專利名稱：一種治療泌尿系感染的中藥口服制劑及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于醫(yī)藥品的制備技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種治療泌尿系感染的中成藥口服制劑及其制備方法。
背景技術(shù)：
泌尿系感染是指上、下尿路的非特異性細菌感染所引起的泌尿系統(tǒng)炎癥，包括腎盂腎炎、膀胱炎、尿道炎?，F(xiàn)稱為尿路感染。尿路感染流行病學(xué)資料表明，該病以女性居多，未婚少女發(fā)病率為2％，已婚女性發(fā)病率增加至5％，這與性生活有關(guān)。孕婦尿路感染發(fā)生率約為7％。男性極少發(fā)生尿路感染，50歲以后因前列腺肥大才較多發(fā)生。老年女性和男性的尿路感染發(fā)病率可高達10％。尿路感染者常見尿頻、尿急、尿痛、恥骨弓上不適、腰痛、甚則寒戰(zhàn)、發(fā)熱、頭痛、惡心、嘔吐等，嚴重影響患者的日常生活和工作，嚴重的尿路感染還可致腎乳頭壞死、腎周圍膿腫等并發(fā)癥。
近年來，中醫(yī)藥防治該病證的研究深受重視，從治療結(jié)果來看，中醫(yī)藥在治療本病方面積累了豐富的經(jīng)驗，顯示了其獨特的優(yōu)勢和廣闊的前景，具有療效確切且較少毒副作用的特點，目前已有一些治療本病的中藥成方制劑形成。但由于泌尿系感染疾病的發(fā)病率高且病理機制復(fù)雜，現(xiàn)有的藥物制劑尚不能完全滿足臨床和市場的需要?！吨腥A人民共和國衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)》(中藥成方制劑十七冊)收載品種“泌尿?qū)庮w?！笔怯刹窈?、黃柏、白芷、五味子、甘草等九味中藥制成的顆粒劑，具有清熱通淋，利尿止痛，補腎固本的功能。臨床上主要用于熱淋，小便赤澀熱痛及泌尿系感染等疾病的治療。其制備方法為以上九味，加水煎煮二次，第一次2小時，第二次1.5小時，合并煎液，靜置沉淀24小時，濾過，濾液濃縮至相對密度約為1.3(80℃)的清膏，取清膏1份，加蔗糖4份，糊精1份，制成顆粒，干燥，分裝，即得。用法與用量為開水沖服，一次12g，一日3次。上述制備工藝存在著一定的缺陷，如處方中的所有藥物放在一起混合煎煮提取，不能將黃柏、白芷、五味子等所含的主要有效成分有效地提取出來，因此不能充分發(fā)揮該配方的治療作用。另外，從其用法用量及臨床實際應(yīng)用過程中出現(xiàn)的情況來看，由于為顆粒劑，在制備過程中加入了5倍于清膏量的輔料—蔗糖和糊精，因而服用量大，運輸攜帶不便等，同時含有大量糖分，糖尿病患者不易接受，限制了該品種在臨床上的廣泛使用。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一種有效成分含量高、質(zhì)量穩(wěn)定、療效好、服用劑量小、使用方便的用于治療泌尿系感染的中成藥口服制劑。
本發(fā)明的另一目的在于提供該中藥口服制劑的制備方法，該制備方法以充分提取各味藥中的有效成分，并采用先進的藥劑劑型—膠囊劑、片劑。
本發(fā)明提供的用于治療泌尿系感染的中成藥口服制劑，由下述重量配比的原料組成柴胡 110～130 五味子 90～110 蓄 90～110黃柏 110～130 白芷 90～110續(xù)斷 90～110桑寄生 90～110 苘麻子 110～130 甘草 90～110。
將上述重量配比的中藥原料制成本發(fā)明的中藥口服制劑的制備方法，包括以下步驟(1)取白芷、五味子加6～10倍量65～90％乙醇，回流提取2～4次，每次1～3h。合并乙醇提取液，減壓回收乙醇；濃縮成稠膏，低溫干燥，粉碎成細粉，備用；(2)取黃柏加8～12倍量水浸泡1～6h，煎煮2～3次，每次1～3h，濾過，合并濾液，減壓濃縮至相對密度為1.05-1.12(60℃測)，加乙醇至醇濃度達45～60％，攪拌，靜置，過濾，殘渣用45～60％乙醇洗滌至近無色，合并濾液及洗液，減壓回收乙醇，濃縮成稠膏，低溫干燥，粉碎成細粉，備用；(3)取柴胡、蓄、續(xù)斷、桑寄生、苘麻子、甘草六味藥，加8～12倍量水浸泡1～6h，煎煮2-4次，每次1～3h，濾過，合并濾液，減壓濃縮至相對密度為1.15-1.25(60℃測)，加乙醇至醇濃度達45～60％，攪拌，靜置，過濾，濾液減壓回收乙醇，濃縮成稠膏，低溫干燥，粉碎成細粉，備用；(4)取上述(1)、(2)、(3)項下細粉，合并，加入羧甲基淀粉鈉、微晶纖維素，充分混合均勻，制軟材，制粒，干燥，整粒，加入適量硬脂酸鎂混勻，裝膠囊或壓片、包衣，即制得本發(fā)明的膠囊劑或片劑。
