一種用于減少底部泥皮產(chǎn)生的微生物制劑及制備方法
【專利摘要】本發(fā)明公開(kāi)了一種減少底部泥皮產(chǎn)生的微生物制劑及其制作方法。所述微生物制劑其特征在于，原料包括枯草芽孢桿菌20-40％，凝結(jié)芽孢桿菌10-30％及沼澤紅假單孢菌20-50％。制備方法為：分別將枯草芽孢桿菌、凝結(jié)芽孢桿菌和沼澤紅假單抱桿菌分別接種于相應(yīng)的培養(yǎng)基中，得到種子培養(yǎng)液；將各種子培養(yǎng)液按比例依次接種到特定培養(yǎng)基中發(fā)酵，再經(jīng)高速離心，得到高濃度的菌液；將菌液移入基質(zhì)中混合，最后制粒、干燥、粉碎。本發(fā)明采用多孔徑復(fù)合載體結(jié)構(gòu)，提供了有益菌的定植基質(zhì)，同時(shí)利用有益菌利用分解載體物理吸附的底部泥皮中的有害物質(zhì)，使已經(jīng)板結(jié)的底泥趨于松軟和分解，大幅提升整搪水體緩沖力，構(gòu)成了良性循環(huán)，營(yíng)造了良好的水質(zhì)環(huán)境。
【專利說(shuō)明】—種用于減少底部泥皮產(chǎn)生的微生物制劑及制備方法

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及一種微生物發(fā)酵領(lǐng)域，尤其涉及一種用于減少底部泥皮產(chǎn)生的復(fù)合微生物制劑及其制備方法

【背景技術(shù)】
[0002]隨著水產(chǎn)養(yǎng)殖生產(chǎn)產(chǎn)量的增長(zhǎng)，一味追究高密度放養(yǎng)，提高產(chǎn)量和效益的措施對(duì)養(yǎng)殖環(huán)境污染，尤其是養(yǎng)殖塘底部環(huán)境造成了很大的污染，嚴(yán)重破壞了養(yǎng)殖塘原有的生態(tài)平衡。養(yǎng)殖水的環(huán)境惡化，一旦超過(guò)養(yǎng)殖對(duì)象的適應(yīng)范圍，魚(yú)蝦蟹則會(huì)處于應(yīng)激狀態(tài)，降低了它們的正常的生理功能，表現(xiàn)為厭食，體弱，易致病，甚至死亡。養(yǎng)殖塘經(jīng)過(guò)一段時(shí)間飼養(yǎng)中的大量投餌，剩余殘餌和動(dòng)物糞便就會(huì)沉積池底，使底質(zhì)惡化，產(chǎn)生有害物質(zhì)，抑制水產(chǎn)養(yǎng)殖動(dòng)物的生長(zhǎng)發(fā)育，因此在飼養(yǎng)過(guò)程中注意觀察底質(zhì)好壞進(jìn)行底質(zhì)改良。使養(yǎng)殖塘的生態(tài)平衡，水質(zhì)各項(xiàng)指標(biāo)符合優(yōu)良，營(yíng)造一個(gè)良好的水環(huán)境，促進(jìn)水產(chǎn)養(yǎng)殖動(dòng)物生長(zhǎng)發(fā)育有著重要作用。
[0003]養(yǎng)殖塘底的淤泥增多，底質(zhì)惡化(塘底發(fā)惡臭)，是造成養(yǎng)殖塘底部“氧債”升高，PH值失衡，有毒物質(zhì)和有害細(xì)菌增加的罪魁禍?zhǔn)?，是造成整個(gè)養(yǎng)殖水體水質(zhì)污染的主要原因。魚(yú)蝦蟹疾病暴發(fā)，飼料效率不高，養(yǎng)殖成本增大，其直接原因就是水質(zhì)惡化，而水質(zhì)惡化的根本在于底質(zhì)惡化。
