專利名稱：用腺苷受體拮抗劑治療缺血再灌注損傷的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及心臟病學(xué)、醫(yī)藥化學(xué)和藥理學(xué)。更確切地，本發(fā)明涉及A2b腺苷受體拮抗劑和預(yù)防或治療缺血再灌注損傷。
背景技術(shù)：
組織血流和供氧的中止誘發(fā)一種被稱為缺血的病癥。實(shí)質(zhì)性供氧減少誘發(fā)一種被稱為低氧的病癥。缺血和低氧如果延長，能夠?qū)е陆M織功能的喪失，進(jìn)而細(xì)胞死亡。導(dǎo)致缺血和低氧的病癥有很多，既有天然的也有醫(yī)原性的，包括但不限于阻塞性血管疾病、冠脈血栓形成、腦血管血栓形成、動(dòng)脈瘤破裂、全身性出血、擠壓損傷、膿毒病、嚴(yán)重的皮膚灼傷、血管閉合性外科技術(shù)(例如胸腹動(dòng)脈瘤手術(shù)期間的脊柱缺血)、心肺旁路手術(shù)、器官移植、心肺萎陷(突發(fā)性心死亡)和窒息。
缺血和低氧的常規(guī)治療是通過增加一般的氧合作用或者通過除去血管阻塞的原因，恢復(fù)血流和供氧至正常水平。血流的恢復(fù)比缺血或低氧維持更長時(shí)間的情形后果有所改善。不過，公認(rèn)血流和供氧的恢復(fù)能夠?qū)е铝硗獾募?xì)胞死亡和功能喪失，與由缺血或低氧所導(dǎo)致的損害無關(guān)。這種由血流和供氧恢復(fù)所誘發(fā)的另外損害被稱為再灌注損傷。由再灌注損傷所導(dǎo)致的反常組織損害似乎與急性炎癥相似，起因是炎性細(xì)胞與再灌注組織的粘連、這些炎性細(xì)胞的活化和隨后自由基的生成(Granger et al.Ann.Rev.Physiol.，57，311-332，(1995))。再灌注組織內(nèi)自由基和其他細(xì)胞毒性生物分子的生成通過壞死或細(xì)胞凋亡途徑的活化而能夠誘發(fā)細(xì)胞死亡。
腺苷是一種由體內(nèi)所有細(xì)胞生成的細(xì)胞內(nèi)與細(xì)胞外信使。它在細(xì)胞外也是由酶轉(zhuǎn)化作用所生成的。缺血和低氧組織在能量消耗期間經(jīng)由腺苷三磷酸(ATP)的分解生成大量腺苷。基于對(duì)各種腺苷受體配體的相對(duì)親和性和編碼這些受體的基因序列分析，腺苷受體分為四種已知的亞型(即A1、A2a、A2b和A3)。每種亞型的活化引發(fā)獨(dú)特的、有時(shí)是相反的效應(yīng)。
四種腺苷受體亞型中已知有三種在再灌注損傷期間影響炎性細(xì)胞的功能。已經(jīng)顯示A2a腺苷受體的活化抑制受刺激的嗜中性白細(xì)胞釋放氧自由基，減少嗜中性白細(xì)胞與血管內(nèi)皮的粘連，抑制TNF和LTB4的嗜中性釋放(例如參見Cronstein et al.，J.Immunology，148，pp.2201-2206(1992)；Thiel et al.，(1995)J.Lab.Clin.Med.，126，pp.275-282；Krump et al.，J.Exp.Med.，186，pp.1401-6(1997))。
與A2a腺苷受體活化的抗炎效果相反，已經(jīng)顯示A1受體的活化促進(jìn)受刺激的嗜中性白細(xì)胞的趨化性和吞噬作用(例如參見Cronstein et al.(1992)，見上；Salmon et al.，J.Immunology 145，pp.2235-2240.(1990))，促進(jìn)單核細(xì)胞分化為多核巨細(xì)胞(Merrill et al.，Arth.Rheum.，40，pp.1308-1315(1997))。而且，血管內(nèi)皮細(xì)胞上A1受體的活化在心臟再灌注損傷模型中促進(jìn)炎癥和組織損傷(Becker et al.，Pharm.Pharmacol.Letters，2，pp.8-11(1992)；Schwartz et al.，J.Mol.Cell.Cardio.，25，pp.927-938(1993)；Zahler et al.，Cardiovascular Res.，28，pp.1366-1372(1994)；和Forman et al.，J.Pharmacol.Exp.Ther.，292(3)，pp.929-38(2000))。
A2b受體的活化也能引起促炎活性，例如IL-6的產(chǎn)生增加(Sitaraman et al.，J.Clin.Invest.，107，pp.861-9(2001)，和肥大細(xì)胞脫粒，這是一種局部炎癥的標(biāo)志(Linden et al.，Life Sci.，62，pp.1519-24(1998)；和Auchampach et al.，Mol.Pharmacol.，52，846-60(1997))。另外，血管平滑肌細(xì)胞中A2b受體的活化經(jīng)由直接刺激細(xì)胞凋亡而引起細(xì)胞的損失(Peyot et al.，Circ.Res.，86，pp.76-85(2000))。
目前對(duì)缺血再灌注損傷的治療僅僅通過恢復(fù)血流和氧合作用適度治療缺血損害。不過，由再灌注損傷所導(dǎo)致的損害一般是治療不足的。缺血再灌注的研究性治療包括腺苷和腺苷類似物的使用以及缺血肌細(xì)胞上鈉-鈣交換泵的抑制。不過，這些療法是不充分的。例如，腺苷和腺苷類似物的使用受到壓制劑活性和心動(dòng)過緩副作用的困擾。同樣，缺血肌細(xì)胞上鈉-鈣交換泵的抑制是不充分的，因?yàn)樗粫?huì)預(yù)防或治療炎癥或細(xì)胞凋亡的直接刺激。因而，仍然需要新的藥學(xué)上可接受的化合物和組合物，用于預(yù)防、限制或治療缺血再灌注損傷。
發(fā)明概述申請人發(fā)現(xiàn)，A2b腺苷受體拮抗劑能夠預(yù)防、限制或治療缺血再灌注損傷，從而解決了上述問題。本發(fā)明涉及使用A2b腺苷受體拮抗劑預(yù)防、限制或治療哺乳動(dòng)物缺血再灌注損傷的方法，所述動(dòng)物已經(jīng)經(jīng)歷過缺血事件，或者其中缺血事件即將來臨。
在一些實(shí)施方式中，本發(fā)明的方法包含在缺血事件前后十天內(nèi)對(duì)患者給予治療上有效量或預(yù)防上有效量的A2b腺苷受體拮抗劑。
在一些發(fā)明實(shí)施方式中，該A2b腺苷受體拮抗劑是式(I)化合物 或其藥學(xué)上可接受的鹽或N-氧化物，其中每一R1、R2和R3獨(dú)立地是a)氫；b)C1-6烷基、C2-6鏈烯基或C2-6炔基；其中所述烷基、鏈烯基或炔基是未取代的或者被一個(gè)或多個(gè)取代基取代，所述取代基選自由羥基、烷氧基、氨基、單烷基氨基、二烷基氨基、環(huán)烷基、芳基、雜環(huán)基、芳烷基、雜環(huán)基烷基、酰氨基、烷基氨基羰基、烷基磺酰氨基和烷基氨基磺?；M成的組；c)取代或未取代的芳基；或d)取代或未取代的雜環(huán)基；R4是單鍵、-O-、-(CH2)1-3-、-O(CH2)1-2-、-CH2OCH2-、-(CH2)1-2O-、-CH＝CHCH2-、-CH＝CH-或-CH2CH＝CH-；R5是
a)苯基；或b)二環(huán)或三環(huán)基團(tuán)，選自由下列基團(tuán)組成的組 和 其中該苯基、二環(huán)或三環(huán)基團(tuán)是未取代的或者被一個(gè)或多個(gè)Ra基團(tuán)取代，Ra選自由下列基團(tuán)組成的組a)C1-6烷基、C2-6鏈烯基或C2-6炔基；其中所述烷基、鏈烯基或炔基是未取代的或者被一個(gè)或多個(gè)取代基取代，所述取代基選自由氨基、單烷基氨基、二烷基氨基、取代或未取代的雜環(huán)基氨基羰基、(氨基)(Rb)酰基肼基羰基-、(氨基)(Rb)酰氧基羧基-、(羥基)(烷氧羰基)烷基氨甲?；?、酰氧基、醛基、鏈烯基磺酰氨基、烷氧基、烷氧基羰基、烷基氨基烷基氨基、二烷基氨基烷基氨基、烷基膦?；⑼榛酋０被?、氨甲?；b-、Rb-烷氧基-、Rb-烷基氨基-、氰基、氰基烷基氨甲?；?、環(huán)烷基氨基、二烷基膦?；Ⅺu代烷基磺酰氨基、雜環(huán)基烷基氨基、雜環(huán)基氨甲?；?、羥基、羥基烷基磺酰氨基、肟基、膦?；?、取代或未取代的芳烷基氨基、取代或未取代的芳基羧基烷氧基羰基、取代或未取代的雜芳基磺酰氨基、取代或未取代的雜環(huán)基、硫代氨甲?；腿谆M成的組；和b)(烷氧基羰基)芳烷基氨甲?；⑷┗?、鏈烯氧基、鏈烯基磺酰氨基、烷氧基、烷氧基羰基、烷基氨甲?；⑼檠趸驶被?、烷氧基羰基烷基氨基、烷基磺酰氨基、烷基磺酰氧基、氨基、氨基烷基芳烷基氨甲?；?、氨基烷基氨甲?；被榛s環(huán)基烷基氨甲?；被h(huán)烷基烷基環(huán)烷基氨甲?；?、氨基環(huán)烷基氨甲酰基、芳烷氧基羰基氨基、芳基雜環(huán)基、芳氧基、芳基磺酰氨基、芳基磺酰氧基、氨甲?；Ⅳ驶?、Rb-、Rb-烷氧基-、Rb-烷硫基-、Rb-烷基(烷基)氨基-、Rb-烷基(烷基)氨甲酰基-、Rb-烷基氨基-、Rb-烷基氨甲?；?、Rb-烷基磺?；?、Rb-烷基磺酰氨基、Rb-烷硫基、Rb-雜環(huán)基羰基、氨基烷基氨基羰基、二烷基氨基烷基氨基、烷基氨基烷基氨基、氰基、環(huán)烷基氨基、二烷基氨基烷基氨甲?；?、鹵素、雜環(huán)基烷基氨基、羥基、肟基、磷酸酯、取代或未取代的芳烷基氨基、取代或未取代的雜環(huán)基、取代或未取代的雜環(huán)基磺酰氨基、次硫酸(sulfoxy)酰氨基和硫代氨甲?；?；Rb選自由-COOH、-C(CF3)2OH、-CONHNHSO2CF3、-CONHORc、-CONHSO2Rc、-CONHSO2NHRc、-C(OH)RcPO3H2、-NHCOCF3、-NHCONHSO2Rc、-NHPO3H2、-NHSO2Rc、-NHSO2NHCORc、-OPO3H2、-OSO3H、-PO(OH)Rc、-PO3H2、-SO3H、-SO2NHRc、-SO3NHCORc、-SO3NHCONHCO2Rc和下列基團(tuán)組成的組 Rc選自由氫、-C1-4烷基、-C1-4烷基-CO2H和苯基組成的組，其中該-C1-4烷基、-C1-4烷基-CO2H和苯基是未取代的或者被一至三個(gè)取代基取代，所述取代基選自由鹵素、-OH、-OMe、-NH2、-NO2、未取代的芐基和被一至三個(gè)取代基取代的芐基組成的組，所述取代基選自由鹵素、-OH、-OMe、-NH2和-NO2組成的組；X1和X2獨(dú)立地選自由O和S組成的組；X3是N或CRd，其中Rd選自由下列基團(tuán)組成的組a)氫；b)C1-6烷基、C2-6鏈烯基或C2-6炔基；其中所述烷基、鏈烯基或炔基是未取代的或者被一個(gè)或多個(gè)取代基取代，所述取代基選自由羥基、烷氧基、氨基、單烷基氨基、二烷基氨基、環(huán)烷基、芳基、雜環(huán)基、芳烷基、雜環(huán)基烷基、酰氨基、烷基氨基羰基、烷基磺酰氨基和烷基氨基磺?；M成的組；c)取代或未取代的芳基；和d)取代或未取代的雜環(huán)基。
在本發(fā)明的一些實(shí)施方式中，R1是C1-6烷基。在一些實(shí)施方式中，R2是C1-6烷基。在一些實(shí)施方式中，R3是氫。在一些實(shí)施方式中，R4是單鍵。
在一些發(fā)明實(shí)施方式中，R5是取代的苯基。在其他實(shí)施方式中，R5是取代的二環(huán)或三環(huán)基團(tuán)，選自由下列基團(tuán)組成的組 在其他實(shí)施方式中，R5是 或 其中所述R5是未取代的或者被一個(gè)或多個(gè)Ra基團(tuán)取代，Ra選自由下列基團(tuán)組成的組a)C1-6烷基、C2-6鏈烯基或C2-6炔基；其中所述烷基、鏈烯基或炔基是未取代的或者被一個(gè)或多個(gè)取代基取代，所述取代基選自由氨基、單烷基氨基、二烷基氨基、取代或未取代的雜環(huán)基氨基羰基、(氨基)(Rb)酰基肼基羰基-、(氨基)(Rb)酰氧基羧基-、(羥基)(烷氧羰基)烷基氨甲酰基、酰氧基、醛基、鏈烯基磺酰氨基、烷氧基、烷氧基羰基、烷基氨基烷基氨基、二烷基氨基烷基氨基、烷基膦?；⑼榛酋０被?、氨甲酰基、Rb-、Rb-烷氧基-、Rb-烷基氨基-、氰基、氰基烷基氨甲?；?、環(huán)烷基氨基、二烷基膦?；?、鹵代烷基磺酰氨基、雜環(huán)基烷基氨基、雜環(huán)基氨甲?；⒘u基、羥基烷基磺酰氨基、肟基、膦?；?、取代或未取代的芳烷基氨基、取代或未取代的芳基羧基烷氧基羰基、取代或未取代的雜芳基磺酰氨基、取代或未取代的雜環(huán)基、硫代氨甲?；腿谆M成的組；和b)(烷氧基羰基)芳烷基氨甲?；?、醛基、鏈烯氧基、鏈烯基磺酰氨基、烷氧基、烷氧基羰基、烷基氨甲?；⑼檠趸驶被?、烷氧基羰基烷基氨基、烷基磺酰氨基、烷基磺酰氧基、氨基、氨基烷基芳烷基氨甲?；?、氨基烷基氨甲酰基、氨基烷基雜環(huán)基烷基氨甲?；?、氨基環(huán)烷基烷基環(huán)烷基氨甲?；?、氨基環(huán)烷基氨甲?；?、芳烷氧基羰基氨基、芳基雜環(huán)基、芳氧基、芳基磺酰氨基、芳基磺酰氧基、氨甲?；?、羰基、Rb-、Rb-烷氧基-、Rb-烷硫基-、Rb-烷基(烷基)氨基-、Rb-烷基(烷基)氨甲?；?、Rb-烷基氨基-、Rb-烷基氨甲?；?、Rb-烷基磺?；?、Rb-烷基磺酰氨基、Rb-烷硫基、Rb-雜環(huán)基羰基、氨基烷基氨基羰基、二烷基氨基烷基氨基、烷基氨基烷基氨基、氰基、環(huán)烷基氨基、二烷基氨基烷基氨甲酰基、鹵素、雜環(huán)基烷基氨基、羥基、肟基、磷酸酯、取代或未取代的芳烷基氨基、取代或未取代的雜環(huán)基、取代或未取代的雜環(huán)基磺酰氨基、次硫酸(sulfoxy)酰氨基和硫代氨甲?；?。
