一種濰縣蘿卜火龍果益壽飲料及其制備方法
【專(zhuān)利摘要】本發(fā)明公開(kāi)了一種濰縣蘿卜火龍果益壽飲料及其制備方法，該飲料采用濰縣蘿卜、胡蘿卜、番茄、火龍果為原料制成，因含有多種營(yíng)養(yǎng)成分，能夠增強(qiáng)人體的免疫力，具有抑制癌細(xì)胞生長(zhǎng)的能力，非常適合化療病人飲用，在降低癌細(xì)胞30％的同時(shí)，在一定程度上提高了體內(nèi)的免疫能力。
【專(zhuān)利說(shuō)明】一種濰縣蘿卜火龍果益壽飲料及其制備方法

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及一種復(fù)合果蔬飲料及其制備方法，具體地說(shuō)是一種濰縣蘿卜火龍果益 壽飲料及其制備方法，屬于飲料【技術(shù)領(lǐng)域】。 技術(shù)背景
[0002] 濰縣蘿卜，又稱(chēng)濰坊蘿卜，是山東省著名蘿卜品種，俗稱(chēng)高腳青或?yàn)H縣青蘿卜，因 原產(chǎn)于山東濰縣而得名，已有300多年的栽培歷史。濰縣蘿卜皮色深綠，肉質(zhì)翠綠，香辣脆 甜，多汁味美，具有濃郁獨(dú)特的地方風(fēng)味和鮮明的地域特點(diǎn)，是享譽(yù)國(guó)內(nèi)外的名特優(yōu)地方品 種。濰縣蘿卜肉質(zhì)緊密，甜而多汁，稍具辣香味，食之清脆可口，而且又有藥用價(jià)值，"可生可 熟，可豉可醋，可糖可辣可飯，乃蔬菜中之最有利益者。"蘿卜及秧苗和種子，在預(yù)防和治療 流行腦炎、煤氣中毒、暑熱、痢疾、腹瀉、熱咳帶血等病方面，有較好的藥效。蘿卜的營(yíng)養(yǎng)比較 豐富，據(jù)分析，每100克可食部分，含碳水化合物6克、蛋白質(zhì)0. 6克、鈣49毫克、磷34毫克、 鐵0. 5毫克、無(wú)機(jī)鹽0. 8克、維生素C30毫克，亞麻腦苷酯A(linum cerebroside)，黃酮，木 質(zhì)素、萊釀腦、膽堿、氧化酶素、甘酶、觸酶、淀粉酶、芥子油、維生素C等成分。
[0003] 胡蘿卜，是傘形科二年生草本植物，以呈肉質(zhì)的根作蔬菜食用。胡蘿卜別名黃蘿 卜、丁香蘿卜、葫蘆菔金與紅蘿卜，又被稱(chēng)為胡蘆菔、紅蘿卜、黃蘿卜等。胡蘿卜肉質(zhì)根富含 蔗糖、葡萄糖、淀粉、胡蘿卜素及鉀、鈣、磷等。每IOOg鮮重含胡蘿卜素1.67?12. lmg，比番 茄高5?7倍，食用后經(jīng)消化分解成維生素A，有防止夜盲癥和呼吸道疾病的作用，促進(jìn)兒童 生長(zhǎng)等功能。此外還含較多的鈣、磷、鐵等礦物質(zhì)。
[0004] 番茄，別名西紅柿、洋柿子，古名六月柿、喜報(bào)三元。番茄果實(shí)營(yíng)養(yǎng)豐富，具特殊風(fēng) 味，具有減肥瘦身、消除疲勞、增進(jìn)食欲、提高對(duì)蛋白質(zhì)的消化、減少胃脹食積等功效。每100 克鮮果含水分94克左右、碳水化合物2. 5?3. 8克、蛋白質(zhì)0. 6?1. 2克、維生素C20? 30毫克，以及番茄素、礦物鹽、有機(jī)酸等。
