體外受精培養(yǎng)篩及體外受精方法
【專利摘要】本發(fā)明公開(kāi)了一種體外受精培養(yǎng)篩，包括篩體，篩體邊緣設(shè)有上側(cè)邊框和下側(cè)邊框，篩體上設(shè)有一能使吸管通過(guò)的小孔及孔道，孔道位于篩體上側(cè)，篩體上遍布孔徑小于卵子直徑且能使正常精子自由通過(guò)的微孔。采用本發(fā)明的體外受精培養(yǎng)篩進(jìn)行體外受精的方法為：(1)將體外受精培養(yǎng)篩放置入體外培養(yǎng)四孔皿的孔中，將培養(yǎng)液添加至體外培養(yǎng)四孔皿中；(2)將通過(guò)取卵術(shù)獲得的卵冠丘復(fù)合體放置在培養(yǎng)篩上；(3)取精液，液化后采用密度梯度離心法分離精子，將精子通過(guò)小孔加入到體外培養(yǎng)四孔皿的底部，進(jìn)行體外受精。本發(fā)明的體外受精培養(yǎng)篩，可達(dá)到優(yōu)選精子受精的目的，且能減少凋亡細(xì)胞對(duì)受精卵的不良影響，有利于受精卵和胚胎的發(fā)育。
【專利說(shuō)明】體外受精培養(yǎng)篩及體外受精方法

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及一種體外受精培養(yǎng)篩，是一種生殖醫(yī)學(xué)試驗(yàn)中使用的設(shè)備及方法。

【背景技術(shù)】
[0002]體外受精(In vitro Fertilizat1n, IVF)技術(shù)是應(yīng)用特殊方法獲取精子和成熟卵子，在體外完成受精過(guò)程的技術(shù)。受精卵在體外分裂成為胚胎后再將胚胎植入女方子宮內(nèi)，使胚胎成長(zhǎng)為胎兒。這種體外受精一胚胎移植技術(shù)的誕生打破了傳統(tǒng)的女性輸卵管阻塞生育無(wú)望的定論，使無(wú)數(shù)家庭享受到生兒育女的快樂(lè)。
[0003]獲取精子后精子需要經(jīng)體外處理以篩選優(yōu)質(zhì)精子，經(jīng)典的做法是應(yīng)用密度梯度離心法分離精子，有的實(shí)驗(yàn)室還要經(jīng)過(guò)一次上游過(guò)程，以獲得優(yōu)質(zhì)精子，處理后前向運(yùn)動(dòng)精子能達(dá)到90?95%，但仍有部分質(zhì)量差的精子混于其中，因此，有些實(shí)驗(yàn)室會(huì)采用二次上游的方法繼續(xù)篩選，但如此做費(fèi)事費(fèi)力，還會(huì)因增加離心次數(shù)進(jìn)而造成對(duì)精子的損傷。
[0004]體外受精通常是卵泡成熟后利用取卵術(shù)獲取卵冠丘復(fù)合體放入盛有培養(yǎng)液的培養(yǎng)皿，適時(shí)加入處理后的精子。最常用的培養(yǎng)皿是四孔培養(yǎng)皿。這種培養(yǎng)皿沒(méi)有特殊設(shè)計(jì)，精子和卵冠丘復(fù)合體簡(jiǎn)單的放在一起完成受精過(guò)程。隨著受精過(guò)程的進(jìn)行，卵冠丘復(fù)合體顆粒細(xì)胞不斷有細(xì)胞凋亡進(jìn)而脫離復(fù)合體，隨培養(yǎng)時(shí)間的延長(zhǎng)，也會(huì)有一些精子死去，但由于培養(yǎng)皿過(guò)于簡(jiǎn)單的結(jié)構(gòu)致使凋亡細(xì)胞和死精子積聚在受精卵周圍，這可能會(huì)影響受精卵和胚胎發(fā)育。