在本發(fā)明的一些實(shí)施方式中，Ra選自由下列基團(tuán)組成的組a)C1-6烷基、C2-6鏈烯基或C2-6炔基；其中所述烷基、鏈烯基或炔基是未取代的或者被一個(gè)或多個(gè)取代基取代，所述取代基選自由氨基、單烷基氨基、二烷基氨基、取代或未取代的雜環(huán)基氨基羰基、(氨基)(Rb)?；禄驶?、(氨基)(Rb)酰氧基羧基-、(羥基)(烷氧羰基)烷基氨甲酰基、酰氧基、醛基、鏈烯基磺酰氨基、烷氧基、烷氧基羰基、烷基氨基烷基氨基、烷基膦?；⑼榛酋０被?、氨甲酰基、Rb-、Rb-烷氧基-、Rb-烷基氨基-、氰基、氰基烷基氨甲?；?、環(huán)烷基氨基、二烷基氨基烷基氨基、二烷基膦酰基、鹵代烷基磺酰氨基、雜環(huán)基烷基氨基、雜環(huán)基氨甲?；⒘u基、羥基烷基磺酰氨基、肟基、膦?；?、取代的芳烷基氨基、取代的芳基羧基烷氧基羰基、取代的雜芳基磺酰氨基、取代的雜環(huán)基、硫代氨甲?；腿谆M成的組；和b)(烷氧基羰基)芳烷基氨甲?；?、醛基、鏈烯氧基、鏈烯基磺酰氨基、烷氧基、烷氧基羰基、烷基氨甲酰基、烷氧基羰基氨基、烷氧基羰基烷基氨基、烷基磺酰氨基、烷基磺酰氧基、氨基、氨基烷基芳烷基氨甲酰基、氨基烷基氨甲酰基、氨基烷基雜環(huán)基烷基氨甲?；?、氨基環(huán)烷基烷基環(huán)烷基氨甲?；?、氨基環(huán)烷基氨甲?；?、芳烷氧基羰基氨基、芳基雜環(huán)基、芳氧基、芳基磺酰氨基、芳基磺酰氧基、氨甲?；?、羰基、Rb-、Rb-烷氧基-、Rb-烷基(烷基)氨基-、Rb-烷基(烷基)氨甲?；?、Rb-烷基氨基-、Rb-烷基氨甲酰基-、Rb-烷基磺?；?、Rb-烷基磺酰氨基、Rb-烷硫基、Rb-雜環(huán)基羰基、氰基、環(huán)烷基氨基、二烷基氨基烷基氨甲酰基、鹵素、雜環(huán)基烷基氨基、羥基、肟基、磷酸酯、取代的芳烷基氨基、取代的雜環(huán)基、取代的雜環(huán)基磺酰氨基、次硫酸(sulfoxy)酰氨基和硫代氨甲?；?。
在本發(fā)明的其他實(shí)施方式中，Ra選自由下列基團(tuán)組成的組a)C1-6烷基或C2-6鏈烯基，它們各自是未取代的或者被一個(gè)或多個(gè)取代基取代，所述取代基選自由氨基、單烷基氨基、二烷基氨基、取代或未取代的雜環(huán)基氨基羰基、Rb-、Rb-烷氧基-和取代或未取代的雜環(huán)基組成的組；和b)烷氧基羰基烷基氨基、氰基和羥基。
在一些發(fā)明實(shí)施方式中，X1是O。在一些實(shí)施方式中，X2是O。在一些實(shí)施方式中，X3是N。
在一些發(fā)明實(shí)施方式中，每個(gè)R1和R2是C2-4烷基；R3是氫；R4是單鍵；每個(gè)X1和X2是O；X3是N。在本發(fā)明的其他實(shí)施方式中，每個(gè)R1和R2獨(dú)立地是C2-4烷基；R3是氫；R4是單鍵；每個(gè)X1和X2是O；X3是N；且R5是被Ra取代的苯基。
在本發(fā)明的其他實(shí)施方式中，每個(gè)R1和R2是C2-4烷基；R3是氫；R4是單鍵；每個(gè)X1和X2是O；X3是N；且R5是被Ra取代的苯基；且Ra選自由下列基團(tuán)組成的組a)C1-6烷基或C2-6鏈烯基，它們各自是未取代的或者被一個(gè)或多個(gè)取代基取代，所述取代基選自由氨基、單烷基氨基、二烷基氨基、取代或未取代的雜環(huán)基氨基羰基、取代或未取代的雜環(huán)基、Rb-和Rb-烷氧基-組成的組；和b)烷氧基羰基烷基氨基、Rb-烷氧基-、氰基、取代或未取代的雜環(huán)基和羥基。
在本發(fā)明的其他實(shí)施方式中，每個(gè)R1和R2是C2-4烷基；R3是氫；R4是單鍵；每個(gè)X1和X2是O；X3是N；R5是被Ra取代的苯基；Ra是氰基。
在本發(fā)明的一些實(shí)施方式中，每個(gè)R1和R2獨(dú)立地是C2-4烷基；R3是氫；R4是單鍵；每個(gè)X1和X2是O；X3是N；R5是 其中所述R5是未取代的或者被一個(gè)或多個(gè)Ra基團(tuán)取代，Ra選自由下列基團(tuán)組成的組a)C1-6烷基、C2-6鏈烯基或C2-6炔基；其中所述烷基、鏈烯基或炔基是未取代的或者被一個(gè)或多個(gè)取代基取代，所述取代基選自由氨基、單烷基氨基、二烷基氨基、取代或未取代的雜環(huán)基氨基羰基、(氨基)(Rb)?；禄驶?、(氨基)(Rb)酰氧基羧基-、(羥基)(烷氧羰基)烷基氨甲?；?、酰氧基、醛基、鏈烯基磺酰氨基、烷氧基、烷氧基羰基、烷基氨基烷基氨基、二烷基氨基烷基氨基、烷基膦?；?、烷基磺酰氨基、氨甲?；?、Rb-、Rb-烷氧基-、Rb-烷基氨基-、氰基、氰基烷基氨甲?；h(huán)烷基氨基、二烷基氨基烷基氨基、二烷基膦?；?、鹵代烷基磺酰氨基、雜環(huán)基烷基氨基、雜環(huán)基氨甲酰基、羥基、羥基烷基磺酰氨基、肟基、膦?；?、取代或未取代的芳烷基氨基、取代或未取代的芳基羧基烷氧基羰基、取代或未取代的雜芳基磺酰氨基、取代或未取代的雜環(huán)基、硫代氨甲?；腿谆M成的組；和b)(烷氧基羰基)芳烷基氨甲?；⑷┗?、鏈烯氧基、鏈烯基磺酰氨基、烷氧基、烷氧基羰基、烷基氨甲?；⑼檠趸驶被?、烷氧基羰基烷基氨基、烷基磺酰氨基、烷基磺酰氧基、氨基、氨基烷基芳烷基氨甲酰基、氨基烷基氨甲酰基、氨基烷基雜環(huán)基烷基氨甲酰基、氨基環(huán)烷基烷基環(huán)烷基氨甲酰基、氨基環(huán)烷基氨甲酰基、芳烷氧基羰基氨基、芳基雜環(huán)基、芳氧基、芳基磺酰氨基、芳基磺酰氧基、氨甲酰基、羰基、Rb-、Rb-烷氧基-、Rb-烷硫基-、Rb-烷基(烷基)氨基-、Rb-烷基(烷基)氨甲?；?、Rb-烷基氨基-、Rb-烷基氨甲?；?、Rb-烷基磺酰基-、Rb-烷基磺酰氨基、Rb-烷硫基、Rb-雜環(huán)基羰基、氨基烷基氨基羰基、二烷基氨基烷基氨基、烷基氨基烷基氨基、氰基、環(huán)烷基氨基、二烷基氨基烷基氨甲?；?、鹵素、雜環(huán)基烷基氨基、羥基、肟基、磷酸酯、取代或未取代的芳烷基氨基、取代或未取代的雜環(huán)基、取代或未取代的雜環(huán)基磺酰氨基、次硫酸(sulfoxy)酰氨基和硫代氨甲酰基。
在本發(fā)明的另一種實(shí)施方式中，每個(gè)R1和R2是C2-4烷基；R3是氫；R4是單鍵；每個(gè)X1和X2是O；X3是N；R5是 其中所述R5是未取代的或者被一個(gè)或多個(gè)Ra基團(tuán)取代，Ra選自由下列基團(tuán)組成的組a)C1-6烷基或C2-6鏈烯基，它們各自是未取代的或者被一個(gè)或多個(gè)取代基取代，所述取代基選自由氨基、單烷基氨基、二烷基氨基、取代或未取代的雜環(huán)基氨基羰基、取代或未取代的雜環(huán)基、Rb-和Rb-烷氧基-組成的組；和b)烷氧基羰基烷基氨基、Rb-烷氧基-、氰基、取代或未取代的雜環(huán)基和羥基。
在另一種實(shí)施方式中，每個(gè)R1和R2是C2-4烷基；R3是氫；R4是單鍵；每個(gè)X1和X2是O；X3是N；R5是 和其中所述R5是未取代的或者被一個(gè)或多個(gè)Ra基團(tuán)取代，Ra選自由被一個(gè)或多個(gè)取代基取代的C2-5烷基組成的組，所述取代基選自由氨基、單烷基氨基和二烷基氨基組成的組。
在本發(fā)明的一些實(shí)施方式中，每個(gè)R1和R2是C2-4烷基；R3是氫；R4是單鍵；每個(gè)X1和X2是O；X3是N；R5是 其中所述R5是未取代的或者被一個(gè)或多個(gè)Ra基團(tuán)取代，Ra選自由下列基團(tuán)組成的組a)C1-6烷基、C2-6鏈烯基或C2-6炔基；其中所述烷基、鏈烯基或炔基是未取代的或者被一個(gè)或多個(gè)取代基取代，所述取代基選自由氨基、單烷基氨基、二烷基氨基、取代或未取代的雜環(huán)基氨基羰基、(氨基)(Rb)?；禄驶?、(氨基)(Rb)酰氧基羧基-、(羥基)(烷氧羰基)烷基氨甲?；ⅤＱ趸?、醛基、鏈烯基磺酰氨基、烷氧基、烷氧基羰基、烷基氨基烷基氨基、二烷基氨基烷基氨基、烷基膦酰基、烷基磺酰氨基、氨甲?；?、Rb-、Rb-烷氧基-、Rb-烷基氨基-、氰基、氰基烷基氨甲酰基、環(huán)烷基氨基、二烷基膦酰基、鹵代烷基磺酰氨基、雜環(huán)基烷基氨基、雜環(huán)基氨甲?；?、羥基、羥基烷基磺酰氨基、肟基、膦?；⑷〈蛭慈〈姆纪榛被?、取代或未取代的芳基羧基烷氧基羰基、取代或未取代的雜芳基磺酰氨基、取代或未取代的雜環(huán)基、硫代氨甲?；腿谆M成的組；和
b)(烷氧基羰基)芳烷基氨甲?；⑷┗?、鏈烯氧基、鏈烯基磺酰氨基、烷氧基、烷氧基羰基、烷基氨甲酰基、烷氧基羰基氨基、烷氧基羰基烷基氨基、烷基磺酰氨基、烷基磺酰氧基、氨基、氨基烷基芳烷基氨甲?；被榛奔柞；?、氨基烷基雜環(huán)基烷基氨甲?；被h(huán)烷基烷基環(huán)烷基氨甲?；被h(huán)烷基氨甲?；⒎纪檠趸驶被⒎蓟s環(huán)基、芳氧基、芳基磺酰氨基、芳基磺酰氧基、氨甲酰基、羰基、Rb-、Rb-烷氧基-、Rb-烷硫基-、Rb-烷基(烷基)氨基-、Rb-烷基(烷基)氨甲?；?、Rb-烷基氨基-、Rb-烷基氨甲酰基-、Rb-烷基磺?；?、Rb-烷基磺酰氨基、Rb-烷硫基、Rb-雜環(huán)基羰基、氨基烷基氨基羰基、二烷基氨基烷基氨基、烷基氨基烷基氨基、氰基、環(huán)烷基氨基、二烷基氨基烷基氨甲?；Ⅺu素、雜環(huán)基烷基氨基、羥基、肟基、磷酸酯、取代或未取代的芳烷基氨基、取代或未取代的雜環(huán)基、取代或未取代的雜環(huán)基磺酰氨基、次硫酸(sulfoxy)酰氨基和硫代氨甲?；?br> 在本發(fā)明的其他實(shí)施方式中，每個(gè)R1和R2是C2-4烷基；R3是氫；R4是單鍵；每個(gè)X1和X2是O；X3是N；R5是 且其中所述R5是未取代的或者被一個(gè)或多個(gè)Ra基團(tuán)取代，Ra選自由下列基團(tuán)組成的組a)C1-6烷基或C2-6鏈烯基，它們各自是未取代的或者被一個(gè)或多個(gè)取代基取代，所述取代基選自由氨基、單烷基氨基、二烷基氨基、取代或未取代的雜環(huán)基氨基羰基、取代或未取代的雜環(huán)基、Rb-和Rb-烷氧基-組成的組；和b)烷氧基羰基烷基氨基、Rb-烷氧基-、氰基、取代或未取代的雜環(huán)基和羥基。
在本發(fā)明的另一種實(shí)施方式中，每個(gè)R1和R2是C2-4烷基；R3是氫；R4是單鍵；每個(gè)X1和X2是O；X3是N；R5是
且其中所述R5是未取代的或者被一個(gè)或多個(gè)Ra基團(tuán)取代，Ra選自由下列基團(tuán)組成的組a)C1-4烷基或C2-4鏈烯基，它們各自是未取代的或者被一個(gè)或多個(gè)取代基取代，所述取代基選自由氨基、單烷基氨基、二烷基氨基、取代或未取代的雜環(huán)基氨基羰基、取代或未取代的雜環(huán)基和Rb-組成的組；和b)Rb-烷氧基-和取代的雜環(huán)基。
在本發(fā)明的一些實(shí)施方式中，每個(gè)R1和R2是丙基；R3是氫；R4是單鍵；R5是被一個(gè)或多個(gè)Ra基團(tuán)取代的苯基、 或 其中所述二環(huán)或三環(huán)基團(tuán)是未取代的或者被一個(gè)或多個(gè)Ra基團(tuán)取代，Ra選自由下列基團(tuán)組成的組a)C1-6烷基或C2-6鏈烯基，它們各自是未取代的或者被一個(gè)或多個(gè)取代基取代，所述取代基選自由氨基、單烷基氨基、二烷基氨基、取代或未取代的雜環(huán)基氨基羰基、Rb-、Rb-烷氧基-和取代或未取代的雜環(huán)基組成的組；和b)烷氧基羰基烷基氨基、氰基和羥基；每個(gè)X1和X2是O；且X3是N。
在優(yōu)選的實(shí)施方式中，本發(fā)明方法中所用的式(I)化合物是3-[4-(2，6-二氧代-1，3-二丙基-2，3，6，7-四氫-1H-嘌呤-8-基)-二環(huán)[2.2.2]辛-1-基]-丙酸。
