一種延長水產(chǎn)品保質(zhì)期的生物保鮮方法
【專利摘要】本發(fā)明提供了一種延長水產(chǎn)品保質(zhì)期的生物保鮮方法，屬于生物工程【技術(shù)領(lǐng)域】。將香櫞果粉碎勻漿后加入甲醇提取，減壓濃縮后與海藻酸鈉溶液混合，然后與氯化鈣溶液作用成膜于水產(chǎn)品體表，用于水產(chǎn)品的保鮮儲(chǔ)藏。本發(fā)明采用天然香櫞提取物，并結(jié)合高分子成膜技術(shù)用于水產(chǎn)品的保鮮，以對蝦為例，在6天保藏期內(nèi)，與空白處理、殼聚糖對照處理的對蝦相比，菌落總數(shù)分別低1.17、0.31個(gè)數(shù)量級，失水率僅為空白對照的82%，而與殼聚糖處理的沒有顯著差異，對蝦色澤、滋氣味等感官特性的保持也明顯優(yōu)于空白處理和殼聚糖對照，該發(fā)明大大延長了鮮活對蝦的保藏時(shí)間，有著廣闊的市場前景。
【專利說明】一種延長水產(chǎn)品保質(zhì)期的生物保鮮方法 一、

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明為一種延長水產(chǎn)品保質(zhì)期的生物保鮮方法，將天然植物來源的提取物結(jié)合 成膜技術(shù)應(yīng)用于水產(chǎn)品的保鮮，屬于生物工程【技術(shù)領(lǐng)域】。 二、

【背景技術(shù)】
[0002] 香櫞（學(xué)名：Citrus medica L.)又名枸櫞，為蕓香科柑橘屬植物，其藥用始載 于《本草拾遺》，稱其性味辛、微苦、酸、溫，歸肝、脾、肺經(jīng)，是理氣、舒郁、消痰、利膈的一味中 藥?！侗窘?jīng)》謂其"安五臟諸不足，益氣補(bǔ)中，止痛解毒，除眾病，和百藥"。而后不少古籍中 也都記載香櫞具有疏肝解郁、理氣寬中、化痰止咳的功效，主治胸脅脹痛、脘腹脹痛、噯氣吞 酸、嘔惡食少、痰濕咳嗽。
[0003] 目前香櫞作為食品、保健品的應(yīng)用還不多。有關(guān)香櫞的相關(guān)研究比較少，僅見一些 關(guān)于香椽揮發(fā)油研究的實(shí)驗(yàn)文章，李雪梅等通過GC-MS技術(shù)從新鮮香櫞葉精油中鑒定出30 種化學(xué)成分，其中主要成分有檸檬烯、橙花醛、香葉醛、香茅醛等。在工業(yè)生產(chǎn)上，因其果皮 所含揮發(fā)油成分較多，開發(fā)作為一種天然香精及熬制香櫞油，質(zhì)量上乘，香氣具佳可替代進(jìn) 口同類產(chǎn)品，廣泛應(yīng)用于食品及化妝品行業(yè)。另外現(xiàn)代藥理研究證明，香櫞所含的橙皮苷有 維生素 P樣作用，可降低毛細(xì)血管的通透性、防止微細(xì)血管出血；能拮抗組胺、溶血磷脂酰 膽堿引起的血管通透性增加；能增強(qiáng)纖維蛋白溶解，抗血栓形成；有利膽作用。
[0004] 我國是水產(chǎn)品的生產(chǎn)與消費(fèi)大國，水產(chǎn)品味道鮮美，營養(yǎng)豐富，是動(dòng)物蛋白質(zhì)的重 要來源。隨著人們生活水平的提高，對水產(chǎn)品品質(zhì)和新鮮度的要求也越來越高，水產(chǎn)品保鮮 工作正受到前所未有的重視。但水產(chǎn)品組織柔嫩，結(jié)締組織少，蛋白質(zhì)、不飽和脂肪酸及水 分含量較高，體內(nèi)組織酶活性強(qiáng)，很容易變質(zhì)、腐敗，失去食用價(jià)值，而且水產(chǎn)品的收獲期相 對集中，我國的冷藏保鮮體系還很不完善，嚴(yán)重影響水產(chǎn)品的市場流通和銷售，成為限制水 產(chǎn)行業(yè)發(fā)展的桎梏。
[0005] 目前，應(yīng)用于水產(chǎn)品保鮮的技術(shù)主要有低溫保鮮、化學(xué)保鮮、氣調(diào)保鮮和輻照保鮮 等。傳統(tǒng)的化學(xué)保鮮、輻照保鮮存在一定的安全隱患，低溫保鮮存在一定的局限性，如增加 成本，特別是冷凍儲(chǔ)藏后嚴(yán)重影響產(chǎn)品食用口感等。因此加強(qiáng)水產(chǎn)品保鮮工作勢在必行，特 別是應(yīng)用天然防腐保鮮劑和新型處理技術(shù)綜合利用，發(fā)揮綜合優(yōu)勢和協(xié)同效應(yīng)。
