本發(fā)明屬于混合型飼料添加劑領域，具體涉及一種混合型飼料添加劑植物精油顆粒及其制備方法。
背景技術(shù)：
目前，動物養(yǎng)殖業(yè)面臨著疾病，應激等各種不良因素的影響，添加抗生素等傳統(tǒng)解決方法會導致腸道菌群失衡、藥物殘留和抗藥性等多方面負效應，存在著威脅食品安全等諸多問題和潛在風險。因此，尋找高效、安全、綠色的飼料添加劑來替代抗生素成為國內(nèi)外畜牧工作者的研究重點。植物提取物便是一種發(fā)展較快的添加劑，植物精油隸屬植物提取油，是目前研究的重點和熱點之一。
植物精油在飼料添加劑方面的應用有用作誘食、抑菌防霉、促生長、抗氧化等作用。但植物精油在強酸性或強堿性介質(zhì)中不穩(wěn)定，易導致變色，在空氣中易氧化。不易溶于水，與飼料不易混合均勻，且其分子量較小，容易揮發(fā)，不易保存。
目前市場上植物精油類飼料添加劑，生產(chǎn)工藝多采取兩種形式，一是以二氧化硅為主體的吸附載體，將植物精油吸附后充分混合，該工藝產(chǎn)品不能解決植物精油的揮發(fā)性及保存期短的問題；二是有些將肉桂油、牛至油、丁香油等與多孔淀粉或微晶纖維素先混合吸附，再用流化床進行包被，該工藝受現(xiàn)有流化床設備產(chǎn)能限制，存在生產(chǎn)流程長，批產(chǎn)量小，生產(chǎn)成本高，而且包被效果差，包封率低等問題。
201210418386.9公開了一種飼用植物精油添加劑及其制備方法、用途，其公開的配方為：以重量百分比計算，肉桂醛8.5％～12％；百里香酚2％～6.5％；丁香酚1.8％～3％；香芹酚2％～3.5％；棕油18％～30％；載體50％～65％。其制備方法為先將原料混合后再加入棕油，攪拌均勻后進入膠體磨進行充分的均質(zhì)混勻，形成穩(wěn)定的液體混合物后，再將其加入到載體中，加入的過程中不斷攪拌。此專利公開的配方中添加比例肉桂醛多于百里香酚多于香芹酚，利用二氧化硅為主要載體，其制備工藝屬于上述第一種。其仍然存在植物精油的揮發(fā)性及保存期短的問題。
所以植物精油類飼料添加劑研究領域，進一步研究出更優(yōu)的精油配方以及制備工藝以解決現(xiàn)有技術(shù)仍然存在的缺陷特別具有實際意義。
技術(shù)實現(xiàn)要素：
有鑒于此，本發(fā)明為解決植物精油工業(yè)領域中所存在的問題，采用現(xiàn)代獸藥顆粒微膠囊化技術(shù)，將液態(tài)的植物精油制成固體顆粒，擴大植物精油的應用范圍，增加植物精油的穩(wěn)定性、緩釋性功能。
為達到上述目的，本發(fā)明提供如下技術(shù)方案：
1、一種混合型飼料添加劑植物精油顆粒，按質(zhì)量份數(shù)計，包括如下成分：
優(yōu)選的，所述一種混合型飼料添加劑植物精油顆粒，按質(zhì)量份數(shù)計，包括如下成分：
優(yōu)選的，所述一種混合型飼料添加劑植物精油顆粒，按質(zhì)量份數(shù)計，包括如下成分：
優(yōu)選的，所述一種混合型飼料添加劑植物精油顆粒，按質(zhì)量份數(shù)計，包括如下成分：
優(yōu)選的，所述一種混合型飼料添加劑植物精油顆粒，按質(zhì)量份數(shù)計，包括如下成分：
優(yōu)選的，所述一種混合型飼料添加劑植物精油顆粒，按質(zhì)量份數(shù)計，包括如下成分：
