專利名稱：：一種銀杏內(nèi)酯凍干粉針劑的質(zhì)量控制方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及一種質(zhì)量控制方法，特別是涉及一種銀杏內(nèi)酯凍干粉針劑的質(zhì)量控制方法，包括鑒別方法、含量測(cè)定方法和/或指紋圖譜檢測(cè)。
背景技術(shù)：
：銀杏內(nèi)酯為銀杏科植物銀杏(GinkgobilobaL)葉經(jīng)提取分離精制得到的化學(xué)成分，含有銀杏內(nèi)酯A、B及少量C。銀杏萜類內(nèi)酯成分是銀杏葉制劑藥用的重要有效成分，該成分具有秸抗PAF(血小板活化因子)作用。文獻(xiàn)報(bào)道高效液相法、差示折光檢測(cè)器、蒸發(fā)光激光檢測(cè)器(ELSD)測(cè)定銀杏內(nèi)酯的含量。其中差示折光檢測(cè)器為通用型檢測(cè)器，對(duì)溫度等外界因素響應(yīng)過(guò)于靈敏，重現(xiàn)性和檢測(cè)靈敏度差，而蒸發(fā)光散射檢測(cè)器為通用質(zhì)量檢測(cè)器，對(duì)銀杏內(nèi)酯等無(wú)C＝C雙鍵和共軛結(jié)構(gòu)，紫外末端吸收的化合物檢測(cè)較為適宜。總的來(lái)說(shuō)，目前銀杏內(nèi)酯制劑的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)還很不完善，質(zhì)量分析和評(píng)價(jià)的手段還很落后，無(wú)法準(zhǔn)確地反映中藥產(chǎn)品的質(zhì)量狀況。本發(fā)明即是為了進(jìn)一步加強(qiáng)銀杏內(nèi)酯注射劑質(zhì)量管理，應(yīng)用液相指紋圖譜測(cè)定方法，通過(guò)對(duì)共有峰圖譜的分析來(lái)控制該注射劑的質(zhì)量，確保藥品的質(zhì)量穩(wěn)定可控。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明目的在于公開(kāi)一種銀杏內(nèi)酯凍干粉針劑的質(zhì)量控制方法，包括鑒別方法、含量測(cè)定方法和/或指紋圖譜檢測(cè)。本發(fā)明目的是通過(guò)如下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)的。銀杏內(nèi)酯凍干粉針劑的質(zhì)量控制方法包括鑒別、含量測(cè)定和/或指紋圖譜測(cè)定。鑒別方法為取銀杏內(nèi)酯凍干粉針劑1瓶，加水10ml至溶解，吸取1ml，以6mol/L鹽酸溶液0.2ml酸化，待結(jié)晶析出，放置30分鐘，3000rpm離心10分鐘，棄去上清液，沉淀以水洗至中性后加1ml丙酮溶解，作為供試品溶液；另取銀杏內(nèi)酯A、B、C對(duì)照品，分別加丙酮1ml溶解，制成每ml含銀杏內(nèi)酯A、B、C各1mg的對(duì)照品溶液；照薄層色譜法，分別吸取上述供試品和對(duì)照品溶液各10μL點(diǎn)樣于同一含4％醋酸鈉的0.5％羧甲基纖維素鈉溶液制成的硅膠GF254薄層板上，以比例為4∶8∶0.3或10∶2.5∶0.3的沸點(diǎn)為60℃-90℃石油醚-丙酮-甲醇為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，于160℃加熱30分鐘，置紫外燈365nm下檢視，供試品色譜圖中，在與對(duì)照品相應(yīng)位置上應(yīng)顯相同顏色的斑點(diǎn)。含量測(cè)定方法包括下列步驟照高效液相色譜法測(cè)定(中國(guó)藥典2000版一部附錄VID)；用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，以1∶25～35∶74～64的正丙醇-四氫呋喃-水為流動(dòng)相；用蒸發(fā)光散射檢測(cè)器檢測(cè)；理論塔板數(shù)按銀杏內(nèi)酯B計(jì)應(yīng)不低于7000；銀杏內(nèi)酯A、B與相鄰峰之間的分離度應(yīng)符合常規(guī)要求；取銀杏內(nèi)酯A、銀杏內(nèi)酯B對(duì)照品，稱定，置10ml量瓶中，加甲醇制成每1ml含銀杏內(nèi)酯A0.5mg、銀杏內(nèi)酯B1.0mg的混合溶液，搖勻，即得對(duì)照品溶液；取銀杏內(nèi)酯凍干粉針劑5瓶，加水至溶解，定量至50ml，轉(zhuǎn)移至50ml量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，吸取上述溶液10ml，置分液漏斗中，加2％鹽酸溶液2滴，搖勻，放置10min，用乙酸乙酯振搖提取4次，合并乙酸乙酯液，水浴揮干，殘?jiān)蛹状既芙獠⑥D(zhuǎn)移至25ml量瓶?jī)?nèi)，加甲醇致刻度，搖勻，即得供試品溶液；其中乙酸乙酯振搖提取時(shí)，乙酸乙酯每次的用量分別為15ml、10ml、10ml和10ml；分別量取對(duì)照溶液10μl、20μl及供試品溶液10μl，分別注入液相色譜儀，測(cè)定，計(jì)算，即得；銀杏內(nèi)酯凍干粉針注射劑每瓶含銀杏內(nèi)酯以銀杏內(nèi)酯A、銀杏內(nèi)酯B含量之和計(jì)，不得少于40mg。銀杏內(nèi)酯凍干粉針劑還可采用指紋圖譜檢測(cè)的方法，該方法為照高效液相色譜法(中國(guó)藥典2000版一部附錄VID)測(cè)定；取銀杏內(nèi)酯B對(duì)照品，稱定，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，即得參照物溶液；取銀杏內(nèi)酯凍干粉針劑5瓶，加水至溶解，定量至50ml，轉(zhuǎn)移至50ml量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，精密吸取上述溶液10ml，置分液漏斗中，加2％鹽酸溶液2滴，搖勻，放置10min，用乙酸乙酯振搖提取4次，合并乙酸乙酯液，水浴揮干，殘?jiān)蛹状既芙獠⑥D(zhuǎn)移至25ml量瓶?jī)?nèi)，加甲醇到刻度，搖勻，即得供試品溶液；吸取參照物溶液與供試品溶液各10μl，分別注入液相色譜儀，照高效液相色譜法測(cè)定；其中以十八烷基鍵合硅膠為填充劑；柱溫30℃；以體積比為85∶10∶5的水-甲醇-四氫呋喃為流動(dòng)相A和體積比為35∶60∶5水-甲醇-四氫呋喃為流動(dòng)相B按如下條件進(jìn)行梯度洗脫；用蒸發(fā)光散射檢測(cè)器檢測(cè)，理論板數(shù)按銀杏內(nèi)酯B計(jì)應(yīng)不低于4000；0到5分鐘時(shí)流動(dòng)相A體積比由100％線性下降到95％，流動(dòng)相B體積比由零線性上升到5％；5分鐘到55分鐘，流動(dòng)相A體積比由95％線性下降到35％，流動(dòng)相B體積比由5％線性上升到65％；55分鐘到60分鐘，流動(dòng)相A體積比由35％線性下降至零，流動(dòng)相B體積比由65％線性上升