專利名稱：(十)北美黃連堿的用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及(+)北美黃連堿在制備預(yù)防和治療癡呆、促進(jìn)智力、提高耐缺氧能力的藥物中的應(yīng)用。經(jīng)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)證實(shí)，(+)北美黃連堿能夠提高東莨菪堿、戊巴比妥鈉致癡呆模型小鼠的學(xué)習(xí)記憶能力，提高正常小鼠、老齡小鼠的學(xué)習(xí)記憶能力，提高缺氧小鼠的生存時(shí)間。(+)北美黃連堿具有活性高、治療劑量毒性小的優(yōu)點(diǎn)。
背景技術(shù)：
目前我國人口的平均壽命已超過70歲。國外一項(xiàng)科學(xué)研究預(yù)測到2025年時(shí)65歲及65歲以上的老年人將達(dá)到18.8％，這個(gè)數(shù)字表明，再過20余年，每5個(gè)人中就有1個(gè)老年人。早老性癡呆癥(Alzheimer’sDisease)多發(fā)生在50余歲。因腦血管病變引發(fā)的多發(fā)性栓塞性癡呆或老年性癡呆多發(fā)生在60歲以后。可見，由于人口的老齡化，早老性癡呆癥和老年性癡呆癥的發(fā)病率也必將增加。老年人及其特有的神經(jīng)退化性疾病——各種癡呆癥要經(jīng)歷兩種死亡，首先是精神上的死亡，后是肉體上的死亡，苦不堪言，更給社會(huì)和家庭帶來沉重負(fù)擔(dān)。人口老齡化被認(rèn)為是僅次于戰(zhàn)爭，瘟疫，饑荒，資源能源短缺而影響社會(huì)發(fā)展和安定的不利因素。
癡呆(dementia)是由于腦功能障礙而產(chǎn)生的獲得性和持續(xù)性智能障礙綜合癥，智能障礙包括不同程度的記憶、語言、視空間功能、人格異常及認(rèn)知能力降低，癡呆主要包括Alzheimer病、血管性癡呆等。防治衰老和治療老年癡呆的藥物種類繁多。目前臨床上主要應(yīng)用膽堿能藥物或膽堿酯酶抑制劑來治療，輔以改善腦血管循環(huán)、腦保護(hù)劑等，效果往往不甚理想。增強(qiáng)膽堿系統(tǒng)功能的藥物中，Ach前體僅有微弱的治療作用，Ach受體激動(dòng)劑和膽堿脂酶抑制劑雖有一定效果，但作用較短暫，毒副作用較大。腦血管擴(kuò)張藥，通過改善腦血流量有助于提供能量和改善智能，但真正有價(jià)值的腦血管擴(kuò)張藥必須具有高度選擇性，不影響腦代謝，無“竊血”現(xiàn)象，有抗血小板聚集和抗血栓作用。鈣拮抗劑尼莫地平雖符合上述某些條件，但它僅作用于電壓依賴性鈣通道中的L-通道，對N型和T型鈣通道無影響。多種神經(jīng)肽和神經(jīng)生長因子曾被認(rèn)為有治療癡呆癥的希望，但臨床效果不佳，可能主要?dú)w因于這類物質(zhì)難以通過血腦屏障進(jìn)入腦內(nèi)發(fā)揮作用。2-吡咯烷酮乙酰胺(商品名腦復(fù)康)問世后，在早期文獻(xiàn)中屬?zèng)]有爭論的一類新型促智藥，近幾年來國內(nèi)外報(bào)道，該藥對各類型的記憶障礙和老年癡呆作用輕微或尚無定論，其為水溶性化合物，血腦屏障通過率低，不易集中到靶點(diǎn)發(fā)揮作用。
(+)北美黃連堿是從一種生長在我國西北地區(qū)的植物—直莖紫堇(Corydalis stricta Steph.)中提取出來的生物堿單體，易溶于酸性溶劑，用堿性溶液調(diào)整pH值不超過4時(shí)，生物活性穩(wěn)定，長期保存不出現(xiàn)沉淀。(+)北美黃連堿已經(jīng)公知(見方起程，林茂，翁慶梅，朱朝德，劉欣.紫堇屬植物生物堿的化學(xué)——青海高原四種紫堇屬植物生物堿的化學(xué)研究.藥學(xué)學(xué)報(bào)，1981，16(10)798-800.)，但是其生物活性方面的研究迄今未見報(bào)道。

發(fā)明內(nèi)容
為了克服現(xiàn)有技術(shù)的不足，本發(fā)明的目的在于提供一種如通式(I)所示的(+)北美黃連堿在制備預(yù)防和治療癡呆、促進(jìn)智力、提高耐缺氧能力的藥物中的應(yīng)用。
本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供藥物組合物，其中包括作為有效成分的如通式(I)所示的(+)北美黃連堿，和制藥領(lǐng)域中常用的載體。
本發(fā)明所述的化合物包括其衍生物、立體異構(gòu)體和藥效學(xué)上可接受的鹽。