在一些實(shí)施方式中，將A2b腺苷受體拮抗劑對(duì)人給藥。
在一些實(shí)施方式中，將用于本發(fā)明方法中的A2b腺苷受體拮抗劑與藥學(xué)上適合的載體一起配制成藥學(xué)上可接受的組合物。
本發(fā)明可用于治療已經(jīng)經(jīng)歷缺血事件的患者或者其中缺血事件即將來臨的患者。缺血事件的實(shí)例包括急性冠脈綜合征(包括心肌梗塞)、中風(fēng)、器官移植、腎缺血、休克和器官移植手術(shù)。
在一些實(shí)施方式中，本發(fā)明的方法包括在缺血事件前后兩天內(nèi)給予A2b腺苷受體拮抗劑。在另一種實(shí)施方式中，該方法包括在缺血事件后兩天內(nèi)給予A2b腺苷受體拮抗劑。
在一些實(shí)施方式中，用于本發(fā)明方法中的化合物表現(xiàn)對(duì)A2b腺苷受體的親和性比對(duì)A2a腺苷受體或A3腺苷受體的親和性至少大10倍。在其他實(shí)施方式中，用于本發(fā)明方法中的化合物進(jìn)一步表現(xiàn)對(duì)A1腺苷受體的親和性比對(duì)A2a腺苷受體或A3腺苷受體的親和性至少大10倍。
在一些實(shí)施方式中，用在本發(fā)明方法中的化合物對(duì)A2b腺苷受體表現(xiàn)低于500nM的Ki值。在其他實(shí)施方式中，用在本發(fā)明方法中的化合物對(duì)A2b腺苷受體表現(xiàn)低于200nM的Ki值。
在一些實(shí)施方式中，本發(fā)明涉及治療由A2b腺苷受體活化介導(dǎo)的疾病或病癥的方法，包含對(duì)需要的哺乳動(dòng)物給予有效量的上述式(I)化合物。
在一些實(shí)施方式中，本發(fā)明涉及使用A2b腺苷受體拮抗劑在已經(jīng)經(jīng)歷缺血事件或者其中缺血事件即將來臨的哺乳動(dòng)物中限制由缺血事件引起組織壞死的方法。
在一些實(shí)施方式中，本發(fā)明涉及使用A2b腺苷受體拮抗劑在已經(jīng)經(jīng)歷心肌梗塞或者其中心肌梗塞即將來臨的哺乳動(dòng)物中限制心肌梗塞后梗塞大小的方法。
附圖的簡要說明

圖1描繪方案I所得心肌梗塞大小數(shù)據(jù)(見實(shí)施例2)。圖A描繪四個(gè)實(shí)驗(yàn)組中的危險(xiǎn)區(qū)大小，以左心室的百分比表示。圖B描繪梗塞大小，為危險(xiǎn)區(qū)的百分比。圖C描繪梗塞大小，以左心室的百分比表示。圖D反映梗塞大小的圖形，以危險(xiǎn)區(qū)的百分比和冠脈閉合后30分鐘所測量的透壁旁系血流表示。
圖2描繪方案II所得心肌梗塞大小數(shù)據(jù)(見實(shí)施例3)。圖A描繪四個(gè)實(shí)驗(yàn)組中的危險(xiǎn)區(qū)大小，以左心室的百分比表示。出于對(duì)比的目的，來自方案I的對(duì)照組也包括在內(nèi)。圖B描繪梗塞大小，為危險(xiǎn)區(qū)的百分比。圖C描繪梗塞大小，以左心室的百分比表示。圖D反映梗塞大小的圖形，以危險(xiǎn)區(qū)的百分比和冠脈閉合后30分鐘所測量的透壁旁系血流表示。
圖3描繪方案III所得心肌梗塞大小數(shù)據(jù)(見實(shí)施例4)。圖A描繪四個(gè)實(shí)驗(yàn)組中的危險(xiǎn)區(qū)大小，以左心室的百分比表示。圖B描繪梗塞大小，為危險(xiǎn)區(qū)的百分比。圖C描繪梗塞大小，以左心室的百分比表示。圖D反映梗塞大小的圖形，以危險(xiǎn)區(qū)的百分比和冠脈閉合后30分鐘所測量的透壁旁系血流表示。
圖4描繪BG9928對(duì)重組人A1腺苷受體的競爭性結(jié)合。將從穩(wěn)定表達(dá)人A1腺苷受體的HEK-293細(xì)胞制備的膜(50μg膜蛋白)、0.92nM放射性配體[3H]-DPCPX和不同濃度BG9928一式三份培育在0.1ml緩沖液HE加2單位/mL腺苷脫氨基酶中，在21℃下培育2.5小時(shí)。在10μM NECA的存在下測量非特異性結(jié)合。通過過濾終止結(jié)合測定(N＝1)。
圖5描繪BG9928對(duì)重組人A2a腺苷受體的競爭性結(jié)合。將從穩(wěn)定表達(dá)人A2a腺苷受體的HEK-293細(xì)胞制備的膜(50μg膜蛋白)、1.16nM放射性配體[3H]-ZM241385和不同濃度BG9928一式三份培育在0.1ml緩沖液HE加2單位/mL腺苷脫氨基酶中，在21℃下培育2.5小時(shí)。在10μMXAC的存在下測量非特異性結(jié)合。通過過濾終止結(jié)合測定(N＝1)。
圖6描繪BG9928對(duì)重組人A2b腺苷受體的競爭性結(jié)合。將從穩(wěn)定表達(dá)人A2b腺苷受體的HEK-293細(xì)胞制備的膜(40-70μg膜蛋白)、30-40nM放射性配體[3H]-ZM241385和不同濃度BG9928一式三份培育在0.1ml緩沖液HE加2單位/mL腺苷脫氨基酶中，在21℃下培育2.5小時(shí)。在10μM NECA的存在下測量非特異性結(jié)合。通過過濾終止結(jié)合測定(N＝3)。
圖7描繪BG9928對(duì)重組人A3腺苷受體的單點(diǎn)結(jié)合。將從穩(wěn)定表達(dá)人A3腺苷受體的HEK-293細(xì)胞制備的膜(50μg膜蛋白)和0.12nM放射性配體[125I]-AB-MECA單獨(dú)或者與10μM IB-MECA或與10μM BG9928一起一式三份培育在0.1ml緩沖液HE加2單位/mL腺苷脫氨基酶中，在21℃下培育2.5小時(shí)。通過過濾終止結(jié)合測定(N＝2)。
圖8描繪BG9928的FLIPR測定法，采用在CHO-K1細(xì)胞中穩(wěn)定表達(dá)的重組人A1腺苷受體。FLIPR測定法測量表達(dá)重組人A1腺苷受體的CHO-K1細(xì)胞對(duì)激動(dòng)劑(CPA)濃度增加的響應(yīng)(頂部圖形)，以利用零點(diǎn)法測定拮抗劑BG9928在固定激動(dòng)劑濃度(200nM CPA)下的IC50(獲得50％響應(yīng)時(shí)的濃度)和KB值(底部圖形)。
圖9描繪BG9928的FLIPR測定法，采用在HEK-293細(xì)胞中穩(wěn)定表達(dá)的重組人A2b腺苷受體。FLIPR測定法測量穩(wěn)定表達(dá)重組人A2b腺苷受體的HEK-293細(xì)胞對(duì)激動(dòng)劑(NECA)濃度增加的響應(yīng)(頂部圖形)，以利用零點(diǎn)法測定拮抗劑BG9928在固定激動(dòng)劑濃度(5μM NECA)下的IC50(獲得50％響應(yīng)時(shí)的濃度)和KB值(底部圖形)。
圖10描繪BG9928的FLIPR測定法，采用在HEK-293細(xì)胞中穩(wěn)定表達(dá)的重組人A2b腺苷受體。FLIPR測定法在遞增濃度激動(dòng)劑(NECA)的存在下測量在表達(dá)大鼠A2b腺苷受體的HEK-293細(xì)胞中用1O、100和300nMBG9928所觀察到的對(duì)照響應(yīng)部分(頂部圖形)。底部圖形是頂部途徑中所列數(shù)據(jù)的Schild分析。
發(fā)明的詳細(xì)說明除非另有限定，本文所用所有技術(shù)和科學(xué)術(shù)語都具有為本發(fā)明所屬領(lǐng)域普通技術(shù)人員所普遍理解的含義。盡管在本發(fā)明的實(shí)施或試驗(yàn)中可以使用與本文所述那些相似或相同的方法和材料，不過下面描述適合的材料和方法。本文提到的所有出版物、專利申請、專利和其他參考文獻(xiàn)都全文結(jié)合在此作為參考。另外，材料、方法和實(shí)施例僅供例證，并非限制。
在說明書全文中，“包含”將被理解為暗示包括所述整體或整體組，但是不排除任意其他整體或整體組。
本文所用的“烷基”是飽和的脂族烴基。烷基可以是直鏈或支鏈的，例如可以在鏈中具有1至6個(gè)碳原子。直鏈烷基的實(shí)例包括但不限于乙基和丁基。支鏈烷基的實(shí)例包括但不限于異丙基和叔丁基。烷基可以可選地被一個(gè)或多個(gè)取代基取代，取代基例如烷氧基、氨基、硝基、羧基、烷酯基、氰基、鹵代、羥基、巰基、三鹵甲基、次硫酸(sulfoxy)或氨甲酰基。
本文所用的“鏈烯基”是具有至少一條雙鍵的脂族含碳基團(tuán)。鏈烯基可以是直鏈或支鏈的，例如可以在鏈中具有3至6個(gè)碳原子和1或2條雙鍵。鏈烯基的實(shí)例包括但不限于烯丙基和異丙烯基。鏈烯基可以可選地被一個(gè)或多個(gè)取代基取代，取代基例如烷氧基、氨基、硝基、羧基、烷酯基、氰基、鹵代、羥基、巰基、三鹵甲基、次硫酸(sulfoxy)或氨甲?；?br> 本文所用的“炔基”是具有至少一條叁鍵的脂族含碳基團(tuán)。炔基可以是直鏈或支鏈的，例如可以在鏈中具有3至6個(gè)碳原子和1或2條叁鍵。炔基的實(shí)例包括但不限于炔丙基和丁炔基。炔基可以可選地被一個(gè)或多個(gè)取代基取代，取代基例如烷氧基、氨基、硝基、羧基、烷酯基、氰基、鹵代、羥基、巰基、三鹵甲基、次硫酸(sulfoxy)或氨甲?；?。
本文所用的“芳基”是苯基或萘基、或其衍生物?！叭〈姆蓟笔潜灰粋€(gè)或多個(gè)取代基取代的芳基，取代基例如烷基、烷氧基、氨基、硝基、羧基、烷酯基、氰基、烷基氨基、二烷基氨基、鹵代、羥基、羥基烷基、巰基、烷基巰基、三鹵烷基、羧基烷基、次硫酸(sulfoxy)或氨甲?；?。
本文所用的“芳烷基”是被芳基取代的烷基。芳烷基的實(shí)例有芐基。
本文所用的“環(huán)烷基”是例如3至8個(gè)碳原子的脂族環(huán)。環(huán)烷基的實(shí)例包括環(huán)丙基和環(huán)己基。
本文所用的“?；笔侵辨溁蛑ф溚榛?(＝O)-基團(tuán)或甲?；?。?；膶?shí)例包括烷酰基(例如在烷基中具有1至6個(gè)碳原子)。乙酰基和新戊?；酋；膶?shí)例。?；梢允侨〈幕蛭慈〈?。
本文所用的“氨甲?；笔蔷哂薪Y(jié)構(gòu)H2N-CO2-的基團(tuán)?！巴榛奔柞；焙汀岸榛奔柞；北硎酒渲械謩e連接一個(gè)或兩個(gè)烷基代替氫的氨甲酰基。同樣，“芳基氨甲?；焙汀胺蓟榛奔柞；卑ǚ蓟嬉粋€(gè)氫，在后者情況下，烷基代替第二個(gè)氫。
本文所用的“羧基”是-COOH基團(tuán)。
本文所用的“烷氧基”是烷基-O-基團(tuán)，其中“烷基”是如前面所述的。
本文所用的“烷氧基烷基”是如前面所述的烷基，其中氫被如前面所述的烷氧基代替。
本文所用的“鹵素”或“鹵代”基團(tuán)是氟、氯、溴或碘。
本文所用的“雜環(huán)基”是5至約10元環(huán)結(jié)構(gòu)，其中該環(huán)中一個(gè)或多個(gè)原子是除碳以外的元素，例如N、O、S。雜環(huán)基可以是芳族的或非芳族的，也就是可以是飽和的或者可以是部分或完全不飽和的。芳族雜環(huán)基也可以被稱為“雜芳基”。雜環(huán)基的實(shí)例包括吡啶基、咪唑基、呋喃基、噻吩基、噻唑基、四氫呋喃基、四氫吡喃基、嗎啉基、硫嗎啉基、吲哚基、二氫吲哚基、異二氫吲哚基、哌啶基、嘧啶基、哌嗪基、異噁唑基、異噁唑烷基、四唑基和苯并咪唑基。
本文所用的“取代的雜環(huán)基”是其中一個(gè)或多個(gè)氫被取代基代替的雜環(huán)基，取代基例如烷氧基、烷基氨基、二烷基氨基、烷氧羰基、氨甲?；?、羧基、氰基、鹵代、三鹵甲基、羥基、羰基、硫代羰基、羥基烷基或硝基。
本文所用的“羥基烷基”表示被羥基取代的烷基。
本文所用的“氨磺?；本哂薪Y(jié)構(gòu)-S(O)2NH2?！巴榛被酋；焙汀岸榛被酋；北硎酒渲械謩e連接一個(gè)或兩個(gè)烷基代替氫的氨磺?；Ｍ瑯?，“芳基氨磺?；焙汀胺蓟榛被酋；卑ǚ蓟嬉粋€(gè)氫，在后者情況下，烷基代替第二個(gè)氫。
本文所用的“拮抗劑”是與受體結(jié)合但不激活該受體的分子。它與內(nèi)源性配體競爭該結(jié)合部位，因而減少內(nèi)源性配體刺激該受體的能力。
本文所用的“選擇性拮抗劑”是與腺苷受體特定亞型結(jié)合親和性高于其他亞型的拮抗劑。本文所用的“A2b選擇性拮抗劑”是對(duì)A2b受體具有高親和性的拮抗劑，并且(a)對(duì)A2b受體亞型具有納摩爾級(jí)結(jié)合親和性，(b)對(duì)A2b亞型的親和性比A2a和A3受體亞型至少大10倍，更優(yōu)選50倍，最優(yōu)選100倍。A2b選擇性拮抗劑可以可選地對(duì)A1受體亞型具有親和性，并且(a)對(duì)A1受體亞型具有納摩爾級(jí)結(jié)合親和性，(b)對(duì)A1亞型的親和性比A2a和A3受體亞型至少大10倍，更優(yōu)選50倍，最優(yōu)選100倍。
本文所用的“梗塞”表示由對(duì)組織(例如心肌)血液供應(yīng)梗阻引起的局部壞死。
