或其衍生物的一種或多種：維生素隊(duì)（硫胺素、焦磷酸硫胺素、TPP、三磷酸硫胺素、 TTP、鹽酸硫胺素、一硝酸硫胺素）、維生素B 2 (核黃素、黃素單核苷酸、FMN、黃素腺嘌呤二核 苷酸、FAD、核黃素、卵黃素）、維生素B3 (尼克酸、煙酸、煙酰胺、尼克酰胺、煙酰胺腺嘌呤二 核苷酸、NAD、煙酸單核苷酸、NicMN、吡啶-3-甲酸）、維生素B 3-前體色氨酸、維生素B6 (吡 哆醇、吡哆醛、吡哆胺、鹽酸吡哆醇）、泛酸（泛酸鹽、泛醇）、葉酸鹽（葉酸、葉酸（foacin)、 蝶酰谷氨酸）、維生素B 12 (鈷胺素、甲鈷胺、脫氧腺苷鈷胺素、氰鈷胺、羥鈷胺素、腺苷鈷胺 素）、生物素、維生素C (抗壞血酸）、維生素A (視黃醇、視黃醇醋酸酯、視黃醇棕櫚酸酯、與 其它長鏈脂肪酸形成的視黃酯、視黃醛、視黃酸、視黃醇酯）、維生素D (骨化醇、膽骨化醇、 維生素D3、l，25，-二羥維生素D)、維生素E (a-生育酚、a-生育酚醋酸酯、a-生育酚琥 珀酸酯、a -生育酚煙酸酯、y -生育酚）、維生素K (維生素&、葉綠醌、萘醌、維生素K2、甲 基萘醌-7、維生素K3、甲基萘醌-4、甲萘醌、甲基萘醌-8、甲基萘醌-8H、甲基萘醌-9、甲基 萘醌-9H、甲基萘醌-10、甲基萘醌-11、甲基萘醌-12、甲基萘醌-13)、膽堿、肌醇、0 -胡蘿 卜素及其任何組合。
[0139] 在為兒童提供營養(yǎng)產(chǎn)品例如成長乳的實(shí)施方案中，組合物可以任選地包括，但 不限于一種或多種以下礦物質(zhì)或其衍生物：硼、鈣、醋酸鈣、葡萄糖酸鈣、氯化鈣、乳酸鈣、 磷酸媽、硫酸媽、氯化物、絡(luò)、氯化絡(luò)、吡啶甲酸絡(luò)（chromium picolonate)、銅、硫酸銅、葡 萄糖酸銅、硫酸銅、氟化物、鐵、羰基鐵、三價(jià)鐵、富馬酸亞鐵、正磷酸鐵、鐵研制劑（iron trituration)、多糖鐵、碘化物、碘、鎂、碳酸鎂、氫氧化鎂、氧化鎂、硬脂酸鎂、硫酸鎂、錳、 鉬、磷、鉀、磷酸鉀、碘化鉀、氯化鉀、醋酸鉀、硒、硫、鈉、多庫酯鈉、氯化鈉、硒酸鈉、鉬酸鈉、 鋅、氧化鋅、硫酸鋅及其混合物。礦物質(zhì)化合物的非限制性示例性衍生物包括任何礦物質(zhì)化 合物的鹽、堿性鹽、酯和螯合物。
[0140] 可以將礦物質(zhì)以鹽的形式添加至成長乳或其它兒童營養(yǎng)組合物中，所述鹽諸如磷 酸鈣、甘油磷酸鈣、檸檬酸鈉、氯化鉀、磷酸鉀、磷酸鎂、硫酸亞鐵、硫酸鋅、硫酸銅、硫酸錳和 亞硒酸鈉。可以添加本領(lǐng)域中已知的其它維生素和礦物質(zhì)。
[0141] 在一個(gè)實(shí)施方案中，對于每份的維生素A、C和E、鋅、鐵、碘、硒和膽堿，兒童營養(yǎng) 組合物可以含有對于任何給定國家最大膳食推薦的約10%至約50%，或?qū)τ谝唤M國家平均 膳食推薦的約10%至約50%。在另一個(gè)實(shí)施方案中，對于每份的B-維生素，兒童營養(yǎng)組合 物可以提供對于任何給定國家最大膳食推薦的約10-30%，或?qū)τ谝唤M國家平均膳食推薦的 約10-30%。在還另一個(gè)實(shí)施方案中，在兒童的營養(yǎng)產(chǎn)品中的維生素D、鈣、鎂、磷和鉀的水平 可以對應(yīng)在乳中存在的平均水平。在其它實(shí)施方案中，兒童營養(yǎng)組合物中的每份其它營養(yǎng) 物可以以對于任何給定國家最大膳食推薦的約20%，或?qū)τ谝唤M國家的平均膳食推薦的約 20%存在。
