專利名稱：具有mmp抑制活性的診斷造影劑的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及體內(nèi)診斷造影，特別是SPECT造影領(lǐng)域。具體來說，本發(fā)明涉及包含基質(zhì)金屬蛋白酶抑制劑的新造影劑，所述新造影劑可用于心血管疾病、炎性疾病和惡性疾病的體內(nèi)診斷造影。
相關(guān)領(lǐng)域的描述基質(zhì)金屬蛋白酶(MMP)是由至少20種鋅依賴內(nèi)肽酶組成的家族，這些內(nèi)肽酶介導細胞外基質(zhì)(ECM)的降解或重建[Massova等人，F(xiàn)ASEB J(1998)121075-95]。MMP家族的成員可一起降解血管的所有組分，因此在涉及ECM組分降解的生理和病理事件中起主要作用。因為MMP可干擾控制細胞行為的細胞-基質(zhì)相互作用，所以它們的活性影響細胞分化、遷移、增殖和凋亡等多種不同過程[Nagase和WoessnerJ.Biol.Chem.(1999)27421491-4]。精細地調(diào)控生理狀況中MMP活性的負調(diào)控并不總是起它們所應當行使的功能。據(jù)信，在幾種病癥中，MMP活性的不適當表達構(gòu)成了病理機制的一部分。因此，在很多炎性、惡性和變性疾病中，MMP成為治療抑制劑的靶目標[Whittaker等人，Chem.Rev.(1999)992735-76]。
因此，據(jù)信MMP的合成抑制劑可用于治療很多炎性、惡性和變性疾病。此外，已經(jīng)有人提出MMP抑制劑可用于診斷這些疾病。WO01/60416公開了可用于診斷與細胞外基質(zhì)降解有關(guān)的心血管病變例如動脈粥樣硬化、心力衰竭和再狹窄的化合物。上述專利所公開的化合物包括MMP抑制劑，所述MMP抑制劑通過任選的連接基團與能夠綴合診斷金屬的螯合劑理解。其中描述了優(yōu)選的MMP抑制劑、螯合劑和連接基團。Zheng等人的報道[Nuc.Med.Biol.29761-770(2002)]描述了用正電子成像(PET)示蹤劑11C和16F標記的MMP抑制劑的合成。其中所描述的化合物據(jù)述可用于乳腺癌的非侵入性成像。
發(fā)明概述本申請公開了已發(fā)現(xiàn)可特別用于診斷成像的具有MMP抑制活性的新的造影劑。本發(fā)明的另一個方面是可用于人體診斷成像的藥物組合物。還公開了用于制備本發(fā)明藥物組合物的藥盒。此外，本發(fā)明包括本發(fā)明藥物組合物在診斷造影中的應用。
本發(fā)明的造影劑可用于已知涉及特定基質(zhì)金屬蛋白酶的多種病癥(炎性、惡性和變性疾病)的體內(nèi)診斷成像。這些病癥包括(a)動脈粥樣硬化，其中各種MMP過度表達。已經(jīng)在人動脈粥樣硬化斑中檢測到了最高水平的MMP-1、3、7、9、11、12、13和MT1-MMP[S.J.George，Exp.Opin.Invest.Drugs，9(5)，993-1007(2000)以及其中的參考文獻]。還已經(jīng)報道了在人粥樣斑中MMP-2的表達[Z.Li等人，Am.J.Pathol.，148，121-128(1996)]和MMP-8的表達[M.P.Herman等人，Circulation，104，1899-1904(2001)]；(b)CHF(Peterson，J.T.等人，用于治療心力衰竭的基質(zhì)金屬蛋白酶的開發(fā)，Drug Dev.Res.(2002)，55(1)，29-44報道，MMP-1、MMP-2、MMP-3、MMP-8、MMP-9、MMP-13和MMP-14在心力衰竭中上調(diào))；(c)癌癥[Vihinen等人，Int.J.Cancer 99，pu57-186(2002)總結(jié)了MMP參與癌癥，尤其強調(diào)了MMP-2、MMP-3、MMP-7和MMP-9]；(d)關(guān)節(jié)炎[Jacson等人，Inflamm.Res.50(4)，p183-186(2001)“在靶向明膠酶A激活的類風濕性關(guān)節(jié)炎中選擇性基質(zhì)金屬蛋白酶抑制”，特別討論了MMP-2]；(e)肌萎縮性側(cè)索硬化[Lim等人，J.Neurochem，67，251-259(1996)；其中涉及MMP-2和MMP-9]；(f)腦轉(zhuǎn)移瘤，據(jù)報道其中涉及MMP-2、MMP-9和MMP-13[Spinale，Circul.Res.，90，520-530(2002)]；(g)腦血管疾病，據(jù)報道其中涉及MMP-2和MMP-9[Lukes等人，Mol.Neurobiol.，19，267-284(1999)]；(h)阿爾茨海默氏病，已經(jīng)在患病組織中鑒定出來MMP-2和MMP-9[Backstrom等人，J.Neurochem.，58，983-992(1992)]；(i)神經(jīng)炎性疾病，其中涉及MMP-2、MMP-3和MMP-9[Mun-Bryce等人，Brain.Res.，933，42-49(2002)]；(j)COPD(即慢性阻塞性肺病)，據(jù)報道其中MMP-1、MMP-2、MMP-8和MMP-9上調(diào)[Segura-Valdez等人，Chest，117，684-694(2000)]；
(k)眼睛病變[Kurpakus-Wheateret等人，Prog.Histo.Cytochem.，36(3)，179-259(2001)]；(l)皮膚疾病[Herouy，Y.，Int.J.Mol.Med.，7(1)，3-12(2001)]。
發(fā)明詳述本發(fā)明的第一個方面是診斷造影劑，所述造影劑包含用γ-發(fā)射放射性核素標記的式I所示基質(zhì)金屬蛋白酶抑制劑的診斷造影劑 R1選自氫、羥基、C1-6烷基、C6-14芳基、C7-20芳基烷基，或者與R5及其所連接的碳一起形成C6-8環(huán)烷基環(huán)或C4-6雜環(huán)基環(huán)，或者與R4一起形成含有5-7個原子和1或2個選自N或O的雜原子的C4-6雜環(huán)基環(huán)；R2和R3獨立地為氫、羥基、鹵素、C1-6烷基、C1-6烷氧基、C1-6氨基、C6-14芳基、C7-20芳基烷基或C7-20氨基甲酰基芳基；R4是C6-14芳基、C4-6雜芳基、C7-20芳基烷基、C7-20氨基甲?；蓟蚍蓟被柞；蓟?；且R5選自氫或C1-6烷基，條件是當R1是異丙基，R3是氫，且R4是3-吡啶基時，則R2不是甲氧基。
單獨使用或者作為另一基團(例如羥基烷基、氨基烷基、羧基烷基或烷氧基烷基)的一部分使用的“烷基”在本文中定義為任何直鏈、支鏈或環(huán)狀飽和或不飽和的CxH2x+1基團，其中除非另有說明，否則x是1-6的整數(shù)。
單獨使用或者作為另一基團的一部分使用的“芳基”在本文中定義為衍生自單環(huán)或多環(huán)芳烴的任何C6-14分子片段或基團。在本發(fā)明中，合適的芳基是任選在任何位置被取代的苯基或萘基。
“芳基烷基”在本文中定義為由如上所定義的烷基和芳基構(gòu)成的任何C7-20基團。
“雜芳基環(huán)”在本發(fā)明中定義為包含1或2個雜原子的C6-14環(huán)狀基團。合適的雜原子包括N和O。
術(shù)語“鹵素”是指選自氟、氯、溴和碘的基團。
“胺”在本發(fā)明中定義為含有氨基或取代的氨基的任何有機基團。
本文所用的詞語“用γ-發(fā)射放射性核素標記的”是指式I的一個原子或取代基包含γ-發(fā)射放射性核素，所述γ-發(fā)射放射性核素作為人工富含水平的該結(jié)構(gòu)內(nèi)在的原子，或者作為已經(jīng)通過適于偶聯(lián)所述γ-發(fā)射放射性核素的官能團化學連接的另外的必需特征。
優(yōu)選的本發(fā)明診斷造影劑包含用γ-發(fā)射放射性核素標記的式I化合物，其中R1選自C1-6烷基、C6-14芳基或C7-20芳基烷基，或者與R5及其所連接的碳一起形成C4-6雜環(huán)基環(huán)；R2是氫、羥基、甲基、異丙基、甲氧基或鹵素；R3是氫；R4是吡啶基或(Ar1)y-(R)z(NH)-苯基，其中Ar1是亞苯基，R是CH2或C＝O，y＝0或1，且z＝0或1；且R5是氫，條件是當R1是異丙基，且R4是3-吡啶基時，則R2不是甲氧基。
最優(yōu)選的本發(fā)明診斷造影劑包含用γ-發(fā)射放射性核素標記的式I化合物，其中R1是甲基、異丁基、異丙基、芐基或羥基芐基；R2是羥基、鹵素或甲氧基；R3是氫；R4是吡啶基或(Ar1)y-(R)z(NH)-苯基，其中Ar1是1，4-亞苯基，R是CH2或C＝O，y＝0或1，且z＝0或1；且R5是氫，條件是當R1是異丙基，且R4是3-吡啶基時，則R2不是甲氧基。
當R5是氫時，本發(fā)明的基質(zhì)金屬蛋白酶抑制劑包括在攜帶R1基團的碳原子上的手性中心。該手性中心的對映體在本發(fā)明的范圍內(nèi)，優(yōu)選的對映體是式Ia所示對映體
尤其優(yōu)選的本發(fā)明診斷造影劑包含式I化合物，其中所述γ-發(fā)射放射性核素替代或者化學連接一個或多個R1-R4取代基。最尤其優(yōu)選的本發(fā)明診斷造影劑包含式I化合物，其中R2在磺酰胺的對位，且R3在磺酰胺的間位。
未用γ-發(fā)射體標記的式I化合物可根據(jù)MacPherson等人，J.Med.Chem.1997；2525-32中描述的方法容易地合成。
合適的本發(fā)明γ-發(fā)射放射性核素是γ-發(fā)射金屬離子或γ-發(fā)射放射性鹵素。在下文中，包括在優(yōu)選和最優(yōu)選的實施方案中對此進行更詳細描述。
當本發(fā)明γ-發(fā)射放射性核素是金屬離子時，其適當?shù)剡x自99mTc、111In、113mIn、67Cu或67Ga。優(yōu)選的γ-發(fā)射金屬離子是99mTc、67Cu、67Ga和111In，其中99mTc是最優(yōu)選的。金屬離子適當?shù)匾越饘俳j合物的形式存在于本發(fā)明的診斷造影劑中，這樣診斷造影劑是式II所示的金屬絡合綴合物[{基質(zhì)金屬蛋白酶抑制劑}-(A)n]m-[金屬絡合物](II)其中-(A)n-是連接基團，n是0-50的整數(shù)，且m是1、2或3。
術(shù)語“金屬絡合物”是指金屬離子與一個或多個配體的配位絡合物。非常優(yōu)選地，所述金屬絡合物是“抗轉(zhuǎn)螯合的”，即金屬絡合物不易于在金屬配位位點與其它潛在競爭性配體發(fā)生配體交換。潛在競爭性配體包括體外式I化合物與制劑中的其它賦形劑(例如制劑中使用的輻射防護劑或抗微生物防腐劑)或體內(nèi)的內(nèi)源性化合物(例如谷胱甘肽、轉(zhuǎn)鐵蛋白或血漿蛋白)。術(shù)語“連接基團”(A)n如下文關(guān)于式IIa所定義。
本發(fā)明的第二個方面是配體綴合物，可以將其進行放射標記以形成式II所示金屬絡合物綴合物。優(yōu)選的本發(fā)明配體綴合物是式IIa所示的綴合物[{基質(zhì)金屬蛋白酶抑制劑}-(A)n]m-[配體](IIa)其中-(A)n-是連接基團，其中每個A獨立地為CR’2、CR’＝CR’、C≡C、CH2CH2O、CR’2CO2、CO2CR’2、NR’CO、CONR’、NR’(C＝O)NR’、NR’(C＝S)NR’、SO2NR’、NR’SO2、CR’2OCR’2、CR’2SCR’2、CR’2NRCR’2、C4-8亞環(huán)雜烷基、C4-8亞環(huán)烷基、C5-12亞芳基或C3-12亞雜芳基；R’獨立地選自H、C1-4烷基、C2-4鏈烯基、C2-4炔基、C1-4烷氧基烷基或C1-4羥基烷基；n是0-50的整數(shù)；且m是1、2或3。
在式II和IIa中，m優(yōu)選為1或2，最優(yōu)選為1。