本文所用的“缺血”表示由于局部區(qū)域(即器官或組織)血管阻塞，該區(qū)域血液供應(yīng)(循環(huán))不足。缺血包括組織血流和供氧的完全停止以及低氧，由此組織供氧有實(shí)質(zhì)性減少。
本文所用的“再灌注”表示器官或組織血流的恢復(fù)。
本文所用的“缺血再灌注損傷”表示由缺血繼之以再灌注所導(dǎo)致的組織損傷。
本文所用的“藥學(xué)上可接受的”表示在治療或預(yù)防以腺苷濃度升高和/或?qū)ο佘彰舾行栽黾訛樘卣鞯牟“Y中有效的量。
本文所用的術(shù)語“患者”表示動(dòng)物，包括哺乳動(dòng)物(例如人類)。
本文所用的“藥學(xué)上可接受的載體或助劑”表示無毒的載體或助劑，可以與本發(fā)明化合物一起對(duì)動(dòng)物給藥，不會(huì)破壞其藥理活性。
藥學(xué)上可接受的陰離子鹽包括下列酸的鹽甲磺酸、鹽酸、氫溴酸、硫酸、磷酸、硝酸、苯甲酸、檸檬酸、酒石酸、富馬酸、馬來酸、CH3-(CH2)n-COOH(其中n是0-4)、HOOC-(CH2)n-COOH(其中n是如上所定義的)。
在使用溶劑對(duì)時(shí)，所用溶劑的比例是體積/體積(v/v)。
在使用固體在溶劑中的溶解度時(shí)，固體與溶劑的比例是重量/體積(wt/v)。
另外，下列縮寫將適用于說明書全文BCA表示Bicinchoninic acid。
BG9928表示3-[4-(2，6-二氧代-1，3-二丙基-2，3，6，7-四氫-1H-嘌呤-8-基)-二環(huán)[2.2.2]辛-1-基]-丙酸。
(Ca2+)i表示細(xì)胞內(nèi)鈣。
CCD表示荷電偶聯(lián)裝置。
CPA表示N6-環(huán)戊基腺苷。
CPM表示每分鐘的個(gè)數(shù)。
DPM表示每分鐘的分解。
DR表示濃度比，也就是在拮抗劑的存在下產(chǎn)生限定響應(yīng)(通常但不是必需為最大程度的50％)的激動(dòng)劑濃度除以在沒有拮抗劑的存在下產(chǎn)生相同響應(yīng)的濃度。
EDTA表示乙二胺四乙酸。
FLIPR表示熒光成像平板讀數(shù)。-BG9928表示氚標(biāo)記的BG9928。-DPCPX表示氚標(biāo)記的8-環(huán)戊基-1，3-二丙基黃嘌呤，它是A1與A2b腺苷受體的競爭性底物。-ZM241385表示氚標(biāo)記的4-(2-[7-氨基-2-(呋喃基)(1，2，4)三唑并(2，3-a)(1，3，5)三嗪-5-基氨基]乙基)苯酚，它是A2a腺苷受體的競爭性底物。表示游離放射性配體的濃度。-AB-MECA表示[125碘]標(biāo)記的N6-(4-氨基芐基)-9-(5-甲基羰基)-β-D-呋喃核糖基)腺嘌呤。
IB-MECA表示1-脫氧-1-[6-[[(3-碘苯基)甲基]氨基]-9H-嘌呤-9-基]-N-甲基-βN6-(4-氨基芐基)-9-(5-(甲基羰基)-β-D-呋喃核糖酰胺。
IC50表示抑制50％所測量活性的試劑濃度。
KB表示拮抗劑離解常數(shù)。
KD表示由飽和度分析所測定的放射性標(biāo)記藥物離解常數(shù)。
KI表示藥物的抑制常數(shù)；在競爭測定法中占據(jù)50％受體時(shí)的競爭性配體濃度，如果沒有放射性配體存在的話。
AB-MECA表示N6-(4-氨基芐基)-9-(5-(甲基羰基)-β-D-呋喃核糖基)腺苷。
N表示觀察的數(shù)量。
NECA表示5’N-乙酰氨基腺苷。
pA2表示拮抗劑效力的對(duì)數(shù)量度；拮抗劑在激動(dòng)劑濃度-響應(yīng)曲線中產(chǎn)生2-倍偏移的濃度的負(fù)對(duì)數(shù)。
PMSF表示苯甲基磺酰氟。
RFU表示相對(duì)熒光單位。
3H-R-PIA表示[3H]-R-N6苯基異丙基腺苷(A3腺苷受體的放射性配體)。
Schild圖形表示log(濃度比-1)、即log(DR-1)對(duì)log(拮抗劑濃度)作圖。log濃度軸上的截距等于pA2值，而斜率給出關(guān)于拮抗作用屬性的信息。
SD表示標(biāo)準(zhǔn)偏差。
SEM平均值的標(biāo)準(zhǔn)誤差。
XAC表示黃嘌呤氨基同類物。
一般而言，本發(fā)明以高度有效的選擇性A2b腺苷受體拮抗劑為特征。在一些實(shí)施方式中，本發(fā)明化合物可以可選地是選擇性A1腺苷受體拮抗劑。
腺苷拮抗劑化合物的合成可用于本發(fā)明的化合物可以借助本領(lǐng)域已知的常規(guī)方法制備。例如，式I化合物的合成描述在國際專利公報(bào)WO 01/34604和WO 01/34610中。
本文描述兩種一般方法。每種方法采用共同的原料1，3-二取代的-5，6-二氨基尿嘧啶(化合物(VI))，如下兩個(gè)流程所示。1，3-二取代的-5，6-二氨基尿嘧啶可以這樣制備，將相應(yīng)的對(duì)稱或不對(duì)稱取代的脲用氰基乙酸處理，繼之以亞硝化和還原作用(例如參見J.Org.Chem.16，1879，1951；Can J.Chem.46，3413，1968，結(jié)合在此作為參考)。不對(duì)稱取代的黃嘌呤可以經(jīng)由Mueller的方法獲得(J.Med.Chem.36，3341，1993，結(jié)合在此作為參考)。在這種方法中，在Vorbruggen條件下使6-氨基尿嘧啶的尿嘧啶N3位單烷基化?；蛘撸慈〈腘1或N3位可以在合成的最后階段被官能化(例如烷基化)。
在第一種一般方法中，1，3-二取代的-5，6-二氨基尿嘧啶(化合物(VI))可以首先經(jīng)歷環(huán)閉合反應(yīng)，生成8-位未取代的黃嘌呤中間體。這種中間體繼而可以與Z-R3部分的前體化合物偶聯(lián)，生成所需8-取代的黃嘌呤。參照下列流程1，原料1，3-二取代的-5，6-二氨基尿嘧啶(即化合物(VI))首先與HC(OEt)3經(jīng)歷環(huán)閉合反應(yīng)，生成8-位未取代的黃嘌呤中間體(即化合物(A))。這種中間體在被氨基保護(hù)基團(tuán)保護(hù)(例如用THP或BOM保護(hù)N7位)后，進(jìn)一步在強(qiáng)堿(例如正丁基鋰(n-BuLi)或二異丙氨基化鋰(LDA))的存在下與Z-R3部分的前體化合物(例如醛或酮)經(jīng)歷偶聯(lián)反應(yīng)，生成醇(即化合物(C))。然后可以借助本領(lǐng)域普通技術(shù)人員熟知的方法使醇羥基反應(yīng)，將醇轉(zhuǎn)化為胺、硫醇、醚、內(nèi)酯(例如化合物(E))或其他官能化化合物。然后可以除去N7保護(hù)，得到去保護(hù)產(chǎn)物(即化合物(F))，它可以進(jìn)一步官能化，得到本發(fā)明化合物。
流程1 在第二種一般方法中，本發(fā)明化合物可以這樣制備，使原料1，3-二取代的-5，6-二氨基尿嘧啶與Z-R3部分的前體化合物(例如醛或羧酸或羧酸酰氯)反應(yīng)，生成6-酰胺取代的尿嘧啶中間體，后者繼而可以經(jīng)歷環(huán)閉合反應(yīng)，得到所需的黃嘌呤化合物。參照下列流程2，原料1，3-二取代的-5，6-二氨基尿嘧啶(即化合物(VI))首先與二羧基/酯取代的Z-R3部分的前體化合物HOOC-Z-R3-COORa(即化合物(G)；Ra代表H、C1-5烷基或芐基，所述苯基環(huán)可選地被1-3個(gè)取代基取代，取代基選自由鹵素、羥基或C1-3烷氧基組成的組)偶聯(lián)，得到6-酰胺取代的尿嘧啶中間體(即化合物(H))該反應(yīng)是本領(lǐng)域普通技術(shù)人員熟知的(例如采用偶聯(lián)試劑，例如苯并三唑-1-基氧基三(二甲氨基)膦六氟磷酸鹽(BOP)、O-苯并三唑-1-基-N，N，N’，N’-四甲基脲鎓六氟磷酸鹽(HBTU)或O-(7-氮雜苯并三唑-1-基)-N，N，N’，N’-四甲基脲鎓六氟磷酸鹽(HATU))。化合物(G)的實(shí)例包括二環(huán)[3.2.1]辛烷-1，5-二羧酸一甲基酯和二環(huán)[2.2.2]辛烷-1，4-二羧酸一乙基酯。尿嘧啶中間體然后可以在堿性條件下(例如采用KOH和異丙醇)經(jīng)歷環(huán)閉合反應(yīng)，得到黃嘌呤化合物(即化合物(J))，后者可以進(jìn)一步經(jīng)歷官能化作用，生成各種本發(fā)明化合物。
流程2 所需的醛、酮、羧酸和羧酸酰氯是商業(yè)上可得到的(例如來自Aldrich Chemical Co.，Inc.，Milwaukee，Wisc.)或者可以容易借助熟知的合成方法從商業(yè)上可得到的原料制備。這類合成方法包括但不限于氧化、還原、水解、烷基化和Wittig確認(rèn)(homologation)反應(yīng)。就關(guān)于本發(fā)明二環(huán)烷烴羧酸(例如化合物(III)，它是化合物(G)的實(shí)例)制備的參考文獻(xiàn)而言，例如參見Aust.J.Chem.38，1705，1985；AustJ.Chem.39，2061，1986；J.Am.Chem.Soc.75，637，1953；J.Am.Chem.Soc.86，5183，1964；J.Am.Chem.Soc.102，6862，1980；J.Org.Chem.46，4795，1981；和J.Org.Chem.60，6873，1995。
進(jìn)一步使化合物(J)官能化有很多方法，所述化合物含有與R3部分連接的羧酸或酯。例如，化合物(J)可以轉(zhuǎn)化為對(duì)應(yīng)的丙烯酸衍生物。一種方式是首先水解化合物(J)的酯基(只要Ra不是H)，得到對(duì)應(yīng)的羧酸，還原羧酸為對(duì)應(yīng)的醇，氧化醇為對(duì)應(yīng)的醛，然后進(jìn)行Wadsworth-Horner-Emmons或Witting反應(yīng)，生成對(duì)應(yīng)的丙烯酸衍生物。化合物(J)也可以直接轉(zhuǎn)化為其對(duì)應(yīng)的醇。一種不同的變化是直接轉(zhuǎn)化化合物(J)為其對(duì)應(yīng)的醛。進(jìn)一步的變化是轉(zhuǎn)化含酯化合物(J)為其對(duì)應(yīng)的羧酸，然后直接轉(zhuǎn)化為醛?；蛘?，可以先使Z-R3部分的前體化合物官能化，再在流程1中與1，3-二取代的-8-未取代的黃嘌呤偶聯(lián)或者在流程2中與1，3-二取代的-5，6-二氨基尿嘧啶偶聯(lián)。進(jìn)而，本發(fā)明化合物可以在固體載體(例如Wang樹脂)上制備。
3-[4-(2，6-二氧代-1，3-二丙基-2，3，6，7-四氫-1H-嘌呤-8-基)-二環(huán)[2.2.2]辛-1-基]-丙酸(BG9928)的合成描述在國際專利公報(bào)WO01/34610中。
在一些實(shí)施方式中，化合物可以是非手性化合物、旋光活性化合物、純的非對(duì)映體、非對(duì)映體混合物、前體藥物或藥理學(xué)上可接受的鹽的形式。
在一些發(fā)明實(shí)施方式中，式I化合物表現(xiàn)對(duì)A2b腺苷受體的親和性比對(duì)A2a腺苷受體或A3腺苷受體的親和性至少大10倍。在其他實(shí)施方式中，式I化合物表現(xiàn)對(duì)A2b腺苷受體的親和性比對(duì)A2a腺苷受體或A3腺苷受體的親和性至少大50倍。在其他實(shí)施方式中，式I化合物表現(xiàn)對(duì)A2b腺苷受體的親和性比對(duì)A2a腺苷受體或A3腺苷受體的親和性至少大100倍。在一些實(shí)施方式中，除了對(duì)A2b腺苷受體的親和性以外，式I化合物可選地表現(xiàn)對(duì)A1腺苷受體的親和性。
在一些發(fā)明實(shí)施方式中，式I化合物對(duì)A2b腺苷受體表現(xiàn)低于500nM的Ki值。在其他發(fā)明實(shí)施方式中，式I化合物對(duì)A2b腺苷受體表現(xiàn)低于200nM的Ki值。在其他發(fā)明實(shí)施方式中，式I化合物對(duì)A2b腺苷受體表現(xiàn)低于10nM的Ki值。
A2b腺苷受體抗體的產(chǎn)生本發(fā)明還涵蓋抗A2b腺苷受體抗體作為該受體拮抗劑的用途。這類抗體阻滯A2b腺苷受體上的配體(例如腺苷)結(jié)合部位，或者防止配體(例如腺苷)與該受體結(jié)合。
利用本領(lǐng)域普通技術(shù)人員熟知的多種技術(shù)，A2b腺苷受體可以用于引發(fā)與A2b腺苷受體結(jié)合的多克隆或單克隆抗體?；蛘?，可以按照熟知方法合成相當(dāng)于A2b腺苷受體特定區(qū)域的肽，并用于創(chuàng)造免疫試劑。
