專利名稱：作為蛋白激酶抑制劑的吡啶基氨基－嘧啶衍生物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及4-雜芳基-2-(吡啶基氨基)-嘧啶和/或4-雜芳基-2-(吡啶基氨基)-吡啶。具體地，本發(fā)明涉及噻唑基-、噁唑基-，和咪唑基-取代的嘧啶或吡啶化合物及其治療用途。更具體地，但非排他性地，本發(fā)明涉及能抑制一或多種蛋白激酶的化合物。
背景技術(shù)：
在真核細(xì)胞中，所有的生物功能，包括DNA復(fù)制、細(xì)胞周期進(jìn)程、能量代謝以及細(xì)胞生長以及分化，都是通過蛋白的可逆性磷酸化調(diào)節(jié)的。蛋白的磷酸化狀態(tài)不僅決定其功能、亞細(xì)胞分布以及穩(wěn)定性，以及其結(jié)合的其他的蛋白或細(xì)胞成分的種類。生化通路中的作為整體的蛋白質(zhì)組，以及單個成員的特定的磷酸化的平衡因此被生物體用作響應(yīng)于不斷變化的環(huán)境保持內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定的策略。執(zhí)行這些磷酸化以及去磷酸化步驟的酶分別為蛋白激酶以及磷酸酶。
真核蛋白激酶家族為人基因組最大的成員之一，包括約500種基因[1，2]。多數(shù)激酶包含帶有保守的核心結(jié)構(gòu)的250-300氨基酸殘基催化結(jié)構(gòu)域。這種結(jié)構(gòu)域包括ATP(較少情形下GTP)的結(jié)合口袋，其末端磷酸被激酶共價轉(zhuǎn)移至其大分子底物上。磷酸供體總是與二價離子(通常為Mg2+或Mn2+)結(jié)合成復(fù)合物。催化結(jié)構(gòu)域的另一種重要功能是大分子底物的磷酸轉(zhuǎn)移的結(jié)合以及定位。在絕大多數(shù)激酶中存在的催化結(jié)構(gòu)域具有或多或少的同源性。
本領(lǐng)域已知有許多通過拮抗ATP結(jié)合能抑制蛋白激酶功能的分子[3-7]。例如，申請人以前公開了具有激酶抑制特性特別地具有抗周期蛋白-依賴性激酶(CDKs)的2-苯胺基-4-雜芳基-嘧啶化合物[8-12]。CDKs是與多種周期蛋白亞基結(jié)合的絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶。這些復(fù)合物對調(diào)節(jié)細(xì)胞周期的進(jìn)程以及對轉(zhuǎn)錄的調(diào)節(jié)非常重要[13，14]。
本發(fā)明尋求提供4-雜芳基-2-(吡啶基氨基)-嘧啶和/或4-雜芳基-2-(吡啶基氨基)-吡啶。更具體地，本發(fā)明涉及在治療許多不同的疾病中有廣泛治療用途和/或能抑制一或多種蛋白激酶的化合物。
發(fā)明概述本發(fā)明第一方面涉及式I化合物，或其藥用鹽， 其中(A)“a”為單鍵并且“b”為雙鍵；R1和R2各自獨立地如下定義；R10不存在；或者(B)“a”為雙鍵且“b”為單鍵；R1為氧；R2如下定義；并且R10為H或烷基；X為S、O、NH，或NR7；Y為N或CR8；Z1、Z2以及Z3之一為N或N+Ra并且其余的各自獨立地為CR7；R1、R2、R5和R6各自獨立地為R7；R3和R4各自獨立地為R8；各R7獨立地為H、鹵素、NRbRc、ORd或任選被一或多個R9基團(tuán)取代的烴基；各R8獨立地為H或(CH2)nR9，其中n為0或1；各R9獨立地選自H、鹵素、NO2、CN、Re、NHCORf、CF3、CORg、NRhRi、CONRjRk、SO2NRlRm、SO2Rn、ORp、OCH2CH2ORq、嗎啉代、哌啶基和哌嗪基；并且Ra-q各自獨立地為H或烷基，其中所述的烷基任選被一或多個R9基團(tuán)取代；其中該化合物不是[4-(2，4-二甲基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基]-吡啶-2-基-胺以及4-[4-氟苯基)-1-(1-甲基-4-哌啶基)-1H-咪唑-5-基]-N-4-吡啶基-2-嘧啶胺。