適于在本發(fā)明中形成抗轉(zhuǎn)螯合的金屬絡合物綴合物的配體包括螯合劑，其中排列2-6個，優(yōu)選2-4個金屬配位原子，以形成5或6元螯合劑環(huán)(通過具有碳原子的非配位骨架或連接金屬配位原子的非配位雜原子)；或單齒配體，其包含能夠與金屬離子強結(jié)合的配位原子，例如異腈、膦或diazenide。作為螯合劑一部分與金屬良好結(jié)合的配位原子類型的實例是胺、硫醇、酰胺、肟和膦。膦形成這樣的強的金屬絡合物，甚至單齒或二齒膦形成合適的金屬絡合物。異腈和diazenide的線形幾何學是這樣的，它們自身不有助于摻入到螯合劑內(nèi)，并因此常用作單齒配體。合適的異腈的實例包括簡單的烷基異腈例如叔丁基異腈和醚取代的異腈例如MIBI(即1-異氰基-2-甲氧基-2-甲基丙烷)。合適的膦的實例包括Tetrofosmin和單齒膦例如三(3-甲氧基丙基)膦。合適的diazenide的實例包括HYNIC系列的配體，即肼取代的吡啶或煙酰胺類。
對于锝，適于形成抗轉(zhuǎn)螯合的金屬絡合物的螯合劑的實例包括但不限于(i)式III所示的二胺二肟
其中E1-E6分別獨立地為R”基團；每個R”為H或C1-10烷基、C3-10烷基芳基、C2-10烷氧基烷基、C1-10羥基烷基、C1-10氟烷基、C2-10羧基烷基或C1-10氨基烷基，或者兩個或多R”基團與它們所連接的原子一起形成碳環(huán)、雜環(huán)、飽和或不飽和環(huán)，并且其中一個或多個R”基團與式I化合物綴合；且Q是式-(J)f-所示橋連基團；其中f是3、4或5，并且每個J獨立地為-O-、-NR”-或-C(R”)r，條件是-(J)f-含有最多一個是-O-或-NR”-的J基團。
優(yōu)選的Q基團如下Q＝-(CH2)(CHR”)(CH2)-，即亞丙基胺肟或PnAO衍生物；Q＝-(CH2)2(CHR”)(CH2)2-，即亞戊基胺肟或PentAO衍生物；Q＝-(CH2)2NR”(CH2)2-。
E1-E6優(yōu)選選自C1-3烷基、C4-10烷基芳基、C2-3烷氧基烷基、C1-3羥基烷基、C1-2氟烷基、C1-3羧基烷基或C1-3氨基烷基。最優(yōu)選地，每個E1-E6基團是CH3。
式I化合物優(yōu)選在E1或E6上與R”基團或Q部分的R”基團綴合。最優(yōu)秀地，式I化合物與Q部分的R”基團綴合。當式I化合物與Q部分的R”基團綴合時，R”基團優(yōu)選在橋頭位置。在這種情況下，Q優(yōu)選為-(CH2)(CHR”)(CH2)-、-(CH2)2(CHR”)(CH2)2-或-(CH2)2NR”(CH2)2-，最優(yōu)選為-(CH2)2(CHR”)(CH2)2-。
尤其優(yōu)選的雙官能二胺二肟螯合劑具有以下結(jié)構(gòu)
這樣式I化合物經(jīng)由橋頭-CH2CH2NH2基團綴合。該雙官能二胺二肟螯合劑在本文的其余部分成為螯合劑1或CA1。
(ii)N3S配體，該配體具有硫代三酰胺供體部分例如MAG3(巰基乙?；拾彼?和相關(guān)配體；或具有二酰胺吡啶硫醇部分例如PICA；(iii)N2S2配體，該配體具有二胺二硫醇供體部分例如BAT或ECD(即乙基半胱氨酸酯二聚體)或酰胺胺二硫醇供體部分例如MAMA；(iv)N4配體，該配體是開鏈或大環(huán)配體，具有四胺、酰胺三胺或二酰胺二胺供體部分例如cyclam、monoxocyclam或dioxocyclam。
(v)N2O2配體，該配體具有二胺二苯酚供體部分。
上述配體特別適于絡合99mTc，并且Jurisson等人[Chem.Rev.(1999)992205-2218]對此做了更詳細描述。其它合適的配體描述在Sandoz WO91/01144中，該文獻包括特別適于銦和釓，尤其是大環(huán)氨基羧酸酯和氨酸膦酸配體。形成釓的非離子(即中性)金屬絡合物的配體是已知的，并且描述在US 4885363中。當放射性金屬離子是锝時，配體優(yōu)選為是四齒配體的螯合劑。對于锝，優(yōu)選的螯合劑是二胺二肟，或具有如上所述的N2S2或N3S供體部分的配體。對于锝，尤其優(yōu)選的螯合劑是二胺二肟。
式II的連接基團-(A)n-的作用是將較大的金屬絡合物與式I化合物的活性位點隔開一定距離，這樣該化合物與MMP酶的結(jié)合不受影響。這可通過合并柔性(例如簡單的烷基鏈)，這樣較大基團自身能夠遠離活性位點和/或剛性，例如將金屬絡合物定向以遠離活性位點的環(huán)烷基或芳基間隔基團來實現(xiàn)。
連接基團的性質(zhì)還可以用于調(diào)節(jié)所得金屬絡合物綴合物的生物分布。因此，例如，在連接基團中引入醚基將有助于把血漿蛋白結(jié)合降至最小。包含多個連接的-CH2CH2O-基團(PEG連接基團)或1-10個氨基酸的肽鏈的連接基團還具有以下另外的性質(zhì)容許有利地改變特定化合物的臨床性質(zhì)，尤其是生物分布。這樣的“生物改性劑”可促進造影劑從背底組織例如肌肉或肝臟和/或血液中清除，由此由于更少的背底干擾而給出更好分診斷成像。生物改性劑連接基團還可用于使得帶來更有利的排泄途徑，例如經(jīng)由腎排泄而不是經(jīng)由肝臟排泄。
非肽類連接基團例如亞烷基或亞芳基具有這樣的優(yōu)點，與綴合的式I化合物之間沒有任何顯著的氫鍵相互作用，這樣連接基團不纏繞在式I化合物周圍。優(yōu)選的亞烷基間隔基團是-(CH2)q-，其中q是2-5。優(yōu)選的亞芳基間隔基團是式IV所示基團 其中a和b獨立地為0、1或2。
當連接基團不包含PEG或肽鏈時，優(yōu)選的連接基團-(A)n-具有包含2-10個原子、最優(yōu)選2-5個原子、尤其優(yōu)選2或3個原子的構(gòu)成-(A)n-部分的連接原子主鏈。具有2個原子的最小連接基團主鏈帶來的優(yōu)點是，鰲合劑與式I化合物良好地分隔開，這樣將任何相互作用降至最小。當連接基團是PEG連接基團時，-(A)n-中A基團的數(shù)目n可最高達50，優(yōu)選15-30。當連接基團包含肽鏈時，其優(yōu)選為1-10個氨基酸殘基的肽鏈，氨基酸殘基優(yōu)選選自甘氨酸、賴氨酸、天冬氨酸或絲氨酸。
非常優(yōu)選地，式I化合物以這樣的方式與金屬絡合物結(jié)合，其中連接鍵在血液中不易于發(fā)生代謝，因為代謝將會導致金屬絡合物在化合物到達體內(nèi)靶位點之前發(fā)生裂解。因此，式I化合物優(yōu)選與本發(fā)明的金屬絡合物通過不易于代謝的鍵共價結(jié)合。
最有選的用γ-發(fā)射金屬離子標記的本發(fā)明化合物是用與CA1配位的99mTc標記，在一個式I的R1-R4取代基上，CA1通過合適的化學官能團連接，具有任選的連接基團。優(yōu)選的用99mTc標記的本發(fā)明化合物的實例如下(Tc在結(jié)構(gòu)中代表99mTc)
化合物1化合物2 化合物3 化合物16 化合物17當γ-發(fā)射放射性核素是放射性鹵素時，其優(yōu)選為碘的同位素，并且診斷造影劑是通過將前體與碘的γ-發(fā)射同位素反應而有效地制得的。這樣的前體在下文中更詳細地描述，并且是本發(fā)明的第四個方面。優(yōu)選的碘的γ-發(fā)射同位素是123I或131I。
碘的γ-發(fā)射同位素優(yōu)選通過直接的共價鍵與芳環(huán)例如苯環(huán)連接，或通過乙烯基進行連接，因為已知與飽和脂族系統(tǒng)結(jié)合的碘原子易于在體內(nèi)代謝并由此損失碘的γ-發(fā)射同位素。最優(yōu)選地，碘的γ-發(fā)射同位素通過直接的共價鍵與式I的-NSO2-苯環(huán)連接。
尤其優(yōu)選的用碘的γ-發(fā)射同位素標記的本發(fā)明診斷造影劑是式I化合物，其中(i)R1是異丙基，R2是4-OH，R3是3-123I，且R4是吡啶基(當R4是3-吡啶基時＝化合物4)；(ii)R1是異丙基，R2是4-123I，R3是H，且R4是吡啶基(當R4是3-吡啶基時＝化合物7)；(iii)R1是異丙基，R2是4-(4-[123I]碘苯甲酰胺)，R3是H，且R4是吡啶基(當R4是3-吡啶基時＝化合物20)；(iv)R1是4-羥基-3-[123I]碘芐基，R2是4-碘，R3是H，且R4是吡啶基(當R4是3-吡啶基時＝化合物21)；或(v)R1是異丙基，R2是4-碘，R3是3-H，且R4是(Ar1)y-(R)z(NH)-(Ar2)，其中Ar1是1，4-亞苯基，且Ar2是-[123I]碘苯基，R可以是CH2或C＝O，y＝0或1，且z＝0或1；并且其中當R4是吡啶基時，其優(yōu)選為3-吡啶基。
放射性碘標記的MMP抑制劑的非放射性類似物表現(xiàn)出優(yōu)良的抗MMP-2的抑制作用，對于化合物9，IC50值是2.5nM(表1)，對于化合物8，是320nM(表1)。這些非放射性類似物還表現(xiàn)出抗MMP-9的抑制作用，對于化合物9，IC50值是4.6nM，對于化合物8，是153nM(表1)。因此，本發(fā)明化合物具有能夠預示其體內(nèi)MMP活性的成功成像的體外特征。所以，將使用這些新的放射示蹤劑與SPECT聯(lián)合使用，提供了用于在體內(nèi)非侵入性地進行MMP活性成像的創(chuàng)新工具。在動物模型中的成像試驗提供了本發(fā)明造影劑適于進行體內(nèi)MMP活性成像的進一步證據(jù)。
在第三個方面，本發(fā)明提供了藥物組合物，所述組合物包含適于對哺乳動物給藥形式的如上所述的診斷造影劑以及生物相容載體?！吧锵嗳葺d體”是流體，尤其是液體，造影劑可懸浮或溶解在其中，這樣組合物是生理相容的，即組合物可以對哺乳動物體給藥而不會帶來毒性或不適當?shù)牟贿m。生物相容載體適當?shù)貫榭勺⑸涞囊簯B(tài)載體例如無菌、不含熱原的注射用水；水溶液例如鹽水(其可有利地被平衡，這樣最終的用于注射的產(chǎn)品是等滲或非低滲的)；一種或多種張力調(diào)節(jié)物質(zhì)(例如具有生物相容反離子的血漿陽離子的鹽)、糖(例如葡萄糖或蔗糖)、糖醇(例如山梨醇或甘露醇)、二醇(例如甘油)或其它非離子多元醇材料(例如聚乙二醇、丙二醇等)的水溶液。
本發(fā)明的第四個方面是可用于制備本發(fā)明放射性碘標記的診斷造影劑的前體，所述前體包含適于與碘的γ-發(fā)射同位素反應以生成所述診斷造影劑的基團。用于制備放射性碘標記的造影劑的合適的前體是這樣的式I化合物，所述式I化合物包含非放射性鹵素原子例如芳基碘或芳基溴(以容許放射性碘交換)；活化的芳基環(huán)(例如苯酚基團)；或有機金屬前體化合物(例如三烷基錫或三烷基甲硅烷基)；或有機前體例如三氮烯。Bolton[J.Lab.Comp.Radiopharm.2002 45 485-528]描述了用于引入碘的γ-發(fā)射同位素的方法。碘的γ-發(fā)射同位素可連接在其上的合適的芳基的實例如下 其中存在合適的芳基的優(yōu)選的本發(fā)明前體化合物的實例如下
上述兩種合適的芳基都包含使得能夠容易地將碘取代到芳環(huán)上的取代基?；蛘?，含有碘的γ-發(fā)射同位素的取代基可經(jīng)由放射性鹵素交換通過直接的碘化來合成，例如 在第五個方面，本發(fā)明提供了用于制備本發(fā)明藥物組合物的藥盒。當本發(fā)明藥物組合物包含用γ-發(fā)射放射性金屬標記的診斷造影劑時，所述藥盒包含(i)包含與適于γ-發(fā)射放射性金屬配位的配體綴合的式I化合物的配體綴合物，和(ii)生物相容還原劑。當本發(fā)明藥物組合物包含用碘的γ-發(fā)射同位素標記的診斷造影劑時，所述藥盒包含前體，所述前體是包含適于與碘的γ-發(fā)射同位素反應的基團的式I化合物，這樣所述前體與通常是碘化物形式的碘的γ-發(fā)射同位素的反應生成所述診斷造影劑。
這樣的藥盒被設計成能得到適合于對人給藥的無菌的放射性藥物產(chǎn)品，如通過直接注射到血液中。對于99mTc來說，藥盒優(yōu)選被冷凍干燥，并被設計成能從99mTc放射性同位素發(fā)生器中重新用無菌的99mTc-高锝酸鹽(TcO4-)組成，以便在不進行進一步操作的情況下獲得適合于對人給藥的溶液。適當?shù)乃幒邪ê杏坞x堿或酸式鹽形式的配體或螯合劑綴合物的容器(例如隔膜密封的瓶)，以及生物相容的還原劑例如連二亞硫酸鈉、亞硫酸氫鈉、抗壞血酸、甲脒亞硫酸、亞錫離子、鐵(II)或銅(I)。生物相容還原劑優(yōu)選為亞錫鹽例如氯化亞錫或酒石酸亞錫。或者，藥盒可任選包含金屬絡合物，在加入放射性金屬后，所述金屬絡合物發(fā)生金屬轉(zhuǎn)移作用(即金屬交換)從而生成所需產(chǎn)物。
