雞抗病新品系的培育方法及與雞抗病能力相關(guān)的snp標(biāo)記的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明提供了一種雞抗病新品系的培育方法及與雞抗病能力相關(guān)的SNP標(biāo)記。所述SNP標(biāo)記多態(tài)性與異嗜性粒細胞/淋巴細胞的比值顯著相關(guān)，可應(yīng)用于雞抗病新品系育種，通過異嗜性粒細胞/淋巴細胞的比值表型選擇與SNP標(biāo)記基因型輔助選擇相結(jié)合，建立雞抗病新品系選育技術(shù)。
【專利說明】雞抗病新品系的培育方法及與雞抗病能力相關(guān)的SNP標(biāo)記

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及SNP分子標(biāo)記及家禽育種，具體地說，涉及雞抗病新品系的培育方法 及與雞抗病能力相關(guān)的SNP標(biāo)記。

【背景技術(shù)】
[0002] 禽病每年給家禽養(yǎng)殖業(yè)造成的經(jīng)濟損失十分巨大。采用遺傳改良方法從本質(zhì)上提 高雞對病原的抗性，進行抗病育種，是禽病防治的有效途徑之一。
[0003] 與雞抗病性有關(guān)的生化指標(biāo)較多，包括抗體含量、血清介質(zhì)水平、淋巴細胞轉(zhuǎn)化率 等。有些指標(biāo)與特定病原有關(guān)，代表性較差，有些指標(biāo)受環(huán)境、品種和營養(yǎng)等因素影響，變異 范圍大，很難應(yīng)用于抗病雞的新品系選育中。因此，抗病家禽新品系選育始終是育種中的一 個難題。
[0004] 異嗜性粒細胞在細胞免疫中起到抵抗外間微生物入侵第一道屏障的作用。淋巴細 胞和異嗜性粒細胞在雞體液免疫、細胞免疫反應(yīng)中均起到重要作用。異嗜性粒細胞/淋巴 細胞的比值（heterophil/lymphocyte，H/L)已知與家禽抗應(yīng)激程度相關(guān)（Gross和Siegel, 1986)。H/L值越低指示雞抗應(yīng)激能力較強。但目前尚未見到在DNA分子水平上與異嗜性粒 細胞/淋巴細胞比率相關(guān)的報道。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 為了解決現(xiàn)有技術(shù)中存在的問題，本發(fā)明的目的是提供一種與雞抗病能力相關(guān)的 SNP標(biāo)記及其應(yīng)用。
[0006] 為了實現(xiàn)本發(fā)明目的，本發(fā)明首先提供一種與雞抗病能力相關(guān)的SNP標(biāo)記，其核 苷酸序列如序列表SEQ ID No. 1所示，在第1832位有1個A1832-G1832堿基突變，所述SNP 標(biāo)記的多態(tài)性與異嗜性粒細胞/淋巴細胞的比值顯著相關(guān)，并與雞抗病能力相關(guān)。
[0007] 本發(fā)明還提供了用于檢測所述SNP標(biāo)記的引物對，所述引物對含有正向引物F : 5' -TGAACTTCCTGAAATGGGT-3' 和反向引物 R:5' -GGTGTGTGGCATATCATTG-3'。
[0008] 本發(fā)明還提供了所述SNP標(biāo)記在選擇抗病能力強的雞品系（種）中的應(yīng)用。
[0009] 進一步地，所述應(yīng)用包括以下步驟：
[0010] ⑴提取待測雞的基因組DNA ;
[0011] ⑵以待測雞的基因組DNA為模版，利用引物F和R，通過PCR反應(yīng)擴增出雞Toll 樣受體4基因（TLR4) 73bp片段（如SEQ ID No. 2所示），其中，
[0012] F: 5 ' -TGAACTTCCTGAAATGGGT-3 ' ；
[0013] R: 5，-GGTGTGTGGCATATCATTG-3，；
[0014] (3)檢測PCR擴增產(chǎn)物，如果擴增產(chǎn)物序列中43bp處的堿基為A，則待測雞屬于抗 病能力強的個體。
[0015] 其中，PCR反應(yīng)體系以50 μ 1計為：
[0016]
[0017] PCR 反應(yīng)條件為：94 °C IOmin,