本發(fā)明第二方面涉及式Ia的化合物，或其藥用鹽， 其中(A)“a”為單鍵并且“b”為雙鍵；R1和R2各自獨立地如下定義；R10不存在；或者(B)“a”為雙鍵且“b”為單鍵；R1為氧；R2如下定義；并且R10為H或烷基；X為S、O、NH，或NR7；Y為N或CR8；Z1、Z2和Z3之一為N或N+Ra并且其余的各自獨立地為CR7；R1、R2、R5和R6各自獨立地為R7；R3和R4各自獨立地為R8；各R7獨立地為H、鹵素、NRbRc、ORd或任選被一或多個R9基團(tuán)取代的烴基；各R8獨立地為H或(CH2)nR9，其中n為0或1；各R9獨立地選自H、鹵素、NO2、CN、Re、NHCORf、CF3、CORg、NRhRi、CONRjRk、SO2NRlRm、SO2Rn、ORp、OCH2CH2ORq、嗎啉代、哌啶基和哌嗪基；并且Ra-q各自獨立地為H或烷基，其中所述的烷基任選被一或多個R9基團(tuán)取代，在制備用于治療一或多種下述疾病的藥物中的用途增生性疾病；病毒性疾??；CNS疾?。恢酗L(fēng)；脫發(fā)；并且糖尿病。
本發(fā)明第三方面涉及一種藥物組合物，包括式Ia的化合物，或其藥用鹽，混合可藥用稀釋劑、賦形劑或載體。
本發(fā)明第四方面涉及式Ia的化合物，或其藥用鹽，在用于鑒別能抑制周期蛋白依賴性激酶、aurora激酶、GSK和PLK酶中的一或多種的其他候選化合物的測定中的用途。
發(fā)明詳述本發(fā)明涉及式I化合物以及式Ia化合物在制備用于治療增生性疾病、病毒性疾病、CNS疾病、中風(fēng)、脫發(fā)和糖尿病中一或多種的藥物中的用途。優(yōu)選的實施方案對式I和Ia化合物而言是相同的。
這里所用的術(shù)語“烴基”指包括至少C和H的基團(tuán)。如果烴基包括多于一個C，則這些碳并不是必要地相互連接。例如，至少兩個碳原子可通過合適的元素或基團(tuán)連接。因此，烴基可包含雜原子。合適的雜原子對本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員而言是顯而易見的，并包括，例如，硫、氮、氧、磷以及硅。其中烴基可包括一或多個雜原子，基團(tuán)可通過碳原子或通過雜原子與另一種基團(tuán)連接，即連接原子可為碳或雜原子。優(yōu)選地，烴基為芳基、雜芳基、烷基、環(huán)烷基、芳烷基、脂環(huán)族基、雜脂環(huán)族基或鏈烯基。更優(yōu)選地，烴基為芳基、雜芳基、烷基、環(huán)烷基、芳烷基或鏈烯基。烴基可任選被一或多個R9基團(tuán)取代。
這里所用的術(shù)語“烷基”包括飽和的直鏈和支鏈烷基，其可被取代(單-或多-)或不被取代。優(yōu)選地，烷基為C1-20烷基，更優(yōu)選地C1-15，更優(yōu)選地C1-12烷基，更優(yōu)選地，C1-6烷基，更優(yōu)選地C1-3烷基。特別地優(yōu)選的烷基包括，例如，甲基、乙基、丙基、異丙基、丁基、異丁基、叔丁基、戊基以及己基。合適的取代基包括，例如，一或多個R9基團(tuán)。
這里所用的術(shù)語“環(huán)烷基”指可被取代的(單-或多-)或未被取代的環(huán)狀的烷基。優(yōu)選地，環(huán)烷基為C3-12環(huán)烷基。合適的取代基包括，例如，一或多個R9基團(tuán)。
這里所用的術(shù)語“鏈烯基”指包含一或多個碳-碳雙鍵的基團(tuán)，其可為支鏈的或非支鏈的，取代的(單-或多-)或未被取代的。優(yōu)選地鏈烯基為C2-20鏈烯基，更優(yōu)選地C2-15鏈烯基，更優(yōu)選地C2-12鏈烯基，或優(yōu)選地C2-6鏈烯基，更優(yōu)選地C2-3鏈烯基。合適的取代基包括，例如，一或多個如上定義的R9基團(tuán)。
這里所用的術(shù)語“芳基”指可被取代的(單-或多-)或未被取代的C6-12芳香基團(tuán)。典型的實例包括苯基和萘基等。合適的取代基包括，例如，一或多個R9基團(tuán)。
這里所用的術(shù)語“脂環(huán)族基”指任選包括一或多種雜原子的環(huán)狀的脂環(huán)族。優(yōu)選的脂環(huán)族基包括哌啶基、哌嗪基、吡咯烷基和嗎啉代。