藥盒可任選進一步包含另外的組分例如轉(zhuǎn)螯合劑、輻射防護劑、抗微生物防腐劑、pH調(diào)節(jié)劑或填充劑?！稗D(zhuǎn)螯合劑”是與锝快速反應以形成弱絡合物，然后被配體置換的化合物。這樣，就由于與锝絡合相競爭的高锝酸鹽的快速還原而把形成還原水解锝(RHT)的危險降到最低程度。適當?shù)倪@種轉(zhuǎn)螯合劑是弱有機酸，即pKa為3-7的有機酸與生物相容陽離子的鹽。合適的這樣的弱有機酸是乙酸、檸檬酸、酒石酸、葡糖酸、葡庚糖酸、苯甲酸、苯酚或膦酸。因此，合適的鹽是乙酸鹽、檸檬酸鹽、酒石酸鹽、葡糖酸鹽、葡庚糖酸鹽、苯甲酸鹽、苯酚化物或膦酸鹽。最優(yōu)選的這樣的鹽是酒石酸鹽、葡糖酸鹽、葡庚糖酸鹽、苯甲酸鹽或膦酸鹽，最優(yōu)選膦酸鹽，尤其最優(yōu)選二膦酸鹽。優(yōu)選的這種轉(zhuǎn)螯合劑是MDP，即亞甲基二膦酸與生物相容陽離子的鹽。
術(shù)語“生物相容陽離子”意思是指與離子化的帶負電荷的基團形成鹽的帶正電荷的反離子，其中所述帶正電荷的反離子也是無毒的，因此適合于對哺乳動物體，特別是人體給藥。適當?shù)纳锵嗳莸年栯x子的實例包括堿金屬鈉或鉀；堿土金屬鈣和鎂；和銨離子。優(yōu)選的生物相容陽離子是鈉和鉀，最優(yōu)選鈉。
術(shù)語“輻射防護劑”意思是指能通過捕獲高度反應性的自由基，如由水的射解產(chǎn)生的含氧自由基而抑制降解反應，如氧化還原過程的化合物。本發(fā)明的輻射防護劑適當?shù)剡x自抗壞血酸、對氨基苯甲酸(即4-氨基苯甲酸)、龍膽酸(即2，5-二羥基苯甲酸)和這種酸與如上定義的生物相容陽離子的鹽。
術(shù)語“抗微生物防腐劑”意思是指可抑制潛在有害的微生物如細菌、酵母或霉菌生長的試劑。根據(jù)劑量的大小，抗菌防腐劑也可以顯示出某些殺菌性能。本發(fā)明抗菌防腐劑的主要作用是抑制重新組成后藥物組合物，即放射性診斷產(chǎn)品本身中任何這種微生物的生長。但是，抗菌防腐劑也可任選用來抑制在重新組成之前本發(fā)明藥盒的一個或多個組分中潛在有害的微生物的生長。適當?shù)目咕栏瘎┌▽αu苯甲酸酯，即對羥基苯甲酸甲酯、乙酯、丙酯或丁酯或其混合物；苯甲醇；苯酚；甲酚；溴化十六烷基三甲銨和硫柳汞。優(yōu)選的抗菌防腐劑是對羥苯甲酸酯。
術(shù)語“pH調(diào)節(jié)劑”意思是指用于保證重新組成的藥盒的pH值在對人或哺乳動物給藥的可接受限值范圍之內(nèi)(大約為pH值4.0-10.5)的化合物或化合物的混合物。適當?shù)倪@種pH值調(diào)節(jié)劑包括可藥用的緩沖劑，如N-(羥甲基)甲基甘氨酸、磷酸鹽或TRIS[即三(羥甲基)氨基甲烷]，和可藥用的堿如碳酸鈉、碳酸氫鈉或其混合物。當配體綴合物以酸式鹽形式使用時，pH調(diào)節(jié)劑可任選在單獨的瓶或容器中提供，這樣使用者可以在多步操作的一部分來調(diào)節(jié)pH。
術(shù)語“填充劑”是指可藥用的增量劑，其可以在生產(chǎn)和凍干期間有助于材料操作。合適的填充劑包括無機鹽例如氯化鈉和水溶液糖和糖醇例如蔗糖、麥芽糖、甘露醇或海藻糖。
本發(fā)明的第六個方面是本發(fā)明藥物組合物在心血管疾病的診斷成像中的應用。本發(fā)明藥物組合物可尤其用于動脈粥樣硬化和CHF的診斷成像。使用本發(fā)明診斷造影劑能夠診斷活性斑負荷，活性斑負荷使得能夠?qū)σ阎加谢虮粦岩苫加泄跔顒用}疾病的患者，即具有疼痛或疼痛史的患者，或鑒定為具有高度危險但是無癥狀的患者進行危險分級。此外，本發(fā)明診斷造影劑能夠鑒定有癥狀患者中的易損斑，這使得能夠鑒定急性心肌梗塞或中風的高度危險性，不論有無狹窄，以及能夠在患者表現(xiàn)出胸痛時迅速進行危險分級。此外，易損斑的血管成形術(shù)是高度危險的，并且可在手術(shù)后導致動脈樹栓塞。因此，對這種亞類型的斑進行成像可有助于減輕手術(shù)后并發(fā)癥。
本發(fā)明的第七個方面是本發(fā)明藥物組合物在炎性疾病的診斷成像，和特別是COPD的診斷成像中的應用。
附圖簡述

圖1表明了用于制備前體化合物的合成途徑，所述前體化合物可用于本發(fā)明診斷造影劑的放射合成，其中γ-發(fā)射放射性核素是碘的放射性同位素。通過該合成途徑也制得了這些放射性碘標記的診斷造影劑的非放射性變型。圖1中的“X”如關(guān)于式V和VI所定義。
圖2-5表明了分別用于制備配體綴合物，化合物10、11、18和19的合成途徑。
圖6表明了通過化合物的放射性碘化來制備化合物4的放射合成。
圖7表明了用于制備前體化合物15的兩條合成途徑。
圖8表明了在取自ApoE(-/-)小鼠的左頸動脈樣本上進行的免疫組織化學的結(jié)果。HE＝蘇木精和曙紅。圖8還表明了體內(nèi)注射化合物6之后，在取自ApoE(-/-)小鼠的左頸動脈樣本上進行的放射自顯影法(標記的“Autorad”)的結(jié)果。
圖9表明了在注射化合物4之后在ApoE(-/-)小鼠中產(chǎn)生的影像。
圖10表明了在沒有預先施用冷的化合物的情況下，在ApoE(-/-)小鼠中化合物4的攝取量，與在預先施用冷的化合物CGS27023之后，在ApoE(-/-)小鼠中化合物4的攝取量的比較。
圖11表明了時間-活性曲線，這些曲線是由在試驗A中沒有預先給藥與在試驗B中進行預先給藥后的小鼠4和5的攝取量，該曲線表明在預先給藥的動物中表現(xiàn)出較低的攝取量。
附圖12表明了在試驗A中得自ApoE(-/-)小鼠的肝臟、腎、膀胱、腦和胸區(qū)域的分析的平均(±SEM)數(shù)據(jù)。
實施例實施例1描述了用于制備非放射性現(xiàn)有技術(shù)化合物CGS 27023的合成途徑。
實施例2描述了用于制備化合物9的合成途徑，化合物9是化合物6和7的非放射性變型，化合物6和7都是本發(fā)明診斷造影劑。
實施例3描述了用于制備化合物14的合成途徑，化合物14是用于如實施例14和15所述制備化合物6和7的前體。
實施例4描述了用于制備化合物13的合成途徑，化合物13是用于如實施例12和13所述制備化合物4和5的前體。
實施例5描述了用于合成化合物8的合成途徑，化合物8是化合物4和5的非放射性變型，化合物4和5都是本發(fā)明診斷造影劑。
實施例6描述了用于制備CA1的合成，CA1是用于在化合物1、2、3、16和17中配位99mTc的螯合劑，化合物1、2、3、16和17都是本發(fā)明的診斷造影劑。
實施例7描述了用于合成化合物10的合成途徑，化合物10是可以用99mTc標記以生成化合物1的配體綴合物。
實施例8描述了用于制備化合物11的合成途徑，化合物11是可以用99mTc標記以生成化合物2的配體綴合物。
實施例9描述了用于制備化合物18的合成途徑，化合物18是可以用99mTc標記以生成化合物16的配體綴合物。
實施例10描述了用于制備化合物19的合成途徑，化合物19是可以用99mTc標記以生成化合物17的配體綴合物。
實施例11描述了用99mTc標記化合物10、11、12、18和19的方法。
實施例12描述了通過用123I標記化合物13來制備化合物4的方法。實施例12描述了用于獲得化合物5的與實施例12相同的方法，但是在實施例13中是用125I標記化合物13。
實施例14描述了使用前體化合物14來制備化合物6的放射合成。實施例15描述了用于制備化合物7的與實施例14相同的方法?；衔?和7都是本發(fā)明的診斷造影劑。
實施例16描述了化合物15的合成，其中化合物15是適于化合物6和7的放射合成的前體。
實施例17描述了由三丁基錫前體化合物15制備化合物7的放射合成。
實施例18描述了用于評價本發(fā)明化合物抑制MMP-2和MMP-9的能力的分析。表2中的結(jié)果表明，本發(fā)明診斷造影劑的非放射性變型(化合物8和9)具有與現(xiàn)有技術(shù)化合物相差不大的MMP抑制活性。這提供了這些化合物的放射性變型(化合物2-5)可以在其中涉及MMP的疾病中用作診斷造影劑的證據(jù)。
實施例19描述了用于在體內(nèi)評價本發(fā)明化合物的特征的ApoE(-/-)小鼠模型。
實施例20描述了用于制備組織學和免疫組織化學所用的組織樣本的方法。實施例21描述了用于制備放射自顯影法所用樣本的方法。如圖8所示的這些試驗的結(jié)果表明化合物5的攝取量與MMP-9的存在有關(guān)。
實施例22描述了如何在小鼠中進行體內(nèi)成像試驗。這些試驗證實了在120分鐘的時間內(nèi)，在結(jié)扎區(qū)域化合物4的攝取量不斷增加，這意味著化合物特異性地攝取到損傷部位內(nèi)。還表明了化合物4沒有象在已經(jīng)用非放射性現(xiàn)有技術(shù)化合物CGS27023預先給藥的ApoE-/-小鼠中那樣良好地攝取，這意味著化合物4具有與CGS 27023類似的結(jié)合特性。通過分析所感興趣的區(qū)域而進行的化合物4的生物分布試驗表明，通過腎和肝臟排泄從血液中迅速清除，并且在相同期間內(nèi)在胸腔和腦中沒有可評估的信號(圖12)。這樣的清除特征適于診斷造影劑。
本文中的很多示例性化合物是式I化合物，并且方便起見，將其在下面的表1中定義表1在說明書中描述的式I化合物
*連接基團1＝-Ph-C(＝O)-NH-(CH2)2-O-(CH2)2-O-(CH2)2-O-(CH2)2-NH-C(＝O)-(CH2)3-C(＝O)-連接基團2＝-Ph-C(＝O)-NH-(CH2)2-O-(CH2)2-O-(CH2)2-O-(CH2)2-NH-C(＝O)-CH2-O-CH2-C(＝O)-
實施例1制備CGS 27023(現(xiàn)有技術(shù))CGS 27023是通過MacPherson等人[J.Med.Chem.1997，40；2525-2532]描述的合成方法的改進形式合成的。
本合成首先是將市售的纈氨酸叔丁酯苯基磺酰氯反應，而MacPherson等人首先是將未保護的纈氨酸與苯基磺酰氯反應，然后將酸官能團作為叔丁酯保護起來。本發(fā)明合成的其余部分與MacPherson等人的報道相同。圖1顯示了所用的合成路線，其中對于CGS 27023，X＝甲氧基。
產(chǎn)率94％mp 156-158°1H-NMR(300MHz，DMSO-D6)δ[ppm]10.76(寬，s，1H，OH)，8.52(m，2H，H芳基)，8.18(d，3J＝8.1Hz，1H，H芳基)，7.69(dd，3J1＝8.1Hz，3J2＝5.6Hz，1H，H芳基)，7.47(d，3J＝8.9Hz，2H，H芳基)，6.82(d，3J＝8.9Hz，2H，HAryl)，4.72(d，2J＝16.7Hz，1H，CH2)，4.52(d，2J＝16.7Hz，1H，CH2)，3.63(s，3H，OCH3)，3.64(d，3J＝10.4Hz，1H，N-CH)，1.85-1.71(m，1H，CH(CH3)2)，0.59(d，3J＝6.5Hz，3H，CH(CH3)2)，0.42(d，3J＝6.5Hz，3H，CH(CH3)2).
13C-NMR(75.5MHz，DMSO-D6)δ[ppm]166.22，163.01，144.91，142.01，141.14，138.78，131.48，129.59，126.52，114.72，63.35，56.12，45.04，28.09，19.50，19.29.
實施例2制備化合物9化合物9是按照與實施例1中描述的制備CGS 27023的相同方法制得的，在圖1中，X＝I。
粗產(chǎn)物的產(chǎn)率56％，可將該粗產(chǎn)物從乙腈中重結(jié)晶，獲得36％無色固體。
mp 169℃.
1H-NMR(400MHz，DMSO-D6)δ[ppm]10.87(寬，s，1H，OH)，8.80(m，2H，H芳基)，8.45(d，3J＝8.3Hz，1H，H芳基)，7.96(dd，3J1＝8.1Hz，3J2＝6.0Hz，1H，H芳基)，7.90(d，3J＝8.6Hz，2H，H芳基)，7.52(d，3J＝8.6Hz，2H，H芳基)，4.95(d，2J＝16.9Hz，1H，CH2)，4.74(d，2J＝16.9Hz，1H，CH2)，3.83(d，3J＝10.6Hz，1H，N-CH)，2.05-1.93(m，1H，CH(CH3)2)，0.78(d，3J＝6.5Hz，3H，CH(CH3)2)，0.59(d，3J＝6.5Hz，3H，CH(CH3)2).
