專利名稱：一種治療心腦血管疾病的藥物組合物及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬中藥制藥技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種治療心腦血管疾病的藥物組合物及其制備方法，這種藥物組合物又稱之為復(fù)方銀杏葉注射制劑。
背景技術(shù)：
心腦血管疾病在臨床上是常見病、多發(fā)病，已經(jīng)成為危害人類生命的第一大殺手，因此開發(fā)治療心腦血管疾病的藥物成為人們研究的熱點。在人類“回歸自然”的熱潮中，中藥以其療效好、副作用小、資源豐富而倍受人們的青睞；而且越來越多的臨床報道顯示，中藥在治療心腦血管疾病方面具有良好的應(yīng)用前景，并日益得到患者的認可。
銀杏葉、刺五加、人參組成的制劑有力可生顆粒[楊義芳，等。力可生顆粒劑中蘆丁及總甙含量測定。江西中醫(yī)學(xué)院學(xué)報，1997，9(3)35]，具有活血通絡(luò)、益氣固本之功效；方中銀杏葉的主要有效成分為銀杏總黃酮和銀杏內(nèi)酯，具有擴張動脈血管，對抗腎上腺所致的血管收縮，擴張冠狀動脈，降低血液粘度，疏通血管，增加冠脈流量，改善循環(huán)代謝等作用[徐巧玲，等。銀杏葉提取物藥理研究進展。人民軍醫(yī)，2004，47(10)609]；人參補心氣、養(yǎng)心陰，可調(diào)節(jié)中樞神經(jīng)功能，提高機體適應(yīng)能力，增強心肌收縮力，增強機體免疫功能等作用，其中所含的總皂苷是其主要有效成分；刺五加具有活血化瘀之功效，其中所含的黃酮類化合物是其主要有效成分，還能調(diào)節(jié)機體新陳代謝及調(diào)節(jié)免疫功能。
力可生顆粒為口服制劑，患者用藥后吸收差，生物利用度低，體內(nèi)的血藥濃度低，在臨床應(yīng)用中治療效果非常的不理想。因此，對于力可生顆粒進一步的開發(fā)，使其發(fā)揮更好的療效，是很有必要的。
在資料檢索中未發(fā)現(xiàn)有關(guān)于銀杏葉、刺五加、人參為原料的注射制劑的任何報道。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是公開一種以銀杏葉、刺五加、人參為原料的藥物組合物。
本發(fā)明的另一個目的是公開了上述藥物組合物的制備方法。
本發(fā)明通過以下技術(shù)方案實現(xiàn)一、制備方法本發(fā)明治療心腦血管疾病的藥物組合物的原料藥材為銀杏葉、刺五加和人參，其各重量份組成為銀杏葉30-50份，刺五加40-60份，人參20-40份。
本發(fā)明通過以下方法制備(1)提取物制備將銀杏葉、刺五加和人參藥材粉碎，加入6-12倍量0％-80％的乙醇水溶液回流提取三次，每次0.5-2小時；合并提取液，靜置，過濾，濾液減壓濃縮至相對密度為1.20，過濾，濾液過已處理好的非極性或弱極性大孔吸附樹脂柱，先用3-3倍柱體積的水洗脫，再用4-6倍柱體積的50％-80％乙醇溶液洗脫，收集乙醇洗脫液回收至無醇味，以12000-20000轉(zhuǎn)/分的速度離心，離心液用截流分子量為5000-10000的超濾膜超濾，濾液濃縮，干燥，粉碎，得到提取物1.0-3.5重量份。
(2)注射制劑的制備水針制劑的制備將上述提取物用注射用水溶解，用葡甲胺調(diào)pH值為7.5-8.0用0.22μm微孔濾膜過濾，滅菌，制備成本發(fā)明復(fù)方銀杏葉水針制劑。