這里所用的術(shù)語“雜芳基”指C2-12芳香的取代的(單-或多-)或未被取代的基團(tuán)，其包括一或多個雜原子。優(yōu)選地，雜芳基為包括一或多個選自O(shè)、N和S雜原子的C4-12芳香基團(tuán)。優(yōu)選的雜芳基包括吡咯、吡唑、嘧啶、吡嗪、吡啶、喹啉、噻吩和呋喃。再次，合適的取代基包括，例如，一或多個R9基團(tuán)。
這里所用的術(shù)語″芳烷基″包括，但不限于，同時具有芳基和烷基官能團(tuán)的基團(tuán)。例如，該術(shù)語包括其中烷基的一個氫原子被芳基代替的基團(tuán)，例如，芳基為任選被一或多個取代基如鹵素、烷基、烷氧基、羥基等取代的苯基。典型的芳烷基包括芐基、苯乙基等。
一種優(yōu)選的本發(fā)明的實施方案涉及式Ib化合物，或其藥用鹽，
其中X為S、O、NH，或NR7；Y為N或CR8；Z1、Z2和Z3之一為N或N+Ra并且其余的各自獨立地為CR7；R1、R2、R5和R6各自獨立地為R7；R3和R4各自獨立地為R8；各R7獨立地為H、鹵素、NRbRc、ORd或任選被一或多個R9基團(tuán)取代的烴基；各R8獨立地為H或(CH2)nR9，其中n為0或1；各R9獨立地選自H、鹵素、NO2、CN、Re、NHCORf、CF3、CORg、NRhRi、CONRjRk、SO2NRlRm、SO2Rn、ORp、OCH2CH2ORq、嗎啉代、哌啶基和哌嗪基；并且Ra-q各自獨立地為H或烷基，其中所述的烷基任選被一或多個R9基團(tuán)取代；其中該化合物不是[4-(2，4-二甲基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基]-吡啶-2-基-胺和4-[4-氟苯基)-1-(1-甲基-4-哌啶基)-1H-咪唑-5-基]-N-4-吡啶基-2-嘧啶胺。
另一種優(yōu)選的本發(fā)明的實施方案涉及式Ic化合物，或其藥用鹽， 其中
X為S、O、NH，或NR7；Y為N或CR8；Z1、Z2和Z3之一為N或N+Ra并且其余的各自獨立地為CR7；R1、R2、R5和R6各自獨立地為R7；R3和R4各自獨立地為R8；各R7獨立地為H、鹵素、NRbRc、ORd或任選被一或多個R9基團(tuán)取代的烴基；各R8獨立地為H或(CH2)nR9，其中n為0或1；各R9獨立地選自H、鹵素、NO2、CN、Re、NHCORf、CF3、CORg、NRhRi、CONRjRk、SO2NRlRm、SO2Rn、ORp、OCH2CH2ORq、嗎啉、哌啶和哌嗪；并且Ra-q各自獨立地為H或烷基；其中該化合物不是[4-(2，4-二甲基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基]-吡啶-2-基-胺和4-[4-氟苯基)-1-(1-甲基-4-哌啶基)-1H-咪唑-5-基]-N-4-吡啶基-2-嘧啶胺。
在一種優(yōu)選的實施方案中，各R7獨立地為H、鹵素、NRbRc、ORd或包含1至20個C原子的飽和的或不飽和的基團(tuán)，所述的基團(tuán)任選包含一或多個選自N、S和O的雜原子并任選被一或多個R9基團(tuán)取代。
在另一種優(yōu)選的實施方案中，各R7獨立地為H、NRbRc、ORd或包含1至20個C原子的飽和的或不飽和的基團(tuán)，所述的基團(tuán)任選包含一或多個選自N、S和O的雜原子，并任選被一或多個R9基團(tuán)取代。
更優(yōu)選地，各R7獨立地為H、鹵素、NRbRc、ORd或為烷基、環(huán)烷基、芳基或芳烷基，各基團(tuán)任選包含1～6個選自N、S和O的雜原子，并且各基團(tuán)任選被1～6個R9基團(tuán)取代。
甚至更優(yōu)選地，各R7獨立地為H、NRbRc、ORd或為烷基、環(huán)烷基、芳基、脂環(huán)族基或芳烷基，各基團(tuán)任選包含1～6個選自N、S和O的雜原子，并且任選被1～6個R9基團(tuán)取代。
甚至更優(yōu)選地，各R7獨立地為H、NRbRc、ORd或為烷基、環(huán)烷基、芳基或芳烷基，任選包含1～6個選自N、S和O的雜原子，并且任選被1～6個R9基團(tuán)取代。