到100％；60分鐘到76分鐘以流動(dòng)相B進(jìn)行洗脫；總洗脫時(shí)間為76分鐘；流速為0.8ml/min；記錄1小時(shí)色譜圖，供試品指紋圖譜中與參照物峰相應(yīng)的峰為S峰，計(jì)算相對(duì)保留時(shí)間和峰面積比值，供試品指紋圖譜應(yīng)與標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜相似；指紋圖譜應(yīng)有3個(gè)共有峰，分別計(jì)算3個(gè)共有峰相對(duì)保留時(shí)間和計(jì)算2號(hào)峰相對(duì)峰面積比值，不計(jì)算1號(hào)峰相對(duì)峰面積比值；1號(hào)峰相對(duì)保留時(shí)間為0.448～0.832，2號(hào)峰相對(duì)保留時(shí)間為0.616～1.144，3號(hào)峰為S峰相對(duì)保留時(shí)間為1；2號(hào)峰相對(duì)峰面積比值為0.336～0.624；非共有峰面積不得超過(guò)總峰面積的5％。注射用銀杏內(nèi)酯標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜見(jiàn)圖1。本發(fā)明上述含量測(cè)定和指紋圖譜檢測(cè)中供試品溶液的制備也可以直接用銀杏內(nèi)酯凍干粉針劑加水或乙醇等極性、中等極性或非極性溶劑溶劑至溶解得供試品溶液，然后直接進(jìn)樣檢測(cè)。采用本發(fā)明鑒別方法，以石油醚(60℃-90℃)-丙酮-甲醇(4∶8∶0.3)為展開(kāi)劑展開(kāi)，160℃加熱30分鐘，斑點(diǎn)清晰，銀杏內(nèi)酯A、B、C能夠很好的分離；用醋酸鈉將薄層硅膠改性，能夠使斑點(diǎn)集中，提高薄層色譜分離效能；中試三批樣品(021109，021115，021119)按上述薄層色譜條件試驗(yàn)，供試品與對(duì)照品應(yīng)在對(duì)應(yīng)位置上顯示相同顏色的斑點(diǎn)，結(jié)果均符合規(guī)定。本發(fā)明建立了HPLC-ELSD法測(cè)定制劑中銀杏內(nèi)酯的含量，方法可靠、靈敏、快速。在HypersilODS柱上，流動(dòng)相為正丙醇-四氫呋喃-水(1∶30∶69)條件下的分離結(jié)果為銀杏內(nèi)酯A、銀杏內(nèi)酯B的理論塔板數(shù)分別大于8000，10000，銀杏內(nèi)酯A和銀杏內(nèi)酯B的分離度大于2，分離效果良好，拖尾因子分別為1.03、0.99，說(shuō)明峰形對(duì)稱，達(dá)到中國(guó)藥典定量要求；以注射用銀杏內(nèi)酯空白制劑進(jìn)行相同樣品前處理，進(jìn)樣測(cè)定，結(jié)果表明制劑輔料對(duì)檢測(cè)無(wú)干擾。本發(fā)明銀杏內(nèi)酯凍干粉針劑液相指紋圖譜檢測(cè)方法進(jìn)行了研究及優(yōu)選，建立了新的液相指紋圖譜測(cè)定條件并進(jìn)行了方法學(xué)考察，根據(jù)十批大生產(chǎn)樣品制訂了銀杏內(nèi)酯凍干粉針劑液相指紋圖譜標(biāo)準(zhǔn)，并進(jìn)行了方法學(xué)考察，從而能夠更全面、有效地控制制劑質(zhì)量。下述實(shí)驗(yàn)例用于進(jìn)一步說(shuō)明但不限于本發(fā)明。實(shí)驗(yàn)例1本發(fā)明含量測(cè)定方法學(xué)考察1.銀杏內(nèi)酯A、銀杏內(nèi)酯B標(biāo)準(zhǔn)曲線的測(cè)定取銀杏內(nèi)酯A、銀杏內(nèi)酯B對(duì)照品各適量，精密稱定，加甲醇制成每ml含銀杏內(nèi)酯A0.424mg、含銀杏內(nèi)酯B0.756mg的對(duì)照品溶液，分別精密吸取上述混合對(duì)照品溶液5μl、10μl、15μl、20μl、25μl，照技術(shù)方案所述含量測(cè)定法試驗(yàn)，分別以峰面積的對(duì)數(shù)為縱坐標(biāo)，濃度的對(duì)數(shù)為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算回歸方程和相關(guān)系數(shù)。結(jié)果見(jiàn)表1和表2，圖2和圖3。表1銀杏內(nèi)酯A標(biāo)準(zhǔn)曲線測(cè)定數(shù)據(jù)結(jié)果表明銀杏內(nèi)酯A在進(jìn)樣量2.12μg～10.60μg范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系表2銀杏內(nèi)酯B標(biāo)準(zhǔn)曲線測(cè)定數(shù)據(jù)結(jié)果表明銀杏內(nèi)酯B在進(jìn)樣量3.78μg～18.90μg范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系。2.精密度試驗(yàn)取上述混合對(duì)照品溶液，精密吸取10μl，連續(xù)重復(fù)進(jìn)樣6次，測(cè)定銀杏內(nèi)酯A、銀杏內(nèi)酯B峰面積積分值，考察進(jìn)樣精密度，結(jié)果見(jiàn)表3，結(jié)果表明本法精密度良好。表3精密度試驗(yàn)3.穩(wěn)定性試驗(yàn)取注射用銀杏內(nèi)酯樣品，按技術(shù)方案所述含量測(cè)定項(xiàng)下供試品溶液的制備方法制備供試品溶液，每隔一定時(shí)間依法測(cè)定銀杏內(nèi)酯A及銀杏內(nèi)酯B峰面積，考察其穩(wěn)定性，結(jié)果見(jiàn)表4。結(jié)果表明供試品在12小時(shí)內(nèi)基本穩(wěn)定。表4穩(wěn)定性試驗(yàn)4.重復(fù)性試驗(yàn)取同一批號(hào)(批號(hào)021109)銀杏內(nèi)酯粉針樣品，按技術(shù)方案所述含量測(cè)定項(xiàng)下方法制備供試品溶液，依法試驗(yàn)，測(cè)定銀杏內(nèi)酯A、銀杏內(nèi)酯B的含量，結(jié)果見(jiàn)表5。結(jié)果表明本法重復(fù)性良好。表5重復(fù)性試驗(yàn)5.回收率試驗(yàn)采用加樣回收法，取已知含量的注射用銀杏內(nèi)酯樣品(批號(hào)021109含量48.5mg/瓶，其中銀杏內(nèi)酯A15.02mg/瓶，銀杏內(nèi)酯B33.52mg/瓶)5瓶，加適量水溶解，定量轉(zhuǎn)移至50ml量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，精密吸取上述溶液1ml，置分液漏斗中，精密加入混合對(duì)照品溶液(銀杏內(nèi)酯A濃度為1.18mg/ml，銀杏內(nèi)酯B濃度為2.17mg/ml)1ml，再加入水8ml，加2％鹽酸溶液2滴，搖勻，放置10min，用乙酸乙酯振搖提取4次，(15ml、10ml、10ml、10ml)，合并乙酸乙酯液，水浴揮干，殘?jiān)蛹状既芙獠⑥D(zhuǎn)移至5ml量瓶?jī)?nèi)，加甲醇到刻度，搖勻，即得。