本發(fā)明所使用的原料，要求分別符合《中國藥典》2000年版一部各中藥項下有關(guān)的各項規(guī)定。包衣采用薄膜包衣，其輔料歐巴代(opadry AMB)要求符合USP標(biāo)準(zhǔn)。
本發(fā)明依據(jù)的原理及有益效果1.白芷、五味子的提取白芷的主要有效成分為香豆素類化合物，歐前胡素為其代表成分。藥理研究結(jié)果表明，白芷中的香豆素類化合物具有抗菌消炎、解熱鎮(zhèn)痛等藥理作用，但香豆素類化合物不溶于水，易溶于有機溶劑；五味子主要含有木脂素類成分，此類成分易溶于有機溶劑，具有強的抗氧化作用、免疫調(diào)節(jié)作用、抗應(yīng)激作用，五味子的乙醇浸液具有抗菌消炎作用。因此對于白芷和五味子的提取可選用經(jīng)濟易得、對環(huán)境無污染的乙醇作為提取溶劑進行提取。
將白芷、五味子通過混合水煎提取與乙醇回流提取進行比較試驗，運用高效液相色譜法分別測定其有效成分歐前胡素和五味子甲素的含量，結(jié)果見表一表一白芷和五味子水煎與乙醇提取的比較試驗提取方法 歐前胡素(mg/g)五味子甲素(mg/g)8倍量水煎煮提取、2次、2h/次 0.0132 0.01338倍量80％乙醇提取、2次、2h/次 0.7756 0.3114由上表可見，本發(fā)明的白芷和五味子的乙醇回流提取工藝與水煎提取工藝相比，可大大提高有效成分的提取率，從而提高藥效。
2、黃柏的提取黃柏主要含有小檗堿、黃連堿、藥根堿、巴馬汀等季銨型生物堿類化學(xué)成分，具有抗病原微生物、鎮(zhèn)靜、解熱、提高免疫功能、抗?jié)兊榷喾N藥理作用，為黃柏藥用的主要有效成分，這些成分在熱水中溶解性較好，可用水煎煮法提取。為了確定合理的提取方法，將黃柏單獨煎煮、黃柏與甘草合煎、黃柏與甘草、桑寄生等8味藥物合煎(三組均為每次加10倍量水、煎煮2次，每次1.5h，合并煎液、濾過)后，運用高效液相色譜法分別測定其提取液中小檗堿含量，結(jié)果見表二表二 黃柏與甘草共煎對小檗堿含量的影響處理方法黃柏加甘草合煎 黃柏單煎 黃柏加甘草等8味合煎小檗堿含量(％)0.364 0.777 0.204由表二可見，黃柏與甘草或與甘草、桑寄生等8味藥物合煎后，提取液中小檗堿含量顯著降低，與黃柏單煎相差1倍或2倍以上。因此，本發(fā)明將黃柏采用單獨水煎提取的方法進行提取。另外，將提取液濃縮后，用45～60％的乙醇進行醇沉除雜、再制成浸膏粉后用于壓片，既可減小服用量，又可顯著提高有效成分小檗堿的含量。
3、柴胡、蓄、續(xù)斷、桑寄生、苘麻子、甘草六味藥的提取柴胡和續(xù)斷均含皂苷、黃酮類等成分，藥理實驗表明具有抗炎、解熱、鎮(zhèn)痛、利尿、抗氧化、抗腫瘤和免疫增強作用。桑寄生、蓄、苘麻子含有蓄苷及槲皮苷等黃酮類成分，其水煎液都具有利尿、抗菌、抗病毒作用。甘草主要含甘草酸及甘草黃酮類成分，具有抗病毒、抗氧化、抗?jié)?、調(diào)節(jié)內(nèi)分泌及免疫調(diào)節(jié)作用。以上六味藥所含的主要有效成分均可溶解于水，因此可合并一起用水煎提取，既可減小生產(chǎn)成本、又符合中藥臨床和大生產(chǎn)的實際需要。但水煎液含有大量淀粉、蛋白質(zhì)、粘液質(zhì)等非活性成分，增加了服用量，因此選用45～60％的乙醇進行醇沉除雜，以達到去粗取精、減少服用量的目的。
4、本發(fā)明劑型為薄膜片劑和膠囊劑，成品規(guī)格為0.35～0.5克/片。用法用量為口服，一日3次，一次3～5片(粒)。與原“泌尿?qū)庮w?！币淮畏?2克相比，服用劑量大大減小，因而具有服用方便、易于運輸貯存和攜帶的優(yōu)點。
5、通過運用高效液相色譜法分別測定本發(fā)明和市售“泌尿?qū)庮w粒”中的小檗堿含量，結(jié)果表明，本發(fā)明每1片(粒)小檗堿含量為1.5mg以上，即一次最低服用量為1.5mg/?！?粒/次＝4.5mg，而“泌尿?qū)庮w?！泵看?12克，一次用量)小檗堿含量僅為1.5mg，由此可見本發(fā)明口服制劑有效成分之一小檗堿含量高于“泌尿?qū)庮w粒”的2倍以上，從而提高了藥效。
6、本發(fā)明片劑用全水防潮型歐巴代(Opadry AMB)包衣，具有崩解迅速、機械性能強、防潮性能好等優(yōu)點，提高了制劑的穩(wěn)定性和有效性。
7、本發(fā)明具有清熱通淋，利尿止痛，補腎固本的功效。用于熱淋、小便赤澀熱痛及泌尿系感染等疾病，具有質(zhì)量穩(wěn)定、療效確切等優(yōu)點。經(jīng)藥效學(xué)試驗表明，本發(fā)明具有解熱、抗菌、抗炎、利尿、鎮(zhèn)痛的作用，藥效明顯優(yōu)于“泌尿?qū)庮w?！?。