在一個優(yōu)選的實施方案中，各R7獨立地選自H、ORd、NRbRc、鹵素以及脂環(huán)族基，所述的脂環(huán)族基任選包括一或多個雜原子并且其任選被一或多個R9基團(tuán)取代。
在另一種優(yōu)選的實施方案中，各R7獨立地選自H、ORd、NRbRc、鹵素和脂環(huán)族基，所述的脂環(huán)族基選自吡咯烷基、哌啶基、嗎啉代和哌嗪基，各基團(tuán)任選被一或多個R9基團(tuán)取代。
在另一種優(yōu)選的實施方案中，各R7獨立地選自Me、Cl、OMe、OEt、NH2、NHMe、NHEt、NMe2、N-吡咯烷基、N-哌啶基、N-嗎啉代和N-哌嗪基。
更優(yōu)選地，各R7獨立地選自Me、OMe、OEt、NH2、NHMe、NHEt和NMe2。
在另一種優(yōu)選的實施方案中，Ra-q各自獨立地為H、Me或Et，所述的Me或Et任選被一或多個R9基團(tuán)取代。
在一種優(yōu)選的實施方案中，Ra-q各自獨立地為H、Me或Et。
優(yōu)選地，R9選自H、鹵素、NO2、CN、OH、NH2、NHCOMe、CF3、COMe、Me、Et、iPr、NHMe、NMe2、CONH2、CONHMe、CONMe2、SO2NH2、SO2NHMe、SO2NMe2、SO2Me、OMe、OEt、OCH2CH2OH、OCH2CH2OMe、嗎啉代、哌啶基和哌嗪基。
更優(yōu)選地，R9選自O(shè)Me、鹵素、NH2、CN、NO2、CF3、OEt、NMe2、NHMe和OH。
在一種優(yōu)選的實施方案中Z2和Z3之一為N或N+Ra；并且Z1以及Z2和Z3中的另一個各自獨立地為CR7。
在一種特別地優(yōu)選的實施方案中，Z2為N或NRa+并且Z1和Z3各自獨立地為CR7。
更優(yōu)選地，Z2為N或NRa+，Z1為C-H并且Z3為C-Cl或C-OMe。
在一種優(yōu)選的本發(fā)明的實施方案中，Y為N，即式I或Ia化合物為4-雜芳基-2-吡啶基-嘧啶衍生物。
在另一種優(yōu)選的本發(fā)明的實施方案中，Y為CR8，即式I或Ia化合物為4-雜芳基-2-吡啶基-吡啶衍生物。
在一種優(yōu)選的本發(fā)明的實施方案中，X為S、O或NH。
在一種尤其優(yōu)選的本發(fā)明的實施方案中，X為S，即式I或Ia化合物為4-噻唑基-取代的-2-吡啶基-吡啶衍生物或4-噻唑基-取代的-2-吡啶基-嘧啶衍生物。
在一種優(yōu)選的本發(fā)明的實施方案中，R1選自Me、OMe、OEt、NH2、NHMe、NHEt和NMe2。
在另一種優(yōu)選的本發(fā)明的實施方案中，R2為Me。
在另一種優(yōu)選的實施方案中，R3、R4、R5和R6都為H。
另一種優(yōu)選的本發(fā)明的實施方案涉及式Id化合物，或其藥用鹽， 其中R2-6、R10、X、Y、Z1、Z2和Z3如上定義。
在一種尤其優(yōu)選的本發(fā)明的實施方案中，化合物選自下述化合物[4-(2，4-二甲基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基]-吡啶-3-基-胺[1]；3-[4-(2，4-二甲基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基氨基]-1-甲基-吡啶鎓[2]；(6-氯-吡啶-3-基)-[4-(2，4-二甲基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基]-胺[3]；5-[2-(6-氯-吡啶-3-基氨基)-嘧啶-4-基]-3，4-二甲基-3H-噻唑-2-酮[4]；[4-(2-氨基-4-甲基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基]-(6-甲氧基-吡啶-3-基)-胺[5]；[4-(2，4-二甲基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基]-(6-甲氧基-吡啶-3-基)-胺[6]；[4-(2-氨基-4-甲基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基]-(6-氯-吡啶-3-基)-胺[7]；(6