輸液制劑的制備將上述提取物用注射用水溶解，加入氯化鈉或葡萄糖調(diào)等滲，用葡甲胺調(diào)pH值為7.5-8.0，用0.22μm微孔濾膜過濾，滅菌，制備成本發(fā)明復(fù)方銀杏葉輸液制劑。
粉針制劑的制備將上述提取物用注射用水溶解，加入水溶性凍干賦形劑，用葡甲胺調(diào)pH值為7.5-8.0，用0.22μm微孔濾膜過濾，噴霧干燥，包裝得到本發(fā)明復(fù)方銀杏葉粉針制劑。
凍干粉針制劑的制備將上述提取物用注射用水溶解，加入水溶性凍干賦形劑，用葡甲胺調(diào)pH值為7.5-8.0，用0.22μm微孔濾膜過濾，冷凍干燥，包裝得到本發(fā)明復(fù)方銀杏葉凍干粉針制劑。
上述刺五加藥材包括刺五加的根、根莖、莖、葉；上述人參藥材包括園參、山參、紅參、人參葉。
大孔吸附樹脂對銀杏葉、刺五加中的黃酮類有效成分，銀杏葉中的銀杏內(nèi)酯有效成分，人參中的總皂苷有效成分均有很好的吸附作用。利用這一性質(zhì)可以對提取液中含有的有效成分進行富集和純化。
利用截留分子量合適的超濾膜，可以除去提取液中少量的、但容易使注射制劑變質(zhì)的鞣質(zhì)、蛋白質(zhì)、淀粉等大分子物質(zhì)，使得制成的注射制劑雜質(zhì)含量少、穩(wěn)定性好、有效期更長。
二、含量分析儀器與試藥752型紫外可見分光光度計(上海第三分析儀器廠)。高效液相色譜儀包括LC-10ATvp型溶劑輸送泵，SPD-10ATvp型紫外可見檢測器(日本島津公司)；N2000色譜工作站(浙江大學(xué)智能信息工程研究所)；KQ3200型超聲波清洗儀(昆山市超聲儀器有限公司)，TGL-16G高速臺式離心機(上海安亭科學(xué)儀器廠)。對照品均購自中國藥品生物制品檢定所；其它試劑均為分析醇。本發(fā)明的6批提取物均由廣東天之驕藥物開發(fā)有限公司提供。
1、總黃酮類有效成分含量測定含量測定方法按照參考文獻[李梅，等。紫外分光光度法測定復(fù)方銀杏膠囊中銀杏葉總黃酮含量。中國醫(yī)院藥學(xué)雜志，1998，18(2)85]中的紫外分光光度法進行測定。含量測定結(jié)果見表1。
表1 總黃酮類有效成分含量測定結(jié)果批號 總黃酮含量(％)1 28.42 31.63 25.04 26.75 33.26 30.1由表1的含量測定結(jié)果可以看出，本發(fā)明的6批提取物中總黃酮類有效成分的重量百分含量大于或等于25％。
2、銀杏內(nèi)酯有效成分含量測定含量測定方法按照參考文獻[許海琴，等。常用天然提取物質(zhì)量標準參考手冊?；瘜W(xué)工業(yè)出版社，2003，271]中銀杏葉提取物中萜類內(nèi)酯的高效液相色譜法進行測定。含量測定結(jié)果見表2。
表2 銀杏內(nèi)酯有效成分含量測定結(jié)果批號 銀杏內(nèi)酯含量(％)1 7.462 6.253 9.834 7.17
5 5.006 8.54由表2的含量測定結(jié)果可以看出，本發(fā)明的6批提取物中銀杏內(nèi)酯有效成分的重量百分含量大于或等于5％。
3、人參總皂苷有效成分含量測定含量測定方法按照參考文獻[許海琴，等。常用天然提取物質(zhì)量標準參考手冊?；瘜W(xué)工業(yè)出版社，2003，109]中人參葉莖總皂苷中的分光光度法進行測定。含量測定結(jié)果見表3。