13C-NMR(75.5MHz，DMSO-D6)δ[ppm]166.95，145.67，143.58，142.69，140.27，139.47，139.18，129.96，127.45，102.99，64.51，46.16，29.11，20.51，20.24.
MALDI-TOF490(M-HCl+H+).
元素分析，C17H21IClN3O4S的計算值C 38.83，H 4.03，N 7.99。實測值C 38.67，H 3.85，N 7.94。
實施例3制備化合物14化合物14是按照與實施例1中描述的制備CGS 27023的相同方法制得的，在圖1中，X＝Br。
產(chǎn)率51％無色固體。
mp169-170℃.
1H-NMR(300MHz，DMSO-D6)δ[ppm]11.03(寬，s，1H，OH).8.80(m，2H，H芳基)，8.42(d.3J＝8.1Hz，1H，H芳基)，7.93(dd，3J1＝8.0Hz，3J2＝5.9Hz，1H，H芳基)，7.90(d，3J＝8.6Hz，2H，H芳基)，7.52(d，3J＝8.6Hz，2H，H芳基)，4.98(d，2J＝16.6Hz，1H，CH2)，4.77(d，2J＝16.6Hz，1H，CH2)，3.88(d，3J＝10.5Hz，1H，N-CH)，2.08-1.95(m，1H，CH(CH3)2)，0.81(d，3J＝6.5Hz，3H，CH(CH3)2)，0.63(d，3J＝6.5Hz，3H，CH(CH3)2).
13C-NMR(75.5MHz，DMSO-D6)δ[ppm]165.91，145.13，142.02，141.17，138.91，138.47，132.67，129.39，127.51，126.66，63.54，45.18，28.12，19.51，19.23.
MALDI-TOF466(M-HCl+Na+)，464(M-HCl+Na+)，444(M-HCl+H+)，442(M-HCl+H+).
元素分析，C17H21BrClN3O4S的計算值C 42.64，H 4.42，N 8.78。實測值C 42.60，H 4.20，N 8.52。
實施例4制備化合物13化合物9的合成是按照與實施例1中描述的制備CGS 27023的相同方法進行的，在圖1的式V中，X＝BnO(N-(叔丁氧基)-2(R)-[[(4-芐氧基苯基)磺?；鵠(3-吡啶甲基)氨基]-3-甲基丁酰胺)。
將1.20g(2.28mmol)相當于附圖1式V的化合物(其中X＝BnO)溶解在30ml無水甲醇中，用111mg Pd/C(10％)處理，在氫氣氛下攪拌66小時。過濾出結(jié)晶，用80ml甲醇洗滌。將溶劑蒸發(fā)，把固體殘余物真空干燥。從氯仿中重結(jié)晶，獲得了797mg(1.83mmol，80％)無色細小結(jié)晶產(chǎn)物附圖1式V，其中X＝OH(N-(叔丁氧基)-2-(R)-[[(4-羥基苯基)磺?；鵠(3-吡啶甲基)氨基]-3-甲基-丁酰胺)
mp 160-162℃.
1H-NMR(300MHz，DMSO-D6)δ[ppm]10.74(s，1H，OH)，8.64(s，1H，H芳基)，8.54(m，1H，H芳基)，7.83(d，3J＝7.9Hz，1H，H芳基)，7.63(d，3J＝8.7Hz，2H，H芳基)，7.37(dd，3J1＝7.8Hz，3J2＝4.8Hz，1H，H芳基)，6.91(d，3J＝8.7Hz，2H，H芳基)，4.80(s，2H，CH2)，4.09(d，3J＝10.6Hz，1H，N-CH)，2.09-1.97(m，1H，CH(CH3)2)，1.22(s，9H，C(CH3)3)，0.93(d，3J＝6.3Hz，3H，CH(CH3)2)，0.86(d，3J＝6.3Hz，3H，CH(CH3)2).
13C-NMR(75.5MHz，DMSO-D6)δ[ppm]168.14，161.56，150.30，148.49，136.64，133.85，130.87，129.43，123.18，115.78，81.04，63.07，45.52，28.56，26.60，19.59，19.20.
MALDI-TOF474(M+K+)，458(M+Na+)，436(M+H+).
將600mg(1.38mmol)其中X＝OH的附圖1式V化合物溶解在含有80μl(1.38mmol)乙醇的30ml二氯乙烷中。將該溶液冷卻至-10℃，向其中通入3小時的氯化氫。將該反應容器密封，讓該混合物溫熱至室溫。攪拌2天后，通過蒸發(fā)把溶劑降至1/3體積，用乙醚處理殘余物。將所得懸浮液劇烈攪拌4小時。通過抽濾收集沉淀，真空干燥，獲得了562mg(1.35mmol，98％)化合物13，為無色粉狀固體。
1H-NMR(300MHz，DMSO-D6)δ[ppm]11.13(s，1H，OH)，10.83(s，1H，OH)，8.96(s，2H，H芳基)，8.59(d，3J＝8.0Hz，1H，H芳基)，8.11(dd，3J1＝7.7Hz，3J2＝5.9Hz，1H，H芳基)，7.77(d，3J＝8.6Hz，2H，H芳基)，7.06(d，3J＝8.6Hz，2H，H芳基)，5.11(d，2J＝16.8Hz，1H，CH2)，4.90(d，2J＝16.8Hz，1H，CH2)，4.01(d，3J＝10.6Hz，1H，N-CH)，2.25-2.12(m，1H，CH(CH3)2)，0.99(d，3J＝6.4Hz，3H，CH(CH3)2)，0.81(d，3J＝6.4Hz，3H，CH(CH3)2).
13C-NMR(75.5MHz，DMSO-D6)δ[ppm]166.32，162.04，144.85，142.09，141.17，138.99，129.72，129.59，126.45，115.93，63.30，44.98，28.08，19.49，19.33.
MALDI-TOF402(M-HCl+Na)+.
實施例5制備化合物8化合物8的合成是按照與實施例1中描述的制備CGS 27023的相同方法進行的，在圖1的式V中，X＝OH(N-(叔丁氧基)-2(R)-[[(4-羥基苯基)磺?；鵠(3-吡啶甲基)氨基]-3-甲基-丁酰胺)。
將1.00g(2.30mmol)其中X＝OH的附圖1式V化合物溶解在40ml甲醇中，用1.22g(11.5mmol)碳酸鈉處理。將該溶液在冰浴中冷卻，用1小時滴加2.3ml 1M一氯化碘在甲醇中的溶液。在加入期間，該溶液的深紅色幾乎立即消失。讓該混合物達到室溫，攪拌過夜。然后將該懸浮液過濾，把濾液用4ml 10％硫代硫酸鈉處理，用1N H2SO4調(diào)節(jié)至pH 7。用乙醚萃取后，將合并的萃取液用鹽水洗滌，并干燥(Na2SO4)。將該乙醚溶液真空濃縮，獲得了900mg N-(叔丁氧基)-2(R)-[[(4-羥基-3-碘苯基)磺?；鵠(3-吡啶甲基)-氨基]-3-甲基丁酰胺。該固體為淺粉紅色固體，其不用進一步純化直接用于下一步驟。
將900mg N-(叔丁氧基)-2(R)-[[(4-羥基-3-碘苯基)磺?；鵠(3-吡啶甲基)-氨基]-3-甲基丁酰胺粗產(chǎn)物溶解在含有93μl乙醇的二氯甲烷中。將該溶液冷卻至-10℃，向其中通入1.5小時氯化氫。將該反應容器密封，讓該混合物溫熱至室溫。在室溫攪拌19小時后，通過蒸發(fā)把溶劑減至約20ml，將殘余物用約50ml乙醚處理。將所得懸浮液劇烈攪拌1-2小時。通過抽濾收集沉淀，真空干燥，獲得了830mg無色淺黃色粉狀固體。從2倍的甲醇/乙腈(1∶1)中進行重結(jié)晶，獲得了150mg純的化合物8。
產(chǎn)率12％(兩步的產(chǎn)率)。
mp201-203℃.
1H-NMR(300MHz，DMSO-D6)δ[ppm]11.70(寬，s，1H，OH)，11.03(寬，s，1H，OH)，8.86(s，1H，H芳基)，8.84(s，1H，H芳基)，8.45(d，3J＝8.1Hz，1H，H芳基)，7.98(dd，3J1＝8.3Hz，3J2＝5.7Hz，1H，H芳基)，7.96(d，3J＝2.3Hz，1H，H芳基)，769(d，3J＝8.6Hz，1H，H芳基)，7.10(d，3J＝8.6Hz，1H，H芳基)，4.98(d，2J＝16.5Hz，1H，CH2)，4.82(d，2J＝16.5Hz，1H，CH2)，3.89(d，3J＝10.6Hz，1H，N-CH)，2.15-2.02(m，1H，CH(CH3)2)，0.87(d，3J＝6.6Hz，3H，CH(CH3)2)，0.69(d，3J＝6.6Hz，3H，CH(CH3)2).
13C-NMR(75.5MHz，DMSO-D6)δ[ppm]166.25，161.32，144.95，142.22，141.36，138.72，138.12，131.33，129.15，126.44，115.16，84.87，63.33，45.03，28.05，19.50，19.31.
元素分析，C17H21IN3O5SCl的計算值C 37.69，H 3.90，N 7.76；實測值C 37.84，H 4.42，N 7.39。
實施例6制備螯合劑16(a)3-(甲氧基羰基亞甲基)戊二酸二甲酯將在甲苯(600ml)中的甲氧羰基亞甲基三苯基正膦(167g，0.5mol)用3-氧代戊二酸二甲酯(87g，0.5mol)處理，將該反應在120℃的油浴上于100℃在氮氣氛下加熱36小時。然后將該反應真空濃縮，把該油狀殘余物用40/60石油醚乙醚1∶1，600ml研制。沉淀出了三苯基膦氧化物，將上清液傾出/過濾出。將真空蒸發(fā)的殘余物于高度真空Bpt下進行Kugelrohr蒸餾(烘箱溫度180-200℃，0.2托)，獲得了89.08g 3-(甲氧基羰基亞甲基)戊二酸二甲酯，267mM，53％。
NMR1H(CDCl3)δ3.31(2H，s，CH2)，3.7(9H，s，3xOCH3)，3.87(2H，s，CH2)，5.79(1H，s，＝CH，)ppm.
NMR13C(CDCl3)，δ36.56，CH3，48.7，2xCH3，52.09和52.5(2xCH2)；122.3和146.16C＝CH；165.9，170.0和170.53xCOO ppm.
6(b)3-(甲氧基羰基亞甲基)戊二酸二甲酯的氫化將在甲醇(200ml)中的3-(甲氧基羰基亞甲基)戊二酸二甲酯(89g，267mmol)與(10％披鈀炭50％水)(9g)在氫氣氛下(50psi)搖動(30小時)。將該溶液經(jīng)由硅藻土過濾，真空濃縮，獲得了3-(甲氧基羰基甲基)戊二酸二甲酯，為油狀物(84.9g，94％)。
NMR1H(CDCl3)，δ2.48(6H，d，J＝8Hz，3xCH2)，2.78(1H，六重峰，J＝8Hz CH，)3.7(9H，s，3xCH3).
NMR13C(CDCl3)，δ28.6，CH；37.50，3xCH3；51.6，3xCH2；172.28，3xCOO6(c)將三甲酯還原和酯交換以生成三乙酸酯在氮氣氛下，在2L三頸燒瓶內(nèi)，用1小時將在四氫呋喃(400ml)中的氫化鋰鋁(20g，588mmol)小心地用在四氫呋喃(200ml)中的三(甲氧基羰基甲基甲烷(40g，212mmol)處理。發(fā)生了劇烈的放熱反應，引起溶劑劇烈回流。將該反應在油浴上于90℃回流3天。通過小心地滴加乙酸(100ml)直至氫氣釋放停止來中止該反應。將該攪拌著的反應混合物小心地用乙酸酐溶液(500ml)處理，以引起輕微回流的速度進行處理。給燒瓶裝配上蒸餾裝置，攪拌，然后在90℃(油浴溫度)加熱以蒸餾出四氫呋喃。再加入一部分乙酸酐(300ml)將該反應返回回流配置，在油浴中于140℃攪拌和加熱5小時。讓該反應冷卻并過濾。將氧化鋁沉淀用乙酸乙酯洗滌，把合并的濾液在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上于50℃的水浴溫度真空(5mmHg)濃縮，獲得了油狀物。將該油狀物置于乙酸乙酯(500ml)中，用飽和碳酸鉀水溶液洗滌。分離出乙酸乙酯溶液，用硫酸鈉干燥，真空濃縮，獲得了油狀物。將該油狀物在高度真空下進行Kugelrohr蒸餾，獲得了三(2-乙酰氧基乙基)甲烷(45.313g，產(chǎn)率為95.9％，0.165mol)為油狀物。在0.1mmHg的沸點為220℃。
NMR1H(CDCl3)，δ1.66(7H，m，3xCH2，CH)，2.08(1H，s，3xCH3)；4.1(6H，t 3xCH2O).
NMR13C(CDCl3)，δ20.9，CH3；29.34，CH；32.17，CH2；62.15，CH2O；171，CO.
