(xiàn)狀來看，效果 并不理想，這些方法一般需要前期預(yù)處理，周期較長，且廢水治理并不徹底，需要進一步深 度處理，才能達到排放標(biāo)準(zhǔn)，處理成本比較高。因此，如何有效實現(xiàn)節(jié)能減排，降低成本，是 檸檬酸行業(yè)健康發(fā)展所面臨的重大課題。檸檬酸廢水若能夠直接回用或簡單處理后回用， 對于解決污水處理難題意義重大。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 針對現(xiàn)有技術(shù)存在的上述問題，本 申請人:提供了一種檸檬酸廢水回流發(fā)酵生產(chǎn)檸 檬酸的方法。本方法發(fā)酵穩(wěn)定且與原工藝技術(shù)水平相當(dāng)，節(jié)約了工藝用水和蒸汽用量，節(jié)省 了污水處理成本，具有重要的環(huán)境效益、經(jīng)濟效益。
[0005] 本發(fā)明的技術(shù)方案如下： 檸檬酸廢水回流發(fā)酵生產(chǎn)檸檬酸的方法，包括如下步驟： (1) 淀粉質(zhì)原料與檸檬酸廢水在5(T60°C的情況下，在配料罐中按照1:1. 5~1:4的比例 混合均勻，用氫氧化鈣調(diào)節(jié)混合液的pH至5. 8飛.0,然后加入高溫α -淀粉酶，其添加量為 15?40U/g玉米粉； (2) 將步驟（1)所得混合液進行兩步處理：先將混合液經(jīng)兩次噴射，一次噴射溫度 為97~101°C，二次噴射溫度為12(T130°C，經(jīng)碘試為淺棕色即合格，得到液化混液；再將 6(Γ80%的液化混液經(jīng)過板框壓濾，得到液化清液； (3) 將步驟（2)所得液化清液與液化混液按1:1. 5~1:2. 5的比例混合，并加入檸檬酸廢 水進行補水，使得混合后的液體總糖為1(Γ12%，總氮為0. 19~0. 40%，得到種子培養(yǎng)基，進行 菌種的種子培養(yǎng)； (4) 將步驟（2)所得液化清液與液化混液按3. 5:1飛：1的比例混合，并加入檸檬酸廢水 進行補水，使得混合后的液體總糖為14~17%，總氮為0. 05~0. 15%，得到發(fā)酵營養(yǎng)液，將步驟 (3)種子培養(yǎng)所得種子液加入發(fā)酵營養(yǎng)液，進行發(fā)酵培養(yǎng)； (5) 步驟（4)發(fā)酵結(jié)束后經(jīng)固液分離除去菌體，經(jīng)氫鈣法或色譜法提取得到檸檬酸，產(chǎn) 生的廢水回到步驟（1)和步驟（3)、（4)，如此循環(huán)。
[0006] 步驟（1)中所述淀粉質(zhì)原料包括玉米粉、小麥粉、木薯粉、紅薯粉、淀粉、糖蜜、小麥 的至少一種。
[0007] 步驟（1)中所述檸檬酸廢水是指氫鈣提取法制造檸檬酸時產(chǎn)生的廢糖水，或者色 譜提取法制造檸檬酸時產(chǎn)生的色譜殘液。
[0008] 步驟（3)中所述菌種為在檸檬酸廢水中篩選得到的適應(yīng)性強、穩(wěn)定性高的黑曲霉 菌種。
[0009] 本發(fā)明有益的技術(shù)效果在于： 本發(fā)明的目的在于不改變現(xiàn)有主體發(fā)酵工藝技術(shù)及設(shè)備的情況下，通過添加回流循環(huán) 管路，降低甚至消除高濃度有機廢水的生物處理過程，建立一套穩(wěn)定運行的檸檬酸廢水回 流發(fā)酵生產(chǎn)朽1檬酸的方案。
