專利名稱：長效的可注射胰島素組合物及其制備方法和使用方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本申請要求以下美國臨時申請的權(quán)益2003年3月4日提交的序列號為60/451,245的美國臨時申請；2003年5月5日提交的序列號為60/467,601的美國臨時申請；2003年5月9日提交的序列號為60/469,017的美國臨時申請和2003年8月15日提交的序列號為60/495,097的美國臨時申請，將其所有內(nèi)容以參考的方式引入本文。
本發(fā)明主要涉及胰島素組合物，特別地，本發(fā)明涉及含有胰島素和結(jié)晶的葡聚糖微粒的可注射胰島素組合物。
背景技術(shù)：
葡聚糖是通過一些微生物或生物化學(xué)方法合成的高分子量多糖。平均分子量約為75kDa的葡聚糖具有與血漿類似的膠體滲透壓，因此其水溶液在臨床中作為血漿膨脹劑使用。珠子形式的交聯(lián)葡聚糖是蛋白的GPC(凝膠滲透層析)中使用的“Sephadex”的基礎(chǔ)并作為由Pharmacia研發(fā)的“Cytodex”的基礎(chǔ)，該“Cytodex”用以滿足微載體細(xì)胞培養(yǎng)物的特殊需要。例如，專利號為6,395,302和專利號為6,303,148的美國專利(Hennink等)披露了將各種生物材料附著到交聯(lián)的葡聚糖微粒上。但是，由于應(yīng)用了交聯(lián)劑，使基于交聯(lián)葡聚糖的珠子具有潛在的毒性，所以該珠子通常不能用于植入體的制造(Blain J.F.，Maghni K.，Pelletier S.和Sirois P.炎癥研究(Inflamm.Res.)，48(1999)386～392)。
專利號為4,713,249的美國專利(Schroder)描述了用于生物活性物質(zhì)的貯存基質(zhì)的生產(chǎn)方法。根據(jù)該專利，所述的貯存基質(zhì)據(jù)說由碳水化合物微粒組成，通過結(jié)晶使其穩(wěn)定，這意味著使用了非共價鍵。以下是Schroder描述的生產(chǎn)所謂的結(jié)晶的碳水化合物微粒的方法。在一種或多種的親水溶劑中形成碳水化合物聚合物和生物活性物質(zhì)的溶液，然后在液體疏水介質(zhì)中將所述的碳水化合物和生物活性物質(zhì)的混合物乳化，以形成球形小滴。然后將該乳劑導(dǎo)入到含有丙酮、乙醇或甲醇的結(jié)晶介質(zhì)中，以形成具有非共價鍵交聯(lián)的結(jié)晶碳水化合物聚合物基質(zhì)的球狀體。所述基質(zhì)混合有0.001重量％～50重量％的生物活性物質(zhì)。因而，在使該球狀體結(jié)晶前，在所述溶液中加入生物活性物質(zhì)。Schroder并沒有描述通過所述多步法制備的微粒的微結(jié)構(gòu)。Schroder的多步法是復(fù)雜的，并且用到了對細(xì)胞具有潛在毒性并需要去除的有機(jī)溶劑。

發(fā)明內(nèi)容
在哺乳動物中降低血糖的方法，該方法包括給哺乳動物注射治療有效量的結(jié)晶的葡聚糖微粒和胰島素以降低該哺乳動物的血糖。該組合物可以是單相或結(jié)構(gòu)化的多相組合物，該組合物用于在很長時間內(nèi)控釋釋放胰島素。


圖1是分子量為70.0kDa的葡聚糖在55.0重量％的水溶液中自發(fā)形成的結(jié)晶的葡聚糖微粒的照片。
圖2A是在圖1中顯示的結(jié)晶的葡聚糖微粒的橫截面照片。
圖2B是在圖2A中顯示的微粒的橫截面照片，在該照片中可以看到該微粒的微孔結(jié)構(gòu)。
圖3是結(jié)晶的葡聚糖微粒的聚集體的照片。
圖4是肌肉間注射后第14天熒光標(biāo)記大分子從包括結(jié)晶的葡聚糖微粒的植入體緩慢釋放到小鼠肌肉組織中的照片。
圖5是在葡聚糖(分子量為500kDa)水溶液中的PEG(聚乙二醇)水溶液的乳劑的照片，所述的葡聚糖水溶液含有圖1中顯示的結(jié)晶的葡聚糖微粒。
圖6是在PEG水溶液中的葡聚糖(分子量為500kDa)水溶液的乳劑的照片，所述葡聚糖水溶液含有圖1中顯示的結(jié)晶的葡聚糖微粒。
圖7是葡聚糖(分子量為500kDa)水溶液中的PEG水溶液的乳劑的肌肉內(nèi)注射照片，所述葡聚糖水溶液含有圖1中顯示的結(jié)晶的葡聚糖微粒。
圖8是葡聚糖(分子量為500kDa)水溶液中的PEG水溶液的乳劑的皮下注射照片，所述葡聚糖水溶液含有圖1中顯示的結(jié)晶的葡聚糖微粒。
圖9A和圖9C示意性地圖解了在水性兩相體系中不同類型顆粒和各相的分配行為。
圖9B是基于兩相體系的植入體結(jié)構(gòu)的橫截面照片。
圖10和圖11示意性地圖解了本發(fā)明的一個實施方案的治療劑遞送方法。
圖12A和圖12B是針對含有各種胰島素的組合物的相對標(biāo)準(zhǔn)化血糖濃度相對于時間的曲線圖。
具體實施例方式
本發(fā)明人已發(fā)現(xiàn)，將結(jié)晶的葡聚糖微粒和胰島素的組合物注射入哺乳動物中，與單獨(dú)注射相同劑量的相同胰島素相比，意外地延長了胰島素的效力持續(xù)時間。該組合物可以是單相組合物或是在哺乳動物內(nèi)形成結(jié)構(gòu)化的植入體的多相組合物。
以下第一部分描述結(jié)晶的葡聚糖微粒，第二部分描述來自多相組合物的結(jié)構(gòu)化的植入體的形成，而隨后的部分描述組合物在哺乳動物中的注射以及可注射組合物的制備方法的具體實施例。
A.結(jié)晶的葡聚糖微粒本發(fā)明人通過實驗發(fā)現(xiàn)，在20℃～90℃的溫度范圍內(nèi)，在分子量為1.0kDa～200.0kDa的葡聚糖的濃縮水溶液(40重量％～65重量％)中自發(fā)形成平均直徑為0.5微米～3.5微米的結(jié)晶的葡聚糖微粒。如果需要在室溫形成微粒，可以使用2kDa～18kDa的葡聚糖溶液。當(dāng)然，如果需要，也可以由2kDa～18kDa的葡聚糖溶液在高于室溫的溫度形成該微粒。該微粒可以在高于室溫的溫度(例如約40?！妗s70℃)由較高分子量的葡聚糖的溶液(例如20kDa～75kDa的溶液)自發(fā)形成。該微?？梢跃哂兄T如規(guī)則或不規(guī)則等適宜的任何形狀，但是優(yōu)選為球狀，并且優(yōu)選直徑為10微米，或者更小，例如0.5微米～5微米。