[0142] 本公開內(nèi)容的營養(yǎng)組合物可以任選地包括一種或多種以下調(diào)味劑，包括但不限 于：風(fēng)味提取物、揮發(fā)油、可可粉或巧克力調(diào)味料、花生醬調(diào)味料、餅干碎肩、香草或任何可 商購獲得的調(diào)味料?？捎玫恼{(diào)味料的實(shí)例包括但不限于，純茴芹提取物、仿制香蕉提取物、 仿制櫻桃提取物、巧克力提取物、純檸檬提取物、純柑橘提取物、純薄荷提取物、蜂蜜、仿制 菠蘿提取物、仿制朗姆酒提取物、仿制草莓提取物、葡萄和/或葡萄籽提取物、蘋果提取物、 越橘提取物或香草提取物；或揮發(fā)油，諸如蜜蜂花油、月桂油、香檸檬油、雪松木油、櫻桃油、 肉桂油、丁子香油或薄荷油；花生醬、巧克力調(diào)味料、香草餅干肩、奶油糖果、太妃糖及其混 合物。調(diào)味劑的量可根據(jù)所用的調(diào)味劑而大幅變化?？砂幢绢I(lǐng)域已知的，選擇調(diào)味劑的類 型和量。
[0143] 本公開內(nèi)容的營養(yǎng)組合物可以任選地包括一種或多種乳化劑，其可以被添加用于 最終產(chǎn)品的穩(wěn)定性。合適的乳化劑的實(shí)例包括但不限于，卵磷脂（例如，來自蛋或大豆或任 何其它植物和動(dòng)物來源）、a乳白蛋白和/或甘油單酯和甘油二酯，和其混合物。其它乳化 劑對技術(shù)人員是顯而易見的，并且對合適乳化劑的選擇部分地取決于配方和終產(chǎn)品。
[0144] 本公開的營養(yǎng)組合物可以任選地包括也可以添加以延長產(chǎn)品保質(zhì)期的一種或多 種防腐劑。合適的防腐劑包括，但不限于，山梨酸鉀、山梨酸鈉、苯甲酸鉀、苯甲酸鈉、EDTA鈣 二鈉和其混合物。
[0145] 本公開內(nèi)容的營養(yǎng)組合物可以任選地包括一種或多種穩(wěn)定劑。對在本公開內(nèi)容的 營養(yǎng)組合物實(shí)踐中使用的合適的穩(wěn)定劑包括，但不限于，阿拉伯樹膠、茄替膠、刺梧桐樹膠、 西黃蓍膠、瓊脂、紅藻膠、瓜爾膠、吉蘭糖膠、刺槐豆膠、果膠、低甲氧基果膠、明膠、微晶纖維 素、CMC (羧甲基纖維素鈉）、甲基纖維素、羥丙基甲基纖維素、羥丙基纖維素、DATEM (甘油 單酯和甘油二酯的二乙?；剖狨ィ⑵暇厶?、角叉菜膠、CITREM及其混合物。
[0146] 在某些實(shí)施方案中，本文所述的營養(yǎng)組合物在受試者中有利地減少炎性反應(yīng)。因 此，本公開內(nèi)容涉及通過給予受試者含有本文所述的蛋白等價(jià)物源的營養(yǎng)組合物，在受試 者中減少促炎反應(yīng)的方法。例如，本發(fā)明方法在受試者中可以減少促炎細(xì)胞因子的產(chǎn)生。更 具體地講，本公開內(nèi)容涉及通過向目標(biāo)受試者提供含有本文所述的肽組分的營養(yǎng)組合物減 少IL-17的產(chǎn)生的方法。
[0147] 在某些實(shí)施方案中，在受試者中減少炎性反應(yīng)的方法包括給予受試者包含碳水化 合物源、蛋白等價(jià)物源和脂肪源的營養(yǎng)組合物，其中所述蛋白等價(jià)物源包含：a)含有以下 的肽組分：SEQ ID NO 4、SEQ ID NO 13、SEQ ID NO 17、SEQ ID NO 21、SEQ ID NO 24、SEQ ID NO 30、SEQ ID NO 31、SEQ ID NO 32、SEQ ID NO 51、SEQ ID NO 57、SEQ ID NO 60 和 SEQ ID NO 63,和b)完整蛋白、水解蛋白、或其組合。在某些實(shí)施方案中，所述肽組分可包 含表1中公開的另外的肽。例如，所述組合物可包括表1中公開的至少10種另外的肽。在 某些實(shí)施方案中，20%至80%的蛋白等價(jià)物源包含肽組分，和20%至80%的蛋白等價(jià)物源包 含完整蛋白、部分水解蛋白和其組合。