[0010] 本發(fā)明可以使檸檬酸提取過程產(chǎn)生的廢水不經(jīng)過任何處理直接替代生產(chǎn)用水，用 于原料調(diào)漿液化與配制培養(yǎng)基補水；培養(yǎng)對廢水適應(yīng)性強的菌種，轉(zhuǎn)接發(fā)酵；發(fā)酵結(jié)束，發(fā) 酵液經(jīng)固液分離得到發(fā)酵清液，氫鈣法或色譜法提取檸檬酸，產(chǎn)生的檸檬酸廢水繼續(xù)回流 至生產(chǎn)系統(tǒng)，如此實現(xiàn)廢水的循環(huán)利用。
[0011] 采用本技術(shù)檸檬酸廢水循環(huán)利用40批次，糖酸轉(zhuǎn)化率為95. 859Γ101. 35%，發(fā)酵周 期在62~72h，發(fā)酵穩(wěn)定且與原工藝技術(shù)水平相當(dāng)。本發(fā)明可有效利用廢水中的碳、氮源，回 流5(T60°C的檸檬酸廢水可契合投料溫度，節(jié)約了工藝用水和蒸汽用量，節(jié)省了污水處理成 本，具有重要的環(huán)境效益、經(jīng)濟效益。

【專利附圖】

【附圖說明】
[0012] 圖1為本發(fā)明檸檬酸廢水回流發(fā)酵生產(chǎn)檸檬酸的工藝技術(shù)流程示意圖。

【具體實施方式】
[0013] 下面結(jié)合附圖1，對本發(fā)明進行具體描述。下面實施例中的黑曲霉種子的來源是 宜興協(xié)聯(lián)生物化學(xué)有限公司生產(chǎn)，由江南大學(xué)糧食發(fā)酵工藝與技術(shù)國家工程實驗室生物 分離工程研究室進行馴化培養(yǎng)。檸檬酸廢水(檸檬酸提取產(chǎn)生的廢水，宜興協(xié)聯(lián)生物化學(xué) 有限公司提供）液化得到玉米液化液，添加一定量的硫酸銨，配制培養(yǎng)基(總糖59Γ9%，總氮 0. 259Γ0. 45%)，接種黑曲霉種子，經(jīng)平板分離篩選（35°C，48h)，挑選邊緣整齊、凸起、較大單 菌落，單菌落斜面培養(yǎng)（35°C，5d)，搖瓶復(fù)篩（35°C，320rpm，培養(yǎng)72h)挑選產(chǎn)酸較高的菌 種，然后進一步馴化培養(yǎng)，如此循環(huán)重復(fù)篩選，獲得適應(yīng)性強的菌種，編號為AT0019。
[0014] 實施例1 玉米粉200kg，檸檬酸廢糖水600kg，在50°C配料罐中混合均勻，加氫氧化鈣調(diào)節(jié)pH至 5.8，加入酶活單位為 20000U/g的耐高溫α-淀粉酶250g。經(jīng)過二次噴射液化，其中一次噴 射溫度為97°C，二次噴射溫度為130°C，維持罐中維持0. 5~lh，碘試為淺棕色即合格，得到 液化混液，再將70%的液化混液進入板框壓濾得到液化清液。
[0015] 配制種子培養(yǎng)基和發(fā)酵營養(yǎng)液，其中種子培養(yǎng)基是將液化清液與液化混液按 1:1. 5的比例混合，并加入檸檬酸廢水進行補水；發(fā)酵營養(yǎng)液是將液化清液與液化混液按 3. 5:1的比例混合，并加入檸檬酸廢水進行補水。
[0016] 種子培養(yǎng)基初始總糖10. 7%，總氮0· 24%，黑曲霉種子培養(yǎng)27h，pH 2. 05,酸度 2. 05% ;發(fā)酵初始總糖16. 10%，總氮0. 05%，培養(yǎng)溫度37°C;發(fā)酵結(jié)束酸度為16. 08%(v/v)，殘 總糖為2. 3%，殘還原糖為0. 5%，轉(zhuǎn)化率為99. 88%，周期67h。發(fā)酵液經(jīng)氫鈣法提取檸檬酸， 產(chǎn)生檸檬酸廢水，再次按照上述步驟重復(fù)操作，循環(huán)40批次，檸檬酸發(fā)酵水平正常。