[0005] 火龍果，又稱(chēng)紅龍果、龍珠果，仙人掌科、量天尺屬植物果實(shí)，呈橢圓形，直徑10? 12cm，外觀為紅色或黃色，有綠色圓角三角形的葉狀體，白色、紅色或黃色果肉，具有黑色種 子的水果。火龍果營(yíng)養(yǎng)豐富、功能獨(dú)特，它含有一般植物少有的植物性白蛋白及花青素，豐 富的維生素和水溶性膳食纖維?；瘕埞庵校堪倏撕?3. 75克、灰分0. 34克、粗脂 肪0. 17克、粗蛋白0. 62克、粗纖維1. 21克、碳水化合物13. 91克、熱量59. 65千卡、膳食纖 維1. 62克、維生素C5. 22克、果糖2. 83克、葡萄糖7. 83克、鈣6. 3-8. 8毫克、磷30. 2-36. 1 毫克、鐵0. 55-0. 65毫克和大量花青素（紅肉果品種最豐）、水溶性膳食蛋白、植物白蛋白 等。
[0006] 經(jīng)檢索，目前尚未有以濰縣蘿卜、胡蘿卜、番茄與火龍果為原料制作復(fù)合果蔬飲料 的報(bào)道。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0007] 本發(fā)明的目的是提供一種濰縣蘿卜火龍果益壽飲料及其制備方法，其由等重量的 濰縣蘿卜、胡蘿卜、番茄、火龍果制成，其制備方法如下：
[0008] (1)、取等重量的濰縣蘿卜、胡蘿卜、番茄、火龍果，洗凈，漂燙；
[0009] (2)、取漂燙后的原材料、提取物與適量的水，勻漿，除渣，得濰縣蘿卜火龍果放化 療益壽飲料；
[0010] 其中提取物的制備方法如下：
[0011] 取等重量的濰縣蘿卜、胡蘿卜、番茄、火龍果，洗凈，混合，加入適量的石油醚，勻 漿，提取，過(guò)濾，得1號(hào)濾液；濾渣加入適量的乙酸乙酯，過(guò)濾，得到2號(hào)濾液；濾渣加入適量 乙醇，過(guò)濾，得到3號(hào)濾液；1-3號(hào)濾液混合，濃縮，得到提取物。勻漿、提取及濃縮均可采用 常規(guī)的方法實(shí)現(xiàn)。
[0012] 提取物的主要成分為生物堿、阜式、黃酮式，亞麻腦苷酯A(linum cerebroside)， 黃酮，木質(zhì)素、萊釀腦、膽堿、氧化酶素、甘酶、觸酶、淀粉酶、芥子油、維生素C、番茄素、胡蘿 卜素，植物白蛋白及花青色素等。
[0013] 本發(fā)明的濰縣蘿卜火龍果益壽飲料選用濰縣蘿卜、胡蘿卜、番茄、火龍果等常食果 蔬制成，無(wú)任何毒副作用的飲料。
[0014] 本發(fā)明的濰縣蘿卜火龍果益壽飲料因含有多種營(yíng)養(yǎng)成分，能夠增強(qiáng)人體的免疫 力，具有抑制癌細(xì)胞生長(zhǎng)的能力，非常適合化療病人飲用，在降低癌細(xì)胞30%的同時(shí)，在一 定程度上提高了體內(nèi)的免疫能力。以下的細(xì)胞學(xué)試驗(yàn)研究能更好的說(shuō)明濰縣蘿卜火龍果益 壽飲料對(duì)抑止癌細(xì)胞，提高免疫能力中的積極作用。
[0015] 以下通過(guò)細(xì)胞學(xué)試驗(yàn)進(jìn)一步說(shuō)明濰縣蘿卜火龍果益壽飲料的有益效果。
[0016] 濰縣蘿卜、火龍果、胡蘿卜、番茄提取物的細(xì)胞試驗(yàn)
[0017] 1?材料與方法
[0018] I. 1 材料
[0019] I. I. 1濰縣蘿卜、卜火龍果、胡蘿卜、番茄等洗凈擦干備用。
[0020] 1.1. 2濰縣蘿卜、火龍果等提取物：稱(chēng)取洗凈的濰縣蘿卜50g、胡蘿卜50g、番茄 50g、火龍果，50g濰縣蘿卜混合后，加入石油醚1升，放入攪拌機(jī)攪均，過(guò)濾，得1號(hào)濾液備 用；濾渣加入200毫升乙酸乙酯，過(guò)濾，得到2號(hào)濾液；濾渣加入100毫升乙醇，過(guò)濾，得到3 號(hào)濾液；1、2、3號(hào)濾液混合，濃縮，得到提取物。