具體講，本發(fā)明一方面涉及如通式(I)所示的化合物 (+)北美黃連堿能改善多種原因引起的學(xué)習(xí)記憶障礙。腹腔給藥0.15mg/kg(約為半數(shù)致死量的1/20)和口服給藥0.625mg/kg(約為半數(shù)致死量的1/40)，可使動(dòng)物進(jìn)入暗室觸電區(qū)的潛伏期明顯延長，出現(xiàn)的錯(cuò)誤次數(shù)明顯減少。藥理實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示在預(yù)先腹腔給于(+)北美黃連堿0.15mg/kg后再腹腔注射東莨菪堿1.0mg/kg，錯(cuò)誤的次數(shù)為0％。潛伏期完全恢復(fù)到正常組的水平，說明完全逆轉(zhuǎn)了東莨菪堿對小鼠記憶獲得的損害作用。說明(+)北美黃連堿能夠有效改善抗膽堿藥東莨菪堿導(dǎo)致的學(xué)習(xí)和記憶障礙。
同樣，對戊巴比妥鈉(Pentobarbital)引起的學(xué)習(xí)記憶障礙也有明顯的翻轉(zhuǎn)作用。在暗室試驗(yàn)中，小鼠腹腔注射(+)北美黃連堿0.15mg/kg潛伏期增長，錯(cuò)誤的次數(shù)減少，與模型組比較差異顯著。說明(+)北美黃連堿能夠有效改善戊巴比妥鈉導(dǎo)致的學(xué)習(xí)和記憶障礙，并明顯的強(qiáng)于國外上市的膽堿酯酶抑制劑他克林(Tacrine)和鈣拮抗劑尼莫地平(Nimodipine)。
在水迷宮試驗(yàn)中，口服0.625mg/kg(+)北美黃連堿的小鼠組游至平臺(tái)時(shí)間比模型組縮短，并且比正常對照組還少，錯(cuò)誤次數(shù)也比正常對照組還少。與模型組比，差異非常顯著。說明(+)北美黃連堿能夠有效改善戊巴比妥鈉導(dǎo)致的學(xué)習(xí)和記憶障礙，并優(yōu)于尼莫地平。
對于正常動(dòng)物，在水迷宮的動(dòng)物模型上也顯示了很好的增強(qiáng)學(xué)習(xí)記憶的作用。給了(+)北美黃連堿的動(dòng)物比未給藥的正常對照組學(xué)習(xí)記憶能力明顯增強(qiáng)，不但抵達(dá)安全平臺(tái)所需時(shí)間短，而且在水迷宮中走錯(cuò)路線的次數(shù)也少。經(jīng)多次重復(fù)均顯示這種結(jié)果。試驗(yàn)結(jié)果表明無論是錯(cuò)誤次數(shù)較正常組少，游泳時(shí)間較正常組短，顯示出明顯的促智作用。效果優(yōu)于尼莫地平和腦復(fù)康。
本發(fā)明的進(jìn)一步研究表明(+)北美黃連堿能明顯地改善和增強(qiáng)老齡動(dòng)物的學(xué)習(xí)記憶能力。老齡雄性小鼠確實(shí)比青年小鼠的學(xué)習(xí)記憶能力差，其錯(cuò)誤次數(shù)和游達(dá)安全平臺(tái)所需的時(shí)間均較青年正常小鼠多和長。但口服0.625mg/kg(+)北美黃連堿后，無論是雄性動(dòng)物，還是雌性動(dòng)物，無論是抵達(dá)安全平臺(tái)的時(shí)間，還是發(fā)生錯(cuò)誤的次數(shù)，均顯示了改善和增強(qiáng)學(xué)習(xí)記憶的作用。不僅與未給藥的正常老齡動(dòng)物相比差異顯著，抵達(dá)安全平臺(tái)的時(shí)間和發(fā)生錯(cuò)誤的次數(shù)甚至比正常的青年對照組都短和少。
除了上述的提高動(dòng)物的學(xué)習(xí)和記憶的能力外，本發(fā)明還發(fā)現(xiàn)，(+)北美黃連堿有明顯的抗缺氧作用。無論是一次口服給藥，還是連續(xù)給藥30天，均能延長缺氧缺血?jiǎng)游镱^部的生存時(shí)間，而且顯示出較好的量效關(guān)系。
另外，(+)北美黃連堿毒性低，治療劑量安全性高。
本發(fā)明因此還涉及含有作為活性成份的本發(fā)明的化合物和常規(guī)藥物賦形劑或輔劑的藥物組合物。通常本發(fā)明藥物組合物含有0.1-95重量％的本發(fā)明化合物。
本發(fā)明化合物的藥物組合物可根據(jù)本領(lǐng)域公知的方法制備。用于此目的時(shí)，如果需要，可將本發(fā)明的化合物與一種或多種固體或液體藥物賦形劑和/或輔劑結(jié)合，制成可作為人藥或獸藥使用的適當(dāng)?shù)氖┯眯问交騽┝啃问健?br> 本發(fā)明化合物或含有它的藥物組合物可以單位劑量形式給藥，給藥途徑可為腸道或非腸道，如口服、肌肉、皮下、鼻腔、口腔粘膜、皮膚、腹膜或直腸等，優(yōu)選口服。