[0148] 在另一個(gè)實(shí)施方案中，所述方法包括給予受試者營養(yǎng)組合物，其中20%至80%的蛋 白等價(jià)物源包含含有選自以下的至少3種肽：SEQIDN0 4、SEQIDN0 13、SEQIDN0 17、 SEQIDNO21、SEQIDNO24、SEQIDNO30、SEQIDNO31、SEQIDNO32、SEQIDNO51、 SEQIDNO57、SEQIDNO60和SEQIDNO63,和選自表1的至少5種另外的肽的肽組分； 和其中20%至80%的蛋白等價(jià)物源包含完整蛋白、部分水解蛋白、或其組合。
[0149] 在再其它實(shí)施方案中，減少炎性反應(yīng)的方法包括提供包含表1的肽組分的營養(yǎng)組 合物，其中所述肽組分衍生自摩爾質(zhì)量分布大于500道爾頓的酪蛋白水解物。在某些實(shí)施 方案中，酪蛋白水解物的摩爾質(zhì)量分布范圍為500-2000道爾頓。在其它實(shí)施方案中，減少 炎性反應(yīng)的方法包括提供包含本文所述的肽組分的營養(yǎng)組合物，其中所述肽組分衍生自不 包含摩爾質(zhì)量分布小于200道爾頓的肽的酪蛋白水解物。
[0150] 在一些實(shí)施方案中，所述目標(biāo)受試者可以是兒童受試者。此外，在一個(gè)實(shí)施方案 中，提供給兒童受試者的營養(yǎng)組合物可以是嬰兒配方食品。本文指定的并添加至嬰兒配方 食品中的肽組分可以選自特定來源，并且其濃度可以調(diào)節(jié)至使健康益處最大化。在該方法 的另一個(gè)實(shí)施方案中，包含本文公開的肽組分的營養(yǎng)組合物是成長乳。
[0151] 在營養(yǎng)組合物是嬰兒配方食品的實(shí)施方案中，所述組合物在嬰兒中可以有利地減 少促炎反應(yīng)，并因此減少炎性疾病的發(fā)病率。此外，炎性疾病的減少可以持續(xù)至整個(gè)兒童期 并到達(dá)成人期。同樣，當(dāng)所述營養(yǎng)組合物是成長乳時(shí)，攝食成長乳的兒童在成人期以及在兒 童期可以經(jīng)歷炎性疾病發(fā)病率的減少。
[0152] 實(shí)施例1 實(shí)施例1進(jìn)一步說明了產(chǎn)生蛋白部分水解物的方法。首先，將60.3kg非乳固體（奶 粉）和37. 4kg乳清蛋白濃縮物（60%)在裝有54°C的水的罐中混合。漿液的總固體含量 為20%至23%。再測定漿液的pH。將氫氧化鈉和氫氧化鉀加入漿液中，將漿液的pH調(diào)節(jié)至 7. 0。pH調(diào)節(jié)之后，將0.5kgAmanoN酶加入衆(zhòng)液中。在將AmanoN加入衆(zhòng)液后，繼續(xù)用氫 氧化鈉和氫氧化鉀將pH調(diào)節(jié)至pH7.0。加入漿液中的氫氧化鈉的總量是0.3 kg。加入漿 液中的氫氧化鉀的總量是1. 5kg。
[0153] 讓水解進(jìn)行90分鐘，時(shí)間從將Amano N酶加入漿液開始。在90分鐘結(jié)束時(shí)，對漿 液進(jìn)行加熱處理以滅活酶。加熱處理包括將漿液溫度升高至82°C達(dá)10分鐘。在本實(shí)施例 中得到的水解度是6%至9%。然后冷卻漿液并將其噴霧干燥，得到粉末狀水解物。
[0154] 實(shí)施例2 實(shí)施例2提供測定水解物肽的分子量分布的非限制性方法。
[0155] 采用大小排阻色譜（SEC)測定本文所述的水解過程產(chǎn)生的水解物肽的分子量分 布。具體地講，將足量的粉末狀嬰兒配方食品稱重，以提供0.5克蛋白至50ml錐形離心管 中。向管內(nèi)加水至45ml體積。將混合物放入Sarstedt D-5223混合器中并混合1小時(shí)。 混合之后，通過將另一份5ml水加入管中，產(chǎn)生1%蛋白溶液。制備母液標(biāo)準(zhǔn)并同樣混合1 小時(shí)。