下面結(jié)合實施例及主要藥效學(xué)試驗報告對本發(fā)明作進一步的說明。
實施例1(1)取白芷100g、五味子100g，混合，加8倍量80％乙醇，回流提取2次，每次1.5h。合并乙醇提取液，減壓回收乙醇，濃縮成稠膏，低溫干燥，粉碎成細粉，備用；(2)取黃柏120g加10倍量水浸泡1h，煎煮2次，每次1.5h，濾過，合并濾液，減壓濃縮至相對密度為1.05-1.08(60℃測)，加乙醇至醇濃度達50％，攪拌，靜置24h，過濾，殘渣用50％乙醇洗滌至近無色，合并濾液及洗液，減壓回收乙醇，濃縮至稠膏，低溫真空干燥，粉碎成細粉，備用；(3)取柴胡120g、蓄100g、續(xù)斷100g、桑寄生100g、苘麻子120g、甘草100g，混合，加10倍量水浸泡1h，煎煮3次，每次1.5h，濾過，合并濾液，減壓濃縮至相對密度為1.15-1.25(60℃測)，加乙醇至醇濃度達50％，攪拌，靜置24h，過濾，濾液減壓回收乙醇，濃縮成稠膏，低溫干燥，粉碎成細粉，備用；(4)取上述(1)、(2)、(3)項下細粉，合并，加入羧甲基淀粉鈉、微晶纖維素，充分混合均勻，制軟材，制粒，干燥，整粒，加入適量硬脂酸鎂混勻，裝膠囊，即制得本發(fā)明的膠囊劑。
實施例2(1)取白芷400g、五味子400g，混合，加10倍量70％乙醇，回流提取3次，每次1h。合并乙醇提取液，減壓回收乙醇，濃縮成稠膏，低溫干燥，粉碎成細粉，備用；(2)取黃柏480g加12倍量水浸泡3h，煎煮2次，每次2h，濾過，合并濾液，減壓濃縮至相對密度為1.12(60℃測)，加乙醇至醇濃度達60％，攪拌，靜置18h，過濾，殘渣用60％乙醇洗滌至近無色，合并濾液及洗液，減壓回收乙醇，濃縮至稠膏，低溫真空干燥，粉碎成細粉，備用；(3)取柴胡480g、蓄400g、續(xù)斷400g、桑寄生400g、苘麻子480g、甘草400g，混合，加12倍量水浸泡4h，煎煮3次，每次1.5h，濾過，合并濾液，減壓濃縮至相對密度為1.20(60℃測)，加乙醇至醇濃度達60％，攪拌，靜置20h，過濾，濾液減壓回收乙醇，濃縮成稠膏，低溫干燥，粉碎成細粉，備用；(4)取上述(1)、(2)、(3)項下細粉，合并，加入羧甲基淀粉鈉、微晶纖維素，充分混合均勻，用適量乙醇制軟材，16目篩制顆粒，50℃干燥，整粒，加入適量硬脂酸鎂，混勻，壓片，用歐巴代(opadry AMB)包薄膜衣，即制得本發(fā)明片劑1000片。
實施例3(1)取白芷110g、五味子90g，混合，加7倍量60％乙醇，回流提取2次，每次2.5h。合并乙醇提取液，減壓回收乙醇，濃縮成稠膏，低溫干燥，粉碎成細粉，備用；(2)取黃柏130g加10倍量水浸泡3h，煎煮4次，每次1h，濾過，合并濾液，減壓濃縮至相對密度為1.07(60℃測)，加乙醇至醇濃度達50％，攪拌，靜置22h，過濾，殘渣用50％乙醇洗滌至近無色，合并濾液及洗液，減壓回收乙醇，濃縮至稠膏，低溫真空干燥，粉碎成細粉，備用；(3)取柴胡110g、蓄110g、續(xù)斷90g、桑寄生110g、苘麻子130g、甘草100g，混合，加9倍量水浸泡2h，煎煮3次，每次1.2h，濾過，合并濾液，減壓濃縮至相對密度為1.18(60℃測)，加乙醇至醇濃度達53％，攪拌，靜置20h，過濾，濾液減壓回收乙醇，濃縮成稠膏，低溫真空干燥，粉碎成細粉，備用；
(4)取上述(1)、(2)、(3)項下細粉，合并，加入羧甲基淀粉鈉、微晶纖維素，充分混合均勻，用適量乙醇制軟材，16目篩制顆粒，45℃干燥，12目篩整粒，加入適量硬脂酸鎂，混勻，壓片，包薄膜衣，即制得本發(fā)明片劑。
為證明本發(fā)明治療泌尿系感染的效果及安全性，進行了毒理和藥效學(xué)試驗，研究結(jié)果如下一、急性毒性試驗急性毒性研究結(jié)果表明，本發(fā)明灌胃給藥后，小鼠活動明顯減少，部分出現(xiàn)腹瀉，24小時后基本恢復(fù)正常，未發(fā)現(xiàn)其它毒性反應(yīng)。小鼠一日最大給藥量為179.2g生藥/kg，相當(dāng)于臨床成人每日用量344.6倍。
二、長期毒性試驗長期毒性研究結(jié)果表明，用本發(fā)明大、中、小三個劑量(40.16、20.8、10.4g生藥/kg，分別相當(dāng)于成人用量的80、40、20倍)給大鼠連續(xù)灌胃三個月，對大鼠的一般狀況、血液學(xué)、血液生化學(xué)、尿常規(guī)、心電圖、系統(tǒng)解剖、臟器系數(shù)和組織病理學(xué)均無明顯影響，未發(fā)現(xiàn)毒性反應(yīng)，恢復(fù)期亦無延遲性毒性反應(yīng)，提供大鼠無毒性反應(yīng)劑量為40.16g生藥/kg/日。