-甲氧基-吡啶-3-基)-[4-(4-甲基-2-甲基氨基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基]-胺[8]；(6-氯-吡啶-3-基)-[4-(4-甲基-2-甲基氨基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基]-胺[9]；[4-(2-二甲基氨基-4-甲基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基]-(6-甲氧基-吡啶-3-基)-胺[10]；3-乙基-5-[2-(6-甲氧基-吡啶-3-基氨基)-嘧啶-4-基]-4-甲基-3H-噻唑-2-酮[11]；[4-(2-乙基氨基-4-甲基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基]-(6-甲氧基-吡啶-3-基)-胺[12]；{4-[2-(2-甲氧基-乙基氨基)-4-甲基-噻唑-5-基]-嘧啶-2-基}-(6-甲氧基-吡啶-3-基)-胺[13]；[4-(2，4-二甲基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基]-(6-吡咯烷-1-基-吡啶-3-基)-胺[14]；[4-(4-甲基-2-甲基氨基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基]-[6-(4-甲基-哌嗪-1-基)-吡啶-3-基]-胺[15]；以及(6-甲氧基-吡啶-3-基)-[4-(4-甲基-2-嗎啉-4-基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基]-胺[16]。
在另一種特別地優(yōu)選的實施方案中，本發(fā)明的化合物選自下述化合物[4-(2，4-二甲基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基]-吡啶-3-基-胺[1]；3-[4-(2，4-二甲基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基氨基]-1-甲基-吡啶鎓[2]；(6-氯-吡啶-3-基)-[4-(2，4-二甲基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基]-胺[3]；(6-氯-吡啶-3-基)-[4-(2-甲氧基-4-甲基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基]-胺[4]；[4-(2-氨基-4-甲基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基]-(6-甲氧基-吡啶-3-基)-胺[5]；[4-(2，4-二甲基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基]-(6-甲氧基-吡啶-3-基)-胺[6]；[4-(2-氨基-4-甲基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基]-(6-氯-吡啶-3-基)-胺[7]；(6-甲氧基-吡啶-3-基)-[4-(4-甲基-2-甲基氨基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基]-胺[8]；(6-氯-吡啶-3-基)-[4-(4-甲基-2-甲基氨基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基]-胺[9]；[4-(2-二甲基氨基-4-甲基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基]-(6-甲氧基-吡啶-3-基)-胺[10]；[4-(2-乙氧基-4-甲基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基]-(6-甲氧基-吡啶-3-基)-胺[11]；并且[4-(2-乙基氨基-4-甲基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基]-(6-甲氧基-吡啶-3-基)-胺[12]。