[0006] 香櫞果很耐儲(chǔ)存，不用任何保鮮劑能保持?jǐn)?shù)月以上而不變色味，因此推測香櫞果 中含有具有良好抑菌作用的組分，其提取物可以作為天然保鮮劑用于食品的保鮮。本發(fā)明 采用溶劑提取香櫞果浸膏，并結(jié)合多糖成膜法，用于水產(chǎn)品的保鮮，獲得了一種能顯著延長 新鮮水產(chǎn)品保質(zhì)期和感官性能的方法。 三、


【發(fā)明內(nèi)容】

[0007] 技術(shù)問題本發(fā)明的目的是提供一種延長水產(chǎn)品保質(zhì)期的生物保鮮方法，實(shí)現(xiàn)水 產(chǎn)品保質(zhì)期延長一倍以上。
[0008] 技術(shù)方案本發(fā)明提供一種延長水產(chǎn)品保質(zhì)期的生物保鮮方法，包括：
[0009] (1)香櫞提取物的制備：香櫞果洗凈，切塊，用組織勻漿機(jī)打漿；香櫞果洗凈，切 塊，用組織勻漿機(jī)打漿；香櫞勻漿中加入甲醇提取，提取液蒸發(fā)甲醇后得到濃縮的香櫞提取 物浸膏；
[0010] (2)成膜試劑的制備：分別稱取海藻酸鈉和氯化鈣，以水溶解，配制成溶液，海藻 酸鈉溶液的濃度為〇. 3-0. 6g/L，氯化鈣溶液的濃度為l-3g/L ;
[0011] (3)水產(chǎn)品的保鮮處理：取步驟（1)中獲得的香櫞提取物浸膏，以步驟（2)中的 海藻酸鈉溶液溶解，配制成提取物稀釋液，提取物稀釋液中海藻酸鈉溶液溶解的終濃度為 0. 2-0. 6mg/ml ;水產(chǎn)品洗凈，浙干，于上述香櫞提取物稀釋液中浸漬l-5min后取出，再放入 步驟（2)中的氯化鈣溶液中立即取出，浙干，4°C保藏。
[0012] 所述步驟（1)中香櫞提取物的制備是將香櫞勻漿中加入5倍體積的甲醇，于 120rpm條件下室溫振蕩30min，過濾上清，再加入甲醇重復(fù)提取2次，合并3次甲醇提取液， 于40°C下真空旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至無甲醇蒸出，得到濃縮的提取物浸膏。
[0013] 步驟（2)中所用海藻酸鈉溶液的濃度為0. 5g/L，所用氯化鈣溶液的濃度為2g/L。
[0014] 步驟（3)中香櫞提取物浸膏用海藻酸鈉溶液溶解的終濃度為0. 4mg/ml。
[0015] 步驟（3)中水產(chǎn)品在香櫞提取物稀釋液中浸漬的時(shí)間為2min ;水產(chǎn)品放入氯化鈣 溶液中立即取出，時(shí)間不超過5s。
[0016] 有益效果
[0017] 水產(chǎn)品一般蛋白質(zhì)和游離氨基酸含量豐富，隨著人們生活水平的提高，人們對健 康和水產(chǎn)食品質(zhì)量越來越關(guān)注。水產(chǎn)品捕撈后如不采取適當(dāng)?shù)姆栏ｕr處理極易腐敗變 質(zhì)，嚴(yán)重影響水產(chǎn)品的市場流通和銷售。目前，應(yīng)用于水產(chǎn)品保鮮的技術(shù)主要有低溫保鮮、 化學(xué)保鮮、氣調(diào)保鮮和輻照保鮮等。傳統(tǒng)的化學(xué)保鮮、輻照保鮮存在一定的安全隱患，低溫 保鮮存在一定的局限性，如增加成本，特別是冷凍儲(chǔ)藏后嚴(yán)重影響產(chǎn)品食用口感等。
[0018] 1、香櫞果很耐儲(chǔ)存，不用任何保鮮劑能保持?jǐn)?shù)月以上而不變色味，本發(fā)明經(jīng)研究， 香櫞果中含有具有良好抑菌作用的組分，其提取物可以作為天然保鮮劑用于食品的保鮮。
[0019] 2、本發(fā)明采用溶劑提取香櫞果浸膏，并結(jié)合多糖成膜法，用于水產(chǎn)品的保鮮，獲得 了一種能顯著延長新鮮水產(chǎn)品保質(zhì)期和感官性能的方法。