依法測(cè)定，計(jì)算回收率，結(jié)果見(jiàn)表6。表6同收率測(cè)定結(jié)果6.樣品測(cè)定取注射用銀杏內(nèi)酯樣品，照技術(shù)方案所述含量測(cè)定項(xiàng)下試驗(yàn)，測(cè)定樣品中銀杏內(nèi)酯A、銀杏內(nèi)酯B的含量，結(jié)果見(jiàn)表7。表7銀杏內(nèi)酯A、銀杏內(nèi)酯B含量測(cè)定結(jié)果根據(jù)三批樣品測(cè)定結(jié)果，結(jié)合大生產(chǎn)實(shí)際情況，確定每瓶含銀杏內(nèi)酯A及銀杏內(nèi)酯B含量之總和不得低于40mg。實(shí)驗(yàn)例2本發(fā)明指紋圖譜的方法學(xué)考察1.穩(wěn)定性試驗(yàn)同一批樣品(批號(hào)021109)，制備供試品溶液，隔3小時(shí)測(cè)一次，共測(cè)6次，測(cè)定結(jié)果見(jiàn)表8、9。結(jié)果表明，供試品溶液中各共有峰的相對(duì)保留時(shí)間及主要峰(占總峰面積5％以上)的相對(duì)峰面積基本沒(méi)有明顯變化(RSD＜3％)，符合指紋圖譜的技術(shù)要求。故供試液在12小時(shí)內(nèi)穩(wěn)定。表8注射用銀杏內(nèi)酯供試品溶液的穩(wěn)定性考察結(jié)果(共有峰的相對(duì)保留時(shí)間)表9注射用銀杏內(nèi)酯供試品溶液的穩(wěn)定性考察結(jié)果(共有峰的相對(duì)峰面積)2.精密度試驗(yàn)同一樣品(批號(hào)021109)供試品溶液，連續(xù)進(jìn)樣6次進(jìn)行測(cè)定，測(cè)定結(jié)果見(jiàn)表10、11。結(jié)果表明，供試液中各共有峰的相對(duì)保留時(shí)間及主要峰(占總峰面積5％以上)的相對(duì)峰面積基本一致(RSD＜3％)，符合指紋圖譜的技術(shù)要求。表10注射用銀杏內(nèi)酯供試品溶液測(cè)定的精密度考察結(jié)果(共有峰的相對(duì)保留時(shí)間)表11注射用銀杏內(nèi)酯供試品溶液測(cè)定的精密度考察結(jié)果(主要峰的相對(duì)峰面積)3.重復(fù)性試驗(yàn)同一批號(hào)(批號(hào)021109)制劑，同法制備樣品液6份，依法測(cè)定，結(jié)果見(jiàn)表12、13。結(jié)果表明，供試液中各共有峰的相對(duì)保留時(shí)間及主要峰(占總峰面積5％以上)的相對(duì)峰面積基本一致(RSD＜3％)，符合指紋圖譜的技術(shù)要求。表12注射用銀杏內(nèi)酯指紋圖譜測(cè)定重復(fù)性考察結(jié)果(共有峰的相對(duì)保留時(shí)間)表13注射用銀杏內(nèi)酯指紋圖譜測(cè)定重復(fù)性考察結(jié)果(主要峰的相對(duì)峰面積)4.樣品測(cè)定分別精密吸取參照物溶液與供試品溶液各10μl，注入液相色譜儀，測(cè)定，參照物用外標(biāo)法，計(jì)算標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜。(1)小試制劑樣品測(cè)定樣品十批小試樣品及其中間體由南京中醫(yī)藥大學(xué)植物藥深加工中心研制而成，樣品見(jiàn)表14表14注射用銀杏內(nèi)酯十批小試樣品取10批小試制劑樣品，同法制備，依法測(cè)定。結(jié)果見(jiàn)表15、16、17。表15列出了10個(gè)批次樣品所有峰的示保留時(shí)間和相對(duì)保留時(shí)間，表16是根據(jù)表15而列出的10個(gè)批次樣品共有峰的相對(duì)保留時(shí)間和峰面積百分比，表17是根據(jù)表16而列出的10個(gè)批次樣品主要峰的峰面積百分比和相對(duì)峰面積以及其范圍。表15注射用銀杏內(nèi)酯十批樣品指紋圖譜測(cè)定結(jié)果(示所有峰相對(duì)保留時(shí)間)表16注射用銀杏內(nèi)酯共有峰的確定表17銀杏內(nèi)酯十批(小樣)中間體指紋圖譜測(cè)定結(jié)果(示主要峰相對(duì)峰面積)標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜由10批(小試)中間體檢測(cè)的數(shù)據(jù)計(jì)算，制定指紋圖譜應(yīng)有3個(gè)共有峰；相對(duì)保留時(shí)間(峰號(hào))0.448～0.832(1)、0.616～1.144(2)、1(3)(S)；峰面積比值(峰號(hào))0.336～0.624(2)；非共有峰面積不得過(guò)總峰面積的5％。(2)中試制劑樣品的測(cè)定三批中試樣品由江蘇康緣藥業(yè)股份有限公司研制而成，樣品見(jiàn)表18表18注射用銀杏內(nèi)酯三批中試樣品前1批中試(批號(hào)021109)樣品用于方法學(xué)研究，后2批中試制劑樣品依法測(cè)定，測(cè)定結(jié)果見(jiàn)表19。結(jié)果顯示，三批中試制劑圖譜符合制劑標(biāo)準(zhǔn)圖譜的要求。表19注射用銀杏內(nèi)酯中試制劑檢測(cè)結(jié)果5.原料、中間體指紋圖譜之間的相關(guān)性分別對(duì)銀杏內(nèi)酯原料、中間體和注射劑進(jìn)行HPLC分析，結(jié)果表明制劑中各共有峰在原料和中間體中都有相對(duì)應(yīng)的色譜峰，而且原料、中間體與制劑的指紋圖譜非常接近。6.中間體內(nèi)控標(biāo)準(zhǔn)的指紋圖譜測(cè)定(1)10批小試中間體樣品測(cè)定取10批小試中間體樣品，同法制備，依法測(cè)定。結(jié)果見(jiàn)表20、21、22。表20列出了10個(gè)批次樣品所有峰的示保留時(shí)間和相對(duì)保留時(shí)間，表21是根據(jù)表20而列出的10個(gè)批次樣品共有峰的相對(duì)保留時(shí)間和峰面積百分比，表22是根據(jù)表21而列出的10個(gè)批次樣品主要峰的峰面積百分比和相對(duì)峰面積以及其范圍。表20注射用銀杏內(nèi)酯中間體指紋圖譜測(cè)定結(jié)果(示所有峰相對(duì)保留時(shí)間)表21注射用銀杏內(nèi)酯中間體共有峰的確定表22銀杏內(nèi)酯十批(小樣)中間體指紋圖譜測(cè)定結(jié)果(示主要峰相對(duì)峰面積)<tablesid="table12"num="012"><tablewidth="476">樣品號(hào)參照物峰As主峰2A2/AsA2/A總185643320.468131.09284046140.464130.84384318830.479231.23474111910.567936.08584477800.048431.50676497680.490632.32777580420.508533.23880156210.511833.43983841070.417328.251084549340.415328.20平均值/0.479831.62峰面積限度Min0336Max0.624</table></tables>標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜由10批(小試)中間體檢測(cè)的數(shù)據(jù)計(jì)算，制定指紋圖譜應(yīng)有3個(gè)共有峰；相對(duì)保留時(shí)間(峰號(hào))0.448～0.832(1)、0.616～1.144(2)、1(3)(S)；峰面積比值(峰號(hào))0.336～0.624(2)；非共有峰面積不得過(guò)總峰面積的5％。