本發(fā)明化合物或含有它的藥物組合物的給藥途徑可為注射給藥。注射包括靜脈注射、肌肉注射、皮下注射和皮內(nèi)注射等。
給藥劑型可以是液體劑型、固體劑型。如液體劑型可以是真溶液類、膠體類、微粒劑型、乳劑劑型、混懸劑型。其他劑型例如片劑、膠囊、滴丸、氣霧劑、丸劑、粉劑、溶液劑、混懸劑、乳劑、顆粒劑、栓劑、凍干粉針劑等。
本發(fā)明化合物可以制成普通制劑、也可以是緩釋制劑、控釋制劑、靶向制劑及各種微粒給藥系統(tǒng)。
為了將單位給藥劑型制成片劑，可以廣泛使用本領(lǐng)域公知的各種載體。關(guān)于載體的例子是，例如稀釋劑與吸收劑，如淀粉、糊精、硫酸鈣、乳糖、甘露醇、蔗糖、氯化鈉、葡萄糖、尿素、碳酸鈣、白陶土、微晶纖維素、硅酸鋁等；濕潤劑與粘合劑，如水、甘油、聚乙二醇、乙醇、丙醇、淀粉漿、糊精、糖漿、蜂蜜、葡萄糖溶液、阿拉伯膠漿、明膠漿、羧甲基纖維素鈉、紫膠、甲基纖維素、磷酸鉀、聚乙烯吡咯烷酮等；崩解劑，例如干燥淀粉、海藻酸鹽、瓊脂粉、褐藻淀粉、碳酸氫鈉與枸櫞酸、碳酸鈣、聚氧乙烯山梨糖醇脂肪酸酯、十二烷基磺酸鈉、甲基纖維素、乙基纖維素等；崩解抑制劑，例如蔗糖、三硬脂酸甘油酯、可可脂、氫化油等；吸收促進(jìn)劑，例如季銨鹽、十二烷基硫酸鈉等；潤滑劑，例如滑石粉、二氧化硅、玉米淀粉、硬脂酸鹽、硼酸、液體石蠟、聚乙二醇等。還可以將片劑進(jìn)一步制成包衣片，例如糖包衣片、薄膜包衣片、腸溶包衣片，或雙層片和多層片。
例如為了將給藥單元制成丸劑，可以廣泛使用本領(lǐng)域公知的各種載體。關(guān)于載體的例子是，例如稀釋劑與吸收劑，如葡萄糖、乳糖、淀粉、可可脂、氫化植物油、聚乙烯吡咯烷酮、Gelucire、高嶺土、滑石粉等；粘合劑，如阿拉伯膠、黃蓍膠、明膠、乙醇、蜂蜜、液糖、米糊或面糊等；崩解劑，如瓊脂粉、干燥淀粉、海藻酸鹽、十二烷基磺酸鈉、甲基纖維素、乙基纖維素等。
例如為了將給藥單元制成膠囊，將有效成分本發(fā)明化合物與上述的各種載體混合，并將由此得到的混合物置于硬的明膠膠囊或軟膠囊中。也可將有效成分本發(fā)明化合物制成微囊劑，混懸于水性介質(zhì)中形成混懸劑，亦可裝入硬膠囊中或制成注射劑應(yīng)用。
例如，將本發(fā)明化合物制成注射用制劑，如溶液劑、混懸劑溶液劑、乳劑、凍干粉針劑，這種制劑可以是含水或非水的，可含一種和/或多種藥效學(xué)上可接受的載體、稀釋劑、粘合劑、潤滑劑、防腐劑、表面活性劑或分散劑。如稀釋劑可選自水、乙醇、聚乙二醇、1，3-丙二醇、乙氧基化的異硬脂醇、多氧化的異硬脂醇、聚氧乙烯山梨醇脂肪酸酯等。另外，為了制備等滲注射液，可以向注射用制劑中添加適量的氯化鈉、葡萄糖或甘油，此外，還可以添加常規(guī)的助溶劑、緩沖劑、pH調(diào)節(jié)劑等。這些輔料是本領(lǐng)域常用的。
此外，如需要，也可以向藥物制劑中添加著色劑、防腐劑、香料、矯味劑、甜味劑或其它材料。
為達(dá)到用藥目的，增強(qiáng)治療效果，本發(fā)明的藥物或藥物組合物可用任何公知的給藥方法給藥。
本發(fā)明化合物、藥物組合物的給藥劑量取決于許多因素，例如所要預(yù)防或治療疾病的性質(zhì)和嚴(yán)重程度，患者或動(dòng)物的性別、年齡、體重、性格及個(gè)體反應(yīng)，給藥途徑、給藥次數(shù)、治療目的，因此本發(fā)明的治療劑量可以有大范圍的變化。一般來講，本發(fā)明中藥學(xué)成分的使用劑量是本領(lǐng)域技術(shù)人員公知的?？梢愿鶕?jù)本發(fā)明化合物組合物中最后的制劑中所含有的實(shí)際藥物數(shù)量，加以適當(dāng)?shù)恼{(diào)整，以達(dá)到其治療有效量的要求，完成本發(fā)明的預(yù)防或治療目的。本發(fā)明化合物的每天的合適劑量范圍本發(fā)明的化合物的用量為0.001-150mg/kg體重，優(yōu)選為0.01-100mg/kg體重，更優(yōu)選為0.01-60mg/kg體重，最優(yōu)選為0.1-10mg/kg體重。上述劑量可以單一劑量形式或分成幾個(gè)，例如二、三或四個(gè)劑量形式給藥這受限于給藥醫(yī)生的臨床經(jīng)驗(yàn)以及包括運(yùn)用其它治療手段的給藥方案。
每一種治療所需總劑量可分成多次或按一次劑量給藥。本發(fā)明的化合物、組合物可單獨(dú)服用，或與其他治療藥物或?qū)ΠY藥物合并使用并調(diào)整劑量。