優(yōu)選的，所述流散劑為二氧化硅、高嶺土、硅酸鈣、碳酸鈣中的一種或多種，所述載體為硬脂酸、單硬脂酸甘油酯、單硬脂酰乳酸鈉、單硬脂酰乳酸鈣中的一種或多種。
進一步優(yōu)選的，所述流散劑為二氧化硅，所述載體為硬脂酸或單硬脂酸甘油酯。
2、所述一種混合型飼料添加劑植物精油顆粒的制備方法，包括如下步驟：
1)將載體投入夾套加熱罐中，控制夾套溫度為100℃～130℃，加熱使熔化；
2)將熔化后的載體按配方量轉(zhuǎn)移至夾套攪拌均質(zhì)罐中；
3)維持攪拌均質(zhì)罐的夾套溫度為80～90℃，啟動攪拌器，在攪拌下先投入配方量一半的流散劑，攪拌均勻后依次加入配方量的百里香酚、香芹酚和肉桂醛，最后加入余下量的流散劑，啟動均質(zhì)泵，使物料混合均勻；
4)啟動輸料泵，將混合均勻的物料送至離心噴霧塔，控制進風溫度≤5℃，離心轉(zhuǎn)盤速度3000～4000轉(zhuǎn)/分鐘，風量30000～40000立方/分鐘，將物料噴霧冷卻制成顆粒；
5)收集顆粒產(chǎn)品，用震蕩篩篩分，得到顆粒直徑為0.180um～0.850um之間的成品，計量、包裝、檢驗合格后入庫。
本發(fā)明的有益效果在于：1)本發(fā)明通過優(yōu)化混合型飼料添加劑植物精油顆粒的組分配比可以得到極好的體外抑菌效果，本發(fā)明以硬脂酸、單硬脂酸甘油酯、單硬脂酰乳酸鈉、單硬脂酰乳酸鈣中的一種或多種作為主要載體，再配合流散劑的制備工藝可以使得植物精油與輔料結(jié)合緊密，相互嵌合，減少了植物精油與空氣的接觸，增加了精油貯藏、運輸、使用過程的穩(wěn)定性；2)本產(chǎn)品具有緩釋性，在胃液中不完全釋放，在腸道中緩慢釋放，提高了植物精油的效果；3)本品可一定程度上控制飼料保存過程中霉菌的滋生，減少飼料養(yǎng)分的損耗和霉菌毒素的產(chǎn)生，同時可抑制大腸桿菌、沙門氏菌等有害菌的增殖，有效調(diào)控腸道微生物菌群，可以有效替代抗生素的促生長作用；4)本發(fā)明生產(chǎn)工藝簡單，生產(chǎn)成本低，批量大，單批產(chǎn)量可達1.0～1.5噸，生產(chǎn)效率可達2噸/小時。
附圖說明
為了使本發(fā)明的目的、技術(shù)方案和有益效果更加清楚，本發(fā)明提供如下附圖進行說明：
圖1為混合型飼料添加劑植物精油顆粒體外釋放度曲線。
具體實施方式
下面將結(jié)合附圖，對本發(fā)明的優(yōu)選實施例進行詳細的描述。以下實施例中所用的實驗方法，如無特殊說明，均為常規(guī)方法。下述實施例中所用的原料、試劑等，如無特殊說明，均為市售產(chǎn)品。
本發(fā)明的配方篩選
1、常用植物天然體取物體外抑菌效果比較
飼料添加劑中常用天然提取物有：大蒜精油、肉桂油、牛至油、丁香油、辣椒油、百里香酚、香芹酚、肉桂醛、姜黃素、檸檬烯、辣椒素、大蒜素等。為考察上述各天然提取物的抑菌效果，分別采購以上原料，進行抑菌效果比較試驗。
1.1材料
1.1.1原料：辣椒油、辣椒素購至吉安盛大香料油有限公司；大蒜精油、肉桂油、牛至油、丁香油、辣椒油、百里香酚、香芹酚、肉桂醛購至廣州日化化工有限公司；姜黃素、大蒜素購至陜西昂盛生物醫(yī)藥科技有限公司；檸檬烯購至江西環(huán)球天然香料有限公司。
1.1.2試驗菌：大腸埃希氏菌(escherichiacoli)(cvcc2801)購至中國獸醫(yī)藥品監(jiān)察所。
