一種區(qū)分蕨麻和鵝絨委陵菜的方法
【專利摘要】本發(fā)明公開一種區(qū)分蕨麻和鵝絨委陵菜的方法，其特征在于,包括如下步驟：提取樣品DNA溶液；獲取樣品DNA條形碼序列：DNA溶液按照預(yù)定的PCR體系在預(yù)定的循環(huán)程序下，進(jìn)行PCR擴(kuò)增，得到樣品的DNA條形碼序列；將PCR擴(kuò)增產(chǎn)物采用1.5％瓊脂糖凝膠電泳分離，目標(biāo)條帶回收，進(jìn)行測(cè)序，將測(cè)序所得到的ABI序列文件用DNAMAN軟件進(jìn)行拼接和人工校正，得到ITS、Trn-L和Matk的核苷酸序列。將樣品的ITS、Trn-L和Matk的核苷酸序列與參照序列進(jìn)行對(duì)比，判別樣品所屬。采用本發(fā)明的設(shè)計(jì)方案，使用DNA鑒定技術(shù)對(duì)蕨麻和鵝絨委陵菜在分子水平進(jìn)行鑒定，準(zhǔn)確率高，結(jié)果可靠。
【專利說(shuō)明】一種區(qū)分蕨麻和鵝絨委陵菜的方法

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及生物【技術(shù)領(lǐng)域】，特別涉及一種區(qū)分蕨麻和鵝絨委陵菜的方法。

【背景技術(shù)】
[0002] 蕨麻是鵝絨委陵菜（Potentilla anserina L.)的變種的塊根。蕨麻富含淀粉、蛋 白質(zhì)、礦質(zhì)元素、皂苷、總黃酮等營(yíng)養(yǎng)成分和活性物質(zhì)，具有較好的營(yíng)養(yǎng)和藥用價(jià)值，質(zhì)糯， 味甜，口感佳，是我國(guó)醫(yī)典中記載的藥食兼用的民族食品；鵝絨委陵菜地下部分不膨大，常 常作為飼料和地被植物使用，不能食用。兩者的用途差異大，表型形態(tài)卻非常接近，差別不 明顯，還有較多過(guò)渡種。鵝絨委陵菜和蕨麻一直是從形態(tài)水平上進(jìn)行分類的，難以區(qū)別，經(jīng) 常造成分類困難，因此，利用分子技術(shù)對(duì)其進(jìn)行分類具有重要的現(xiàn)實(shí)意義。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0003] 為了解決上述區(qū)分蕨麻和鵝絨委陵菜的方法的缺點(diǎn)，本發(fā)明公開一種區(qū)分蕨麻和 鵝絨委陵菜的方法，本發(fā)明采用如下技術(shù)方案來(lái)解決上述技術(shù)問(wèn)題：
[0004] 一種區(qū)分蕨麻和鵝絨委陵菜的方法，其特征在于，包括如下步驟：
[0005] a.提取樣品DNA溶液：采用快捷型植物基因組DNA提取試劑盒進(jìn)行DNA提取，得 到樣品DNA溶液；
[0006] b.獲取樣品DNA條形碼序列：以步驟a提取的DNA溶液為模板，按照預(yù)定的 PCR體系在預(yù)定的循環(huán)程序下，ITS序列采用正向引物（5' -CGTAACAAGGTTTCCGTAGGT-3'） 和反向引物（5' -TGGTTCACGGGATTCTGC-3'）進(jìn)行PCR擴(kuò)增；Trn-L序列采用正向引物 (5,-CGAAATCGGTAGACGCTACG-3'），和反向引物（5,-GGGGATAGAGGGACTTGAAC-3'）進(jìn)行 PCR擴(kuò)增；Matk序列采用采用正向引物（5' -TAATTTACGATCAATTCATTC-3'）和反向引物 (5' -GTTCTAGCACAAGAAAGTCG-3'）進(jìn)行PCR擴(kuò)增，即得到樣品的DNA條形碼序列；將PCR擴(kuò) 增產(chǎn)物采用1.5%瓊脂糖凝膠電泳分離，目標(biāo)條帶回收，進(jìn)行測(cè)序，將測(cè)序所得到的ABI序 列文件用DNAMAN軟件進(jìn)行拼接和人工校正，得到ITS、Trn-L和Matk的核苷酸序列。
[0007] c.將樣品的ITS、Trn-L和Matk的核苷酸序列與參照序列進(jìn)行對(duì)比，判別樣品所 屬。
[0008] 優(yōu)選的，在上述的一種區(qū)分蕨麻和鵝絨委陵菜的方法中，所述步驟b的PCR體系 為：
[0009]