表3 人參總皂苷有效成分含量測定結(jié)果批號 銀杏內(nèi)酯含量(％)1 24.72 20.03 21.34 27.85 30.46 28.5由表3的含量測定結(jié)果可以看出，本發(fā)明的6批提取物中人參總皂苷有效成分的重量百分含量大于或等于20％。
三、藥理實施例為了充分說明本發(fā)明復(fù)方銀杏葉注射制劑對于力可生顆粒的開發(fā)具有科學(xué)性、合理性，本發(fā)明研究人員以力可生顆粒為對照，對本發(fā)明制劑進行了藥效學(xué)研究。
在以下實驗中，所使用的本發(fā)明復(fù)方銀杏葉注射制劑的編號為1、本發(fā)明水針制劑，2、本發(fā)明輸液制劑，3、本發(fā)明粉針制劑，4、本發(fā)明凍干粉針劑，均由廣東天之驕藥物開發(fā)有限公司提供。
1、對小鼠缺氧耐力的影響實驗實驗方法取健康昆明種小鼠30只，體重20-24g。隨機分成對照組，力可生顆粒組、本發(fā)明水針制劑組。每組10只，雌雄各半，分籠飼養(yǎng)。以人常規(guī)治療劑量折算為小鼠的劑量。折算公式為待測動物試用劑量＝已知動物給藥量×待測動物的體表面積比值/已知動物的體表面積比值。對照組給生理鹽水，1次/天，連續(xù)7d。于末次給藥后1h，將小鼠分別置于體積為150ml磨口瓶中，內(nèi)放15g鈉石灰密閉觀察其存活時間。結(jié)果見表4。
表4 對小鼠常壓缺氧的影響(X±SD)組別 鼠數(shù)(只) 平均存活時間(min)對照組 10 15.54±4.65力可生顆粒組 10 23.67±4.03*本發(fā)明1號組10 32.28±3.52**注與對照組比較*P＜0.05；**P＜0.01。
由表4實驗結(jié)果看出，本發(fā)明注射制劑能顯著提高小鼠常壓缺氧耐力，平均存活時間比力可生顆粒組顯著延長。說明本發(fā)明復(fù)方銀杏葉注射制劑的藥理作用強于力可生顆粒。
2、對小鼠心肌缺氧的保護作用實驗實驗方法取健康昆明種小鼠30只，體重18-22g，隨機分成3組，隨機分成對照組，力可生顆粒組、本發(fā)明輸液制劑組。每組雌雄各半，分籠飼養(yǎng)。以人常規(guī)治療劑量折算為小鼠的劑量。折算公式為待測動物試用劑量＝已知動物給藥量×待測動物的體表面積比值/已知動物的體表面積比值。對照組給生理鹽水。給藥方法1次/天，連續(xù)6天。于末次給藥后1小時用烏拉坦1.2g/kg腹腔注射麻醉，背部固定，分離氣管，以動脈夾夾閉氣管，用心電儀觀察心電，并用秒表記下小鼠夾閉氣管后至心電消失的時間。結(jié)果見表5。
表5 對小鼠心肌缺氧的影響(X±SD)組別鼠數(shù)(只) 平均存活時間(min)對照組10 6.24±0.95力可生顆粒組 10 10.65±0.89*本發(fā)明2號組 10 14.33±0.64**注與對照組比較*P＜0.05；**P＜0.01。
由表5實驗結(jié)果看出，本發(fā)明注射制劑對小鼠心肌缺氧起顯著的保護作用，小鼠平均存活時間比力可生顆粒組顯著延長。說明本發(fā)明注射制劑的藥理作用強于力可生顆粒。
3、對大鼠體內(nèi)血栓形成的影響將大鼠隨機分成3組，每組10只，分別為生理鹽水對照組、力可生顆粒組、本發(fā)明粉針制劑組。將各組動物給藥(生理鹽水組給予等體積的生理鹽水)，每日1次，連續(xù)給藥7天，末次給藥后1小時，將大鼠用10％水合氯醛，按0.3g/kg體重麻醉后固定，分離左頸總動脈，在血栓儀上以2mA電流刺激血管7min后，記錄血栓形成時間。結(jié)果見表6。
