專利名稱：用于診斷和治療心血管疾病的組合物和方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及診斷心血管疾病的方法和用于治療或預(yù)防此類疾病的組合物。具體而言，本發(fā)明涉及用于診斷和治療冠狀動脈疾病的方法和組合物。
所述斑塊中的T淋巴細(xì)胞和巨噬細(xì)胞之間重要但又復(fù)雜的關(guān)系可能部分上是由受體配體對通過巨噬細(xì)胞(和其他細(xì)胞)上的CD40將CD40L連接到活化的斑塊內(nèi)T細(xì)胞上介導(dǎo)的，由此對一系列的結(jié)果產(chǎn)生影響，包括斑塊的重構(gòu)、斑塊破裂和抗原呈遞(Lamon等，1997)。
最近，人們發(fā)現(xiàn)，具體的微生物同動脈粥樣硬化的促進(jìn)有關(guān)。盡管最近的綜述表明持久性的感染一般與內(nèi)膜炎癥和動脈粥樣硬化斑的生長有關(guān)，但最確定的微生物為肺炎衣原體(Chlamydia pneumoniae)(Saiku等，Lancet 116(1998)983-5；Shar等，S Sfr Med J82(1992)158-61；Mejer等，JAMA 281(1999)427)。目前，還沒有數(shù)據(jù)來闡明動脈粥樣硬化發(fā)生的機理，即與流行病相關(guān)的微生物有助于動脈粥樣硬化產(chǎn)生的過程。
因此，人們需要有助于診斷以免疫應(yīng)答為基礎(chǔ)的心血管疾病例如冠狀動脈疾病的改進(jìn)的方法，還需要預(yù)防或治療此類疾病的組合物。
本發(fā)明是基于發(fā)現(xiàn)了一種新的冠狀動脈疾病發(fā)生的主要機理，與過敏反應(yīng)(一種現(xiàn)代生活中“Th2型細(xì)胞因子”發(fā)生偏離的疾病)的情況類似，冠狀動脈疾病，如動脈粥樣硬化也是一種與“Th2偏離”有關(guān)的現(xiàn)代生活疾病。許多因素可以改變Th2型炎性反應(yīng)對動脈粥樣硬化的促進(jìn)作用(如脂質(zhì)水平、吸煙和高血壓等)。盡管不希望受任何具體的作用機理的限制，但是申請人認(rèn)為其原因可能是由于環(huán)境對腸道細(xì)菌的影響所致，從而使Th1促進(jìn)微生物如乳酸菌(Lactobacilli)被其他與Th2應(yīng)答有關(guān)的微生物所代替。
這一新的觀察結(jié)果為診斷和治療提供了一個獨特的機會，由此可以檢測并改善易發(fā)生動脈粥樣硬化或動脈粥樣高危個體。具體而言，用某些“常規(guī)”的細(xì)菌(益生菌)對腸道進(jìn)行重建不失為一條有效的治療途徑。
本發(fā)明還包括對其他具體的微生物進(jìn)行調(diào)整的診斷和治療，這些微生物(如肺炎衣原體和幽門螺旋桿菌(H.pylori))一旦出現(xiàn)則會加劇Th2的偏離?！艾F(xiàn)代生活性動脈粥樣硬化”可能是由于腸道菌群偏離引起細(xì)胞因子分布型發(fā)生改變所致，這樣一個概念與在發(fā)達(dá)國家和發(fā)展中國家之間動脈粥樣硬化的本質(zhì)區(qū)別是在發(fā)達(dá)國家中發(fā)炎斑塊的數(shù)目過多這一觀點是相符的。
因此，從廣泛的意義上講，本發(fā)明涉及診斷或檢測Th2介導(dǎo)的動脈粥樣硬化如冠狀動脈疾病的方法，該方法是基于對血液(可以與動脈壁的組織間隙發(fā)生交換的血液)中Th2應(yīng)答的各種標(biāo)志和指標(biāo)進(jìn)行測定，本發(fā)明還涉及能夠用作治療或預(yù)防劑的組合物，該組合物可以促進(jìn)Th1型應(yīng)答和/或抑制Th2型應(yīng)答。
具體而言，一方面，本發(fā)明提供了預(yù)防或治療心血管疾病的方法，該方法包括給予需要此類治療的個體有效量的至少一種藥物，相對于與疾病有關(guān)的Th2型T-細(xì)胞應(yīng)答的特征性細(xì)胞因子分布型，該藥物能夠?qū)h1型T-細(xì)胞應(yīng)答的特征性細(xì)胞因子分布型進(jìn)行增量調(diào)節(jié)。
所述Th1型T-細(xì)胞應(yīng)答的特征性細(xì)胞因子分布型的增量調(diào)節(jié)可以通過增量調(diào)節(jié)個體的Th1型T-細(xì)胞應(yīng)答和/或抑制個體的Th2型T-細(xì)胞應(yīng)答來實現(xiàn)?；蛘撸隽空{(diào)節(jié)可以通過增強Th1型T-細(xì)胞應(yīng)答的特征性細(xì)胞因子的活性和/或抑制Th2型應(yīng)答的特征性細(xì)胞因子的活性來實現(xiàn)。
可以給予個體宿主一種或多種藥物以達(dá)到所需的效果。這可以通過給予能夠抑制Th2T細(xì)胞應(yīng)答的藥物并由此獲得Th1型T細(xì)胞應(yīng)答的相對增量調(diào)節(jié)來達(dá)到，或者通過給予可產(chǎn)生可檢測到的Th1型T細(xì)胞應(yīng)答升高的藥物來達(dá)到?；蛘?，可以給予所述個體一種或多種能夠可檢測到地提高Th1型T細(xì)胞應(yīng)答的藥物以及一種或多種抑制Th2型T細(xì)胞應(yīng)答的藥物。優(yōu)選給予至少一種能夠增量調(diào)節(jié)Th1型T細(xì)胞應(yīng)答和抑制Th2型T細(xì)胞應(yīng)答的藥物。
一般而言，該方法包括使Th2型T-細(xì)胞應(yīng)答的特征性細(xì)胞因子轉(zhuǎn)換為Th1型T-細(xì)胞應(yīng)答的特征性細(xì)胞因子。
因此，在另一方面，本發(fā)明提供了預(yù)防或治療心血管疾病的方法，該方法包括給予需要此類治療的個體有效量的至少一種能夠增量調(diào)節(jié)Th1型T-細(xì)胞應(yīng)答的藥物和/或至少一種能夠抑制與疾病有關(guān)的Th2型T-細(xì)胞應(yīng)答的藥物。