[0021] 提取物的主要成分為生物堿、阜式、黃酮式，亞麻腦苷酯A(linum cerebroside)， 黃酮，木質(zhì)素、萊釀腦、膽堿、氧化酶素、甘酶、觸酶、淀粉酶、芥子油、維生素C、番茄素、胡蘿 卜素，植物白蛋白及花青色素等。
[0022] I. L 3 試劑：
[0023] 火龍果、濰縣蘿卜等提取的浸膏采用二甲基亞砜（分析純）溶解，人肝癌細(xì)胞 株BEL-7402來(lái)自中科院，用含高糖的DMEM培養(yǎng)液培養(yǎng)，補(bǔ)充12 %的胎牛血清、鏈霉素 (100 ii g/ml)及青霉素（lOOU/ml)，生長(zhǎng)于37°C含5%的CO2孵箱中。細(xì)胞凋亡原位檢測(cè)試 劑盒、SABC試劑盒為中山生物公司產(chǎn)品。
[0024] 1. 2 方法
[0025] I. 2. IMTT比色法測(cè)定火龍果、濰縣蘿卜等提取物對(duì)人肝癌細(xì)胞株的生長(zhǎng)抑制率： 將BEL-7402細(xì)胞以IO5Ail濃度接種于96孔板，每孔100 yl，24h后更換培養(yǎng)液，實(shí)驗(yàn)組分 別加入含10、20、40及80 y g/L濃度的濰縣蘿卜火龍果益壽飲料提取物，陰性對(duì)照不加藥， 空白對(duì)照只加培養(yǎng)液，每組設(shè)3個(gè)復(fù)孔，將培養(yǎng)板置37°C、5% CO2、飽和濕度下分別培養(yǎng)24、 48、72、96h，將培養(yǎng)后的96孔板每孔加入5g/L的MTT20 yl，繼續(xù)放入培養(yǎng)箱孵育4h后，以 1200r/min離心IOmin,小心吸出上清，加入DMS0150ii 1/孔，微量振蕩器振蕩5min后，在全 自動(dòng)酶標(biāo)儀讀取試驗(yàn)波長(zhǎng)570nm，參考波長(zhǎng)620nm的吸光值（OD)，計(jì)算細(xì)胞生長(zhǎng)抑制率。抑 制率=對(duì)照組OD值-實(shí)驗(yàn)組OD值/對(duì)照組OD值-空白組OD值X 100%。
[0026] 1. 2. 2濰縣蘿卜、火龍果益壽飲料提取物誘導(dǎo)肝癌細(xì)胞凋亡的研究：
[0027] (1)透射電鏡觀察將BEL-7402細(xì)胞以105/ml，共3ml鋪入培養(yǎng)瓶中，37°C孵育， 待細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)。另加含濰縣蘿卜、火龍果益壽飲料提取液（40 yg.171)培養(yǎng)液3ml，孵育 24h。洗下瓶?jī)?nèi)細(xì)胞，I，000rpml0min離心，PBS洗2次，細(xì)胞沉淀用4%戊二醛固定過(guò)夜。 2,000rpml0min離心，加入2%瓊脂糖攪勻，冷卻后切成Imm3小塊，用1%四氧化鋨固定3h， PBS充分清洗，梯度乙醇脫水，包埋劑包埋，切片，醋酸雙氧鈾-檸檬酸鉛雙重染色透射電鏡 觀察。
