專利名稱：一種sars疫苗及其制備方法和應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及用生物工程技術(shù)制備的疫苗，特別是涉及一種SARS疫苗及其制備方法與應(yīng)用。
背景技術(shù)：
SARS(Severe Acute Respiratory Syndrome)是一種嚴(yán)重的急性傳染病，它首先在我國廣東省部分地區(qū)發(fā)現(xiàn)并流行，患者的主要臨床表現(xiàn)為肺炎，典型癥狀為高燒(＞38℃)、干咳、呼吸急促或呼吸困難。人群對SARS病毒普遍易感，醫(yī)護人員是本病的高危人群。疾病的死亡率與患者年齡及其相關(guān)，年齡越大死亡危險也越大，患者的亡率可能達到14％到15％。2003年3月15日，世界衛(wèi)生組織(WHO)將這種疾病命名為嚴(yán)重急性呼吸道綜合癥，我國習(xí)慣上稱為非典型肺炎。2003年4月16日，WHO正式宣布SARS的致病原為一種新的冠狀病毒，稱為SARS病毒。據(jù)報道，SARS病毒的平均潛伏期是6.4天，其傳播途徑主要是短距離飛沫傳播、接觸病人呼吸道分泌物傳播及密切接觸傳播。迄今為止，全球范圍內(nèi)，已經(jīng)有22個國家和地區(qū)出現(xiàn)SARS病例的報道。
自WHO正式確認(rèn)SARS的致病原為SARS病毒以來，界各國相繼報告了它與其他冠狀病毒的差異。NCBI的GeneBank于2003年4月18日發(fā)布了兩條完整的SARS病毒基因組，NC_004718(29736bp)，AY278554(29206bp)-SARS coronavirus CUHK-W1。除了這些差別，SARS病毒基因組與其他冠狀病毒的結(jié)構(gòu)相似。初步的基因組注釋在NCBI完成，預(yù)測得到的主要蛋白質(zhì)有RNA聚合酶蛋白(聚合酶1a，1b)，S蛋白(spike protein)，E蛋白(small membrane protein)，N蛋白(nucleocapsid protein)等。使用Clustalx 1.82，用neighbor-joiningtree方法構(gòu)建的冠狀病毒的進化關(guān)系樹如下M蛋白，N蛋白，S蛋白.(來源biosino.org)“SARS”病毒傳播迅速，致病死亡率高，而其又非常獨特，以前從未在人類中發(fā)現(xiàn)，因此，目前尚沒有針對這種病毒的特效藥物，現(xiàn)有的SARS治療藥物主要是干擾素類藥物，但其不能從根本上有效地預(yù)防或治療SARS疾病，SARS仍然嚴(yán)重地威脅著人民的健康。(資料來源http//www-micro.msb.le.ac.uk/3035/Coronaviruses.html#SARS)發(fā)明概述本發(fā)明的目的是提供一種安全有效的SARS疫苗。
本發(fā)明的另一個目的是提供一種制備所述SARS疫苗的方法。
本發(fā)明的再一個目的是提供所述SARS疫苗在預(yù)防和治療非典型肺炎中的用途。
本發(fā)明的SARS疫苗包括至少一個類型的SARS病毒的全抗原，或者含有至少一個類型的SARS病毒的不完全抗原。
完全抗原是指能夠直接誘導(dǎo)機體產(chǎn)生特異性免疫應(yīng)答的一類物質(zhì)。半抗原能與抗體特異性結(jié)合，但不能激發(fā)機體產(chǎn)生抗體，必須與蛋白質(zhì)(載體)結(jié)合后進入機體，才能產(chǎn)生有效的免疫應(yīng)答。大分子的半抗原在體外能與對應(yīng)的抗體結(jié)合發(fā)生可見反應(yīng)(凝集、沉淀)，小分子的半抗原能與對應(yīng)抗體結(jié)合而不出現(xiàn)可見反應(yīng)。