【權(quán)利要求】
1. 一種與雞抗病能力相關(guān)的SNP標(biāo)記，其特征在于，其核苷酸序列如SEQ ID No. 1所 示，在第1832位有1個A1832-G1832堿基突變，所述SNP標(biāo)記的多態(tài)性與雞抗病能力相關(guān)。
2. 用于檢測權(quán)利要求1所述的SNP標(biāo)記的引物對，其特征在于，所述引物對含有正向引 物 F :5' -TGAACTTCCTGAAATGGGT-3' 和反向引物 R :5' -GGTGTGTGGCATATCAITG-3'。
3. 權(quán)利要求1所述的SNP標(biāo)記在鑒定抗病力強的雞品系中的應(yīng)用。
4. 根據(jù)權(quán)利要求3所述的應(yīng)用，其特征在于，包括以下步驟： (1)提取待測雞的基因組DNA ; ⑵以待測雞的基因組DNA為模版，利用引物F和R，通過PCR反應(yīng)擴增出雞Toll樣受 體4基因73bp片段，其中， F:5, -TGAACTTCCTGAAATGGGT-3,； R:5' -GGTGTGTGGCATATCATTG-3' ； (3)檢測PCR擴增產(chǎn)物，如果擴增產(chǎn)物序列中43bp處的堿基為A，則待測雞屬于異嗜性 粒細胞/淋巴細胞的比值低，抗病力強的個體。
5. 權(quán)利要求1所述的SNP標(biāo)記在雞抗病新品系育種中的應(yīng)用。
6. 根據(jù)權(quán)利要求5所述的應(yīng)用，其特征在于，包括以下步驟： (一） 采用聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)和測序技術(shù)篩選到與雞抗病能力相關(guān)的SNP標(biāo)記； (二） 檢測待測雞的SNP標(biāo)記基因型； (三） 根據(jù)基因型進行抗病能力優(yōu)勢品系的選育。
7. -種雞抗病新品系的培育方法，其特征在于，通過候選個體血液中異嗜性粒細胞/ 淋巴細胞的比值與權(quán)利要求1所述SNP標(biāo)記共同對抗病能力優(yōu)勢個體進行選育。
8. 根據(jù)權(quán)利要求7所述的方法，其特征在于，包括以下步驟： (a) 對候選個體采血，測定血液中異嗜性粒細胞/淋巴細胞的比值，同時采血提取基因 組DNA，測定SNP標(biāo)記1832bp位點的堿基狀態(tài)； (b) 留種時，首先利用異嗜性粒細胞/淋巴細胞的比值進行優(yōu)勢雙親個體的選擇，其次 查看SNP A1832G的多態(tài)性，避免選擇GG型個體； (c) 按照每個世代不低于30只公雞，公母比例不低于1:3的留種數(shù)量組建新的家系和 繁種。
9. 根據(jù)權(quán)利要求8所述的方法，其特征在于，所述候選個體數(shù)量不小于500只，所述優(yōu) 勢個體的選擇為由低到高選擇異嗜性粒細胞/淋巴細胞的比值較低的個體。
10. 根據(jù)權(quán)利要求9所述的方法，其特征在于，包括以下步驟： (a) 對55-60日齡的候選個體翅下靜脈采血，制作血液涂片，測定異嗜性粒細胞/淋巴 細胞的比值；同時取靜脈血，制成抗凝血，提取基因組DNA，測定SNP標(biāo)記1832bp位點的堿 基狀態(tài)； (b) 留種時，首先利用異嗜性粒細胞/淋巴細胞的比值進行優(yōu)勢雙親個體的選擇；其次 查看SNP A1832G的多態(tài)性，避免選擇GG型個體； (c) 按照每個世代不低于30只公雞，公母比例1:3的留種數(shù)量組建新的家系和繁種。
【文檔編號】C12N15/11GK104404037SQ201410654722
【公開日】2015年3月11日 申請日期:2014年11月17日 優(yōu)先權(quán)日:2014年11月17日
【發(fā)明者】趙桂蘋, 文杰, 劉冉冉, 鄭麥青, 李鵬, 李慶賀 申請人:中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院北京畜牧獸醫(yī)研究所