6(d)從三乙酸酯除去乙酸酯基團將在甲醇(200ml)和880氨(100ml)中的三(2-乙酰氧基乙基)甲烷(45.3g，165mM)在油浴上于80℃加熱2天。將該反應再用一部分880氨(50ml)處理，在油浴中于80℃加熱24小時。再加入一部分880氨(50ml)，將該反應在80℃加熱24小時。然后將該反應真空濃縮以除去所有溶劑，獲得了油狀物。將該油狀物置于880氨(150ml)中，在80℃加熱24小時。然后將該反應真空濃縮以除去所有溶劑，獲得了油狀物。進行Kugelrohr蒸餾，獲得了乙酰胺，bp 170-180℃0.2mm。將含有乙酰胺的該產(chǎn)物洗凈，繼續(xù)蒸餾。獲得了三(2-羥基乙基)甲烷(22.53g，152mmol，92.1％)，bp 220℃0.2mm。
NMR1H(CDCl3)，δ1.45(6H，q，3xCH2)，2.2(1H，五重峰，CH)；3.7(6H，t 3xCH2OH)；5.5(3H，brs，3xOH).
NMR13C(CDCl3)，δ22.13，CH；33.95，3xCH2；57.8，3xCH2OH.
6(e)將三醇轉(zhuǎn)化成三(甲磺酸酯)在氮氣氛下，向三(2-羥基乙基)甲烷(10g，0.0676mol)在二氯甲烷(50ml)內(nèi)的攪拌著的冰冷溶液中緩慢地滴加甲磺酰氯(40g，0.349mol)在二氯甲烷(50ml)中的溶液，加入速度使得溫度不超過15℃。然后以加入速度使得溫度不超過15℃的速度滴加溶解在二氯甲烷(50ml)中的吡啶(21.4g，0.27mol，4eq)，為放熱反應。將該反應在室溫攪拌24小時，然后浴5N鹽酸(80ml)處理，分離各層。將水層用二氯甲(50ml)萃取，合并有機萃取液，用硫酸鈉干燥，過濾，真空濃縮，獲得了含有過量的甲磺酰氯的三(2-(甲基磺酰氧基)乙基)甲烷。理論產(chǎn)量為25.8g。
NMR1H(CDCl3)，δ4.3(6H，t，2xCH2)，3.0(9H，s，3xCH3)，2(1H，六重峰，CH，)，1.85(6H，q，3xCH2).
6(f)制備1，1，1-三(2-疊氮基乙基)甲烷在氮氣氛下，用15分鐘向三(2-(甲基磺酰氧基)-乙基)甲烷[得自步驟6(e)，含有過量的甲磺酰氯](25.8g，67mmol，理論上的)在無水DMF(250ml)中的攪拌著的溶液分批加入疊氮化鈉(30.7g，0.47mol。觀察到放熱，將該反應在冰浴上冷卻。30分鐘后，將該反應混合物在油浴上于50℃加熱24小時。該反應混合物變?yōu)樽厣?。讓該反應冷卻，用稀的碳酸鉀溶液(200ml)處理，用40/60石油醚/乙醚10∶1(3×150ml)萃取3次。將有機萃取液用水(2×150ml)洗滌，用硫酸鈉干燥，過濾。將乙醇(200ml)加到該石油醚/乙醚溶液中以把三疊氮化物保持在溶液中，真空濃縮至體積小于200ml。加入乙醇(200ml)，再次真空濃縮，以除去石油醚，至乙醇溶液小于200ml。
注意不要除去所有溶劑，因為疊氮化物有可能爆炸，并且應當在所有時間保持稀溶液。
NMR1H(CDCl3)，δ3.35(6H，t，3xCH2)，1.8(1H，六重峰，CH，)，1.6(6H，q，3xCH2).
6(g)制備1，1，1-三(2-氨基乙基)甲烷將在乙醇(200ml)中的三(2-疊氮基乙基)甲烷(15.06g，0.0676mol)，(假定在上一反應中是100％產(chǎn)率)用10％披鈀炭(2g，50％水)處理，氫化2小時。每隔2小時就將該反應容器抽空一次以除去反應中釋放出的氮氣，用氫氣填充。取樣本進行NMR分析以確定三疊氮化物完全轉(zhuǎn)化為三胺。
注意未反應的疊氮化物有可能在蒸餾時爆炸。
將該反應經(jīng)由硅藻土墊過濾以除去催化劑，真空濃縮，獲得了三(2-氨基乙基)甲烷，為油狀物。通過在0.4mm/Hg進行Kugelrohr蒸餾(bp.180-200℃)，獲得了無色油狀物(8.1g，55.9mmol，從三醇開始的總產(chǎn)率為82.7％)。
NMR1H(CDCl3)，2.72(6H，t，3xCH2N)，1.41(H，七重峰，CH)，1.39(6H，q，3xCH2).
NMR13C(CDCl3)，δ39.8(CH2NH2)，38.2(CH2.)，31.0(CH).
1，1，1-三(2-氨基乙基)甲烷可通過另一下述方法制得6(g)(i)使用對甲氧基芐基胺將三甲酯酰胺化將(甲氧基羰基甲基)甲烷[2g，8.4mmol；在上面的步驟6(b)中制得的]溶解在對甲氧基芐基胺(25g，178.6mmol)中。安裝上蒸餾裝置，在氮氣流下于120℃加熱24小時。通過收集的甲醇的量來監(jiān)測反應進程。將該反應混合物冷卻至室溫，加入30ml乙酸乙酯，然后將沉淀的三酰胺產(chǎn)物攪拌30分鐘。通過過濾分離出該三酰胺，將氯餅用足量的乙酸乙酯洗滌幾次以除去過量對甲氧基-芐基胺。干燥后，獲得了4.6g，100％白色粉末。該高度不溶的產(chǎn)物不用進一步純化或鑒定直接用于下一步驟。
6(g)(ii)制備1，1，1-三[2-(對甲氧基芐基氨基)乙基]甲烷在冰水浴中冷卻的1000ml三頸燒瓶內(nèi)，將得自步驟2(a)的三酰胺(10g，17.89mmol)小心地加到250ml 1M硼烷溶液(3.5g，244.3mmol中。加入完全后，移去冰水浴，將該反應混合物緩慢地加熱至60℃。將該反應混合物在60℃攪拌20小時。取出該反應混合物的樣本(1ml)，與0.5ml 5N HCl混合，靜置30分鐘。向該樣本中加入0.5ml 50NaOH，然后加入2ml水，將該溶液攪拌直至所有白色沉淀溶解。將該溶液用乙醚(5ml)萃取，蒸發(fā)。將殘余物以1mg/ml的濃度溶解在乙腈中，通過MS分析。如果在MS譜中發(fā)現(xiàn)一酰胺和二酰胺(M+H/z＝520和534)，則該反應未完全。為了反應完全，再加入100ml 1M硼烷的THF溶液，將該反應混合物在60℃再攪拌6小時，按照上一取樣操作取出一份新的樣本。按照需要再加入1M硼烷的THF溶液，直至完全轉(zhuǎn)化為三胺。
將該反應混合物冷卻至室溫，緩慢地加入5N HCl[注意發(fā)生劇烈的泡沫形成！]。加入HCl直至不再觀察到有氣體釋放出來。將該混合物攪拌30分鐘，然后蒸發(fā)。將殘余物懸浮在NaOH溶液(20-40％；1∶2w/v)中，攪拌30分鐘。然后將該混合物用水(3體積)稀釋。將該混合物用乙醚(2×150ml)萃取[注意不用使用鹵代溶劑]。然后將合并的有機相用水(1×200ml)、鹽水(150ml)洗滌，用硫酸鎂干燥。蒸發(fā)后獲得了7.6g，84％，為油狀物。
NMR1H(CDCl3)，δ1.45，(6H，m，3xCH2；1.54，(1H，七重峰，CH)；2.60(6H，t，3xCH2N)；3.68(6H，s，ArCH2)；3.78(9H，s，3xCH3O)；6.94(6H，d，6xAr).7.20(6H，d，6xAr).
NMR13C(CDCl3)，δ32.17，CH；34.44，CH2；47.00，CH2；53.56，ArCH2；55.25，CH3O；113.78，Ar；129.29，Ar；132.61；Ar；158.60，Ar；6(g)(iii)制備1，1，1-三(2-氨基乙基)甲烷將1，1，1-三[2-(對甲氧基芐基氨基)乙基]甲烷(20.0g，0.036mol)溶解在甲醇(100ml)中，加入Pd(OH)2(5.0g)。將該混合物氫化(3巴，100℃，在高壓釜中)，攪拌5小時。分別在10和15小時之后分兩批加入Pd(OH)2(2×5g)。將該反應混合物過濾，將濾液用甲醇洗滌。將合并有機相蒸發(fā)，把殘余物真空蒸餾(1×10-2，110℃)，獲得了2.60克(50％)1，1，1-三(2-氨基乙基)甲烷，與通過前面所述方法獲得的相同。
6(h)制備3-氯-3-甲基-2-亞硝基丁烷將2-甲基丁-2-烯(147ml，1.4mol)與亞硝酸異戊酯(156ml，1.16mol)的混合物在cardice與甲醇的浴中冷卻至-30□，用高架攪拌器劇烈攪拌，滴加濃鹽酸(140ml，1.68mol)，滴加速度使得溫度保持在-20℃以下。這需要約1小時，由于這是劇烈的放熱，所以必須注意防止過熱。加入乙醇(100ml)以降低在加入結(jié)束時形成的漿液的粘度，將該反應在-20℃--10℃攪拌2小時以反應完全。通過真空過濾收集沉淀，用4×30ml冷(-20℃)乙醇和100ml冰冷的水洗滌，真空干燥，獲得了3-氯-3-甲基-2-亞硝基丁烷，為白色固體。將乙醇濾液和洗滌液合并，用水(200ml)稀釋，冷卻，并在-10℃靜置1小時，又獲得了一批結(jié)晶出的3-氯-3-甲基-2-亞硝基丁烷。通過過濾收集該沉淀，用最小所需量的水洗滌，真空干燥，總共獲得了3-氯-3-甲基-2-亞硝基丁烷(115g 0.85mol，73％)＞98％純度(NMR)。
NMR1H(CDCl3)，異構(gòu)體的混合物(異構(gòu)體1，90％)1.5d，(2H，CH3)，1.65d，(4H，2×CH3)，5.85，q，和5.95，q，以及1H.(異構(gòu)體2，10％)，1.76s，(6H，2×CH3)，2.07(3H，CH3)。
6(i)合成二[N-(1，1-二甲基-2-N-羥基亞胺丙基)2-氨基乙基]-(2-氨基乙基)甲烷(螯合劑1)在室溫，氮氣氛下，于劇烈攪拌下向三(2-氨基乙基)甲烷(4.047g，27.9mmol)在無水乙醇(30ml)內(nèi)的溶液中加入無水碳酸鉀(7.7g，55.8mmol，2eq)。將3-氯-3-甲基-2-亞硝基丁烷(7.56g，55.8mol，2eq)溶解在無水乙醇(100ml)中，將75ml該溶液緩慢地滴加到該反應混合物內(nèi)。通過二氧化硅TLC純化該反應，用二氯甲烷、甲醇、濃(0.88sg)氨水；100/30/5展開，通過用茚三酮噴霧和加熱來使TLC平板顯色。觀察到了一、二和三烷基化產(chǎn)物，其RF值以該順序增加。使用RPR反相柱進行分析HPLC，用7.5-75％乙腈在3％氨水中的混合物進行梯度洗脫。將該反應真空濃縮以除去乙醇，懸浮在水(110ml)中。將該水漿液用乙醚(100ml)萃取以除去某些三烷基化化合物和親脂性雜質(zhì)，使得在水層中留下一烷基化產(chǎn)物和所需的二烷基化產(chǎn)物。將該水溶液用乙酸銨(2eq，4.3g，55.8mmol)緩沖以保證良好的色譜純化。將該水溶液在4℃保藏過夜，然后通過自動制備HPLC純化。
產(chǎn)率(2.2g，6.4mM，23％)。
質(zhì)譜陽離子10V錐形電壓。實測值344；計算的M+H＝344。
NMR1H(CDCl3)，δ1.24(6H，s，2xCH3)，1.3(6H，s，2xCH3)，1.25-1.75(7H，m，3xCH2，CH)，(3H，s，2xCH2)，2.58(4H，m，CH2N)，2.88(2H，t CH2N2)，5.0(6H，s，NH2，2xNH，2xOH).
NMR1H((CD3)2SO)δ1.14xCH；1.29，3xCH2；2.1(4H，t， 2xCH2)；NMR13C((CD3)2SO)，δ9.0(4xCH3)，25.8(2xCH3)，31.0 2xCH2，34.6 CH2，56.8 2xCH2N；160.3，C＝N.