1.1.3儀器：電子天平(感量0.0001g)、培養(yǎng)皿、試管、移液槍、接種環(huán)、隔水式恒溫培養(yǎng)箱、潔凈操作臺、牛津杯、游標卡尺等。
1.2方法
1.2.1樣品制備準確量取/稱取各植物提取物1ml/1g，按提取物：吐溫80：二甲基亞砜＝2：1：1的體積比混合，渦旋1min配成體積分數(shù)為1/2的藥液。再用滅菌的營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基稀釋至100ml，備用。
1.2.2抑菌試驗
①菌懸液的制備取大腸埃希氏菌的營養(yǎng)瓊脂斜面培養(yǎng)物，接種到營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基中，在35～37℃培養(yǎng)18～24小時后。用生理鹽水把制備好的菌懸液10倍比稀釋成不同濃度，進行菌落計數(shù)，保持菌懸液的濃度約為1×106cfu/ml。
②檢測平皿的制備取直徑約90mm，高16～17mm平底雙碟，滅菌后待用。取制備好的菌懸液，按比例加入(菌懸液：培養(yǎng)基＝1：15)到滅菌后冷卻至50℃的營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基中，振搖使混合均勻，然后傾注20ml含菌培養(yǎng)基到雙碟中，作為菌層，置于水平臺面，待其凝固。
③檢測方法在每一雙碟中等距離放置牛津杯4個，加入各樣品溶液200ul，每個樣品做4個平行，用圓形陶瓦蓋覆蓋，置于35～37℃的隔水式恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24小時，觀察抑菌作用，用游標卡尺測量抑菌圈直徑，同時用空白滅菌營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基做對照。文獻資料《三種非水溶液供試品溶劑對抑菌試驗效果的影響》(胡君茹等)表明，二甲基亞砜和吐溫-80不會干擾大腸桿菌的抑菌試驗結(jié)果。
1.3試驗結(jié)果
對上述植物提取物樣品進行抑菌效果的試驗結(jié)果見表1
表1不同飼用天然植物提取物的抑菌效果
結(jié)果顯示，抑菌效果較好的天然提取物分別是牛至油、香芹酚、肉桂醛、肉桂油、百里香酚、丁香油。牛至油的主要成分是香芹酚和百里香酚，肉桂醛和肉桂油的抑菌效果基本上一致。
2.復方植物天然提取物與單方體外抑菌效果的比較
根據(jù)文獻資料顯示，植物天然提取物的抑菌能力多存在相互疊加作用，我們選擇抑菌效果最好的單一組分香芹酚、肉桂醛和百里香酚作做復方配比，與單方進行體外抑菌效果比較，其樣品處理和檢測方法按1.2中所述方法進行，結(jié)果見表2
表2復方植物天然提取物與單方體外抑菌效果比較
結(jié)果表明，復方植物天然提取物體外抑菌效果確實大于單方，且三組分復方效果最好。
3.復方配比篩選
我們選擇香芹酚、肉桂醛和百里香酚，以大腸桿菌為指示菌，以抑菌圈直徑大小為主要考察指標，設計三因素四水平的正交試驗，對配方進行篩選，樣品處理和檢測方法按1.2中所述方法進行，用spssstatistics17.0軟件生成正交表，按正交表設計進行試驗，結(jié)果如表3。
表3正交設計試驗結(jié)果
對上表的試驗數(shù)據(jù)用spssstatistics17.0軟件進行單變量的方差分析，結(jié)果如表4。
