專利名稱：毛發(fā)增殖的方法
技術領域：
本發(fā)明首先涉及毛發(fā)再生的方法，還涉及一種培養(yǎng)來自生長期毛發(fā)的毛囊細胞的方法，以及非常適于培養(yǎng)毛囊細胞的培養(yǎng)基，和一種制備該培養(yǎng)基的方法及涉及一種前體培養(yǎng)基。
毛發(fā)再生的方法見于歐洲專利申請0236014所揭示，其中將所需類型毛發(fā)的表皮毛囊細胞從患者的頭皮上取下，然后將此表皮毛囊細胞在優(yōu)選含有生長因子的培養(yǎng)基中培養(yǎng)，接下來在患者頭皮的表皮內(nèi)做一切口，經(jīng)此切口將培養(yǎng)的表皮毛囊細胞導入表皮下的真皮內(nèi)。該方法的缺點是其是一種侵害性方法，且細胞不能直接置入，結(jié)果需要許多細胞且毛發(fā)的再生能力較低，在此方法中所用的也不是自身(培養(yǎng)的)CD34+細胞。
毛發(fā)的必需生長結(jié)構(gòu)是所謂的毛囊，其存在于皮膚中，毛囊細胞或角質(zhì)細胞再生自這些毛囊，且在其突出皮膚表面過程中，所述細胞的細胞質(zhì)經(jīng)大量復雜過程被轉(zhuǎn)變成堅韌且有彈力的已知為毛發(fā)的物質(zhì)。毛發(fā)的生長周期可以分成三個階段生長期、退化期或稱過渡期及末期或稱死亡期。由于毛發(fā)的形成及生長的循環(huán)性，因而毛囊是獨特的，毛囊是身體中唯一具有生長核的部分，從中在舊發(fā)退去后可以產(chǎn)生新發(fā)。
現(xiàn)已知來自脫落的人毛發(fā)的毛囊細胞可以培養(yǎng)。也已知可以利用如此培養(yǎng)的細胞在體內(nèi)及體外產(chǎn)生分化的表皮或充分發(fā)育的表皮。培養(yǎng)的小鼠毛囊細胞當植入受試動物時可刺激毛發(fā)生長。但到目前為止尚未能實現(xiàn)借助于培養(yǎng)的自身毛囊細胞，在不希望的人脫發(fā)或無發(fā)部位獲得新發(fā)生長。
人們通常從美容和審美角度發(fā)現(xiàn)禿發(fā)是不合需要的。但禿發(fā)經(jīng)常發(fā)生，且知特別是男性在年老時也變得毛發(fā)稀疏這一現(xiàn)象。這種禿頭的形成已知是雄激素性脫發(fā)。目前還不十分清楚為什么頭皮的某些部位對雄激素性脫發(fā)敏感而其它部位不敏感。而女性也通常發(fā)生毛發(fā)變得稀薄甚至有大面積脫落的危險。對女性而言從美容和審美角度這一現(xiàn)象尤為不適合。
對付禿頭的一種已知方法是植發(fā)，此方法中，從通常為頭后部的有毛發(fā)覆蓋的供體區(qū)取包括頭皮的毛發(fā)，切成小片，通常每片只有1-3根毛發(fā)，然后將此小片植入禿頭區(qū)(受體區(qū))。此方法一主要缺點是供體區(qū)的消耗。也就是說毛發(fā)取自此區(qū)，該毛發(fā)不能再返回。因而移植技術應用有限制。
本發(fā)明的目的在于提供一種技術，借助于該技術，可為禿頭部位再提供毛發(fā)，且沒有上述植發(fā)技術的缺點。本發(fā)明再一目的是提供一種方法，使用該方法借助于培養(yǎng)的毛囊細胞在人脫發(fā)部位可以得到新發(fā)生長。本發(fā)明另一目的是提供一種相對簡單易行的方法。
根據(jù)本發(fā)明方法可以達到所述目的，其中毛發(fā)再生出來。具體地，根據(jù)本發(fā)明，毛發(fā)取自供體區(qū)，在此方式中新發(fā)返回其部位，同時從所取毛發(fā)中培養(yǎng)毛囊細胞，反過來從這些細胞中可以形成新發(fā)。