在另一方面，本發(fā)明提供了預(yù)防或治療心血管疾病的方法，該方法包括給予需要此類治療的個體有效量的至少一種能夠抑制與疾病有關(guān)的Th2型T-細(xì)胞應(yīng)答的特征性細(xì)胞因子活性的藥物和/或至少一種能夠增強Th1型T-細(xì)胞應(yīng)答的特征性細(xì)胞因子的作用的藥物。
在另一方面，本發(fā)明提供了改變心血管疾病患者體內(nèi)細(xì)胞因子平衡的方法，該方法包括給予需要此類治療的個體有效量的至少一種能夠增量調(diào)節(jié)Th1型T-細(xì)胞應(yīng)答的藥物和/或至少一種能夠抑制與疾病有關(guān)的Th2型T-細(xì)胞應(yīng)答的藥物。
在再一方面，本發(fā)明提供了改變心血管疾病患者體內(nèi)細(xì)胞因子平衡的方法，該方法包括給予需要此類治療的個體有效量的至少一種能夠抑制與疾病有關(guān)的Th2型T-細(xì)胞應(yīng)答的特征性細(xì)胞因子的作用的藥物和/或至少一種能夠增強Th1型T-細(xì)胞應(yīng)答的特征性細(xì)胞因子的作用的藥物。
用于本發(fā)明方法中的優(yōu)選的藥物為微生物或其能夠達(dá)到所需結(jié)果的組分、提取物或分泌物。例如，微生物可以是酵母、細(xì)菌和它們的混合物。優(yōu)選微生物為細(xì)菌，更優(yōu)選為益生菌。適合的益生菌選自乳酸菌屬亞種和/或分枝桿菌屬亞種。優(yōu)選能夠抑制Th2型應(yīng)答并降低膽固醇的乳酸菌。特別優(yōu)選嗜酸乳桿菌(Lactobacillus acidophilus)和母牛分枝桿菌(Mycobacterium vaccae)。
可以理解，可以給予活的、滅活的或殺死的微生物。優(yōu)選以活的微生物形式給予益生菌。
但是，本發(fā)明不限于使用微生物，可以理解，可以使用任何相對于Th2型T-細(xì)胞應(yīng)答的特征性細(xì)胞因子分布型而言能夠?qū)h1型T-細(xì)胞應(yīng)答的特征性細(xì)胞因子分布型進(jìn)行增量調(diào)節(jié)的藥物。其他藥物包括例如抗體及其結(jié)合片段。特別優(yōu)選抗-CD40抗體或其結(jié)合片段。另外，也可以使用CD40的其他配體。
所述細(xì)胞因子標(biāo)志可以是與Th1或Th2型應(yīng)答有關(guān)的任何特征性細(xì)胞因子。例如，對于Th1應(yīng)答而言，所述細(xì)胞因子可以是干擾素-γ或白介素-12，而對于Th2應(yīng)答而言，所述細(xì)胞因子可以是白介素-4、白介素-10、TGF-β和/或白介素-13。但是，可以理解，可以使用任何其他的細(xì)胞因子標(biāo)志，只要該標(biāo)志為Th1或Th2型應(yīng)答的特異性或特征性標(biāo)志即可。
上述的治療方法可以與一種或多種用于治療可以使心血管疾病惡化的情況的藥用活性物質(zhì)聯(lián)合應(yīng)用，如降脂藥、抗高血壓藥和抗糖尿病藥。
可以在給予所述藥用活性物質(zhì)之前、同時或之后給予所述用于改變T-細(xì)胞應(yīng)答或調(diào)節(jié)相關(guān)細(xì)胞因子活性的藥物。
本發(fā)明的方法也可以有效用于由于細(xì)菌感染、細(xì)菌性抗原、多克隆激活劑(如內(nèi)毒素等)、超抗原(如來自克隆細(xì)菌)或自身抗原(血管壁的斑塊內(nèi))而導(dǎo)致細(xì)胞因子失衡或適當(dāng)?shù)腡細(xì)胞應(yīng)答缺乏惡化的個體。與本發(fā)明特別相關(guān)的為肺炎衣原體、幽門螺旋桿菌或非典型性流感嗜血桿菌(non-typable Haemophilusinfluenzae)引起的感染或這些細(xì)菌的細(xì)菌性抗原。
因此，在另外一個方面，本發(fā)明提供了心血管疾病易感性的診斷或評價的方法，該方法包括評價個體的T-細(xì)胞應(yīng)答，其中Th2型應(yīng)答的增量調(diào)節(jié)和/或Th1型應(yīng)答的抑制為所述疾病易感性或存在所述疾病的指標(biāo)。
在另一方面，本發(fā)明提供了診斷或評價心血管疾病易感性的方法，該方法包括評價個體的T-細(xì)胞應(yīng)答，其中Th1型應(yīng)答的特征性細(xì)胞因子的產(chǎn)生或活性的抑制和/或Th2型應(yīng)答的特征性細(xì)胞因子的產(chǎn)生或活性的增強為個體易感所述疾病或存在所述疾病的指標(biāo)。
在另一方面，本發(fā)明提供了診斷心血管疾病或評價個體是否易感心血管疾病的方法，該方法包括(a)測定一種或多種受疾病影響的免疫球蛋白的水平從而獲得試驗數(shù)據(jù)；并(b)將試驗數(shù)據(jù)與參比數(shù)據(jù)進(jìn)行比較，籍此評價該個體是否易感心血管疾病或者患有心血管疾病。
優(yōu)選所述免疫球蛋白為IgG，更優(yōu)選為IgG2亞類。
優(yōu)選所述免疫球蛋白為IgG2亞類的抗體，該抗體對病原菌如肺炎衣原體、幽門螺旋桿菌或非典型性流感嗜血桿菌具有特異性。對本領(lǐng)域技術(shù)人員而言，顯而易見也可以使用其他特異性抗體。
優(yōu)選將總的IgG2與IgG2亞類特異性抗體之比或總的IgG2亞類免疫球蛋白與IgG2亞類特異性抗體之比的改變用作心血管疾病易感性或心血管疾病存在的指標(biāo)。
術(shù)語“心血管疾病”包括動脈粥樣硬化和退行性血管疾病以及與冠狀動脈發(fā)炎有關(guān)的任何心血管疾病，包括1至3支冠狀動脈疾病。
一般地說，所述心血管疾病為退行性血管疾病，更通常為動脈粥樣硬化。
具體地說，本發(fā)明的方法可以用于治療患有動脈粥樣硬化(經(jīng)血管造影術(shù)確定)的個體，該類患者具有較少或廣泛的冠狀動脈粥樣硬化但在臨床上是穩(wěn)定的，該方法還可以用于治療具有與近期心肌梗塞或不穩(wěn)定型心絞痛有關(guān)的不穩(wěn)定型臨床疾病的動脈粥樣硬化患者。
