專利名稱：制備轉(zhuǎn)移因子工藝方法－加熱法的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于醫(yī)藥新技術(shù)領(lǐng)域，涉及轉(zhuǎn)移因子的制備工藝的改進最新技術(shù)。
背景技術(shù)：
轉(zhuǎn)移因子發(fā)現(xiàn)于二十世紀(jì)四十年代并于二十世紀(jì)七十年代應(yīng)用于臨床，是一種能傳遞遲發(fā)性超敏反應(yīng)、分子量小于10000的具有生物活性的多肽及核苷酸的混合物，其具有活性不被胰蛋白酶、核糖核酸酶所破壞，耐熱、無種屬界限的特點。目前主要用于對病毒性感染及自身免疫性質(zhì)病的治療。能雙向調(diào)節(jié)機體的免疫功能，對于細胞免疫功能與體液免疫功能的增高和低下具有雙向免疫調(diào)節(jié)作用。同時促進T淋巴細胞的增殖，對骨髓造血免疫功能有調(diào)節(jié)作用。近年來，試驗證實轉(zhuǎn)移因子對乙肝病毒等病毒具有一定的抗病毒作用。
過去轉(zhuǎn)移因子的一般工藝流程如下(1)對新鮮組織進行預(yù)處理，用勻漿搗碎機進行勻漿后進行-20℃-37℃反復(fù)凍融三次，以破碎細胞。
(2)用高速冷凍離心機離心，取離心液。
(3)用透析技術(shù)在4℃條件下透析，取透析外液。
(4)將透析外液進行限分子量超濾，截留分子量6000-10000取超濾液。
(5)將所獲不同分子量的超濾液供制備不同劑型的轉(zhuǎn)移因子需要<包括凍干粉針、水針、口服液>。
(6)根據(jù)制備轉(zhuǎn)移因子劑型的濃度需要用凍融法適量濃縮。
上述制備轉(zhuǎn)移因子的工藝流程從原料處理到制備出半成品所需時間長約一星期，細胞破碎不完全及原材料浪費多，得率低，成本高而活性容易降低，產(chǎn)品濃縮費時費力，有一定難度。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明解決了以往轉(zhuǎn)移因子制備工藝中的凍融、透析等步驟而造成的制備工藝時間長，生物活性受影響，有效成分產(chǎn)出率低，生產(chǎn)成本高等諸多不足之處，具有制備時間短、生物活性得以保護，產(chǎn)出率高同時試驗證明轉(zhuǎn)移因子具有耐熱的特點，因此將加熱法、納濾濃縮技術(shù)應(yīng)用到轉(zhuǎn)移因子制備工藝中可以半獲取高濃度半成品、進一步降低成本等眾多優(yōu)點，適合于制備不同劑型需要的轉(zhuǎn)移因子原料液。
本發(fā)明提出的制備的轉(zhuǎn)移因子的主要工藝流程如下(1)在10-12℃以下在對轉(zhuǎn)移因子原材料進行初步處理的基礎(chǔ)上，用勻漿搗碎機高速勻漿搗碎處理原材料以最大限度的破碎細胞，控制溫度及勻漿速率是保證活性和保證高得率的重要步驟。
(2)將經(jīng)過組織細胞破碎處理的組織液用微波技術(shù)進行加熱處理，用強微波快速加熱至80度，10分鐘內(nèi)完成后迅速冷卻至10度以下。
(3)高速冷凍離心后取離心液經(jīng)壓濾器壓濾為第一步濾過，去除粗蛋白。
(4)用不同規(guī)格分子量的超濾膜進行分級超濾，獲取分子量為6000或10000的超濾液得到為一級原料液適應(yīng)制備單位含量較低的不同劑型轉(zhuǎn)移因子制劑的需要。
(5)根據(jù)轉(zhuǎn)移因子生產(chǎn)制劑單位含量濃度的需要，應(yīng)用納濾濃縮技術(shù)進行濃縮成二級原料液為高濃度原料液，以滿足制備高含量濃度制劑的需要。
本制備工藝發(fā)明要點如下(1)在10度溫度條件下，將轉(zhuǎn)移因子制備原材料經(jīng)過初步處理后應(yīng)用高速勻漿器搗碎脾臟組織保證了組織細胞高細胞破碎率。
(2)將轉(zhuǎn)移因子脾組織細胞提取液應(yīng)用微波加熱 技術(shù)將提取液迅速加熱至80度十分鐘內(nèi)完成后，既迅速冷卻至10度以下。試驗已證實轉(zhuǎn)移因子具有耐熱的特性，因此，增加此工藝加速了蛋白質(zhì)的變性，提高了轉(zhuǎn)移因子產(chǎn)品的產(chǎn)出率，保證了轉(zhuǎn)移因子的活性等優(yōu)點。
(3)高速冷凍離心后取離心液后經(jīng)壓濾器壓濾進一步除掉粗蛋白，此步驟縮短了生產(chǎn)時間，增加產(chǎn)出率，保證了制品的生物活性。