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0005]針對(duì)上述現(xiàn)有技術(shù)，為解決體外受精過(guò)程中死精子及卵子周圍的顆粒細(xì)胞凋亡后積聚在卵子周圍有可能對(duì)受精卵發(fā)育造成不良影響的問(wèn)題，本發(fā)明提供了一種體外受精培養(yǎng)篩及體外受精方法，利用本發(fā)明的體外受精培養(yǎng)篩進(jìn)行體外受精，可使受精過(guò)程中產(chǎn)生的死精子和凋亡顆粒細(xì)胞遠(yuǎn)離受精卵，從而以利于受精卵發(fā)育。
[0006]本發(fā)明是通過(guò)以下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)的:
[0007]一種體外受精培養(yǎng)篩，包括篩體，篩體邊緣設(shè)有上側(cè)邊框和下側(cè)邊框，篩體上設(shè)有一能使吸管通過(guò)的小孔及孔道，孔道位于篩體上側(cè)，篩體上分布多個(gè)孔徑小于卵子直徑(卵子直徑約100 μ m)且能使正常精子自由通過(guò)的微孔。
[0008]優(yōu)選的,所述小孔設(shè)在篩體邊緣處或靠近邊緣處。
[0009]優(yōu)選的，所述篩體呈圓形，直徑為200mm,厚度0.2mm,上側(cè)邊框高0.5mm,下側(cè)邊框高2mm，小孔直徑2mm，孔道高0.5mm,微孔直徑10 μ m(大約為3?4倍精子頭部寬度)。
[0010]優(yōu)選的，所述體外受精培養(yǎng)篩的材質(zhì)為聚苯乙烯。
[0011]本發(fā)明的體外受精培養(yǎng)篩，使用時(shí)與經(jīng)典的體外培養(yǎng)四孔皿結(jié)合使用(放入體外培養(yǎng)四孔皿的孔內(nèi)，由于下側(cè)邊框的存在，可使篩體距離孔底部一定的距離，約為孔深的1/3)，采用本發(fā)明的體外受精培養(yǎng)篩進(jìn)行體外受精的方法為:(I)將本發(fā)明的體外受精培養(yǎng)篩放置入體外培養(yǎng)四孔皿的孔中，然后通過(guò)小孔將培養(yǎng)液添加至體外培養(yǎng)四孔皿中，培養(yǎng)液液面高出篩體2_ ;在CO2培養(yǎng)箱內(nèi)平衡過(guò)夜；(2)將通過(guò)取卵術(shù)獲得的卵冠丘復(fù)合體(卵子)放置在培養(yǎng)篩上；(3)取精液，液化后采用密度梯度離心法分離精子，分離的精子用培養(yǎng)液洗滌一次后，利用吸管將精子通過(guò)小孔加入到體外培養(yǎng)四孔皿的底部，精子會(huì)通過(guò)微孔上游到培養(yǎng)篩上層，與卵子相遇，進(jìn)行體外受精。在受精過(guò)程中，活動(dòng)力好的精子會(huì)通過(guò)微孔較早上游到篩體上方與卵子結(jié)合，達(dá)到優(yōu)選精子受精的目的；而大部分凋亡的卵冠丘復(fù)合體的顆粒細(xì)胞也會(huì)脫離受精卵進(jìn)而沉入體外培養(yǎng)四孔皿底部，從而減少了凋亡細(xì)胞對(duì)受精卵的不良影響，有利于受精卵和胚胎的發(fā)育。與經(jīng)典體外受精技術(shù)(精子、卵子同時(shí)放入四孔培養(yǎng)皿中)相比，本發(fā)明的體外受精方法將卵子和精子分別放置；卵子放置在篩體上，而精子放在篩體底部，精子需經(jīng)過(guò)上游至篩體上與卵子結(jié)合，通過(guò)上游法篩選高質(zhì)量精子；同時(shí)受精過(guò)程中會(huì)產(chǎn)生凋亡顆粒細(xì)胞和死亡精子，這些細(xì)胞會(huì)通過(guò)微孔沉入四孔培養(yǎng)皿底部，以免凋亡細(xì)胞對(duì)受精卵發(fā)育造成的不良影響。