人們已經(jīng)克隆了人A2b腺苷受體，并且已經(jīng)鑒別了編碼該受體的DNA序列以及該受體的蛋白質(zhì)序列(Rivkee et al.，Mol.Endocrinol.，6，pp.1598-1604(1992)；Pierce et al.，Biochem.Biophys.Res.Commun.，187，pp.86-93(1992)；Reppert et al.，美國專利5,516,894)。
針對(duì)本發(fā)明A2b腺苷受體的抗體是免疫球蛋白分子或其部分，它們與本發(fā)明A2b腺苷受體有免疫反應(yīng)性。更優(yōu)選地，用在本發(fā)明方法中的抗體與A2b腺苷受體的配體結(jié)合域有免疫反應(yīng)性。
針對(duì)A2b腺苷受體的抗體可以借助適合宿主的免疫接種而生成。這類抗體可以是多克隆的或單克隆的。優(yōu)選地，它們是單克隆的。多克隆和單克隆抗體的產(chǎn)生屬于本領(lǐng)域的普通技能。就可用于實(shí)施發(fā)明的方法評(píng)論而言，例如參見Harlow and Lane(1988)，Antibodies，ALaboratory Manual，Yelton，D.E.et al.(1981)；Ann.Rev.ofBiochem.，50，pp.657-80.，和Ausubel et al.(1989)；CurrentProtocols in Molecular Biology(New YorkJohn Wiley&Sons)，每年更新。對(duì)A2b腺苷受體的免疫反應(yīng)性測定可以借助本領(lǐng)域熟知的任意若干方法進(jìn)行，例如包括免疫印跡測定法和ELISA。
親和性為10-8M-1或優(yōu)選10-9至10-1M-1或者更強(qiáng)的單克隆抗體通常是借助標(biāo)準(zhǔn)工藝制備的，例如Harlow and Lane，(1988)所述，出處同上。簡而言之，選擇適當(dāng)?shù)膭?dòng)物，遵循所需的免疫接種方案。在適當(dāng)?shù)臅r(shí)間之后，切除這類動(dòng)物的脾臟，在適當(dāng)?shù)倪x擇條件下使單個(gè)的脾細(xì)胞通常與無限增殖化骨髓瘤細(xì)胞融合。之后，無性系分離細(xì)胞，測試每種克隆體上清液中適當(dāng)?shù)奶禺愑谀康目乖瓍^(qū)域的抗體的產(chǎn)生。
其他適合的技術(shù)涉及將淋巴細(xì)胞體外暴露于抗原性A2b腺苷受體，或者，在噬菌體或相似載體中選擇抗體文庫。參見Huse et al.，Science，246，pp.1275-81(1989)?？捎糜诒景l(fā)明的抗體在采用時(shí)可以經(jīng)過或者不經(jīng)修飾?？乖?在這種情況下是A2b腺苷受體)和抗體可以這樣進(jìn)行標(biāo)記，以共價(jià)或非共價(jià)方式結(jié)合一種提供可檢測信號(hào)的物質(zhì)。各種標(biāo)記和綴合技術(shù)是本領(lǐng)域已知的，都可以用于實(shí)施本發(fā)明。適合的標(biāo)記包括放射性核素、酶、底物、輔因子、抑制劑、熒光劑、化學(xué)發(fā)光劑、磁性粒子等。教導(dǎo)這類標(biāo)記用途的專利包括美國專利3,817,837、3,850,752、3,939,350、3,996,345、4,277,437、4,275,149和4,366,241。還可以生產(chǎn)重組免疫球蛋白(參見美國專利4,816,567)。
本發(fā)明的抗體還可以是一種雜合分子，由來自不同物種(例如小鼠和人)的免疫球蛋白序列生成或者由來自相同物種的免疫球蛋白輕鏈與重鏈序列部分生成?？贵w可以是一種單鏈抗體或人源化抗體。它可以是具有多種結(jié)合特異性的分子，例如一種雙功能抗體，借助本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的大量技術(shù)制備，包括雜合雜交瘤的產(chǎn)生、二硫化物交換、化學(xué)交聯(lián)、在兩種單克隆抗體之間加入肽連接基團(tuán)、向特定細(xì)胞系引入兩套免疫球蛋白重鏈與輕鏈等等。本發(fā)明的抗體還可以是人單克隆抗體，例如由無限增殖化人細(xì)胞產(chǎn)生的那些、由SCID-hu小鼠或其他能夠產(chǎn)生“人”抗體的非人類動(dòng)物產(chǎn)生的那些或者由所克隆的人免疫球蛋白基因的表達(dá)所產(chǎn)生的那些。美國專利5,777,085和5,789,554教導(dǎo)了人源化抗體的制備。
總之，本領(lǐng)域技術(shù)人員根據(jù)本發(fā)明的教導(dǎo)，獲得多種可以用于改變本發(fā)明抗體生物學(xué)性質(zhì)的方法，包括增加或降低給定抗體分子的穩(wěn)定性或半衰期、免疫性、毒性、親和性或收率，或者以任意其他方式改變之，可以使其更適合于特定應(yīng)用。
A2b腺苷受體拮抗劑的用途本發(fā)明的方法和組合物可以用于預(yù)防、限制或治療已經(jīng)經(jīng)歷缺血事件或者其中缺血事件即將來臨的患者。缺血事件例如可以是急性冠脈綜合征(包括心肌梗塞)、中風(fēng)、器官移植、腎缺血、休克和器官移植手術(shù)。在一些實(shí)施方式中，缺血事件是心肌梗塞。
在本發(fā)明的一些實(shí)施方式中，在缺血事件前后十天內(nèi)給予A2b腺苷受體拮抗劑。在本發(fā)明的其他實(shí)施方式中，在缺血事件前后五天內(nèi)給予A2b腺苷受體拮抗劑。在本發(fā)明的其他實(shí)施方式中，在缺血事件前后兩天內(nèi)給予A2b腺苷受體拮抗劑。在其他實(shí)施方式中，在缺血事件后兩天內(nèi)給予A2b腺苷受體拮抗劑。
本發(fā)明還提供治療由A2b腺苷受體活化介導(dǎo)的疾病或病癥的方法，該方法對(duì)需要的哺乳動(dòng)物給予藥學(xué)上有效量或預(yù)防上有效量的本發(fā)明A2b腺苷受體拮抗劑。
缺血事件經(jīng)常導(dǎo)致患病組織的壞死。本發(fā)明還提供限制由缺血事件引起組織壞死的方法，包括確定已經(jīng)經(jīng)歷缺血事件或者其中缺血事件即將來臨的哺乳動(dòng)物，再給予治療上有效量或預(yù)防上有效量的本發(fā)明A2b腺苷受體拮抗劑。在一些實(shí)施方式中，在缺血事件前后十天內(nèi)給予A2b腺苷受體拮抗劑。在其他實(shí)施方式中，在缺血事件前后五天內(nèi)給予A2b腺苷受體拮抗劑。在其他實(shí)施方式中，在缺血事件前后兩天內(nèi)給予A2b腺苷受體拮抗劑。
心肌梗塞是由氧供應(yīng)與心肌需求之間的失衡所導(dǎo)致的心肌壞死的進(jìn)一步發(fā)展，導(dǎo)致心肌壞死。心肌梗塞經(jīng)常是由冠狀血管中血栓形成斑塊破裂所導(dǎo)致的，導(dǎo)致心肌部分血液供應(yīng)的急劇減少。這可以導(dǎo)致血管的部分或完全阻塞和隨后的心肌缺血。冠狀血管完全阻塞若干小時(shí)(例如4-6小時(shí))導(dǎo)致不可逆的心肌壞死。不過，在這一階段內(nèi)的再灌注能夠挽救心肌，減少發(fā)病和死亡。因此，本發(fā)明還提供在心肌梗塞之后限制梗塞大小的方法，該方法確定已經(jīng)經(jīng)歷心肌梗塞或者其中心肌梗塞即將來臨的患者，再給予治療上有效量或預(yù)防上有效量的本發(fā)明A2b腺苷受體拮抗劑。在一些實(shí)施方式中，在缺血事件前后十天內(nèi)給予本發(fā)明的A2b腺苷受體拮抗劑。在其他實(shí)施方式中，在缺血事件前后五天內(nèi)給予A2b腺苷受體拮抗劑。在其他實(shí)施方式中，在缺血事件前后兩天內(nèi)給予A2b腺苷受體拮抗劑。
藥物組合物可以將A2b腺苷受體拮抗劑配制成藥物組合物，用于對(duì)動(dòng)物、包括人類給藥。這些藥物組合物優(yōu)選地包括有效治療、限制或預(yù)防缺血再灌注損傷量的A2b腺苷受體拮抗劑和藥學(xué)上可接受的載體。
可用于這些藥物組合物的藥學(xué)上可接受的載體例如包括離子交換劑、氧化鋁、硬脂酸鋁、卵磷脂、血清蛋白(例如人血清白蛋白)、緩沖物質(zhì)(例如磷酸鹽)、甘氨酸、山梨酸、山梨酸鉀、飽和植物脂肪酸的偏甘油酯混合物、水、鹽或電解質(zhì)(例如硫酸魚精蛋白、磷酸氫二鈉、磷酸氫鉀、氯化鈉、鋅鹽、膠體二氧化硅、三硅酸鎂)、聚乙烯吡咯烷酮、基于纖維素的物質(zhì)、聚乙二醇、羧甲基纖維素鈉、聚丙烯酸酯、蠟、聚乙烯-聚氧丙烯-嵌段聚合物、聚乙二醇和羊毛脂。
本發(fā)明組合物可以腸胃外、口服、吸入噴霧、局部、經(jīng)直腸、鼻、頰、陰道或者經(jīng)由植入藥庫的方式給藥。本文所用的術(shù)語“腸胃外”包括皮下、靜脈內(nèi)、肌內(nèi)、關(guān)節(jié)內(nèi)、滑膜內(nèi)、胸骨內(nèi)、鞘內(nèi)、肝內(nèi)、損傷內(nèi)和顱內(nèi)注射或輸注技術(shù)。優(yōu)選地，組合物經(jīng)口服、腹膜內(nèi)或靜脈內(nèi)給藥。
本發(fā)明組合物的無菌可注射形式可以是水性或油性懸液。這些懸液可以按照本領(lǐng)域已知的技術(shù)加以配制，并使用適合的分散或濕潤劑和懸浮劑。無菌可注射制備物還可以是在無毒性腸胃外可接受的稀釋劑或溶劑中的無菌可注射溶液或懸液，例如在1，3-丁二醇中的溶液?？梢圆捎玫目山邮艿妮d體和溶劑有水、Ringer氏溶液和等滲氯化鈉溶液。另外，無菌的不揮發(fā)油習(xí)慣上用作溶劑或懸浮介質(zhì)。為此，可以采用任意品牌的不揮發(fā)油，包括合成的單-或二-甘油酯。脂肪酸、例如油酸及其甘油酯衍生物可用于注射劑的制備，它們是天然的藥學(xué)上可接受的油，例如橄欖油或蓖麻油，尤其是它們的聚氧乙基化版本。這些油溶液或懸液還可以含有長鏈醇稀釋劑或分散劑，例如羧甲基纖維素或相似的分散劑，它們普遍用在藥學(xué)上可接受的劑型的制劑中，包括乳劑和懸液。出于制劑的目的，還可以使用其他常用的表面活性劑，例如吐溫、司盤和其他乳化劑或生物利用度增強(qiáng)劑，它們普遍用于制造藥學(xué)上可接受的固體、液體或其他劑型。
腸胃外制劑可以是單一的大丸劑、輸液或者負(fù)載性大丸劑繼之以維持劑量。這些組合物可以每天給藥一次或者在“根據(jù)需要”的基礎(chǔ)上給藥。
本發(fā)明的藥物組合物可以在任意口服可接受的劑型中口服給藥，所述劑型包括膠囊劑、片劑、水懸液或溶液。在口服片劑的情況下，常用載體包括乳糖和玉米淀粉。通常還加入潤滑劑，例如硬脂酸鎂。對(duì)于膠囊劑形式口服給藥，有用的稀釋劑包括乳糖和干燥的玉米淀粉。當(dāng)需要口服水懸液時(shí)，使活性成分與乳化劑和懸浮劑混合。如果需要的話，還可以加入某些甜味劑、矯味劑或著色劑。
或者，本發(fā)明的藥物組合物可以以直腸給藥用栓劑的形式給藥。這些栓劑可以這樣制備，將藥物與適合的無刺激性賦形劑混合，所述賦形劑在室溫下是固體，但是在直腸溫度下是液體，因此將在直腸內(nèi)熔化，釋放出藥物。這類材料包括可可脂、蜂蠟和聚乙二醇。
本發(fā)明的藥物組合物還可以借助鼻用氣霧劑或者吸入給藥。這類組合物是按照藥物制劑領(lǐng)域熟知的工藝制備的，可以制成在鹽水中的溶液，并采用苯甲醇或其他適合的防腐劑、增強(qiáng)生物利用度的吸收促進(jìn)劑、碳氟化合物和/或其他常規(guī)的增溶劑或分散劑。
可以與載體材料混合形成單一劑型的A2b腺苷受體拮抗劑量將因所治療的宿主和特定給藥方式而異。組合物可以這樣配制，以便對(duì)接受這些組合物的患者給予劑量在0.01-100mg/kg體重之間的A2b腺苷受體拮抗劑。在本發(fā)明的一些實(shí)施方式中，劑量為0.1-10mg/kg體重。組合物可以作為單劑量、多劑量或者歷經(jīng)既定時(shí)間輸注給藥。
用于任意特定患者的具體劑量和治療方案將依賴于多種因素，包括特定的A2b腺苷受體拮抗劑、患者的年齡、體重、一般健康狀況、性別與飲食、給藥的時(shí)間、排泄的速率、藥物組合和所治療特定疾病的嚴(yán)重性。醫(yī)護(hù)人員對(duì)這類因素的判斷屬于本領(lǐng)域的普通技能。拮抗劑的量還將依賴于所治療的個(gè)體患者、給藥的途徑、制劑的類型、所用化合物的特征、疾病的嚴(yán)重性和所需效果。拮抗劑的量可以取決于本領(lǐng)域熟知的藥理學(xué)與藥動(dòng)學(xué)原理。
按照一些實(shí)施方式，本發(fā)明提供預(yù)防、限制或治療缺血再灌注損傷的方法，包含對(duì)患者給予上述藥物組合物之一的步驟。
為了更充分地理解本文所述發(fā)明，提供下列實(shí)施例。應(yīng)當(dāng)認(rèn)為，這些實(shí)施例僅供例證，不被解釋為以任何方式限制本發(fā)明。
