專利名稱：一種抗腫瘤及抗衰老的藥物組合物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種抗腫瘤及抗衰老的藥物組合物，該藥物組合物有效組份為從大豆中提取的鮑曼-伯克蛋白酶抑制劑和葡萄皮籽提取物。
背景技術(shù)：
蛋白酶抑制劑(Bowman-birk soybean protease inhibitor，簡稱BBI)是鮑曼1946年在粗制大豆粉中分離出來的一種具有較高胱氨酸含量的蛋白物質(zhì)。由于該物質(zhì)具有不溶于丙酮的物理性質(zhì)，當(dāng)時將其稱為丙酮不溶因子(Pro.soc.exp.biol.med.63547-550)；1961年，伯克完成了對該物質(zhì)的純化(DEAE-cellulose column層析法)，并賦予更為完整的理化及生理學(xué)性質(zhì)“其分子是由7個二硫鍵締合71個氨基酸而成，分子量8000，擁有兩個獨立的抑制位點，可與胰蛋白酶或者糜蛋白酶結(jié)合形成一個1∶1的復(fù)合物，使酶原有活性改變”(Biochim.biophys.acta.54378-381)。此后，該抑制劑以上述二人名字命名，即BBI。
最先發(fā)現(xiàn)BBI醫(yī)學(xué)用途的是Troll.。1983年，Troll報告流行病學(xué)研究顯示，經(jīng)常食用富含BBI的食物可以降低人們前列腺、乳腺、結(jié)腸及皮膚部位癌癥的發(fā)病率，這一結(jié)果已在其建立的動物試驗?zāi)Ｐ拖到y(tǒng)得到證實。Troll認(rèn)為，在上述過程中BBI是以植物抗氧劑發(fā)揮抗癌作用(Prostate.4345-349)。繼之，有關(guān)BBI各種醫(yī)學(xué)應(yīng)用的研究相繼報道1984年，Kennedy報告無論使用BBI純品或者含有BBI的大豆粗提物(稱BBIconcentrate，簡稱BBIC)，都可以使患有Bloom′s綜合癥小鼠細(xì)胞染色體畸形的水平降低。該病是一種具有較高染色體畸形水平、癌發(fā)病率很高的遺傳性疾病(Mechanisms of tumor promotion，Vol.III，pp13-55；CRC press，Inc.BocaRaton)；1985年，Yavelow報道了一種新的BBI提取方法用于提取的材料是經(jīng)丙酮，而非以前所用乙醚去脂的大豆粉；通過醇提、丙酮沉淀、濾膜滲析及冷凍干燥得到的BBIC，在體外試驗系統(tǒng)中可顯示出更好的抑制細(xì)胞惡變效果(Proc.natl.acad.sci.USA.825395-5399)；同年，Weed模擬人結(jié)腸直腸癌發(fā)病機理，利用dimethylhydrazine(DMH)作誘變劑建立了一個小鼠致結(jié)腸癌模型系統(tǒng)。在這個實驗系統(tǒng)的研究中，Weed將BBIC加入到模型組及空白組，結(jié)果顯示BBIC可以顯著抑制鼠結(jié)腸粘膜腺癌的發(fā)病水平；空白組中的大多數(shù)小鼠則維持到其正常的壽命期限(1.5年)而未發(fā)現(xiàn)任何健康問題；(Carcinogenesis.61239-1241)；1986年，Messadi證實利用Yavelow方法制取的BBIC，在其建立的與人口腔癌病變過程、組織病理、生長方式及癌前損傷都極為相似的動物模型系統(tǒng)中，能夠有效地抑制7，12-dimethyl-benz[a]anthracene(DMBA)誘發(fā)的hamster鼠頰囊袋腫瘤發(fā)生水平(JNCI，76，447-452)；1986年及1993年，Kennedy分別申請了兩項BBIC的制取方法專利(US4793996；US5217717)。