[0012]本發(fā)明的體外受精培養(yǎng)篩，使用時(shí)與經(jīng)典的體外培養(yǎng)四孔皿結(jié)合使用，靠近培養(yǎng)篩邊緣處有一能使吸管通過(guò)小孔，小孔上設(shè)有孔道以高出培養(yǎng)篩平面，以防卵子落入小孔。篩體上遍布孔徑小于卵子且能使正常精子自由通過(guò)的微孔，體外受精時(shí)，加入培養(yǎng)液后，洗滌過(guò)的精子用吸管通過(guò)小孔加到四孔皿的底部，卵冠丘復(fù)合體(包含卵子)放在培養(yǎng)篩上，活動(dòng)力好的精子會(huì)較早上游到培養(yǎng)篩上與卵子結(jié)合，達(dá)到優(yōu)選精子受精的目的；而大部分凋亡的卵冠丘復(fù)合體的顆粒細(xì)胞也會(huì)脫離受精卵而沉入四孔皿底部，從而減少了凋亡細(xì)胞對(duì)受精卵的不良影響，有利于受精卵和胚胎的發(fā)育。

【專利附圖】

【附圖說(shuō)明】
[0013]圖1:本發(fā)明的體外受精培養(yǎng)篩的結(jié)構(gòu)示意圖。
[0014]圖2:本發(fā)明的體外受精培養(yǎng)篩的俯視圖。
[0015]圖3:圖2中A處結(jié)構(gòu)放大示意圖。
[0016]圖4:常規(guī)的體外培養(yǎng)四孔皿示意簡(jiǎn)圖(俯視圖)。
[0017]圖5:常規(guī)的體外培養(yǎng)四孔皿的照片。
[0018]其中，1、篩體；2、上側(cè)邊框；3、下側(cè)邊框；4、小孔；5、孔道；6、微孔。

【具體實(shí)施方式】
[0019]下面結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步的說(shuō)明。
[0020]一種體外受精培養(yǎng)篩，包括篩體，如圖1、圖2所示，篩體邊緣設(shè)有上側(cè)邊框和下側(cè)邊框，篩體邊緣處設(shè)有一能使吸管通過(guò)的小孔及孔道，孔道位于篩體上側(cè)，篩體上分布多個(gè)孔徑小于卵子直徑(卵子直徑約100 μ m)且能使正常精子自由通過(guò)的微孔，如圖3所示。
[0021]所述篩體呈圓形，直徑為200mm,厚度0.2mm,上側(cè)邊框高0.5mm,下側(cè)邊框高2mm,小孔直徑2mm，孔道高0.5mm,微孔直徑10 μ m(大約為3?4倍精子頭部寬度)。
[0022]所述體外受精培養(yǎng)篩的材質(zhì)為聚苯乙烯。
[0023]本發(fā)明的體外受精培養(yǎng)篩，使用時(shí)與經(jīng)典的體外培養(yǎng)四孔皿(如圖4、圖5所示)結(jié)合使用(放入體外培養(yǎng)四孔皿的孔內(nèi)，由于下側(cè)邊框的存在，可使篩體距離孔底部一定的距離，約為孔深的1/3)，采用本發(fā)明的體外受精培養(yǎng)篩進(jìn)行體外受精的方法為:(I)將本發(fā)明的體外受精培養(yǎng)篩放置入體外培養(yǎng)四孔皿的孔中，然后通過(guò)小孔將培養(yǎng)液添加至體外培養(yǎng)四孔皿中，培養(yǎng)液液面高出篩體2mm ;在CO2培養(yǎng)箱內(nèi)平衡過(guò)夜；(2)將通過(guò)取卵術(shù)獲得的卵冠丘復(fù)合體(卵子)放置在培養(yǎng)篩上；(3)取精液，液化后采用密度梯度離心法分離精子，分離的精子用培養(yǎng)液洗滌一次后，利用吸管將精子通過(guò)小孔加入到體外培養(yǎng)四孔皿的底部，精子會(huì)通過(guò)微孔上游到培養(yǎng)篩上層，與卵子相遇，進(jìn)行體外受精。