優(yōu)選通過測定循環(huán)T細(xì)胞來評價T細(xì)胞應(yīng)答。但是，可以理解，也可以通過測定具體的T細(xì)胞應(yīng)答的任何特征性細(xì)胞因子標(biāo)志來評價T細(xì)胞應(yīng)答，如對于Th1型應(yīng)答，測定干擾素-γ或白介素-12，對于Th2型應(yīng)答，則測定白介素-4和/或白介素-13。
本發(fā)明的范圍也包括用于在此所述的方法的組合物。而且，本發(fā)明還具體包括在此所述的藥物在生產(chǎn)用于給予個體以預(yù)防或治療心血管疾病的藥物或治療用組合物中的用途。
另外，本發(fā)明也提供了用于本發(fā)明的診斷或評價方法中的試劑盒。試劑盒可以包括例如一種或多種用于進(jìn)行測定的試劑，如抗體、緩沖劑、對照和使用說明。
下面將參照本發(fā)明的多個優(yōu)選的非限定性實施方案對本發(fā)明的特點和優(yōu)點進(jìn)行描述。
本發(fā)明優(yōu)選實施方案的詳述人們觀察到，大量動脈粥樣硬化的存在導(dǎo)致血液中IL-4水平升高，同時伴隨IFN-γ水平下降。這種細(xì)胞因子平衡的改變是向Th2型應(yīng)答發(fā)生偏移的指標(biāo)，可以用于動脈粥樣硬化的診斷中。該觀察結(jié)果也為目的在于使T細(xì)胞應(yīng)答向Th1型應(yīng)答發(fā)生轉(zhuǎn)變的治療方法提供了堅實的基礎(chǔ)，因此，對于預(yù)防和/或治療具有相似發(fā)病機理的冠狀動脈疾病和其他心血管疾病(包括動脈粥樣硬化)是有益的。
包括在此的可能的治療用制劑的一個示例為包括益生菌(如乳酸菌)的制劑，它們可以趨使細(xì)胞因子平衡恢復(fù)為Th1型應(yīng)答，并因此減緩心血管疾病的進(jìn)展、預(yù)防心血管疾病的發(fā)作或逆轉(zhuǎn)心血管疾病。但是，其他藥物和組合物，如在下面描述的能使Th2型應(yīng)答轉(zhuǎn)換為Th1型應(yīng)答的細(xì)菌佐劑也可以用于在此所述的疾病的治療中。
檢測循環(huán)的T細(xì)胞中是否存在Th2偏離的任何直接或間接的方法，如監(jiān)測這種偏離的下游作用，如肺炎衣原體或幽門螺旋桿菌(但不限于這些病原體)的抗體產(chǎn)生中發(fā)生的IgG亞類改變或IgG亞類特異性抗體改變，均可用作冠狀動脈疾病的指標(biāo)。例如，當(dāng)細(xì)胞因子分布型向Th2偏移時，IgG2含量相對較低。所以，總IgG2亞類免疫球蛋白或IgG2亞類特異性抗體，如肺炎衣原體或幽門螺旋桿菌的特異性抗體之比發(fā)生改變(或為低水平)表示發(fā)生了“促進(jìn)動脈粥樣硬化的”細(xì)胞因子的偏離。
情況確是如此，可以通過檢測免疫球蛋白如IgG2亞類抗體的水平，并與參比水平或之比比較，從而評價個體是否易感心血管疾病(如動脈粥樣硬化)或者已患有該種疾病。適合的參比水平或之比通常是基于由健康個體獲得的相應(yīng)的值，一般而言，包括根據(jù)常規(guī)的方法學(xué)由代表性群體獲得的平均值。
此外，屬于本發(fā)明范圍的預(yù)防、治療或逆轉(zhuǎn)動脈粥樣硬化的方法還包括能夠使細(xì)胞因子平衡向Th1型應(yīng)答方向偏移或改變的任何治療方法，如給予益生菌(特別是乳酸菌屬)。例如，嗜酸乳桿菌可以減量調(diào)節(jié)脾T細(xì)胞(即循環(huán)細(xì)胞)分泌IL-4并增量調(diào)節(jié)脾T細(xì)胞分泌INF-γ，并因此可以用于治療動脈粥樣硬化和其他此類心血管疾病。其他治療方法包括給予抑制Th2細(xì)胞因子分泌或抑制這些因子的作用的任何因子，和/或能夠促進(jìn)Th1型細(xì)胞因子如INF-γ的分泌或活性的任何治療方法。
對于本領(lǐng)域技術(shù)人員而言，顯而易見，本發(fā)明還包括下列治療方法，即可以特異性調(diào)節(jié)循環(huán)T細(xì)胞分泌的細(xì)胞因子的水平或分布型的任何治療方法，上述T細(xì)胞特別對抗原(如肺炎衣原體或幽門螺旋桿菌)或非特異性活化因子(如多克隆活化劑、內(nèi)毒素或超抗原)有活性。
而且，也可以采用聯(lián)合治療方法，將益生菌或其他能夠使細(xì)胞因子平衡向Th1型應(yīng)答方向改變的藥物與旨在改變“危險因素”的現(xiàn)有治療方法(如降脂藥、抗高血壓藥等)聯(lián)合。多種其他因素(如血脂、糖尿病、高血壓、吸煙)均可以引起動脈粥樣硬化，因此本發(fā)明還包括將改變細(xì)胞因子平衡的治療方法與治療所述疾病誘因的方法聯(lián)合。
一般而言，由個體獲得樣品，評價T-細(xì)胞的細(xì)胞因子分布型和/或T-細(xì)胞應(yīng)答。該樣品可以是全血樣本、全血的細(xì)胞組分、分離的細(xì)胞或者為如適合測定的活組織切片樣本。
微生物可以選自細(xì)菌和酵母株，包括酵母屬亞種，如釀酒酵母和酵母菌。優(yōu)選所述細(xì)菌為益生菌。另外，可以使用所述微生物的組分、超聲處理產(chǎn)物、提取物或分泌物或混合物。提取物包括例如細(xì)胞壁組分。所述微生物的組分可以包括抗原，如由本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的酶處理方法獲得的抗原性肽等。
細(xì)菌可以選自(但不限于)乳酸菌屬、乳酸菌、分枝桿菌屬和雙歧桿菌屬。還更優(yōu)選使用嗜酸乳桿菌、發(fā)酵乳桿菌或母牛分枝桿菌，或其能夠誘導(dǎo)Th1細(xì)胞應(yīng)答的組分、提取物、超聲處理產(chǎn)物、分泌物或其混合物。特別優(yōu)選嗜酸乳桿菌、發(fā)酵乳桿菌或母牛分枝桿菌，它們可以以活的形式使用，也可以以滅活的制劑形式使用，只要它們能夠誘導(dǎo)所需的Th1型T-細(xì)胞應(yīng)答即可。