Kennedy指出如果需要BBI純品，可以在獲得的BBIC基礎(chǔ)上通過傳統(tǒng)法得到。但他認(rèn)為BBI純品與BBIC在許多試驗中沒有表現(xiàn)出較多的效力上的差異，而且BBIC可以直接食用，從成本考慮，建議使用BBIC；1989年，Witschi報告BBIC還可以抑制3-methylcholanthrane(MCA)誘發(fā)的小鼠肺癌發(fā)生的比率(Carcinogenesis.122275-2277)；1990年，ST.Clair對不同劑量下的BBI純品及BBIC抑癌效力進行了試驗，發(fā)現(xiàn)在經(jīng)DMH處理的小鼠食物中加入0.5％、0.1％的BBIC或者0.1％、0.01％的BBI純品這樣的較低劑量，其結(jié)果都能導(dǎo)致具有統(tǒng)計學(xué)意義的抑制肝血管肉瘤及結(jié)腸癌的效果，而且沒有任何毒副作用反應(yīng)(Cancer Res.50580-586)。
除了上面所述之外，還有許多體外試驗研究揭示了BBIC對鱗狀細(xì)胞癌、腺癌等多種細(xì)胞類型癌具有抑制作用。綜合以上研究，可以對BBI的性能狀況以及現(xiàn)存問題作如下描述BBI是一個抗腫瘤譜廣、無毒、可食的化學(xué)物質(zhì)；在較低劑量下，可對癌變的三個主要過程啟動(initiation)、促進(promotion)和演進(progression)有效抑制；醫(yī)學(xué)上僅被定位在化學(xué)防護劑應(yīng)用范疇?，F(xiàn)存的問題是，自1983年起發(fā)現(xiàn)BBIC的抗腫瘤作用以來，至今尚未見到可以應(yīng)用的產(chǎn)品上市，是否因為其以單一成分在實際的應(yīng)用中產(chǎn)生了效力方面的問題；除作為化學(xué)防護劑應(yīng)用之外，BBIC是否還可以作為一種有效的化學(xué)治療劑使用？這一點十分重要，因為它關(guān)系到BBIC應(yīng)用價值的擴大與延深。但是，在Pubmed數(shù)據(jù)庫中的數(shù)百條文獻中未能找到一篇涉及移植性腫瘤的藥理學(xué)研究予以明確。為了弄清這些問題，本發(fā)明人作了相應(yīng)的試驗研究。發(fā)現(xiàn)BBIC確實存在著對實體瘤抑制率較低的問題(見抗腫瘤試驗部分)。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一種抗腫瘤及抗衰老的藥物組合物。這里所說的抗腫瘤不再僅僅局限于腫瘤的防護，而且可以適用于腫瘤發(fā)生后的化學(xué)治療；所說的抗衰老是藥物組合物在動物長期毒性試驗中的意外發(fā)現(xiàn)，服用本組合物的小鼠對照空白組出現(xiàn)了較大的壽命時間差異。
鑒于背景技術(shù)中所述的內(nèi)容，尋求一種可與BBIC產(chǎn)生協(xié)力作用的活性物質(zhì)并能與之組成一個藥物組合物，使BBIC的單一腫瘤防護作用延伸至可以有效地進行化學(xué)治療是構(gòu)成本發(fā)明的一個基本驅(qū)動思想。通過對大量藥理上的可用材料進行試驗篩選，發(fā)現(xiàn)葡萄皮籽提取物(GSSE)是達到本發(fā)明原定目標(biāo)的理想物質(zhì)。