[0028] (2) TUNEL染色法置蓋玻片于6孔細(xì)胞培養(yǎng)板內(nèi)。取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的BEL-7402細(xì)胞 (細(xì)胞數(shù)為IOVml) 0. 4ml鋪于蓋玻片上。37°C孵育，待細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)。各孔內(nèi)另加含濰縣蘿 卜火龍果益壽飲料提取液（40iig/L)培養(yǎng)液3ml，與細(xì)胞共育，時(shí)間分別為24、48、72、96h。 每個(gè)時(shí)間組均設(shè)PBS對(duì)照孔，倒去孔內(nèi)培養(yǎng)液，10%甲醛固定。0. lmmol/L PBS緩沖液洗滌 后，0.3%過(guò)氧化氫-甲醇溶液及預(yù)冷的0. 1% Triton-XlOO處理細(xì)胞。后面步驟按中山生 物公司試劑盒操作說(shuō)明進(jìn)行，最后DAB-H2O2顯色，光鏡下觀察凋亡細(xì)胞并計(jì)數(shù)。
[0029] 實(shí)驗(yàn)對(duì)照：陰性對(duì)照用去掉TdT酶的標(biāo)記體系處理標(biāo)本；陽(yáng)性對(duì)照用以TACS核酶 處理、蛋白酶消化后的標(biāo)本，人為導(dǎo)致DNA斷裂，通過(guò)此方法使一份標(biāo)本上所有細(xì)胞均能低 強(qiáng)度顯弱棕黃色。
[0030] 凋亡指數(shù)（Al)計(jì)算方法：染色后細(xì)胞核呈棕褐色的細(xì)胞被判為凋亡細(xì)胞。隨機(jī)選 取AI =(凋亡細(xì)胞數(shù)+總細(xì)胞數(shù)）X 100%。
[0031] 統(tǒng)計(jì)方法：T檢驗(yàn)。
[0032] 2 結(jié)果
[0033] 2. 1濰縣蘿卜、火龍果益壽飲料提取物對(duì)肝癌細(xì)胞的生長(zhǎng)抑制作用
[0034] 10、20、40及80 ii g/L濃度的濰縣蘿卜火龍果益壽飲料提取液對(duì)肝癌細(xì)胞均有明 顯抑制作用，抑制率與對(duì)照組比較有顯著性差異（P < 〇. 01)，且隨濰縣蘿卜、火龍果益壽飲 料提取液濃度增加和培養(yǎng)時(shí)間的延長(zhǎng)，抑制作用逐漸增強(qiáng)（結(jié)果見(jiàn)表1)。
[0035] 2. 2濰縣蘿卜火龍果益壽飲料提取物誘導(dǎo)肝癌細(xì)胞凋亡的研究
[0036] 2. 2. 1透射電鏡觀察經(jīng)濰縣蘿卜火龍果益壽飲料提取物（40 ii g/L)處理24h后，部 分肝癌細(xì)胞出現(xiàn)典型的凋亡細(xì)胞形態(tài)，如細(xì)胞核染色質(zhì)致密濃縮，或聚集于核膜呈新月形 小體（結(jié)果見(jiàn)說(shuō)明書(shū)附圖1 :濰縣蘿卜、火龍果益壽飲料提取物處理后，肝癌細(xì)胞出現(xiàn)由膜 性結(jié)構(gòu)包繞的核碎片所形成的凋亡小體（透射電鏡，X8000))。
[0037] 2. 2. 2TUNEL 染色法
[0038] 光鏡下檢查可見(jiàn)，經(jīng)濰縣蘿卜、火龍果益壽飲料提取物（10 U g/L)處理24、48、72、 96h后，腫瘤BEL-7402細(xì)胞凋亡數(shù)（凋亡數(shù)的結(jié)果列表并證明P值）明顯增加。棕褐色染 色顆粒定位于細(xì)胞核內(nèi)。染色陽(yáng)性的腫瘤細(xì)胞出現(xiàn)細(xì)胞核碎裂，核質(zhì)固縮，細(xì)胞膜突出形成 質(zhì)膜小泡等凋亡細(xì)胞形態(tài)學(xué)變化（結(jié)果見(jiàn)說(shuō)明書(shū)附圖2 :附圖-2TUNEL染色法可見(jiàn)凋亡的 肝癌細(xì)胞的細(xì)胞核被染為棕褐色（光鏡，X 200))。