在一種優(yōu)選的實施方案中，化合物能抑制一或多種選自CDK1/周期蛋白B、CDK2/周期蛋白A、CDK2/周期蛋白E、CDK4/周期蛋白D1、CDK7/周期蛋白H、CDK9/周期蛋白T1、aurora激酶、GSK3β和PLK1中的蛋白激酶，如用適當(dāng)?shù)臏y定測量。多種激酶測定的細(xì)節(jié)可見于伴隨的實施例部分并且對本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員而言是熟知的。
更優(yōu)選地，化合物顯示的IC50值(對激酶抑制)小于1μM。因此，在一種優(yōu)選的實施方案中，式I或Ia化合物選自下述化合物[1]、[3]、[4]、[5]、[6]、[7]、[8]、[9]、[10]、[11]、[12]、[13]、[14]和[15]。
更優(yōu)選地，化合物顯示的IC50值(對激酶抑制)小于0.1μM。因此，在一種優(yōu)選的實施方案中，式I或Ia化合物選自下述化合物[1]、[4]、[5]、[7]、[8]、[9]、[10]、[11]、[12]和[15]。
在一種優(yōu)選的實施方案中，化合物選自下述化合物[4]、[5]、[7]、[8]和[11]。
甚至更優(yōu)選地，化合物顯示的IC50值(對激酶抑制)小于0.01μM。因此，在一種優(yōu)選的實施方案中，式I或Ia化合物選自下述化合物[5]、[7]和[8]。
在一種優(yōu)選的實施方案中，本發(fā)明涉及在體外對一或多種轉(zhuǎn)化的人細(xì)胞系顯示抗增殖活性的化合物，如用72-小時MTT細(xì)胞毒性測定顯示。優(yōu)選地，化合物選自下述化合物如上定義的[1]-[10]、[12]和[14]。
優(yōu)選地，本發(fā)明的化合物在體外對一或多種轉(zhuǎn)化的人細(xì)胞系能顯示小于10μM的IC50值(平均)，如用72-小時MTT細(xì)胞毒性測定顯示。因此，優(yōu)選地，式I或Ia化合物選自下述化合物[1]、[3]、[4]、[5]、[6]、[7]、[8]、[9]、[10]、[12]和[14]。
甚至更優(yōu)選地，本發(fā)明的化合物在體外對一或多種轉(zhuǎn)化的人細(xì)胞系能顯示小于5μM的IC50值(平均)，如用72-小時MTT細(xì)胞毒性測定顯示。因此，優(yōu)選地，式I或Ia化合物選自下述化合物[1]、[4]、[5]、[6]、[7]、[8]、[9]、[10]、[12]和[14]。
更優(yōu)選地，本發(fā)明的化合物在體外對一或多種轉(zhuǎn)化的人細(xì)胞系能顯示小于2.5μM并且更優(yōu)選地小于2μM的IC50值(平均)，如用72-小時MTT細(xì)胞毒性測定顯示。因此，優(yōu)選地，式I或Ia化合物選自下述化合物[4]、[8]、[10]、[12]和[14]。
更優(yōu)選地，本發(fā)明的化合物在體外對一或多種轉(zhuǎn)化的人細(xì)胞系能顯示小于1μM的IC50值(平均)，如用72-小時MTT細(xì)胞毒性測定顯示。因此，優(yōu)選地，式I或Ia化合物為化合物[14]。
治療用途已經(jīng)發(fā)現(xiàn)式Ia化合物具有抗增殖活性并因此相信可用于治療增生性疾病例如癌癥、白血病和其他與失控細(xì)胞增殖有關(guān)的疾病，例如牛皮癬和再狹窄。在本發(fā)明的范圍內(nèi)所定義的抗增殖效果可以由在體外全細(xì)胞測定法中抑制細(xì)胞增殖的能力得到證明，例如使用A549、HT29、Saos-2中的任何一種細(xì)胞系。利用這些細(xì)胞系，可以確定一種化合物在本發(fā)明的意義上是否具有抗增殖性的特性。
因此一種優(yōu)選的本發(fā)明實施方案涉及一或多種式Ia化合物在制備用于治療增生性疾病的藥物中的用途。
這里使用的術(shù)語“藥物制備”除了其用于篩選其他治療劑的方法外，包括式Ia的化合物直接用作藥物或在制備這樣的藥物的任何階段中的用途。