表4方差的單變量分析結(jié)果
結(jié)果顯示，香芹酚在配方中隨著比例增加，體外抑菌效果增加，但增加速率下降明顯；肉桂醛在配方中的隨著比例增加，對體外抑菌效果貢獻不大；百里香酚在配方中占比越小，復方體外抑菌效果越好。故最優(yōu)配比為香芹酚：肉桂醛：百里香酚＝2.5：1.5：1。
實施例1
稱取硬脂酸/單硬脂酸甘油酯750kg，投入夾套加熱罐中，控制夾套溫度為100℃～130℃，加熱使熔化，將熔化后的硬脂酸/單硬脂酸甘油酯轉(zhuǎn)移至夾套攪拌均質(zhì)罐中，維持攪拌均質(zhì)罐的夾套溫度為80℃～90℃，啟動攪拌器，在攪拌下先投入75kg的二氧化硅，攪拌均勻后依次加入百里香酚20kg，香芹酚50kg和肉桂醛30kg，最后加入75kg二氧化硅，啟動均質(zhì)泵，使物料混合均勻。啟動輸料泵，將混合均勻的物料送至離心噴霧塔，控制進風溫度≤5℃，離心轉(zhuǎn)盤速度3000～4000轉(zhuǎn)/分鐘，風量30000～40000立方/分鐘，將物料噴霧冷卻制成顆粒，收集顆粒產(chǎn)品，用震蕩篩篩分，得到顆粒直徑為0.180um～0.850um，總含量(以百里香酚+香芹酚+肉桂醛計)為10wt％的成品，計量、包裝、檢驗合格后入庫。
實施例2
稱取硬脂酸/單硬脂酸甘油酯700kg，投入夾套加熱罐中，控制夾套溫度為100℃～130℃，加熱使熔化，將熔化后的硬脂酸/單硬脂酸甘油酯轉(zhuǎn)移至夾套攪拌均質(zhì)罐中，維持攪拌均質(zhì)罐的夾套溫度為80℃～90℃，啟動攪拌器，在攪拌下先投入75kg的二氧化硅，攪拌均勻后依次加入百里香酚30kg，香芹酚75kg和肉桂醛45kg，最后加入75kg二氧化硅，啟動均質(zhì)泵，使物料混合均勻。啟動輸料泵，將混合均勻的物料送至離心噴霧塔，控制進風溫度≤5℃，離心轉(zhuǎn)盤速度3000～4000轉(zhuǎn)/分鐘，風量30000～40000立方/分鐘，將物料噴霧冷卻制成顆粒，收集顆粒產(chǎn)品，用震蕩篩篩分，得到顆粒直徑為0.180um～0.850um，總含量(以百里香酚+香芹酚+肉桂醛計)為15％的成品，計量、包裝、檢驗合格后入庫。
實施例3
稱取硬脂酸/單硬脂酸甘油酯650kg，投入夾套加熱罐中，控制夾套溫度為100℃～130℃，加熱使熔化，將熔化后的硬脂酸/單硬脂酸甘油酯轉(zhuǎn)移至夾套攪拌均質(zhì)罐中，維持攪拌均質(zhì)罐的夾套溫度為80℃～90℃，啟動攪拌器，在攪拌下先投入75kg的二氧化硅，攪拌均勻后依次加入百里香酚40kg，香芹酚100kg和肉桂醛60kg，最后加入75kg二氧化硅，啟動均質(zhì)泵，使物料混合均勻。啟動輸料泵，將混合均勻的物料送至離心噴霧塔，控制進風溫度≤5℃，離心轉(zhuǎn)盤速度3000～4000轉(zhuǎn)/分鐘，風量30000～40000立方/分鐘，將物料噴霧冷卻制成顆粒，收集顆粒產(chǎn)品，用震蕩篩篩分，得到顆粒直徑為0.180um～0.850um，總含量(以百里香酚+香芹酚+肉桂醛計)為20％的成品，計量、包裝、檢驗合格后入庫。
實施例4