三、主要藥效學(xué)試驗試驗材料試驗藥物本發(fā)明薄膜衣片，0.46g/片，每克實驗藥物相當(dāng)于生藥5.6g，以蒸餾水配成所需濃度的溶液。對照藥、主要試劑及細菌泌尿?qū)庮w粒；三金片；標(biāo)準(zhǔn)菌株購自中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院、北京藥品生物制品鑒定所、中國醫(yī)學(xué)細菌保藏中心，臨床分離菌株由西安交通大學(xué)第一醫(yī)院等提供，均經(jīng)TAXK-II全自動數(shù)字細菌鑒定儀鑒定。
試驗方法及結(jié)果(一)鎮(zhèn)痛試驗小鼠50只，雌雄各半，隨機分為5組，每組10只。第一組為陰性對照組，給等容積生理鹽水；第二組為陽性對照組，給泌尿?qū)庮w粒28g生藥/kg；第三、四、五組為本發(fā)明薄膜衣片組，分別給本發(fā)明薄膜衣片7、14、28g生藥/kg。各組皆灌胃給藥，0.2ml/10g，每天1次，連續(xù)3天。末次給藥1小時后腹腔注射0.6％醋酸溶液0.1ml/10g，觀察記錄15min內(nèi)小鼠扭體反應(yīng)(小鼠腹部貼地、內(nèi)凹、伸展后肢、扭曲)次數(shù)，結(jié)果見表1。
表1本發(fā)明對小鼠扭體反應(yīng)的影響(x±s)組別 劑量 動物數(shù) 扭體反應(yīng)g生藥/kg) (只) (次/15min)陰性對照組 1014.9±6.9泌尿?qū)庮w粒 28 109.2±5.0*本發(fā)明小劑量 7 1013.5±6.7本發(fā)明中劑量 14 109.2±5.5本發(fā)明大劑量 28 108.5±5.6*與陰性對照組比較 *P＜0.05由表1可見，本發(fā)明薄膜衣片能抑制醋酸刺激的小鼠扭體反應(yīng)，與陰性對照組比較，大劑量組有顯著性差異(P＜0.05)，提示泌尿?qū)幈∧ひ聦Υ姿岽碳さ奶弁从墟?zhèn)痛作用。陽性對照藥泌尿?qū)庮w粒也能抑制醋酸刺激的小鼠扭體反應(yīng)，但作用稍弱于本發(fā)明薄膜衣片。
(二)抗炎試驗(1)急性腹腔滲出性炎癥試驗小鼠50只，雌雄各半，隨機分為5組，每組10只。第一組為陰性對照組，給等容積生理鹽水；第二組為陽性對照組，給泌尿?qū)庮w粒28g生藥/kg；第三、四、五組為本發(fā)明薄膜衣片組，分別給本發(fā)明薄膜衣片7、14、28g生藥/kg。各組皆灌胃給藥，0.2ml/10g，每天1次，連續(xù)3天。末次給藥1小時后，每鼠靜脈注射0.5％伊文思藍溶液0.1ml/10g，然后腹腔注射0.6％醋酸0.2ml/只，20min后頸椎脫臼處死，剪開腹腔，用6ml生理鹽水分次沖洗腹腔，收集洗滌液并加生理鹽水至l0ml，3000rpm離心15min。取上清夜于590nm比色，由標(biāo)準(zhǔn)曲線計算伊文思藍含量。結(jié)果見表2。
表2本發(fā)明薄膜衣片對小鼠急性腹腔滲出性炎癥的影響(x±s)組別 劑量動物數(shù) 伊文思藍量 抑制率(g生藥/kg) (只) (μg/ml) (％)陰性對照組102.6±1.4泌尿?qū)庮w粒 28 101.3±0.8* 47.54本發(fā)明小劑量 7101.7±0.8 34.62本發(fā)明中劑量 14 101.4±1.0* 46.15本發(fā)明大劑量 28 101.1±0.6**57.69與陰性對照組比較，*P＜0.05，**P＜0.01
由表2可見，本發(fā)明薄膜衣片可使小鼠腹腔伊文思藍滲出量減少，與陰性對照組比較，中、大劑量組均有顯著性差異(P＜0.05或P＜0.01)，提示本發(fā)明薄膜衣片可抑制醋酸刺激的小鼠急性滲出性炎癥反應(yīng)。陽性對照藥泌尿?qū)庮w粒也能抑制醋酸刺激的小鼠急性滲出性炎癥反應(yīng)，但作用弱于本發(fā)明片劑。
(2)大鼠足跖水腫法大鼠50只，隨機分為5組，每組10只。第一組為陰性對照組，給等容積蒸餾水；第二組為陽性對照組，給泌尿?qū)庮w粒20g生藥/kg；第三、四、五組為本發(fā)明薄膜衣片小、中、大劑量組，分別給本發(fā)明薄膜衣片5、10、20g生藥/kg。各組灌胃給藥，每天1次，0.2ml/100g，連續(xù)3天。末次給藥60min后，每鼠右后足跖皮內(nèi)注射10％雞蛋清0.1ml致炎。致炎前及致炎后30min、1h、2h、4h用大鼠足趾容積測定儀測量大鼠右后足爪容積，以致炎前后足爪容積之差作為腫脹度，結(jié)果見表3。