[0017] 實施例2 木薯粉100kg，檸檬酸廢糖水150kg，在60°C配料罐中混合均勻，加氫氧化鈣調(diào)pH至 5. 9,加入酶活單位為20000U/g的耐高溫α -淀粉酶125g。經(jīng)過二次噴射液化，其中一次噴 射溫度為99°C，二次噴射溫度為125°C，在維持罐中維持0. 5~lh，碘試為淺棕色合格，得到 液化混液，再將60%的液化混液進入板框壓濾得到液化清液。
[0018] 配制種子培養(yǎng)基和發(fā)酵營養(yǎng)液，其中種子培養(yǎng)基是將液化清液與液化混液按 1:1. 5的比例混合，并加入檸檬酸廢水進行補水；發(fā)酵營養(yǎng)液是將液化清液與液化混液按 5. 5:1的比例混合，并加入檸檬酸廢水進行補水。
[0019] 種子培養(yǎng)基初始總糖10%，總氮0. 2%，黑曲霉種子培養(yǎng)26h，pH 2. 06,酸度2. 7% ; 發(fā)酵初始總糖為14%，總氮0.08%，培養(yǎng)溫度37°C ;發(fā)酵結(jié)束酸度為14. 19%(v/v)，殘總糖為 2. 0%，殘還原糖為0. 5%，轉(zhuǎn)化率為101. 35%，周期60h。發(fā)酵液經(jīng)過氫鈣法提取檸檬酸，產(chǎn)生 檸檬酸廢水，再次按照上述步驟重復(fù)操作，循環(huán)40次，檸檬酸發(fā)酵水平正常。
[0020] 實施例3 玉米粉300kg，木薯粉原料200kg，檸檬酸廢糖水2000kg，在55°C配料罐中混合均勻，力口 氫氧化鈣調(diào)pH至5. 9,加入酶活單位為20000U/g的耐高溫α -淀粉酶800g。經(jīng)過二次噴 射液化，其中一次噴射溫度為l〇l°C，二次噴射溫度為120°C，在維持罐中維持0. 5~lh，經(jīng)碘 試為淺棕色合格，得到液化混液，再將80%的液化混液進入板框壓濾得到液化清液。
[0021] 配制種子培養(yǎng)基和發(fā)酵營養(yǎng)液，其中種子培養(yǎng)基是將液化清液與液化混液按1:2 的比例混合，并加入檸檬酸廢水進行補水；發(fā)酵營養(yǎng)液是將液化清液與液化混液按5. 5:1 的比例混合，并加入檸檬酸廢水進行補水。
[0022] 種子初始總糖12%，總氮0· 26%，黑曲霉種子培養(yǎng)26h，pH 1. 99,酸度2. 3% ;發(fā)酵培 養(yǎng)基初始總糖為16. 2%，總氮0. 11%，培養(yǎng)溫度37°C;發(fā)酵結(jié)束酸度為16. 1%(ν/ν)，殘總糖為 2. 02%，殘還原糖為0. 51%，轉(zhuǎn)化率為99. 38%，周期72h。發(fā)酵液經(jīng)過氫鈣法提取檸檬酸，產(chǎn)生 檸檬酸廢水，再次按照上述步驟重復(fù)操作，循環(huán)40次，檸檬酸發(fā)酵水平正常。
[0023] 實施例4 紅薯粉原料120kg，檸檬酸廢糖水320kg，在55°C配料罐中混合均勻，加氫氧化鈣調(diào)pH 至6. 0,加入酶活單位為20000U/g的耐高溫α -淀粉酶180g，經(jīng)過二次噴射液化，其中一次 噴射溫度為97°C，二次噴射溫度為125°C，在維持罐中維持0. 5~lh，碘試為淺棕色合格，得 到液化混液，再將65%的液化混液進入板框壓濾得到液化清液。
[0024] 配制種子培養(yǎng)基和發(fā)酵營養(yǎng)液，其中種子培養(yǎng)基是將液化清液與液化混液按1:2 的比例混合，并加入檸檬酸廢水進行補水；發(fā)酵營養(yǎng)液是將液化清液與液化混液按5:1的 比例混合，并加入檸檬酸廢水進行補水。