稱取硬脂酸/單硬脂酸甘油酯600kg，投入夾套加熱罐中，控制夾套溫度為100℃～130℃，加熱使熔化，將熔化后的硬脂酸/單硬脂酸甘油酯轉(zhuǎn)移至夾套攪拌均質(zhì)罐中，維持攪拌均質(zhì)罐的夾套溫度為80℃～90℃，啟動攪拌器，在攪拌下先投入75kg的二氧化硅，攪拌均勻后依次加入百里香酚50kg，香芹酚125kg和肉桂醛75kg，最后加入75kg二氧化硅，啟動均質(zhì)泵，使物料混合均勻。啟動輸料泵，將混合均勻的物料送至離心噴霧塔，控制進風溫度≤5℃，離心轉(zhuǎn)盤速度3000～4000轉(zhuǎn)/分鐘，風量30000～40000立方/分鐘，將物料噴霧冷卻制成顆粒，收集顆粒產(chǎn)品，用震蕩篩篩分，得到顆粒直徑為0.180um～0.850um，總含量(以百里香酚+香芹酚+肉桂醛計)為25％的成品，計量、包裝、檢驗合格后入庫。
實施例5
稱取硬脂酸/單硬脂酸甘油酯550kg，投入夾套加熱罐中，控制夾套溫度為100℃～130℃，加熱使熔化，將熔化后的硬脂酸/單硬脂酸甘油酯轉(zhuǎn)移至夾套攪拌均質(zhì)罐中，維持攪拌均質(zhì)罐的夾套溫度為80℃～90℃，啟動攪拌器，在攪拌下先投入75kg的二氧化硅，攪拌均勻后依次加入百里香酚60kg，香芹酚150kg和肉桂醛90kg，最后加入75kg二氧化硅，啟動均質(zhì)泵，使物料混合均勻。啟動輸料泵，將混合均勻的物料送至離心噴霧塔，控制進風溫度≤5℃，離心轉(zhuǎn)盤速度3000～4000轉(zhuǎn)/分鐘，風量30000～40000立方/分鐘，將物料噴霧冷卻制成顆粒，收集顆粒產(chǎn)品，用震蕩篩篩分，得到顆粒直徑為0.180um～0.850um，總含量(以百里香酚+香芹酚+肉桂醛計)為30％的成品，計量、包裝、檢驗合格后入庫。
實施例6
稱取硬脂酸/單硬脂酸甘油酯600kg，投入夾套加熱罐中，控制夾套溫度為100℃～130℃，加熱使熔化，將熔化后的硬脂酸/單硬脂酸甘油酯轉(zhuǎn)移至夾套攪拌均質(zhì)罐中，維持攪拌均質(zhì)罐的夾套溫度為80℃～90℃，啟動攪拌器，在攪拌下先投入50kg的二氧化硅，攪拌均勻后依次加入百里香酚60kg，香芹酚150kg和肉桂醛90kg，最后加入50kg二氧化硅，啟動均質(zhì)泵，使物料混合均勻。啟動輸料泵，將混合均勻的物料送至離心噴霧塔，控制進風溫度≤5℃，離心轉(zhuǎn)盤速度3000～4000轉(zhuǎn)/分鐘，風量30000～40000立方/分鐘，將物料噴霧冷卻制成顆粒，收集顆粒產(chǎn)品，用震蕩篩篩分，得到顆粒直徑為0.180um～0.850um，總含量(以百里香酚+香芹酚+肉桂醛計)為30％的成品，計量、包裝、檢驗合格后入庫。
對以上實施例所制備的產(chǎn)品進行如下性能測試
1)穩(wěn)定性試驗
取本發(fā)明實施例1、實施例2、實施例3、實施例4和實施例5生產(chǎn)的產(chǎn)品，以100g/袋置于鋁箔袋中，密封，置于穩(wěn)定性試驗箱中，在溫度40℃±2℃，濕度65％±5％的條件下考察6個月，分別于第1個月、第2個月、第3個月、第6個月取樣一次，按考察項目進行考察，結(jié)果見表5。
表5混合型飼料添加劑植物精油顆粒產(chǎn)品加速試驗結(jié)果
試驗結(jié)果顯示，本發(fā)明的實施例1-5的產(chǎn)品在6個月加速試驗后，含量標示量都高于92％，說明產(chǎn)品穩(wěn)定性好，符合要求，解決了植物精油的揮發(fā)性問題，增加了精油貯藏、運輸、使用過程的穩(wěn)定性。
2)體外釋放度試驗
1.材料
樣品：本發(fā)明實施例3的產(chǎn)品