具體實(shí)施例方式
下面的實(shí)施例用來進(jìn)一步說明本發(fā)明，但是這并不意味著對本發(fā)明的任何限制。
避暗法屬于一次性訓(xùn)練被動(dòng)回避實(shí)驗(yàn)，此法利用小鼠嗜暗習(xí)性設(shè)計(jì)。實(shí)驗(yàn)裝置分為明暗兩室，有一洞口連接，明室為安全區(qū)，無電；暗室為電擊區(qū)，底部為銅柵，通以40伏交流電。動(dòng)物鉆進(jìn)暗室即受到電擊，逃回明室可躲避傷害性刺激。實(shí)驗(yàn)共分兩天進(jìn)行，第一天是訓(xùn)練，24小時(shí)后測驗(yàn)。此即記憶的獲得和保持測試，記錄小鼠受電擊的次數(shù)作為錯(cuò)誤次數(shù)并計(jì)算錯(cuò)誤的百分率(即出現(xiàn)錯(cuò)誤的小鼠的只數(shù)占該組小鼠只數(shù)的百分率)。小鼠從計(jì)數(shù)開始到第一次進(jìn)入暗室的時(shí)間為潛伏期。錯(cuò)誤少、潛伏期長表明記憶好，錯(cuò)誤多、潛伏期短表明記憶差。
迷宮學(xué)習(xí)，是一種空間位置的辨別學(xué)習(xí)。水迷宮內(nèi)水深10cm，水溫控制在25℃左右，在目標(biāo)區(qū)有一爬梯，動(dòng)物可爬出水面而獲得休息。實(shí)驗(yàn)分三個(gè)階段進(jìn)行。第一階段，將擋板擋在A處，使動(dòng)物從A處開始訓(xùn)練，A處只作為訓(xùn)練用，第1-2次，時(shí)間和錯(cuò)誤次數(shù)未作統(tǒng)計(jì)。逐漸延長動(dòng)物起步區(qū)至目標(biāo)區(qū)的游泳路徑，同時(shí)增加盲端區(qū)。第二階段，將擋板擋在B處，使動(dòng)物從B處開始訓(xùn)練，第3-6次。第三階段，將擋板擋在C處，使動(dòng)物從C處開始訓(xùn)練，第7-9次。見示意圖，圖中1，2，3，4為盲端，動(dòng)物游入盲端表示錯(cuò)誤。從各訓(xùn)練處到達(dá)階梯安全平臺(tái)的時(shí)間為游泳所需要的時(shí)間。進(jìn)入盲端的次數(shù)少，游泳所需的時(shí)間短表示學(xué)習(xí)記憶好。反之則差，或稱之為學(xué)習(xí)記憶障礙。該方法可檢測動(dòng)物空間定向和學(xué)習(xí)記憶的能力。
老年性癡呆以基底前腦膽堿能神經(jīng)元丟失最為嚴(yán)重，造成乙酰膽堿分泌不足。東莨菪堿為M膽堿受體阻斷劑，能抑制乙酰膽堿對M受體的激動(dòng)作用，因此可模仿膽堿能功能不足的結(jié)果，是研究老年性癡呆的動(dòng)物模型之一。
HDST是(+)北美黃連堿的縮寫。
SCOP表示東莨菪堿的縮寫。
NMDP尼莫地平的縮寫。
Tac他克林的縮寫。
PTB戊巴比妥鈉的縮寫。
所有的劑量的單位是mg/kg。
實(shí)施例1 (+)北美黃連堿對東莨菪堿造成記憶獲得障礙的作用(避暗法)昆明小鼠50只，隨機(jī)分為5組正常對照組，東莨菪堿破壞記憶模型組，(+)北美黃連堿0.075mg/kg、0.15mg/kg、0.30mg/kg三個(gè)劑量組。與正常對照組相比，腹腔注射東莨菪堿1.0mg/kg后，使錯(cuò)誤的百分率達(dá)到60％，潛伏期縮短了90秒，與對照組比較差異顯著，提示東莨菪堿能顯著破壞動(dòng)物的學(xué)習(xí)和記憶獲得。預(yù)先腹腔給于(+)北美黃連堿后，進(jìn)行訓(xùn)練，24小時(shí)后重做測試，結(jié)果見表1表1組別 劑量 錯(cuò)誤次數(shù)潛伏期(秒) 錯(cuò)誤％正常對照組 0.0±0.0299.0±0.0 0SCOP 1.00.6±0.5++210.0±84.4++60++HDST+SCOP 0.075+1.0 0.4±0.5231.2±93.040HDST+SCOP 0.15+1.0 0.0±0.0299±0.0**0**HDST+SCOP 0.30+1.0 0.4±0.7262.7±62.430n＝10，X±SD，++P＜0.01 vs 對照組，**P＜0.01 vs SCOP實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示在預(yù)先腹腔給于(+)北美黃連堿0.15mg/kg后再腹腔注射東莨菪堿1.0mg/kg，錯(cuò)誤的次數(shù)為0％。潛伏期和正常對照組相同，完全恢復(fù)到正常組的水平，說明完全逆轉(zhuǎn)了東莨菪堿對小鼠記憶獲得的損害作用。說明(+)北美黃連堿能夠有效改善抗膽堿藥東莨菪堿導(dǎo)致的學(xué)習(xí)和記憶障礙。