(2)三批中試中間體的測(cè)定取三批中試中間體樣品，同法制備，依法測(cè)定。其測(cè)定結(jié)果見(jiàn)表23。結(jié)果顯示，三批中試中間體圖譜符合中間體標(biāo)準(zhǔn)圖譜的要求。表23注射用銀杏內(nèi)酯(凍干)三批中試中間體檢測(cè)結(jié)果7.制劑穩(wěn)定性試驗(yàn)三批中試制劑樣品，批號(hào)分別為030812、030820、030825，隔1、2、3、6個(gè)月分別同法制備三批中試制劑樣品供試液，依法測(cè)定，測(cè)定結(jié)果見(jiàn)表24～28。結(jié)果表明，供試液中各共有峰的相對(duì)保留時(shí)間及主要峰(占總峰面積5％以上)的相對(duì)峰面積基本沒(méi)有明顯變化(RSD＜3％)，符合指紋圖譜的技術(shù)要求。故制劑在6個(gè)月內(nèi)穩(wěn)定。表24注射用銀杏內(nèi)酯三批中試制劑穩(wěn)定性檢驗(yàn)結(jié)果表25注射用銀杏內(nèi)酯三批中試制劑穩(wěn)定性檢驗(yàn)結(jié)果表26注射用銀杏內(nèi)酯三批中試制劑穩(wěn)定性檢驗(yàn)結(jié)果表27注射用銀杏內(nèi)酯三批中試制劑穩(wěn)定性檢驗(yàn)結(jié)果表28注射用銀杏內(nèi)酯三批中試制劑穩(wěn)定性檢驗(yàn)結(jié)果圖1為注射用銀杏內(nèi)酯標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜圖2為銀杏內(nèi)酯A標(biāo)準(zhǔn)曲線圖3銀杏內(nèi)酯B標(biāo)準(zhǔn)曲線下述實(shí)施例均能達(dá)到上述實(shí)驗(yàn)例的效果。實(shí)施例1銀杏內(nèi)酯凍干粉針劑的質(zhì)量控制方法取銀杏內(nèi)酯注射劑(凍干粉針)1瓶，加水10ml使溶解，吸取1ml，以6mol/L鹽酸溶液0.2ml酸化，待結(jié)晶析出，放置30分鐘，3000rpm離心10分鐘，棄去上清液，沉淀以少量水洗至中性后加1ml丙酮溶解，作為供試品溶液；另取銀杏內(nèi)酯A、B、C對(duì)照品適量，分別加丙酮1ml溶解，制成每ml含銀杏內(nèi)酯A、B、C各1mg的對(duì)照品溶液；照薄層色譜法(中國(guó)藥典2000年版一部附錄VIB)，分別吸取上述供試品和對(duì)照品溶液各10μL點(diǎn)樣于同一含4％醋酸鈉的0.5％CMC-Na(羧甲基纖維素鈉)溶液制成的硅膠GF254薄層板上，以石油醚(60℃-90℃)-丙酮-甲醇(4∶8∶0.3)為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，于160℃加熱30分鐘，置紫外燈365nm下檢視，供試品色譜圖中，在與對(duì)照品相應(yīng)位置上應(yīng)顯相同顏色的斑點(diǎn)。實(shí)施例2銀杏內(nèi)酯凍干粉針劑的質(zhì)量控制方法取銀杏內(nèi)酯注射劑(凍干粉針)1瓶，加水10ml使溶解，吸取1ml，以6mol/L鹽酸溶液0.2ml酸化，待結(jié)晶析出，放置30分鐘，3000rpm離心10分鐘，棄去上清液，沉淀以少量水洗至中性后加1ml丙酮溶解，作為供試品溶液；另取銀杏內(nèi)酯A、B、C對(duì)照品適量，分別加丙酮1ml溶解，制成每ml含銀杏內(nèi)酯A、B、C各1mg的對(duì)照品溶液；照薄層色譜法(中國(guó)藥典2000年版一部附錄VIB)，分別吸取上述供試品和對(duì)照品溶液各10μL點(diǎn)樣于同一含4％醋酸鈉的0.5％CMC-Na(羧甲基纖維素鈉)溶液制成的硅膠GF254薄層板上，以石油醚(60℃-90℃)-丙酮-甲醇(10∶2.5∶0.3)為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，于160℃加熱30分鐘，置紫外燈365nm下檢視，供試品色譜圖中，在與對(duì)照品相應(yīng)位置上應(yīng)顯相同顏色的斑點(diǎn)。實(shí)施例3銀杏內(nèi)酯凍干粉針劑質(zhì)量控制方法色譜分離條件HPLC系統(tǒng)Agilent1100液相色譜儀，全自動(dòng)進(jìn)樣器，柱溫箱。Alltck500蒸發(fā)光檢測(cè)器，實(shí)驗(yàn)中所用溶劑為色譜純，水為純凈水。色譜柱ThermoHypersilODS，5μm，4.6mm×250mm；流動(dòng)相正丙醇-四氫呋喃-水(1∶30∶69)(V/V/V)；流速1ml/min；柱溫30℃；蒸發(fā)光檢測(cè)器條件漂移管溫度120℃；氮?dú)饬魉?.45ml/min。照高效液相色譜法(中國(guó)藥典2000版一部附錄VID)測(cè)定。色譜條件與系統(tǒng)適用性實(shí)驗(yàn)用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，建議使用HypersilODS，5μm，250×4.6mm；以正丙醇-四氫呋喃-水(1∶30∶69)為流動(dòng)相；用蒸發(fā)光散射檢測(cè)器檢測(cè)；理論塔板數(shù)按銀杏內(nèi)酯B計(jì)應(yīng)不低于7000，銀杏內(nèi)酯A、B與相鄰峰之間的分離度應(yīng)符合常規(guī)要求；對(duì)照品溶液的制備取銀杏內(nèi)酯A、銀杏內(nèi)酯B對(duì)照品各適量，精密稱定，置10ml量瓶中，加甲醇制成每1ml含銀杏內(nèi)酯A0.5mg、銀杏內(nèi)酯B1.0mg的混合溶液，搖勻，即得；供試品溶液的制備取本銀杏內(nèi)酯注射劑(凍干粉針)5瓶，加適量水溶解，定量至50ml，轉(zhuǎn)移至50ml量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，精密吸取上述溶液10ml，置分液漏斗中，加2％鹽酸溶液2滴，搖勻，放置10min，用乙酸乙酯振搖提取4次，(15ml、10ml、10ml、10ml)，合并乙酸乙酯液，水浴揮干，殘?jiān)蛹状既芙獠⑥D(zhuǎn)移至25ml量瓶?jī)?nèi)，加甲醇到刻度，搖勻，即得；測(cè)定法分別精密量取對(duì)照溶液10μl、20μl及供試品溶液10μl分別注入液相色譜儀，測(cè)定，計(jì)算，即得；銀杏內(nèi)酯凍干粉針劑每瓶含銀杏內(nèi)酯以銀杏內(nèi)酯A(C20H24O9)、銀杏內(nèi)酯B(C20H24O10)含量之和計(jì)，不得少于40mg。