專利名稱：一種基于H¹NMR技術分析心血管疾病代謝物的方法
技術領域：
本發(fā)明屬于生物技術領域，涉及心血管疾病。具體提供了一種基于H1NMR技術分析心血管疾病代謝物的方法。
背景技術：
心血管疾病，又稱為循環(huán)系統(tǒng)疾病，是一系列涉及循環(huán)系統(tǒng)的疾病，循環(huán)系統(tǒng)指人體內運送血液的器官和組織，主要包括心臟、血管(動脈、靜脈、微血管)，可以細分為急性和慢性，一般都是與動脈硬化有關。這些疾病都有著相似的病因、病發(fā)過程及治療方法。實際上，心血管疾病是由心臟學家、胸部外科醫(yī)生、血管外科醫(yī)生、神經(jīng)學家及介入性放射學家來治療。代謝組學的定義是定量分析機體的某一器官、組織或者細胞在特定的時間和環(huán)境中所有低分子量代謝物濃度的一種科學。近年來，由于核磁共振、高效液相色譜儀/質譜、 氣相色譜/質譜等各種高通量技術的飛速發(fā)展，代謝組學被廣泛地應用于疾病發(fā)病機制的研究中。參與外周血物質代謝是肝臟的重要生理功能之一，因此肝臟疾病可能會影響外周血或者尿液中的代謝物的變化，比如，有學者通過氣相色譜/質譜(gas chromatography/ massspectrometry)發(fā)現(xiàn)肝癌患者尿液中有103種代謝物與健康個體不同，這些物質都是潛在的肝癌標志物，還有學者通過核磁共振法也發(fā)現(xiàn)肝癌患者外周血的代謝物譜存在明顯異常。本發(fā)明提供了一種基于H1NMR技術分析心血管疾病代謝物的方法。為研究心血管疾病的診療提供了一些新的標志物，同時也為其發(fā)病機制的研究提供了新的思路。

發(fā)明內容
本發(fā)明的目的是提供一種基于H1NMR技術分析心血管疾病代謝物的方法。本發(fā)明是這樣實現(xiàn)的，主要包括如下流程步驟1，樣本收集與制備；步驟2，對原始數(shù)據(jù)進行提取、對齊與歸一化；步驟3，主成分(PCA)分析；步驟4，正交偏最小二乘法-判別分析(OPLS-DA)；步驟5，引起組間差異的代謝物的尋找；步驟6，統(tǒng)計檢驗。本發(fā)明的優(yōu)點在于本發(fā)明提供的分析方法為心血管疾病代謝物的分析研究提供了一種新途徑和方法，本方法設計合理可行，為研究PBC的診療提供了一些新的標志物，同時也為其發(fā)病機制的研究提供了新的思路。


圖1 一種基于H1NMR技術分析心血管疾病代謝物的方法流程
具體實施例方式本發(fā)明所述，一種基于H1NMR技術分析心血管疾病代謝物的方法，本發(fā)明將以原發(fā)性膽汁性肝硬化患者外周血的代謝組學分析為例，說明本方法得具體實施步驟步驟1，樣本收集與制備；所有心血管疾病患者均為首診患者，在血液標本采集前未接受任何醫(yī)學處理。步驟2，H1NMR技術檢測，對原始數(shù)據(jù)進行提取、對齊與歸一化；所有譜圖在進行傅立葉變換前均乘以增寬因子為IHz的指數(shù)窗函數(shù)以提高信噪比。使用iTopSpin軟件(V3. O,Bruker Biospin,Germany)對每個樣本的譜圖進行了傅立葉變換，相位調整，基線校正及定標(以標乳酸在1. 33ppm處的譜峰作為參比)。積分區(qū)間為 0. 5-9. Oppm，積分間距為0. 005ppm,并去掉6. 20-4. 40ppm 一段由于水峰影響的區(qū)間。對譜圖的有效信號區(qū)域進行分段積分，相對于整個譜圖的有效面積部進行歸一化處理。步驟3，主成分(PCA)分析；使用SIMCA-P+軟件(V 10.0，Umetrics AB, Umea, Sweden)對歸一化后的數(shù)據(jù)進行模式識別多變量分析，主成分分析使用中心化換算(mean centerscaling)的數(shù)據(jù)標度換算方式，并通過得分圖的形式進行了總結。 步驟4，正交偏最小二乘法-判別分析(OPLS-DA)；OPLS-DA使用自適換算(unit variance scaling)的數(shù)據(jù)標度換算方式。步驟5，引起組間差異的代謝物的尋找；找出各代謝物相應的相關系數(shù)，對有統(tǒng)計意義的代謝物進行進一步歸納。在載荷圖中，將每一個變量的載荷值與其標準差的平方根值相乘后進行數(shù)據(jù)的回溯轉換。然后與相應的相關系數(shù)臨界值表進行比對，得到引起組間差異的代謝物。步驟6，統(tǒng)計檢驗。所有數(shù)據(jù)均以均值士標準差的形式表示，臨床特征的比較中，計數(shù)資料多組數(shù)據(jù)之間的比較采用方差分析，組內比較采用LSD-t法。兩組數(shù)據(jù)的比較采用t檢驗，計量資料的比較采用卡方檢驗。所有的統(tǒng)計均在SPSS11. 0中完成，P < 0. 05被認為是有意義。本方法得特征本方法對基于H1NMR技術分析心血管疾病代謝物提供了一種新方法，為研究PBC的診療提供了一些新的標志物，同時也為其發(fā)病機制的研究提供了新的思路。以上是對本發(fā)明的描述而非限定，基于本發(fā)明思想的其它實施方式，均在本發(fā)明的保護范圍之中。
權利要求
1. 一種基于H1NMR技術分析心血管疾病代謝物的方法，其特征在于該方法包括有如下步驟步驟1，樣本收集與制備；步驟2，對原始數(shù)據(jù)進行提取、對齊與歸一化；步驟3，主成分(PCA)分析；步驟4，正交偏最小二乘法-判別分析(OPLS-DA)；步驟5，引起組間差異的代謝物的尋找；步驟6，統(tǒng)計檢驗。
全文摘要
本發(fā)明提供一種基于H1NMR技術分析心血管疾病代謝物的方法，屬于生物技術領域，涉及心血管疾病。本發(fā)明主要包括如下流程步驟1，樣本收集與制備；步驟2，對原始數(shù)據(jù)進行提取、對齊與歸一化；步驟3，主成分(PCA)分析；步驟4，正交偏最小二乘法-判別分析(OPLS-DA)；步驟5，引起組間差異的代謝物的尋找；步驟6，統(tǒng)計檢驗。本發(fā)明的優(yōu)點在于本發(fā)明提供的分析方法為心血管疾病代謝物的分析研究提供了一種新途徑和方法，本方法設計合理可行，為研究心血管疾病的診療提供了一些新的標志物，同時也為其發(fā)病機制的研究提供了新的思路。
文檔編號G01N30/86GK102323366SQ20101059909
公開日2012年1月18日 申請日期2010年12月17日 優(yōu)先權日2010年12月17日
發(fā)明者曾華宗 申請人:上海聚類生物科技有限公司