HPLC條件流速8ml/分鐘，使用25mm PRP柱A＝3％氨溶液(sp.gr＝0.88)/水。
B＝乙腈時間 ％B0 7.51575.02075.0227.5307.5每次運轉(zhuǎn)加3ml水溶液，在12.5-13.5分鐘的時間窗口收集。
實施例7制備化合物10合成途徑如圖2所示。
7(a)4-(1-叔丁氧基羰基-2-甲基-丙基氨磺?；?-苯甲酸甲酯(化合物1*)在室溫向2-氨基-3-甲基-丁酸叔丁酯(H-D-Val-OtBu.HCl)(500mg，2.38mmol)在乙腈(20ml)內(nèi)的攪拌著的懸浮液中加入吡啶(767μl，9.52mmol)。迅速獲得了澄清無色溶液。然后滴加4-氯磺酰基-苯甲酸甲酯(670mg，2.86mmol)在乙腈(6ml)中的溶液，該混合物變?yōu)闇\黃色，在室溫攪拌4小時。通過TLC(EtOAc/己烷，1∶1)監(jiān)測該反應。將溶劑蒸發(fā)，加入乙酸乙酯(50ml)和飽和碳酸氫鈉溶液(10ml)。將該混合物轉(zhuǎn)移到分液漏斗內(nèi)，劇烈搖晃。然后分離各相，將乙酸乙酯相用鹽水洗滌(10ml)，干燥(MgSO4)，過濾并蒸發(fā)，獲得了粗產(chǎn)物。通過快速色譜法純化(乙酸乙酯/己烷，1∶1)，獲得了純的產(chǎn)物，為白色固體。產(chǎn)量880mg(99.55％)。
7(b)4-[(1-叔丁氧基羰基-2-甲基-丙基)-吡啶-3-基甲基-氨磺?；鵠-苯甲酸甲酯(化合物2*)在室溫向4-(1-叔丁氧基羰基-2-甲基-丙基氨磺?；?-苯甲酸甲酯(化合物1*-884mg，2.38mmol)在二甲基甲酰胺(30ml)內(nèi)的攪拌著的溶液中加入碳酸銫(10.86g，33.34mmol)。然后向該懸浮液中加入3-吡啶甲基氯鹽酸鹽(546mg，3.33mmol)，將該反應混合物在室溫攪拌24小時，這時TLC(EtOAc/己烷1∶1)監(jiān)測表明反應完全。將該混合物蒸發(fā)至干，把殘余物在乙酸乙酯(50ml)中攪拌。將乙酸乙酯相用水(1×50ml)萃取，干燥(MgSO4)，過濾并蒸發(fā)，獲得了粗產(chǎn)物，為棕色油狀物。通過快速色譜法純化該油狀物，獲得了純的產(chǎn)物，為無色油狀物。產(chǎn)量800mg(79.21％)。
7(c)4-[(1-羧基-2-甲基-丙基)-吡啶-3-基甲基-氨磺酰基]-苯甲酸甲酯(化合物3*)將酯(化合物2*-321mg，0.75mmol)溶解在二氯甲烷(15ml)中，冷卻至-10℃。向該溶液中通入10分鐘的氯化氫氣體。將該反應混合物密封，溫熱至室溫，攪拌16小時。將溶劑蒸發(fā)，把殘余物與二氯甲烷(2×10ml)共蒸發(fā)，獲得了產(chǎn)物，為白色泡沫狀物(278mg，產(chǎn)率為83.73％).
7(d)4-[(1-羥基氨基甲酰基-2-甲基-丙基)-吡啶-3-基甲基-氨磺?；鵠-苯甲酸甲酯(化合物5*)將酸(化合物3*-112mg，0.28mmol)、1-羥基苯并三唑(39mg，0.29mmol)、4-甲基嗎啉(297μl，1.4mmol)和O-叔丁基二甲基甲硅烷基)羥基胺(124mg，0.84mmol)溶解在二氯甲烷(8ml)中。加入N-[(二甲基氨基)丙基]-N’-乙基碳二亞胺鹽酸鹽(73mg，0.38mmol)，將該反應混合物攪拌24小時。將該反應混合物用水(10ml)稀釋，用二氯甲烷(2×10ml)萃取。將合并的二氯甲烷相干燥(Na2SO4)，過濾。向濾液中加入幾滴氯化氫在二氧雜環(huán)己烷中的溶液，直接獲得了游離的異羥肟酸(108mg)。
7(e)4-[(1-羥基氨基甲酰基-2-甲基-丙基)-吡啶-3-基甲基-氨磺?；鵠-苯甲酸(化合物6*)將2N氫氧化鈉(200l)加到酯(化合物5*-32mg，0.072mmol)在甲醇(1ml)內(nèi)的溶液中，將該混合物在室溫攪拌。30分鐘后，將該混合物蒸發(fā)至干，把殘余物溶解在水(2ml)中。使用2N HCl將該溶液酸化。通過制備HPLC純化后，獲得了純的產(chǎn)物，為白色粉末(28mg，產(chǎn)率為95.01％)。
7(f)4-[(1-羥基氨基甲?；?2-甲基-丙基)-吡啶-3-基甲基-氨磺?；鵠-N-{5-(2-羥基亞氨基-1，1-二甲基-丙基氨基)-3-[2-(2-羥基亞氨基-1，1-二甲基-丙基氨基)-乙基]-戊基}-苯甲酰胺(化合物10)將酸(化合物6*)-12.5mg，0.031mmol)、1-羥基苯并三唑(3.68mg，0.027mmol)、4-甲基嗎啉(17.4μl，0.124mmol)和N-[(二甲基氨基)丙基]-N’-乙基碳二亞胺鹽酸鹽(8.06mg，0.042mmol)溶解在二甲基甲酰胺(2ml)中。加入螯合劑1(13mg，0.037mmol)，將該反應混合物攪拌24小時。將溶劑蒸發(fā)后，獲得了粗產(chǎn)物，直接通過HPLC純化(梯度00_30_60)。產(chǎn)物為淺棕色樹膠狀物(2mg，產(chǎn)率為9％)。
實施例8制備化合物11化合物11的合成如圖3所示。
8(a)2-(4-甲氧基-苯磺酰基氨基)-3-甲基-丁酸叔丁酯在室溫向2-氨基-3-甲基-丁酸叔丁酯(H-D-Val-OtBu.HCl)(500mg，2.38mmol)在乙腈(20ml)內(nèi)的攪拌著的懸浮液中加入吡啶(767μl，9.52mmol)。迅速獲得了澄清無色溶液。然后滴加4-甲氧基苯磺酰氯(541mg，2.62mmol)在乙腈(10ml)中的溶液，該混合物變?yōu)闇\黃色，在室溫攪拌。TLC(EtOAc/己烷，1∶1)監(jiān)測表明該反應在3小時后完成。將乙腈蒸發(fā)后，把殘余物置于二氯甲烷(30ml)后，分別用10％碳酸氫鈉溶液(30ml)和水(30ml)萃取一次。然后分離各相，將二氯甲烷相干燥(Na2SO4)，過濾并蒸發(fā)，獲得了粗產(chǎn)物。通過快速色譜法純化(乙酸乙酯/己烷，1∶1)，獲得了純的產(chǎn)物，為白色固體。產(chǎn)量801mg(93.90％)。
8(b)4-{[(1-叔丁氧基羰基-2-甲基-丙基)-(4-甲氧基-苯磺?；?-氨基]-甲基}苯甲酸甲酯(化合物7*)在室溫向2-(4-甲氧基-苯磺酰基氨基)-3-甲基-丁酸叔丁酯(140mg，0.41mmol)在乙腈(5ml)內(nèi)的攪拌著的溶液中加入碳酸銫(1.33g，4.10mmol)。然后將4-(溴甲基)苯甲酸甲酯(115mg，0.50mmol)加到該懸浮液中，將該反應混合物在70℃攪拌1小時，這時TLC(EtOAc/己烷1∶1)監(jiān)測表明反應完全。冷卻至室溫后，將該混合物過濾以除去過量碳酸銫，蒸發(fā)至干。通過快速色譜法純化殘余物(EtOAc/己烷1∶1)，獲得了純的產(chǎn)物，為淺黃色油狀物。產(chǎn)量153mg(76％)。
8(c)4-{[(1-叔丁氧基羰基-2-甲基-丙基)-(4-甲氧基-苯磺?；?-氨基]-甲基}-苯甲酸(化合物8*)將二酯(化合物7*)(151mg，0.31mmol)溶解在四氫呋喃(2ml)中，在室溫加入4N LiOH(250μl)。將該混合物在60℃加熱5小時，HPLC監(jiān)測表明水解完全。將該混合物冷卻至室溫，將溶劑蒸發(fā)。把殘余物溶解在水中，用乙醚將該澄清溶液萃取一次。然后把水相冷卻至5℃(冰/水)，用1N HCl中和，然后用乙酸乙酯(3×5ml)萃取。將合并的乙酸乙酯相用水(5ml)和鹽水(5ml)萃取，干燥(Na2SO4)過濾并蒸發(fā)，獲得了產(chǎn)物，為白色泡沫狀物。產(chǎn)量133mg(90％)。
8(d)2-[(4-{5-(2-羥基亞氨基-1，1-二甲基-丙基氨基)-3-[2-(2-羥基亞氨基-1，1-二甲基丙基氨基)-乙基]-戊基氨基甲?；鶀-芐基)-(4-甲氧基-苯磺?；?-氨基]-3-甲基-丁酸叔丁酯(化合物9*)向在二甲基甲酰胺(4ml)內(nèi)的酸(化合物8*)(61mg，0.13mmol)中加入N，N-二異丙基乙胺(46μl，0.26mmol)、N-[(二甲基氨基)-1H-1，2，3-三唑并[4，5-b]吡啶-1-基亞甲基]甲基甲烷六氟磷酸銨N-氧化物，HATU(49mg，0.15mmol)和C-Pn216(51mg，0.15mmol)。將該反應混合物在室溫攪拌，1小時后，HPLC表明完全轉(zhuǎn)化為新的產(chǎn)物。將該混合物蒸發(fā)至干，通過快速色譜法純化(氯仿∶甲醇，8/2)純化之后，分離出了純的產(chǎn)物，為白色結(jié)晶。產(chǎn)量66mg。
8(e)2-[(4-{5-(2-羥基亞氨基-1，1-二甲基-丙基氨基)-3-[2-(2-羥基亞氨基-1，1-二甲基丙基氨基)-乙基]-戊基氨基甲酰基}-芐基)-(4-甲氧基-苯磺?；?-氨基]-3-甲基-丁酸(化合物10*)將二氯甲烷(4ml)加到叔丁酯(化合物9*)(64mg，0.08mmol)中，向在室溫獲得的該乳色溶液中通入氯化氫氣體10分鐘。將該混合物蒸發(fā)至干，將殘余物與二氯甲烷(5×5ml)共蒸發(fā)，獲得了產(chǎn)物，為灰白色固體。產(chǎn)量58mg(97％)。M+1＝747。
8(f)4-{[(1-羥基氨基甲酰基-2-甲基-丙基)-(4-甲氧基-苯磺?；?-氨基]甲基}-N-(5-(2-羥基亞氨基-1，1-二甲基-丙基氨基)-3-[2-(2-羥基亞氨基-1，1-二甲基-丙基氨基)-乙基]-戊基}-苯甲酰胺(化合物11)將異羥肟酸通過叔丁基二甲基甲硅烷基保護的中間體(化合物11*)連接上去。因此，將酸(化合物10*)(57mg，0.76mmol)、4-甲基嗎啉(34μl，0.30mmol)、[7-氮雜苯并三唑-1-基氧基三(吡咯烷子基)鏻六氟磷酸鹽]PyAOP，40mg，0.076mmol)和O-(叔丁基二甲基甲硅烷基)羥基胺(12mg，0.08mmol)在二甲基甲酰胺(4ml)中的混合物于室溫攪拌，通過HPLC監(jiān)測反應。3小時后停止反應，將溶劑蒸發(fā)。把殘余物再溶解在二氯甲烷中，在室溫向該混合物中通入氯化氫氣體10分鐘。將該混合物蒸發(fā)至干，將殘余物與二氯甲烷(5×5ml)共蒸發(fā)。HPLC純化之后獲得了產(chǎn)物，為白色粉末，M+H，762。產(chǎn)量15mg。
實施例9制備化合物189(a)2-[[4-(2-{2-[2-(2-疊氮基-乙氧基)-乙氧基]-乙氧基}-乙基氨基甲酰基)-芐基]-(4-甲氧基-苯磺?；?-氨基]-3-甲基-丁酸叔丁酯(化合物12*)向在二甲基甲酰胺(6ml)內(nèi)的酸(化合物8*；140mg，0.30mmol)中加入N，N’-二異丙基乙胺(104.51μl，0.60mmol)、N-[(二甲基氨基)-1H-1，2，3-三唑并[4，5-b]吡啶-1-基亞甲基]甲基甲烷六氟磷酸銨N-氧化物，HATU(114mg，0.30mmol)和2-{2-[2-(2-疊氮基-乙氧基)-乙氧基]-乙氧基}-乙胺(65.50mg，0.30mmol)。將該反應混合物在室溫攪拌，2小時后，HPLC表明完全轉(zhuǎn)化為新的產(chǎn)物。將該混合物蒸發(fā)至干，通過快速色譜法純化(乙酸乙酯)純化之后，分離出了純的產(chǎn)物，為無色油狀物。產(chǎn)量142mg(70％)。
9(b)2-[[4-(2-{2-[2-(2-氨基-乙氧基)-乙氧基]-乙氧基}-乙基氨基甲?；?-芐基]-(4-甲氧基-苯磺?；?-氨基]-3-甲基-丁酸叔丁酯(化合物13*)向疊氮化物(化合物12*；200mg；0.29mmol)在THF(5ml)內(nèi)的攪拌著的冷卻至0℃(冰/水)的溶液中加入三苯基膦(84，0.32mmol)。在該溫度下攪拌5分鐘后，移去冷卻浴，繼續(xù)在室溫攪拌19小時。然后加入水(200μl)，15分鐘后，分析(HPLC)表明水解完全。將溶劑蒸發(fā)，通過快速色譜法純化油狀殘余物，首先用CHCl3/甲醇(8∶2)洗脫，然后用CHCl3/甲醇/H2O洗脫，獲得了化合物，為無色油狀物。產(chǎn)率134mg(71％)。M+6529(c)2-[{4-[2-[2-{2-[2-(4-羧基-丁?；被?-乙氧基]-乙氧基}-乙氧基)-乙基氨基甲?；鵠-芐基]-(4-甲氧基-苯磺?；?-氨基}-3-甲基-丁酸叔丁酯CA1(化合物14*)
