一種牛樟菌的培養(yǎng)基及培養(yǎng)方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及一種牛樟菌的培養(yǎng)基。所述的培養(yǎng)基包含以下重量份的組分：牛樟木萃取的營養(yǎng)液5%-10%，葡萄糖0.1-30%，蛋白胨1-5%，酵母粉2-5%，無機鹽12-25%，玉米漿2.5-5.8%，大米粉 18-32%，水余量。采用所述的培養(yǎng)基進行牛樟菌培養(yǎng)的方法，包括以下步驟：先用接種針挑取少量在試管斜面培養(yǎng)基上保藏的菌絲體接種到PDA平板培養(yǎng)基上，進行菌株活化，在將活化的菌株接種于培養(yǎng)基中，在光照下培養(yǎng)，得樟芝菌菌絲體原基。采用本發(fā)明進行牛樟菌培養(yǎng)，培養(yǎng)得到的樟菌菌絲體可產(chǎn)生種類最多的物質(zhì)，且產(chǎn)生的物質(zhì)明顯優(yōu)于黑暗條件下培養(yǎng)的菌絲體，且培養(yǎng)成本低，利于大規(guī)?；I(yè)生產(chǎn)。
【專利說明】一種牛樟菌的培養(yǎng)基及培養(yǎng)方法

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于生物檢測領(lǐng)域，具體涉及一種牛樟菌的培養(yǎng)基及培養(yǎng)方法。

【背景技術(shù)】
[0002]牛樟芝(Taiwanofungus camphorates)屬樟科樟屬植物，為一種木材腐朽真菌，又名黑樟，牛樟菇或樟芝，味道較苦，原產(chǎn)于我國臺灣。牛樟木樹干通直，樹體高聳，具有良好的觀賞價值，其具有特殊的香味，也不易腐朽，且紋理交錯、材質(zhì)細致，為高價值家具最佳素材。
[0003]從牛樟芝的菌絲體或子實體抽出物中，發(fā)現(xiàn)了多糖體、腺苷及三萜類化合物等多種生理活性物質(zhì)，具有安神、行氣活血、消積解毒、消腫等功效，可謂一種上等的食或藥用類真菌。臺灣研究人員進行了多項樟芝毒理試驗，結(jié)果顯示，LDS(下標(biāo)50)為2000mg/kg，顯示為無毒性物質(zhì)，且原子光譜分析顯示，其中不含有汞、砷及鉻等重金屬。臺北榮民總醫(yī)院研究顯示，樟芝菌粉無毒副作用，樟芝無致突變及致畸作用。目前由于牛樟天然林過度開發(fā)及人為盜伐，使得牛樟芝僅分布在高海撥地區(qū)，且多為高齡老樹，結(jié)實量少，母樹甚為分散，給授粉帶來較大困難，給種子的采集也帶來較大困難，而且因樹體高大不易攀爬，即使能采摘種子，發(fā)芽或發(fā)芽率較低，導(dǎo)致牛樟芝資源嚴重短缺，價格昂貴，因此，極有必要進行牛樟芝的人工栽培。
[0004]野生與人工培育的牛樟芝功效神奇，目前已實現(xiàn)牛樟芝人工培養(yǎng)規(guī)?；，F(xiàn)有技術(shù)的牛樟芝培養(yǎng)方法包括固態(tài)培養(yǎng)法、液態(tài)發(fā)酵法及椴木栽培法，然而，上述培養(yǎng)方法各有缺點。固態(tài)培養(yǎng)法可獲得牛樟芝的菌絲體或子實體，且不易產(chǎn)生雜菌，但三萜類化合物含量卻極低。現(xiàn)有技術(shù)的液態(tài)發(fā)酵法可提高牛樟芝內(nèi)所含有的生理活性物質(zhì)，而制備成本高，且易發(fā)生雜菌污染。為此，本發(fā)明提供一種改進的牛樟芝的培養(yǎng)方法，以克服現(xiàn)有技術(shù)的缺陷。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0005]針對上述現(xiàn)有技術(shù)的不足，本發(fā)明提供一種能獲得樟芝菌絲體原基的培養(yǎng)基及培養(yǎng)方法。
[0006]本發(fā)明的技術(shù)方案如下:
一種牛樟菌的培養(yǎng)基，其特征在于，所述的培養(yǎng)基包含以下重量份的組分:
牛樟木萃取的營養(yǎng)液 5%-10%，
甸萄糖0.1-30%，
蛋白胨1_5%，
酵母粉2-5%，
無機鹽12-25%，
玉米漿1.5-5.8%,
大米粉18-32%，水余量。
[0007]優(yōu)選的，所述的無機鹽選自檸檬酸銨、磷酸二氫鈉或磷酸一氫鈉中的一種或多種。