優(yōu)選以活的制劑形式使用嗜酸乳桿菌和發(fā)酵乳桿菌。也可以使用其他的細(xì)菌(無論它們是否具有益生作用)，例如公知的輔助細(xì)菌，如干酪乳桿菌、植物乳桿菌、鼠李糖乳桿菌(L.rhamnosus)、短雙歧桿菌等。
可以根據(jù)心血管疾病的性質(zhì)和嚴(yán)重程度、是否給予用于預(yù)防或治療的藥物以及所涉及的微生物的類型來調(diào)整給予個體的微生物或提取物等的劑量。本領(lǐng)域的技術(shù)人員可以容易地確定治療參數(shù)以及所需的劑量。
優(yōu)選微生物或含微生物的組合物為片劑或膠囊劑。但是，對于本領(lǐng)域技術(shù)人員而言，很明顯也可以以液體或其他固體制劑形式提供微生物。具體而言，所述微生物也可以以食物的形式提供，如以酸奶形式或其他乳制品形式，或者以類似的非乳制品形式，如豆制品形式提供。
通常以一定的間隔、通常為每天經(jīng)口給予微生物等，一般而言，所述治療可以持續(xù)數(shù)月或更長時間。優(yōu)選以每天log3至log12的劑量給予微生物。當(dāng)以活的全菌的形式給予時，益生菌的劑量可以為約1×108-1×1012個微生物。
但是，在本發(fā)明的方法中也可以使用其他能夠增量調(diào)節(jié)Th1型T-細(xì)胞應(yīng)答的特征性細(xì)胞因子分布型的藥物。本領(lǐng)域的技術(shù)人員根據(jù)在此給出的教導(dǎo)，通過常規(guī)試驗可以容易地確定此類其他藥物。此類藥物可以包括例如抗體及其結(jié)合片段。
就此而言，發(fā)明人發(fā)現(xiàn)，動脈粥樣硬化患者血液T-細(xì)胞分泌的IL-4的量與冠狀動脈疾病的程度有關(guān)。這種相關(guān)性與發(fā)明人關(guān)于T-細(xì)胞介導(dǎo)的炎性反應(yīng)是由CD40L通過一系列結(jié)構(gòu)性和循環(huán)的細(xì)胞(包括血小板)上的CD40連接到CD4+T-細(xì)胞上引起的這一觀察結(jié)果相符。具體而言，由于CD40L是通過血小板上表達(dá)的CD40連接到激活的CD4+T-細(xì)胞上的，因此血小板似乎是產(chǎn)生IL-4的重要因子。
因此，給予能夠抑制CD40L與CD40(如抗體、特別是抗-CD40抗體或其結(jié)合片段)連接的藥物可以改變患者的Th2型應(yīng)答的特征性細(xì)胞因子分布型。結(jié)合片段是指保留了抗體的結(jié)合能力的抗體片段，分別包括通過木瓜蛋白酶或胃蛋白酶進(jìn)行蛋白酶剪切獲得的Fab和(Fab′)2片段。另外，也可以給予本領(lǐng)域人員已知的CD40的其他配體或其肽片段，以相對于Th2型T細(xì)胞應(yīng)答而言對Th1型T細(xì)胞應(yīng)答進(jìn)行所需的增量調(diào)節(jié)。根據(jù)所附的實施例中公開的方法可以容易地鑒定適當(dāng)?shù)呐潴w和藥物。可以通過靜脈、肌內(nèi)或皮下或其他適當(dāng)?shù)耐緩浇o予此類藥物。
可以將此類藥物和其他藥物(如微生物提取物和超聲處理產(chǎn)物等)配成藥用組合物用于對所需個體給藥，該組合物中可以加入藥學(xué)上可接受的載體、稀釋劑和/或賦形劑。一般而言，此類活性藥物的劑量與其常規(guī)的治療方案相符，通常要考慮年齡、體重、所治療的疾病的性質(zhì)和個體的整體健康狀況，這是本領(lǐng)域技術(shù)人員可以理解的。
藥物形式包括適合于注射的水溶液和適合于現(xiàn)場制備注射溶液的粉劑。此類可注射組合物必須具有一定的流動性以可以用于注射，并且通常而言具有穩(wěn)定性以使得在生產(chǎn)后可以儲存。載體可以是含有乙醇、多元醇(如甘油、丙二醇、液體聚乙二醇等)、植物油中的一種或多種及其適合的混合物的溶劑或分散介質(zhì)。通過使用包衣物(如卵磷脂)、在為分散液的情況下維持所需的顆粒大小和加入表面活性劑來保持流動性。
一般而言，可以通過將所需量的活性物質(zhì)加至含有上述各種組分的適當(dāng)溶劑中來制備注射溶液。一般地講，可以通過將所述活性物質(zhì)加至含有分散介質(zhì)和其他組分的載體中來制備分散液。如果是制備注射用溶液的粉劑，那么優(yōu)選的方法是真空干燥和冷凍干燥方法，籍此可以得到活性組分的粉末。
用于口服給藥時，可以將藥物在口服可接受的適當(dāng)?shù)妮d體中配制。具體而言，可以用惰性稀釋劑、可同化的食用載體配制活性組分，或者將活性組分包囊于硬殼或軟殼的明膠膠囊中。另外，還可以將活性組分直接加至上述的食品中。而且，可以以咀嚼片劑、錠劑、膠囊劑、酏劑、混懸劑、糖漿劑等的形式使用活性組分。
本發(fā)明的組合物中也可以加入一種或多種適當(dāng)?shù)姆栏瘎?，如山梨酸。在許多情況下，組合物中還可以包括等滲劑如糖或氯化鈉。
片劑、錠劑、小丸、膠囊劑等也可以含有一種或多種下列物質(zhì)粘合劑，如黃蓍膠、阿拉伯樹膠、玉米淀粉或明膠；賦形劑，如磷酸二鈣；崩解劑，如玉米淀粉、馬鈴薯淀粉、藻酸等；潤滑劑，如硬脂酸鎂；甜味劑，如蔗糖、乳糖或糖精，或矯味劑。如果劑型為膠囊，那么除一種或多種上述組分外，還可以含有液體載體?？梢源嬖谟米靼挛锘蛴糜诟淖儎┝繂挝坏耐庑蔚钠渌M分。例如，可以用蟲膠、糖或兩者對片劑、小丸或膠囊進(jìn)行包衣。另外，也可以將活性組分制成任何適當(dāng)?shù)木忈屩苿?br> 藥學(xué)上可接受的載體、稀釋劑和/或賦形劑包括任何合適的常規(guī)已知溶劑、分散介質(zhì)和等滲的制劑或溶液。此類組分和藥物活性物質(zhì)的介質(zhì)的應(yīng)用是公知的。只要常規(guī)的介質(zhì)或物質(zhì)與活性組分相容，便可以將它們用于本發(fā)明的治療和預(yù)防組合物中。需要時，也可以將其他的活性組分加至組合物中。
