專利名稱：一種蒲公英凍干粉針劑及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬中藥制藥技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種蒲公英凍干粉針劑及其制備方法。
背景技術(shù)：
蒲公英是菊科植物蒲公英Taraxacum mongolicum Hand.-Mazz.、堿地蒲公英Taraxacum sinicum Kitag.或同屬數(shù)種植物的干燥全草，別名蒲公草、黃花地丁等。古方記載蒲公英為“解熱涼血之要藥”、“至賤而有大功”，具有清熱解毒、消腫散結(jié)、利尿通淋之功。蒲公英同屬植物中含有多種成分，主要有胡蘿卜素類、三萜類、甾醇類、黃酮類、倍半萜內(nèi)酯類、咖啡酸、綠原酸、香豆素類、酚酸類等。
蒲公英已有蒲公英注射液[張旭東，等。蒲公英注射液的制備及臨床應(yīng)用。中國醫(yī)院藥學(xué)雜志，2003，23(12)761]和復(fù)方蒲公英注射液(WS3-B-3917-98)。兩者蒲公英提取物的制備均采用傳統(tǒng)的水提醇沉的方法得到。水提取時，對其中所含的水溶性好的有效成分提取比較完全，但對水溶性差的有效成分比如甾醇類、咖啡酸等提取很不完全。而且，水提溶出了不少淀粉、黏液質(zhì)、蛋白質(zhì)、樹脂、鞣質(zhì)等無效成分，這些成分的存在，給后續(xù)的除雜工藝帶來了很大的麻煩。蒲公英注射液的制備分別用75％和85％乙醇進行了兩次沉淀，而復(fù)方蒲公英注射液的制備用60％、80％、85％乙醇進行了三次沉淀。沉淀在形成和沉積的過程中，會吸附、包裹有效成分，從而使有效成分損失很大。申請?zhí)枮镃N02111738的專利申請文獻采用水提，過大孔樹脂的方法得到蒲公英提取物，用于制備口服制劑。其中水提的方法不科學(xué)、不合理，而且對成分的精制方法選擇不合理。
注射液對穩(wěn)定性要求高，在攜帶、儲藏、運輸時容易破碎，帶來許多麻煩。
在資料檢索中未發(fā)現(xiàn)有關(guān)蒲公英凍干粉針劑的任何報道。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是公開一種富含活性成分、療效好、使用方便的蒲公英凍干粉針制劑。
本發(fā)明的另一個目的是提供上述凍干粉針制劑的制備方法。
蒲公英中含有的有效成分水溶性較差，用乙醇提取比用水提取的效率更高。蒲公英中除含有有效成分外，還含有大量的大分子的樹脂、鞣質(zhì)、蛋白質(zhì)等無效成分。用普通水提醇沉的方法除去這些雜質(zhì)的同時，使有效成分損失很多。這些雜質(zhì)的分子量普遍較大，而有效成分的分子量較小，利用超濾法，選擇合適的分子篩可以除去大部分的雜質(zhì)而對有效成分幾乎沒有損失。蒲公英提取物經(jīng)聚酰胺柱吸附，用水和低濃度的乙醇溶液洗脫除雜后，然后再用堿液洗脫，最終得到富含活性成分的提取物。
本發(fā)明通過以下技術(shù)方案實現(xiàn)。
一、制備方法(1)原料藥的處方為蒲公英0.8-1.2重量份；(2)取蒲公英藥材，粉碎，用6-12倍量的50％-80％乙醇提取1-3次，每次1-2小時，合并提取液過濾，濾液濃縮至無醇味，加水稀釋至溶液∶藥材為1∶1，靜置，過濾，濾液以10000-20000轉(zhuǎn)/分的速度離心，離心液用截留分子量為5000的超濾膜超濾，濾液過已處理好的聚酰胺柱，先用4-6倍柱體積的水洗脫，棄去水液，再用2-4倍量稀乙醇溶液洗脫，棄去稀乙醇洗脫液，再換用堿性水溶液洗脫，收集堿洗脫液，用酸調(diào)pH值為中性，減壓濃縮，干燥，粉碎，得到蒲公英醇提物1.5-3.5重量份。