(4)用不同規(guī)格分子量超濾膜進行分級連續(xù)梯度超濾截流分子量為6000以下或10000以下的轉(zhuǎn)移因子供制備不同劑型轉(zhuǎn)移因子產(chǎn)品的需要。如注射用轉(zhuǎn)移因子(限分子量6000)口服用轉(zhuǎn)移因子(限分子量10000)，使產(chǎn)品質(zhì)量完全符合國家該產(chǎn)品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的要求，保證產(chǎn)品質(zhì)量。
(5)將納濾濃縮技術(shù)應(yīng)用到轉(zhuǎn)移因子超濾液的濃縮，可制備出高濃度的轉(zhuǎn)移因子原料液，以供制備不同規(guī)格的高含量轉(zhuǎn)移因子的產(chǎn)品需要或根據(jù)需要儲存-35℃以下備用。
(6)在上述轉(zhuǎn)移因子制備工藝的基礎(chǔ)上制備注射用轉(zhuǎn)移因子，特別是靜脈注射用轉(zhuǎn)移因子通過在一定時間內(nèi)及一定溫度下高壓加溫處理，對于保證產(chǎn)品的質(zhì)量起到了十分重要的作用。因為試驗證實在一定程度溫度下及時間內(nèi)轉(zhuǎn)移因子具有耐熱的特性。
權(quán)利要求
用加熱法制備的轉(zhuǎn)移因子工藝流程采用各種不同的濾過法—壓濾法、梯度超濾法、納濾法完成制備全過程中加入加熱法這一工藝技術(shù)是本發(fā)明工藝特征的核心內(nèi)容。1、將經(jīng)過初步處理的制備轉(zhuǎn)移因子的原材料在10℃以下用高速組織勻漿搗碎機、對新鮮脾臟組織進行處理以最大限度破碎細胞，保證了有效成分的高提取率。
2.將經(jīng)過組織細胞破碎處理的組織液用微波加熱技術(shù)進行加熱處理，用微波加熱技術(shù)快速加熱至80度，10分鐘內(nèi)完成后，迅速冷卻至10度以下。用微波技術(shù)加熱法作為制備轉(zhuǎn)移因子制劑原材料的工藝方法之一是本發(fā)明的權(quán)利要求核心內(nèi)容。
3.在轉(zhuǎn)移因子不同規(guī)格、不同濃度的原料或制劑制備的工藝進行過程中任何一個環(huán)節(jié)使用微波加熱技術(shù)或其它高溫高壓加熱技術(shù)作為制備轉(zhuǎn)移因子原料或制劑的方法均為本發(fā)明專利的要求范圍。
4.高速冷凍離心處理上述組織液后棄殘渣用壓濾機對冷凍離心所獲取的離心液進行壓濾去除粗蛋白。壓濾技術(shù)在轉(zhuǎn)移因子原料液制備過程中的應(yīng)用是本發(fā)明權(quán)利要求。
5.采用不同規(guī)格或不同型號的超濾設(shè)備進行的連續(xù)梯度超濾技術(shù)對壓濾液進行超濾截留分子量為6000或10000物質(zhì)。
6.應(yīng)用鈉濾濃縮技術(shù)對超濾液根據(jù)需要進行濃縮，獲取高濃度原料液。鈉濾濃縮技術(shù)在轉(zhuǎn)移因子制備工藝中的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明涉及醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，轉(zhuǎn)移因子制備工藝的新技術(shù)。轉(zhuǎn)移因子是一種能傳遞遲發(fā)性超敏反應(yīng)、具有生物活性的多肽及核苷酸的混合物，具有耐熱、無種屬界限等特點。主要用于對病毒性感染及自身免疫性疾病的治療。能雙向調(diào)節(jié)機體免疫功能，對于細胞免疫功能與體液免疫功能的增高和低下具有雙向免疫調(diào)節(jié)作用。試驗證明轉(zhuǎn)移因子具有耐熱的特點，本發(fā)明將目前常用的微波加熱技術(shù)法、納濾濃縮技術(shù)法應(yīng)用到轉(zhuǎn)移因子制備工藝中。本發(fā)明具有制備時間短、保證生物活性，產(chǎn)出率高的特點可以獲取高濃度半成晶、進一步降低成本等優(yōu)點，適合于制備不同劑型及規(guī)格、需要的轉(zhuǎn)移因子原料及制劑而且便于適應(yīng)生產(chǎn)上的需要儲存?zhèn)溆谩?br> 文檔編號A61P31/12GK1654477SQ20041003944
公開日2005年8月17日 申請日期2004年2月13日 優(yōu)先權(quán)日2004年2月13日
發(fā)明者霍保來 申請人:北京世紀(jì)昭寶轉(zhuǎn)移因子研究中心