優(yōu)選地，增殖性疾病是癌癥或白血病。本文所用的術(shù)語增殖性疾病在廣義上包括任何需要控制細(xì)胞周期的疾病，例如心血管疾病，例如再狹窄和心臟病和心肌梗塞；自體免疫性疾病，例如腎小球腎炎和類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎；皮膚病，例如牛皮癬；需要消炎、抗真菌、抗寄生蟲性疾病，例如瘧疾、肺氣腫和脫發(fā)癥和慢性阻塞性肺病。在這些疾病中，本發(fā)明的化合物可以根據(jù)需要在所需細(xì)胞內(nèi)誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡或者維持停滯。
本發(fā)明的化合物可以抑制細(xì)胞周期中的任意步驟或階段，例如核被膜的形成、從細(xì)胞周期的靜止期(G0)退出、G1進(jìn)展、染色體解聚濃縮、核被膜破裂、START、DNA復(fù)制的引發(fā)、DNA復(fù)制的進(jìn)展、DNA復(fù)制的終止、中心體復(fù)制、G2進(jìn)展、有絲分裂或減數(shù)分裂功能的激活、染色體聚集、中心體分離、微管成核、紡錘體生成與活動、與微管動力蛋白的相互作用、染色單體分開(separation)與分離(segregation)、有絲分裂功能的失活、收縮環(huán)的生成和胞質(zhì)分裂活動。確切而言，本發(fā)明的化合物可以影響某些基因功能，例如染色質(zhì)結(jié)合、復(fù)制復(fù)合體的生成、復(fù)制許可、磷酸化或其他二次修飾活性、蛋白水解性降解、微管結(jié)合、肌動蛋白結(jié)合、septin結(jié)合、微管組織中心成核活性和與細(xì)胞周期發(fā)信號通路成分的結(jié)合。
在一種本發(fā)明的實施方案中，式Ia化合物以足以抑制至少一種CDK酶的量給藥。
優(yōu)選地，式Ia化合物以足以抑制至少一種CDK2和/或CDK4的量給藥。
本發(fā)明的另一方面涉及式Ia的化合物在制備用于治療病毒性疾病如人巨細(xì)胞病毒(HCMV)、1型單純皰疹病毒(HSV-1)、1型人免疫缺陷病毒(HIV-1)和水痘-帶狀皰疹病毒(VZV)的藥物中的用途。
在更優(yōu)選的本發(fā)明的實施方案中，式Ia化合物以足以抑制一或多種在病毒復(fù)制中涉及的宿主細(xì)胞CDKs即CDK2、CDK7、CDK8和CDK9[23]的量給藥。
如這里定義的本發(fā)明范圍的抗病毒活性可通過抑制CDK2、CDK7、CDK8或CDK9的活性而得到證實。
在特別優(yōu)選的實施方案中，本發(fā)明涉及一種或多種式Ia化合物在治療CDK依賴性或敏感性的病毒性疾病中的應(yīng)用。CDK依賴性疾病與一種或多種CDK酶的超過正常活性水平有關(guān)。這類疾病優(yōu)選與CDK2、CDK7、CDK8和/或CDK9的異?；钚运接嘘P(guān)。CDK敏感性疾病為CDK水平的失常不是主因而是下游初級異謝失常導(dǎo)致的疾病。在這種情況下，CDK2、CDK7、CDK8和/或CDK9被認(rèn)為是敏感性代謝途徑的一部分，并且CDK抑制劑可因此在治療這類疾病中有活性。
本發(fā)明的另一方面涉及一種治療CDK-依賴性疾病的方法，所述的方法包括對需要該治療的患者以足以抑制周期蛋白依賴性激酶的量給藥如上定義的式Ia的化合物，或其藥用鹽。
優(yōu)選地，CDK-依賴性疾病為病毒性疾病，或增生性疾病，更優(yōu)選地癌癥。
本發(fā)明另一方面涉及式Ia化合物，或其藥用鹽，在制備用于治療糖尿病的藥物中的用途。
在特別優(yōu)選的實施方案中，所述的糖尿病為II型糖尿病。
GSK3為磷酸化糖原合成酶(GS)的數(shù)種蛋白激酶中的一種。骨骼肌中胰島素對的糖原合成的刺激源自GS的去磷酸化以及活化。因此，GSK3對GS的作用導(dǎo)致后者的失活并因此抑制肌肉中葡萄糖向糖原的轉(zhuǎn)化。