[0008]優(yōu)選的，所述的玉米淀粉:水的體積比為(3-4): (5-7)。
[0009]優(yōu)選的，所述的培養(yǎng)基為在121°C、0.10-0.15Kpa下滅菌15_30min的培養(yǎng)基。
[0010]優(yōu)選的，所述的水為二次蒸餾水。
[0011]采用如上所述的培養(yǎng)基進行牛樟菌培養(yǎng)的方法，包括以下步驟:
(O菌株活化:用接種針挑取少量在試管斜面培養(yǎng)基上保藏的菌絲體接種到PDA平板培養(yǎng)基上，培養(yǎng)得活化的樟菌菌株；
(2)取l-2cm2步驟(I)中培養(yǎng)得到的活化樟菌菌落接種于培養(yǎng)基中，在光照下培養(yǎng)，得樟芝菌菌絲體原基。
[0012]優(yōu)選的，步驟(I)中所述的培養(yǎng)溫度為25_28°C，所述的培養(yǎng)時間為20_25d。
[0013]優(yōu)選的，步驟(2)中所述的培養(yǎng)溫度為26_30°C，培養(yǎng)時間為55_56d。
[0014]本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)相比，有益效果體現(xiàn)在以下幾點:
1.HPLC結(jié)果顯示，培養(yǎng)55d或以上，培養(yǎng)55天或以上菌絲體產(chǎn)生的物質(zhì)種類最多。在菌絲體生長初期，菌絲體只合成本身生長所需要的初級代謝產(chǎn)物，在后期才合成具有生物活性的次級代謝產(chǎn)物,但是在培養(yǎng)60天時，菌絲體的物質(zhì)種類少于培養(yǎng)55天的樟芝菌絲體，說明在培養(yǎng)60天后，菌絲體的物質(zhì)可能被菌絲體利用。因此，本發(fā)明中將樟菌的培養(yǎng)時間限定為55-56d,
2.研究顯示，HPLC結(jié)果顯示，樟菌絲體在有光的條件下產(chǎn)生的物質(zhì)明顯優(yōu)于黑暗條件下培養(yǎng)的菌絲體。因此，本發(fā)明對樟菌在光照下培養(yǎng)。
[0015]3.本發(fā)明選擇來源廣泛、價格低廉的大米粉及玉米粉作為樟芝菌培養(yǎng)的發(fā)酵基質(zhì)，將二者以一定比例組合，更加利于樟芝菌的生長。

【具體實施方式】
[0016]下面結(jié)合實施例對本發(fā)明做進一步說明。
[0017]實施例1
一種牛樟菌的培養(yǎng)基，所述的培養(yǎng)基包含以下重量份的組分:
牛樟木萃取的營養(yǎng)液 5%,
葡萄糖0.1%，
蛋白胨1%，
酵母粉2%，
朽1檬酸銨12%,
玉米漿2.5%，
大米粉18%，
水余量。
[0018]所述的培養(yǎng)基為在121°C、0.1OKpa下滅菌15min的培養(yǎng)基。
[0019]所述的水為二次蒸餾水。
[0020]采用如上所述的培養(yǎng)基進行牛樟菌培養(yǎng)的方法，包括以下步驟:
(O菌株活化:用接種針挑取少量在試管斜面培養(yǎng)基上保藏的樟芝菌絲體接種到PDA平板培養(yǎng)基上，培養(yǎng)溫度為25°C,培養(yǎng)時間為20d,培養(yǎng)得活化的樟菌菌株；
(2)取lcm2步驟(I)中培養(yǎng)得到的活化樟菌菌落接種于培養(yǎng)基中，在光照下培養(yǎng)，培養(yǎng)溫度為26°C，培養(yǎng)時間為55d，得樟芝菌菌絲體原基。
[0021]實施例1
一種牛樟菌的培養(yǎng)基，所述的培養(yǎng)基包含以下重量份的組分:
牛樟木萃取的營養(yǎng)液 10%,
葡萄糖30%，
蛋白胨5%，
酵母粉5%，
磷酸二氫鈉25%，
玉米漿5.8%，
大米粉32%，
水余量。
[0022]所述的培養(yǎng)基為在121°C、0.15Kpa下滅菌30min的培養(yǎng)基。
[0023]所述的水為二次蒸餾水。
[0024]采用如上所述的培養(yǎng)基進行牛樟菌培養(yǎng)的方法，包括以下步驟:
(O菌株活化:用接種針挑取少量在試管斜面培養(yǎng)基上保藏的樟芝菌絲體接種到PDA平板培養(yǎng)基上，培養(yǎng)溫度為28°C,培養(yǎng)時間為25d培養(yǎng)得活化的樟菌菌株；