本發(fā)明因而涉及一種毛發(fā)再生的方法，包括以下步驟(1)從一處或多處供體區(qū)取生長期毛發(fā)，其中生長期毛發(fā)的球狀特征仍與所取毛發(fā)相附著，(2)在毛囊細胞能增殖條件下，培養(yǎng)來自所取毛發(fā)中的毛囊細胞，(3)將培養(yǎng)的毛囊細胞植入受體區(qū)，其中—生長期毛發(fā)經(jīng)在供體區(qū)拔取，隨后選擇適當?shù)纳L期毛發(fā)，—在培養(yǎng)基中培養(yǎng)毛囊細胞，培養(yǎng)基中任選地補加(a)至少一種人肥大細胞系和/或自身(培養(yǎng)的)CD34+細胞，或(b)一種或多種人肥大細胞系的提取物和/或CD34+細胞的提取物，和/或(c)生長刺激劑，—將培養(yǎng)的毛囊細胞和/或自身(培養(yǎng)的)CD34+細胞植入受體區(qū)的毛孔中。
根據(jù)本發(fā)明，盡管描述中通常提及了許多細胞，但只有一種毛囊細胞或一種自身(培養(yǎng)的)CD34+細胞，或這二種細胞的組合物可被導入。
本發(fā)明方法具有的主要優(yōu)點是在不損害供體區(qū)的情況下在脫發(fā)部位可得到毛發(fā)生長。
本發(fā)明方法的步驟(1)包括從生長期毛發(fā)所在的供體區(qū)取發(fā)。如上所述，毛發(fā)生長包括三個階段生長期、退化期和末期。只有生長期毛發(fā)適用于本發(fā)明的方法。與退化期和末期毛發(fā)相比，生長期毛發(fā)特征在于在生長期毛發(fā)根部具有通常為有顏色的特征性球狀這一形態(tài)特點。這已周知且用肉眼也可立即將生長期毛發(fā)根據(jù)特征性球狀形態(tài)加以識別。使用顯微鏡可以提供一明確答案。取生長期毛發(fā)因此可以各種方式進行，只要生長期毛發(fā)的特征性球狀特性仍與所取毛發(fā)相附即可。
需用于培養(yǎng)適量毛囊細胞的生長期毛發(fā)數(shù)量幾乎不受特殊限制，這是由于原則上從一根毛發(fā)可以培養(yǎng)無限量的毛囊細胞。從第一個培養(yǎng)物可以依次培養(yǎng)傳代培養(yǎng)物且依次從每傳代培養(yǎng)物可培養(yǎng)許多培養(yǎng)物。原則上，3-10根生長期毛發(fā)就足夠了。最終在受體區(qū)形成的來自培養(yǎng)的毛囊細胞的毛發(fā)呈現(xiàn)培養(yǎng)的毛囊細胞所來自的供體區(qū)毛發(fā)的特性。因而對雄激素性脫發(fā)不敏感的區(qū)域可用作合適的供體區(qū)。但這不是必需的。
由于一旦毛發(fā)被取，在不同生長時期的毛發(fā)的差異顯而易見，所以經(jīng)在供體區(qū)拔取毛發(fā)，并選擇合適的生長期毛發(fā)而可以從供體區(qū)取發(fā)。例如，用鑷子非常適于在供體區(qū)拔取毛發(fā)。
在本發(fā)明的步驟(2)中，將所取毛發(fā)在毛囊細胞可增殖的條件下進行培養(yǎng)。原則上，可用已知方法從毛發(fā)培養(yǎng)毛囊細胞。為此目的的培養(yǎng)基是可商購的，且任何相關生長補加劑都是易于得到的。如此培養(yǎng)基也稱作無血清角質(zhì)細胞培養(yǎng)基，且通常含有必需和非必需氨基酸，維生素，微量元素，有機組分和無機鹽。該培養(yǎng)基也可與生長補加劑組合，生長補加劑含有生長因子、激素、抗生素及組織提取物如BPE(牛垂體提取物)，胰島素、氫考、HEGF(人表皮生長因子)，TGF(轉(zhuǎn)化生長因子)，L-半胱氨酸，L-亮氨酸和慶大霉素。根據(jù)本發(fā)明，如果在本發(fā)明方法的步驟(2)中，所用的培養(yǎng)基除上述已知培養(yǎng)基外，還任選地補加一種或多種生長補加劑，和/或補加人肥大細胞系和/或自身(培養(yǎng)的)CD34+細胞或者一或多種人肥大細胞系的提取物和/或CD34+細胞的提取物和/或生長刺激劑，則可獲得特別好的結(jié)果。優(yōu)選地，只使用培養(yǎng)的CD34+細胞，這是由于這些細胞是機體天生的。