[0020] 3、本發(fā)明采用天然的香櫞提取物，體外抑菌實(shí)驗(yàn)證明能抑制多種特征性的水產(chǎn)品 腐敗菌，如銅綠假單胞菌、熒光假單胞菌、單核增生李斯特菌、腐敗希瓦菌、變形斑沙雷氏 菌、嗜水氣單胞菌、耶耳辛氏腸炎桿菌等。
[0021] 4、本發(fā)明利用海藻酸鈉多糖凝膠和金屬陽離子的成膜特性，將香櫞提取物混于成 膜系統(tǒng)中，緩解水產(chǎn)品保鮮過程中的變色、失水等問題。
[0022] 5、采用的保鮮試劑和成膜試劑均為天然物質(zhì)，無毒性、無異味、安全可靠，工藝、操 作簡單。
[0023] 6、本發(fā)明采用天然的香櫞提取物，可以顯著抑制水產(chǎn)品中的特征性腐敗菌，同時(shí) 利用海藻酸鈉多糖凝膠和金屬陽離子的成膜特性，緩解水產(chǎn)品保鮮過程中的變色、失水等 問題，實(shí)現(xiàn)水產(chǎn)品保質(zhì)期延長一倍以上。 四、【專利附圖】

【附圖說明】
[0024] 圖1新鮮對蝦
[0025] 圖2無保鮮處理的對照組對蝦存放6天后的狀態(tài)
[0026] 圖3香櫞提取物處理的對蝦存放6天后的狀態(tài)
[0027] 圖4殼聚糖處理的對蝦存放6天后的狀態(tài)
[0028] 圖5對蝦6天儲(chǔ)存過程中揮發(fā)性鹽基氮含量的變化趨勢 五、具體實(shí)施例
[0029] 1.香櫞提取物的制備
[0030] 香櫞果5kg洗凈，切塊約3cmX3cm大小，去籽，果肉用組織勻漿機(jī)（西貝樂電器 有限公司）低速打漿lmin。香櫞勻漿中加入5倍體積的甲醇，于120rpm條件下室溫振蕩 30min，過濾上清，殘?jiān)性偌尤爰状贾貜?fù)提取2次，合并3次甲醇提取液，于40°C下真空旋 轉(zhuǎn)蒸發(fā)至無甲醇蒸出，得到濃縮的提取浸膏約23. 5g，4°C保藏備用；
[0031] 2.海藻酸鈉溶液的配制：稱取海藻酸鈉0. 5g，以IOOOml水溶解，配制成終濃度 0· 5g/L的溶液；
[0032] 3.氯化鈣溶液的配制：稱取氯化鈣2g，以IOOOml水溶解，配制成終濃度2g/L的溶 液；
[0033] 4.稱取適量步驟1中的香櫞浸膏，以0. 5g/L的海藻酸鈉溶液溶解，配制成終濃度 為0. 4mg/ml的提取物稀釋液；
[0034] 5.以市售對蝦為例進(jìn)行保鮮處理。對蝦樣品洗凈浙干，于步驟4所述配制的香櫞 提取物稀釋液中浸漬2min，撈出浙干；
[0035] 6.放入氯化鈣溶液中立即取出，時(shí)間不超過5s，浙干后裝袋，封口（溫州市興業(yè)機(jī) 械設(shè)備有限公司），4°C保藏。
[0036] 7.體外抑菌實(shí)驗(yàn)：
[0037] 米用改良的平板孔講擴(kuò)散法（Gomez S, Cosson C, Deschamps AM. Evidence for a bacteriocin-1 ike substance produced by a new strain of Streptococcus sp., inhibitory to Gram-positive food-borne pathogens.Research in Microbiology, 1997, 148:757-766)研究香櫞提取物對特征性的水產(chǎn)品腐敗菌的生長抑制 活性。
[0038] 參考下列文獻(xiàn)依據(jù)選擇抗菌試驗(yàn)腐敗指示菌：曲敏，趙舉風(fēng)，孫懷軍，劉志廣.魚 類特定腐敗菌及其腐敗能力研究概況.寧夏農(nóng)林科技，2013,54(10) :58-59,99;羅慶 華.水產(chǎn)品特定腐敗菌研究進(jìn)展，食品科學(xué)，2010,31 (23) :468-472。