表6 對大鼠體內(nèi)血栓形成的影響(X±SD)組別 鼠數(shù)(只)血栓形成時間(min)對照組10633.46±84.25力可生顆粒組 10734.13±78.82*本發(fā)明3號組 10810.08±70.46**注與對照組比較*P＜0.05；**P＜0.01。
由表6實驗結(jié)果看出，本發(fā)明注射制劑能顯著延長大鼠體內(nèi)血栓的形成，血栓形成時間比力可生顆粒組顯著延長。說明本發(fā)明注射制劑的藥理作用強于力可生顆粒。
4、抗血小板聚集作用將大鼠隨機分成3組，每組10只，分別為對照組、力可生顆粒組、本發(fā)明凍干粉針劑組。各組動物給藥，每日1次，連續(xù)給藥7天，末次給藥后1小時，動物麻醉后自腹主動脈取血，抗凝劑采用3.28％枸櫞酸鈉，與血液以1∶9比例混合。將抗凝全血在20℃條件下1500r·min-1離心5min，獲得富血小板血漿(platelet-richplasma，PRP)。留取定量PRP后，將剩余PRP再次以3000r·min-1離心10min，獲得自身對照貧血小板血漿(platelet-poorplasma，PPP)。以PPP調(diào)節(jié)PRP濃度，使各PRP濃度相同。將PRP在37℃的恒溫孔中預(yù)熱后，加入ADP(終濃度為3μmol·L-1)引起血小板聚集，記錄最大聚集率。結(jié)果見表7。
表7 抗血小板聚集作用(X±SD)組別 鼠數(shù)(只)最大聚集率(η/％)對照組 10 93.74±16.24力可生顆粒組10 84.56±17.58*本發(fā)明4號組 10 71.55±14.88**注與對照組比較*P＜0.05；**P＜0.01。
表7實驗結(jié)果看出，本發(fā)明注射制劑能明顯抑制血小板聚集，最大聚集率比力可生顆粒組顯著縮小。說明本發(fā)明注射制劑的作用強于力可生顆粒。
總結(jié)以上藥理實驗說明，由銀杏葉、刺五加、人參為原料藥材，用本發(fā)明制備方法精制而成的復(fù)方銀杏葉注射制劑，對于心腦血管疾病具有很好的治療作用，比由三味藥材制成的口服制劑具有更好的藥理作用。說明，本發(fā)明復(fù)方銀杏葉制劑的開發(fā)是科學(xué)的、合理的，在臨床的應(yīng)用中更具有實用性。
四、制備實施例實施例1將銀杏葉500g、刺五加根600g和園參400g粉碎，加入12倍量80％乙醇溶液回流提取三次，每次0.5小時；合并提取液，靜置，過濾，濾液減壓濃縮至相對密度為1.20，過濾，濾液過已處理好的D101型大孔吸附樹脂柱，先用5倍柱體積的水洗脫，再用4倍柱體積的80％乙醇溶液洗脫，收集乙醇洗脫液回收至無醇味，以20000轉(zhuǎn)/分的速度離心，離心液用截流分子量為5000的超濾膜超濾，濾液濃縮，干燥，粉碎，得到提取物35.0g。
實施例2將銀杏葉300g、刺五加根莖400g和山參200g粉碎，加入6倍量水回流提取三次，每次2小時；合并提取液，靜置，過濾，濾液減壓濃縮至相對密度為1.20，過濾，濾液過已處理好的AB-8型大孔吸附樹脂柱，先用3倍柱體積的水洗脫，再用6倍柱體積的50％乙醇溶液洗脫，收集乙醇洗脫液回收至無醇味，以12000轉(zhuǎn)/分的速度離心，離心液用截流分子量為10000的超濾膜超濾，濾液濃縮，干燥，粉碎，得到提取物10.0g。