[0039] 濰縣蘿卜、火龍果益壽飲料提取物，未處理組的細(xì)胞凋亡指數(shù)為I. 15±1. 04%，濰 縣蘿卜、火龍果益壽飲料提取物處理24h組的細(xì)胞凋亡指數(shù)為6. 94±2. 17%;處理48h組的 細(xì)胞凋亡指數(shù)為18. 46±1.78% ;處理72h組的細(xì)胞凋亡指數(shù)為29. 49±3. 23% ;處理96h 組的細(xì)胞凋亡指數(shù)為38. 67±3. 67%。經(jīng)t檢驗(yàn)，差異均有顯著性（P < 0. 05)。
[0040] 3 討論
[0041] 研究發(fā)現(xiàn)10、20、40及SOyg/L濃度的濰縣蘿卜、火龍果益壽飲料提取物對(duì)肝癌 細(xì)胞均有明顯抑制作用，抑制率與對(duì)照組比較有顯著性差異（P < 〇. 01)，且隨濰縣蘿卜、火 龍果益壽飲料提取物濃度增加和培養(yǎng)時(shí)間的延長(zhǎng)，抑制作用逐漸增強(qiáng)。經(jīng)濰縣蘿卜、火龍 果益壽飲料提取物（40 i! g/L)處理24h后，部分腫瘤BEL-7402細(xì)胞的超微結(jié)構(gòu)出現(xiàn)典型的 凋亡細(xì)胞形態(tài)，證實(shí)濰縣蘿卜、火龍果益壽飲料提取物（40 yg.171)對(duì)肝癌細(xì)胞具有誘導(dǎo)凋 亡作用；濰縣蘿卜、火龍果益壽飲料提取物處理24、48、72、9611后，1^呢1染色法發(fā)現(xiàn)腫瘤 BEL-7402細(xì)胞凋亡數(shù)明顯隨著時(shí)間的延長(zhǎng)而增加，進(jìn)一步證實(shí)誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡是濰縣蘿卜、 火龍果益壽飲料提取物殺傷肝癌細(xì)胞的作用機(jī)制之一。因此，探討濰縣蘿卜、火龍果益壽飲 料提取物誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡的分子機(jī)制具有重要意義。
[0042] 表1對(duì)BEL-7402細(xì)胞的生長(zhǎng)抑制作用（抑制率，％ )
[0043]

【權(quán)利要求】
1. 一種濰縣蘿卜火龍果放化療益壽飲料，其特征是其由等重量的濰縣蘿卜、胡蘿卜、番 爺、火龍果制成。
2. 如權(quán)利要求1所述的濰縣蘿卜火龍果放化療益壽飲料，其特征是其制備方法如下： (1) 、取等重量的濰縣蘿卜、胡蘿卜、番茄、火龍果，洗凈，漂燙； (2) 、取漂燙后的原材料、提取物與適量的水，勻漿，除渣，得濰縣蘿卜火龍果放化療益 壽飲料； 其中提取物的制備方法如下： 取等重量的濰縣蘿卜、胡蘿卜、番茄、火龍果，洗凈，混合，加入適量的石油醚，勻漿，提 取，過(guò)濾，得1號(hào)濾液；濾渣加入適量的乙酸乙酯，過(guò)濾，得到2號(hào)濾液；濾渣加入適量乙醇， 過(guò)濾，得到3號(hào)濾液；1-3號(hào)濾液混合，濃縮，得到提取物。
【文檔編號(hào)】A23L2/02GK104382124SQ201410460605
【公開(kāi)日】2015年3月4日 申請(qǐng)日期:2014年9月11日 優(yōu)先權(quán)日:2014年9月11日
【發(fā)明者】夏銘笛, 李宗霖, 李學(xué)春, 李桂鳳 申請(qǐng)人:李桂鳳