【權(quán)利要求】
1. 一種區(qū)分蕨麻和鵝絨委陵菜的方法，其特征在于，包括如下步驟： a. 提取樣品DNA溶液：采用快捷型植物基因組DNA提取試劑盒進(jìn)行DNA提取，得到樣 品DNA溶液； b. 獲取樣品DNA條形碼序列：以步驟a提取的DNA溶液為模板，按照預(yù)定的PCR體系 在預(yù)定的循環(huán)程序下，ITS序列采用正向引物 (5, -CGTAACAAGGTTTCCGTAGGT-3'）和反向引物 (5' -TGGTTCACGGGATTCTGC-3'）進(jìn)行PCR擴(kuò)增；Trn-L序列采用正向引物 (5, -CGAAATCGGTAGACGCTACG-3'），和反向引物 (5' -GGGGATAGAGGGACTTGAAC-3'）進(jìn)行PCR擴(kuò)增；Matk序列采用采用正向引物 (5, -TAATTTACGATCAATTCATTC-3'）和反向引物 (5' -GTTCTAGCACAAGAAAGTCG-3'）進(jìn)行PCR擴(kuò)增，即得到樣品的DNA條形碼序列；將PCR 擴(kuò)增產(chǎn)物采用1.5%瓊脂糖凝膠電泳分離，目標(biāo)條帶回收，進(jìn)行測(cè)序，將測(cè)序所得到的ABI 序列文件用DNAMAN軟件進(jìn)行拼接和人工校正，得到ITS、Trn-L和Matk的核苷酸序列； c. 將樣品的ITS、Trn-L和Matk的核苷酸序列與參照序列進(jìn)行對(duì)比，判別樣品所屬。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種區(qū)分蕨麻和鵝絨委陵菜的方法，其特征在于，所述步驟b 的PCR體系為：
3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種區(qū)分蕨麻和鵝絨委陵菜的方法，其特征在于，所述步驟 b的循環(huán)程序?yàn)椋孩?5°C預(yù)變性5min ;②95°C變性30s，55/50°C復(fù)性30s(ITS/Trn基因擴(kuò)增 采用551：，]\^1(基因采用50°〇,721：延伸458,30個(gè)循環(huán) ；@721：延伸101^11。產(chǎn)物41： 冰箱短期保存或_20°C冰箱長(zhǎng)期保存。4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種區(qū)分蕨麻和鵝絨委陵 菜的方法，其特征在于，在步驟b前還包括DNA質(zhì)量和濃度檢測(cè)步驟b Q : 取2 μ L DNA溶液，加入2 μ L 6 X Loading buf f er和6 μ L ddH20混勻，上樣；電泳緩沖 液1XTBE、1%瓊脂糖凝膠上進(jìn)行電泳檢測(cè)，電泳結(jié)束后，在凝膠成像分析系統(tǒng)上，觀察、拍 昭. 將待檢樣本總DNA溶液，按一定的比例稀釋，用UV-2800紫外分光光度計(jì)，測(cè)定樣本總 DNA在紫外波長(zhǎng)為260和280nm處的吸收值；依據(jù)0D26Q和0D28Q值，判斷待檢樣本總DNA的純 度；待檢樣本總 DNA 的純度（μ g .mL-1) = 0D26Q/0. 02XLX 稀釋倍數(shù)=0D26QX50y g .ml^X 稀釋倍數(shù)，其中L為比色皿光經(jīng)lcm，0D26Q為260nm波長(zhǎng)處的光吸收值，0· 02為每mL溶液內(nèi)
【文檔編號(hào)】C12Q1/68GK104099426SQ201410380396
【公開日】2014年10月15日 申請(qǐng)日期:2014年8月4日 優(yōu)先權(quán)日:2014年8月4日
【發(fā)明者】李軍喬, 富貴, 白世俊, 韋梅琴, 包錦淵, 閆淑艷 申請(qǐng)人:青海民族大學(xué)