表3本發(fā)明薄膜衣片對大鼠急性炎癥的影響(x±s，n＝10)組別 劑量腫脹度(mm)(g生藥/kg) 30min1h 2h 4h陰性對照組 0.40±0.24 0.73±0.32 0.66±0.14 0.40±0.12泌尿?qū)庮w粒 20 0.34±0.16 0.47±0.23* 0.27±0.13* 0.17±0.13本發(fā)明小劑量 5 0.34±0.24 0.62±0.24 0.46±0.18* 0.37±0.17本發(fā)明中劑量 10 0.32±0.21 0.61±0.33 0.46±0.24* 0.32±0.12本發(fā)明大劑量 20 0.32±0.20 0.45±0.12* 0.44±0.23* 0.27±0.15*與陰性對照組比較，*P＜0.05，**P＜0.01由表3可見，本發(fā)明薄膜衣片可抑制雞蛋清誘發(fā)的大鼠急性炎癥的發(fā)生和發(fā)展，與陰性對照組比較，小、中劑量給藥后2h有顯著性差異(P＜0.05)，大劑量組給藥后1h、2h、4h有顯著性差異(P＜0.05)。說明本發(fā)明薄膜農(nóng)片有抗大鼠急性滲出性炎癥作用。陽性對照藥泌尿?qū)庮w粒也能抑制雞蛋清誘發(fā)的大鼠急性滲出性炎癥反應(yīng)，在4h時作用弱于本發(fā)明薄膜衣片。
(三)對正常家兔的利尿作用健康家兔40只，隨機分為5組，每組8只。第一組為陰性對照組，給生理鹽水；第二組為陽性對照組，給泌尿?qū)庮w粒10.4g生藥/kg、第三、四、五組為本發(fā)明薄膜衣片組，分別給本發(fā)明薄膜衣片2.6、5.2、10.4g生藥/kg。首先給家兔以水負荷，30ml/kg，然后靜脈注射3％戊巴比妥鈉1ml/kg麻醉，仰臥固定于手術(shù)臺，剪去下腹部毛，在恥骨聯(lián)合上方沿正中線做長約5cm切口，打開腹腔，暴露膀胱。然后切開膀胱，插入、固定膀胱漏斗以收集尿液。手術(shù)結(jié)束后停留20min，然后收集30min尿量。灌胃給藥，5ml/kg。給藥后開始收集尿量，共4次(第1次0～30min，第二次30～60min，第三次60～90min，第四次90～120min)，每次30min。結(jié)果見表4。
表4本發(fā)明對正常家兔的利尿作用(x±s)組別 劑量 動物數(shù) 尿量(ml)(g生藥/kg) (只) 給藥前給藥后30min60min 90min 120min陰性對照組 8 1.73±0.79 1.26±1.19 1.79±1.24 2.25±0.79 2.10±0.98泌尿?qū)庮w粒10.4 8 1.56±0.49 2.66±4.45 3.24±2.63 5.09±3.83* 3.58±2.15本發(fā)明小劑量 2.6 8 1.73±2.11 2.84±3.25 3.04±2.92 2.43±1.85 1.54±0.52本發(fā)明中劑量 5.2 8 1.90±0.68 3.05±2.33 3.01±1.82 3.63±1.65* 3.03±1.92本發(fā)明大劑量 10.4 8 1.71±0.89 3.09±2.74 5.36±4.63* 6.49±5.1* 4.89±3.57*與陰性對照組比較，*P＜0.05，**P＜0.01由表4可見，本發(fā)明薄膜衣片可增加正常家兔的尿量，與陰性對照組比較，中劑量組給藥后90min有顯著性差異(P＜0.05)，大劑量組給藥后60min、90min、120min均有顯著性差異(P＜0.05)，提示本發(fā)明薄膜衣片對家兔具有利尿作用。陽性對照藥泌尿?qū)庮w粒對家兔也有利尿作用，但作用弱于本發(fā)明薄膜衣片。
(四)解熱試驗健康家兔40只，隨機分為5組，每組8只。第一組為陰性對照組，給生理鹽水；第二組為陽性對照組，給泌尿?qū)庮w粒10.4g生藥/kg、第三、四、五組為泌尿?qū)幈∧ひ缕M，分別給泌尿?qū)幈∧ひ缕?.6、5.2、10.4g生藥/kg。各組以5ml/kg灌胃給藥后，在每只兔股四頭肌處注射用高壓滅菌并用肉湯培養(yǎng)液10倍稀釋的大腸桿菌液2ml，在注射死菌液后1、2、3、5、8、12 h時測定每只兔肛溫。將各給藥組動物體溫與基礎(chǔ)體溫之差與模型組體溫之差進行比較。結(jié)果見表5。