(3)取上述蒲公英醇提物加注射用水溶解，濾過，加入凍干賦型劑3.7-5.5重量份，加注射用水至規(guī)定量，調(diào)節(jié)pH值至7.0-7.5，灌裝，冷凍干燥，即得。
二、制劑中總黃酮含量測定測定方法按照復(fù)方蒲公英注射液(WS3-B-3917-98)[部頒標準20冊，223]含量測定項下的方法測定。編號1蒲公英注射液按照文獻[張旭東，等。蒲公英注射液的制備及臨床應(yīng)用。中國醫(yī)院藥學(xué)雜志，2003，23(12)761]中的方法制備；編號2復(fù)方蒲公英注射液(江西余江制藥廠)；編號3為本發(fā)明蒲公英凍干粉針劑(北京乾露春科技有限公司提供)。結(jié)果見表1。
表1 制劑中總黃酮含量測定編號樣品含量(mg/支)批次1 2 31 0.202 0.186 0.3352 0.196 0.227 0.3173 0.237 0.213 0.304二、提取物中總黃酮含量測定測定方法按照復(fù)方蒲公英注射液(WS3-B-3917-98)[部頒標準20冊，223]含量測定項下的方法測定。編號1蒲公英提取物按照文獻[張旭東，等。蒲公英注射液的制備及臨床應(yīng)用。中國醫(yī)院藥學(xué)雜志，2003，23(12)761]中的方法制備；編號2蒲公英提取物按照申請?zhí)枮镃N02111738中的方法制備；編號3蒲公英提取物按本發(fā)明制備方法得到；均由北京乾露春科技有限公司提供)。結(jié)果見表2。
表2 制劑中總黃酮含量測定編號樣品含量(％)批次1 231 17.726.4 43.72 19.428.2 43.23 18.227.8 42.5以上藥理說明，用本發(fā)明的制備方法得到的蒲公英提取物和蒲公英凍干粉針劑中主要有效成分總黃酮的含量明顯高于對比文獻中的含量。說明本發(fā)明的制備方法是科學(xué)的、合理的，更具有實用性。
五、藥理實施例1.蒲公英制劑抑菌作用的實驗研究實驗材料金黃色葡萄球菌、變形桿菌、甲型鏈球菌、乙型鏈球菌，均購于中國藥品生物制品檢定所；營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基，購于北京海淀區(qū)微生物培養(yǎng)基制品廠；游標卡尺，規(guī)格(0～150)mm×0.02mm，安徽桐城量具廠生產(chǎn)；復(fù)方蒲公英注射液(江西余江制藥廠)；蒲公英注射液按照文獻[張旭東，等。蒲公英注射液的制備及臨床應(yīng)用。中國醫(yī)院藥學(xué)雜志，2003，23(12)761]中的方法制備；本發(fā)明蒲公英凍干粉針劑，均由北京乾露春科技有限公司提供；實驗方法將金黃色葡萄球菌、變形桿菌分別用取菌環(huán)致密接種到普通營養(yǎng)培養(yǎng)基表面，以無菌操作將含蒲公英制劑浸出液的直徑0.4cm的濾紙片貼到培養(yǎng)基上，37℃培養(yǎng)24h觀察測量抑菌環(huán)直徑。在普通營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基基礎(chǔ)上高壓滅菌后，冷卻至56℃時加上5％～10％無菌脫纖維綿羊血混勻，倒入培養(yǎng)皿中備用。將甲型鏈球菌、乙型鏈球菌用取菌環(huán)分別致密接種到血平板培養(yǎng)基上后，以無菌操作將含蒲公英浸出液的直徑0.4cm的濾紙片貼到培養(yǎng)基上后，37℃培養(yǎng)24h觀察測量抑菌環(huán)直徑。結(jié)果見表3。
表3 蒲公英制劑的抑菌作用抑菌環(huán)直徑平均值d/cm菌種蒲公英注射液復(fù)方蒲公英注射液本發(fā)明蒲公英凍干粉針劑金黃色葡萄球菌1.153 1.278 1.583*變形桿菌 1.175 1.292 1.644*甲型鏈球菌0.599 0.723 1.072*乙型鏈球菌0.618 0.740 1.108*注和蒲公英注射液、復(fù)方蒲公英注射液相比*P＜0.05。