本發(fā)明的SARS疫苗是由分離自非典疫區(qū)的病例標(biāo)本中的SARS病毒株，經(jīng)大量培養(yǎng)并滅活后制得的。制備方法包括(1)將SARS病毒接種入適于其生長傳代的細(xì)胞中，在合適的培養(yǎng)條件下培育細(xì)胞，收集上清液，繼續(xù)傳代，直至上清液中的病毒滴度大于5.80PFU/ml，篩選出適于大規(guī)模培養(yǎng)的含SARS病毒的細(xì)胞株；(2)將篩選出的病毒株接種于生長良好的適于傳代的細(xì)胞中，在合適的培養(yǎng)條件下，經(jīng)大規(guī)模培養(yǎng)，收獲病毒原液；(3)病毒原液經(jīng)加入福爾馬林或β-丙內(nèi)酯滅活后，再濃縮、純化為純化原液；(4)將純化原液制備成疫苗。
優(yōu)選的，本發(fā)明的方法還包括向滅活的純化原液中添加藥學(xué)上可接受的佐劑、保護劑、防腐劑和/或添加劑的步驟。
優(yōu)選的，SARS病毒接種入細(xì)胞的比例是0.01PFU/細(xì)胞。
細(xì)胞的培養(yǎng)條件包括溫度、濕度、培養(yǎng)基等，本方法優(yōu)選的培養(yǎng)條件包括在含有10％小牛血清的MEM培養(yǎng)液中，35℃培養(yǎng)3-5天。
優(yōu)選的，本方法中適于SARS病毒傳代生長的細(xì)胞是Vero細(xì)胞、人二倍體細(xì)胞(2BS)或人肺上皮細(xì)胞，經(jīng)過傳代培養(yǎng)后，得到相應(yīng)的含有SARS病毒的細(xì)胞株。
在本發(fā)明的一個優(yōu)選實施方案中，篩選出SARS-Vero細(xì)胞，其上清液中SRAS病毒的滴度大于5.80PFU/ml。
在本發(fā)明的又一個優(yōu)選實施方案中，篩選出SARS-2BS細(xì)胞，其上清液中SRAS病毒的滴度大于5.80PFU/ml。
在本發(fā)明的又一個優(yōu)選實施方案中，篩選出SARS-人肺上皮細(xì)胞，其上清液中SRAS病毒的滴度大于5.80PFU/ml。
優(yōu)選的，用福爾馬林或β-丙內(nèi)酯滅活病毒原液，更優(yōu)選的，按照1∶2000(病毒原液∶福爾馬林或β-丙內(nèi)酯)的比例入滅活病毒原液。優(yōu)選的，在滅活的病毒原液中加入防腐劑，如硫柳汞。
滅活的病毒原液可以經(jīng)多種方法純化，例如離子交換層析等各種層析手段。在本發(fā)明的一個優(yōu)選實施方案中，滅活的病毒液經(jīng)高倍超濾濃縮后，經(jīng)分子篩層析柱、離子交換后，去除大部分雜蛋白，得到純化原液。在本發(fā)明的另一個優(yōu)選實施方案中，滅活的病毒液經(jīng)疏水柱后，再經(jīng)離子交換、分子篩層析柱，得到純化原液。
可以將合適的佐劑加入純化后的病毒原液，制備出免疫效果增強的疫苗。佐劑能夠與抗原混合使用，不僅有助于注射物質(zhì)的沉積或匯集，而且能夠增強抗體反應(yīng)?？梢宰鳛槊庖咦魟┑奈镔|(zhì)有①微生物及其產(chǎn)物，常用的微生物如分枝桿菌、短小棒狀桿菌、百日咳桿菌以及處左蘭氏陰性桿菌的提取物脂多糖，自分枝桿菌的提取物質(zhì)胞壁酰二肽等。②多聚核苷酸，如多聚肌苷酸∶胞苷酸(poly1∶C)，多聚腺苷酸(poly1∶A∶μ)等。③弗氏佐劑(Freundadjuvant)，包括不完全弗氏佐劑(將抗原水溶液與油劑(石蠟油或植物油)等量混合，再加乳化劑(羊毛脂或葉吐溫80)制成的油包水抗原乳劑)和完全弗氏佐劑(在不完全佐劑中加入分枝桿菌，如死卡苗)。④無機物，如明礬及氫化鋁等。