實(shí)施例2 (+)北美黃連堿對戊巴比妥鈉造成記憶獲得障礙的作用(避暗法)昆明小鼠60只，隨機(jī)分為6組正常對照組，戊巴比妥鈉破壞記憶模型組，他克林組，(+)北美黃連堿0.075mg/kg、0.15mg/kg、0.30mg/kg三個(gè)劑量組。皮下注射戊巴比妥鈉25mg/kg可以明顯地破壞動(dòng)物的學(xué)習(xí)記憶能力，潛伏期從275.8秒縮短到65.9秒，錯(cuò)誤的百分率從10％增加到90％。結(jié)果見表2表2組別劑量 錯(cuò)誤次數(shù)潛伏期(秒) 錯(cuò)誤％對照組 0.1±0.3275.8±69.6 10PTB 25 1.4±1.0++65.9±84.8++90++Tac+PTB 1.5+25 1.3±0.757.5±52.9 100HDST+PTB0.075+25 1.1±0.889.2±113.5 70HDST+PTB0.15+25 0.4±0.5* 220.8±103.8** 40*HDST+PTB0.30+25 0.6±0.5* 178.0±108.0* 60n＝10，X±SD，++P＜0.01 vs對照組，*P＜0.05 vs PTB，**P＜0.01 vsPTB。
腹腔注射(+)北美黃連堿0.15mg/kg潛伏期為220.8秒，錯(cuò)誤的次數(shù)為40％，與模型組比較P＜0.01與＜0.05，差異顯著。他克林1.5mg/kg沒有顯示任何作用，潛伏期為57.5秒，錯(cuò)誤的百分率為100％。說明(+)北美黃連堿能夠有效改善戊巴比妥鈉導(dǎo)致的學(xué)習(xí)和記憶障礙，并且優(yōu)于他克林。
實(shí)施例3 (+)北美黃連堿對戊巴比妥鈉造成的學(xué)習(xí)記憶障礙的影響(水迷宮測試)昆明小鼠60只，隨機(jī)分為6組正常對照組，戊巴比妥鈉腹腔注射15mg/kg破壞記憶模型組，尼莫地平(Nimodipine，NMDP)組，(+)北美黃連堿口服2.5mg/kg、1.25mg/kg、0.625mg/kg三個(gè)劑量組(分別為半數(shù)致死量的1/10，1/20，1/40)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，戊巴比妥鈉15mg/kg破環(huán)了小鼠學(xué)習(xí)記憶能力，游至安全平臺(tái)的時(shí)間同對照組的12.2秒相比延長了1/3，為18.0秒，差異顯著(P＜0.05)。錯(cuò)誤的次數(shù)為2.4，較對照組(1.7次)相比有所增加，但統(tǒng)計(jì)差異不顯著。結(jié)果見表3表3
組別劑量(mg/kg) 錯(cuò)誤次數(shù)時(shí)間(秒)對照組 1.7±0.612.2±4.3PTB 15 2.4±1.018.0±8.0+NMDP+PTB1.0+15 2.1±1.315.2±6.7HDST+PTB0.625+15 1.0±0.5** 8.7±2.4**HDST+PTB1.25+15 2.0±1.413.4±7.2HDST+PTB2.50+15 1.8±1.413.6±9.2n＝10，X±SD，+P＜0.05 vs 對照組，**P＜0.01vs PTB。
口服0.625mg/kg(+)北美黃連堿組游至平臺(tái)時(shí)間只花了8.7秒，不但比模型組縮短了近10秒，而且比正常對照組少花了3.5秒。錯(cuò)誤次數(shù)1.0比正常對照組還少0.7次。與模型組比，差異非常顯著，P值均＜0.01。而口服1mg/kg尼莫地平組游至平臺(tái)時(shí)間沒有縮短，錯(cuò)誤次數(shù)雖有減少，統(tǒng)計(jì)處理均不顯著。說明(+)北美黃連堿能夠有效改善戊巴比妥鈉導(dǎo)致的學(xué)習(xí)和記憶障礙，并優(yōu)于尼莫地平。
實(shí)施例4 (+)北美黃連堿對正常小鼠學(xué)習(xí)記憶的影響(水迷宮測試)昆明小鼠50只，隨機(jī)分為5組，每組10只正常對照組，口服尼莫地平1mg/kg組，口服(+)北美黃連堿0.625mg/kg、1.25mg/kg、2.5mg/kg三個(gè)劑量組。第1和第2次只是讓動(dòng)物熟悉條件訓(xùn)練，不作記錄。結(jié)果見下表4表4 (+)北美黃連堿對正常小鼠學(xué)習(xí)記憶的影響劑量 B處測試的錯(cuò)誤次數(shù)組別 (mg/kg) 3 4 5 6對照組 3.9±1.92.6±1.42.3±1.61.6±0.8NMDP 1 3.2±1.11.5±0.7** 1.6±1.50.8±0.7*HDST 0.625 2.4±1.31.2±0.5** 0.8±6.4** 0.3±0.4**HDST 1.25 2.2±0.8** 1.6±0.6** 1.2±0.8* 0.8±0.7*HDST 2.50 2.5±0.8** 1.8±0.7* 1.0±0.6** 0.8±0.5**n＝10，X±SD，*P＜0.05，**P＜0.01 vs對照組。