[0004]水產(chǎn)養(yǎng)殖塘中的泥皮是屬于一種苔藻類(lèi)和餌料碎屑的綜合物，泥皮在養(yǎng)殖塘中主要附生在底泥表面，呈藍(lán)綠、綠褐、黃褐等顏色，上面有著大量的泡沫和有機(jī)物。有泥皮的養(yǎng)殖塘，水質(zhì)普遍清瘦，不易肥水，池水PH值偏高。溫度稍高點(diǎn)就會(huì)由于其中的有機(jī)物酵分解產(chǎn)生有害氣體，而且死亡的藻類(lèi)尸體與底泥一起浮出水面，成為許許多片狀浮泥，容易造成缺氧，并且容易產(chǎn)生很多有毒物質(zhì)。
[0005]養(yǎng)殖塘泛起泥皮，是養(yǎng)殖塘水質(zhì)開(kāi)始惡化或正在惡化的一個(gè)征兆。它對(duì)生產(chǎn)的主要危害有:①殘骸的腐爛，增加池中氨氮的濃度；②殘骸的分解過(guò)程，增加了養(yǎng)殖塘生物耗氧量，因而降低了池水溶解氧；③泥皮在生成的過(guò)程中會(huì)滋生大量的原生動(dòng)物和細(xì)菌，上浮后容易被攝食，引發(fā)養(yǎng)殖動(dòng)物的中毒和腸炎，導(dǎo)致抵抗力下降有泥皮的塘水的水質(zhì)PH值通常都高，會(huì)刺激鰓絲導(dǎo)致鰓腫，進(jìn)一步降低抵抗能力。
[0006]生物方法改底相比于物理方法和化學(xué)方法，具有有效分解底部有毒物質(zhì)、對(duì)底部無(wú)二次污染、改善水色、穩(wěn)定藻相、穩(wěn)定PH值、抑制致病菌和保持水體最佳狀態(tài)等優(yōu)點(diǎn)。但目前市場(chǎng)上存在微生物制劑單一或配比不合理的情況，使得微生物制劑的成本和利用率受到極大的限制。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0007]本發(fā)明提供了一種減少底部泥皮產(chǎn)生的微生物制劑及其制備方法。
[0008]為了實(shí)現(xiàn)以上目的，本發(fā)明的第一個(gè)方面是提供一種用于減少底部泥皮產(chǎn)生的微生物制劑，由以下重量百分比的菌種組成:
[0009]枯草芽孢桿菌20-40% ;
[0010]凝結(jié)芽孢桿菌10-30% ;
[0011 ] 沼澤紅假單孢菌20-50 % ；
[0012]所述微生物制劑，其制劑水分< 8%、活菌數(shù)至少為50億/g。
[0013]本發(fā)明的第二個(gè)方面提供了用于減少底部泥皮產(chǎn)生的微生物制劑的制備方法，其步驟包括:
[0014]步驟一:
[0015]培養(yǎng)菌種按以下重量百分比稱取:枯草芽孢桿菌20-40 %、凝結(jié)芽孢桿菌10-30%、沼澤紅假單孢菌20-50%，
[0016]a:沼澤紅假單孢菌接種于培養(yǎng)基，在28_35°C、光照強(qiáng)度5000_100001Χ的條件下，培養(yǎng)5-7天，得到光合細(xì)菌種子培養(yǎng)液；
[0017]b:凝結(jié)芽孢桿菌接種于培養(yǎng)基，在37-45°C、攪拌轉(zhuǎn)速為200r/min-240r/min、通氣量1:1的條件下，培養(yǎng)22-36小時(shí)，顯微鏡下觀察90-95%生孢時(shí)結(jié)束，得到凝結(jié)芽孢桿菌種子培養(yǎng)液；
[0018]c:枯草芽孢桿菌接種于培養(yǎng)基，在35-4CTC、攪拌轉(zhuǎn)速為200r/min-240r/min、通氣量1:1的條件下，培養(yǎng)22-36小時(shí),顯微鏡下觀察90-95%生孢時(shí)結(jié)束,得到枯草芽孢桿菌種子培養(yǎng)液。
[0019]步驟二:
[0020]將步驟一中所述種子培養(yǎng)液在無(wú)菌條件下依次接種到培養(yǎng)基中，接種量為該培養(yǎng)基總重量的1% -5%，在35-40°C、攪拌轉(zhuǎn)速為200r/min-240r/min、通氣量為1:1的條件下，發(fā)酵36-42小時(shí)后，將發(fā)酵液在3000-5000r/min的轉(zhuǎn)速下高速離心，得到高濃度的菌液，
[0021]步驟三:
[0022]將步驟二得到的高濃度菌液與基質(zhì)混合，并制粒、干燥。
[0023]優(yōu)選的，所述步驟一的沼澤紅假單孢菌培養(yǎng)基配比:碳酸氫鈉0.2-1.0%、乙酸鈉0.5-1.5%、硫酸銨0.1-0.5%、磷酸氫二鉀0.02-0.1 %、磷酸二氫鈉0.02-0.1%，硫酸鎂0.02-0.1 %、氯化鈣 0.02-0.1 %、酵母膏 0.1-0.5%,pH 值調(diào)至 6.5-6.8。
[0024]優(yōu)選的，所述步驟一的枯草芽孢桿菌的培養(yǎng)基配比；蛋白胨0.2-0.8 %、葡萄糖 1.0-1.8%、氯化鈉 0.01-0.07%、酵母膏 1.8-2.8 %、硫酸鎂 0.01-0.06%, pH 值調(diào)至6.5-6.8。
[0025]優(yōu)選的，所述步驟一的凝結(jié)芽孢桿菌的培養(yǎng)基配比；蛋白胨0.5-1.5 %、酵母膏0.2-0.5 %、葡萄糖0.5-1.5 %、氯化鈉0.2-0.5 %、磷酸氫二鉀0.02-0.1 %、硫酸鎂0.02-0.1%，pH 值調(diào)至 6.5-6.8。
[0026]優(yōu)選的，所述步驟二的培養(yǎng)基配比:豆柏10-15%、麩皮40-50%、尿素1.5-2.8%,酵母粉2-3 %、玉米粉8-13 %、糖蜜10-15 %、硫酸鎂0.8-1.2 %、加水配成100 %。
[0027]優(yōu)選的，所述步驟三中的載體由沸石粉、輕質(zhì)碳酸鈣和硅藻土三種基質(zhì)組成，重量百分比為沸石粉75%、輕質(zhì)碳酸鈣15%和硅藻土 10%組成。
[0028]本發(fā)明是通過(guò)微生物技術(shù)解決養(yǎng)殖塘底部的生態(tài)環(huán)境。能大幅提升整塘水體的緩沖能力，延緩?fù)獠凯h(huán)境突變(暴雨等)對(duì)養(yǎng)殖塘造成的影響，穩(wěn)定水體PH值，降低養(yǎng)殖動(dòng)物的應(yīng)激反應(yīng)；不斷處理底層水中的氨、氮、亞硝酸鹽、穩(wěn)定各項(xiàng)水質(zhì)指標(biāo)，避免養(yǎng)殖動(dòng)物的水底中毒，提高養(yǎng)殖安全系數(shù)。周而復(fù)始，構(gòu)成了一個(gè)良性生態(tài)循環(huán)，使池底的菌相和藻相達(dá)到平衡，營(yíng)造良好的水質(zhì)環(huán)境。
[0029]使用時(shí)，將本發(fā)明提供的多孔徑復(fù)合載體撒入養(yǎng)殖塘底部，載體物理吸附各種有害物質(zhì)，被載體包埋的有益菌利用分解，使得各菌種充分發(fā)揮作用，解決改良養(yǎng)殖塘底部生態(tài)環(huán)境的問(wèn)題。
[0030]本發(fā)明所選用的菌種功能如下:
[0031]⑴枯草芽孢桿菌:產(chǎn)生大量中性蛋白酶和枯草菌素,并有一定的反硝化作用。
[0032]⑵凝結(jié)芽孢桿菌:消耗水體中多余的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，產(chǎn)生大量抗菌凝固素、乳酸、氨基酸、維生素和多種酶。
[0033]⑶沼澤紅假單孢菌:利用光能，吸收CO2,氨態(tài)氮，硫化氫或有機(jī)物而大量繁殖，可部分替代飼料，調(diào)節(jié)水體PH值，增加水中氧氣含量。