透射電子顯微術(shù)揭示了結(jié)晶的葡聚糖微粒的微孔結(jié)構(gòu)(見圖2A和圖2B)。優(yōu)選地，按體積計算該微粒的孔隙率至少為10％，例如約10％～約50％，更優(yōu)選為約20％～約40％。因而，該結(jié)構(gòu)包含具有位于顆粒之間的大孔性區(qū)域的微孔性微粒。
對結(jié)晶的葡聚糖微粒的水性懸浮液進(jìn)行噴霧干燥證明了可以生產(chǎn)結(jié)晶的葡聚糖微粒的聚集體，所述聚集體基本上為球狀，直徑為10.0微米～150.0微米(見圖3)。
以下是形成葡聚糖微粒的方法的非限制性的實施例。向500ml實驗燒杯中的50.0g無菌蒸餾水中加入50.0g來自安森生物科學(xué)(AmershamBiosciences)的葡聚糖T40(分子量為40kDa)，以在層流下獲得50重量％的溶液。將該混合物在60℃(水浴)中在磁力攪拌器上以50rpm(轉(zhuǎn)/分)的轉(zhuǎn)速進(jìn)行攪拌，直到葡聚糖完全溶解，并獲得澄清的溶液?？梢酝ㄟ^抽真空去除該溶液中所包含的氣體。蓋上蒂維克蓋(Tyveklid)后將該澄清的溶液放在60℃的實驗烘箱中。在3.5小時后，作為結(jié)晶的葡聚糖微粒形成的結(jié)果，形成了混濁的粘性懸浮液。
為了去除非結(jié)晶的葡聚糖，用3×250ml的無菌蒸餾水通過離心(例如3,000g，30分鐘)對該微粒進(jìn)行洗滌，或者對稀釋的微粒的懸浮液例如1份的微粒和10份的水(3×250ml的無菌蒸餾水通過除菌濾器)進(jìn)行過濾。所述離心/洗滌是在層流下進(jìn)行的。在將該微粒放入500ml的實驗燒杯中并蓋上蒂維克蓋，并在60℃的實驗烘箱中干燥8小時，使其水分含量達(dá)到約5％。所獲得的干粉由平均直徑約為2微米的顆粒組成。
結(jié)晶的微粒優(yōu)選含有通過多個氫鍵、范德華力和/或離子鍵集合在一起的葡聚糖分子(即聚合物分子)并且在葡聚糖分子間基本上沒有共價鍵。因而，微粒中的分子優(yōu)選沒有特意地進(jìn)行交聯(lián)(即不進(jìn)行交聯(lián)步驟)并且該微粒在分子間不含有共價鍵或者在分子間含有低于10％的共價鍵。
在實驗中，已經(jīng)證明了大分子從植入體中緩慢釋放，在該實驗中，注射前大分子在結(jié)晶的葡聚糖微?；蚱渚奂w的水性懸浮液中溶解。圖4顯示含有熒光標(biāo)記的大分子(FITC-葡聚糖，分子量為500kDa)的植入體和肌肉間注射后第14天該大分子從植入體到小鼠肌肉組織中的緩慢釋放。
B.兩相體系可以在兩相系統(tǒng)的基礎(chǔ)上形成植入體的自組裝結(jié)構(gòu)，該植入體的自組裝結(jié)構(gòu)基于結(jié)晶的葡聚糖微粒和它們的聚集體。
諸如油、脂質(zhì)體、微粒和毫微粒的小滴的膠狀體系可以分散在結(jié)晶的葡聚糖微粒的懸浮液中，并且可以進(jìn)行注射以在被施用到哺乳動物中后形成釋放治療試劑的植入體。
例如，在油的情況中，可以形成一種特殊類型的植入體結(jié)構(gòu)，其中，油核被由分散在水或諸如多糖(例如葡聚糖)等有機(jī)聚合物的水溶液中的結(jié)晶的葡聚糖微?；蚱渚奂w組成的外層包圍。所述結(jié)構(gòu)可以稱為囊。應(yīng)該提到的是，所述外層可以包括當(dāng)該囊被組織包圍時所形成的粗糙的球狀外層。但是，當(dāng)該囊位于例如基質(zhì)、骨頭或腸壁等障壁的附近時，該囊所包括的核可以位于一個或更多個微粒壁的一側(cè)與障壁的另一側(cè)之間。而且，雖然將油用作示例性例子，但是所述核可以含有其它材料，例如其它聚合物、細(xì)胞等。
為了形成囊結(jié)構(gòu)，可以應(yīng)用兩相水性體系。當(dāng)不同聚合物的水溶液以高于某濃度進(jìn)行混合時，它們經(jīng)常形成不相溶液體的兩相溶液。各相通常含有超過90％的水，其可以被緩沖并且變?yōu)榈葷B。如果將細(xì)胞懸浮液或顆粒懸浮液加到該體系中，經(jīng)常會發(fā)現(xiàn)該細(xì)胞或顆粒在各相間進(jìn)行不均分配。由于在這些體系中的分配直接取決于細(xì)胞或顆粒的表面特性，所以可以利用這種優(yōu)先分配行為作為基礎(chǔ)對不同細(xì)胞群或顆粒進(jìn)行分離。具有不同表面特性的細(xì)胞或顆粒顯示出足夠不同的分配行為。
所述的兩種聚合物相的競爭性吸附取決于聚合物的化學(xué)特性。兩相聚合物法已被應(yīng)用于細(xì)胞、蛋白質(zhì)、核酸和礦物質(zhì)的分離或分配(“在水性兩相體系中的分配(Partitioning in Aqueous Two-Phase Systems)”，1985，H.Walter，D.Brooks和D.Fisher編輯，Academic Press出版)。
結(jié)晶的葡聚糖微粒在來自例如葡聚糖/聚乙二醇(PEG)的混合物的相系中的分布實驗顯示，如在圖5和圖6中顯示的那樣，葡聚糖微粒優(yōu)先處在葡聚糖相中，而另外的PEG相可以分散在該葡聚糖相中，以形成W/W乳劑，并且，當(dāng)PEG相的體積大于葡聚糖相的體積時，反過來也是成立的。
圖5是在葡聚糖水溶液中的PEG水溶液的乳劑的照片，所述葡聚糖水溶液含有結(jié)晶的葡聚糖微粒。在圖5的結(jié)構(gòu)中，PEG相的體積小于葡聚糖相的體積。該葡聚糖相含有葡聚糖和結(jié)晶的葡聚糖微粒。因而，該P(yáng)EG相形成由葡聚糖/葡聚糖微粒外層包圍的一個或多個球狀核(即，封閉的孔結(jié)構(gòu))。
圖6是在PEG水溶液中的葡聚糖水溶液的乳劑的照片，所述葡聚糖水溶液含有結(jié)晶的葡聚糖微粒，其中，PEG相的體積大于葡聚糖相的體積。在這種情況中，葡聚糖相形成一個或多個由PEG相包圍的含有葡聚糖微粒的球狀核(即當(dāng)PEG消散在組織液中時，在體內(nèi)形成的開放的孔結(jié)構(gòu))。如圖6所示，較小體積(小滴)的葡聚糖相形成大的球狀的葡聚糖/葡聚糖微粒的核(圖6的右邊底側(cè))，含有葡聚糖/葡聚糖微粒的較小的球狀體加入到該核上，并與之融合。