流行病學(xué)揭示葡萄及其飲食制品降低癌和心臟病發(fā)生率，通過物理和化學(xué)技術(shù)分析得知葡萄的全果實，特別是其皮部和籽部，含有一群在物源、結(jié)構(gòu)和性質(zhì)上密切關(guān)聯(lián)的活性化合物，即多元酚(pps，主要存在于葡萄籽中)和黃酮類似物(flavonoids，主要存在于葡萄皮中)。他們是葡萄皮籽提取物中的主要有效成分，均具有廣譜的生理、藥理學(xué)活性。通過抗氧化，中和自由基-超氧陰離子，羥自由基，穩(wěn)定的PHH自由基，抑制脂質(zhì)過氧化，LDL氧化，抑制環(huán)氧合酶，脂氧化酶，膠原酶、彈性蛋白酶、透明質(zhì)酸酶，降低血脂、擴張血管、防止脈管狹窄、栓塞硬化、提高免疫力、抗突變以及抗腫瘤等多種作用。盡管GSSE具有以上所述多種功能，但是單獨以其用作抗腫瘤藥物還難以達到理想程度。近年來，國內(nèi)外已有一些利用GSSE與其他物源成分協(xié)同作用，提高了療效及擴大了適應(yīng)癥范圍的文獻報道。本發(fā)明人通過試驗也證明了這一現(xiàn)象BBIC經(jīng)與GSSE組合，抑瘤效果顯著提高，從而形成了本項發(fā)明。
在本發(fā)明的藥物組合物中，BBIC的制取依照Yavelow在Proc.Natl.Acad.sci.USA，82，5395-5399文獻中采用的方法進行。按照此法獲得的BBIC每克含80-115mg CI(chymotrypsin inhibitor)，含量測定效仿中華人民共和國藥典抑肽酶效價測定方法；GSSE制取的工藝流程如下葡萄皮籽選分、干燥、合并、混勻；含水20％乙酸乙酯浸提(交替法)；過濾得濾液；減壓濃縮，泥槳加入石油醚攪洗沉析得粗品固形物；溶于純水，上大孔吸附樹脂柱，水與乙醇梯度洗滌與解吸；洗脫液減壓濃縮得固形物；真空干燥或噴霧干燥得成品；用兒茶素(98％)和表沒食子兒茶素沒食子酸酯(98％)作標(biāo)品進行HPLC分析，GSSE的主要有效成分(pps和flavonoid)含量為65％-75％。
本發(fā)明的藥物組合物，BBIC與GSSE兩組分的比例為1∶1～1∶9；其優(yōu)選配比為1∶3～1∶5。
本發(fā)明的藥物組合物，可以根據(jù)不同的給藥途徑配以藥學(xué)上可以接受的各種附加劑，例如，填充劑、粘合劑、崩解劑、稀釋劑等，采用本領(lǐng)域常規(guī)制劑技術(shù)制成藥學(xué)上常用的各種劑型。例如，片劑、膠囊劑、顆粒劑、口服液、透皮吸收劑等。
具體實施方法實施例1選用下列用量的藥物組合物與附加劑BBIC100gGSSE300g羥基纖維素 150g微粉硅膠30g膠化淀粉30g硬脂酸鎂10g制成1000片實施例2選用下列用量的藥物組合物與附加劑BBIC100gGSSE400g瓊脂30g硬脂酸鎂20g羥基纖維素100g制成1000粒膠囊實施例3選用下列用量的藥物組合物與附加劑BBIC50gGSSE250g乳糖250g糊精50g山梨醇 30g蒸餾水 適量防腐劑適量制成1000ml口服液本發(fā)明藥物組合物的抗腫瘤試驗材料和方法昆明種小白鼠，19～22g，隨機分組#1生理鹽水組用作陰性對照(0.2ml/只/天)；#2天仙膠囊組(250mg/kg/d)與#35-FU組(25mg/kg/d)用做陽性對照；#4BBIC(100mg CI/g)組(100mg/kg/d)；#5GSSE(每克含主要有效成分70％)組(100mg/kg/d)；#6，#7為本發(fā)明藥物組合物BBIC與GSSE按1∶4及1∶3劑量配比組(100mg/kg/d)。瘤株∶肝癌、S-80、艾氏腹水瘤來源于吉林省腫瘤研究所，細(xì)胞培養(yǎng)、計數(shù)及接種方法按照《藥理實驗方法學(xué)》(徐叔云等，人民衛(wèi)生出版社)所述方法進行。實驗結(jié)果見以下各表表1 本發(fā)明藥物組合物對載肝癌細(xì)胞小鼠的影響