將胺(化合物13*；73mg，0.11mmol)、N，N-二異丙基乙胺(39μl，0.22mmol)和活性酯4-{5-(2-羥基亞氨基-1，1-二甲基-丙基氨基)-3-[2-(2-羥基亞氨基-1，1-二甲基-丙基氨基)-乙基]-戊基氨基甲?；鶀-硫代丁酸2，3，5，6-四氟-苯基酯(b；85mg，0.11mmol)在二甲基甲酰胺(5ml)中的溶液于室溫攪拌2小時，這時HPLC表明該反應已經(jīng)完全。將該混合物蒸發(fā)至干，通過快速色譜法純化殘余物(CHCl3/MeOH，8∶2)，獲得了產(chǎn)物，為樹膠狀物。產(chǎn)量54mg(45％)。
9(d)2-[{4-[2-(2-{2-[2-(4-羧基-丁?；被?-乙氧基]-乙氧基}-乙氧基)-乙基氨基甲酰基]-芐基}-(4-甲氧基-苯磺?；?-氨基]-3-甲基-丁酸cPn216，(化合物15*)將二氯甲烷(5ml)加到叔丁酯(化合物14*；50mg，0.046mmol)內(nèi)，向在室溫獲得的該乳色溶液中通入氯化氫氣體10分鐘。將該混合物蒸發(fā)至干，將殘余物與二氯甲烷(5×5ml)共蒸發(fā)，獲得了產(chǎn)物，為白色固體。產(chǎn)量47mg(99％).M+1＝1035。
9(e)4-[2-(2-{2-[2-(4-{[(1-羥基氨基甲?；?2-甲基-丙基)-(4-甲氧基-苯磺?；?-氨基]-甲基}-苯甲?；被?-乙氧基]-乙氧基}-乙氧基)-乙基氨基甲?；鵠-丁酸cPn216(化合物18)將異羥肟酸通過叔丁基二甲基甲硅烷基保護的中間體連接上去。因此，將酸(化合物15*；47mg，0.045mmol)、4-甲基嗎啉(20μl，0.18mmol)、[7-氮雜苯并三唑-1-基氧基三(吡咯烷子基)鏻六氟磷酸鹽]PyAOP(a；23.5mg，0.045mmol)和O-(叔丁基二甲基甲硅烷基)羥基胺(10mg，0.07mmol)在二甲基甲酰胺(4ml)中的混合物于室溫攪拌，通過HPLC監(jiān)測反應。1小時后停止反應，將溶劑蒸發(fā)。把殘余物再溶解在二氯甲烷中，在室溫向該混合物中通入氯化氫氣體10分鐘。將該混合物蒸發(fā)至干，將殘余物與二氯甲烷(5×5ml)共蒸發(fā)。HPLC純化之后獲得了產(chǎn)物，為白色粉末，M+H，1050，產(chǎn)量7mg(15％)。
實施例10制備化合物10(a)2-[{4-[2-(2-{2-[2-(2-羧基甲氧基-乙酰基氨基)-乙氧基]-乙氧基}-乙氧基)-乙基氨基甲?；鵠-芐基}-(4-甲氧基苯磺?；?-氨基]-3-甲基丁酸叔丁酯(化合物17*)將胺(化合物13*；60mg，0.092mmol)、N，N’-二異丙基乙胺(96μl，0.55mmol)和二甘醇酸酐(66mg，0.55mmol)在二甲基甲酰胺(6ml)中的混合物于室溫攪拌3小時，這時HPLC表明該反應已經(jīng)完全。將溶劑減壓蒸發(fā)，把殘余物溶解在含有0.1％TFA的乙腈中。在室溫攪拌5分鐘后，將該混合物蒸發(fā)至干，通過快速色譜法純化粗產(chǎn)物，使用CHCl3/MeOH/H2O，65∶25∶4。獲得了產(chǎn)物，為白色泡沫狀物。產(chǎn)量70.50mg(99.80％)。
10(b)2-[{4-[2-(2-{2-[2-(2-羧基甲氧基-乙?；被?-乙氧基]-乙氧基}-乙氧基)-乙基氨基甲酰基]-芐基}-(4-甲氧基苯磺?；?-氨基]-3-甲基丁酸叔丁酯-CA1綴合物(化合物18*)向在二甲基甲酰胺(5ml)內(nèi)的酸(化合物17*；70.50mg，0.092mmol)中加入N，N’-二異丙基乙胺(32μl，0.184mmol)、N-[(二甲基氨基)-1H-1，2，3-三唑并[4，5-b]吡啶-1-基亞甲基]甲基甲烷六氟磷酸銨N-氧化物，HATU(38mg，0.10mmol)和螯合劑1(CA1；34mg，0.10mmol)。將該反應混合物在室溫攪拌，6小時后，HPLC表明基本上完全轉(zhuǎn)化為新的產(chǎn)物。將該混合物蒸發(fā)至干，通過制備HPLC色譜法純化(乙腈∶水∶0.1％三氟乙酸，10∶80∶60)之后，分離出了純的產(chǎn)物，為白色晶體。產(chǎn)量21mg(21％)。
10(c)2-[{4-[2-(2-{2-[2-(2-羧基甲氧基-乙?；被?-乙氧基]-乙氧基}-乙氧基)-乙基氨基甲?；鵠-芐基}-(4-甲氧基苯磺?；?-氨基]-3-甲基丁酸叔丁酯-CA1綴合物(化合物19*)將二氯甲烷(3ml)加到叔丁酯(化合物18*；20mg，0.018mmol)內(nèi)，向在室溫獲得的該乳色溶液中通入氯化氫氣體60分鐘。將該混合物蒸發(fā)至干，將殘余物與二氯甲烷(5×5ml)共蒸發(fā)，獲得了產(chǎn)物，為灰白色固體。產(chǎn)量18mg(95％)。M+1＝1037。
10(d){[2-(2-{2-[2-(4-{[(1-羥基氨基甲酰基-2-甲基-丙基)-4-(4-甲氧基-苯磺?；?-氨基]-甲基}苯甲?；被?乙氧基]乙氧基}乙氧基)-乙基氨基甲?；鵠-甲氧基}乙酸-CA1綴合物(化合物19)將異羥肟酸通過叔丁基二甲基甲硅烷基保護的中間體連接上去。因此，將酸(化合物19*；18mg，0.017mmol)、4-甲基嗎啉(8μl，0.70mmol)、[7-氮雜苯并三唑-1-基氧基三(吡咯烷子基)鏻六氟磷酸鹽]PyAOP(9.4mg，0.017mmol)和O-(叔丁基二甲基甲硅烷基)羥基胺(4mg，0.026mmol)在二甲基甲酰胺(2ml)中的混合物于室溫攪拌，通過HPLC監(jiān)測反應。2小時后停止反應，將溶劑蒸發(fā)。把殘余物(化合物*)再溶解在二氯甲烷中，在室溫向該混合物中通入氯化氫氣體10分鐘。將該混合物蒸發(fā)至干，將殘余物與二氯甲烷(5×3ml)共蒸發(fā)。HPLC純化之后獲得了產(chǎn)物，為白色粉末，M+H，1052，產(chǎn)量4mg(22.35％)。
實施例11用99mTc標記化合物10、11、12、18和19以分別生成化合物1、2、3、16和17通過將10mg SnCl2和90mg MDP溶解在100ml氮氣催掃過的鹽水中來制得SnCl2/MDP溶液。向50μl 1mg/ml的一種化合物10、11或12在甲醇內(nèi)的溶液中加入(1)0.7ml甲醇，(2)0.5ml 0.1M碳酸鈉緩沖液，(3)0.5ml 500MBq/ml TcO4和(4)100μlSnCl2/MDP溶液。將該反應混合物在37℃加熱30分鐘以分別形成一種化合物1、2和3。
實施例12制備化合物4圖4顯示了制備化合物4的合成途徑。將4μl[123I]NaI在0.05NNaOH溶液中的溶液(12.04MBq)、39μl化合物13溶液(c＝1.23g/lMeOH)和71μl NCS-溶液(NCS＝N-氯琥珀酰亞胺)(c＝0.579g/l注射用水)加到錐形瓶中。
將該混合物渦旋1分鐘，任何在室溫于黑暗條件下?lián)u動60分鐘。然后加入25μlNa2S2O3溶液(c＝2.00g/l注射用水)，將該混合物再次渦旋。
將該溶液注射到梯度HPLC色譜系統(tǒng)上，該裝置具有γ-和UV檢測器和NucleosilTM反相C-185μ250×4mm2柱，該柱具有相應的20×4mm2前柱。
HPLC-條件洗脫劑ACH3CN/H2O/TFA 950/50/1洗脫劑BCH3CN/H2O/TFA 50/950/1時間程序在45分鐘內(nèi)洗脫劑B由92％變?yōu)?0％，然后在10分鐘內(nèi)由50％變?yōu)?2％流速 1.5ml/分鐘λ254nmRt(產(chǎn)物級分)18.50-19.80分鐘將該級分蒸發(fā)至干，再溶解在200μlPBS緩沖液內(nèi)，使用相同條件再注射到梯度HPLC系統(tǒng)上。
Rt(化合物)17.40-18.70分鐘。
該產(chǎn)物的質(zhì)量控制(HPLC，相同條件)在γ-和UV檢測中沒有表現(xiàn)出任何雜質(zhì)。放射化合物的產(chǎn)率為44％。
實施例13制備化合物5化合物5是化合物的125I變型。其是使用在實施例12中描述的相同方法制得的，但是使用[125I]NaI代替[123I]NaI。
實施例14制備化合物6將0.6mg 2，5-二羥基苯甲酸、0.8mg抗壞血酸、20μl注射用水和5μl CuSO4·5H2O溶液(c＝3.26g/l注射用水)加到含有50μl化合物14(c＝2.00g/l EtOH)的錐形瓶中。使用He氣流將該冰冷的混合物脫氣10分鐘。加入4μl[125I]NaI在0.05N NaOH溶液中的溶液(8.68MBq)，并渦旋。將該混合物在113℃加熱51分鐘，每5分鐘搖動一次。然后將該溶液注射到HPLC色譜系統(tǒng)上，如實施例10所述進行HPLC。Rt(產(chǎn)物級分)17.18-19.54分鐘。
將該級分蒸發(fā)至干，再溶解在200μl CH3CN/H2O/TFA50/950/1內(nèi)，再次注射到梯度HPLC系統(tǒng)上?；衔锏腞t21.05-21.36分鐘。
該產(chǎn)物的質(zhì)量控制(HPLC，相同條件)在γ-和UV檢測中沒有表現(xiàn)出任何雜質(zhì)。Rt參數(shù)是通過將等份試樣的化合物9(即非放射性化合物6)加到第二質(zhì)量控制注射中來實現(xiàn)的。
平均放射化合物產(chǎn)率23％(n＝5)。
實施例15制備化合物7化合物7是通過與制備化合物6相同的方法制得的，但是使用[123I]NaI來代替[125I]NaI。
實施例16制備化合物15圖7中顯示了可用于制備化合物15的合成途徑。
在合成途徑A中，用氮氣吹掃燒瓶，然后依次加入二氯(雙三苯基膦)鈀(II)(0.1equiv)和乙酸鉀(3equiv)。加入N-甲基吡咯烷酮(5ml)，然后依次加入化合物9(1equiv)和三丁基氫化錫(2equiv)。將該反應混合物于室溫攪拌24小時。然后將該反應混合物用乙酸乙酯稀釋，用水洗滌，用硫酸鎂干燥。將溶劑蒸發(fā)，HPLC純化之后，分離出了產(chǎn)物。
在合成途徑B中，用氮氣吹掃燒瓶，然后加入化合物14和無水甲苯。向該燒瓶中依次加入六丁基二錫和四(三苯基膦)鈀。將該反應混合物加熱回流24小時，獲得了產(chǎn)物。
實施例17制備化合物710μl 0.1mM Na127I在0.01M NaOH中的溶液加到200μl 0.2MNH4OAc(pH 4)中。然后將Na127I/NH4Oac溶液加到11.0μl Na123I在0.05M NaOH內(nèi)的溶液(111MBq)中。將合并的溶液轉(zhuǎn)移到硅化塑料瓶中。通過將5μl 36-40wt％的過乙酸在乙酸中溶液加到5ml H2O中來制備過乙酸溶液。然后將5μl制備的過乙酸溶液加到含有Na123/127I的瓶中。最后，將在硅化塑料瓶中的17μl 3mM三丁基錫前體(化合物15)溶液加到該反應混合物中，讓該溶液靜置3分鐘。
使用具有γ-和UV檢測器和反相Phenomenex C18(2)Luna 5μ，150×4.6mm柱的梯度HPLC色譜分析或純化化合物7。
HPLC-條件洗脫劑A0.1％TFA的H2O水溶液洗脫劑B0.1％TFA在CH3CN中的水溶液在20分鐘的時間內(nèi)洗脫劑B從20％變?yōu)?0％。
20分鐘80％B20.2分鐘100％B23.2分鐘100％B23.7分鐘20％B流速1mi/分鐘λ254nmRt7分鐘實施例18測定MMP-2和MMP-9抑制活性按照現(xiàn)有技術(shù)描述的方法[Huang等人，J.Biol.Chem.272 22086-22091(1997)]使用合成的廣譜熒光底物(7-甲氧基香豆素-4-基)乙?；鵳ro-Leu-Gly-Leu-(3-(2，4-二硝基苯基)-L-2，3-二氨基-丙?；?-Ala-Arg-NH2(R & D Systems)來測定MMP-2和MMP-9活性。如下所述測定CGS 27023和化合物8、9、13和14對MMP-2和MMP-9的抑制作用將MMP-2(1nM)或MMP-9(2nM)和欲測定化合物以不同濃度(10pm-1mM)在含有0.2M NaCl、5mM CaCl2、20μM ZnSO4和0.05％Brij 35的50mM Tris-HCl，pH 7.5中于37℃預培養(yǎng)30分鐘。然后將等份試樣(10μl)的底物(5μM)加到90μM欲培養(yǎng)的MMP/化合物混合物內(nèi)，在37℃通過產(chǎn)物隨時間的釋放來測定活性。使用Fusion UniversalMicroplate Analyzer(Packard Bioscience)以分別設定為330和390nm的激發(fā)波長和發(fā)射波長來測定關(guān)于MMP-2和MMP-9的熒光變化。由其中產(chǎn)物釋放與時間成線性關(guān)系的反應曲線的前10分鐘測定抑制比例。使用XMGRACE 5.18軟件在linux下進行非線性回歸分析。