可以理解，考慮到準(zhǔn)備采用的給藥方式，組合物中的藥物的量應(yīng)足以向個體遞送適當(dāng)?shù)挠行┝俊?br> 在本文中，單位劑量形式是指適于以單位劑量的形式向待治療個體給藥的物理上可分的單位，每單位中含有計算出的可產(chǎn)生所需治療或預(yù)防作用的預(yù)定量的活性組分以及相應(yīng)的載體、稀釋劑和/或賦形劑。
可以在進(jìn)行抗生素治療或用其他活性藥物進(jìn)行治療之前、同時或之后，將所述藥物和一種或多種抗生素或一種或多種用于治療心血管疾病或使所述疾病惡化的病癥的其他藥學(xué)活性物質(zhì)聯(lián)合給藥。實施例實施例1乳桿菌屬抑制IL-4分泌為了測定乳桿菌屬是否能夠調(diào)節(jié)IL-4的產(chǎn)生，將增加劑量的發(fā)酵乳桿菌(得自澳大利亞悉尼的新南威爾士大學(xué)微生物學(xué)和免疫學(xué)學(xué)院的培養(yǎng)物保藏中心的VRI 002株)加至培養(yǎng)基中，該培養(yǎng)基中含有等體積的得自正常健康個體的肝素化全血和不含AIM-V血清的培養(yǎng)基。對照培養(yǎng)物則僅含有培養(yǎng)基。用Con A(5μg/ml)刺激所有的培養(yǎng)物。溫育24小時后，通過捕獲IL-4 ELISA測定IL-4的分泌量。如

圖1所示，發(fā)酵乳桿菌以劑量依賴方式抑制IL-4的分泌，劑量為2×105個細(xì)菌/培養(yǎng)物時抑制響應(yīng)最大。該數(shù)據(jù)表明，發(fā)酵乳桿菌可以有效對與Th2型應(yīng)答有關(guān)的IL-4介導(dǎo)的炎性反應(yīng)進(jìn)行減量調(diào)節(jié)。實施例2益生菌對Th1/Th2型細(xì)胞因子應(yīng)答的作用為了測定益生菌是否可以對Th2型細(xì)胞因子應(yīng)答產(chǎn)生減量調(diào)節(jié)并對Th1型細(xì)胞因子應(yīng)答產(chǎn)生增量調(diào)節(jié)，用進(jìn)食針將各種劑量的嗜酸乳桿菌(得自澳大利亞悉尼的新南威爾士大學(xué)微生物學(xué)和免疫學(xué)學(xué)院的培養(yǎng)物保藏中心的VRI001株)對C57/B16小鼠進(jìn)行胃內(nèi)給藥，每日給藥，連續(xù)兩周，此后用在0.2mL磷酸鹽緩沖液中的8μg卵清蛋白(OVA)和氫氧化鋁腹膜內(nèi)給藥致敏。隨后繼續(xù)給予嗜酸乳桿菌十次，每兩天給藥一次，連續(xù)兩周，然后將小鼠處死。通過過篩分離脾臟淋巴細(xì)胞，用PBS洗滌，將其以10×106個細(xì)胞/ml培養(yǎng)基的濃度重新懸浮。
然后將每份1mL的細(xì)胞懸浮液分配至24孔平底微量滴定板的各孔中，用OVA(5μg/mL)刺激。溫育4天后，收集上清液，采用標(biāo)準(zhǔn)ELISA方法，用IL-4或IFN-γ單克隆抗體對測定IL-4和IFN-γ的產(chǎn)生量。
簡言之，用捕獲抗-IL-4抗體對24孔微量滴定板的各孔進(jìn)行包被。于室溫下溫育1小時后，洗滌各孔并向各孔中加入生物素化的抗-IL-4抗體。再溫育1小時，洗滌各孔，向各孔中加入鏈霉抗生物素-過氧化物酶結(jié)合物。溫育30分鐘后，洗滌各孔，然后加入TMB底物。在ELISA讀板儀上于450/620nm處讀取光密度。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線，采用插入法對未知樣品中的IL-4進(jìn)行定量。采用類似的方法測定IFN-γ。
結(jié)果示于圖2A和圖2B中。由圖2A可以看出，給予嗜酸乳桿菌以劑量依賴的方式抑制IL-4產(chǎn)生，而圖2B則表明IFN-γ的產(chǎn)生增加。因此，全血中IL-4分泌量的增加與冠狀動脈疾病患者中疾病的嚴(yán)重程度有關(guān)。實施例3個體的選擇和測試3.1個體.根據(jù)血管造影術(shù)研究，對John Hunter Hospital(紐卡斯，澳大利亞)提供的個體進(jìn)行選擇。記錄危險因素(脂質(zhì)、高血壓、糖尿病、吸煙、家族史)。分為下列各組(a)很輕的冠狀動脈粥樣硬化(n＝100)；(b)伴有穩(wěn)定型臨床疾病的廣泛的冠狀動脈粥樣硬化(涉及三個主要血管的＞50％)(n＝100)，和(c)伴有不穩(wěn)定型臨床疾病的廣泛的冠狀動脈粥樣硬化(n＝100)(近期有心肌梗塞或不穩(wěn)定型心絞痛)。
在血管造影術(shù)后從選擇的個體取血(20ml)進(jìn)行抗體和T細(xì)胞研究。在JohnHunter Hospital(紐卡斯，澳大利亞)進(jìn)行的血管造影術(shù)研究的數(shù)目約為30-40個/周，其分布約為10-15％具有正常的動脈或具有較輕的疾病，20-30％具有三支動脈疾病，這其中約三分之一具有不穩(wěn)定型臨床疾病，三分之二具有穩(wěn)定型臨床疾病。
3.2抗-衣原體肺炎抗體.通過微量免疫熒光試驗測定肺炎衣原體特異性抗原的免疫球蛋白IgG(Chlamydia-cel Pn試劑盒，CeLLabs Pty Ltd，澳大利亞)，從而測定抗體。采用特異性IgG亞類抗血清測定IgG亞類抗體。
3.3 T-細(xì)胞增殖.在96孔圓底微量滴定板上一式三份對全血淋巴細(xì)胞培養(yǎng)物進(jìn)行測定。用不含AIM-V血清的培養(yǎng)基以1∶1(v/v)稀釋肝素化血液，所述培養(yǎng)基中含有含量逐漸增加的根據(jù)下面所述方法制備的肺炎衣原體原體(EB)(0.1、1.0、10μg/ml)。另外再用沙眼衣原體(C.trachomatis)或EB抗原(0.1、1.0、10μg/ml)作為“不相關(guān)”抗原對照對所有的個體進(jìn)行刺激。于37℃、在5％CO2環(huán)境中培養(yǎng)5天后，加入氚標(biāo)胸腺嘧啶脫氧核苷(0.5μCi/培養(yǎng)物)，再培養(yǎng)6小時，然后收獲并計數(shù)。