人肥大細胞是已知的，它們含有各種生長因子，且在機體各種不同部位產(chǎn)生并消耗。人肥大細胞系提取物和/或自身(培養(yǎng)的)CD34+細胞提取物和/或生長刺激劑含有生長因子。但到目前為止這種人肥大細胞系提取物和/或自身(培養(yǎng)的)CD34+細胞提取物和/或生長刺激劑未用于培養(yǎng)毛囊細胞的培養(yǎng)基中。其提取物可被使用的一種人肥大細胞系是HMC-1(人肥大細胞系1)或衍生自其中的一個細胞系，如亞克隆5C6和KU812。肥大細胞系如HMC-1及其亞克隆是可商購的。根據(jù)本發(fā)明，可用自身(培養(yǎng)的)CD34+細胞或兩種或多種這些細胞類型的組合代替肥大細胞。
人肥大細胞系提取物和/或自身(培養(yǎng)的)CD34+細胞提取物和/或生長刺激劑可通過向含有人肥大細胞系，其亞克隆和/或自身(培養(yǎng)的)CD34+細胞和/或生長劑的無血清角質(zhì)細胞培養(yǎng)基中加入至少一種脫粒劑而被非常合適地導入培養(yǎng)基中。也可加入無機鹽以優(yōu)化脫粒劑的作用。適當?shù)柠}是CaCl2。然后脫粒劑將肥大細胞和/或自身(培養(yǎng)的)CD34+細胞切割成較小塊(脫粒)，結(jié)果生長因子釋入培養(yǎng)基中。脫粒后，可除去肥大細胞和/或自身(培養(yǎng)的)CD34+細胞的殘余物，如可通過離心進行。得到的條件培養(yǎng)基可用于培養(yǎng)毛囊細胞。
脫粒劑是已知的，且可大致分為三組—激素如雌激素和緩激肽，
—神經(jīng)遞質(zhì)和抗原如蜂毒，P物質(zhì)及IgE。
—合成試劑如化合物48/80和離子載體A23187。
任選地使用的能使肥大細胞脫粒的脫粒劑適用于本發(fā)明的方法。
一種選擇是首先單獨制備人肥大細胞系提取物和/或自身(培養(yǎng)的)CD34+細胞提取物和/或生長劑，并將這些提取物加入無血清角質(zhì)細胞培養(yǎng)基中。
步驟(2)中培養(yǎng)毛囊細胞的條件可以變化很大且特別依賴于所用的培養(yǎng)基。但已發(fā)現(xiàn)毛囊細胞的培養(yǎng)在30℃-40℃，優(yōu)選在溫育器內(nèi)以便使溫度保持恒定，并在水飽和的且除空氣中含有的常量的常規(guī)組分外另含有3-10％CO2的環(huán)境下可得到好結(jié)果。但這些條件是非限制性的，且也可使用其它條件。培養(yǎng)期根據(jù)每培養(yǎng)物的不同變化于1小時至40天之間，為得到良好結(jié)果，優(yōu)選每2-5天以新鮮培養(yǎng)基替換舊培養(yǎng)基。
本發(fā)明方法的步驟(2)可以單一培養(yǎng)步驟進行。但也可以通過從初始培養(yǎng)物傳代培養(yǎng)以多個傳代步驟進行，這可以當主培養(yǎng)物有足夠毛囊細胞時從中取足夠量的毛囊細胞加以進行。將取自主培養(yǎng)物的毛囊細胞依次培養(yǎng)，優(yōu)選但非必需在與初始培養(yǎng)物相同的培養(yǎng)基中進行。如果需要，在培養(yǎng)期間可從所述傳代培養(yǎng)物培養(yǎng)進一步的培養(yǎng)物，等等。
毛囊細胞經(jīng)培養(yǎng)之后，必須將其從其生長的基質(zhì)上分離。這可用已知方法進行，如在PBS中用胰蛋白酶溶液(0.1-0.5％(重)水溶液)，任選地與EDTA溶液(0.01-0.05％(重))組合，進行，這類方法已熟知。在培養(yǎng)的毛囊細胞用于步驟(3)之前，如果需要，可除去肥大細胞和/或自身(培養(yǎng)的)CD34+細胞。