[0025] 種子培養(yǎng)基初始總糖10. 8%，總氮0. 22%，黑曲霉種子培養(yǎng)26h，pH 2. 06,酸度 2. 7% ;發(fā)酵初始總糖為16. 7%，總氮0. 13%，培養(yǎng)溫度37°C;發(fā)酵結(jié)束酸度為16. 61%(v/v)，殘 總糖為2. 0%，殘還原糖為0. 5%，轉(zhuǎn)化率為99. 5%，周期69h。發(fā)酵液經(jīng)過氫鈣法提取檸檬酸， 產(chǎn)生檸檬酸廢水，再次按照上述步驟重復(fù)操作，循環(huán)40次，檸檬酸發(fā)酵水平正常。
[0026] 實施例5 小麥粉210kg，檸檬酸廢糖水380kg，在60°C配料罐中混合均勻，加氫氧化鈣調(diào)pH至 5. 9,加入酶活單位為20000U/g的耐高溫α -淀粉酶290g，經(jīng)過二次噴射液化，其中一次噴 射溫度為98°C，二次噴射溫度為128°C，在維持罐中維持0. 5~lh，碘試為淺棕色合格，得到 液化混液，再將75%的液化混液進入板框壓濾得到液化清液。
[0027] 配制種子培養(yǎng)基和發(fā)酵營養(yǎng)液，其中種子培養(yǎng)基是將液化清液與液化混液按 1:2. 5的比例混合，并加入檸檬酸廢水進行補水；發(fā)酵營養(yǎng)液是將液化清液與液化混液按 5:1的比例混合，并加入檸檬酸廢水進行補水。
[0028] 種子培養(yǎng)基初始總糖11%，總氮0. 24%，黑曲霉種子培養(yǎng)25h，pH 2. 02,酸度2. 9% ; 發(fā)酵初始總糖為15. 2%，總氮0. 15%，培養(yǎng)溫度37°C ;發(fā)酵結(jié)束酸度為15. 03%(v/v)，殘總糖 為2. 0%，殘還原糖為0. 5%，轉(zhuǎn)化率為98. 9%，周期66h。發(fā)酵液經(jīng)過氫鈣法提取檸檬酸，產(chǎn)生 檸檬酸廢水，再次按照上述步驟重復(fù)操作，循環(huán)40次，檸檬酸發(fā)酵水平正常。
[0029] 實施例6 玉米粉150kg，色譜殘液600kg，在52°C配料罐中混合均勻，加氫氧化鈣調(diào)節(jié)pH至5. 8， 加入酶活單位為20000U/g的低pH耐高溫α -淀粉酶130g，經(jīng)過二次噴射液化，其中一次噴 射溫度為l〇〇°C，二次噴射溫度為122°C，維持罐中維持0. 5~lh，碘試為淺棕色合格，得到液 化混液，再將70%的液化混液進入板框壓濾得到液化清液。
[0030] 配制種子培養(yǎng)基和發(fā)酵營養(yǎng)液，其中種子培養(yǎng)基是將液化清液與液化混液按 1:2. 5的比例混合，并加入檸檬酸廢水進行補水；發(fā)酵營養(yǎng)液是將液化清液與液化混液按 4. 5:1的比例混合，并加入檸檬酸廢水進行補水。
[0031] 種子培養(yǎng)基初始總糖9. 7%，總氮0. 19%，黑曲霉種子培養(yǎng)26h，pH 2. 0,酸度2. 15% ; 發(fā)酵初始總糖15. 90%，總氮0. 10%，培養(yǎng)溫度37°C;發(fā)酵結(jié)束酸度為15. 42%(v/v)，殘總糖為 2. 08%，殘還原糖為0. 5%，轉(zhuǎn)化率為96. 14%，周期67h。發(fā)酵液經(jīng)色譜法提取檸檬酸，產(chǎn)生檸 檬酸廢水，再次按照上述步驟重復(fù)操作，循環(huán)40批次，檸檬酸發(fā)酵水平正常。
[0032] 實施例7 木薯粉200kg，色譜殘液800kg，在60°C配料罐中混合均勻，加氫氧化鈣調(diào)pH至5. 8,加 入酶活單位為20000U/g的低pH耐高溫α -淀粉酶250g，經(jīng)過二次噴射液化，其中一次噴射 溫度為97°C，二次噴射溫度為124°C，在維持罐中維持0. 5~lh，碘試為淺棕色合格，得到液 化混液，再將70%的液化混液進入板框壓濾得到液化清液。