實(shí)施例4銀杏內(nèi)酯凍干粉針劑的質(zhì)量控制方法鑒別取銀杏內(nèi)酯注射劑(凍干粉針)1瓶，加水10ml使溶解，吸取1ml，以6mol/L鹽酸溶液0.2ml酸化，待結(jié)晶析出，放置30分鐘，3000rpm離心10分鐘，棄去上清液，沉淀以少量水洗至中性后加1ml丙酮溶解，作為供試品溶液；另取銀杏內(nèi)酯A、B、C對(duì)照品適量，分別加丙酮1ml溶解，制成每ml含銀杏內(nèi)酯A、B、C各1mg的對(duì)照品溶液；照薄層色譜法(中國(guó)藥典2000年版一部附錄VIB)，分別吸取上述供試品和對(duì)照品溶液各10μL點(diǎn)樣于同一含4％醋酸鈉的0.5％CMC-Na(羧甲基纖維素鈉)溶液制成的硅膠GF254薄層板上，以石油醚(60℃-90℃)-丙酮-甲醇(10∶2.5∶0.3)為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，于160℃加熱30分鐘，置紫外燈365nm下檢視，供試品色譜圖中，在與對(duì)照品相應(yīng)位置上應(yīng)顯相同顏色的斑點(diǎn)；含量測(cè)定色譜分離條件HPLC系統(tǒng)Agilent1100液相色譜儀，全自動(dòng)進(jìn)樣器，柱溫箱。Alltck500蒸發(fā)光檢測(cè)器，實(shí)驗(yàn)中所用溶劑為色譜純，水為純凈水。色譜柱ThermoHypersilODS，5μm，4.6mm×250mm；流動(dòng)相正丙醇-四氫呋喃-水(1∶30∶69)(V/V/V)；流速1ml/min；柱溫30℃；蒸發(fā)光檢測(cè)器條件漂移管溫度120℃；氮?dú)饬魉?.45ml/min；照高效液相色譜法(中國(guó)藥典2000版一部附錄VID)測(cè)定；色譜條件與系統(tǒng)適用性實(shí)驗(yàn)用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，建議使用HypersilODS，5μm，250×4.6mm；以正丙醇-四氫呋喃-水(1∶30∶69)為流動(dòng)相；用蒸發(fā)光散射檢測(cè)器檢測(cè)；理論塔板數(shù)按銀杏內(nèi)酯B計(jì)應(yīng)不低于7000，銀杏內(nèi)酯A、B與相鄰峰之間的分離度應(yīng)符合常規(guī)要求；對(duì)照品溶液的制備取銀杏內(nèi)酯A、銀杏內(nèi)酯B對(duì)照品各適量，精密稱定，置10ml量瓶中，加甲醇制成每1ml含銀杏內(nèi)酯A0.5mg、銀杏內(nèi)酯B1.0mg的混合溶液，搖勻，即得；供試品溶液的制備取本銀杏內(nèi)酯注射劑(凍干粉針)5瓶，加適量水溶解，定量至50ml，轉(zhuǎn)移至50ml量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，精密吸取上述溶液10ml，置分液漏斗中，加2％鹽酸溶液2滴，搖勻，放置10min，用乙酸乙酯振搖提取4次，(15ml、10ml、10ml、10ml)，合并乙酸乙酯液，水浴揮干，殘?jiān)蛹状既芙獠⑥D(zhuǎn)移至25ml量瓶?jī)?nèi)，加甲醇到刻度，搖勻，即得；測(cè)定法分別精密量取對(duì)照溶液10μl、20μl及供試品溶液10μl分別注入液相色譜儀，測(cè)定，計(jì)算，即得；銀杏內(nèi)酯凍干粉針劑每瓶含銀杏內(nèi)酯以銀杏內(nèi)酯A(C20H24O9)、銀杏內(nèi)酯B(C20H24O10)含量之和計(jì)，不得少于40mg。實(shí)施例5銀杏內(nèi)酯凍干粉針劑的質(zhì)量控制方法照高效液相色譜法(中國(guó)藥典2000版一部附錄VID)測(cè)定；取銀杏內(nèi)酯B對(duì)照品適量，稱定，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，即得參照物溶液；取銀杏內(nèi)酯凍干粉針劑5瓶，加水至溶解，定量至50ml，轉(zhuǎn)移至50ml量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，精密吸取上述溶液10ml，置分液漏斗中，加2％鹽酸溶液2滴，搖勻，放置10min，用乙酸乙酯振搖提取4次，合并乙酸乙酯液，水浴揮干，殘?jiān)蛹状既芙獠⑥D(zhuǎn)移至25ml量瓶?jī)?nèi)，加甲醇到刻度，搖勻，即得供試品溶液；吸取參照物溶液與供試品溶液各10μl，分別注入液相色譜儀，照高效液相色譜法測(cè)定；其中以十八烷基鍵合硅膠為填充劑；柱溫30℃；以體積比為85∶10∶5的水-甲醇-四氫呋喃為流動(dòng)相A和體積比為35∶60∶5水-甲醇-四氫呋喃為流動(dòng)相B按如下條件進(jìn)行梯度洗脫；用蒸發(fā)光散射檢測(cè)器檢測(cè)，理論板數(shù)按銀杏內(nèi)酯B計(jì)應(yīng)不低于4000；0到5分鐘時(shí)流動(dòng)相A體積比由100％線性下降到95％，流動(dòng)相B體積比由零線性上升到5％；5分鐘到55分鐘，流動(dòng)相A體積比由95％線性下降到35％，流動(dòng)相B體積比由5％線性上升到65％；55分鐘到60分鐘，流動(dòng)相A體積比由35％線性下降至零，流動(dòng)相B體積比由65％線性上升到100％；60分鐘到76分鐘以流動(dòng)相B進(jìn)行洗脫；總洗脫時(shí)間為76分鐘；流速為0.8ml/min；記錄1小時(shí)色譜圖，供試品指紋圖譜中與參照物峰相應(yīng)的峰為S峰，計(jì)算相對(duì)保留時(shí)間和峰面積比值，供試品指紋圖譜應(yīng)與標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜相似；指紋圖譜應(yīng)有3個(gè)共有峰；1號(hào)峰相對(duì)保留時(shí)間為0.448～0.832，2號(hào)峰相對(duì)保留時(shí)間為0.616～1.144，3號(hào)峰為S峰相對(duì)保留時(shí)間為1；2號(hào)峰相對(duì)峰面積比值為0.336～0.624；非共有峰面積不得超過(guò)總峰面積的5％；儀器Agilent1100液相色譜儀；色譜柱HypersilODSC18(4.6×250mm5μm)；Allteck500型蒸發(fā)光檢測(cè)器；積分方式谷谷積分。