3.4細(xì)胞因子的產(chǎn)生.采用基于細(xì)胞因子的全血測定方法檢測EB活性T細(xì)胞。在96孔圓底微量滴定板中用AIM-V培養(yǎng)基以1∶1(v/v)稀釋肝素化血液，所述培養(yǎng)基中含有各種濃度的EB抗原，或者不含有該抗原。為了測定產(chǎn)生的IL-4，用捕獲單克隆抗IL-4抗體(Endogen，CSL)預(yù)包被部分孔。將培養(yǎng)物在37℃、5％CO2環(huán)境中培養(yǎng)24-48小時，然后收集血漿上清液，用于IL-2、IL-10和IFN-γ測定(Endogen試劑盒，CSL)。根據(jù)測定試劑盒中的說明，洗滌并加入顯色抗-IL-4抗體后，直接測定各孔中捕獲的IL-4的含量和各標(biāo)準(zhǔn)品的含量。已經(jīng)對用于測定抗原活性T細(xì)胞和細(xì)胞因子產(chǎn)生分布型的全血測定法進(jìn)行了驗證使其可以用于被幽門螺旋桿菌感染的患者的研究中。
3.5由肺炎衣原體制備原體.使由P Saikku教授(University of Helsinki，芬蘭)提供的適應(yīng)HeLa細(xì)胞229的肺炎衣原體Kajaani株在含有RPMI 1640培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中、于37℃、5％CO2濕化環(huán)境中在HeLa細(xì)胞中生長，所述培養(yǎng)基中補充有5％胎牛血清(FCS)和鏈霉素。3天后，由培養(yǎng)的細(xì)胞中分離衣原體原體。用無菌刮刀使細(xì)胞由培養(yǎng)瓶剝離，洗滌并懸浮于磷酸鹽緩沖液(PBS)中，超聲使包含體破裂。離心去除細(xì)胞碎片，于30,000g超速離心收集EB材料。將該EB材料懸浮于PBS中并鋪層于30-60％Nycodenz溶液(Nycomed，Norway)上。離心后，收集60％梯度以上的EB材料，洗滌并用1％甲醛滅活24小時。充分洗滌，將EB材料懸浮于PBS中，測定蛋白濃度(Pierce蛋白試劑盒)。將由Saikku教授和其同事處獲得的EB抗原用作對照。用類似的方法從沙眼衣原體(仍由PSaikku教授提供樣品)制備原體抗原。
3.6特異性克隆的蛋白.使用Saikku博士和Makela博士(芬蘭，見上)提供的肺炎衣原體克隆抗原進(jìn)行細(xì)胞因子平衡測定(見上)。所述克隆抗原包括枯草芽孢桿菌(B.subtilis)中產(chǎn)生的重組蛋白MOMP、OMP2和HSP60。測定濃度為1μg/ml。
具體而言，自冠狀動脈粥樣硬化患者收集肝素化全血，這些患者為肺炎衣原體血清陽性(n＝17)或血清陰性(n＝27)。如上所述于37℃培養(yǎng)過夜后，通過捕獲ELISA測定分泌的IL-4，同時測定血漿上清液中的IFN-γ。
如圖3A和3B所示，與有輕度或1支血管疾病的個體相比，在有2至3支冠狀血管疾病的個體中檢測到了較高的IL-4水平。在正常個體中，未檢測到IL-4或IL-4的水平很低。與血清陰性個體、特別是具有1支血管疾病的個體相比，在肺炎衣原體血清陽性的個體中，具有1-3支血管疾病的個體分泌更多的IL-4，這表明IL-4分泌的增加與感染狀態(tài)有關(guān)。但是，在所有研究的個體中，IL-4分泌并不依賴于培養(yǎng)物中肺炎衣原體抗原的刺激，這表明IL-4的自發(fā)產(chǎn)生是由體內(nèi)激活的T-細(xì)胞所致，這些激活的T細(xì)胞對培養(yǎng)物中其他抗原刺激不再發(fā)生應(yīng)答。將由44名患者獲得的數(shù)據(jù)結(jié)合觀察發(fā)現(xiàn)其結(jié)果相似，即全血培養(yǎng)物中分泌的IL-4水平與疾病的程度有關(guān)而與抗原刺激無關(guān)。實施例4T淋巴細(xì)胞的自發(fā)激活截然不同的是，IL-4和IFN-γ的分泌產(chǎn)生呈相反關(guān)系(參見圖4A和4B)。但是，IFN-γ水平與疾病的嚴(yán)重性之間無相關(guān)性，這表明動脈粥樣硬化中的炎性反應(yīng)受CD4+Th2輔助細(xì)胞介導(dǎo)的炎性反應(yīng)驅(qū)動，同時增量調(diào)節(jié)IL-4。
具體而言，細(xì)胞因子自發(fā)產(chǎn)生的結(jié)果表明，在具有“正?！惫跔钛茉煊暗膫€體和具有2或3支血管疾病(表示“高負(fù)荷”動脈粥樣硬化)的個體之間存在顯著差異，那些定義為輕度或較少冠狀動脈粥樣硬化的個體IL-4的產(chǎn)生量處于中等。就INF-γ而言，在正常個體和“檢測有動脈粥樣硬化”的個體之間存在差異，正常個體INF-γ水平較高。較輕患者和嚴(yán)重動脈粥樣硬化患者的INF-γ水平間的差異不像IL-4的差異那么顯著。總而言之，這些結(jié)果清楚地表明，Th1-Th2平衡的偏移與動脈粥樣硬化的量有關(guān)。
由此可以得出結(jié)論，具有傾向于對T細(xì)胞的刺激物產(chǎn)生Th2型細(xì)胞因子應(yīng)答的“系列因素(set)”的個體血管壁中過量的動脈粥樣硬化集聚是由于Th2型T細(xì)胞相關(guān)的炎性途徑激活所致。由于在此測定的細(xì)胞因子是由全血培養(yǎng)物中的T細(xì)胞自發(fā)分泌的，因此激活在體內(nèi)就已經(jīng)發(fā)生了。刺激物包括多克隆激活劑(如由腸道菌群產(chǎn)生的內(nèi)毒素)、超抗原(如，來自克隆細(xì)菌)、自身抗原(包括斑塊或血管壁內(nèi)的抗原)或特異性抗原，特別是來自與宿主具有克隆或寄生關(guān)系的微生物(如肺炎衣原體、幽門螺旋桿菌、非典型性流感嗜血桿菌等)的抗原。后者與是“與具體的微生物無關(guān)的慢性感染”而不是具有獨特的抗原作用的肺炎衣原體是動脈粥樣硬化進(jìn)展的“危險因素”這一觀點相符(Groyston JT，Kuo Coulson AS等，Circulation(1995)923397-3400；Bachmaier K，Neu N等，Science(1999)2831335-1339；Mejer D，Derby LE等，JAMA(1999)18272-277)。另外，圖3A和3B中的數(shù)據(jù)表明，用肺炎衣原體抗原刺激的培養(yǎng)物中“Th2偏移”具有增大的傾向與免疫系統(tǒng)的“Th2系列”、特別是微生物可以增強向Th2型應(yīng)答的轉(zhuǎn)換并因此進(jìn)一步發(fā)展為動脈粥樣硬化斑這一觀察結(jié)果相符。循環(huán)細(xì)胞可與動脈粥樣硬化斑中的細(xì)胞發(fā)生相互交換。因此，慢性感染可以使具有顯著動脈粥樣硬化的個體的Th2偏離更加嚴(yán)重。但是，目前由衣原體感染或未感染的個體獲得的數(shù)據(jù)表明Th2細(xì)胞因子的基本“系列因素”與衣原體感染無關(guān)(如上所述，盡管感染可能使偏離更加嚴(yán)重)。