因而，當(dāng)?shù)谝幌?例如PEG相及其內(nèi)含物如治療劑)與第二相(例如葡聚糖相及其內(nèi)含物如葡聚糖微粒)的體積比小于1時，便自組裝形成由第二相(外層)包圍的第一相(核)的囊。如果該組合物含有例如胰島素等優(yōu)先分配入PEG相的治療劑，則該治療劑便選擇性地分配入PEG核中，而顆粒通過自組裝選擇性地進(jìn)行分配并形成包圍在該P(yáng)EG核周圍的外層。
可以通過將分開制備的葡聚糖相和PEG相混合來制備乳劑，兩者均可以是分別優(yōu)先處在PEG相或處在葡聚糖相中的不同類型顆粒的懸浮液。其原理是，顆粒在不同聚合物相中的分配取決于它們的表面結(jié)構(gòu)和顆粒在該聚合物溶液中的界面能。
用含有結(jié)晶的葡聚糖微粒的水性的兩相體系對實驗動物組織進(jìn)行的注射顯示了如圖7和圖8所示的具有囊結(jié)構(gòu)的植入體的形成。在該兩相體系中，葡聚糖相的體積大于PEG相的體積。圖7和圖8均顯示，具有PEG核和葡聚糖/葡聚糖微粒外層的囊在體內(nèi)通過自組裝形成(即注射到哺乳動物組織后)。該外層含有在相鄰的微粒間的大孔區(qū)和在微粒本身中的微孔區(qū)。
以下是由兩相體系形成囊結(jié)構(gòu)的方法的非限制性實施例。將10g葡聚糖T40(分子量為40kDa)和2g PGE溶解在88ml含有1,000IU胰島素(Actrapid)的溶液中，所述溶液中加有25g結(jié)晶的葡聚糖微粒。這些步驟在層流條件下進(jìn)行。在磁力攪拌器上，將該混合物在室溫以100rpm攪拌30分鐘，以形成均勻的混合物(即懸浮液)。1.0g的該懸浮液中含有8IU胰島素。
應(yīng)該提到的是，葡聚糖微?？梢杂膳c兩相體系中提供的葡聚糖溶液分子量不同的葡聚糖溶液來制備。因而，可以在分子量比提供到兩相體系中的葡聚糖溶液低的葡聚糖溶液(例如2kDa～20kDa的溶液)中形成該結(jié)晶的葡聚糖微粒，所述提供到兩相體系中的葡聚糖溶液可以是40kDa～500kDa的葡聚糖溶液，例如可以是40kDa～75kDa的溶液。這樣是有利的，因為較高分子量的葡聚糖溶液(例如40kDa～70kDa的溶液)得到了更廣泛的規(guī)章的認(rèn)可，并且可以在較低濃度下形成囊的外層。雖然較低分子量的溶液可用以降低結(jié)晶時間，但是實際上并沒有在體內(nèi)提供較低分子量的葡聚糖溶液。而且，較低分子量顆粒在體內(nèi)可更容易溶解。
由兩相體系形成的囊結(jié)構(gòu)是有利的，因為該囊結(jié)構(gòu)使治療劑從核內(nèi)的釋放比從包含含有微粒的單相的組合物中的釋放更均勻、更持續(xù)。而且，據(jù)信通過使用囊結(jié)構(gòu)，需要較少的微粒就可以獲得比使用單相體系相同的或更好的治療劑的時控釋放。而且，據(jù)信可以通過控制在兩相體系中的微粒量，從而控制該微粒的外層的厚度。在兩相體系中，微粒量越大，得到的外層就會越厚。因而，可以通過控制外層的厚度來控制治療劑從囊核中釋放的量、持續(xù)時間和/或時機(jī)。因此，可以針對每位患者或每組患者定制治療劑的釋放概況。
應(yīng)該提到的是，雖然將PEG和葡聚糖用作兩相體系的材料的例子，但是可以使用顯示以下分配行為的任何其它適宜材料進(jìn)行替換。圖9A示意性地圖解在水性的兩相體系中不同類型顆粒的分配特性。例如，在圖9A中顯示了三種類型的分子或分子聚集體的優(yōu)選顆粒10、12、14，以及相16和相18兩相。但是，可以是兩種類型或超過三種類型的顆粒。這些顆?？梢允怯捎袡C(jī)材料和/或無機(jī)材料、脂質(zhì)體、活細(xì)胞、病毒或大分子制得的微粒，例如微球體或納米球體。第一類型的顆粒10優(yōu)先分離入第一相16。第二類型的顆粒12優(yōu)先分離到第一相16和第二相18的界面。第三類型的顆粒14優(yōu)先分離入第二相18中。因而，通過模擬以前的非限制性例子，第一顆粒10可以包含治療劑，第二顆粒12和/或第三顆粒14可以包含結(jié)晶的葡聚糖微粒，第一相16可以包含PEG相，而第二相18可以包含葡聚糖相。
如圖9A的區(qū)域20所示，如果在較大量的第二相18中提供較小量的第一相16，便形成位于第二相18中的囊型結(jié)構(gòu)，該囊型結(jié)構(gòu)包含第一相16的離散球狀體，所述第一相16含有一定濃度的第一類型顆粒10。第二類型顆粒12可以位于相16和相18的界面，并起到囊外層的作用。顆粒14分散到第二相18中和/或形成囊外層。
相反地，如圖9A的區(qū)域22所示，如果在較大量的第一相16中提供較小量的第二相18，便形成位于第一相16中的囊型結(jié)構(gòu)，該囊型結(jié)構(gòu)包含第二相18的離散球狀體，所述第二相18含有一定濃度的第三類型的顆粒14。第二類型的顆粒12可以定位于相16和相18的界面，并起到囊外層的作用。顆粒10分散到第一相16中和/或形成囊外層?？梢詫上囿w系20和22用作植入體，例如將其注射到哺乳動物(例如動物或人)中。因而，該囊形成結(jié)構(gòu)化的三維植入體，該植入體具有作為貯存池或貯存庫的核，以對治療劑經(jīng)過外層進(jìn)行控釋。相反地，微粒均勻分布的植入體是未結(jié)構(gòu)化的植入體。
而且，顆粒10、12和14可以由選擇性分配入各相之一的液體材料(例如油)或大分子替換。例如，諸如胰島素的治療劑可以分配入PEG/葡聚糖兩相體系的PEG相中。由于胰島素選擇性地分配到PEG相中，所以該P(yáng)EG相形成囊結(jié)構(gòu)的含有胰島素的核。應(yīng)該提到的是，盡管特定的顆粒和治療劑進(jìn)行選擇性分配，但是術(shù)語“選擇性地分配”并不一定意為100％的該顆粒或治療劑都分配到其中一相中。但是，多數(shù)的選擇性分配物質(zhì)，優(yōu)選80％的該分配物質(zhì)，分配到其中一相中。例如，雖然多數(shù)的胰島素分配到PEG相，但是一部分胰島素可以保留在葡聚糖相中。