[0033] 配制種子培養(yǎng)基和發(fā)酵營養(yǎng)液，其中種子培養(yǎng)基是將液化清液與液化混液按 1:1. 5的比例混合，并加入檸檬酸廢水進行補水；發(fā)酵營養(yǎng)液是將液化清液與液化混液按 4. 5:1的比例混合，并加入檸檬酸廢水進行補水。
[0034] 種子培養(yǎng)基初始總糖10. 9%，總氮0. 3%，黑曲霉種子培養(yǎng)25h，pH 2. 06,酸度2. 2% ; 發(fā)酵初始總糖為17%，總氮0. 13%，培養(yǎng)溫度37°C ;發(fā)酵結(jié)束酸度為16. 77%(v/v)，殘總糖為 2. 15%，殘還原糖為0. 5%，轉(zhuǎn)化率為98. 62%，周期71h。發(fā)酵液經(jīng)過色譜法提取檸檬酸，產(chǎn)生 檸檬酸廢水，再次按照上述步驟重復(fù)操作，循環(huán)40次，檸檬酸發(fā)酵水平正常。
[0035] 實施例8 玉米粉300kg，木薯粉原料200kg，色譜殘液1000kg，在55°C配料罐中混合均勻，加氫氧 化鈣調(diào)pH至5. 9,加入酶活單位為20000U/g的低pH耐高溫α -淀粉酶800g，經(jīng)過二次噴 射液化，其中一次噴射溫度為l〇〇°C，二次噴射溫度為130°C，在維持罐中維持0. 5~lh，經(jīng)碘 試為淺棕色合格，得到液化混液，再將80%的液化混液進入板框壓濾得到液化清液。
[0036] 配制種子培養(yǎng)基和發(fā)酵營養(yǎng)液，其中種子培養(yǎng)基是將液化清液與液化混液按 1:1. 5比例混合，并加入檸檬酸廢水進行補水；發(fā)酵營養(yǎng)液是將液化清液與液化混液按4:1 的比例混合，并加入檸檬酸廢水進行補水。
[0037] 種子初始總糖11%，總氮0. 23%，黑曲霉種子培養(yǎng)25h，pH 1. 99,酸度2. 3% ;發(fā)酵培 養(yǎng)基初始總糖為15. 44%，總氮0. 11%，培養(yǎng)溫度37°C;發(fā)酵結(jié)束酸度為15. 38%(v/v)，殘總糖 為2. 08%，殘還原糖為0. 5%，轉(zhuǎn)化率為99. 64%，周期72h。發(fā)酵液經(jīng)過色譜法提取檸檬酸，產(chǎn) 生檸檬酸廢水，再次按照上述步驟重復(fù)操作，循環(huán)40次，檸檬酸發(fā)酵水平正常。
[0038] 實施例9 玉米粉250kg，小麥粉150kg，色譜殘液1200kg，在60°C配料罐中混合均勻，加氫氧化鈣 調(diào)pH至5. 8,加入酶活單位為20000U/g的低pH耐高溫α -淀粉酶250g，經(jīng)過二次噴射液 化，其中一次噴射溫度為97°C，二次噴射溫度為129°C，在維持罐中維持0. 5~lh，碘試為淺 棕色合格，得到液化混液，再將60%的液化混液進入板框壓濾得到液化清液。
[0039] 配制種子培養(yǎng)基和發(fā)酵營養(yǎng)液，其中種子培養(yǎng)基是將液化清液與液化混液按1:2 比例混合，并加入檸檬酸廢水進行補水；發(fā)酵營養(yǎng)液是將液化清液與液化混液按3. 5:1的 比例混合，并加入檸檬酸廢水進行補水。
[0040] 種子培養(yǎng)基初始總糖11. 2%，總氮0. 35%，黑曲霉種子培養(yǎng)24h，pH 2. 06,酸度 2. 3% ;發(fā)酵初始總糖為15. 9%，總氮0. 07%，培養(yǎng)溫度37°C;發(fā)酵結(jié)束酸度為15. 87%(v/v)，殘 總糖為2. 01%，殘還原糖為0. 5%，轉(zhuǎn)化率為97. 99%，周期63h。發(fā)酵液經(jīng)過色譜法提取檸檬 酸，產(chǎn)生檸檬酸廢水，再次按照上述步驟重復(fù)操作，循環(huán)40次，檸檬酸發(fā)酵水平正常。