表5泌尿?qū)幈∧ひ缕瑢λ来竽c桿菌引起兔體溫升高的影響(x±s，n＝8)組別 劑量 用藥后體溫(g生藥/kg) 正常致熱后1h 2h3h 5h 8h 12h陰性對照組 39.04±0.10 41.61±0.29 41.86±0.19 41.80±0.17 41.76±0.13 41.53±0.18 40.64±0.22 39.90±0.26泌尿?qū)庮w粒 10.439.04±0.09 41.43±0.29 41.63±0.20* 41.48±0.29* 41.38±0.25**40.89±0.32**40.29±0.34* 39.95±0.33本發(fā)明2 6 38.95±0.09 41.55±0.23 41.77±0.17 41.70±0.17 41.69±0.25 41.34±0.14* 40.64±0.19 40.08±0.30本發(fā)明5.2 39.04±0.11 41.68±0.24 41.64±0.17* 41.57±0.20* 41.43±0.25**41.03±036** 40.13±0.17**39.63±0.24*本發(fā)明10.439.06±0.09 41.50±0.35 41.64±0.19* 41.49±0.21**41.28±0.19**40.31±0.22**40.10±0.24**39.45±0.16*與陰性對照組比較，*P＜0.05，**P＜0.01
由表5可見，泌尿?qū)幈∧ひ缕山档痛竽c桿菌引起兔體溫升高，與陰性對照組比較，小劑量組給藥后5h有顯著性差異(P＜0.05)；中劑量組給藥后1h、2h、3h、5h、8h、12h有顯著性差異(P＜0.05，P＜0.01)；大劑量組給藥后1h、2h、3h、5h、8h、12h均有顯著性差異(P＜0.05，P＜0.01)，提示泌尿?qū)幈∧ひ缕瑢Υ竽c桿菌引起兔體溫升高有抑制作用。陽性對照藥泌尿?qū)庮w粒對大腸桿菌引起兔體溫升高也有抑制作用，但作用弱于泌尿?qū)幈∧ひ缕?br> (五)體外抗菌試驗1.本發(fā)明薄膜衣片MIC和MBC的測定1.1對大腸埃希氏菌、金黃色葡萄球菌、綠膿假單胞菌、表皮葡萄球菌、不動桿菌、變形桿菌、腸炎沙門氏菌標(biāo)準(zhǔn)株和臨床分離株MIC和MBC的測定將本發(fā)明薄膜衣片用MH肉湯由10％(560mg生藥/ml)進行連續(xù)二倍梯度稀釋，將各濃度藥液分別加到96孔培養(yǎng)板，0.2ml/孔。再依次加入濃度為106CFU/ml的試驗菌液10μl/孔，同時設(shè)立細菌對照以及培養(yǎng)基對照。置室溫作用12h，于普通培養(yǎng)箱37℃培養(yǎng)24h觀察結(jié)果。無細菌生長孔中所含最小藥物濃度為MIC。再依次將未見細菌生長孔的培養(yǎng)物分別吸取0.1ml點種于MH平板，置普通培養(yǎng)箱37℃培養(yǎng)24h，無細菌生長接種區(qū)域?qū)?yīng)的最小藥物濃度為MBC，結(jié)果見表6～7。
1.2對釀膿鏈球菌、糞鏈球菌、淋病奈瑟氏菌標(biāo)準(zhǔn)株MIC和MBC的測定將本發(fā)明薄膜衣片用含0.5％小牛血清的MH肉湯由10％(560mg生藥/ml)進行連續(xù)二倍梯度稀釋，將各濃度藥液分別加到96孔培養(yǎng)板，0.2ml/孔。再依次加入濃度為106CFU/ml的試驗菌液10μl/孔，同時設(shè)立細菌對照以及培養(yǎng)基對照。置室溫作用12h，于5％CO2培養(yǎng)箱37℃培養(yǎng)48h觀察結(jié)果。無細菌生長孔中所含最小藥物濃度為MIC。再依次將未見細菌生長各孔的培養(yǎng)物分別吸取0.1ml轉(zhuǎn)染到營養(yǎng)平板(釀膿鏈球菌、糞鏈球菌接種血平板，淋球菌接種巧克力色平板)，置5％CO2培養(yǎng)箱37℃培養(yǎng)48h，無細菌生長接種區(qū)域?qū)?yīng)的最小藥物濃度為MBC，結(jié)果見表5～6。
1.3對白色念珠菌標(biāo)準(zhǔn)株和臨床分離MIC和MBC的測定將本發(fā)明薄膜衣片用沙保弱氏(SB)肉湯由10％(560mg生藥/ml)進行連續(xù)二倍梯度稀釋，將各濃度藥液分別加到96孔培養(yǎng)板，0.2ml/孔。再依次加入濃度為106CFU/ml的試驗菌液10μl/孔，同時設(shè)立細菌對照以及培養(yǎng)基對照。置室溫作用12h，于普通培養(yǎng)箱37℃培養(yǎng)48h觀察結(jié)果。無細菌生長孔中所含最小藥物濃度為MIC。再依次將未見細菌生長各孔的培養(yǎng)物分別吸取0.1ml點種于SB平板，置普通培養(yǎng)箱37℃培養(yǎng)48h，無細菌生長接種區(qū)域所對應(yīng)的最小藥物濃度為MBC，結(jié)果見表6～7。