實(shí)施例6銀杏內(nèi)酯凍干粉針劑的質(zhì)量控制方法鑒別取銀杏內(nèi)酯凍干粉針劑1瓶，加水10ml使溶解，吸取1ml，以6mol/L鹽酸溶液0.2ml酸化，待結(jié)晶析出，放置30分鐘，3000rpm離心10分鐘，棄去上清液，沉淀以少量水洗至中性后加1ml丙酮溶解，作為供試品溶液；另取銀杏內(nèi)酯A、B、C對(duì)照品適量，分別加丙酮1ml溶解，制成每ml含銀杏內(nèi)酯A、B、C各1mg的對(duì)照品溶液；照薄層色譜法(中國(guó)藥典2000年版一部附錄VIB)，分別吸取上述供試品和對(duì)照品溶液各10μL點(diǎn)樣于同一含4％醋酸鈉的0.5％CMC-Na(羧甲基纖維素鈉)溶液制成的硅膠GF254薄層板上，以石油醚(60℃-90℃)-丙酮-甲醇(4∶8∶0.3)為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，于160℃加熱30分鐘，置紫外燈365nm下檢視，供試品色譜圖中，在與對(duì)照品相應(yīng)位置上應(yīng)顯相同顏色的斑點(diǎn)；含量測(cè)定照高效液相色譜法(中國(guó)藥典2000版一部附錄VID)測(cè)定；色譜條件與系統(tǒng)適用性實(shí)驗(yàn)用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，建議使用HypersilODS，5μm，250×4.6mm；以正丙醇-四氫呋喃-水(1∶30∶69)為流動(dòng)相；用蒸發(fā)光散射檢測(cè)器檢測(cè)；理論塔板數(shù)按銀杏內(nèi)酯B計(jì)應(yīng)不低于7000，銀杏內(nèi)酯A、B與相鄰峰之間的分離度應(yīng)符合常規(guī)要求；對(duì)照品溶液的制備取銀杏內(nèi)酯A、銀杏內(nèi)酯B對(duì)照品各適量，精密稱定，置10ml量瓶中，加甲醇制成每1ml含銀杏內(nèi)酯A0.5mg、銀杏內(nèi)酯B1.0mg的混合溶液，搖勻，即得；供試品溶液的制備取本銀杏內(nèi)酯凍干粉針劑5瓶，加適量水溶解，定量至50ml，轉(zhuǎn)移至50ml量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，精密吸取上述溶液10ml，置分液漏斗中，加2％鹽酸溶液2滴，搖勻，放置10min，用乙酸乙酯振搖提取4次，(15ml、10ml、10ml、10ml)，合并乙酸乙酯液，水浴揮干，殘?jiān)蛹状既芙獠⑥D(zhuǎn)移至25ml量瓶?jī)?nèi)，加甲醇到刻度，搖勻，即得；測(cè)定法分別精密量取對(duì)照溶液10μl、20μl及供試品溶液10μl分別注入液相色譜儀，測(cè)定，計(jì)算，即得；銀杏內(nèi)酯凍干粉針劑每瓶含銀杏內(nèi)酯以銀杏內(nèi)酯A(C20H24O9)、銀杏內(nèi)酯B(C20H24O10)含量之和計(jì)，不得少于40mg；指紋圖譜照高效液相色譜法(中國(guó)藥典2000版一部附錄VID)測(cè)定；取銀杏內(nèi)酯B對(duì)照品適量，稱定，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，即得參照物溶液；取銀杏內(nèi)酯凍干粉針劑5瓶，加水至溶解，定量至50ml，轉(zhuǎn)移至50ml量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，精密吸取上述溶液10ml，置分液漏斗中，加2％鹽酸溶液2滴，搖勻，放置10min，用乙酸乙酯振搖提取4次，合并乙酸乙酯液，水浴揮干，殘?jiān)蛹状既芙獠⑥D(zhuǎn)移至25ml量瓶?jī)?nèi)，加甲醇到刻度，搖勻，即得供試品溶液；吸取參照物溶液與供試品溶液各10μl，分別注入液相色譜儀，照高效液相色譜法測(cè)定；其中以十八烷基鍵合硅膠為填充劑；柱溫30℃；以體積比為85∶10∶5的水-甲醇-四氫呋喃為流動(dòng)相A和體積比為35∶60∶5水-甲醇-四氫呋喃為流動(dòng)相B按如下條件進(jìn)行梯度洗脫；用蒸發(fā)光散射檢測(cè)器檢測(cè)，理論板數(shù)按銀杏內(nèi)酯B計(jì)應(yīng)不低于4000；0到5分鐘時(shí)流動(dòng)相A體積比由100％線性下降到95％，流動(dòng)相B體積比由零線性上升到5％；5分鐘到55分鐘，流動(dòng)相A體積比由95％線性下降到35％，流動(dòng)相B體積比由5％線性上升到65％；55分鐘到60分鐘，流動(dòng)相A體積比由35％線性下降至零，流動(dòng)相B體積比由65％線性上升到100％；60分鐘到76分鐘以流動(dòng)相B進(jìn)行洗脫；總洗脫時(shí)間為76分鐘；流速為0.8ml/min；記錄1小時(shí)色譜圖，供試品指紋圖譜中與參照物峰相應(yīng)的峰為S峰，計(jì)算相對(duì)保留時(shí)間和峰面積比值，供試品指紋圖譜應(yīng)與標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜相似；指紋圖譜應(yīng)有3個(gè)共有峰；1號(hào)峰相對(duì)保留時(shí)間為0.448～0.832，2號(hào)峰相對(duì)保留時(shí)間為0.616～1.144，3號(hào)峰為S峰相對(duì)保留時(shí)間為1；2號(hào)峰相對(duì)峰面積比值為0.336～0.624；非共有峰面積不得超過(guò)總峰面積的5％；儀器Agilent1100液相色譜儀；色譜柱HypersilODSC18(4.6×250mm5μm)；Allteck500型蒸發(fā)光檢測(cè)器；積分方式谷谷積分。權(quán)利要求1.一種銀杏內(nèi)酯凍干粉針劑的質(zhì)量控制方法，其特征在于該方法包括如下鑒別方法取銀杏內(nèi)酯凍干粉針劑1瓶，加水10ml至溶解，吸取1ml，以6mol/L鹽酸溶液0.2ml酸化，待結(jié)晶析出，放置30分鐘，3000rpm離心10分鐘，棄去上清液，沉淀以水洗至中性后加1ml丙酮溶解，作為供試品溶液；另取銀杏內(nèi)酯A、B、C對(duì)照品，分別加丙酮1ml溶解，制成每ml含銀杏內(nèi)酯A、B、C各1mg的對(duì)照品溶液；照薄層色譜法，分別吸取上述供試品和對(duì)照品溶液各10μL點(diǎn)樣于同一含4％醋酸鈉的0.5％羧甲基纖維素鈉溶液制成的硅膠GF254薄層板上，以比例為4∶8∶0.3或10∶2.5∶0.3的沸點(diǎn)為60℃-90℃石油醚-丙酮-甲醇為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，于160℃加熱30分鐘，置紫外燈365nm下檢視，供試品色譜圖中，在與對(duì)照品相應(yīng)位置上應(yīng)顯相同顏色的斑點(diǎn)。2.