表2本發(fā)明藥物組合物對載S-180肉瘤小鼠的影響

表3本發(fā)明藥物組合物對小鼠艾氏腹水瘤體內(nèi)生長的影響

表4本發(fā)明藥物組合物量效關(guān)系(#7 肝癌)

本發(fā)明藥物組合物長期慢性毒性試驗昆明種雌性12月齡小鼠45只，隨機平分3組，對照組提供日常普通飼料；給藥(#7)組分中、高二個劑量；飼料另制，依照小鼠平均食量中應(yīng)包含該組規(guī)定的每日給藥劑量為準(zhǔn)。試驗狀況見表5
表5本發(fā)明藥物組合物長期慢性毒性試驗

試驗中所有死亡鼠均冷凍保存，經(jīng)尸檢，未發(fā)現(xiàn)藥物組合物組任何小鼠主要藏器有異常表現(xiàn)。盡管試驗意外中斷，但從藥物組合物組與對照組小鼠死亡的比率可以看出，本藥物組合物的中、高劑量組均有明顯的延長小鼠壽命的趨勢。
本發(fā)明藥物組合物抗衰老試驗本實驗通過對用藥后的自然衰老模型鼠血中丙二醛(MDA)含量以及SOD活力的影響，探討本發(fā)明藥物組合物的抗衰老作用。方法如下昆明種雌性14月齡小鼠45只，隨機平分老齡對照組(NS 0.2ml/只)，本發(fā)明藥物組合物#7中劑量組和高劑量組；灌胃給藥100天殺鼠取血，分離血清，對血中SOD和MDA進行測定。SOD采用黃嘌呤氧化酶法，MDA采用熒光法。
試驗結(jié)果見表6
表6本發(fā)明藥物組合物抗衰老試驗(#7) 以上數(shù)據(jù)表明，藥物組隨劑量不同對兩個老化指標(biāo)都產(chǎn)生顯著和極顯著的影響，證實本發(fā)明藥物組合物具有抗衰老功能。
綜合以上試驗結(jié)果，可以得出以下結(jié)論本發(fā)明藥物組合物與組合前的單一組分相比較，抑瘤效果明顯提高，充分表現(xiàn)該兩組份組合確實具有較好協(xié)同作用；本發(fā)明藥物組合物具有抗衰老功能。
權(quán)利要求
1.一種抗腫瘤及抗衰老的藥物組合物，其特征在于它包含的有效組分為從大豆中提取的鮑曼-伯克蛋白酶抑制劑和葡萄皮籽提取物，鮑曼-伯克蛋白酶抑制劑與葡萄皮籽提取物的比例為1∶1～1∶9。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的藥物組合物，其特征在于葡萄皮籽提取物包含的主要有效成分為多元酚和黃酮類似物。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的藥物組合物，其特征在于鮑曼-伯克蛋白酶抑制劑與葡萄皮籽提取物的優(yōu)選比例為1∶3～1∶5。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種抗腫瘤及抗衰老的藥物組合物，它包含的有效組分為從大豆中提取出的鮑曼－伯克蛋白酶抑制劑和葡萄皮籽提取物，該組合物可根據(jù)不同的給藥途徑，配以藥學(xué)上可以接受的各種輔劑，制成不同劑型的藥物。
文檔編號A61P43/00GK1651078SQ20041003950
公開日2005年8月10日 申請日期2004年2月5日 優(yōu)先權(quán)日2004年2月5日
發(fā)明者李占兵, 江漫濤 申請人:李占兵, 江漫濤