下表2給出了獲得的所分析化合物的IC50值。
表2化合物8、9、13和14對MMP-2和MMP-9活性的抑制作用與CGS 27023A的比較。
實施例19ApoE(-/-)小鼠模型將ApoE(-/-)小鼠(4周大小，20-28g)通過腹膜內(nèi)注射賽拉嗪/氯胺酮(Bayer，Germany)來進行麻醉。使用5-0絲線(Ethicon)將左頸動脈在分歧附近結(jié)扎。在假手術(shù)對照中，讓縫線在左頸動脈下面穿過而不扎緊。讓動物恢復一周，然后給予高膽固醇飲食(15％椰子油，1.0％膽固醇，0.5％膽酸鈉)。手術(shù)后5周，使用小鼠進行組織病理學、放射自顯影和成像試驗。
實施例20組織學和免疫組織化學方法如實施例16所述，給ApoE-/-小鼠灌注Langendorff緩沖液3分鐘。取出結(jié)扎部位以及左和右頸動脈，在液氮中迅速冷凍，不用進一步解剖。以同樣的空間間隔收集每組由5個切片組成的組(10μm，用于組織病理學分析)。
切結(jié)扎部位以及左和右頸動脈的手術(shù)樣本以獲得系列低溫切片(10μm)，在顯微鏡載物片上風干，在3.75％PFA(MMP-9)中固定10分鐘，4℃，丙酮10分鐘(MAC3，550292，BD Pharmingen，California，USA)。將切片在蘇木精和曙紅中染色。為了進行免疫組織化學分析，10分鐘，抗過氧化物酶試劑(S2001，DAKO，Denmark)，1％BSA 25分鐘，將切片與一抗(2μg/ml兔抗-小鼠MMP-9，AB19047，Chemicon，Germany)在室溫培養(yǎng)(30分鐘)或與對照抗體(兔IgG，E0432，DAKO，Denmark)在室溫培養(yǎng)1小時，其中培養(yǎng)在具有背景還原組分(S3022，DAKO，California，USA)的抗體稀釋液中進行，并且按照供應商的說明進行處理。山羊抗-兔IgG(H+L)生物素綴合的(AB132B，1∶500，Chemicon，Germany)25分鐘。鏈霉抗生物素蛋白-HRP(LSAB試劑盒，K0675，California，USA)25分鐘，AEC(K0696，DAKO，California，USA)20分鐘，蘇木精1分鐘，H2O 1-2分鐘。
圖8顯示了免疫組織化學分析結(jié)果以及放射自顯影結(jié)果，這些結(jié)果表明攝取量與MMP-9的存在相關(guān)。
實施例21體內(nèi)放射自顯影在給予放射配體之前2小時，給4只結(jié)扎的ApoE-/-小鼠在眼眶后注射0.5μCi(20MBq)在0.2ml 0.9％NaCl中的化合物5和CGS 27023(6mM，在200μl 0.9％NaCl中，用于非特異性結(jié)合)或鹽水，注射之后2小時將小鼠處死。迅速取出結(jié)扎部位以及左和右頸動脈，切成冷凍切片，然后加工成60μm的切片以進行微放射自顯影。
圖8顯示了放射自顯影結(jié)果以及如在實施例17中描述的免疫組織化學分析結(jié)果。
實施例22體內(nèi)成像將化合物4經(jīng)由眼眶后靜脈血管從注射，在使用超高分辨率準直儀的Siemens MULTISPECT 3γ照相機上進行平面成像。用1分鐘框架的初始成框獲得動態(tài)影像，加和至10分鐘框架進行分析。通過環(huán)形ROt(感興趣區(qū)域)分析斑面積，產(chǎn)生TAC(時間活性曲線)。
試驗A將在200μl 0.9％NaCl中的9MBq化合物4注射到各只小鼠(小鼠1-6)內(nèi)，注射后在最長達120分鐘拍攝動態(tài)影像。產(chǎn)生TAC，結(jié)果表明，在120分鐘的時間內(nèi)，結(jié)扎區(qū)域中標記的化合物的攝取量不斷增加(見圖9)。
試驗B2天后，將在200μl 0.9％NaCl中的6mM CGS 2702注射到取自上一試驗的小鼠4和5內(nèi)，2小時后，給小鼠4和5注射在200μl0.9％NaCl中的7.5MBq化合物4。也給小鼠1-3注射在200μl 0.9％NaCl中的7.5MBq化合物4，但是沒有進行冷的預先給藥。在120分鐘的時間內(nèi)獲得動態(tài)影像(圖10)，并產(chǎn)生TAC。比較試驗A中沒有進行預先給藥與試驗B中進行預先給藥的小鼠4和5中的攝取量，結(jié)果表明在預先給藥的動物中有較低的攝取量(見圖11)。
在試驗A期間另外測定肝臟、腎、膀胱、腦和胸的ROI。對于每個ROI，計算衰減校正的TAC，標準化到10分鐘p.i.活性，即每秒標準化的計數(shù)(見圖12)。
權(quán)利要求
1.包含用γ-發(fā)射放射性核素標記的式I所示基質(zhì)金屬蛋白酶抑制劑的診斷造影劑 R1選自氫、羥基、C1-6烷基、C6-14芳基、C7-20芳基烷基，或者與R5及其所連接的碳一起形成C6-8環(huán)烷基環(huán)或C4-6雜環(huán)基環(huán)，或者與R4一起形成含有5-7個原子和1或2個選自N或O的雜原子的C4-6雜環(huán)基環(huán)；R2和R3獨立地為氫、羥基、鹵素、C1-6烷基、C1-6烷氧基、C1-6氨基、C6-14芳基、C7-20芳基烷基或C7-20氨基甲?；蓟?；R4是C6-14芳基、C4-6雜芳基、C7-20芳基烷基、C7-20氨基甲?；蓟蚍蓟被柞；蓟磺襌5選自氫或C1-6烷基。
2.權(quán)利要求1的診斷造影劑，其中R1選自C1-6烷基、C6-14芳基或C7-20芳基烷基，或者與R5及其所連接的碳一起形成C4-6雜環(huán)基環(huán)；R2是氫、羥基、甲基、異丙基、甲氧基或鹵素；R3是氫；R4是吡啶基或(Ar1)y-(R)z(NH)-苯基，其中Ar1是亞苯基，R是CH2或C＝O，y＝0或1，且z＝0或1；且R5是氫。
3.權(quán)利要求1或2的診斷造影劑，其中R1是甲基、異丁基、異丙基、芐基或羥基芐基；R2是羥基、鹵素或甲氧基；R3是氫；R4是吡啶基或(Ar1)y-(R)z(NH)-苯基，其中Ar1是1，4-亞苯基，R是CH2或C＝O，y＝0或1，且z＝0或1；且R5是氫。
4.權(quán)利要求1-3的診斷造影劑，其中R5是氫，且基質(zhì)金屬蛋白酶抑制劑是式Ia化合物
5.權(quán)利要求1-4的診斷造影劑，其中一個R1-R4包含所述γ-發(fā)射放射性核素。
6.權(quán)利要求1-5的診斷造影劑，其中R2在磺酰胺的對位，且R3在磺酰胺的間位。
7.權(quán)利要求1-6的診斷造影劑，其中所述γ-發(fā)射放射性核素是選自99mTc、111In、113mIn、67Cu或67Ga的γ-發(fā)射放射性金屬。
8.權(quán)利要求7的診斷造影劑，其中所述γ-發(fā)射放射性金屬作為γ-發(fā)射放射性金屬與一個或多個配體的金屬絡合物的一部分存在。
9.權(quán)利要求8的造影劑，其中所述金屬絡合物連接在式I的R1、R2或R4位上。
10.權(quán)利要求8和9的診斷造影劑，所述診斷造影劑是式II所示造影劑[{基質(zhì)金屬蛋白酶抑制劑}-(A)n]m-[金屬絡合物](II)其中-(A)n-是連接基團，其中每個A獨立地為CR’2、CR’＝CR’、C≡C、CH2CH2O、CR’2CO2、CO2CR’2、NR’CO、CONR’、NR’(C＝O)NR’、NR’(C＝S)NR’、SO2NR’、NR’SO2、CR’2OCR’2、CR’2SCR’2、CR’2NRCR’2、C4-8亞環(huán)雜烷基、C4-8亞環(huán)烷基、C5-12亞芳基或C3-12亞雜芳基；R’獨立地選自H、C1-4烷基、C2-4鏈烯基、C2-4炔基、C1-4烷氧基烷基或C1-4羥基烷基；n是0-50的整數(shù)；且m是1、2或3。
11.權(quán)利要求8-10的診斷造影劑，其中所述一個或多個配體包含具有選自二胺二肟、N3S、N2S2、N4和N2O2的供體部分的鰲合劑。
12.權(quán)利要求1-6的診斷造影劑，其中所述γ-發(fā)射放射性核素是碘的γ-發(fā)射同位素。
13.權(quán)利要求12的診斷造影劑，其中所述碘的γ-發(fā)射同位素是123I。
14.權(quán)利要求12和13的診斷造影劑，其中所述碘的γ-發(fā)射同位素在式I或式Ia的芳環(huán)的3-或4-位通過直接的共價鍵連接。
15.包含式I或式Ia所示基質(zhì)金屬蛋白酶抑制劑的配體綴合物，所述抑制劑與適于配位選自99mTc、111In、113mIn、67Cu或67Ga的γ-發(fā)射放射性金屬的配體綴合。
16.權(quán)利要求15的配體綴合物，其中所述綴合物是式IIa所示綴合物[{基質(zhì)金屬蛋白酶抑制劑}-(A)n]m-[配體](IIa)其中(A)n、n和m如權(quán)利要求9中的式II所定義。
17.權(quán)利要求16的配體綴合物，其中所述配體是鰲合劑，其中在所述鰲合劑中，排列2-6個金屬配位原子以形成用于金屬配位的5或6元螯合劑環(huán)。
18.權(quán)利要求17的配體綴合物，其中所述鰲合劑選自二胺二肟、N3S配體、N2S2配體、N4配體和N2O2配體。
19.包含權(quán)利要求1-14任一項的診斷造影劑與生物相容載體的適于哺乳動物給藥形式的藥物組合物。
20.權(quán)利要求19的藥物組合物，其中所述組合物包含權(quán)利要求7-11的診斷造影劑。
21.權(quán)利要求19的藥物組合物，其中所述組合物包含權(quán)利要求12-14的診斷造影劑。
22.用于制備權(quán)利要求12-14的診斷造影劑的前體，所述前體包含適于與碘的γ-發(fā)射同位素反應以生成所述診斷造影劑的基團。
23.權(quán)利要求22的前體，其中所述適于與碘的γ-發(fā)射同位素反應的基團選自芳基碘、芳基溴、苯酚基團、三烷基錫衍生物、三烷基甲硅烷基衍生物、三氮烯基團或芳基重氮鹽。
24.用于制備權(quán)利要求19-21的藥物組合物的藥盒。
25.權(quán)利要求24的藥盒，其中所述藥物組合物如權(quán)利要求20所限定，所述藥盒包含權(quán)利要求15-18的配體綴合物。
26.權(quán)利要求25的藥盒，其中所述γ-發(fā)射放射性金屬是99mTc。
27.權(quán)利要求25和26的藥盒，其中所述藥盒還包含生物相容還原劑。
28.權(quán)利要求27的藥盒，其中所述生物相容還原劑是Sn2+。
29.權(quán)利要求24的藥盒，其中所述藥物組合物如權(quán)利要求21所限定，所述藥盒包含權(quán)利要求22和23的前體。
30.權(quán)利要求19-21的藥物組合物在心血管疾病的診斷成像中的應用。
31.權(quán)利要求30的應用，其中所述心血管疾病是動脈粥樣硬化。
32.權(quán)利要求30的應用，其中所述心血管疾病是充血性心力衰竭。
33.權(quán)利要求19-21的藥物組合物在炎性疾病的診斷成像中的應用。
34.權(quán)利要求33的應用，其中所述炎性疾病是慢性阻塞性肺病。
全文摘要
本發(fā)明涉及診斷成像領(lǐng)域。具體來說，本發(fā)明涉及其中已知涉及特定基質(zhì)金屬蛋白酶的疾病的診斷成像。本發(fā)明的一個實施方案是具有基質(zhì)金屬蛋白酶抑制劑活性的適于診斷成像的化合物。本發(fā)明還公開了包含本發(fā)明診斷造影劑的適于哺乳動物給藥形式的藥物組合物。本發(fā)明還公開了在本發(fā)明診斷造影劑的合成中的中間體，以及用于制備本發(fā)明藥物組合物的藥盒。本發(fā)明藥物組合物可用于已知涉及特定基質(zhì)金屬蛋白酶的疾病的診斷。
文檔編號A61K51/02GK1747749SQ200480003837
公開日2006年3月15日 申請日期2004年2月10日 優(yōu)先權(quán)日2003年2月10日
發(fā)明者A·斯托里, J·達維斯, S·-A·里克茨, M·門迪扎瓦爾, A·庫特伯特森, J·阿魯克維, K·海伍德, I·威爾遜, D·懷恩, M·沙菲爾斯, B·勒夫考, S·瓦納, H·－J·布雷霍爾茨, K·科普卡 申請人:通用電氣健康護理有限公司