實(shí)施例1、動(dòng)物模型和一般工藝研究是在開胸的、巴比妥麻醉的犬中進(jìn)行的，儀器測量心率、血壓、左心室壓和區(qū)域性心肌血流(放射性微球)。將機(jī)械咬合器置于左前下行冠狀動(dòng)脈近側(cè)附近，形成缺血和再灌注。在實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)，通過組織化學(xué)染色測定梗塞大小(專利藍(lán)染劑和三苯基四唑鎓)，以危險(xiǎn)區(qū)域的百分比或全部左心室的百分比表示。
2、預(yù)處理實(shí)驗(yàn)方案在預(yù)處理方案(見圖1，方案I)中，對(duì)犬進(jìn)行60分鐘冠狀動(dòng)脈閉合和3小時(shí)再灌注，然后取出心臟，評(píng)估梗塞大小。將四組犬隨機(jī)分配接受載體、CPX(8-環(huán)戊基-1，3-二丙基-3，7-二氫-嘌呤-2，6-二酮)、BG9719(8-(2S-5，6-外-環(huán)氧-內(nèi)-降冰片-2-基)-1，3-二丙基-3，7-二氫-嘌呤-2，6-二酮)或BG9928(3-[4-(2，6-二氧代-1，3-二丙基-2，3，6，7-四氫-1H-嘌呤-8-基)-二環(huán)[2.2.2]辛-1-基]-丙酸)，開始于閉合之前10分鐘。按照1mg/kg劑量i.v.給予全部拮抗劑大丸劑，繼之以按10μg/kg/min輸注，持續(xù)至再灌注前不久(總計(jì)70分鐘)。
在四組之間，全身血液動(dòng)力學(xué)(心率和血壓)、最大左心室dP/dt或區(qū)域性心肌血流沒有顯著性差異(見表1、4和5)，證明了血液動(dòng)力學(xué)變量不受拮抗劑的影響。左心室在冠脈閉合期間受到缺血的比例(危險(xiǎn)區(qū)大小；圖1A)也沒有差異。不過，以危險(xiǎn)區(qū)百分比表示(圖1B)或者以左心室百分比表示(圖1C)的梗塞大小在用CPX(減少51％)或BG9928(減少49％)處理的兩組犬中顯著較小。BG9928處理組犬的梗塞大小與對(duì)照組相似。當(dāng)將以危險(xiǎn)區(qū)百分比表示的梗塞大小對(duì)透壁旁系血流作圖時(shí)(圖1D)，借助線性回歸分析可以得出明顯的反比關(guān)系。在CPX處理組和BG9928處理組中，這種關(guān)系與對(duì)照組相比向下移動(dòng)，表明梗塞大小在這兩組中在任意給定程度的旁系血流下都較小。梗塞大小與旁系血流之間的關(guān)系在對(duì)照組與BG9719處理組之間是相似的。因而，在閉合之前用CPX或BG9928處理(但不是用BG9719處理)導(dǎo)致梗塞大小有顯著減少，所述減少不涉及全身血液動(dòng)力學(xué)或區(qū)域性旁系血流的變化。
表1方案I(預(yù)處理)的血液動(dòng)力學(xué)變量
HR心率；MBP平均動(dòng)脈血壓；LVdP/dt最大左心室dP/dt3、預(yù)調(diào)節(jié)實(shí)驗(yàn)方案在預(yù)調(diào)節(jié)方案(見圖2，方案II)中，對(duì)全部犬進(jìn)行60分鐘冠狀動(dòng)脈閉合繼之以三小時(shí)再灌注。在60-分鐘閉合之前10分鐘進(jìn)行四個(gè)5-分鐘閉合/5-分鐘再灌注循環(huán)，引發(fā)預(yù)調(diào)節(jié)。將四組犬隨機(jī)分配接受載體、CPX、BG9719或BG9928，開始于第一次預(yù)調(diào)節(jié)性閉合之前10分鐘。按照1mg/kg劑量i.v.給予拮抗劑，繼之以按10μg/kg/min輸注，持續(xù)至長期閉合的解除(總計(jì)115分鐘)。
與處理組相似，在預(yù)調(diào)節(jié)方案中的四組之間，全身血液動(dòng)力學(xué)、區(qū)域性心肌血流或危險(xiǎn)區(qū)大小沒有顯著差異(見表2、4和5，圖2A)。在60-分鐘閉合之前用四個(gè)5-分鐘閉合/5-分鐘再灌注周期預(yù)調(diào)節(jié)，與來自方案I的非預(yù)調(diào)節(jié)對(duì)照組相比明顯減少梗塞大小(減少-65％)(圖2B和2C)。腺苷受體拮抗劑處理組中犬的平均梗塞大小(以危險(xiǎn)區(qū)或左心室的百分比表示)也顯著小于非預(yù)處理對(duì)照組，并且相似于或者略小于預(yù)調(diào)節(jié)對(duì)照組(圖2B和2C)。與非預(yù)調(diào)節(jié)對(duì)照組相比，預(yù)調(diào)節(jié)使梗塞大小與旁系血流之間的關(guān)系向下偏移(圖2D)。這種關(guān)系在CPX或BG9928處理組而非BG9719處理組中進(jìn)一步向下偏移。這些結(jié)果證明，用CPX、BG9719或BG9928處理不會(huì)阻滯由多個(gè)閉合/再灌注循環(huán)引發(fā)的缺血預(yù)調(diào)節(jié)的保護(hù)作用。這些結(jié)果也提示，用CPX或BG9928(而非BG9719)處理增加缺血預(yù)調(diào)節(jié)的保護(hù)作用。
表2方案II(預(yù)調(diào)節(jié))的血液動(dòng)力學(xué)變量
HR心率；MBP平均動(dòng)脈血壓；最大LVdP/dt，左心室dP/dt4、再灌注實(shí)驗(yàn)方案在再灌注方案(見圖3，方案III)中，對(duì)犬進(jìn)行60分鐘冠狀動(dòng)脈閉合繼之以三小時(shí)再灌注。將四組犬隨機(jī)分配接受載體、CPX、BG9719或BG9928，開始于閉合的解除之前10分鐘。按照1mg/kg劑量i.v.給予拮抗劑大丸劑，繼之以按10μg/kg/min輸注一小時(shí)。
在本實(shí)驗(yàn)方案中的四組犬之間，血液動(dòng)力學(xué)變量、區(qū)域性心肌血流或危險(xiǎn)區(qū)大小沒有顯著差異(見表3-5和圖3A)。在再灌注早期給予CPX或BG9928顯著減少以危險(xiǎn)區(qū)百分比表示的梗塞大小(圖3B)。不過，BG9719給藥沒有保護(hù)作用。與對(duì)照組相比，用CPX或BG9928處理的兩組犬中梗塞大小與旁系血流之間的關(guān)系向下偏移(圖3C)。當(dāng)在缺血之前給藥時(shí)，本方案中由CPX和BG9928產(chǎn)生的梗塞大小減少幅度(分別為42％和44％)小于方案I，當(dāng)數(shù)據(jù)以全部左心室的百分比表示時(shí)沒有觀察到梗塞大小有顯著的減少(圖3D)，這也許是因?yàn)樗芯康膭?dòng)物數(shù)量少。這些數(shù)據(jù)證明，CPX和BG9928(而非BG9719)當(dāng)在再灌注時(shí)給藥時(shí)減少梗塞大小。
表3方案III(再灌注)的血液動(dòng)力學(xué)變量
HR心率；MBP平均動(dòng)脈血壓；最大LVdP/dt，左心室dP/dt表4非缺血區(qū)(被左旋繞冠狀動(dòng)脈灌注的區(qū)域)中方案I、II和III的區(qū)域性心肌血流數(shù)據(jù)(ml/min/gm)
epi心外膜；mid心肌中層；endo心內(nèi)膜；trans透壁表5缺血再灌注區(qū)(被左前下行冠狀動(dòng)脈灌注的區(qū)域)中方案I、II和III的區(qū)域性心肌血流數(shù)據(jù)(ml/min/gm)
epi心外膜；mid心肌中層；endo心內(nèi)膜；trans透壁表6利用放射性配體結(jié)合分析法測定的重組犬A1、A2a與A3腺苷受體拮抗劑的離解常數(shù)
分別使用3H-CPX、3H-ZM241385和3R-PIA作為A1、A2a和A3受體的放射性配體，從轉(zhuǎn)染的HEK 293的細(xì)胞膜的競爭結(jié)合實(shí)驗(yàn)得到Ki值(nM±SEM；n＝3)
5、膜的準(zhǔn)備表達(dá)人A2b腺苷受體的HEK 293(人胚胎腎)細(xì)胞膜是從ReceptorBiology購買的；表達(dá)人A2a受體的HEK 293細(xì)胞膜是從Perkin Elmer(Boston，MA)購買的；表達(dá)人A1受體的CHO-K1細(xì)胞膜和表達(dá)人A3受體的HEK 293細(xì)胞膜是從既定的相應(yīng)穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞制備的。
6、放射性配體結(jié)合測定法將膜(40-70μg膜蛋白)、放射性配體和不同濃度的競爭性配體在0.1mL緩沖液HE加2單位/mL腺苷脫氨基酶中、在21℃下培育2.5小時(shí)，一式三份。用于競爭結(jié)合測定法的放射性配體是用于A1和A2b腺苷受體的[3H]-8-環(huán)戊基-1，3-二丙基黃嘌呤([3H]-DPCPX)(NEN，Boston，MA)、用于A2a腺苷受體的[3H]-4-(2-[7-氨基-2-(呋喃基)(1，2，4)三唑(2，3-a)(1，3，5)三嗪-5-基氨基乙基)苯酚([3H]-ZM241385)(Tocris，Bristol，UK)和用于A3腺苷受體的[125碘]-標(biāo)記的N6-(4-氨基芐基)-9-(5-(甲基羰基)-β-D-呋喃核糖基)腺嘌呤([125I]-AB-MECA)或[3H]-R-N6-苯基異丙基腺苷([3H]-R-PIA)(都來自NEN，Boston，MA)。就A1和A2b受體而言，在10μM 5’N-乙基甲酰胺腺苷(NECA，來自RBI-Sigma，Natick，MA)的存在下測量非特異性結(jié)合，或者就A2a受體而言，在10μM黃嘌呤氨基同類物(XAC，來自RBI-Sigma，Natick，MA)的存在下測量非特異性結(jié)合。利用BRANDEL細(xì)胞收獲器(Gaithersburg，MD)通過Whatman GF/C玻璃纖維濾器過濾，終止結(jié)合測定。將濾器用3-4mL冰冷的10mM Tris-HCl，pH 7.4和5mM氯化鎂(MgCl2)在4℃下沖洗三次，在Wallac β-計(jì)數(shù)器(Perkin Elmer，Boston，MA)中計(jì)數(shù)。
表710μM拮抗劑在放射性配體競爭結(jié)合測定法中的抑制KI值(nM)或百分比(％)
ND未進(jìn)行aN＝3b10μM BG9928的抑制百分比c參見J.Linden，Annu.Rev.Pharmacol.Toxicol.，41，pp.775-787(2001)在以重組人A1腺苷受體和[3H]-DPCPX為放射性配體的競爭結(jié)合測定法中，BG9928、DPCPX和BG9717的KI值分別為12.2nM、5.3nM和10.3nM(見表7，圖4)。在以重組人A2a腺苷受體和[3H]-ZM241385為放射性配體的競爭結(jié)合測定法中，BG9928、DPCPX和BG9717的KI值分別為4059nM、156nM和9152nM(見表7，圖5)。在以重組人A2b腺苷受體和[3H]-ZM241385為放射性配體的競爭結(jié)合測定法中，BG9928、DPCPX和BG9717的KI值分別為88.53±21.03nM(N＝3)、56nM和853±270nM(N＝3)(見表7，圖6)。
進(jìn)行單點(diǎn)結(jié)合測定法，以測定10μM BG9928對(duì)[125I]-AB-MECA與重組人A3腺苷受體膜結(jié)合的影響。在重組人A3腺苷受體的單點(diǎn)結(jié)合測定法中，10μM BG9928抑制30％的[3H]-ZM241385結(jié)合(圖7)。
7、放射性配體結(jié)合測定法將膜(50μg膜蛋白)、放射性配體和不同濃度競爭性配體在0.1mL緩沖液HE加2單位/mL腺苷脫氨基酶中、在21℃下培育2小時(shí)，一式三份。用于競爭結(jié)合測定法的放射性配體是用于人A2b腺苷受體的[3H]-8-環(huán)戊基-1，3-二丙基黃嘌呤([3H]-DPCPX，30-40nM)(NEN，Boston，MA)。在10μM 5’N-乙基甲酰胺腺苷(NECA，來自RBI-Sigma，Natick，MA)的存在下測量非特異性結(jié)合。利用BRANDEL細(xì)胞收獲器(Gaithersburg，MD)通過Whatman GF/C玻璃纖維濾器過濾，終止結(jié)合測定。將濾器用3-4mL冰冷的10mM Tris-HCl，pH 7.4和5mM氯化鎂(MgCl2)在4℃下沖洗三次，在Wallac β-計(jì)數(shù)器(Perkin Elmer，Boston，MA)中計(jì)數(shù)。
將競爭結(jié)合數(shù)據(jù)帶入單部位結(jié)合模型，并利用Prizm GraphPad作圖。利用Cheng-Prusoff方程KI＝IC50/(1+[I]/KD)從IC50值計(jì)算KI值，其中KI是對(duì)競爭性配體的親和性常數(shù)，[I]是游離放射性配體的濃度，且KD是對(duì)放射性配體的親和性常數(shù)(Cheng和Prusoff 1973)。表8提供了若干本發(fā)明化合物的KI值。