百里香酚對照品：szbe0770v含量99％sigma公司
香芹酚對照品：mkbr8607v含量99％sigma公司
肉桂醛對照品：xl065004c含量99.5％sigma公司
高效液相色譜儀：lc-20at，日本島津公司；
智能型溶出度儀：rcz-8，上海黃海藥檢儀器銷售有限公司；
分析天平：bt25s，賽多利斯。
2.方法
2.1色譜條件
分析柱：c18，250mm，內(nèi)徑4.6mm，粒徑5um；
流動相：甲醇:水:冰醋酸＝60:40:2；
檢測器：紫外檢測器，波長274nm；
柱溫：30℃；
流速：1.0ml/min
進樣量：20ul
2.2照品溶液的制備
精密稱取香芹酚500mg，置50ml容量瓶中，用甲醇溶解稀釋至刻度，制成濃度為10mg/ml的香芹酚儲備液；精密稱取百里香酚500mg，置50ml容量瓶中，用95％乙醇溶解稀釋至刻度，制成濃度為10mg/ml的百里香酚儲備液。準確移取香芹酚標準儲備液和百里香酚標準儲備液各1ml于50ml容量瓶中，用甲醇稀釋至刻度線，搖勻，使其濃度為200μg/ml，現(xiàn)用現(xiàn)配。
肉桂醛對照品溶液的置備：精密稱取肉桂醛25mg，置于50ml容量瓶中，用甲醇溶解并稀釋至刻度，配成濃度為0.5mg/ml的肉桂醛標準儲備液。準確移取肉桂醛標準儲備液1ml，置于50ml容量瓶中，用甲醇定容至刻度線，搖勻，使其濃度為10μg/ml，現(xiàn)用現(xiàn)配。
2.3釋放介質(zhì)
為研究試驗藥物在胃腸道不同部位的釋放，模擬動物體內(nèi)胃腸道環(huán)境，選擇0.1mol/l鹽酸、ph6.86磷酸鹽緩沖溶液和水作為釋放介質(zhì)，所有釋放介質(zhì)均參照《中華人民共和國獸藥典》(2015版)緩沖溶液的配制進行配制。
2.4檢測方法
酸中釋放量除另有規(guī)定外，量取0.1mol/l鹽酸溶液750ml，注入每個溶出杯，實際量取的體積與規(guī)定體積的偏差應不超過±1％，待溶出介質(zhì)的溫度恒定在37℃±0.5℃，精密稱取實施例3的樣品適量，(供試品稱取2g)分別置于溶出杯中，以100r/min速度攪拌。在30min、1h、2h、3h分別取樣2.5ml。(及時補充相同體積的溫度為37℃±0.5℃的溶出介質(zhì))。立即用0.22μm微孔濾膜過濾后，取濾液1.5ml，注入色譜儀，記錄色譜圖，按外標法以峰面積計算，及得。
緩沖液中釋放量立即加入溫度為37℃±0.5℃的0.2mol/l的磷酸鈉溶液(必要時用2mol/l鹽酸溶液和2mol/l氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)ph值至6.8)250ml，以100r/min速度攪拌。在1h、2h、3h、4h、5h分別取樣2.5ml。(及時補充相同體積的溫度為37℃±0.5℃的溶出介質(zhì))。立即用0.22μm微孔濾膜過濾后，取濾液1.5ml，注入色譜儀，記錄色譜圖，按外標法以峰面積計算。試驗結(jié)果如圖1所示，由圖1可看出，本發(fā)明的產(chǎn)品在胃液中不完全釋放，在腸道緩慢釋放，具有緩釋功能。
3)對斷奶仔豬添加效果試驗
試驗選用35日齡的杜長大三元雜交健康斷奶仔豬144頭，胎次相近，品種相同，體重相當，公母各半，隨機分為2組，每組設6個重復，每個重復12頭，公母各半，a組為對照組，b組為試驗組，選用實施例4的產(chǎn)品，添加量為300g/噸飼料，拌飼使用，試驗期45d。