[0041] 以上所述已詳細(xì)描述了本發(fā)明的實施方案，對本領(lǐng)域技術(shù)人員來說很顯然可以做 很多的改進，凡在本發(fā)明的精神和原則之內(nèi)，所做的任何修改、同等替換、改進等，均應(yīng)包含 在本發(fā)明保護的范圍之內(nèi)。
【權(quán)利要求】
1. 檸檬酸廢水回流發(fā)酵生產(chǎn)檸檬酸的方法，其特征在于包括如下步驟： (1) 淀粉質(zhì)原料與檸檬酸廢水在5(T60°C的情況下，在配料罐中按照1:1. 5~1:4的比例 混合均勻，用氫氧化鈣調(diào)節(jié)混合液的pH至5. 8飛.0,然后加入高溫α -淀粉酶，其添加量為 15?40U/g玉米粉； (2) 將步驟（1)所得混合液進行兩步處理：先將混合液經(jīng)兩次噴射，一次噴射溫度 為97~101°C，二次噴射溫度為12(T130°C，經(jīng)碘試為淺棕色即合格，得到液化混液；再將 6(Γ80%的液化混液經(jīng)過板框壓濾，得到液化清液； (3) 將步驟（2)所得液化清液與液化混液按1:1. 5~1:2. 5的比例混合，并加入檸檬酸廢 水進行補水，使得混合后的液體總糖為1(Γ12%，總氮為0. 19~0. 40%，得到種子培養(yǎng)基，進行 菌種的種子培養(yǎng)； (4) 將步驟（2)所得液化清液與液化混液按3. 5:1飛：1的比例混合，并加入檸檬酸廢水 進行補水，使得混合后的液體總糖為14~17%，總氮為0. 05~0. 15%，得到發(fā)酵營養(yǎng)液，將步驟 (3)種子培養(yǎng)所得種子液加入發(fā)酵營養(yǎng)液，進行發(fā)酵培養(yǎng)； (5) 步驟（4)發(fā)酵結(jié)束后經(jīng)固液分離除去菌體，經(jīng)氫鈣法或色譜法提取得到檸檬酸，產(chǎn) 生的廢水回到步驟（1)和步驟（3)、（4)，如此循環(huán)。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的檸檬酸廢水回流發(fā)酵生產(chǎn)檸檬酸的方法，其特征在于步驟 (1)中所述淀粉質(zhì)原料包括玉米粉、小麥粉、木薯粉、紅薯粉、淀粉、糖蜜、小麥的至少一種。
3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的檸檬酸廢水回流發(fā)酵生產(chǎn)檸檬酸的方法，其特征在于步驟 (1)中所述檸檬酸廢水是指氫鈣提取法制造檸檬酸時產(chǎn)生的廢糖水，或者色譜提取法制造 朽1檬酸時產(chǎn)生的色譜殘液。
4. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的檸檬酸廢水回流發(fā)酵生產(chǎn)檸檬酸的方法，其特征在于步驟 (3)中所述菌種為在檸檬酸廢水中篩選得到的適應(yīng)性強、穩(wěn)定性高的黑曲霉菌種。
【文檔編號】C12P7/48GK104109697SQ201410321671
【公開日】2014年10月22日 申請日期:2014年7月8日 優(yōu)先權(quán)日:2014年7月8日
【發(fā)明者】石貴陽, 胡志杰, 蔣小東, 孫福新, 金賽, 王寶石, 張 杰, 李贏 申請人:江南大學(xué), 宜興協(xié)聯(lián)生物化學(xué)有限公司