圖9B顯示植入體結(jié)構(gòu)的橫截面的掃描電子顯微圖，所述植入體結(jié)構(gòu)基于在圖9A中進(jìn)行示意性圖解的兩相體系。將含有葡聚糖第一相、PEG第二相和結(jié)晶的葡聚糖微粒的兩相水性組合物注射到瓊脂糖凝膠中。該凝膠組成通過防止結(jié)晶的葡聚糖微粒從注射側(cè)擴(kuò)散來模擬哺乳動物組織。圖9B中的圖顯示核-外層植入體結(jié)構(gòu)的形成。該核包括被外層34包圍的區(qū)30和區(qū)32。在切開凝膠進(jìn)行橫截面SEM(掃描電子顯微)成像前，區(qū)30為填充有PEG相區(qū)的空間。在橫切的過程中，凝膠被切開時PEG相區(qū)從凝膠中滴出。區(qū)32是位于結(jié)晶的葡聚糖微粒中的含有PEG小滴的核的外部。區(qū)34是含有結(jié)晶的葡聚糖微粒的外層，其包圍含有PEG的核并維持含有PEG的核的位置。
雖然不希望受到特定的理論束縛，但發(fā)明人認(rèn)為，如圖9B所示的核-外層結(jié)構(gòu)通過如在9C示意性顯示的自組裝而形成。當(dāng)?shù)谝幌?6和第二相18(例如不同的不相溶聚合物的水溶液)處在適宜的貯存容器19(例如玻璃燒杯或小瓶)中時，相16升到另一相18的上面。當(dāng)該兩相組合物被注入諸如哺乳動物組織或基質(zhì)材料(如模擬組織的凝膠)等的限制相16和相18自由流動的材料中時，該組合物自組裝成所述的核-外層結(jié)構(gòu)。首先，體積較小的一相形成如圖9C中間部分所示的近似球形的球狀體。然后，如圖9C底部所示，球狀體結(jié)合以形成被另外一相的外層包圍的一個相的近似球形的核。雖然顯示了多相體系的兩相體系的例子，但是如果需要，多相體系可以多于兩相。
C.可注射胰島素的遞送載體本發(fā)明人已發(fā)現(xiàn)，將結(jié)晶的葡聚糖微粒和胰島素的組合物注射入哺乳動物，例如小鼠和兔子中，與單獨(dú)注射相同劑量的相同胰島素相比，意外地延長了胰島素的效力持續(xù)時間。圖10示意性地圖解了用注射器56通過注射含有微粒12、14和胰島素46的單相組合物，植入體40在哺乳動物53中的形成。圖11示意性地圖解了通過注射包括葡聚糖相18和PEG相16的兩相組合物，結(jié)構(gòu)化的植入體40在哺乳動物53中的形成，所述葡聚糖相18含有選擇性分配的結(jié)晶的葡聚糖微粒12、14，所述的PEG相16含有選擇性分配的含有胰島素的治療劑10。所述葡聚糖相18形成位于所述PEG相16核周圍的外層。由于小鼠和兔子是在藥物試驗中人的常用模型，所以本發(fā)明人認(rèn)為，當(dāng)被注入成人和小孩中時，含有結(jié)晶的葡聚糖微粒和胰島素的組合物也將有效地延長胰島素的效力持續(xù)時間。
實施例1～實施例8顯示了與單獨(dú)注射胰島素相比，使用結(jié)晶的葡聚糖微粒作為可注射胰島素的遞送載體的優(yōu)勢。該實驗涉及小鼠并觀察它們對皮下注射由結(jié)晶的葡聚糖微粒和人重組胰島素(NovoNordiskActrapid HM Penfill，40UI/ml)組成的水性懸浮液的反應(yīng)。
所述懸浮液按以下方法進(jìn)行制備。在20.0g的水中溶解5.0g的葡聚糖T10(Pharmacia，Uppsala，瑞典)。用0.22μm的過濾器(Millipore，Bedford，MA)過濾該溶液，并將其并凍干。將3.0g所得的粉末溶解在3.0g的無菌水中，并放入溫度為60℃的盒子中。6小時后，用3×5.0ml的無菌水通過在3000g離心對結(jié)晶的葡聚糖微粒進(jìn)行洗滌。最后，將制得的結(jié)晶的葡聚糖微粒懸浮液與胰島素水溶液混合，并用于小鼠的實驗中。將該懸浮液的樣品導(dǎo)入小鼠的腿中，并從各小鼠的尾巴采集動物血樣，對葡萄糖濃度進(jìn)行分析。采用葡萄糖氧化酶法通過正確校準(zhǔn)的“單觸系統(tǒng)葡萄糖分析儀(one-touch system glucose analyzer)”(LifescanJohnson & Johnson，Milpitas，CA，美國)對血糖進(jìn)行測定。
在比較例1中，沒有將胰島素注入小鼠中。在比較例2、3和7中，只將胰島素(0.5UI)注入3只小鼠中。在實施例4～實施例6和實施例8中，將胰島素(0.5UI)和結(jié)晶的葡聚糖微粒的植入體注入4只小鼠中。該結(jié)果總結(jié)在表I中。
表I

當(dāng)0.5UI的胰島素與或不與結(jié)晶的葡聚糖微粒一起進(jìn)行i.m.(肌肉內(nèi)注射)應(yīng)用時，動物血液中的糖(即血糖)的平均降低量非常不一樣。如表I所示，注射后的前45分鐘期間，比較例2、3或7的小鼠中的葡萄糖水平與實施例4～實施例6和實施例8的小鼠中的葡萄糖水平幾乎相同或較低。注射后120分鐘，比較例2、3或7的小鼠中的葡萄糖水平與實施例4～實施例6和實施例8的小鼠中的葡萄糖水平幾乎相同。但是，注射后210分鐘～390分鐘，比較例2、3或7的小鼠中的葡萄糖水平比實施例4～實施例6和實施例8的小鼠中的葡萄糖水平高約3倍。實際上，注射后120分鐘～390分鐘，實施例4～實施例6和實施例8的小鼠中的葡萄糖水平基本上沒有上升(即升高沒有超過10％，保持相同水平或下降)。相反地，注射后120分鐘～390分鐘，比較例2、3或7中注射了相同量胰島素的小鼠中的葡萄糖水平確實顯著上升。與單獨(dú)注射相同劑量的胰島素相比，注射結(jié)晶的葡聚糖微粒/胰島素能更長時間地降低血糖。因而，含有結(jié)晶的葡聚糖微粒和胰島素的組合物可以用于注射給藥。
以下對兔子進(jìn)行的實驗也證明了與單獨(dú)注射相同劑量的相同胰島素相比，注射結(jié)晶的葡聚糖微粒/胰島素如何降低血糖以及如何使血液中的胰島素的基礎(chǔ)水平保持較長的時間。皮下注射含有Actrapid HM短效胰島素和結(jié)晶的葡聚糖微粒的組合物，意外地發(fā)現(xiàn)該短效胰島素的效力持續(xù)時間延長到超過單獨(dú)皮下注射的長效胰島素Monotard HM的效力持續(xù)時間。