按常規(guī)飼養(yǎng)和免疫規(guī)程進行飼養(yǎng)管理，對照組基礎日糧組成及營養(yǎng)水平見表6，試驗組日糧為相應的基礎日糧基礎上再添加相應劑量的混合型飼料添加劑植物精油顆粒。試驗期內(nèi)由專人管理，每天記錄各組仔豬的耗料量、體重(試驗前和試驗結(jié)束時各稱重一次)和健康狀況。試驗豬飼養(yǎng)條件完全一致，均自由采食和飲水。
表6基礎日糧組成及營養(yǎng)水平
試驗第1天和第45天對全群試驗仔豬進行空腹稱重，并記錄各試驗組每日耗料量和腹瀉情況，(判斷腹瀉的標準是豬排出不同顏色的稀薄糞便或水樣腹瀉，肛門松馳，精神濃郁，被毛無光澤)計算各組平均日增重、平均日采食量、腹瀉率和料肉比。
在實驗第45天，各組采集5個新鮮糞便樣品，測定糞便中雙歧桿菌、乳酸菌、糞鏈球菌、大腸桿菌的數(shù)量。稱取糞樣0.50g左右，嚴格按1：9比例加入裝有相應生理鹽水的試管中，在微型震蕩器上震蕩10min，然后從中再取0.50ml放于第二個試管，震蕩5min，依次倍比稀釋到10-8。雙歧桿菌和乳酸菌是厭氧菌，在tpy和改良mrs培養(yǎng)基上進行培養(yǎng)，細菌數(shù)量采用平板菌落計數(shù)法進行統(tǒng)計。每個樣品選擇10-4～10-7四個稀釋度，由高稀釋度開始，用微量取樣器吸取100ul滴入?yún)捬蹙囵B(yǎng)基平皿內(nèi)，用滅菌曲玻棒推勻，每個稀釋度2次重復，然后在厭氧條件下置37℃恒溫箱中培養(yǎng)48h。大腸桿菌用伊紅美藍培養(yǎng)基進行培養(yǎng)，計數(shù)選用稀釋度為10-3～10-6；糞鏈球菌用kf鏈球菌培養(yǎng)基，加入ttc，糞鏈球菌呈紅色，計數(shù)選用稀釋度為10-2～10-5。方法同厭氧菌，區(qū)別在于置37℃恒溫箱中培養(yǎng)24h后進行菌落計數(shù)。
培養(yǎng)的細菌進行革蘭氏染色，鏡檢，并用微生物細菌儀進行鑒定。選取菌落數(shù)(cfu)在30～300之間的培養(yǎng)皿作為菌落總數(shù)計數(shù)標準，計算出每克內(nèi)容物的細菌數(shù)，最后以每克盲腸內(nèi)容物中細菌個數(shù)的對數(shù)(log10cfu/g)表示。
試驗結(jié)果見表7
表7混合型飼料添加劑植物精油顆粒對斷奶仔豬的添加效果試驗
“*”表示p<0.05，差異顯著沒有“*”代表p>0.05，差異不顯著
經(jīng)spss17.0軟件分析，試驗組平均增重效果明顯(p<0.05)，說明添加本發(fā)明的產(chǎn)品有顯著的促生長作用，平均增重提高了13.28％，料肉比下降了11.44％；抗腹瀉效果明顯，乳酸菌、大腸桿菌、糞鏈球菌的數(shù)量差異顯著(p<0.05)，說明試驗組對斷奶仔豬腸道菌群數(shù)量有顯著影響，主要表現(xiàn)在對腸道有益菌具有促進生長作用，對大腸桿菌等有害菌具有減少生長作用。
最后說明的是，以上優(yōu)選實施例僅用以說明本發(fā)明的技術(shù)方案而非限制，盡管通過上述優(yōu)選實施例已經(jīng)對本發(fā)明進行了詳細的描述，但本領域技術(shù)人員應當理解，可以在形式上和細節(jié)上對其作出各種各樣的改變，而不偏離本發(fā)明權(quán)利要求書所限定的范圍。