優(yōu)選的，用0.4-0.7％(mg/ml)的Al(OH)3作為免疫佐劑。
本發(fā)明進一步涉及上述SARS疫苗在預(yù)防和治療由SARS病毒引起的疾病中的用途。
例如，可以通過免疫注射本發(fā)明SARS疫苗的方法，預(yù)防非典型肺炎。具體而言，可以在第0、7、21天各注射一劑SARS疫苗，用于預(yù)防目的。
本發(fā)明的SARS疫苗效果顯著，安全性好，無毒副作用。
體外中和試驗表明，本發(fā)明的SARS疫苗中所含活性成分能特異性地中和SARS病毒，中和后的SARS病毒混和物不引起細(xì)胞的病變。
小白鼠動物試驗表明，經(jīng)腹腔免疫注射本發(fā)明的SARS疫苗兩次后，小白鼠能抵抗SARS病毒的攻擊，而未免疫過的對照組小白鼠全部死亡，疫苗效價可達2.0IU以上。
家兔試驗表明，肌肉免疫注射本發(fā)明的SARS疫苗兩次后，采血進行抗體測定，抗體平均滴度達1∶128以上，陽轉(zhuǎn)率達100％。
動物安全、毒性試驗表明，經(jīng)腹腔注射本發(fā)明的SARS疫苗后，連續(xù)觀察7～14天，動物未發(fā)現(xiàn)有發(fā)病，甚至死亡，體重增加。
人體臨床觀察試驗表明，全程免疫注射本發(fā)明的SARS疫苗后，除少部分出現(xiàn)局部反應(yīng)外，其余未發(fā)現(xiàn)大的毒、副作用，采血進行中和抗體測定，滴度都在1∶128以上，抗體陽轉(zhuǎn)率為100％。
下列實例描述了獲得本發(fā)明的疫苗，以及準(zhǔn)備本發(fā)明的試驗和組合的較佳方法。這些實例明顯表明，本發(fā)明的SARS疫苗可作為預(yù)防非典型肺炎的首選，為安全、有效的疫苗。這些實例僅僅起描述作用，并沒有限制本發(fā)明的范圍。
具體實施例方式
實施例1、SARS病毒滴定試驗(蝕斑法)A.病毒來源由非典型肺炎疫區(qū)的病例標(biāo)本中分離的SARS病毒株，用于SARS疫苗的研制。
致密單層的Vero細(xì)胞(協(xié)和醫(yī)科大學(xué)細(xì)胞中心提供)經(jīng)胰酶消化，用含10％小牛血清的199培養(yǎng)液制備成濃度約為0.8×105個/ml的細(xì)胞懸液，接種于直徑為35mm的6孔組織細(xì)胞培養(yǎng)板，置于含5％CO2的孵箱內(nèi)，35-37℃培養(yǎng)兩天后形成單層，移去6孔板內(nèi)的細(xì)胞培養(yǎng)液。用含5％小牛血清的199培養(yǎng)液4倍系列稀釋病毒，選擇3個適宜稀釋度1/40960、1/163840、和1/655360的病毒液，接種至培養(yǎng)板，每個稀釋度的病毒接種2孔，每孔0.4ml；另設(shè)細(xì)胞對照2孔。在孵箱吸附1小時(每隔15分鐘搖板1次)，然后每孔加入4ml最終濃度為0.75％的羧甲基纖維素(其中含10％牛血清，10％10倍濃縮199液，0.5％慶大霉素)，于孵箱繼續(xù)培養(yǎng)6天后傾去覆蓋物，加入1％結(jié)晶紫染色液染色15分鐘，用自來水漂洗、晾干，計每孔30個以內(nèi)的蝕斑數(shù)，計算PFU。
計算舉例見下表。

注1/163840稀釋度平均蝕斑數(shù)24；1/655360稀釋度平均蝕斑數(shù)5；1/163840＝(24+5×4)/2＝22；22PFU×163840＝3604480PFU/0.4ml；即為9011200PFU/1.0ml(病毒LgPFU＝6.95).