術(shù)語“效力持續(xù)時間”的意思是獨(dú)立于引起血糖峰的外部因素(例如進(jìn)食)，使血糖濃度降低到所需水平和/或使血液中的胰島素濃度的基礎(chǔ)水平保持在所需水平。因而，術(shù)語“效力持續(xù)時間”是將胰島素和微粒的組合物的效力與單獨(dú)的相同劑量的相同胰島素的效力相比較的相對術(shù)語。換句話說，效力持續(xù)時間是作用持續(xù)時間或藥理學(xué)效果的持續(xù)時間，該持續(xù)時間可以通過在患者禁食狀態(tài)比較胰島素和微粒的組合物的效力和單獨(dú)的相同劑量的相同胰島素的效力來進(jìn)行測定。
如圖12A和12B所示，與單獨(dú)的Actrapid HM胰島素的約2小時～約8小時的效力持續(xù)時間(圖12B)和單獨(dú)的“Monotard HM”長效胰島素的約17小時～24小時的效力持續(xù)時間(圖12A)相比，含有ActrapidHM短效胰島素和結(jié)晶的葡聚糖微粒的組合物延緩了對胰島素的吸收，并延長了降低血糖效果(即，胰島素的效力持續(xù)時間)到至少24小時，例如約28小時～約31小時。Actrapid HM胰島素和Monotard HM胰島素都是Novo Nordisk的產(chǎn)品，獲自該公司的信息宣傳這些胰島素組合物在人體內(nèi)的效力持續(xù)時間分別是8小時和24小時。
在圖12A和12B中，上面的線顯示未處理(即，沒有施用胰島素)的兔子對照線。圖12A和12B的y-軸是對于相同的8IU劑量的胰島素的血糖濃度的相對標(biāo)準(zhǔn)化刻度。圖中數(shù)據(jù)都經(jīng)過調(diào)整以使各圖顯示在一張曲線圖中，該數(shù)據(jù)顯示了注射胰島素后動物血液中的血糖水平。
在圖12A和圖12B中顯示的數(shù)據(jù)是按如下獲得的。監(jiān)測秘魯(Chinchilla)兔(2.3±0.3kg)對注射由結(jié)晶的葡聚糖微粒和ActrapidHM短效胰島素組成的制劑的反應(yīng)。該制劑樣品通過皮下注射到兔子中。將沒有微粒的Monotard HM長效胰島素(40IU/ml)和Actrapid HM短效胰島素通過皮下注射到不同的兔子中作為對照。從兔子的耳靜脈采集動物血樣，并對葡萄糖濃度進(jìn)行分析。采用葡萄糖氧化酶法通過正確校準(zhǔn)的葡萄糖分析儀(One-touchLifescan，Johnson & Johnson，Milpitas，CA，美國)測定血糖濃度。
在比較例9和比較例10中，2只兔子沒有被提供任何胰島素。在比較例11和比較例12中，Monotard HM長效胰島素的水溶液以8IU的劑量通過皮下導(dǎo)入到2只兔子中。在實施例13～實施例15中，結(jié)晶的葡聚糖微粒和Actrapid HM短效胰島素的懸浮液以8IU的劑量通過皮下導(dǎo)入到3只兔子中。該實驗的結(jié)果總結(jié)在表II中。
表II

以上的實施例13～實施例15證明，Actrapid HM短效胰島素和結(jié)晶的葡聚糖微粒的組合物提供了超過Monotard HM長效胰島素效果的延長效果，并且據(jù)認(rèn)為與來自安萬特(Aventis)(見www.aventis-us.com/Pls/lantus TXT.html)的長效(一天給藥一次)胰島素glargine Lantus的效果相當(dāng)。另外，不能將Lantus胰島素與任何其它胰島素或溶液進(jìn)行稀釋或混合。如果稀釋或混合Lantus胰島素，Lantus胰島素和/或該混合胰島素的藥學(xué)動力學(xué)/藥效的概況(即作用的起始、到達(dá)效果峰的時間)可能以不可預(yù)測的方式發(fā)生改變。相反地，結(jié)晶的葡聚糖微粒和胰島素的組合物就沒有受到這些限制，因為可以使用任何適宜的胰島素，例如人胰島素。在所述結(jié)晶的葡聚糖微粒和胰島素的組合物中，可以根據(jù)需要而改變胰島素和微粒的比例。而且，可以使用任何適宜的胰島素以對個別的患者定制適當(dāng)?shù)囊葝u素療法。因而，在所述組合物中使用Actrapid HM作為典型胰島素的說明性例子，但是該組合物并不限于該品牌的胰島素。
如實施例9～實施例15所示，與沒有微粒的相同劑量的相同胰島素相比，含有結(jié)晶的葡聚糖微粒和胰島素的組合物在保持胰島素的效力持續(xù)方面是有效的，其持續(xù)時間至少延長30％，例如至少延長100％，優(yōu)選延長100％～400％。與沒有微粒的相同劑量的相同胰島素相比，含有微粒的胰島素組合物在保持所需要的血液中胰島素和血糖濃度的基礎(chǔ)水平方面是有效的，其基礎(chǔ)水平持續(xù)時間至少延長30％，例如延長100％～400％。因而，含有微粒的組合物的效力持續(xù)時間至少為24小時，這樣使得在哺乳動物(例如需要的人)中每天只需注射一次。
耐久的胰島素的結(jié)晶的葡聚糖微粒組合物比現(xiàn)有技術(shù)中的耐久的胰島素組合物更安全，因其不用象現(xiàn)有技術(shù)的組合物那樣使用更多劑量即可以獲得耐久的效力。例如，如果8IU劑量的短效胰島素在醫(yī)藥上已被確定為對患者是安全的而沒有顯著的用藥過量危險，那么，含有相同的短效胰島素和結(jié)晶的葡聚糖微粒的組合物在短效胰島素的劑量同樣為8IU時，即便所有的這些胰島素立刻在患者中釋放，也可以提供作用更長的作用時間而沒有顯著的用藥過量危險。而且，因為該組合物在沒有增加胰島素的量的情況下延長了其效力，所以與現(xiàn)有技術(shù)的組合物相比，該組合物節(jié)省了費(fèi)用。目前現(xiàn)有技術(shù)的長效的糖尿病療法使用了胰島素的類似物，例如，來自安萬特的Lantus。相反地，含有結(jié)晶的葡聚糖微粒的組合物優(yōu)選含有安全概況已經(jīng)確認(rèn)的人重組胰島素。因而，該組合物降低了不良反應(yīng)的危險性，并減少了對糖尿病患者的注射次數(shù)，據(jù)此提高了糖尿病患者的生命質(zhì)量。
所述可注射組合物可以包含含有胰島素和微粒的單相體系或包含形成PEG和胰島素的核以及葡聚糖和葡聚糖微粒外層的兩相體系，該兩相體系用于使效力持續(xù)時間甚至更長。而且，該組合物包含注入哺乳動物相對容易的流動性的單相或多相的膠狀體系(即懸浮液或乳劑)。