劑量 B處測試的游泳時(shí)間(秒)組別(mg/kg) 3456對照組24.3±12.1 16.5±13.1 13.1±8.79.2±3.9NMDP1 20.0±7.413.0±5.711.4±9.28.0±2.5HDST0.625 15.9±5.7* 9.5±1.6*8.4±3.1*6.9±2.1HDST1.25 12.6±3.2** 9.9±3.0*9.6±2.7 8.2±2.0HDST2.50 20.0±11.4 13.6±7.4* 9.5±23.68.2±2.9
n＝10，X±SD，*P＜0.05，**P＜0.01 vs對照組。
從表4的結(jié)果可以看出(+)北美黃連堿在第3次測試時(shí)即顯示改善作用。無論是錯(cuò)誤次數(shù)較正常組少，游泳時(shí)間也較正常組短，顯示出明顯的促智作用。1mg/kg的尼莫地平也有一定的促智作用，但不如0.625mg/kg(+)北美黃連堿強(qiáng)。
實(shí)施例5 (+)北美黃連堿與尼莫地平、腦復(fù)康對正常小鼠學(xué)習(xí)記憶的作用的比較(水迷宮測試)昆明小鼠40只，隨機(jī)分為4組，每組10只正常對照組，口服尼莫地平1mg/kg組，口服腦復(fù)康400mg/kg組，口服(+)北美黃連堿0.625mg/kg組。第1和第2次只是讓動(dòng)物熟悉條件訓(xùn)練，不作記錄。結(jié)果見下表表5 (+)北美黃連堿與尼莫地平、腦復(fù)康對正常小鼠學(xué)習(xí)記憶的作用的比較劑量 錯(cuò)誤次數(shù)組別 mg/kg 3 456 7 8對照組 5.56±2.314.2±2.631.9±1.631.65±1.18 1.58±0.1 1.06±0.5HDST 0.625 3.24±1.09** 2.05±1.16* 1.79±0.89 0.6±0.39* 0.8±0.5* 0.61±0.46NMDP 1 4.45±3.152.7±2.852.5±2.761.1±0.59 1.06±0.7 1.17±0.77腦復(fù)康4003.71±2.492.12±2.28 1.87±1.08 1.06±0.26 1.23±0.6 1.37±0.73n＝10，X±SD，*P＜0.05，**P＜0.01 vs對照組。
劑量 游泳時(shí)間(秒)組別 mg/kg 3 4 5 67 8對照組 37.6±14.8638.4±24.9 16.7±10.9 15.27±9.53 17.33±8.610.5±3.47HDST 0.625 23.01±6.19** 14.9±4.04*17.1±8.5 8±1.56* 8.73±2.01** 8.8±2.37NMDP 1 28.9±17.6718.49±14.85* 15.9±12.2 11.3±4.5* 10.37±3.95* 12.19±4.41腦復(fù)康40025.24±12.31 17.76±13.52* 15.6±5.6 10.3±2.38 11.54±2.46 13.7±4.35n＝10，X±SD，*P＜0.05，**P＜0.01 vs對照組。
從表5的結(jié)果中可以看出口服0.625mg/kg(+)北美黃連堿仍然顯示極好的促智作用。其錯(cuò)誤的次數(shù)和到達(dá)安全平臺(tái)的時(shí)間幾乎只有正常青年對照組的一半。尼莫地平也有一定的作用，但遠(yuǎn)不如(+)北美黃連堿明顯?？诜?00mg/kg的腦復(fù)康有增強(qiáng)學(xué)習(xí)記憶能力的趨勢，但統(tǒng)計(jì)處理差異無顯著性。說明(+)北美黃連堿對正常小鼠學(xué)習(xí)記憶的作用優(yōu)于尼莫地平、腦復(fù)康。
實(shí)施例6 (+)北美黃連堿對雄性老齡小鼠學(xué)習(xí)記憶的影響(水迷宮測試)雄性老齡小鼠為繁育已衰老淘汰種鼠，并由本發(fā)明人繼續(xù)喂養(yǎng)4-6個(gè)月。雄性老齡昆明小鼠40只，正常青年小鼠10只，用水迷宮測試。實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表6