表6本發(fā)明薄膜衣片對標(biāo)準(zhǔn)菌株的MIC和MBC菌株 MIC(mg生藥/ml) MBC(mg生藥/ml)大腸埃希氏菌ATCC25922株 70 140金黃色葡萄球菌ATCC25925株 2.185 8.75綠膿假單胞菌ATCC27853株 70 140表皮葡萄球菌ATCC26069株 4.375 7.75釀膿鏈球菌32300株 4.375 17.5不動桿菌25003株 17.570糞鏈球菌ATCC10541株 8.7517.5淋病奈瑟氏菌20106株 1.0938 4.375變形桿菌49010株 35 70腸炎沙門氏菌50040株 17.535白色念珠菌85021株 2.1875 8.75表7本發(fā)明對473株臨床分離菌株的MIC、MIC50、MIC90和MBC(mg生藥/ml)菌株 株數(shù) MIC MIC50MIC90MBC大腸桿菌 155 35～140 64.5806 81.5126 70～280金黃葡菌 115 1.0938～8.75 3.8794 4.0514 4.375～17.5表皮葡菌 50 2.185～8.75 3.9804 4.1038 4.375～17.5不動桿菌 38 8.75～70 20.7237 24.5717 17.5～140變形桿菌 85 17.5～70 34.5882 48.3146 35～140白念球菌 30 0.5469～4.375 1.6401 1.9306 2.185～8.75由表6可見，本發(fā)明薄膜衣片對試驗所選用的大腸埃希氏菌、金黃色葡萄球菌、綠膿假單胞菌、表皮葡萄球菌、釀膿鏈球菌、不動桿菌、糞鏈球菌、淋病奈瑟氏菌、變形桿菌、腸炎沙門氏菌、白色假絲酵母菌的標(biāo)準(zhǔn)株均有較明顯的抑制和滅活作用，其MBC為MIC的2～4倍。由表7可見，本發(fā)明薄膜衣片對試驗所選用的473株臨床分離菌株均有一定的抑制和滅活作用，其MBC為MIC的2～4倍。
2.培養(yǎng)條件對本發(fā)明薄膜衣片MIC的影響選取大腸埃希氏菌ATCC25922株和表皮葡萄球菌ATCC26069株，改變培養(yǎng)條件，分別測定本發(fā)明薄膜衣片對受試細菌的MIC。
2.1pH的影響參照試驗1MIC測定方法，將培養(yǎng)液的pH分別調(diào)到5.7、7.2、8.5，分別測定各自的MIC，結(jié)果見表8。
表8pH對本發(fā)明薄膜農(nóng)片MIC的影響MIC (mg生藥/ml)pH大腸埃希氏菌 表皮葡萄球菌ATCC25922株 ATCC26069株5.7 70 4.3757.2 70 4.3758.5 70 4.375由表8可見，改變培養(yǎng)液的pH，不影響本發(fā)明薄膜衣片對大腸埃希氏菌ATCC25922株和表皮葡萄球菌ATCC26069株的MIC。
2.2細菌接種量的影響參照試驗1MIC測定方法，將試驗菌液濃度依次改變?yōu)?06、108、1010CFU/ml，每孔接種10μl，進行MIC測定，結(jié)果見表9。
表9 細菌接種量對本發(fā)明薄膜衣片MIC的影響細菌接種量 MIC(mg生藥/ml)(CFU/ml) 大腸埃希氏菌 表皮葡萄球菌ATCC25922株ATCC26069株10670 4.37510870 4.375101070 4.37由表9可見，改變細菌接種量，不影響本發(fā)明薄膜衣片對大腸埃希氏菌ATCC25922株和表皮葡萄球菌ATCC26069株的MIC。
(六)體內(nèi)抗菌試驗1.試驗菌最小致死量的測定將ICR小鼠隨機分組，每組10只，雌雄各半。將試驗菌液用含5％胃膜素的生理鹽水10倍連續(xù)梯度稀釋，用每一稀釋菌液腹腔注射感染一組小鼠，感染量0.2ml/10g，以5％胃膜素生理鹽水為對照，觀察7天，記錄各組小鼠死亡情況，以致小鼠全部死亡的最小濃度細菌量作為最小致死量(MLD)。結(jié)果表明，變形桿菌49010株的最小致死量2×107CFU/kg。
2.本發(fā)明薄膜衣片對感染小鼠0％(ED0)和100％(ED100)保護量的測定ICR小鼠隨機分組，每組10只，雌雄各半。用試驗菌100％MLD腹腔注射感染小鼠。將本發(fā)明薄膜衣片由20％開始用生理鹽水做5倍連續(xù)梯度稀釋，每一稀釋度藥液灌胃給藥一組小鼠，0.2ml/10g(起始給藥量22.4g生藥/kg)，每日1次，連續(xù)7天，同時設(shè)立感染對照和正常對照組，觀察7天內(nèi)小鼠死亡情況。小鼠全部死亡的最大給藥量為0％保護量，小鼠全部存活的最小給藥量為100％保護量。結(jié)果表明，本發(fā)明薄膜農(nóng)片對變形桿菌49010株感染小鼠的ED100為22.4g生態(tài)平衡藥/kg，ED0為0.35g生藥/kg。
3.本發(fā)明薄膜衣片貼對變形桿菌49010株感染小鼠50％(ED50)保護量的測定ICR小鼠隨機分組，每組10只，雌雄各半。用變形桿菌49010株100％MLD菌液腹腔注射感染小鼠。將本發(fā)明薄膜衣片用生理鹽水由20％開始做1∶2連續(xù)5個梯度稀釋，每一梯度藥液灌胃給藥一組小鼠。給藥量0.2ml/10g(起始給藥量22.4g生藥/kg)，每日1次，連續(xù)7天。感染對照組和正常對照組同法給等容積生理鹽水，陽性對照設(shè)兩組，分別給三金片和泌尿?qū)庮w粒。觀察7天內(nèi)小鼠死亡情況，計算本發(fā)明薄膜衣片對變形桿菌49010株感染小鼠的ED50及95％可信限，結(jié)果見表10。