該項研究支持下面這樣一個結(jié)論T淋巴細(xì)胞自發(fā)激活的類型通常與動脈粥樣硬化、特別是冠狀動脈粥樣硬化的量有關(guān)。實施例5給予乳桿菌對進(jìn)食高膽固醇飲食的小鼠動脈粥樣硬化的影響通過測定小鼠主動脈竇(根)脂肪紋的形成來評價高膽固醇飲食對動脈粥樣硬化進(jìn)展的影響。
食物含有下列組分g/100g蔗糖 51.3酪蛋白(酸)20.0
菜籽油1.00可可脂15.00纖維素5.10DL-甲硫氨酸 0.30AIN93G礦物質(zhì) 3.50AIN93G維生素 1.00氯化膽堿50％w/w 1.00膽酸鈉0.50膽固醇1.00DLα-生育酚乙酸酯 0.26簡言之，給予C57/B16雄性小鼠(8周齡)高膽固醇食物(HCD)或不含膽固醇的正常食物，并使其可以自由飲水。使各組小鼠(n＝10)進(jìn)食HCD一周，然后根據(jù)給藥方案給予含有發(fā)酵乳桿菌(VRI 002)的食物。每周經(jīng)口-胃給予3次200μl洗滌過的來自重新懸浮的過夜培養(yǎng)物的細(xì)菌懸浮液樣本，終濃度為log9.5-log10.5個微生物。對照小鼠則僅給予200μl鹽水。5周后，用0.1mL在不完全弗氏佐劑中乳化的5mg/mL殺死的結(jié)核分枝桿菌(Mycobacterium tuberclosis，MT，Difco)經(jīng)皮下注射對兩組小鼠進(jìn)行免疫。該免疫步驟的原理是基于這樣一個近期報道，該報道表明用殺死的細(xì)菌進(jìn)行免疫使免疫系統(tǒng)激活可以導(dǎo)致主動脈竇加速形成脂肪紋(George J等，Ateriosclerosis，Thrombosis and Vascular Biology，1999，19505-510)。
在用HCD和益生菌進(jìn)行處理后7周，將所有的小鼠處死。通過心臟穿刺取血。將心臟全部取出，剝離含有主動脈竇(根)的上面部分，在10％福爾馬林的PBS溶液中固定。在福爾馬林/PBS中固定過夜后，將組織浸于OCT培養(yǎng)基中并冷凍，然后在恒冷切片機中切片。取6-7片(8-10μm厚)，用油紅O染色。由不知情的觀察者對每一切片的損傷區(qū)打分。根據(jù)形成的脂肪紋，采用0-5的損傷評分系統(tǒng)。如圖5A所示，僅進(jìn)食HCD的小鼠比用乳桿菌處理的小鼠形成更多的脂肪紋。采用MT對小鼠進(jìn)行免疫獲得了類似的結(jié)果(參見圖5B)，盡管在這些小鼠中損傷的數(shù)目較未免疫的組少，這表明免疫可以限制動脈粥樣硬化形成。實施例6冠狀動脈疾病患者全血培養(yǎng)物中IL-4產(chǎn)生的量受抗-CD40單克隆抗體的抑制由冠狀動脈疾病患者收集肝素化血液并在用抗IL-4抗體包被的96孔平底培養(yǎng)板中用等體積的含有梯度濃度抗CD40L抗體的不含血清的AIM-V培養(yǎng)基(總體積為300μL)培養(yǎng)。對照培養(yǎng)物僅含有培養(yǎng)基或者小鼠IgG1同型對照物。培養(yǎng)24小時后，經(jīng)捕獲ELISA測定法檢測分泌的IL-4的量。如圖6所示，與對照相比，抗-CD40抗體以劑量依賴的方式抑制IL-4的產(chǎn)生(p＜0.05，9名患者)，而加入小鼠IgG1同型對照物或抗-CD40L抗體(數(shù)據(jù)未示出)沒有作用。該結(jié)果表明，CD40對于全血培養(yǎng)物中IL-4的產(chǎn)生至關(guān)重要。
盡管前面已參照優(yōu)選的實施方案對本發(fā)明進(jìn)行了描述，但是本領(lǐng)域的技術(shù)人員可以理解，在不偏離本發(fā)明的范圍的情況下，可以對本發(fā)明進(jìn)行多種改變和修改。
權(quán)利要求
1.預(yù)防或治療心血管疾病的方法，該方法包括給予需要此類治療的個體有效量的一種或多種藥物，以相對于與所述疾病有關(guān)的Th2型T-細(xì)胞應(yīng)答的細(xì)胞因子分布型而言，對Th1型T-細(xì)胞應(yīng)答的特征性細(xì)胞因子分布型進(jìn)行增量調(diào)節(jié)。
2.權(quán)利要求1的方法，該方法包括使Th2型T-細(xì)胞應(yīng)答的特征性細(xì)胞因子分布型轉(zhuǎn)換為Th1型應(yīng)答的特征性細(xì)胞因子分布型。
3.權(quán)利要求1或2的方法，該方法包括給予能夠在個體中增量調(diào)節(jié)Th1型T-細(xì)胞應(yīng)答并抑制Th2型T-細(xì)胞應(yīng)答的藥物。
4.權(quán)利要求1或2的方法，該方法包括給予能夠在個體中增強Th1型T-細(xì)胞應(yīng)答的特征性細(xì)胞因子的作用并抑制Th2型應(yīng)答的特征性細(xì)胞因子的作用的藥物。
5.權(quán)利要求1的方法，該方法包括給予能夠在個體中增量調(diào)節(jié)Th1型T-細(xì)胞應(yīng)答的藥物。
6.權(quán)利要求1的方法，該方法包括給予能夠在個體中增強Th1型T-細(xì)胞應(yīng)答的特征性細(xì)胞因子的作用的藥物。
7.權(quán)利要求1的方法，該方法包括給予能夠在個體中抑制Th2型T-細(xì)胞應(yīng)答的藥物。