表8放射性配體競爭結(jié)合測定法中的KI(nM)


8、熒光成像平板讀數(shù)(FLIPR)功能測定法利用HEK 293細(xì)胞和CHO-K1細(xì)胞進(jìn)行用于鈣測定的熒光成像平板讀數(shù)(FLIPR)測定法，所述HEK 293細(xì)胞表現(xiàn)穩(wěn)定的人與大鼠A2b腺苷受體表達(dá)，所述CHO-K1細(xì)胞表現(xiàn)穩(wěn)定的重組人A1腺苷受體表達(dá)。將細(xì)胞接種在帶有黑壁和透明底的96-孔組織培養(yǎng)平板中，培養(yǎng)至單層匯合率為80-90％。不除去培養(yǎng)基，加入等體積染劑(購自Molecular Devices的鈣測定試劑盒)。將細(xì)胞平板在37℃下培育1小時(shí)，然后轉(zhuǎn)移至FLIPR單元(Molecular Devices)。
就重組人A1腺苷受體的測定而言，將CHO-K1細(xì)胞用遞增劑量的激動(dòng)劑(N6-環(huán)戊基腺苷，CPA)培育，以測定激動(dòng)劑產(chǎn)生50％最大響應(yīng)的濃度。然后將這種濃度的激動(dòng)劑(200nM CPA)用遞增濃度(10-12M至10-5M)的拮抗劑BG9928培育。就重組人與大鼠A2b腺苷受體的測定而言，將HEK293細(xì)胞用遞增劑量的激動(dòng)劑(5’N-乙基甲酰胺腺苷，NECA)培育，以測定激動(dòng)劑產(chǎn)生50％最大響應(yīng)的濃度。然后將這種濃度的激動(dòng)劑(就人A2b受體而言是5μM NECA)或遞增濃度(就人A2b受體而言是10-12M至5×10-6M，就大鼠A2b受體而言是10,1100或300nM)的拮抗劑BG9928培育。
FLIPR整合有氬激光激發(fā)光源、96-孔吸移器和采用CCD(帶電偶聯(lián)裝置)成像照相機(jī)的檢測系統(tǒng)。分別在488和520nm的激發(fā)和發(fā)射波長下同時(shí)監(jiān)測來自96-孔的熒光發(fā)射。在向96-孔平板同時(shí)迅速加入化合物前后按1秒間隔收集熒光數(shù)據(jù)。結(jié)果為相對(duì)熒光單位(RFU)。
使用在CHO-K1細(xì)胞中穩(wěn)定表達(dá)的重組人A1腺苷受體進(jìn)行BG9928的FLIPR功能測定。利用零點(diǎn)法，BG9928和BG9719對(duì)重組人A1腺苷受體的拮抗劑離解常數(shù)(KB)分別為0.60nM和0.46nM(見表9和圖8)。
使用在HEK 293細(xì)胞中穩(wěn)定表達(dá)的重組人A2b腺苷受體進(jìn)行BG9928的FLIPR功能測定。利用零點(diǎn)法，BG9928、BG9719和DPCPX對(duì)重組人A2b腺苷受體的拮抗劑KB分別為3.36nM、182nM和23.6nM(見表9和圖9)。
使用在HEK 293細(xì)胞中穩(wěn)定表達(dá)的重組大鼠A2b腺苷受體進(jìn)行BG9928的FLIPR功能測定。利用零點(diǎn)法，BG9928的拮抗劑KB為257nM，利用Schild分析，pA2為6.59(見表9和圖10)。
表9拮抗劑在FLIPR功能測定法中的KB值(nM)總結(jié)(人受體亞型)
ND未進(jìn)行9、數(shù)據(jù)分析數(shù)據(jù)以平均值±平均值的平均標(biāo)準(zhǔn)誤差(SEM)或標(biāo)準(zhǔn)偏差(SD)表示。利用Marquafdt氏非線性最小平方法分析飽和數(shù)據(jù)，利用PrizmGraphPad作圖。將競爭結(jié)合數(shù)據(jù)帶入單位點(diǎn)結(jié)合模型，利用PrizmGraphPad作圖。利用Cheng-Prusoff方程KI＝IC50/(1+[I]/KD)從IC50值計(jì)算KI值，其中KI是對(duì)競爭性配體的親和性常數(shù)，[I]是游離放射性配體的濃度，而KD是對(duì)放射性配體的親和性常數(shù)(Cheng和Prusoff1973)。
在FLIPR功能測定法中，利用Prizm GraphPad中的非線性回歸程序，將激動(dòng)劑濃度-響應(yīng)曲線帶入邏輯方程。利用由Lazareno和Roberts(1987)開發(fā)的零點(diǎn)法估計(jì)拮抗劑離解常數(shù)(KB)。進(jìn)行Schild分析，以估計(jì)化合物作為拮抗劑的效力(pA2)。pA2是拮抗劑能夠在濃度-響應(yīng)曲線中產(chǎn)生2-倍偏移的濃度的負(fù)對(duì)數(shù)，其中該響應(yīng)被定義為最大響應(yīng)的50％。
權(quán)利要求
1.預(yù)防、限制或治療哺乳動(dòng)物缺血再灌注損傷的方法，包括確定已經(jīng)經(jīng)歷缺血事件或者其中缺血事件即將來臨的哺乳動(dòng)物；在該缺血事件前后十天內(nèi)對(duì)該哺乳動(dòng)物給予治療有效量或預(yù)防有效量的A2b腺苷受體拮抗劑；其中該A2b腺苷受體拮抗劑是式(I)化合物 或其藥學(xué)上可接受的鹽或N-氧化物，其中每一R1、R2和R3獨(dú)立地是a)氫；b)C1-6烷基、C2-6鏈烯基或C2-6炔基；其中所述烷基、鏈烯基或炔基是未取代的或者被一個(gè)或多個(gè)取代基取代，所述取代基選自由羥基、烷氧基、氨基、單烷基氨基、二烷基氨基、環(huán)烷基、芳基、雜環(huán)基、芳烷基、雜環(huán)基烷基、酰氨基、烷基氨基羰基、烷基磺酰氨基和烷基氨基磺?；M成的組；c)取代或未取代的芳基；或d)取代或未取代的雜環(huán)基；R4是單鍵、-O-、-(CH2)1-3-、-O(CH2)1-2-、-CH2OCH2-、-(CH2)1-2O-、-CH＝CHCH2-、-CH＝CH-或-CH2CH＝CH-；R5是a)苯基；或b)二環(huán)或三環(huán)基團(tuán)，選自由下列基團(tuán)組成的組 和 其中該苯基、二環(huán)或三環(huán)基團(tuán)是未取代的或者被一個(gè)或多個(gè)Ra基團(tuán)取代，Ra選自由下列基團(tuán)組成的組a)C1-6烷基、C2-6鏈烯基或C2-6炔基；其中所述烷基、鏈烯基或炔基是未取代的或者被一個(gè)或多個(gè)取代基取代，所述取代基選自由氨基、單烷基氨基、二烷基氨基、取代或未取代的雜環(huán)基氨基羰基、(氨基)(Rb)?；禄驶?、(氨基)(Rb)酰氧基羧基-、(羥基)(烷氧羰基)烷基氨甲?；?、酰氧基、醛基、鏈烯基磺酰氨基、烷氧基、烷氧基羰基、烷基氨基烷基氨基、二烷基氨基烷基氨基、烷基膦酰基、烷基磺酰氨基、氨甲酰基、Rb-、Rb-烷氧基-、Rb-烷基氨基-、氰基、氰基烷基氨甲酰基、環(huán)烷基氨基、二烷基膦?；Ⅺu代烷基磺酰氨基、雜環(huán)基烷基氨基、雜環(huán)基氨甲?；⒘u基、羥基烷基磺酰氨基、肟基、膦?；⑷〈蛭慈〈姆纪榛被?、取代或未取代的芳基羧基烷氧基羰基、取代或未取代的雜芳基磺酰氨基、取代或未取代的雜環(huán)基、硫代氨甲酰基和三氟甲基組成的組；和b)(烷氧基羰基)芳烷基氨甲酰基、醛基、鏈烯氧基、鏈烯基磺酰氨基、烷氧基、烷氧基羰基、烷基氨甲?；?、烷氧基羰基氨基、烷氧基羰基烷基氨基、烷基磺酰氨基、烷基磺酰氧基、氨基、氨基烷基芳烷基氨甲?；被榛奔柞；被榛s環(huán)基烷基氨甲?；被h(huán)烷基烷基環(huán)烷基氨甲?；?、氨基環(huán)烷基氨甲酰基、芳烷氧基羰基氨基、芳基雜環(huán)基、芳氧基、芳基磺酰氨基、芳基磺酰氧基、氨甲?；?、羰基、Rb-、Rb-烷氧基-、Rb-烷硫基-、Rb-烷基(烷基)氨基-、Rb-烷基(烷基)氨甲?；?、Rb-烷基氨基-、Rb-烷基氨甲酰基-、Rb-烷基磺酰基-、Rb-烷基磺酰氨基、Rb-烷硫基、Rb-雜環(huán)基羰基、氨基烷基氨基羰基、二烷基氨基烷基氨基、烷基氨基烷基氨基、氰基、環(huán)烷基氨基、二烷基氨基烷基氨甲?；Ⅺu素、雜環(huán)基烷基氨基、羥基、肟基、磷酸酯、取代或未取代的芳烷基氨基、取代或未取代的雜環(huán)基、取代或未取代的雜環(huán)基磺酰氨基、次硫酸(sulfoxy)酰氨基和硫代氨甲酰基；Rb選自由-COOH、-C(CF3)2OH、-CONHNHSO2CF3、-CONHORc、-CONHSO2Rc、-CONHSO2NHRc、-C(OH)RcPO3H2、-NHCOCF3、-NHCONHSO2Rc、-NHPO3H2、-NHSO2Rc、-NHSO2NHCORc、-OPO3H2、-OSO3H、-PO(OH)Rc、-PO3H2、-SO3H、-SO2NHRc、-SO3NHCORc、-SO3NHCONHCO2Rc和下列基團(tuán)組成的組 Rc選自由氫、-C1-4烷基、-C1-4烷基-CO2H和苯基組成的組，其中該-C1-4烷基、-C1-4烷基-CO2H和苯基是未取代的或者被一至三個(gè)取代基取代，所述取代基選自由鹵素、-OH、-OMe、-NH2、-NO2、未取代的芐基和被一至三個(gè)取代基取代的芐基組成的組，所述取代基選自由鹵素、-OH、-OMe、-NH2和-NO2組成的組；X1和X2獨(dú)立地選自由O和S組成的組；X3是N或CRd，其中Rd選自由下列基團(tuán)組成的組a)氫；b)C1-6烷基、C2-6鏈烯基或C2-6炔基；其中所述烷基、鏈烯基或炔基是未取代的或者被一個(gè)或多個(gè)取代基取代，所述取代基選自由羥基、烷氧基、氨基、單烷基氨基、二烷基氨基、環(huán)烷基、芳基、雜環(huán)基、芳烷基、雜環(huán)基烷基、酰氨基、烷基氨基羰基、烷基磺酰氨基和烷基氨基磺酰基組成的組；c)取代或未取代的芳基；和d)取代或未取代的雜環(huán)基。
2.權(quán)利要求1的方法，其中R1是C1-6烷基。
3.權(quán)利要求1的方法，其中R2是C1-6烷基。
4.權(quán)利要求1的方法，其中R3是氫。
5.權(quán)利要求1的方法，其中R4是單鍵。
6.權(quán)利要求1的方法，其中R5是被Ra取代的苯基。
7.權(quán)利要求1的方法，其中R5是取代的二環(huán)或三環(huán)基團(tuán)，選自由下列基團(tuán)組成的組
8.權(quán)利要求1的方法，其中R5是 或 其中所述R5是未取代的或者被一個(gè)或多個(gè)Ra基團(tuán)取代，Ra選自由下列基團(tuán)組成的組a)C1-6烷基、C2-6鏈烯基或C2-6炔基；其中所述烷基、鏈烯基或炔基是未取代的或者被一個(gè)或多個(gè)取代基取代，所述取代基選自由氨基、單烷基氨基、二烷基氨基、取代或未取代的雜環(huán)基氨基羰基、(氨基)(Rb)酰基肼基羰基-、(氨基)(Rb)酰氧基羧基-、(羥基)(烷氧羰基)烷基氨甲酰基、酰氧基、醛基、鏈烯基磺酰氨基、烷氧基、烷氧基羰基、烷基氨基烷基氨基、二烷基氨基烷基氨基、烷基膦?；?、烷基磺酰氨基、氨甲?；b-、Rb-烷氧基-、Rb-烷基氨基-、氰基、氰基烷基氨甲?；h(huán)烷基氨基、二烷基膦?；?、鹵代烷基磺酰氨基、雜環(huán)基烷基氨基、雜環(huán)基氨甲酰基、羥基、羥基烷基磺酰氨基、肟基、膦?；?、取代或未取代的芳烷基氨基、取代或未取代的芳基羧基烷氧基羰基、取代或未取代的雜芳基磺酰氨基、取代或未取代的雜環(huán)基、硫代氨甲酰基和三氟甲基組成的組；和b)(烷氧基羰基)芳烷基氨甲?；?、醛基、鏈烯氧基、鏈烯基磺酰氨基、烷氧基、烷氧基羰基、烷基氨甲?；⑼檠趸驶被?、烷氧基羰基烷基氨基、烷基磺酰氨基、烷基磺酰氧基、氨基、氨基烷基芳烷基氨甲?；?、氨基烷基氨甲?；被榛s環(huán)基烷基氨甲?；?、氨基環(huán)烷基烷基環(huán)烷基氨甲?；被h(huán)烷基氨甲?；?、芳烷氧基羰基氨基、芳基雜環(huán)基、芳氧基、芳基磺酰氨基、芳基磺酰氧基、氨甲?；Ⅳ驶?、Rb-、Rb-烷氧基-、Rb-烷硫基-、Rb-烷基(烷基)氨基-、Rb-烷基(烷基)氨甲?；?、Rb-烷基氨基-、Rb-烷基氨甲酰基-、Rb-烷基磺?；?、Rb-烷基磺酰氨基、Rb-烷硫基、Rb-雜環(huán)基羰基、氨基烷基氨基羰基、二烷基氨基烷基氨基、烷基氨基烷基氨基、氰基、環(huán)烷基氨基、二烷基氨基烷基氨甲?；?、鹵素、雜環(huán)基烷基氨基、羥基、肟基、磷酸酯、取代或未取代的芳烷基氨基、取代或未取代的雜環(huán)基、取代或未取代的雜環(huán)基磺酰氨基、次硫酸(sulfoxy)酰氨基和硫代氨甲?；?。