本發(fā)明蒲公英凍干粉針劑、蒲公英注射液和復(fù)方蒲公英注射液對金黃色葡萄球菌、變形桿菌、甲型鏈球菌、乙型鏈球菌均有明顯的抑菌作用，且本發(fā)明蒲公英凍干粉針劑的抑菌作用明顯強于蒲公英注射液和復(fù)方蒲公英注射液(P＜0.05)。
2.蒲公英制劑免疫活性的實驗研究實驗動物昆明種小鼠，體重20～25g。
實驗藥物復(fù)方蒲公英注射液(江西余江制藥廠)；蒲公英注射液按照文獻[張旭東，等。蒲公英注射液的制備及臨床應(yīng)用。中國醫(yī)院藥學(xué)雜志，2003，23(12)761]中的方法制備；本發(fā)明蒲公英凍干粉針劑，均由北京乾露春科技有限公司提供；培養(yǎng)液RPMA-1640完全培養(yǎng)液(Sigma美國)；ConA(Sigma美國)刀豆蛋白A；MTT(瑞士)四甲基戊唑藍；氫化可的松(北京化學(xué)試劑廠)。
實驗方法將小鼠隨機分為5組，正常對照組每日給予相應(yīng)體積的蒸餾水；模型對照組每日每只小鼠1mg氫化可的松，肌肉注射5天，同時等容積蒸餾水灌胃；給藥組每日每只小鼠1mg氫化可的松，肌肉注射5天，并同時每日給蒲公英制劑的藥物10天。用MTT比色分析法，觀察脾淋巴細胞增殖反應(yīng)。無菌制備脾細胞懸液，將調(diào)整好的細胞懸液加入多孔細胞培養(yǎng)板種，每孔100μl，細胞數(shù)為2.5×105個/孔。每孔加入ConA。ConA最終濃度為3μg/ml；置于5％CO2、37℃溫箱培養(yǎng)48h。于培養(yǎng)終止前4h加入MTT，使最終濃度為0.05mg/ml，離心，棄去上清液，加入100μl含0.04mol/lHCl的異丙醇溶液充分混合，用450型酶聯(lián)免疫檢測儀測定，波長570nm及630nm的OD值。期OD值能準確反應(yīng)淋巴細胞的增殖率。結(jié)果見表4。
表4 蒲公英制劑對小鼠淋巴細胞增殖的影響X±S組別 ConA刺激物對照組0.898±0.034模型組0.597±0.018蒲公英注射劑組0.736±0.037*復(fù)方蒲公英注射液組0.754±0.028*
本發(fā)明蒲公英凍干粉針劑組0.792±0.022*★和模型組相比*P＜0.01和蒲公英注射液、復(fù)方蒲公英注射液組相比★P＜0.05本發(fā)明蒲公英凍干粉針劑、蒲公英注射液和復(fù)方蒲公英注射液均可對抗氫化可的松抑制脾淋巴細胞的增殖作用(P＜0.01)；本發(fā)明蒲公英凍干粉針劑組與蒲公英注射劑、復(fù)方蒲公英注射劑組相比也有差異(P＜0.05)；說明本發(fā)明蒲公英凍干粉針劑在對抗氫化可的松抑制脾淋巴細胞的增殖作用效果更強。
以上藥理實驗證明，用新工藝制備的本發(fā)明蒲公英凍干粉針劑具有更好的治療效果。
六、制備實施例實施例1(1)原料藥的處方為蒲公英1200g；(2)取蒲公英藥材，粉碎，用12倍量的40％乙醇提取3次，每次2小時，合并提取液過濾，濾液濃縮至無醇味，加水稀釋至溶液∶藥材為1∶1，靜置，過濾，濾液以20000轉(zhuǎn)/分的速度離心，離心液用截留分子量為5000的超濾膜超濾，濾液過已處理好的聚酰胺柱，先用4倍柱體積的水洗脫，棄去水液，再用60％乙醇溶液洗脫至Molisch反應(yīng)為陰性，棄去乙醇洗脫液，再換用pH值為11.0的氫氧化鈉水溶液洗脫，收集堿洗脫液，用鹽酸調(diào)pH值為中性，減壓濃縮，干燥，粉碎，得到蒲公英醇提物330g。
(3)取上述蒲公英醇提物加注射用水溶解，濾過，加入聚乙烯吡咯烷酮和葡萄糖370g，加注射用水至規(guī)定量，用葡甲胺調(diào)節(jié)pH值至7.5，灌裝，冷凍干燥，即得蒲公英凍干粉針劑500支。