以下實施例顯示了含有葡聚糖相、PEG相、胰島素和結(jié)晶的葡聚糖微粒的可注射兩相組合物的用途。據(jù)認(rèn)為當(dāng)注入哺乳動物中時，該組合物形成具有三維囊結(jié)構(gòu)的結(jié)構(gòu)化的貯存庫型植入體。在該囊結(jié)構(gòu)中，所述微粒選擇性地分配到葡聚糖相，而胰島素則被選擇性地分配到PEG相中。含有微粒的葡聚糖相在包含PEG相的核的周圍形成外層，所述PEG相含有胰島素。該結(jié)構(gòu)化的植入體使得從核中通過外層可以進(jìn)行控釋釋放。
在比較例16中，將0.5IU的Actrapid HM胰島素(100IU/ml)通過皮下注入到小鼠中。在實施例17中，將0.4g的結(jié)晶的葡聚糖微粒分散在0.6ml的20％(重量比)的分子量為70kDa的葡聚糖(Pharmacia，瑞典)的水溶液中以形成懸浮液。將10mg的分子量為6kDa的PEG(Fluka)溶解在0.1ml的Actrapid HM胰島素(100IU/ml)中以形成溶液。將0.05ml的PEG和胰島素溶液與0.15ml的微粒和葡聚糖懸浮液混合，以形成兩相組合物或混合物。將0.02ml含有0.5IU的胰島素的所述兩相混合物通過皮下注射到小鼠中。結(jié)果顯示在表III中。
表III

如表III所見，所述的兩相組合物的效力持續(xù)時間長于單獨(dú)的胰島素的效力持續(xù)時間。而且，該兩相組合物對血糖濃度的降低作用比單獨(dú)的胰島素更緩慢。盡管沒有期望受到特定理論的束縛，據(jù)認(rèn)為這些效果是由于胰島素從囊結(jié)構(gòu)的核中控釋釋放的緣故。
而且，可以通過調(diào)整胰島素和/或微粒的量來為每位患者定制含有微粒的組合物，使得可以在每天的同一時間將該組合物注射給該患者(即每24小時一次，每48小時一次，等等)。因而，用于每位患者的所述組合物的效力持續(xù)時間是可調(diào)的。對于兩相體系，胰島素從囊核中的釋放概況可以通過控制微粒的量以控制該囊外層的厚度來進(jìn)行調(diào)節(jié)。
雖然發(fā)明人不期望受到特定理論的束縛，但是據(jù)認(rèn)為相同劑量的與結(jié)晶的葡聚糖微粒在一起的胰島素在小鼠和兔子中的耐久效果可以通過該胰島素分子從基于結(jié)晶的葡聚糖微粒的植入體中的擴(kuò)散(即胰島素的自我控制釋放)來解釋。由于小鼠和兔子是藥物試驗中人的共同模型，顯示在上表I～表III中的數(shù)據(jù)表明，通過使用基于結(jié)晶的葡聚糖微粒的植入體，可以開發(fā)藥效動力學(xué)特性和藥代動力學(xué)特性得到改善的控釋釋放遞送體系，從而更好地滿足基礎(chǔ)胰島素患者(例如人)的需要。
D.材料在本發(fā)明的一個優(yōu)選方案中，治療劑含有胰島素。換句話說，該治療劑可以基本上只由胰島素組成或者含有胰島素和另外的物質(zhì)。術(shù)語“胰島素”應(yīng)該解釋為包括胰島素類似物、天然提取的人胰島素、重組體產(chǎn)生的人胰島素、牛源和/或豬源提取的胰島素、重組體產(chǎn)生的豬和牛的胰島素以及任何這些胰島素產(chǎn)品的混合物。該術(shù)語意欲包括通常用于治療糖尿病的充分純化形式的多肽，但使用該術(shù)語包括其商購的藥物形式，這種商購的藥物形式包含另外的賦形劑。所述胰島素優(yōu)選為重組產(chǎn)生的并且可以是脫水的(完全干燥)或在溶液中。
術(shù)語“胰島素類似物”、“單體胰島素”等在這里交互使用，并且意欲包括任何形式的如上所述的“胰島素”，其中，該多肽鏈中的一個或多個氨基酸已被替換氨基酸所置換和/或其中一個或多個氨基酸已缺失或其中一個或多個另外的氨基酸已被添加到該多肽鏈或氨基酸序列上，所述多肽鏈或氨基酸序列作為胰島素在降低血糖水平中起作用。一般地，在本發(fā)明的優(yōu)選實施方案中的術(shù)語“胰島素類似物”包括專利號為No.5,547,929的美國專利所披露的“速效胰島素(胰島素lispro)類似物”，將所述專利的全部內(nèi)容以參考的方式引入本文；胰島素類似物包括LysPro胰島素和優(yōu)泌樂(humalog)胰島素，以及其它“超胰島素類似物”，其中，與傳統(tǒng)的胰島素和在肝中比在脂肪組織中更有活性的肝選擇性胰島素相比，所述胰島素類似物影響血清中的葡萄糖水平的能力得到相當(dāng)大的提高。優(yōu)選的類似物是單體胰島素類似物，其為用于與胰島素的主要目的相同的胰島素樣化合物，例如，胰島素lispro，即通過施用以降低血糖水平的化合物。
術(shù)語“類似物”是指與被認(rèn)為是與其相當(dāng)?shù)姆肿泳哂泄餐δ芑钚圆⑶彝ǔ＞哂泄餐Y(jié)構(gòu)特征的分子。
術(shù)語“重組體”是指任何類型的在原核細(xì)胞中表達(dá)的克隆的治療劑或遺傳工程分子或可以被處理成為另一種狀態(tài)以形成另一個組合文庫的組合分子文庫，尤其是含有提高該治療劑的物理化學(xué)的、藥理學(xué)的和臨床上的安全性的保護(hù)基團(tuán)的分子。
術(shù)語“葡聚糖微粒”包括未取代的葡聚糖微粒和取代的葡聚糖微粒。例如，取代的葡聚糖微粒包括用適當(dāng)基團(tuán)(例如甲基)取代的葡聚糖，其取代程度達(dá)到不損害該葡聚糖微粒的結(jié)晶(例如高至3.5％或更低百分比的分支)的程度。微粒的平均直徑優(yōu)選為約0.5微米～約5微米，更優(yōu)選為約1微米～約2微米。
而且，雖然優(yōu)選與治療劑一起使用多孔的非交聯(lián)的葡聚糖微粒(例如結(jié)晶的微粒)，但是也可以替代性使用其它適宜的有機(jī)或無機(jī)微粒，例如其它的聚合物微粒，包括多糖、PLA、PLGA、PMMA、聚酰亞胺、聚酯、丙烯酸酯、丙烯酰胺、乙酸乙烯酯或其它聚合材料；生物材料微粒例如海藻酸鹽和細(xì)胞；或者無機(jī)顆粒例如二氧化硅、玻璃或磷酸鈣。優(yōu)選該微粒是生物可降解的。優(yōu)選地，使用多孔性微粒。最優(yōu)選地，該微粒具有足夠的孔隙度，以將治療劑容納孔中，并提供該治療劑從孔隙中的時控釋放。換句話說，該治療劑隨著時間進(jìn)程從孔隙中釋放，例如超過5分鐘，優(yōu)選超過30分鐘，最優(yōu)選超過1小時，例如數(shù)小時到數(shù)天，而不是突然釋放。因此，可以基于所用的治療劑類型、進(jìn)行遞送所需的治療劑的體積、治療劑的遞送持續(xù)時間、藥劑將要被遞送到的環(huán)境以及其它因素，對顆粒材料、孔徑和孔隙體積進(jìn)行選擇。