該7株菌分別為銅綠假 單胞菌（Pseudomonas aeruginosa CGMCCL 10712,購買自中國普通微生物菌種保藏管理中 心）、焚光假單胞菌（Pseudomonas fluorescens CGMCCL 6279,購買自中國普通微生物菌種 保藏管理中心）、單核增生李斯特菌（Listeria monocytogenes CMCC (B) 54002,購買自廣東 省菌種保藏中心）、腐敗希瓦菌（Shewanella putrefaciens ATCC1109,購買自美國典型培 養(yǎng)物保藏中心）、變形斑沙雷氏菌（Serratia proteamaculans ATCC 35476,購買自美國典 型培養(yǎng)物保藏中心）、嗜水氣單胞菌（Aeromonas hydrophila CGMCC1. 2017,購買自中國普 通微生物菌種保藏管理中心）、耶耳辛氏腸炎桿菌（Yersinia enterocolitica ATCC27729， 購買美國典型培養(yǎng)物保藏中心）。
[0039] 將活化好的7種抗菌試驗(yàn)指示菌種用冷卻到50°C左右的肉湯培養(yǎng)基（牛肉膏3g， 蛋白胨l〇g，氯化鈉5g，瓊脂12g，水1000ml，pH7. O?7· 2)稀釋至106cfu/ml以上，倒平板。 待培養(yǎng)基冷凝后，用直徑為7mm的打孔器于平板上均勻打出三個(gè)孔，吸取10 μ L融化的培養(yǎng) 基封底以防止培養(yǎng)基與平皿底的出現(xiàn)裂隙。分別吸取處理好的香櫞提取物100 μ L注入孔 中，37°C下分別培養(yǎng)24h后觀察抑菌圈，另外，采用氨芐青霉素、慶大霉素、四環(huán)素作為陽性 對照。
[0040] 體外抑菌實(shí)驗(yàn)證明，香櫞提取物能抑制多種特征性的水產(chǎn)品腐敗菌，如銅綠假單 胞菌、熒光假單胞菌、單核增生李斯特菌、腐敗希瓦菌、變形斑沙雷氏菌、嗜水氣單胞菌、耶 耳辛氏腸炎桿菌等，結(jié)果見表1。
[0041] 8.菌落總數(shù)測定：
[0042] 按照上述具體實(shí)施例步驟1-6進(jìn)行保鮮處理，另外用不做任何處理的對蝦作為空 白對照，以及l(fā)〇g/L殼聚糖處理的對蝦作為陽性對照。
[0043] 參照《GB47892-2010食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)食品微生物學(xué)檢驗(yàn)菌落總數(shù)測定》進(jìn)行 測定。用香櫞提取物處理的對蝦樣品，儲(chǔ)存6天后菌落總數(shù)達(dá)到3. 4X IO5CFU/克（折 合成IgCFU為5. 53)，如表2所示，空白處理和10g/L殼聚糖處理的對蝦菌落總數(shù)分別為 5 X IO6CFU/克（折合成IgCFU為6. 70)、7 X IO5CFU/克（折合成IgCFU為5. 85)，相比之下 用香櫞提取物處理的對蝦樣品比空白處理和殼聚糖處理的對蝦中菌落總數(shù)低I. 17、0. 31 個(gè)數(shù)量級。
[0044] 9.理化指標(biāo)和感官指標(biāo)評定：
[0045] 按照上述具體實(shí)施例步驟1-6進(jìn)行保鮮處理，另外用不做任何處理的對蝦作為空 白對照，以及l(fā)〇g/L殼聚糖處理的對蝦作為陽性對照。表3為這三種不同處理的對蝦儲(chǔ)存6 天后失水率的變化，采用本發(fā)明所述香櫞提取物成膜保鮮的對蝦樣品在6天儲(chǔ)存期后失水 率最低，為18. 24%，而空白對照組的失水率達(dá)到22. 21%。
[0046] 感官評定：按照表4感官評定標(biāo)準(zhǔn)對各個(gè)保鮮處理的樣品進(jìn)行感官評定。表5所 示為三種不同處理后對蝦的感官性狀評分結(jié)果，6天儲(chǔ)存期后香櫞提取物成膜保鮮的對蝦 樣品色澤、滋氣味等感官特性的保持明顯優(yōu)于空白處理和殼聚糖對照，相關(guān)圖片見圖1? 圖4。
[0047] 揮發(fā)性鹽基氮TVB-N測定：參照《GB/T5009. 44-2003肉與肉制品衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)的分析 方法》進(jìn)行測定。結(jié)果見圖5。