在本發(fā)明方法的步驟(3)中，將培養(yǎng)的毛囊細胞植入受體區(qū)皮膚。已發(fā)現(xiàn)當將培養(yǎng)的毛囊細胞和/或自身(培養(yǎng)的)CD34+細胞直接植入受體區(qū)的毛孔內(nèi)時，可獲得非常好的效果，如果毛孔難以看見，尤其淺色皮膚，可通過在受體區(qū)皮膚應用一種通常是黃色的液體而使毛孔更易觀測到，因毛孔內(nèi)汗腺的汗液的分泌而使該液體在毛孔所在部位顏色變深，如此液體的一個例子是鄰苯二醛在例如二甲苯或乙醚中的1-10％溶液，如L.Juhlin and W.B.Suelley，Nature，1967年1月28日，408頁中所述。
優(yōu)選地，將一定量的培養(yǎng)的毛囊細胞和/或自身(培養(yǎng)的)CD34+細胞的懸液導入每個毛孔中，所述的一定量含有足夠量的能發(fā)育毛囊的毛囊細胞和/或自身(培養(yǎng)的)CD34+細胞，從中可生長毛發(fā)。毛囊形成所需的培養(yǎng)的毛囊細胞和/或自身(培養(yǎng)的)CD34+細胞的數(shù)量高度依賴于培養(yǎng)細胞的分化或生長潛力。當培養(yǎng)的毛囊細胞和/或自身(培養(yǎng)的)CD34+細胞具有相對高的分化程度時所需培養(yǎng)細胞的量比相對低的分化程度要少。有許多影響培養(yǎng)的毛囊細胞和/或自身(培養(yǎng)的)CD34+細胞分化程度的因素。例如所用培養(yǎng)基及培養(yǎng)時間是起作用的因素。優(yōu)選地，使用在培養(yǎng)基中的培養(yǎng)的毛囊細胞和/或自身(培養(yǎng))CD34+細胞的懸浮液。優(yōu)選地，毛囊細胞懸浮液的濃度應使每個毛孔0.01-5μl，更優(yōu)選0.1-0.5μl懸液即可滿足需要，如此少量的液體優(yōu)選借助于配有中空針優(yōu)選18-40G針的計量儀注入毛孔中。所用的計量儀可以是如吸量管的電子計量系統(tǒng)，在計量管或吸量管的末端裝備有18-40G針。根據(jù)尤其是頭皮毛孔的平均大小，優(yōu)選使用中空34G針。但在身體其它部位更小或更大的針也可以使用。也可以并優(yōu)選將懸液用(電子)重復注射儀如胰島素筆進行注射。在此情況下，也可使用特別開發(fā)用于此目的的針，稱作“毛囊引導針”(follicle-conductingneedle)，在需要部位導入細胞且盡可能小地損傷皮膚。毛囊引導針是一柔韌的非常小的且毛囊細胞可隨之而動的針。
在懸液注射期間，可同時導入使細胞生存更長時間的物質(zhì)。這些物質(zhì)如Minoxidil及其它生長刺激劑。
本發(fā)明還涉及一種從生長期毛發(fā)中培養(yǎng)毛囊細胞的方法，將一根或多根生長期毛發(fā)置入用一種適當?shù)臒o血清角質(zhì)細胞培養(yǎng)基和任選地用一種人肥大細胞系和/或自身(培養(yǎng)的)CD34+細胞或者一種或多種的人肥大細胞系和/或CD34+細胞的提取物和/或生長刺激劑補加的培養(yǎng)基中。如此培養(yǎng)基的獲得方式在前面已描述。
關于所用培養(yǎng)基的各種組分及培養(yǎng)條件，其與上述方法的步驟(2)中應用的培養(yǎng)基與條件相同。因而優(yōu)選使用一種肥大細胞系，其亞克隆和/或自身(培養(yǎng)的)CD34+細胞和/或生長刺激劑。合適的條件包括水飽和的且含3-10％(體積)CO2的環(huán)境、培養(yǎng)溫度30-40℃。
本發(fā)明還涉及一種用于培養(yǎng)生長期毛發(fā)的毛囊細胞的培養(yǎng)基，及一種制備所述培養(yǎng)基的方法。本發(fā)明的培養(yǎng)基包括至少一種合適的無血清角質(zhì)細胞培養(yǎng)基，任選地用一種人肥大細胞系和/或自身(培養(yǎng)的)CD34+細胞，或人肥大細胞系的提取物和/或自身(培養(yǎng)的)CD34+細胞的提取物，和/或生長刺激劑補加。如此培養(yǎng)基的特點尤其是含有源自一種或多種人肥大細胞系和/或自身(培養(yǎng)的)CD34+細胞的生長因子。