實施例2(1)原料藥的處方為蒲公英800g；
(2)取蒲公英藥材，粉碎，用6倍量的80％乙醇提取1次，每次1小時，合并提取液過濾，濾液濃縮至無醇味，加水稀釋至溶液∶藥材為1∶1，靜置，過濾，濾液以10000轉(zhuǎn)/分的速度離心，離心液用截留分子量為5000的超濾膜超濾，濾液過已處理好的聚酰胺柱，先用6倍柱體積的水洗脫，棄去水液，再用40％乙醇溶液洗脫至Molisch反應(yīng)為陰性，棄去乙醇洗脫液，再換用pH值為8.5的碳酸鈉水溶液洗脫，收集堿洗脫液，用硫酸調(diào)pH值為中性，減壓濃縮，干燥，粉碎，得到蒲公英醇提物150g。
(3)取上述蒲公英醇提物加注射用水溶解，濾過，加入甘露醇、果糖和乳糖550g，加注射用水至規(guī)定量，用葡甲胺調(diào)節(jié)pH值至7.0，灌裝，冷凍干燥，即得蒲公英凍干粉針劑500支。
實施例3(1)原料藥的處方為蒲公英1000g；(2)取蒲公英藥材，粉碎，用10倍量的50％乙醇提取2次，每次2小時，合并提取液過濾，濾液濃縮至無醇味，加水稀釋至溶液∶藥材為1∶1，靜置，過濾，濾液以15000轉(zhuǎn)/分的速度離心，離心液用截留分子量為5000的超濾膜超濾，濾液過已處理好的聚酰胺柱，先用5倍柱體積的水洗脫，棄去水液，再用50％乙醇溶液洗脫至Molisch反應(yīng)為陰性，棄去乙醇洗脫液，再換用pH值為9.0的氫氧化鉀水溶液洗脫，收集堿洗脫液，用醋酸調(diào)pH值為中性，減壓濃縮，干燥，粉碎得到蒲公英醇提物230g。
(3)取上述蒲公英醇提物加注射用水溶解，濾過，加入聚乙烯吡咯烷酮470g，加注射用水至規(guī)定量，用葡甲胺調(diào)節(jié)pH值至7.2，灌裝，冷凍干燥，即得蒲公英凍干粉針劑500支。
實施例4
(1)原料藥的處方為蒲公英1100g；(2)取蒲公英藥材，粉碎，用8倍量的60％乙醇提取3次，每次1小時，合并提取液過濾，濾液濃縮至無醇味，加水稀釋至溶液∶藥材為1∶1，靜置，過濾，濾液以12000轉(zhuǎn)/分的速度離心，離心液用截留分子量為5000的超濾膜超濾，濾液過已處理好的聚酰胺柱，先用4倍柱體積的水洗脫，棄去水液，再用45％乙醇溶液洗脫至Molisch反應(yīng)為陰性，棄去乙醇洗脫液，再換用pH值為9.5的碳酸氫鈉水溶液洗脫，收集堿洗脫液，用磷酸調(diào)pH值為中性，減壓濃縮，干燥，粉碎，得到蒲公英醇提物305g。
(3)取上述蒲公英醇提物加注射用水溶解，濾過，加入右旋果糖和乳糖395g，加注射用水至規(guī)定量，用葡甲胺調(diào)節(jié)pH值至7.1，灌裝，冷凍干燥，即得蒲公英凍干粉針劑500支。
實施例5(1)原料藥的處方為蒲公英900g；(2)取蒲公英藥材，粉碎，用9倍量的70％乙醇提取2次，每次2小時，合并提取液過濾，濾液濃縮至無醇味，加水稀釋至溶液∶藥材為1∶1，靜置，過濾，濾液以18000轉(zhuǎn)/分的速度離心，離心液用截留分子量為5000的超濾膜超濾，濾液過已處理好的聚酰胺柱，先用5倍柱體積的水洗脫，棄去水液，再用47％乙醇溶液洗脫至Molisch反應(yīng)為陰性，棄去乙醇洗脫液，再換用pH值為10.5的碳酸鉀水溶液洗脫，收集堿洗脫液，用冰醋酸調(diào)pH值為中性，減壓濃縮，干燥，粉碎，得到蒲公英醇提物185g。
(3)取上述蒲公英醇提物加注射用水溶解，濾過，加入甘露醇和葡聚糖515g，加注射用水至規(guī)定量，用葡甲胺調(diào)節(jié)pH值至7.4，灌裝，冷凍干燥，即得蒲公英凍干粉針劑500支。