實施例3將銀杏葉400g、刺五加莖500g和紅參300g粉碎，加入10倍量50％乙醇溶液回流提取三次，每次1小時；合并提取液，靜置，過濾，濾液減壓濃縮至相對密度為1.20，過濾，濾液過已處理好的NKA型大孔吸附樹脂柱，先用4倍柱體積的水洗脫，再用5倍柱體積的70％乙醇溶液洗脫，收集乙醇洗脫液回收至無醇味，以16000轉(zhuǎn)/分的速度離心，離心液用截流分子量為8000的超濾膜超濾，濾液濃縮，干燥，粉碎，得到提取物18.7g。
實施例4
將銀杏葉450g、刺五加根和葉450g、人參葉250g粉碎，加入8倍量70％乙醇溶液回流提取三次，每次1.5小時；合并提取液，靜置，過濾，濾液減壓濃縮至相對密度為1.20，過濾，濾液過已處理好的D101型大孔吸附樹脂柱，先用3倍柱體積的水洗脫，再用6倍柱體積的60％乙醇溶液洗脫，收集乙醇洗脫液回收至無醇味，以18000轉(zhuǎn)/分的速度離心，離心液用截流分子量為6000的超濾膜超濾，濾液濃縮，干燥，粉碎，得到提取物26.6g。
實施例5將銀杏葉350g、刺五加根和莖550g、園參和山參350g粉碎，加入11倍量40％乙醇溶液回流提取三次，每次2小時；合并提取液，靜置，過濾，濾液減壓濃縮至相對密度為1.20，過濾，濾液過已處理好的NKA型大孔吸附樹脂柱，先用5倍柱體積的水洗脫，再用4倍柱體積的55％乙醇溶液洗脫，收集乙醇洗脫液回收至無醇味，以14000轉(zhuǎn)/分的速度離心，離心液用截流分子量為7500的超濾膜超濾，濾液濃縮，干燥，粉碎，得到提取物12.5g。
實施例6將銀杏葉330g、刺五加根莖和葉560g、紅參和山參和人參葉280g粉碎，加入9倍量30％乙醇溶液回流提取三次，每次0.5小時；合并提取液，靜置，過濾，濾液減壓濃縮至相對密度為1.20，過濾，濾液過已處理好的D101型大孔吸附樹脂柱，先用4倍柱體積的水洗脫，再用5倍柱體積的75％乙醇溶液洗脫，收集乙醇洗脫液回收至無醇味，以15000轉(zhuǎn)/分的速度離心，離心液用截流分子量為6500的超濾膜超濾，濾液濃縮，干燥，粉碎，得到提取物23.8g。
實施例7將銀杏葉480g、刺五加根和根莖和莖和葉430g、園參和山參和紅參和人參葉320g藥材粉碎，加入7倍量10％乙醇溶液回流提取三次，每次1小時；合并提取液，靜置，過濾，濾液減壓濃縮至相對密度為1.20，過濾，濾液過已處理好的AB-8型大孔吸附樹脂柱，先用5倍柱體積的水洗脫，再用5倍柱體積的65％乙醇溶液洗脫，收集乙醇洗脫液回收至無醇味，以13000轉(zhuǎn)/分的速度離心，離心液用截流分子量為8000的超濾膜超濾，濾液濃縮，干燥，粉碎，得到提取物15.5g。
實施例8將上述提取物用注射用水溶解，用葡甲胺調(diào)pH值為7.5，用0.22μm微孔濾膜過濾，滅菌，制備成本發(fā)明復(fù)方銀杏葉水針制劑1000支。
實施例9將上述提取物用注射用水溶解，加入氯化鈉調(diào)等滲，用葡甲胺調(diào)pH值為8.0，用0.22μm微孔濾膜過濾，滅菌，制備成本發(fā)明復(fù)方銀杏葉輸液制劑1000瓶。
實施例10將上述提取物用注射用水溶解，加入葡萄糖調(diào)等滲，用葡甲胺調(diào)pH值為7.7，用0.22μm微孔濾膜過濾，滅菌，制備成本發(fā)明復(fù)方銀杏葉輸液制劑1000瓶。
實施例11將上述提取物用注射用水溶解，加入甘露醇，用葡甲胺調(diào)pH值為7.6，用0.22μm微孔濾膜過濾，噴霧干燥，包裝得到本發(fā)明復(fù)方銀杏葉粉針制劑1000支。