9.權(quán)利要求1的方法，其中Ra選自由下列基團(tuán)組成的組a)C1-6烷基、C2-6鏈烯基或C2-6炔基；其中所述烷基、鏈烯基或炔基是未取代的或者被一個(gè)或多個(gè)取代基取代，所述取代基選自由氨基、單烷基氨基、二烷基氨基、取代或未取代的雜環(huán)基氨基羰基、(氨基)(Rb)?；禄驶?、(氨基)(Rb)酰氧基羧基-、(羥基)(烷氧羰基)烷基氨甲酰基、酰氧基、醛基、鏈烯基磺酰氨基、烷氧基、烷氧基羰基、烷基氨基烷基氨基、二烷氨基烷氨基、烷基膦酰基、烷基磺酰氨基、氨甲?；?、Rb-、Rb-烷氧基-、Rb-烷基氨基-、氰基、氰基烷基氨甲?；?、環(huán)烷基氨基、二烷基膦?；?、鹵代烷基磺酰氨基、雜環(huán)基烷基氨基、雜環(huán)基氨甲酰基、羥基、羥基烷基磺酰氨基、肟基、膦?；?、取代的芳烷基氨基、取代的芳基羧基烷氧基羰基、取代的雜芳基磺酰氨基、取代的雜環(huán)基、硫代氨甲?；腿谆M成的組；和b)(烷氧基羰基)芳烷基氨甲酰基、醛基、鏈烯氧基、鏈烯基磺酰氨基、烷氧基、烷氧基羰基、烷基氨甲?；?、烷氧基羰基氨基、烷氧基羰基烷基氨基、烷基磺酰氨基、烷基磺酰氧基、氨基、氨基烷基芳烷基氨甲?；?、氨基烷基氨甲酰基、氨基烷基雜環(huán)基烷基氨甲?；被h(huán)烷基烷基環(huán)烷基氨甲?；被h(huán)烷基氨甲?；?、芳烷氧基羰基氨基、芳基雜環(huán)基、芳氧基、芳基磺酰氨基、芳基磺酰氧基、氨甲?；?、羰基、Rb-、Rb-烷氧基-、Rb-烷基(烷基)氨基-、Rb-烷基(烷基)氨甲?；?、Rb-烷基氨基-、Rb-烷基氨甲?；?、Rb-烷基磺?；?、Rb-烷基磺酰氨基、Rb-烷硫基、Rb-雜環(huán)基羰基、氰基、環(huán)烷基氨基、二烷基氨基烷基氨甲?；Ⅺu素、雜環(huán)基烷基氨基、羥基、肟基、磷酸酯、取代的芳烷基氨基、取代的雜環(huán)基、取代的雜環(huán)基磺酰氨基、次硫酸(sulfoxy)酰氨基和硫代氨甲酰基。
10.權(quán)利要求1的方法，其中Ra選自由下列基團(tuán)組成的組a)C1-6烷基或C2-6鏈烯基，它們各自是未取代的或者被一個(gè)或多個(gè)取代基取代，所述取代基選自由氨基、單烷基氨基、二烷基氨基、取代或未取代的雜環(huán)基氨基羰基、Rb-、Rb-烷氧基-和取代或未取代的雜環(huán)基組成的組；和b)烷氧基羰基烷基氨基、氰基和羥基。
11.權(quán)利要求1的方法，其中X1是O。
12.權(quán)利要求1的方法，其中X2是O。
13.權(quán)利要求1的方法，其中X3是N。
14.權(quán)利要求1的方法，其中每個(gè)R1和R2是C2-4烷基；R3是氫；R4是單鍵；每個(gè)X1和X2是O；且X3是N。
15.權(quán)利要求14的方法，其中R5是被Ra取代的苯基。
16.權(quán)利要求15的方法，其中Ra選自由下列基團(tuán)組成的組a)C1-6烷基或C2-6鏈烯基，它們各自是未取代的或者被一個(gè)或多個(gè)取代基取代，所述取代基選自由氨基、單烷基氨基、二烷基氨基、取代或未取代的雜環(huán)基氨基羰基、取代或未取代的雜環(huán)基、Rb-和Rb-烷氧基-組成的組；和b)烷氧基羰基烷基氨基、Rb-烷氧基-、氰基、取代或未取代的雜環(huán)基和羥基。
17.權(quán)利要求16的方法，其中Ra是氰基。
18.權(quán)利要求14的方法，其中R5是 其中所述R5是未取代的或者被一個(gè)或多個(gè)Ra基團(tuán)取代，Ra選自由下列基團(tuán)組成的組a)C1-6烷基、C2-6鏈烯基或C2-6炔基；其中所述烷基、鏈烯基或炔基是未取代的或者被一個(gè)或多個(gè)取代基取代，所述取代基選自由氨基、單烷基氨基、二烷基氨基、取代或未取代的雜環(huán)基氨基羰基、(氨基)(Rb)酰基肼基羰基-、(氨基)(Rb)酰氧基羧基-、(羥基)(烷氧羰基)烷基氨甲酰基、酰氧基、醛基、鏈烯基磺酰氨基、烷氧基、烷氧基羰基、烷基氨基烷基氨基、二烷基氨基烷基氨基、烷基膦酰基、烷基磺酰氨基、氨甲?；?、Rb-、Rb-烷氧基-、Rb-烷基氨基-、氰基、氰基烷基氨甲?；h(huán)烷基氨基、二烷基膦?；?、鹵代烷基磺酰氨基、雜環(huán)基烷基氨基、雜環(huán)基氨甲?；?、羥基、羥基烷基磺酰氨基、肟基、膦?；?、取代或未取代的芳烷基氨基、取代或未取代的芳基羧基烷氧基羰基、取代或未取代的雜芳基磺酰氨基、取代或未取代的雜環(huán)基、硫代氨甲?；腿谆M成的組；和b)(烷氧基羰基)芳烷基氨甲?；?、醛基、鏈烯氧基、鏈烯基磺酰氨基、烷氧基、烷氧基羰基、烷基氨甲酰基、烷氧基羰基氨基、烷氧基羰基烷基氨基、烷基磺酰氨基、烷基磺酰氧基、氨基、氨基烷基芳烷基氨甲酰基、氨基烷基氨甲?；?、氨基烷基雜環(huán)基烷基氨甲?；?、氨基環(huán)烷基烷基環(huán)烷基氨甲?；被h(huán)烷基氨甲?；?、芳烷氧基羰基氨基、芳基雜環(huán)基、芳氧基、芳基磺酰氨基、芳基磺酰氧基、氨甲?；?、羰基、Rb-、Rb-烷氧基-、Rb-烷硫基-、Rb-烷基(烷基)氨基-、Rb-烷基(烷基)氨甲?；?、Rb-烷基氨基-、Rb-烷基氨甲酰基-、Rb-烷基磺?；?、Rb-烷基磺酰氨基、Rb-烷硫基、Rb-雜環(huán)基羰基、氨基烷基氨基羰基、二烷基氨基烷基氨基、烷基氨基烷基氨基、氰基、環(huán)烷基氨基、二烷基氨基烷基氨甲?；?、鹵素、雜環(huán)基烷基氨基、羥基、肟基、磷酸酯、取代或未取代的芳烷基氨基、取代或未取代的雜環(huán)基、取代或未取代的雜環(huán)基磺酰氨基、次硫酸(sulfoxy)酰氨基和硫代氨甲?；?br> 19.權(quán)利要求18的方法，其中Ra選自由下列基團(tuán)組成的組a)C1-6烷基或C2-6鏈烯基，它們各自是未取代的或者被一個(gè)或多個(gè)取代基取代，所述取代基選自由氨基、單烷基氨基、二烷基氨基、取代或未取代的雜環(huán)基氨基羰基、取代或未取代的雜環(huán)基、Rb-和Rb-烷氧基-組成的組；和b)烷氧基羰基烷基氨基、Rb-烷氧基-、氰基、取代或未取代的雜環(huán)基和羥基。
20.權(quán)利要求19的方法，其中Ra是被一個(gè)或多個(gè)取代基取代的C2-5烷基，所述取代基選自由氨基、單烷基氨基和二烷基氨基組成的組。
21.權(quán)利要求14的方法，其中R5是 其中所述R5是未取代的或者被一個(gè)或多個(gè)Ra基團(tuán)取代，Ra選自由下列基團(tuán)組成的組a)C1-6烷基、C2-6鏈烯基或C2-6炔基；其中所述烷基、鏈烯基或炔基是未取代的或者被一個(gè)或多個(gè)取代基取代，所述取代基選自由氨基、單烷基氨基、二烷基氨基、取代或未取代的雜環(huán)基氨基羰基、(氨基)(Rb)?；禄驶?、(氨基)(Rb)酰氧基羧基-、(羥基)(烷氧羰基)烷基氨甲?；?、酰氧基、醛基、鏈烯基磺酰氨基、烷氧基、烷氧基羰基、烷基氨基烷基氨基、二烷基氨基烷基氨基、烷基膦酰基、烷基磺酰氨基、氨甲酰基、Rb-、Rb-烷氧基-、Rb-烷基氨基-、氰基、氰基烷基氨甲?；?、環(huán)烷基氨基、二烷基膦?；?、鹵代烷基磺酰氨基、雜環(huán)基烷基氨基、雜環(huán)基氨甲?；?、羥基、羥基烷基磺酰氨基、肟基、膦酰基、取代或未取代的芳烷基氨基、取代或未取代的芳基羧基烷氧基羰基、取代或未取代的雜芳基磺酰氨基、取代或未取代的雜環(huán)基、硫代氨甲?；腿谆M成的組；和b)(烷氧基羰基)芳烷基氨甲?；⑷┗?、鏈烯氧基、鏈烯基磺酰氨基、烷氧基、烷氧基羰基、烷基氨甲?；?、烷氧基羰基氨基、烷氧基羰基烷基氨基、烷基磺酰氨基、烷基磺酰氧基、氨基、氨基烷基芳烷基氨甲?；被榛奔柞；?、氨基烷基雜環(huán)基烷基氨甲酰基、氨基環(huán)烷基烷基環(huán)烷基氨甲?；?、氨基環(huán)烷基氨甲?；?、芳烷氧基羰基氨基、芳基雜環(huán)基、芳氧基、芳基磺酰氨基、芳基磺酰氧基、氨甲?；?、羰基、Rb-、Rb-烷氧基-、Rb-烷硫基-、Rb-烷基(烷基)氨基-、Rb-烷基(烷基)氨甲?；?、Rb-烷基氨基-、Rb-烷基氨甲?；?、Rb-烷基磺酰基-、Rb-烷基磺酰氨基、Rb-烷硫基、Rb-雜環(huán)基羰基、氨基烷基氨基羰基、二烷基氨基烷基氨基、烷基氨基烷基氨基、氰基、環(huán)烷基氨基、二烷基氨基烷基氨甲?；Ⅺu素、雜環(huán)基烷基氨基、羥基、肟基、磷酸酯、取代或未取代的芳烷基氨基、取代或未取代的雜環(huán)基、取代或未取代的雜環(huán)基磺酰氨基、次硫酸(sulfoxy)酰氨基和硫代氨甲?；?br> 22.權(quán)利要求21的方法，其中Ra選自由下列基團(tuán)組成的組a)C1-6烷基或C2-6鏈烯基，它們各自是未取代的或者被一個(gè)或多個(gè)取代基取代，所述取代基選自由氨基、單烷基氨基、二烷基氨基、取代或未取代的雜環(huán)基氨基羰基、取代或未取代的雜環(huán)基、Rb-和Rb-烷氧基-組成的組；和b)烷氧基羰基烷基氨基、Rb-烷氧基-、氰基、取代或未取代的雜環(huán)基和羥基。
23.權(quán)利要求21的方法，其中Ra選自由下列基團(tuán)組成的組a)C1-4烷基或C2-4鏈烯基，它們各自是未取代的或者被一個(gè)或多個(gè)取代基取代，所述取代基選自由氨基、單烷基氨基、二烷基氨基、取代或未取代的雜環(huán)基氨基羰基、取代或未取代的雜環(huán)基和Rb-組成的組；和b)Rb-烷氧基-和取代的雜環(huán)基。
24.權(quán)利要求1的方法，其中每個(gè)R1和R2是丙基；R3是氫；R4是單鍵；R5是被Ra基團(tuán)取代的苯基， 或 其中所述二環(huán)或三環(huán)基團(tuán)可選被Ra基團(tuán)取代，Ra選自由下列基團(tuán)組成的組a)C1-6烷基或C2-6鏈烯基，它們各自是未取代的或者被一個(gè)或多個(gè)取代基取代，所述取代基選自由氨基、單烷基氨基、二烷基氨基、取代或未取代的雜環(huán)基氨基羰基、Rb-、Rb-烷氧基-和取代或未取代的雜環(huán)基組成的組；和b)烷氧基羰基烷基氨基、氰基和羥基；每個(gè)X1和X2是O；且X3是N。
25.權(quán)利要求1的方法，其中該式(I)化合物是3-[4-(2，6-二氧代-1，3-二丙基-2，3，6，7-四氫-1H-嘌呤-8-基)-二環(huán)[2.2.2]辛-1-基]-丙酸。
26.權(quán)利要求1的方法，其中該缺血事件選自由急性冠脈綜合征、中風(fēng)、器官移植、腎缺血、休克和器官移植手術(shù)組成的組。
27.權(quán)利要求26的方法，其中該急性冠脈綜合征是心肌梗塞。
28.權(quán)利要求1的方法，其中在缺血事件前后兩天內(nèi)給予該A2b腺苷受體拮抗劑。
29.權(quán)利要求28的方法，其中在缺血事件后兩天內(nèi)給予A2b腺苷受體拮抗劑。
30.權(quán)利要求1的方法，其中該哺乳動(dòng)物是人。
31.權(quán)利要求1的方法，其中該式(I)化合物表現(xiàn)對(duì)A2b腺苷受體的親和性比對(duì)A2a腺苷受體或A3腺苷受體的親和性至少大10倍。
32.權(quán)利要求31的方法，其中該式(I)化合物進(jìn)一步表現(xiàn)對(duì)A1腺苷受體的親和性比對(duì)A2a腺苷受體或A3腺苷受體的親和性至少大10倍。
33.權(quán)利要求1的方法，其中該式(I)化合物對(duì)A2b腺苷受體表現(xiàn)低于500nM的Ki值。
34.權(quán)利要求1的方法，其中該式(I)化合物對(duì)A2b腺苷受體表現(xiàn)低于200nM的Ki值。
35.治療由A2b腺苷受體活化介導(dǎo)疾病或病癥的方法，包括對(duì)有需要的哺乳動(dòng)物給予有效量的根據(jù)權(quán)利要求1的式(I)化合物。
36.限制由缺血事件引起的組織壞死的方法，包括確定已經(jīng)經(jīng)歷缺血事件或者其中缺血事件即將來臨的哺乳動(dòng)物；在該缺血事件前后十天內(nèi)對(duì)該哺乳動(dòng)物給予治療有效量或預(yù)防有效量的A2b腺苷受體拮抗劑；其中該A2b腺苷受體拮抗劑是根據(jù)權(quán)利要求1的式(I)化合物。
37.限制心肌梗塞后梗塞大小的方法，包括確定已經(jīng)經(jīng)歷心肌梗塞或者其中心肌梗塞即將來臨的哺乳動(dòng)物；在該心肌梗塞前后十天內(nèi)對(duì)該哺乳動(dòng)物給予治療有效量或預(yù)防有效量的A2b腺苷受體拮抗劑；其中該A2b腺苷受體拮抗劑是根據(jù)權(quán)利要求1的式(I)化合物。
全文摘要
本發(fā)明公開了用于預(yù)防、限制或治療哺乳動(dòng)物缺血再灌注損傷的方法。更確切地，本發(fā)明涉及將A
文檔編號(hào)A61K31/675GK1671716SQ03817433
公開日2005年9月21日 申請日期2003年6月12日 優(yōu)先權(quán)日2002年6月12日
發(fā)明者G·J·斯米茨, 金曉瑋, G·J·格洛斯, J·奧查姆帕克 申請人:拜奧根Idec馬薩諸塞公司, Mcw研究基金公司