實施例6(1)原料藥的處方為蒲公英1050g；(2)取蒲公英藥材，粉碎，用8倍量的55％乙醇提取3次，每次1小時，合并提取液過濾，濾液濃縮至無醇味，加水稀釋至溶液∶藥材為1∶1，靜置，過濾，濾液以16000轉(zhuǎn)/分的速度離心，離心液用截留分子量為5000的超濾膜超濾，濾液過已處理好的聚酰胺柱，先用6倍柱體積的水洗脫，棄去水液，再用55％乙醇溶液洗脫至Molisch反應(yīng)為陰性，棄去乙醇洗脫液，再換用pH值為10.0的氫氧化鉀和碳酸氫鈉水溶液洗脫，收集堿洗脫液，用鹽酸調(diào)pH值為中性，減壓濃縮，干燥，粉碎，得到蒲公英醇提物280g。
(3)取上述蒲公英醇提物加注射用水溶解，濾過，加入葡萄糖和果糖420g，加注射用水至規(guī)定量，用葡甲胺調(diào)節(jié)pH值至7.3，灌裝，冷凍干燥，即得蒲公英凍干粉針劑500支。
肌內(nèi)注射，一次1-2支，一日2次。
權(quán)利要求
1.一種蒲公英凍干粉針劑，其特征在于它是由蒲公英醇提物1.5-3.3重量份和藥用輔料3.7-5.5重量份組成的；其中蒲公英醇提物中有效部位總黃酮的重量百分含量大于或等于40％。
2.根據(jù)權(quán)利要求2所述的凍干粉針劑，其中藥用輔料為凍干賦型劑，它是甘露醇、葡聚糖、聚乙烯吡咯烷酮、葡萄糖、果糖、右旋果糖和乳糖中的一種、兩種或幾種的混合物。
3.一種蒲公英凍干粉針劑的制備方法，其特征包括以下步驟(1)原料藥的處方為蒲公英0.8-1.2重量份；(2)取蒲公英藥材，粉碎，用6-12倍量的50％-80％乙醇提取1-3次，每次1-2小時，合并提取液過濾，濾液濃縮至無醇味，加水稀釋至溶液∶藥材為1∶1，靜置，過濾，濾液以10000-20000轉(zhuǎn)/分的速度離心，離心液用截留分子量為5000的超濾膜超濾，濾液過已處理好的聚酰胺柱，先用4-6倍柱體積的水洗脫，棄去水液，再用2-4倍量稀乙醇溶液洗脫，棄去稀乙醇洗脫液，再換用堿性水溶液洗脫，收集堿洗脫液，用酸調(diào)pH值為中性，減壓濃縮，干燥，粉碎，得到蒲公英醇提物；(3)取上述蒲公英醇提物加注射用水溶解，濾過，加入凍干賦型劑，加注射用水至規(guī)定量，調(diào)節(jié)pH值至7.0-7.5，灌裝，冷凍干燥，即得。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的制備方法，其特征在于，其中洗脫聚酰胺柱的稀乙醇溶液的濃度為1％-30％。
5.根據(jù)權(quán)利要求3所述的制備方法，其特征在于，其中洗脫聚酰胺柱的稀乙醇溶液的濃度為10％-20％。
6.根據(jù)權(quán)利要求3所述的制備方法，其特征在于其中堿性水溶液為氫氧化鈉、氫氧化鉀、碳酸鈉、碳酸鉀、碳酸氫鈉中的一種或幾種的混合物的水溶液。
7.根據(jù)權(quán)利要求3所述的制備方法，其特征在于，其中堿性水溶液的pH值為8.5-11.0。
8.根據(jù)權(quán)利要求3所述的制備方法，其特征在于，其中堿性水溶液的pH值為9.0-10.0。
9.根據(jù)權(quán)利要求3所述的制備方法，其特征在于其中所述的酸是指鹽酸、硫酸、磷酸、醋酸、冰醋酸中的一種或幾種的混合物。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種蒲公英凍干粉針劑及其制備方法。它是由蒲公英醇提物以及藥用輔料組成的。蒲公英醇提物采用醇提、超濾、聚酰胺柱除雜的方法獲得，其中的蒲公英總黃酮占到了蒲公英醇提物中的40％以上。含量測定結(jié)果和藥理實驗結(jié)果說明，本發(fā)明有效成分含量更高，藥理作用更強，具有很好的清熱解毒、消腫散結(jié)、利尿通淋的作用。
文檔編號A61P13/00GK1628831SQ20041007408
公開日2005年6月22日 申請日期2004年9月3日 優(yōu)先權(quán)日2004年9月3日
發(fā)明者張平 申請人:張平