[0156] 單獨(dú)地，將14. 91克氯化鉀（KC1)加入1000 ml燒杯。向燒杯加入700 ml水溶解 KC1。然后將250 ml乙腈和1. 0 ml三氯乙酸加入KC1溶液（洗脫液）。用0. 2M K2HP04溶 液將pH調(diào)節(jié)至3.0。
[0157] 填充HPCL試劑瓶，并用洗脫液洗滌該瓶，保留大約50 ml用于稀釋樣品和標(biāo)準(zhǔn)。 Hitachi L-6200 A智能栗線用洗脫液凈化，并用洗脫液平衡柱子1小時(shí)。
[0158] 將樣品混合1小時(shí)后，將各樣品5.0ml移液至玻璃螺口管內(nèi)。將5.0ml二氯甲 烷也移液至各管中。將各管蓋上蓋子并翻轉(zhuǎn)4次以混合。再將樣品在200Xg離心5分鐘。
[0159] 當(dāng)樣品在離心時(shí)，母液標(biāo)準(zhǔn)1-5用洗脫液稀釋（800 ul+3200 ul)。將大約1 ml各 標(biāo)準(zhǔn)移液至兩個(gè)自動(dòng)進(jìn)樣器小管的每一個(gè)中并蓋上蓋子。
[0160] 將經(jīng)離心的樣品1-10的上（水性）層用洗脫液稀釋（100 ul+900 ul)。將小管裝 載到自動(dòng)進(jìn)樣器托盤上，如下：空白、標(biāo)準(zhǔn)、樣品和第二標(biāo)準(zhǔn)。將托盤放入Hitachi自動(dòng)進(jìn)樣 器中。使用自動(dòng)進(jìn)樣器前面的按鍵，讓待運(yùn)行的小管總數(shù)鍵入自動(dòng)進(jìn)樣器程序并運(yùn)行樣品。 結(jié)果表明蛋白的分子量分布。
[0161] 實(shí)施例3 實(shí)施例3涉及在原代人樹突細(xì)胞測定中，廣泛水解的酪蛋白及其大于500 Da部分對促 炎細(xì)胞因子的抑制。具體地講，所抑制的促炎細(xì)胞因子包括白介素_12p70 ("1112口70")、干 擾素1(正附）、白介素-8("118")、腫瘤壞死因子-(1(，即( 1")、白介素-6("116"） 和白介素-10 ("IL1P"）。
[0162] 將分離的⑶14+單核細(xì)胞懸浮于RPMI培養(yǎng)基中并補(bǔ)充有10%熱滅活的胎牛血清 (，83")、青霉素/鏈霉素、500 11]/1111重組白介素-4("濁11-4"）和 800 11]/1111濁61-〇3卩， 并在37°C和5%0)2中在組織培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)5天，允許其分化為樹突細(xì)胞。
[0163] 在第5天，以20, 000細(xì)胞/孔，將細(xì)胞接種在96-孔U型底板中的同樣的培養(yǎng)基 中，接著加入包含廣泛水解的酪蛋白及其大于500 Da部分的水解物樣品，終濃度為0. 007、 0. 02、0. 08和0. 2% m/v。加入地塞米松（"Dex"），終濃度為1 y g/ml，作為用于抑制細(xì)胞 因子產(chǎn)生的陽性對照。所有樣品都以生物學(xué)一式兩份進(jìn)行測試。
[0164] 在第6天，用水解物樣品在無GM-CSF和IL-4的培養(yǎng)基（RPMI + 10% FBS +青霉 素/鏈霉素）中進(jìn)行細(xì)胞更新。加入水解物后1小時(shí)，加入⑶40L +增強(qiáng)子（Alexis)至終 濃度 0.5 μg/ml。
[0165]然后在37°C和5% C02中將細(xì)胞孵育24小時(shí)，隨后收集上清液并貯存于_20°C，直 到按照制造商說明書，用Meso Scale Discovery促炎細(xì)胞因子多元測定法定量測定細(xì)胞因