優(yōu)選的培養(yǎng)基包括無血清角質(zhì)細胞培養(yǎng)基及人肥大細胞系HMC-1或其衍生的細胞系如5C6或KU812的提取物或自身(培養(yǎng)的)CD34+細胞的提取物。對本發(fā)明的培養(yǎng)基組分的詳述在前已提供。
制備所述培養(yǎng)基的方法包括以下步驟(a)將至少一種肥大細胞系，其亞克隆和/或自身(培養(yǎng)的)CD34+細胞和/或生長刺激劑及任選地一種脫粒劑，其任選地與無機鹽如CaCl2組合，加入無血清角質(zhì)細胞培養(yǎng)基，(b)肥大細胞系、其亞克隆和/或自身(培養(yǎng)的)CD34+細胞被脫粒，從而生長因子釋入培養(yǎng)基，(c)任選地從培養(yǎng)基中除去肥大細胞和/或自身(培養(yǎng))CD34+細胞，如經(jīng)離心進行，此后得到(條件)培養(yǎng)基。
根據(jù)本發(fā)明，從培養(yǎng)基除去肥大細胞和/或CD34+細胞和/或其殘余物。
進行方法的條件不是特別關鍵的，且對本領域技術人員是顯而易見的。步驟(a)中所用脫粒劑優(yōu)選地是與CaCl2組合的化合物48/80。
最后，本發(fā)明涉及一種用于培養(yǎng)生長期毛發(fā)的毛囊細胞的前體培養(yǎng)基，該培養(yǎng)基包括至少一種合適的無血清角質(zhì)細胞培養(yǎng)基，其任選地補加一種人肥大細胞系和/或自身(培養(yǎng)的)CD34+細胞，或一種或多種人肥大細胞系的提取物和/或CD34+細胞的提取物，和/或生長刺激劑，和/或至少一種脫粒劑。所述前體培養(yǎng)基可用作從中制備培養(yǎng)生長期毛發(fā)的毛囊細胞的合適的條件培養(yǎng)基。如果人肥大細胞系和/或自身(培養(yǎng))CD34+細胞及脫粒劑均存在的話，可經(jīng)脫粒而簡單進行這種制備。如果二者缺一，即分別為肥大細胞和/或CD34+細胞及脫粒劑缺失，所缺失組分必需在肥大細胞脫粒前補加。
權(quán)利要求
1.再生毛發(fā)的方法，該方法包括以下步驟(1)從一處或多處供體區(qū)取生長期毛發(fā)，其中生長期毛發(fā)的球狀特征仍與所取毛發(fā)相附著，(2)在毛囊細胞能增殖條件下，培養(yǎng)來自所取毛發(fā)中的毛囊細胞，(3)將培養(yǎng)的毛囊細胞植入受體區(qū)，其中—生長期毛發(fā)經(jīng)在供體區(qū)拔取，隨后選擇合適的生長期毛發(fā)，—在培養(yǎng)基中培養(yǎng)毛囊細胞，培養(yǎng)基中任選地補加(a)至少一種人肥大細胞系和/或自身(培養(yǎng)的)CD34+細胞，或(b)一種或多種人肥大細胞系的提取物和/或CD34+細胞的提取物，和/或(c)生長刺激劑，—將培養(yǎng)的毛囊細胞和/或自身(培養(yǎng)的)CD34+細胞植入受體區(qū)的毛孔中。
2.如權(quán)利要求1的方法，其中人肥大細胞系是一種肥大細胞系，其亞克隆和/或自身(培養(yǎng))CD34+細胞和/或生長刺激劑。
3.如權(quán)利要求2的方法，其中人肥大細胞系是一種人肥大細胞系和/或自身(培養(yǎng)的)CD34+細胞系。
4.如前述權(quán)利要求任一項的方法，其中毛囊細胞在30-40℃，在水飽和的且含有3-10％(體積)CO2的環(huán)境下培養(yǎng)。
5.如權(quán)利要求1的方法，其中將一定量的培養(yǎng)的毛囊細胞和/或自身(培養(yǎng)的)CD34+細胞的懸液導入每個毛孔中，所述的一定量含有足夠的能發(fā)育毛囊的毛囊細胞和/或自身(培養(yǎng)的)CD34+細胞。
6.如權(quán)利要求5的方法，其中導入每個毛孔的懸液量是0.01-5μl。