實施例2、含SARS病毒的細(xì)胞株的制備1、SARS-V細(xì)胞株的制備開啟細(xì)胞株安瓶，以2％小牛血清滅菌雙蒸水，按1∶100稀釋，取樣進行無菌試驗及外源因子檢測，方法見《中國生物制品規(guī)程》2000年版中《生物制品無菌規(guī)程》和《生物制品病毒外源因子檢查A項》，同時取樣按例1方法進行病毒滴定，余凍存于-80℃以下備用。無菌試驗和外源因子檢查合格后方可進行以下的試驗。
挑選生長形態(tài)良好的Vero細(xì)胞方瓶，消化下的病毒與細(xì)胞按0.01PFU/細(xì)胞混勻，分別接種于2個方瓶，置35℃培養(yǎng)3～5天，培養(yǎng)液為10％小牛血清的MEM，待細(xì)胞出現(xiàn)脫落，液體變酸時，收集上清液，取樣進行無菌試驗和病毒滴定，其余細(xì)胞立即凍存于-80℃以下，此為SARS-V1代細(xì)胞株。
SARS-V1經(jīng)檢測合格后，用于接下的傳代，按上述方法繼續(xù)接種于Vero細(xì)胞中，經(jīng)培養(yǎng)、收獲，為SARS-V2病毒，如此連續(xù)傳代，直至病毒滴度大于5.80PFU/ml，無菌試驗及外源因子檢測合格后，收集細(xì)胞株并凍存于-80℃以下，此即為SARS-V細(xì)胞株，可用于SARS疫苗的制備。
2、SARS-2BS細(xì)胞株的制備與SARS-V的制備方法類似，SARS病毒在人二倍體細(xì)胞上(2BS細(xì)胞，協(xié)和醫(yī)科大學(xué)細(xì)胞中心提供)進行傳代適應(yīng)，得到經(jīng)傳代適應(yīng)的SARS-2BS細(xì)胞株，其產(chǎn)生的病毒滴度大于5.80PFU/ml，無菌試驗及外源因子檢測合格，該細(xì)胞株可用于SARS疫苗的制備。
3、SARS-人肺上皮細(xì)胞株的制備與SARS-V的制備方法類似，SARS病毒在人肺上皮細(xì)胞上(協(xié)和醫(yī)科大學(xué)細(xì)胞中心提供)進行傳代適應(yīng)，得到經(jīng)傳代適應(yīng)的SARS-人肺上皮細(xì)胞株，其產(chǎn)生的病毒滴度大于5.80PFU/ml，無菌試驗及外源因子檢測合格，該細(xì)胞株可用于SARS疫苗的制備。
實施例3、SARS疫苗的制備1、病毒原液的制備
SARS-Vero細(xì)胞、SARS-2BS細(xì)胞或SARS-人肺上皮細(xì)胞經(jīng)35℃培養(yǎng)3-5天后，收獲病毒原液。
病毒原液按照1∶2000加入福爾馬林或β-丙內(nèi)酯滅活，并補加1∶20000的防腐劑硫柳汞。
2、病毒原液的純化方法1滅活的病毒原液，先以0.45μm的膜澄清過濾，去除細(xì)胞碎片、雜蛋白，用分子量為10萬的超濾膜濃縮30～50倍(濃縮倍數(shù)視病毒收獲液的病毒滴度而定)。然后柱層析純化濃縮液，以10cm×100cm的柱為例，填入Amersham pharmcia公司出品的Sepharose 4 Fast flow介質(zhì)5L，經(jīng)柱壓裝成柱體積為2L的柱床，用于濃縮液的純化。柱床用pH7.6的PBS緩沖液沖洗1.5個柱床體積，沖洗后將濃縮液樣品泵入柱中，每次上樣150ml，然后再用PBS(pH7.6)洗脫，流速為50ml/min，記錄儀的紙動速度為2cm/hr，記錄紙上出現(xiàn)的第一個峰即為應(yīng)收集的病毒峰(見

圖1)，收集的病毒蛋白液為白色透明液體。
方法2滅活病毒原液澄清過濾后，先經(jīng)疏水柱StreamLine(Amersham pharmcia公司出品)，收集蛋白液，再加入離子交換柱(介質(zhì)CMsepharose FF6或DEAEsephrose FF6)，最后加入層析柱(Sepharose 4Fast flow介質(zhì))，收集病毒峰，其余步驟同方法1。
3、蛋白含量的測定按照0.003g/ml的比例，加入保護劑人血白蛋白。測定方法參見2000年版《中國生物制品規(guī)程》附錄中的蛋白含量測定法(Lowry法)。經(jīng)測定蛋白含量為80μg/ml，而濃縮液的蛋白含量為7.9mg/ml，雜蛋白去除率為99％以上，接種于人體后，不易引起過敏等副反應(yīng)。
4、疫苗的制備經(jīng)純化的病毒原液配以0.4-0.7％(mg/ml)Al(OH)3佐劑，制備成疫苗。