[0048] 綜上所述，參照國際食品微生物規(guī)格委員會(huì)對水產(chǎn)品菌落總數(shù)不超過 5X IO5CFU/克規(guī)定，以及《GB2733-2005鮮、凍動(dòng)物性水產(chǎn)品衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)》對揮發(fā)性鹽基氮/ (mg/100g) < 30的規(guī)定可以看出，未經(jīng)處理的空白對蝦樣品的菌落總數(shù)在儲(chǔ)存第2后就高 達(dá)1. 08 X IO6CFU/克（見表2)，揮發(fā)性鹽基氮在儲(chǔ)存3天后也高于30mg/100g (見圖5)，而 采用香櫞提取物處理的對蝦在儲(chǔ)存6天后菌落總數(shù)和揮發(fā)性鹽基氮的數(shù)值都仍在規(guī)定限 量以下（見表2、圖5)。可見本發(fā)明提供了一種延長水產(chǎn)品保質(zhì)期的生物保鮮方法，實(shí)現(xiàn)水 產(chǎn)品保質(zhì)期延長一倍以上。
[0049] 表1香櫞提取物體外抑菌活性
[0050]

【權(quán)利要求】
1. 一種延長水產(chǎn)品保質(zhì)期的生物保鮮方法，包括： (1) 香櫞提取物的制備：香櫞果洗凈，切塊，用組織勻漿機(jī)打漿；香櫞勻漿中加入甲醇 提取，提取液蒸發(fā)甲醇后得到濃縮的香櫞提取物浸膏； (2) 成膜試劑的制備：分別稱取海藻酸鈉和氯化鈣，以水溶解，配制成溶液，海藻酸鈉溶 液的濃度為〇. 3-0. 6g/L，氯化鈣溶液的濃度為l-3g/L ; (3) 水產(chǎn)品的保鮮處理：取步驟（1)中獲得的香櫞提取物浸膏，以步驟（2)中的海 藻酸鈉溶液溶解，配制成提取物稀釋液，提取物稀釋液中海藻酸鈉溶液溶解的終濃度為 0. 2-0. 6mg/ml ;水產(chǎn)品洗凈，浙干，于上述香櫞提取物稀釋液中浸漬l-5min后取出，再放入 步驟（2)中的氯化鈣溶液中立即取出，浙干，4°C保藏。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述一種延長水產(chǎn)品保質(zhì)期的生物保鮮方法，其特征在于，步驟 (1)中香櫞提取物的制備是將香櫞勻漿中加入5倍體積的甲醇，于120rpm條件下室溫振蕩 30min，過濾上清，再加入甲醇重復(fù)提取2次，合并3次甲醇提取液，于40°C下真空旋轉(zhuǎn)蒸發(fā) 至無甲醇蒸出，得到濃縮的提取物浸膏。
3. 根據(jù)權(quán)利要求1或2所述一種延長水產(chǎn)品保質(zhì)期的生物保鮮方法，其特征在于， 步驟（2)中所用海藻酸鈉溶液的濃度為0. 5g/L，所用氯化鈣溶液的濃度為2g/L，步驟 (3)中香櫞提取物浸膏用海藻酸鈉溶液溶解的終濃度為0. 4mg/ml。
4. 根據(jù)權(quán)利要求1或2所述一種延長水產(chǎn)品保質(zhì)期的生物保鮮方法，其特征在于，步驟 (3)中水產(chǎn)品在香櫞提取物稀釋液中浸漬的時(shí)間為2min ;水產(chǎn)品放入氯化鈣溶液中立即取 出，時(shí)間不超過5s。
5. 根據(jù)權(quán)利要求3所述一種延長水產(chǎn)品保質(zhì)期的生物保鮮方法，其特征在于，步驟（3) 中水產(chǎn)品在香櫞提取物稀釋液中浸漬的時(shí)間為2min ;水產(chǎn)品放入氯化鈣溶液中立即取出， 時(shí)間不超過5s。
【文檔編號】A23B4/18GK104222255SQ201410462316
【公開日】2014年12月24日 申請日期:2014年9月11日 優(yōu)先權(quán)日:2014年9月11日
【發(fā)明者】劉小莉, 周劍忠, 張麗霞, 李瑩, 夏秀東, 王英, 黃自蘇 申請人:江蘇省農(nóng)業(yè)科學(xué)院