在受精過(guò)程中，活動(dòng)力好的精子會(huì)通過(guò)微孔較早上游到篩體上方與卵子結(jié)合，達(dá)到優(yōu)選精子受精的目的；而大部分凋亡的卵冠丘復(fù)合體的顆粒細(xì)胞也會(huì)脫離受精卵進(jìn)而沉入體外培養(yǎng)四孔皿底部，從而減少了凋亡細(xì)胞對(duì)受精卵的不良影響，有利于受精卵和胚胎的發(fā)育。與經(jīng)典體外受精技術(shù)(精子、卵子同時(shí)放入四孔培養(yǎng)皿中)相比，本發(fā)明的體外受精方法將卵子和精子分別放置；卵子放置在篩體上，而精子放在篩體底部，精子需經(jīng)過(guò)上游至篩體上與卵子結(jié)合，通過(guò)上游法篩選高質(zhì)量精子；同時(shí)受精過(guò)程中會(huì)產(chǎn)生凋亡顆粒細(xì)胞和死亡精子，這些細(xì)胞會(huì)通過(guò)微孔沉入四孔培養(yǎng)皿底部，以免凋亡細(xì)胞對(duì)受精卵發(fā)育造成的不良影響。
【權(quán)利要求】
1.一種體外受精培養(yǎng)篩，其特征在于:包括篩體，篩體邊緣設(shè)有上側(cè)邊框和下側(cè)邊框，篩體上設(shè)有一能使吸管通過(guò)的小孔及孔道，孔道位于篩體上側(cè)，篩體上分布多個(gè)孔徑小于卵子直徑且能使正常精子自由通過(guò)的微孔。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的體外受精培養(yǎng)篩，其特征在于:所述小孔設(shè)在篩體邊緣處或靠近邊緣處。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的體外受精培養(yǎng)篩，其特征在于:所述篩體呈圓形，直徑為200mm,厚度0.2mm,上側(cè)邊框高0.5mm,下側(cè)邊框高2mm,小孔直徑2mm,孔道高0.5mm,微孔直徑 10 μ m。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的體外受精培養(yǎng)篩，其特征在于:所述體外受精培養(yǎng)篩的材質(zhì)為聚苯乙烯。
5.利用權(quán)利要求1?4中任一項(xiàng)所述的體外受精培養(yǎng)篩進(jìn)行體外受精的方法，其特征在于:包括以下步驟:(I)將體外受精培養(yǎng)篩放置入體外培養(yǎng)四孔皿的孔中，然后通過(guò)小孔將培養(yǎng)液添加至體外培養(yǎng)四孔皿中，培養(yǎng)液液面高出篩體2mm ;在CO2培養(yǎng)箱內(nèi)平衡過(guò)夜；(2)將卵冠丘復(fù)合體放置在篩體上；(3)取精液，液化后采用密度梯度離心法分離精子，分離的精子用培養(yǎng)液洗滌一次后，利用吸管將精子通過(guò)小孔加入到體外培養(yǎng)四孔皿的底部，精子會(huì)通過(guò)微孔上游到培養(yǎng)篩上層，與卵子相遇，進(jìn)行體外受精。
【文檔編號(hào)】C12M1/00GK104450496SQ201410717130
【公開(kāi)日】2015年3月25日 申請(qǐng)日期:2014年12月2日 優(yōu)先權(quán)日:2014年12月2日
【發(fā)明者】張麗紅, 蓋凌, 張偉, 王時(shí)燦, 孫林, 丁海清, 劉蓓, 王琳琳, 蔣寶宏, 呂雪梅, 李青 申請(qǐng)人:張麗紅