實施例4、SARS疫苗效力試驗(BHK21細(xì)胞蝕斑抑制中和法)采用免疫小鼠中和抗體測定法，昆明種小鼠由軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院實驗動物中心提供。中和抗體測定采用蝕斑減少試驗。參考疫苗(RA和RB)及中和試驗陽性血清由中國藥品生物制品檢定所提供。將被檢疫苗(T)和參考苗(R)分別按1∶32進行稀釋，體重12～14g小鼠10只，每只小鼠腹腔注射0.5ml疫苗，免疫2次，間隔7天。2次免疫后第7天采血，分離血清，同組小鼠血清等量混和，于56℃滅活30分鐘，稀釋陽性血清、被檢苗血清和參考苗血清，分別稀釋好的病毒(約200PFU/0.4ml)等量混合。同時將稀釋好的病毒再1∶2稀釋，作為病毒對照，置37℃水浴90分鐘，接種6孔板BHK21細(xì)胞，每孔0.4ml，37℃培養(yǎng)90分鐘，加入含甲基纖維素的培養(yǎng)基覆蓋物，于CO2孵箱中5培養(yǎng)天，染色，蝕斑計數(shù)，計算被檢苗和參考苗對病毒對照組的蝕斑減少率。病毒對照組的蝕斑平均數(shù)應(yīng)在50～150之間。
判定標(biāo)準(zhǔn)如下(1)合格T≥(RA+RB)/2-0.33；(2)重試(RA+RB)/2-0.66＜T＜(RA+RB)/2-0.33；(3)不合格T＜(RA+RB)/2-0.66。
實施例5、體外中和試驗
1、血清采集SARS疫苗以PBS做10倍稀釋后，在第0、3、7、14天進行疫苗注射，每批疫苗注射2500g家兔10只，每只0.5ml。注射前，注射后第7天、第14天、第28天分別采血，分離血清用于中和抗體試驗。
2、中和試驗(1)中和用病毒懸液制備取凍干SARS毒種1支，稀釋成10-2懸液，取上清液腦內(nèi)接種10～12克小白鼠，每只0.03ml/只，共接種10只，待小白鼠出現(xiàn)典型癥狀時，處死并收其腦組織，研磨，以20％小牛血清PBS稀釋成10-1懸液離心，取上清液分裝小管凍存于-70℃以下，同時取樣做病毒滴定，一般傳2～3代可制成-70℃凍存的中和用毒種。
(2)待檢血清樣品稀釋待檢血清用2％小牛血清PBS稀釋、按0.2ml血清加1.8ml稀釋液成1∶10，再取1∶10血清0.5ml加0.5ml稀釋液成1∶20，同樣依次稀釋成1∶40、1∶80、1∶160、1∶320～1∶1280共6個稀釋倍數(shù)的稀釋血清以備用。
(3)中和取上述待檢血清的8個稀釋度待檢樣品各0.5ml，加入中和用病毒懸液0.5ml在小管內(nèi)混勻，放置37℃水浴1小時，作注射小白鼠用。同樣將抗SARS血清標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋液與中和用病毒懸液混勻，水浴中和。中和用病毒懸液再稀釋成10-0、10-1、10-2、10-3四個稀釋度，各取0.5ml與2％小牛血清PBS0.5ml混合于小管內(nèi)，同樣放置37℃水浴作用1小時，作中和病毒對照用。
(4)注射將已中和的待檢血清的不同稀釋度的懸液和病毒對照接種10～12克小白鼠，血清從濃到稀的倍數(shù)接種小白鼠，而病毒對照則從稀到濃的倍數(shù)接種，每個稀釋度6只小白鼠，每只腦內(nèi)注射0.03ml。
結(jié)果接種后觀察14天，結(jié)果已中和病毒懸液接種小白鼠后，除1∶1280稀釋度死亡只小白鼠外，余全部健存；而對照組小白鼠四個稀釋度90％死亡，該結(jié)果說明本發(fā)明疫苗能有效抵抗SARS病毒的攻擊。
實施例6、安全性和毒性試驗1、安全性試驗經(jīng)滅活后的病毒液，腦內(nèi)接種體重為11～13g小鼠20只，每只0.03ml。正常喂養(yǎng)并觀察14天，無一出現(xiàn)發(fā)病、死亡。滅活效果能符合要求。
2、毒性試驗用稀釋、配制并分裝的SARS疫苗，對小鼠和豚鼠進行腹腔注射，注射前，將實驗動物稱重，并進行記錄。選取18～22g的小鼠5只，每只注射疫苗0.5ml；250～350g的豚鼠2只，每只注射疫苗5ml。注射后觀察7天，所有動物未出現(xiàn)發(fā)病或其他異常，且體重增加。
上述結(jié)果表明疫苗無毒、副作用，安全性好。
權(quán)利要求
1.一種SARS疫苗，其含有至少一個類型的SARS病毒的全抗原，或者含有至少一個類型的SARS病毒的不完全抗原。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的SARS疫苗，其還包含藥學(xué)上可接受的佐劑、保護劑、防腐劑和/或添加劑。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的SARS疫苗，其中所述佐劑是Al(OH)3.