8.權(quán)利要求1的方法，該方法包括給予能夠在個體中抑制Th2型T-細(xì)胞應(yīng)答的特征性細(xì)胞因子的作用的藥物。
9.權(quán)利要求1-8中任何一項的方法，其中所述的一種或多種藥物包括微生物或其組分、提取物、超聲處理產(chǎn)物或分泌物，或者為前述部分物質(zhì)或全部物質(zhì)的混合物。
10.權(quán)利要求9的方法，其中所述提取物包括微生物的細(xì)胞壁成分。
11.權(quán)利要求9或10的方法，其中所述微生物選自酵母和細(xì)菌。
12.權(quán)利要求11的方法，其中所述微生物為益生菌。
13.權(quán)利要求12的方法，其中所述益生菌選自乳桿菌屬和分枝桿菌屬。
14.權(quán)利要求13的方法，其中所述乳桿菌屬能夠在個體中抑制Th2應(yīng)答并降低膽固醇水平。
15.權(quán)利要求12的方法，其中所述益生菌選自嗜酸乳桿菌、發(fā)酵乳桿菌和母牛分枝桿菌。
16.權(quán)利要求11的方法，其中所述微生物選自干酪乳桿菌、植物乳桿菌、鼠李糖乳桿菌和短雙歧桿菌。
17.權(quán)利要求11-16中任何一項的方法，其中所述微生物是活的微生物。
18.權(quán)利要求1-17中任何一項的方法，該方法包括除給予所述個體用于增量調(diào)節(jié)Th1型T-細(xì)胞應(yīng)答的特征性細(xì)胞因子分布型的藥物外，還給予個體至少一種有效量的用于治療的藥物活性物質(zhì)。
19.權(quán)利要求18的方法，其中所述的藥物活性物質(zhì)選自降脂藥、抗高血壓藥和抗糖尿病藥。
20.權(quán)利要求18或19的方法，其中在給予個體所述藥物活性物質(zhì)之前、同時或之后給予所述用于增量調(diào)節(jié)Th1型T-細(xì)胞應(yīng)答的特征性細(xì)胞因子分布型的藥物。
21.權(quán)利要求1-20中任何一項的方法，其中與疾病有關(guān)的Th2型T-細(xì)胞應(yīng)答由于細(xì)菌感染、細(xì)菌性抗原、多克隆激活劑、超抗原或自身抗原而加劇。
22.權(quán)利要求20的方法，其中所述感染為肺炎衣原體、幽門螺旋桿菌或非典型性流感嗜血桿菌引起的感染，或者所述細(xì)菌性抗原來自肺炎衣原體、幽門螺旋桿菌或非典型性流感嗜血桿菌。
23.權(quán)利要求1-22中任何一項的方法，其中所述心血管疾病選自具有穩(wěn)定型或不穩(wěn)定型臨床疾病的動脈粥樣硬化疾病。
24.診斷或評價心血管疾病的易感性的方法，該方法包括評價個體的T-細(xì)胞應(yīng)答，其中Th2型T-細(xì)胞應(yīng)答的增量調(diào)節(jié)和/或Th1型T-細(xì)胞應(yīng)答的抑制為易感或存在所述疾病的指標(biāo)。
25.權(quán)利要求24的方法，該方法包括測定所述個體中是否存在Th2型T-細(xì)胞應(yīng)答的增量調(diào)節(jié)和Th1型T-細(xì)胞應(yīng)答的抑制。
26.權(quán)利要求24的方法，其中所述評價包括測定Th1型T-細(xì)胞應(yīng)答的一種或多種特征性細(xì)胞因子的活性或產(chǎn)生是否受到抑制和/或Th2型T-細(xì)胞應(yīng)答的一種或多種特征性細(xì)胞因子的活性或產(chǎn)生是否得到增強。
27.權(quán)利要求26的方法，其中所述評價包括測定Th1型T-細(xì)胞應(yīng)答的一種或多種特征性細(xì)胞因子的活性或產(chǎn)生是否受到抑制以及Th2型T-細(xì)胞應(yīng)答的一種或多種特征性細(xì)胞因子的活性或產(chǎn)生是否得到增強。
28.權(quán)利要求26或27的方法，其中所述細(xì)胞因子選自IFN-y、IL-4、IL-10和IL-12。
29.權(quán)利要求24-28中任何一項的方法，其中通過分析循環(huán)的T-細(xì)胞來評價所述T-細(xì)胞應(yīng)答。
30.診斷心血管疾病或評價個體是否易感心血管疾病的方法，該方法包括(a)測定一種或多種受疾病影響的免疫球蛋白的水平從而獲得試驗數(shù)據(jù)；并(b)將試驗數(shù)據(jù)與參比數(shù)據(jù)進(jìn)行比較，籍此評價該個體是否易感心血管疾病或者患有心血管疾病。
31.權(quán)利要求30的方法，該方法包括檢測一種或多種IgG水平。
32.權(quán)利要求31的方法，該方法包括檢測總IgG2亞類的免疫球蛋白。
33.權(quán)利要求31或32的方法，該方法包括檢測IgG2亞類的特異性抗體的水平。
34.權(quán)利要求33的方法，其中所述IgG2亞類的特異性抗體是肺炎衣原體、幽門螺旋桿菌或非典型性流感嗜血桿菌的特異性抗體。
35.權(quán)利要求31的方法，其中總的IgG2亞類與IgG2亞類特異性抗體之比或總的IgG2亞類與IgG2亞類特異性抗體之比的改變是易感或存在所述疾病的指標(biāo)。
36.權(quán)利要求30-35中任何一項的方法，其中所述的心血管疾病選自具有穩(wěn)定型或不穩(wěn)定型臨床疾病的動脈粥樣硬化疾病。
全文摘要
本發(fā)明公開了預(yù)防或治療心血管疾病的方法，包括給予需要此類治療的個體有效量的一種或多種藥物，以相對于與所述疾病有關(guān)的Th2型T－細(xì)胞應(yīng)答的細(xì)胞因子分布型而言，對Th1型T－細(xì)胞應(yīng)答的特征性細(xì)胞因子分布型進(jìn)行增量調(diào)節(jié)。本發(fā)明還公開了用于該方法的組合物。
文檔編號A61P43/00GK1471402SQ01818014
公開日2004年1月28日 申請日期2001年10月25日 優(yōu)先權(quán)日2000年10月25日
發(fā)明者G·龐, G 龐, P·康威, 嘉, R·克蘭西 申請人:阿瑟羅馬斯塔特有限公司