(2)取l-2cm2步驟(I)中培養(yǎng)得到的活化樟菌菌落接種于培養(yǎng)基中，在光照下培養(yǎng)，培養(yǎng)溫度為30°C，培養(yǎng)時間為56d，得樟芝菌菌絲體原基。
[0025]實施例1
一種牛樟菌的培養(yǎng)基，所述的培養(yǎng)基包含以下重量份的組分:
牛樟木萃取的營養(yǎng)液 8%,
葡萄糖10%，
蛋白胨3%，
酵母粉3%，
磷酸一氫鈉18%，
玉米漿3.5%，
大米粉28%，
水。
[0026]所述的玉米淀粉:水的體積比為3:5。
[0027]所述的培養(yǎng)基為在121°C、0.12Kpa下滅菌20min的培養(yǎng)基。
[0028]所述的水為二次蒸餾水。
[0029]采用如上所述的培養(yǎng)基進行牛樟菌培養(yǎng)的方法，包括以下步驟:
(O菌株活化:用接種針挑取少量在試管斜面培養(yǎng)基上保藏的樟芝菌絲體接種到PDA平板培養(yǎng)基上，培養(yǎng)溫度為26°C,培養(yǎng)時間為23d培養(yǎng)得活化的樟菌菌株；
(2)取l-2cm2步驟(I)中培養(yǎng)得到的活化樟菌菌落接種于培養(yǎng)基中，在光照下培養(yǎng)，培養(yǎng)溫度為28°C，培養(yǎng)時間為55d，得樟芝菌菌絲體原基。
[0030]上述實施例僅為本發(fā)明的優(yōu)選實施方式，并不應(yīng)理解為對本發(fā)明的限定，本領(lǐng)域技術(shù)人員根據(jù)本發(fā)明的揭示，不脫離本發(fā)明范疇所做出的改進和修改都應(yīng)該在本發(fā)明的保護范圍之內(nèi)。
【權(quán)利要求】
1.一種牛樟菌的培養(yǎng)基，其特征在于，所述的培養(yǎng)基包含以下重量份的組分: 牛樟木萃取的營養(yǎng)液 5%-10%， 甸萄糖0.1-30%， 蛋白胨1_5%， 酵母粉2-5%， 無機鹽12-25%， 玉米漿1.5-5.8%, 大米粉18-32%，水余量。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種牛樟菌的培養(yǎng)基，其特征在于，所述的無機鹽選自檸檬酸銨、磷酸二氫鈉或磷酸一氫鈉中的一種或多種。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種牛樟菌的培養(yǎng)基，其特征在于，所述的玉米淀粉:水的體積比為(3-4): (5-7)。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種牛樟菌的培養(yǎng)基，其特征在于，所述的培養(yǎng)基為在121°C、0.10-0.15Kpa 下滅菌 15_30min 的培養(yǎng)基。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種牛樟菌的培養(yǎng)基，其特征在于，所述的水為二次蒸餾水。
6.采用如權(quán)利要求1-6任一所述的培養(yǎng)基進行牛樟菌培養(yǎng)的方法，其特征在于，包括以下步驟: (O菌株活化:用接種針挑取少量在試管斜面培養(yǎng)基上保藏的菌絲體接種到PDA平板培養(yǎng)基上，培養(yǎng)得活化的樟菌菌株； (2)取l-2cm2步驟(I)中培養(yǎng)得到的活化樟菌菌落接種于培養(yǎng)基中，在光照下培養(yǎng)，得樟芝菌菌絲體原基。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種牛樟菌的培養(yǎng)基，其特征在于，步驟(I)中所述的培養(yǎng)溫度為25-28°C，所述的培養(yǎng)時間為20-25d。
8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種牛樟菌的培養(yǎng)基，其特征在于，步驟(2)中所述的培養(yǎng)溫度為26-30°C，培養(yǎng)時間為55-56d。
【文檔編號】C12R1/645GK104371931SQ201410555707
【公開日】2015年2月25日 申請日期:2014年10月20日 優(yōu)先權(quán)日:2014年10月20日
【發(fā)明者】劉巴寧, 鄭安喬 申請人:中山安蕎生物科技有限公司