4.根據(jù)權(quán)利要求2所述的SARS疫苗，其中所述防腐劑是硫柳汞。
5.一種制備SARS疫苗的方法，包括(1)篩選能夠在適于SARS病毒傳代的細(xì)胞中生長繁殖的SARS病毒株；(2)將篩選出的病毒株接種于生長良好的適于傳代的細(xì)胞中，在合適的培養(yǎng)條件下，經(jīng)大規(guī)模培養(yǎng)，收獲病毒原液；(3)病毒原液經(jīng)加入福爾馬林或β-丙內(nèi)酯滅活后，再濃縮、純化為純化原液；(4)將純化原液制備成疫苗。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述SARS疫苗制備方法，還包括向滅活的純化原液中添加藥學(xué)上可接受的佐劑、保護劑、防腐劑和/或添加劑的步驟。
7.根據(jù)權(quán)利要求5或6所述制備SARS疫苗的方法，其中適于SARS病毒傳代的細(xì)胞是Vero細(xì)胞、
8.根據(jù)權(quán)利要求5或6所述制備SARS疫苗的方法，其中適于SARS病毒傳代的細(xì)胞是人二倍體細(xì)胞。
9.根據(jù)權(quán)利要求5或6所述制備SARS疫苗的方法，其中適于SARS病毒傳代的細(xì)胞是人肺上皮細(xì)胞。
10.根據(jù)權(quán)利要求5或6所述制備SARS疫苗的方法，其中病毒原液按1∶2000的比例加入福爾馬林或β-丙內(nèi)酯，進行滅活。
11.根據(jù)權(quán)利要求5或6所述制備SARS疫苗方法，其中滅活的病毒液經(jīng)高倍超濾濃縮后，經(jīng)分子篩層析柱、離子交換后，去除大部分雜蛋白，得到純化原液。
12.根據(jù)權(quán)利要求5或6所述制備SARS疫苗方法，其中滅活的病毒液經(jīng)疏水柱后，再經(jīng)離子交換、分子篩層析柱，得到純化原液。
13.根據(jù)權(quán)利要求6所述SARS疫苗的制備方法，其中所述佐劑是Al(OH)3。
14.根據(jù)權(quán)利要求6所述SARS疫苗的制備方法，其中所述防腐劑是硫柳汞，保護劑是人血白蛋白。
15.根據(jù)權(quán)利要求1所述的SARS疫苗在預(yù)防和治療SARS疾病中的用途。
16.根據(jù)權(quán)利要求15所述的用途，其中包括使用所述SARS疫苗進行免疫接種的步驟。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種SARS疫苗及其制備方法和用途。本發(fā)明的SARS疫苗包括至少一個類型的SARS病毒的全抗原，或者含有至少一個類型的SARS病毒的不完全抗原。本發(fā)明SRAS疫苗是通過將篩選出病毒株大規(guī)模培養(yǎng)后，滅活所收集的病毒原液而制得的。本發(fā)明的SARS疫苗安全有效，可用于預(yù)防和治療非典型肺炎。
文檔編號A61P31/00GK1569228SQ03145928
公開日2005年1月26日 申請日期2003年7月17日 優(yōu)先權(quán)日2003年7月17日
發(fā)明者鄭海發(fā), 丁若愚, 王九裕, 王文輝, 李衛(wèi)東, 李金建 申請人:北京華特森基因科技有限公司, 北京百歐賽地生物工程技術(shù)開發(fā)中心, 北京普世康醫(yī)藥技術(shù)開發(fā)中心