表6 (+)北美黃連堿對雄性老齡小鼠學(xué)習(xí)記憶的影響劑量 B處測試的錯(cuò)誤次數(shù)組別 mg/kg3 456 7 8老齡對照組4.40±2.062.50±1.56 3.33±2.67 2.60±2.43 1.73±1.40 0.89±1.15HDST 0.6252.51±1.09* 1.07±0.59* 1.26±0.87* 0.56±0.33 0.92±0.82 0.56±0.44HDST 1.25 2.10±0.73** 1.50±0.84 1.78±1.14 1.66±1.09 1.30±0.48 0.88±0.60HDST 2.50 2.23±1.431.23±1.29 1.30±1.08 0.80±1.13 0.92±0.82 0.80±0.24青年對照組 2.65±0.991.85±0.66 2.80±1.40 1.30±1.02 1.51±1.05 0.89±0.74n＝10，X±SD，*P＜0.05，**P＜0.01 vs 01d(老齡對照組)。
B處測試的游泳時(shí)間(秒)組別 劑量3 4 5 6 7 8老齡對照組 30.93±14.29 23.70±13.45 31.23±20.58 23.04±15.40 18.66±14.72 15.56±10.50HDST 0.625 21.40±7.8414.26±4.3514.36±5.31* 11.03±2.18* 12.20±3.4012.72±4.27HDST 1.2522.29±8.4915.43±6.3617.14±8.2018.78±9.3316.21±7.0414.13±5.85HDST 2.5017.22±9.4914.23±7.2412.05±7.4310.74±6.5712.54±3.9911.20±3.96青年對照組 18.93±6.13* 18.00±7.9819.34±8.4413.31±4.9917.14±8.4512.06±5.04n＝10，X±SD，*P＜0.05，**P＜0.01 vs 01d(老齡對照組)。
從表中結(jié)果可以看出，老齡雄性小鼠確實(shí)比青年小鼠的學(xué)習(xí)記憶能力差，其錯(cuò)誤次數(shù)和游達(dá)安全平臺(tái)所需的時(shí)間均較青年正常小鼠多和長。但老齡鼠在服用(+)北美黃連堿0.625mg/kg后其錯(cuò)誤的次數(shù)幾乎只有老齡鼠的一半。第6次，其錯(cuò)誤次數(shù)只是老齡鼠的1/5(0.56次比2.60次)，而且再次顯示比青年正常對照組短和少。
實(shí)施例7 (+)北美黃連堿對雌性老齡小鼠學(xué)習(xí)記憶的影響(水迷宮測試)雌性老齡小鼠為繁育已衰老淘汰種鼠，并由本發(fā)明人繼續(xù)喂養(yǎng)4-6個(gè)月。雌性老齡昆明小鼠40只，正常青年小鼠10只，用水迷宮測試。實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表7
表7 (+)北美黃連堿對雌性老齡小鼠學(xué)習(xí)記憶的影響B(tài)處測試的錯(cuò)誤次數(shù)組別 劑量 3 4 5 6 7 8 9老齡對照組 3.41±1.43 2.83±1.291.97±0.960.99±0.871.43±0.731.21±0.810.75±0.68HDST 0.625 2.73±1.29 1.26±1.06** 1.12±0.71* 0.90±0.490.81±0.671.11±0.840.65±0.87HDST 1.25 2.05±0.68 1.74±1.001.28±0.441.24±0.671.56±1.011.23±0.731.05±0.96HDST 2.50 1.88±0.82 2.16±1.001.16±0.761.63±1.071.38±1.051.18±0.700.69±0.66青年對照組2.20±0.87 1.97±0.812.19±0.991.23±0.731.38±1.071.52±0.680.85±0.45n＝10，X±SD，*P＜0.05，**P＜0.01 vs老齡對照組。