因而，在本發(fā)明的一個優(yōu)選方面，治療劑至少部分地位于該多孔性微粒的孔隙中。優(yōu)選地，治療劑沒有被包封在微粒中(即，該微粒沒有作為其中裝有治療劑核的外層)并且沒有被附到該微粒的表面上。但是，如果需要，除了位于該多孔性微粒的孔隙中外，一部分治療劑也可以被包封在微粒外層中和/或被附到微粒的表面上。治療劑在孔隙中的定位提供了該治療劑最適宜的時控釋放。相反地，附到微粒表面的治療劑通常釋放過快，而包封在微粒中的治療劑經(jīng)常釋放得不夠快，并且當(dāng)該微粒外層崩解時突然釋放。在兩相體系中，至少80％的治療劑優(yōu)選位于被含有該微粒的壁或外層包圍的核中。
E.制備方法可以通過任何適宜的方法制備所述微粒。優(yōu)選地，在該微粒形成后，將該微粒與治療劑組合。這樣，通過任何適宜的方法形成微粒(例如結(jié)晶的葡聚糖微粒)，然后通過任何適宜的方法將治療劑與該微粒組合。相反地，在一些現(xiàn)有技術(shù)方法中，通過在溶液中提供顆粒前體材料和治療劑，然后將該前體材料(例如單體或寡聚體材料)進(jìn)行結(jié)晶或交聯(lián)以將治療劑核包封在微粒外層中，從而將治療劑封裝在微粒外層中。
優(yōu)選地，微粒形成后，將治療劑提供到該多孔性微粒的孔隙中。這樣，首先形成多孔性微粒，然后將治療劑提供到含有該微粒的溶液中，以使治療劑滲入該微粒的孔隙中。當(dāng)然，在該步驟中，一些治療劑也可以變?yōu)楦街谠撐⒘５谋砻妗?br> 因而，制備非交聯(lián)的多孔性的結(jié)晶的葡聚糖微粒的方法包括制備葡聚糖溶液(例如水性葡聚糖溶液)，進(jìn)行結(jié)晶步驟以形成結(jié)晶的多孔性的葡聚糖微粒，并且如果需要，從溶液中分離出結(jié)晶的多孔性葡聚糖微粒。通過將治療劑提供到含有微粒的結(jié)晶溶液中或通過將該分離的微粒和該治療劑提供到另外的溶液中(例如另外的水性溶液)中，從而將該治療劑滲入該微粒的孔隙中。例如，可以在第一低分子量葡聚糖水溶液中(例如2kDa～20kDa的葡聚糖溶液)形成結(jié)晶的葡聚糖微粒。然后將該微粒從第一溶液中取出，將其放入分子量較高的葡聚糖的第二葡聚糖水溶液中，例如40kDa～500kDa的溶液，例如，40kDa～75kDa的溶液。第二溶液可以含有兩相體系中的第一相，然后將所述第二溶液與第二相(例如含有治療劑的PEG相)組合。類似的方法可以用于其它多孔性微粒，其中，通過任何適宜的微粒形成方法(包括但不限于結(jié)晶)形成多孔性微粒后，將該治療劑滲入該微粒的孔隙中?？梢詫⒃摻M合物的諸如胰島素、微粒和一種或多種水性相等成分按任何適宜的順序或同時進(jìn)行組合。
優(yōu)選地，所述微粒在不含有有機(jī)溶劑和有機(jī)反應(yīng)促進(jìn)劑的溶液中通過自組裝形成，其中所述有機(jī)溶劑和有機(jī)反應(yīng)促進(jìn)劑在微粒中留下有機(jī)殘留。因而，例如，葡聚糖微粒優(yōu)選由葡聚糖水溶液通過自組裝形成。但是，如果需要，也可以使用有機(jī)溶劑和/或有機(jī)反應(yīng)促進(jìn)劑。在這種情況中，可以在后續(xù)使用之前對該微粒進(jìn)行純化，以去除有害的有機(jī)殘留。
如上所述，具有第一相核和第二相壁或外層的囊結(jié)構(gòu)可以由兩相組合物在體內(nèi)或體外形成。該組合物可以是干燥的粉末，例如作為粉末或多孔性塊狀物貯存的凍干粉末。當(dāng)準(zhǔn)備將該組合物施用至哺乳動物時，將其與水化合并通過注射施用至哺乳動物。
優(yōu)選地，當(dāng)將包含所述微粒和治療劑的所述組合物的劑量定制為適于(dosed for)進(jìn)行注射時，所述組合物是流動性的膠狀體系，所述流動性的膠狀體系包括乳劑和懸浮液，所述乳劑和懸浮液可利用常規(guī)型號的注射器或針容易地注入至哺乳動物中。相反地，一些現(xiàn)有技術(shù)的組合物包含在葡聚糖水凝膠中或交聯(lián)的葡聚糖基質(zhì)中的治療劑。如果沒有進(jìn)行特定制備的話，葡聚糖水凝膠和交聯(lián)的葡聚糖基質(zhì)不是流動性的組合物。
在本發(fā)明的另一個優(yōu)選方面，所述微粒包括對哺乳動物黏膜具有粘附性的微粒。優(yōu)選地，所述粘附性微粒為上述的多孔性微粒。這進(jìn)一步促進(jìn)了所述治療劑的有效遞送。
在本發(fā)明的另一個優(yōu)選方面，所述微粒包括其表面經(jīng)過特別改進(jìn)的微粒以提高所述治療劑對該微粒表面的粘附性并優(yōu)化該治療劑的遞送。該微粒表面可以含有適宜的提高該治療劑的粘附性的任何改進(jìn)。
提供本發(fā)明的上述描述的目的是進(jìn)行例證和說明，而非旨在窮盡或?qū)⒈景l(fā)明限于所披露的精確形式，并且在上述的教導(dǎo)下可以進(jìn)行修改和變化，或可以從本發(fā)明的實踐中獲得修改和變化。選擇附圖和描述的目的是對本發(fā)明的原理及其實際應(yīng)用進(jìn)行解釋。本發(fā)明的范圍意欲由所附權(quán)利要求和其等同物來限定。
本說明書中引用的所有的出版物和專利申請和專利都以參考的方式引入本文。
權(quán)利要求
1.一種在哺乳動物中降低血糖的方法，該方法包括對哺乳動物注射治療有效量的含有結(jié)晶的葡聚糖微粒和胰島素的組合物以降低該哺乳動物的血糖，其中，所述微粒是在胰島素和該微粒于所述組合物中進(jìn)行組合之前形成的。
2.如權(quán)利要求1所述的方法，其中，所述的組合物包含流動性的膠狀組合物，并且所述微粒包含平均直徑為0.5微米～5微米的結(jié)晶的葡聚糖微粒。