[0034]本發(fā)明的有益效果:
[0035]⑴載體尤其是硅藻土是生物細(xì)胞的外殼，可以作為有益菌定植繁殖的基質(zhì)；
[0036]⑵載體物理吸附大量底泥表層泥皮中的有害物質(zhì)，例如排泄物、氨、氮、硫化氫等，被載體中的有益菌利用分解；
[0037]⑶有益菌大量繁殖，釋放到載體附近的水體里，使已經(jīng)板結(jié)的底部泥皮趨于松軟，便于底部泥皮中有害物質(zhì)的緩慢釋放。
[0038]三者形成一個(gè)生物降解泥皮的良性循環(huán)，從而起到減少養(yǎng)殖塘底部泥皮產(chǎn)生的效果O

【具體實(shí)施方式】
[0039]實(shí)施例一
[0040]第一步:生產(chǎn)制種
[0041]將從中國(guó)農(nóng)業(yè)微生物菌種保藏管理中心購(gòu)買(mǎi)的枯草芽孢桿菌，凝結(jié)芽孢桿菌分別接種在肉湯培養(yǎng)基中，在37°C培養(yǎng)48小時(shí)，待培養(yǎng)基表面菌苔布滿即可取出，然后放入4°C冰箱保存待用；將沼澤紅假單胞菌接種在相應(yīng)的培養(yǎng)基中，光照培養(yǎng)5天待顏色變深紅后，放入4°C冰箱保存待用；
[0042]第二步:菌株單獨(dú)及復(fù)合培養(yǎng)
[0043]將步驟I培養(yǎng)的菌種按以下重量百分比稱取:枯草芽孢桿菌30%、沼澤紅假單孢菌40 %、凝結(jié)芽孢桿菌30 %。
[0044]a:28°C下，將沼澤紅假單胞菌在無(wú)菌條件下接種于120°C，30min高溫滅菌的培養(yǎng)基中培養(yǎng)5天，光照強(qiáng)度為50001χ，得到光合細(xì)菌種子培養(yǎng)液，
[0045]培養(yǎng)基配比為碳酸氫鈉0.2%、乙酸鈉0.5%、硫酸銨0.1 %、磷酸氫二鉀0.05%、磷酸二氫鈉0.1 %、硫酸鎂0.02 %、氯化鈣0.02 %、酵母膏0.05%，pH值調(diào)至6.5。
[0046]b:凝結(jié)芽孢桿菌在接種于120°C，30min高溫滅菌的培養(yǎng)基中，在攪拌轉(zhuǎn)速為200r/min、培養(yǎng)溫度為38°C、通氣量為1:1的條件下，發(fā)酵36小時(shí)，顯微鏡下觀察90%生孢時(shí)結(jié)束；
[0047]培養(yǎng)基配比為蛋白胨0.5%、酵母膏0.2%、葡萄糖1.0%、氯化鈉0.5%、磷酸氫二鉀 0.05%、硫酸鎂 0.02%, pH 值調(diào)至 6.5-6.8。
[0048]c:將枯草芽孢桿菌培養(yǎng):將茄子瓶中的枯草芽孢桿菌、接種于12rC、30min高溫滅菌的培養(yǎng)基中，在攪拌轉(zhuǎn)速為200r/min、培養(yǎng)溫度為35°C、通氣量為1:1的條件下，發(fā)酵32小時(shí)，顯微鏡下觀察90%生孢時(shí)結(jié)束；
[0049]培養(yǎng)基配比為蛋白胨0.2%、葡萄糖1.0 %、氯化鈉0.01 %、酵母膏1.8%、硫酸鎂0.01%, pH 值調(diào)至 6.5-6.8。
[0050]第三步::菌群馴化和擴(kuò)大培養(yǎng)
[0051]將上述菌液在無(wú)菌條件下按比例依次接種到培養(yǎng)基中，接種量為該培養(yǎng)基總量的1%，在35°C、攪拌轉(zhuǎn)速為200r/min、通氣量為1:1的條件下，發(fā)酵36小時(shí)后，將發(fā)酵液在3000r/min的轉(zhuǎn)速下高速離心，得到高濃度的菌液上述培養(yǎng)基配比為豆柏10%、麩皮40%、尿素1.5%、酵母粉2%、玉米粉8%、糖蜜10%、硫酸鎂0.8%、加水配成100%。