一種銀杏內(nèi)酯凍干粉針劑的質(zhì)量控制方法，其特征在于該方法包括如下含量測(cè)定照高效液相色譜法測(cè)定；用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，以1∶25～35∶74～64的正丙醇-四氫呋喃-水為流動(dòng)相；用蒸發(fā)光散射檢測(cè)器檢測(cè)；理論塔板數(shù)按銀杏內(nèi)酯B計(jì)應(yīng)不低于7000；銀杏內(nèi)酯A、B與相鄰峰之間的分離度應(yīng)符合常規(guī)要求；取銀杏內(nèi)酯A、銀杏內(nèi)酯B對(duì)照品，稱定，置10ml量瓶中，加甲醇制成每1ml含銀杏內(nèi)酯A0.5mg、銀杏內(nèi)酯B1.0mg的混合溶液，搖勻，即得對(duì)照品溶液；取銀杏內(nèi)酯凍干粉針劑5瓶，加水至溶解，定量至50ml，轉(zhuǎn)移至50ml量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，吸取上述溶液10ml，置分液漏斗中，加2％鹽酸溶液2滴，搖勻，放置10min，用乙酸乙酯振搖提取4次，合并乙酸乙酯液，水浴揮干，殘?jiān)蛹状既芙獠⑥D(zhuǎn)移至25ml量瓶?jī)?nèi)，加甲醇致刻度，搖勻，即得供試品溶液；分別量取對(duì)照溶液10μl、20μl及供試品溶液10μl，分別注入液相色譜儀，測(cè)定，計(jì)算，即得；銀杏內(nèi)酯凍干粉針注射劑每瓶含銀杏內(nèi)酯以銀杏內(nèi)酯A、銀杏內(nèi)酯B含量之和計(jì)，不得少于40mg。3.如權(quán)利要求2所述的銀杏內(nèi)酯凍干粉針劑的質(zhì)量控制方法，其特征在于該方法包括如下含量測(cè)定照高效液相色譜法測(cè)定；用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，以1∶30∶69的正丙醇-四氫呋喃-水為流動(dòng)相；用蒸發(fā)光散射檢測(cè)器檢測(cè)；理論塔板數(shù)按銀杏內(nèi)酯B計(jì)應(yīng)不低于7000；銀杏內(nèi)酯A、B與相鄰峰之間的分離度應(yīng)符合常規(guī)要求；取銀杏內(nèi)酯A、銀杏內(nèi)酯B對(duì)照品，稱定，置10ml量瓶中，加甲醇制成每1ml含銀杏內(nèi)酯A0.5mg、銀杏內(nèi)酯B1.0mg的混合溶液，搖勻，即得對(duì)照品溶液；取銀杏內(nèi)酯凍干粉針劑5瓶，加水至溶解，定量至50ml，轉(zhuǎn)移至50ml量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，吸取上述溶液10ml，置分液漏斗中，加2％鹽酸溶液2滴，搖勻，放置10min，用乙酸乙酯振搖提取4次，合并乙酸乙酯液，水浴揮干，殘?jiān)蛹状既芙獠⑥D(zhuǎn)移至25ml量瓶?jī)?nèi)，加甲醇致刻度，搖勻，即得供試品溶液；分別量取對(duì)照溶液10μl、20μl及供試品溶液10μl，分別注入液相色譜儀，測(cè)定，計(jì)算，即得；銀杏內(nèi)酯凍干粉針注射劑每瓶含銀杏內(nèi)酯以銀杏內(nèi)酯A、銀杏內(nèi)酯B含量之和計(jì)，不得少于40mg。4.一種銀杏內(nèi)酯凍干粉針劑的質(zhì)量控制方法，其特征在于該方法中包括如下步驟的指紋圖譜檢測(cè)方法取銀杏內(nèi)酯B對(duì)照品，稱定，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，即得參照物溶液；取銀杏內(nèi)酯凍干粉針劑5瓶，加水至溶解，定量至50ml，轉(zhuǎn)移至50ml量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，精密吸取上述溶液10ml，置分液漏斗中，加2％鹽酸溶液2滴，搖勻，放置10min，用乙酸乙酯振搖提取4次，合并乙酸乙酯液，水浴揮干，殘?jiān)蛹状既芙獠⑥D(zhuǎn)移至25ml量瓶?jī)?nèi)，加甲醇到刻度，搖勻，即得供試品溶液；吸取參照物溶液與供試品溶液各10μl，分別注入液相色譜儀，照高效液相色譜法測(cè)定；其中以十八烷基鍵合硅膠為填充劑；柱溫30℃；以體積比為85∶10∶5的水-甲醇-四氫呋喃為流動(dòng)相A和體積比為35∶60∶5水-甲醇-四氫呋喃為流動(dòng)相B進(jìn)行梯度洗脫；用蒸發(fā)光散射檢測(cè)器檢測(cè)，理論板數(shù)按銀杏內(nèi)酯B計(jì)應(yīng)不低于4000；記錄1小時(shí)色譜圖，供試品指紋圖譜中與參照物峰相應(yīng)的峰為S峰，計(jì)算相對(duì)保留時(shí)間和峰面積比值；指紋圖譜應(yīng)有3個(gè)共有峰；1號(hào)峰相對(duì)保留時(shí)間為0.448～0.832，2號(hào)峰相對(duì)保留時(shí)間為0.616～1.144，3號(hào)峰為S峰相對(duì)保留時(shí)間為1；2號(hào)峰相對(duì)峰面積比值為0.336～0.624；非共有峰面積不得超過(guò)總峰面積的5％；5.如權(quán)利要求4所述的銀杏內(nèi)酯凍干粉針劑的質(zhì)量控制方法，其特征在于該方法中指紋圖譜檢測(cè)方法的洗脫條件為0到5分鐘時(shí)流動(dòng)相A體積比由100％線性下降到95％，流動(dòng)相B體積比由零線性上升到5％；5分鐘到55分鐘，流動(dòng)相A體積比由95％線性下降到35％，流動(dòng)相B體積比由5％線性上升到65％；55分鐘到60分鐘，流動(dòng)相A體積比由35％線性下降至零，流動(dòng)相B體積比由65％線性上升到100％；60分鐘到76分鐘以流動(dòng)相B進(jìn)行洗脫；總洗脫時(shí)間為76分鐘；流速為0.8ml/min；6.如權(quán)利要求4或5所述的銀杏內(nèi)酯凍干粉針劑的質(zhì)量控制方法，其特征在于該指紋圖譜檢測(cè)方法包括如下步驟取銀杏內(nèi)酯B對(duì)照品，稱定，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，即得參照物溶液；取銀杏內(nèi)酯凍干粉針劑5瓶，加水至溶解，定量至50ml，轉(zhuǎn)移至50ml量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，精密吸取上述溶液10ml，置分液漏斗中，加2％鹽酸溶液2滴，搖勻，放置10min，用乙酸乙酯振搖提取4次，合并乙酸乙酯液，水浴揮干，殘?jiān)蛹状既芙獠⑥D(zhuǎn)移至25ml量瓶?jī)?nèi)，加甲醇到刻度，搖勻，即得供試品溶液；吸取參照物溶液與供試品溶液各10μl，分別注入液相色譜儀，照高效液相色譜法測(cè)定；其中以十八烷基鍵合硅膠為填充劑；柱溫30℃；以體積比為85∶10∶5的水-甲醇-四氫呋喃為流動(dòng)相A和體積比為35∶60∶5水-甲醇-四氫呋喃為流動(dòng)相B按如下條件進(jìn)行梯度洗脫；用蒸發(fā)光散射檢測(cè)器檢測(cè)，理論板數(shù)按銀杏內(nèi)酯B計(jì)應(yīng)不低于4000；0到5分鐘時(shí)流動(dòng)相A體積比由100％線性下降到95％，流動(dòng)相B體積比由零線性上升到5％；5分鐘到55分鐘，流動(dòng)相A體積比由95％線性下降到35％，流動(dòng)相B體積比由5％線性上升到65％；55分鐘到60分鐘，流動(dòng)相A體積比由35％線性下降至零，流動(dòng)相B體積比由65％線性上升到100％；60分鐘到76分鐘以流動(dòng)相B進(jìn)行洗脫；總洗脫時(shí)間為76分鐘；流速為0.8ml/min；記錄1小時(shí)色譜圖，供試品指紋圖譜中與參照物峰相應(yīng)的峰為S峰，計(jì)算相對(duì)保留時(shí)間和峰面積比值；指紋圖譜應(yīng)有3個(gè)共有峰；1號(hào)峰相對(duì)保留時(shí)間為0.448～0.832，2號(hào)峰相對(duì)保留時(shí)間為0.616～1.144，3號(hào)峰為S峰相對(duì)保留時(shí)間為1；2號(hào)峰相對(duì)峰面積比值為0.336～0.624；非共有峰面積不得超過(guò)總峰面積的5％。