B處測試的游泳時(shí)間(秒)組別劑量 3 4 5 67 89老齡對照組 29.36±10.9524.95±12.38 19.53±10.14 14.07±7.51 16.20±6.6212.98±3.95 11.65±2.92HDST0.625 21.13±10.4513.70±7.51* 11.63±3.63* 10.60±3.62 10.63±3.05* 11.07±4.60 10.65±5.39HDST1.25 16.58±3.50** 19.34±6.5014.09±5.3014.26±4.39 14.37±5.5512.11±2.79 12.25±4.53HDST2.50 18.89±7.00*23.13±6.8417.34±8.5618.39±8.18 14.96±4.8313.45±3.08 12.00±4.49青年對照 16.71±6.31** 17.53±5.3716.27±6.0312.16±5.99 13.56±5.9113.94±3.68 10.95±3.34組n＝10，X±SD，*P＜0.05，**P＜0.01 vs老齡對照組。
表7實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示與老齡雄鼠基本相似，只是作用略弱。綜合表6和表7的結(jié)果，可以肯定(+)北美黃連堿有改善老齡動(dòng)物學(xué)習(xí)記憶障礙的作用。
實(shí)施例8 (+)北美黃連堿口服給藥對小鼠耐缺氧能力的影響昆明小鼠40只，隨機(jī)分為4組，每組10只正常對照組，口服(+)北美黃連堿0.625mg/kg、1.25mg/kg、2.5mg/kg三個(gè)劑量組。使用380ml磨口透明試劑瓶，將小鼠放入瓶中，蓋緊瓶塞并用凡士林封口，觀察小鼠在瓶中存活時(shí)間。各給藥組分別與正常對照組進(jìn)行t檢驗(yàn)。
表8a (+)北美黃連堿一次口服給藥對小鼠耐氧能力的影響。
組別 劑量 體重(克) 存活時(shí)間(分鐘)對照組 23.0±0.9 45.0±6.4北美黃連堿0.625 23.0±0.8 47.8±10.6北美黃連堿1.25 22.3±1.2 50.5±5.3*北美黃連堿2.50 22.5±0.8 54.0±6.7**n＝10，X±SD，*P＜0.05，**P＜0.01 vs對照組。
表8b (+)北美黃連堿連續(xù)三十天口服給藥對小鼠耐氧能力的影響。
組別 劑量存活時(shí)間(分鐘)對照組24.0±3.4北美黃連堿0.625 26.6±1.7北美黃連堿1.2531.4±3.1**北美黃連堿2.5031.0±3.9**n＝10，X±SD，*P＜0.05，**P＜0.01 vs對照組。
試驗(yàn)說明(+)北美黃連堿有明顯的抗缺氧作用。無論是一次口服給藥，還是連續(xù)口服給藥30天，均能延長缺氧缺血?jiǎng)游镱^部的生存時(shí)間，而且顯示出較好的量效關(guān)系。
實(shí)施例9 (+)北美黃連堿的毒性(LD50)iv 靜脈注射0.27(0.25-0.29)mg/kgip 腹腔注射2.85±0.39mg/kgpo 口服給藥25.8±1.0mg/kg
權(quán)利要求
1.如通式(I)所示的(+)北美黃連堿在制備預(yù)防或治療癡呆的藥物中的應(yīng)用
2.如通式(I)所示的(+)北美黃連堿在制備促智藥物中的應(yīng)用
3.如通式(I)所示的(+)北美黃連堿在制備抗缺氧藥物中的應(yīng)用
4.根據(jù)權(quán)利要求1或2或3的應(yīng)用，其特征在于，所述的化合物包括立體異構(gòu)體和藥效學(xué)上可接受的鹽。
5.一種藥物組合物，其特征在于，含有藥物有效劑量的如權(quán)利要求1-3所述的任一化合物，及藥用載體。
6.根據(jù)權(quán)利要求5的藥物組合物，其特征在于，所述的藥物組合物可以是片劑、膠囊、丸劑、注射劑、緩釋制劑、控釋制劑及各種微粒給藥系統(tǒng)。
全文摘要
本發(fā)明涉及(+)北美黃連堿在制備預(yù)防和治療癡呆、促進(jìn)智力、提高耐缺氧能力的藥物中的應(yīng)用。經(jīng)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)證實(shí)，(+)北美黃連堿能夠提高東莨菪堿、戊巴比妥鈉致癡呆模型小鼠的學(xué)習(xí)記憶能力，提高正常小鼠、老齡小鼠的學(xué)習(xí)記憶能力，提高缺氧小鼠的生存時(shí)間。(+)北美黃連堿具有活性高、毒性小的優(yōu)點(diǎn)。
文檔編號A61K31/4353GK1511525SQ02159170
公開日2004年7月14日 申請日期2002年12月30日 優(yōu)先權(quán)日2002年12月30日
發(fā)明者黃俊華 申請人:黃俊華