實施例12將上述提取物用注射用水溶解，加入聚乙烯吡咯烷酮，用葡甲胺調(diào)pH值為7.8，用0.22μm微孔濾膜過濾，冷凍干燥，包裝得到本發(fā)明復(fù)方銀杏葉凍干粉針制劑1000支。
權(quán)利要求
1.一種治療心腦血管疾病的藥物組合物，其特征在于它是由銀杏葉30-50重量份、刺五加40-60重量份、人參20-40重量份的提取物1.0-3.5重量份和水溶性藥用輔料制備而成的；其特征還在于提取物中總黃酮類有效成分重量百分含量大于25％，銀杏內(nèi)酯有效成分重量百分含量大于5％，人參總皂苷有效成分重量百分含量大于20％；其特征還在于該藥物是注射制劑，包括水針劑，輸液劑，粉針劑和凍干粉針劑。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的藥物組合物的制備方法，其特征在于包括以下步驟將銀杏葉、刺五加和人參藥材粉碎，加入6-12倍量的極性溶劑回流提取三次，每次0.5-2小時；合并提取液，靜置，過濾，濾液減壓濃縮至相對密度為1.20，過濾，濾液過已處理好的大孔吸附樹脂柱，先用3-5倍柱體積的水洗脫，再用4-6倍柱體積的50％-80％乙醇溶液洗脫，收集乙醇洗脫液回收至無醇味，高速離心，離心液用超濾膜超濾，濾液濃縮，干燥，粉碎，得到提取物。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的藥物組合物的制備方法，其特征在于，極性溶劑為0％-80％的乙醇水溶液。
4.根據(jù)權(quán)利要求2所述的藥物組合物的制備方法，其特征在于，大孔吸附樹脂為非極性或弱極性。
5.根據(jù)權(quán)利要求2所述的藥物組合物的制備方法，其特征在于，離心的速度為12000-20000轉(zhuǎn)/分。
6.根據(jù)權(quán)利要求2所述的藥物組合物的制備方法，其特征在于，超濾膜的截留分子量為5000-10000。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的藥物組合物的制備方法，其特征在于還包括以下步驟水針制劑的制備將上述提取物用注射用水溶解，用葡甲胺調(diào)pH值為7.5-8.0，用0.22μm微孔濾膜過濾，滅菌，制備成本發(fā)明水針制劑。輸液制劑的制備將上述提取物用注射用水溶解，加入氯化鈉或葡萄糖調(diào)等滲，用葡甲胺調(diào)pH值為7.5-8.0，用0.22μm微孔濾膜過濾，滅菌，制備成本發(fā)明輸液制劑。粉針制劑的制備將上述提取物用注射用水溶解，加入水溶性凍干賦形劑，用葡甲胺調(diào)pH值為7.5-8.0，用0.22μm微孔濾膜過濾，噴霧干燥，包裝得到本發(fā)明粉針制劑。凍干粉針制劑的制備將上述提取物用注射用水溶解，加入水溶性凍干賦形劑，用葡甲胺調(diào)pH值為7.5-8.0，用0.22μm微孔濾膜過濾，冷凍干燥，包裝得到本發(fā)明凍干粉針制劑。
全文摘要
本發(fā)明屬于中藥制藥技術(shù)領(lǐng)域，具體公開了一種治療心腦血管疾病的藥物組合物，其特征在于它是由銀杏葉、刺五加、人參的提取物和水溶性藥用輔料制備而成的；本發(fā)明還公開了上述藥物組合物的制備方法。藥理實驗表明，本發(fā)明的藥物組合物具有很好的預(yù)防和治療心腦血管疾病的作用。
文檔編號A61K9/08GK1651003SQ200410101540
公開日2005年8月10日 申請日期2004年12月23日 優(yōu)先權(quán)日2004年12月23日
發(fā)明者吳梅春 申請人:吳梅春