7.一種銀杏內(nèi)酯凍干粉針劑的質(zhì)量控制方法，其特征在于該方法為鑒別取銀杏內(nèi)酯凍干粉針劑1瓶，加水10ml至溶解，吸取1ml，以6mol/L鹽酸溶液0.2ml酸化，待結(jié)晶析出，放置30分鐘，3000rpm離心10分鐘，棄去上清液，沉淀以水洗至中性后加1ml丙酮溶解，作為供試品溶液；另取銀杏內(nèi)酯A、B、C對(duì)照品，分別加丙酮1ml溶解，制成每ml含銀杏內(nèi)酯A、B、C各1mg的對(duì)照品溶液；照薄層色譜法，分別吸取上述供試品和對(duì)照品溶液各10μL點(diǎn)樣于同一含4％醋酸鈉的0.5％羧甲基纖維素鈉溶液制成的硅膠GF254薄層板上，以比例為4∶8∶0.3或10∶2.5∶0.3的沸點(diǎn)為60℃-90℃石油醚-丙酮-甲醇為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，于160℃加熱30分鐘，置紫外燈365nm下檢視，供試品色譜圖中，在與對(duì)照品相應(yīng)位置上應(yīng)顯相同顏色的斑點(diǎn)；含量測(cè)定照高效液相色譜法測(cè)定；用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，以1∶30∶69的正丙醇-四氫呋喃-水為流動(dòng)相；用蒸發(fā)光散射檢測(cè)器檢測(cè)；理論塔板數(shù)按銀杏內(nèi)酯B計(jì)應(yīng)不低于7000；銀杏內(nèi)酯A、B與相鄰峰之間的分離度應(yīng)符合常規(guī)要求；取銀杏內(nèi)酯A、銀杏內(nèi)酯B對(duì)照品，稱定，置10ml量瓶中，加甲醇制成每1ml含銀杏內(nèi)酯A0.5mg、銀杏內(nèi)酯B1.0mg的混合溶液，搖勻，即得對(duì)照品溶液；取銀杏內(nèi)酯凍干粉針劑5瓶，加水至溶解，定量至50ml，轉(zhuǎn)移至50ml量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，吸取上述溶液10ml，置分液漏斗中，加2％鹽酸溶液2滴，搖勻，放置10min，用乙酸乙酯振搖提取4次，合并乙酸乙酯液，水浴揮干，殘?jiān)蛹状既芙獠⑥D(zhuǎn)移至25ml量瓶?jī)?nèi)，加甲醇致刻度，搖勻，即得供試品溶液；分別量取對(duì)照溶液10μl、20μl及供試品溶液10μl，分別注入液相色譜儀，測(cè)定，計(jì)算，即得；銀杏內(nèi)酯凍干粉針注射劑每瓶含銀杏內(nèi)酯以銀杏內(nèi)酯A、銀杏內(nèi)酯B含量之和計(jì)，不得少于40mg；指紋圖譜檢測(cè)取銀杏內(nèi)酯B對(duì)照品，稱定，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，即得參照物溶液；取銀杏內(nèi)酯凍干粉針劑5瓶，加水至溶解，定量至50ml，轉(zhuǎn)移至50ml量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，精密吸取上述溶液10ml，置分液漏斗中，加2％鹽酸溶液2滴，搖勻，放置10min，用乙酸乙酯振搖提取4次，合并乙酸乙酯液，水浴揮干，殘?jiān)蛹状既芙獠⑥D(zhuǎn)移至25ml量瓶?jī)?nèi)，加甲醇到刻度，搖勻，即得供試品溶液；吸取參照物溶液與供試品溶液各10μl，分別注入液相色譜儀，照高效液相色譜法測(cè)定；其中以十八烷基鍵合硅膠為填充劑；柱溫30℃；以體積比為85∶10∶5的水-甲醇-四氫呋喃為流動(dòng)相A和體積比為35∶60∶5水-甲醇-四氫呋喃為流動(dòng)相B按如下條件進(jìn)行梯度洗脫；用蒸發(fā)光散射檢測(cè)器檢測(cè)，理論板數(shù)按銀杏內(nèi)酯B計(jì)應(yīng)不低于4000；0到5分鐘時(shí)流動(dòng)相A體積比由100％線性下降到95％，流動(dòng)相B體積比由零線性上升到5％；5分鐘到55分鐘，流動(dòng)相A體積比由95％線性下降到35％，流動(dòng)相B體積比由5％線性上升到65％；55分鐘到60分鐘，流動(dòng)相A體積比由35％線性下降至零，流動(dòng)相B體積比由65％線性上升到100％；60分鐘到76分鐘以流動(dòng)相B進(jìn)行洗脫；總洗脫時(shí)間為76分鐘；流速為0.8ml/min；記錄1小時(shí)色譜圖，供試品指紋圖譜中與參照物峰相應(yīng)的峰為S峰，計(jì)算相對(duì)保留時(shí)間和峰面積比值；指紋圖譜應(yīng)有3個(gè)共有峰，1號(hào)峰相對(duì)保留時(shí)間為0.448～0.832，2號(hào)峰相對(duì)保留時(shí)間為0.616～1.144，3號(hào)峰為S峰相對(duì)保留時(shí)間為1；2號(hào)峰相對(duì)峰面積比值為0.336～0.624；非共有峰面積不得超過(guò)總峰面積的5％。8.如權(quán)利要求2、3、4、5或7所述的質(zhì)量控制方法，其特征在于所述含量測(cè)定和/或指紋圖譜檢測(cè)方法中供試品溶液的制備還可以直接用銀杏內(nèi)酯凍干粉針劑加水或乙醇至溶解，得供試品溶液，然后直接進(jìn)樣檢測(cè)。全文摘要本發(fā)明公開(kāi)了一種銀杏內(nèi)酯凍干粉針劑的質(zhì)量控制方法，包括鑒別、含量測(cè)定和/或指紋圖譜檢測(cè)。本發(fā)明鑒別方法以石油醚(60℃－90℃)－丙酮－甲醇為展開(kāi)劑；含量測(cè)定方法以正丙醇－四氫呋喃－水為流動(dòng)相，方法可靠、靈敏、快速；指紋圖譜采用照高效液相色譜法測(cè)定，制訂了銀杏內(nèi)酯凍干粉針劑的液相指紋圖譜標(biāo)準(zhǔn)，從而能夠更全面、有效地控制制劑質(zhì)量。文檔編號(hào)G01N1/28GK1800845SQ20041010298公開(kāi)日2006年7月12日申請(qǐng)日期2004年12月31日優(yōu)先權(quán)日2004年12月31日發(fā)明者肖偉,戴翔翎,凌婭,王振中,尚強(qiáng),畢宇安申請(qǐng)人:江蘇康緣藥業(yè)股份有限公司