[0052]第四步:粉碎添加特殊載體
[0053]將得到的菌液高速離心后移入沸石粉+輕質(zhì)碳酸鈣+硅藻土的基質(zhì)中混合，混合后的流體在搖擺機(jī)上制粒，再進(jìn)行沸騰干燥，干燥后的水的重量百分比為13% ；
[0054]第五步:將第四步得到的物料在溫度不高于45°C的條件下，轉(zhuǎn)入粉碎間進(jìn)行粉碎，再過(guò)50目篩網(wǎng)，篩后粗料重新粉碎，得到水份< 8%、活菌數(shù)至少為50億/g的用于養(yǎng)殖底部改良的微生物制劑。
[0055]基質(zhì)組成為沸石粉+輕質(zhì)碳酸鈣+硅藻土基質(zhì)，由以重量百分比計(jì):沸石粉75%、輕質(zhì)碳酸1丐15%和娃藻土 10%。
[0056]實(shí)施例二
[0057]減少養(yǎng)殖塘底的泥皮的實(shí)驗(yàn)的主要考核指標(biāo)是:泥皮提及的變化，泥皮混合物的主要水質(zhì)指標(biāo)(氨氮，亞硝酸鹽氮，硫化氫和有機(jī)氮)的變化。
[0058]具體處理過(guò)程如下:取養(yǎng)殖塘底的泥皮Ikg各一份，分別加入8份的水將其配成混合物溶液，其中一組加入微生物制劑，另一組作為對(duì)照，處理時(shí)間為7天。
[0059]7天后，兩組泥皮混合液均出現(xiàn)明顯的泥皮沉淀，形成明顯的固液分界，加入微生物制劑的一組的泥皮體積明顯少于對(duì)照組，烘干稱重對(duì)比的減少率達(dá)到66%。而且加入微生物制劑的一組的上清液明顯變清，而對(duì)照組的上清液仍然渾濁。主要污染指標(biāo):氨氮含量下降了 45%，亞硝酸鹽氮含量下降了 57%，硫化氫含量下降了 33%，有機(jī)氮的含量下降了41%。
[0060]以上對(duì)本發(fā)明的具體實(shí)施例進(jìn)行了詳細(xì)描述，但其只是作為范例，本發(fā)明并不限制于以上描述的具體實(shí)施例。對(duì)于本領(lǐng)域技術(shù)人員而言，任何對(duì)本發(fā)明進(jìn)行的等同修改和替代也都在本發(fā)明的范疇之中。因此，在不脫離本發(fā)明的精神和范圍下所作的均等變換和修改，都應(yīng)涵蓋在本發(fā)明的范圍內(nèi)。
【權(quán)利要求】
1.一種減少底部泥皮產(chǎn)生的微生物制劑，其特征在于，所述微生物制劑中的微生物包括以下重量百分比的菌種組分: 枯草芽孢桿菌20-40% ； 凝結(jié)芽孢桿菌10-30% ； 沼澤紅假單孢菌20-50%。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的用于減少底部泥皮產(chǎn)生的微生物制劑，其特征在于，所得制劑水分< 13%、活菌數(shù)至少為50億/g。
3.—種如權(quán)利要求1所述的減少底部泥皮產(chǎn)生的微生物制劑的制備方法，其特征在于，步驟包括: 步驟一: 