7.如權(quán)利要求6的方法，其中導入每個毛孔的懸液量是0.1-0.5μl。
8.如權(quán)利要求5-7任一項的方法，其中經(jīng)配有中空針、優(yōu)選18-40G針的計量吸量管將懸液導入每個毛孔。
9.如權(quán)利要求5-7任一項的方法，其中經(jīng)重復注射計量儀導入懸液。
10.如權(quán)利要求9的方法，其中使用毛囊引導針。
11.從生長期毛發(fā)培養(yǎng)毛囊細胞的方法，包括將一根或多根生長期毛發(fā)置入培養(yǎng)基，其特征在于使用如此的培養(yǎng)基，所述培養(yǎng)基用至少一種合適的無血清角質(zhì)細胞培養(yǎng)基補加，并任選地補加一種肥大細胞系和/或自身(培養(yǎng))CD34+細胞，或一種或多種人肥大細胞系的提取物和/或CD34+細胞的提取物和/或生長刺激劑。
12.如權(quán)利要求11的方法，其中人肥大細胞系是HMC-1或自身(培養(yǎng)的)CD34+細胞。
13.如權(quán)利要求11或12的方法，其中毛囊細胞在30-40℃，在水飽和的且含有3-10％(體積)CO2的環(huán)境下培養(yǎng)。
14.用于從生長期毛發(fā)培養(yǎng)毛囊細胞的培養(yǎng)基，其特征在于其含有至少一種合適的無血清角質(zhì)細胞培養(yǎng)基，并任選地補加一種人肥大細胞系和/或自身(培養(yǎng)的)CD34+細胞，或一或多種人肥大細胞系的提取物和/或CD34+細胞的提取物和/或生長刺激劑。
15.如權(quán)利要求14的培養(yǎng)基，其中人肥大細胞系是HMC-1或自身(培養(yǎng)的)CD34+細胞。
16.如權(quán)利要求14或15的培養(yǎng)基，其中人肥大細胞系是一種人肥大細胞系和/或自身(培養(yǎng)的)CD34+細胞。
17.制備如權(quán)利要求14-16任一項的培養(yǎng)基的方法，其特征在于該方法包括以下步驟(a)將至少一種肥大細胞系，其亞克隆和/或自身(培養(yǎng)的)CD34+細胞和/或生長刺激劑及任選地一種脫粒劑，其任選地與無機鹽如CaCl2組合，加入無血清角質(zhì)細胞培養(yǎng)基，(b)肥大細胞系、其亞克隆和/或自身(培養(yǎng)的)CD34+細胞被脫粒，從而生長因子釋入培養(yǎng)基，(c)任選地從培養(yǎng)基中除去肥大細胞和/或自身(培養(yǎng))CD34+細胞，如經(jīng)離心進行，此后得到(條件)培養(yǎng)基。
18.用于從生長期毛發(fā)培養(yǎng)毛囊細胞的前體培養(yǎng)基，其特征在于其含有至少一種合適的無血清角質(zhì)細胞培養(yǎng)基，且任選地補加一種人肥大細胞系和/或自身(培養(yǎng)的)CD34+細胞，或一種或多種人肥大細胞系的提取物和/或CD34+細胞的提取物和/或生長刺激劑和/或至少一種脫粒劑。
19.如權(quán)利要求18的前體培養(yǎng)基，其中脫粒劑是化合物48/80，優(yōu)選與CaCl2組合。
全文摘要
再生毛發(fā)的方法,該方法包括以下步驟:(1)從一處或多處供體區(qū)取生長期毛發(fā),其中生長期毛發(fā)的球狀特征仍與所取毛發(fā)相附著,(2)在毛囊細胞能增殖條件下,培養(yǎng)來自所取毛發(fā)的毛囊細胞,(3)將培養(yǎng)的毛囊細胞植入受體區(qū)。一種培養(yǎng)基,其含有至少一種合適的無血清角質(zhì)細胞培養(yǎng)基,并任選地補加一種人肥大細胞系和/或自身(培養(yǎng)的)CD3文檔編號C12N5/00GK1254277SQ98804712
公開日2000年5月24日 申請日期1998年3月5日 優(yōu)先權(quán)日1997年3月5日
發(fā)明者康拉達斯·古索爾·古 申請人:古斯特控股公司