3.如權(quán)利要求2所述的方法，其中所述組合物包含兩相組合物，該兩相組合物含有葡聚糖相和PEG相；所述胰島素選擇性地分配到PEG相中，所述微粒選擇性地分配到葡聚糖相中；和該組合物在被注射到哺乳動物體內(nèi)后形成結(jié)構(gòu)化的植入體，該植入體含有PEG相核和葡聚糖相外層。
4.如權(quán)利要求3所述的方法，該方法進(jìn)一步包括基于接受所述組合物的哺乳動物的身體而控制所述外層的厚度以控制胰島素從植入體中的釋放。
5.如權(quán)利要求1所述的方法，其中，對糖尿病病人提供所述組合物，以降低所述病人體內(nèi)的血糖濃度。
6.一種定制劑量的藥物組合物，該定制劑量的藥物組合物含有結(jié)晶的葡聚糖微粒和治療有效量的胰島素，其中，將該組合物的劑量定制為適于對人進(jìn)行注射，并且所述微粒是在胰島素和該微粒于所述組合物中進(jìn)行組合之前形成的。
7.如權(quán)利要求6所述的組合物，其中所述組合物包含流動性的膠狀組合物；和所述微粒包含平均直徑為0.5微米～5微米的結(jié)晶的葡聚糖微粒。
8.如權(quán)利要求7所述的組合物，其中所述組合物包含兩相組合物，該兩相組合物含有葡聚糖相和PEG相；所述胰島素選擇性地分配到PEG相中，所述微粒選擇性地分配到葡聚糖相中；和該組合物在被注射到哺乳動物體內(nèi)后形成結(jié)構(gòu)化的植入體，該結(jié)構(gòu)化的植入體含有PEG相核和葡聚糖相外層。
9.一種定制劑量的藥物組合物，該定制劑量的藥物組合物含有結(jié)晶的葡聚糖微粒和治療有效量的第一胰島素，其中，將該組合物的劑量定制為適于對哺乳動物進(jìn)行注射，并且當(dāng)將該組合物注射到哺乳動物中時，其效力持續(xù)時間比沒有微粒的相同劑量的相同第一胰島素在哺乳動物中的效力持續(xù)時間至少延長30％。
10.如權(quán)利要求9所述的組合物，其中所述組合物包含流動性的膠狀組合物；所述微粒包含平均直徑為0.5微米～5微米的結(jié)晶的葡聚糖微粒；和所述微粒是在第一胰島素和該微粒于所述組合物中進(jìn)行組合之前形成的。
11.如權(quán)利要求10所述的組合物，其中所述組合物包含兩相組合物，該兩相組合物含有葡聚糖相和PEG相；所述第一胰島素選擇性地分配到PEG相中，所述微粒選擇性地分配到葡聚糖相中；和所述組合物在被注射到哺乳動物體內(nèi)后形成結(jié)構(gòu)化的植入體，該結(jié)構(gòu)化的植入體含有PEG相核和葡聚糖相外層。
12.如權(quán)利要求9所述的組合物，其中當(dāng)被注射到哺乳動物時，所述組合物的效力持續(xù)時間至少為24小時；和當(dāng)被注射到哺乳動物時，所述組合物的效力持續(xù)時間比沒有微粒的相同劑量的相同第一胰島素在哺乳動物中的效力持續(xù)時間至少延長100％。
13.一種在哺乳動物中降低血糖的方法，該方法包括對哺乳動物注射治療有效量的含有結(jié)晶的葡聚糖微粒和第一胰島素的組合物以降低該哺乳動物的血糖，其中，該組合物在哺乳動物中的效力持續(xù)時間比沒有微粒的相同劑量的相同第一胰島素在哺乳動物中的效力持續(xù)時間至少延長30％。
14.如權(quán)利要求13的方法，其中所述組合物包含流動性的膠狀組合物；所述微粒包含平均直徑為0.5微米～5微米的結(jié)晶的葡聚糖微粒；和所述微粒是在第一胰島素和該微粒于所述組合物中進(jìn)行組合之前形成的。
15.如權(quán)利要求14的方法，其中所述組合物包含兩相組合物，該兩相組合物含有葡聚糖相和PEG相；所述胰島素選擇性地分配到PEG相中，所述微粒選擇性地分配到葡聚糖相中；和所述組合物在被注射到哺乳動物體內(nèi)后形成結(jié)構(gòu)化的植入體，該結(jié)構(gòu)化的植入體含有PEG相核和葡聚糖相外層。
16.如權(quán)利要求13的方法，其中當(dāng)被注射到哺乳動物時，所述組合物的效力持續(xù)時間至少為24小時；和所述組合物在哺乳動物中的效力持續(xù)時間比沒有微粒的相同劑量的相同第一胰島素在哺乳動物中的效力持續(xù)時間至少延長100％。
17.如權(quán)利要求16的方法，其中，所述組合物在哺乳動物中的效力持續(xù)時間比沒有微粒的相同劑量的相同第一胰島素在哺乳動物中的效力持續(xù)時間延長100％～400％。
18.一種制備定制劑量的藥物組合物的方法，該方法包括提供結(jié)晶的葡聚糖微粒；該葡聚糖微粒結(jié)晶后，將治療有效量的胰島素和所述結(jié)晶的葡聚糖微粒在溶液中進(jìn)行組合，以形成胰島素和結(jié)晶的葡聚糖微粒的組合物；和將所述組合物的劑量定制為適于對哺乳動物進(jìn)行注射。
19.如權(quán)利要求18所述的方法，其中所述組合物包含流動性的膠狀組合物；和所述微粒包含平均直徑為0.5微米～5微米的結(jié)晶的葡聚糖微粒。
20.如權(quán)利要求19所述的方法，其中所述組合物包含兩相組合物，該兩相組合物含有葡聚糖相和PEG相；所述胰島素選擇性地分配到PEG相中，所述微粒選擇性地分配到葡聚糖相中；和所述組合物在被注射到哺乳動物體內(nèi)后形成結(jié)構(gòu)化的植入體，該結(jié)構(gòu)化的植入體含有PEG相核和葡聚糖相外層。
21.如權(quán)利要求18所述的方法，其中當(dāng)被注射到哺乳動物時，所述組合物的效力持續(xù)時間至少為24小時；和所述組合物在哺乳動物中的效力持續(xù)時間比沒有微粒的相同劑量的相同胰島素在哺乳動物中的效力持續(xù)時間至少延長100％。
全文摘要
本發(fā)明涉及在哺乳動物中降低血糖的方法，該方法包括對哺乳動物注射治療有效量的結(jié)晶的葡聚糖微粒和胰島素，以降低該哺乳動物的血糖。所述的組合物可以是單相或結(jié)構(gòu)化的多相組合物，該組合物用于在很長時間內(nèi)控釋釋放胰島素。
文檔編號A61K9/00GK1774263SQ200480009197
公開日2006年5月17日 申請日期2004年3月4日 優(yōu)先權(quán)日2003年3月4日
發(fā)明者弗拉迪米爾·薩比特斯凱 申請人:技術(shù)發(fā)展有限公司