培養(yǎng)菌種按以下重量百分比稱取:枯草芽孢桿菌20-40%、凝結(jié)芽孢桿菌10-30%、沼澤紅假單孢菌20-50%， a:沼澤紅假單孢菌接種于培養(yǎng)基，在28-35°C、光照強(qiáng)度5000-100001χ的條件下，培養(yǎng)5-7天，得到沼澤紅假單胞菌種子培養(yǎng)液； b:凝結(jié)芽孢桿菌接種于培養(yǎng)基，在37-45°C、攪拌轉(zhuǎn)速為200r/min-240r/min、通氣量I:1的條件下，培養(yǎng)22-36小時(shí)，顯微鏡下觀察90-95%生孢時(shí)結(jié)束，得到凝結(jié)芽孢桿菌種子培養(yǎng)液； c:枯草芽孢桿菌接種于培養(yǎng)基，在35-40°C、攪拌轉(zhuǎn)速為200r/min-240r/min、通氣量I:1的條件下，培養(yǎng)22-26小時(shí)，顯微鏡下觀察90-95%生孢時(shí)結(jié)束，得到枯草芽孢桿菌種子培養(yǎng)液， 步驟二: 將步驟一中所述種子培養(yǎng)液在無(wú)菌條件下依次接種到培養(yǎng)基中，接種量為該培養(yǎng)基總重量的1% _5%，在35-40°C、攪拌轉(zhuǎn)速為200r/min-240r/min、通氣量為1:1的條件下，發(fā)酵36-42小時(shí)后，將發(fā)酵液在3000-5000r/min的轉(zhuǎn)速下高速離心，得到高濃度的菌液， 步驟三: 將步驟二得到的高濃度菌液與基質(zhì)混合，并制粒、干燥。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的用于減少底部泥皮產(chǎn)生的微生物制劑的制備方法，其特征在于，所述步驟一中沼澤紅假單胞菌的培養(yǎng)基配比為碳酸氫鈉0.2-1.0 %、乙酸鈉0.5-1.5%、硫酸銨0.1-0.5%、磷酸氫二鉀0.02-0.1 %、磷酸二氫鈉0.02-0.1%，硫酸鎂0.02-0.1 %、氯化鈣 0.02-0.1 %、酵母膏 0.1-0.5%,pH 值調(diào)至 6.5-6.8。
5.根據(jù)權(quán)利要求3所述的用于減少底部泥皮產(chǎn)生的微生物制劑的制備方法，其特征在于，所述步驟一中凝結(jié)芽孢桿菌培養(yǎng)基配比為蛋白胨0.5-1.0%、酵母膏0.2-0.8%、葡萄糖0.2-0.8 %、乙酸鈉0.2-0.8 %、磷酸氫二鉀0.02-0.1 %、七水硫酸鎂0.02-0.1 %，將pH值調(diào)至6.5-6.8。
6.根據(jù)權(quán)利要求3所述的一種用于減少底部泥皮產(chǎn)生的微生物制劑的制備方法，其特征在于，所述步驟一中枯草芽孢桿菌培養(yǎng)基含有蛋白胨0.2-0.8%、葡萄糖1.0-1.8%、氯化鈉 0.01-0.07%、酵母膏 1.8-2.8%、硫酸鎂 0.01-0.06%，將 pH 值調(diào)至 6.5-6.8。
7.根據(jù)權(quán)利要求3所述的用于減少底部泥皮產(chǎn)生的微生物制劑的制備方法，所述步驟二中培養(yǎng)基配比為:豆柏10-15%、麩皮40-50%、尿素1.5-2.8%、酵母粉2-3%、玉米粉8-13%、糖蜜10-15%、硫酸鎂0.8-1.2%，加無(wú)菌水配成100%。
8.根據(jù)權(quán)利要求3所述的用于減少底部泥皮產(chǎn)生的微生物制劑的制備方法，所述步驟三中基質(zhì)含有沸石粉、輕質(zhì)碳酸鈣和硅藻土。
9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的基質(zhì)，其特征在于，所述基質(zhì)按照重量百分比由沸石粉75%、輕質(zhì)碳酸鈣15%和硅藻土 10%組成。
【文檔編號(hào)】C12R1/07GK104293798SQ201410483045
【公開(kāi)日】2015年1月21日 申請(qǐng)日期:2014年9月19日 優(yōu)先權(quán)日:2014年9月19日
【發(fā)明者】江旸, 陸瑛 申請(qǐng)人:上海亙卓生物工程有限公司