表10本發(fā)明薄膜衣片對變形桿菌49010株感染小鼠的保護作用組別劑量 對數(shù)劑量動物數(shù) 死亡數(shù) 存活率(g生藥/kg) (只)(只) (％)空白對照組 10 0100感染對照組 10 10 0三金片7.8 0.8921 10 370泌尿?qū)庮w粒11.2 1.0492 10 370本發(fā)明片 11.2 1.0492 10 190本發(fā)明片 5.6 0.7482 10 460本發(fā)明片 2.8 0.4472 10 730本發(fā)明片 1.4 0.1462 10 910本發(fā)明片 0.7 0.1549 10 10 0結(jié)果表明，本發(fā)明薄膜衣片對變形桿菌49010株感染小鼠的ED50為6.0062g生藥/kg，95％可信限為4.1957～8.6038g生藥/kg。
試驗結(jié)論本發(fā)明薄膜衣片體外對泌尿道感染常見細菌大腸埃希氏菌、金黃色葡萄球菌、綠膿假單胞菌、表皮葡萄球菌、釀膿鏈球菌、不動桿菌、糞鏈球菌、淋病奈瑟氏菌、變形桿菌、腸炎沙門氏菌、白色假絲酵母菌有較明顯的抑制和滅活作用，改變pH和細菌接種量不影響本發(fā)明薄膜衣片對大腸埃希氏菌和表皮葡萄球菌的抗菌作用；灌胃給藥，體內(nèi)對變形桿菌感染小鼠有保護作用；能抑制醋酸刺激的小鼠急性滲出性炎癥反應(yīng)和雞蛋清誘發(fā)的大鼠急性炎癥反應(yīng)；抑制醋酸刺激的小鼠扭體反應(yīng)；對家兔具有利尿作用。對家兔灌胃給藥，能抑制死大腸桿菌引起的兔體溫升高。結(jié)果說明，本發(fā)明薄膜衣片具有抗菌、抗炎、利尿、解熱、鎮(zhèn)痛作用，作用優(yōu)于泌尿?qū)庮w粒。
權(quán)利要求
1.一種治療泌尿系感染的中藥口服制劑，其特征在于原料的組成和重量配比為柴胡110～130 五味子90～110萹蓄90～110黃柏110～130 白芷90～110 續(xù)斷90～110桑寄生90～110苘麻子110～130 甘草90～110。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的治療泌尿系感染的中藥口服制劑，其特征在于所述的口服制劑是膠囊劑和片劑。
3.權(quán)利要求2所述的治療泌尿系感染的中藥口服制劑的制備方法，包括以下步驟(1)取白芷、五味子加6～10倍量65～90％乙醇，回流提取2～4次，每次1～3h。合并乙醇提取液，減壓回收乙醇，濃縮成稠膏，低溫干燥，粉碎成細粉，備用；(2)取黃柏加8～12倍量水浸泡1～6h，煎煮2～3次，每次1～3h，濾過，合并濾液，減壓濃縮至相對密度為1.05-1.12(60℃測)，加乙醇至醇濃度達45～60％，攪拌，靜置，過濾，殘渣用45～60％乙醇洗滌至近無色，合并濾液及洗液，減壓回收乙醇，濃縮成稠膏，低溫干燥，粉碎成細粉，備用；(3)取柴胡、萹蓄、續(xù)斷、桑寄生、苘麻子、甘草六味藥，加8～12倍量水浸泡1～6h，煎煮2～4次，每次1～3h，濾過，合并濾液，減壓濃縮至相對密度為1.15-1.25(60℃測)，加乙醇至醇濃度達45～60％，攪拌，靜置，過濾，濾液減壓回收乙醇，濃縮成稠膏，低溫干燥，粉碎成細粉，備用；(4)取上述(1)、(2)、(3)項下細粉，合并，加入羧甲基淀粉鈉、微晶纖維素，充分混合均勻，制軟材，制粒，干燥，整粒，加入硬脂酸鎂混勻，裝膠囊或壓片、包衣，即制得本發(fā)明的膠囊劑或片劑。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種治療泌尿系感染的中藥口服制劑，它是以柴胡、五味子、萹蓄、黃柏、白芷、續(xù)斷、桑寄生等九味中藥為原料，通過分組提取、濃縮、干燥制成浸膏粉，再與輔料混勻、裝膠囊或壓片、包衣而成的膠囊劑或片劑。本發(fā)明中藥口服制劑具有清熱通淋、利尿止痛、補腎固本的功效。經(jīng)藥效學(xué)試驗表明，具有解熱、抗菌、抗炎、利尿、鎮(zhèn)痛的作用，用于熱淋、小便赤澀熱痛及泌尿系感染等疾病，具有有效成分含量高、服用劑量小、起效快、療效確切、服用和攜帶方便、易于保存和運輸、質(zhì)量穩(wěn)定等優(yōu)點。
文檔編號A61P13/02GK1559535SQ20041001557
公開日2005年1月5日 申請日期2004年3月9日 優(yōu)先權(quán)日2004年3月9日
發(fā)明者陳玲玲 申請人:陳玲玲