II型糖尿病(非-胰島素依賴性糖尿病)是一種多因素疾病。高血糖癥是由于肝臟、肌肉以及其他組織中的胰島素抗性以及受損的胰島素分泌導(dǎo)致的。骨骼肌是胰島素-刺激的葡萄糖攝取的主要部位，在那里其離開循環(huán)或轉(zhuǎn)化成糖原。肌肉糖原沉積是葡萄糖調(diào)節(jié)平衡作用中的主要決定環(huán)節(jié)，并且II型糖尿病具有缺乏的肌肉糖原貯存。有證據(jù)表明GSK3活性活性的增加在II型糖尿病中很重要[24]。此外，已經(jīng)證實GSK3在II型糖尿病的肌肉細(xì)胞中過表達(dá)并且在骨骼肌GSK3活性和胰島素作用之間存在逆相關(guān)[25]。
因此，GSK3的抑制在治療糖尿病尤其是II型糖尿病以及糖尿病神經(jīng)病變中有治療意義。
已知GSK3磷酸化除GS以外的許多底物，并因此參與多種生化通路的調(diào)節(jié)。例如，GSK在中樞和外周神經(jīng)系統(tǒng)中高表達(dá)。
因此本發(fā)明另一方面涉及式Ia化合物或其可藥用鹽，在制備用于治療CNS疾病例如神經(jīng)退行性疾病的藥物中的用途。
優(yōu)選地，所述的CNS疾病為阿耳茨海默氏病。
Tau為參與阿耳茨海默氏病的病因?qū)W的GSK-3底物。在健康的神經(jīng)細(xì)胞中，Tau與微管蛋白共聚成微管。但是，在阿耳茨海默氏病中，tau形成了大的絲狀纏結(jié)，破壞了神經(jīng)細(xì)胞中的微管結(jié)構(gòu)，從而損壞營養(yǎng)的傳輸以及神經(jīng)信息的傳遞。
希望不被理論所局限，相信GSK3抑制劑能預(yù)防和/或逆轉(zhuǎn)微管-相關(guān)蛋白tau的異常高度磷酸化，后者是阿耳茨海默氏病以及許多其他的神經(jīng)退行性疾病如進(jìn)行性核上性麻痹、皮質(zhì)基質(zhì)變性以及皮克氏病的不變特征。tau基因中的突變引起額顳癡呆的遺傳形式，進(jìn)一步支持tau蛋白功能障礙與神經(jīng)退行性變化之間的關(guān)系[26]。
本發(fā)明另一方面涉及式Ia化合物或其可藥用鹽，在制備用于治療雙相性精神障礙(bipolar disorder)的藥物中的用途。
另一方面，本發(fā)明涉及式Ia化合物或其可藥用鹽，在制備用于治療中風(fēng)的藥物中的用途。
降低神經(jīng)元細(xì)胞凋亡是頭外傷、中風(fēng)、癲癇癥以及運動神經(jīng)元疾病中的一個重要的治療目標(biāo)[27]。因此，作為神經(jīng)元細(xì)胞中的促細(xì)胞凋亡因子，GSK3使該蛋白激酶成為設(shè)計用于治療這些疾病的抑制性藥物中有吸引力的治療靶標(biāo)。
本發(fā)明另一方面涉及式Ia化合物或其可藥用鹽，在制備用于治療脫發(fā)癥(alopecia)的藥物中的用途。
毛發(fā)生長受Wnt信號通路尤其是Wnt-3信號通路的控制。在皮膚的組織培養(yǎng)模型體系中，β-聯(lián)蛋白的不可降解的突變體的表達(dá)導(dǎo)致推定的干細(xì)胞的數(shù)量的顯著增加，其具有更大的增殖活性[28]。這種干細(xì)胞群體表達(dá)高水平的非-鈣粘蛋白-相關(guān)的β-聯(lián)蛋白[29]，其可促進(jìn)高的增殖活性。此外，皮膚中過量表達(dá)截短的β-聯(lián)蛋白的轉(zhuǎn)基因小鼠發(fā)生全新的發(fā)-囊形態(tài)發(fā)生，正常情況下只在胚胎形成中才發(fā)生。因此GSK3抑制劑的異常使用可用于治療光禿并可用于化療誘導(dǎo)的脫發(fā)癥的頭發(fā)生長的恢復(fù)。
在優(yōu)選的本發(fā)明的實施方案中，式Ia化合物，或其藥用鹽，以足以抑制GSK3β的量給藥。
更優(yōu)選地，式Ia化合物，或其藥用鹽，以足以抑制GSK3β的量給藥。
本發(fā)明另一方面涉及一種治療GSK3-依賴性疾病的方法，所述的方法包括對需要該治療的患者以足以抑制GSK3的量給藥如上定義的式Ia的化合物，或其藥用鹽。優(yōu)選地，式Ia化合物，或其藥用鹽，以足以抑制GSK3β的量給藥。
優(yōu)選地，GSK3-依賴性疾病為糖尿病。
在一種本發(fā)明的實施方案中，式Ia化合物以足以抑制至少一種PLK酶的量給予。
polo樣激酶(PLKs)由絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶家族組成。在polo位點的有絲分裂果蠅melanogaster突變顯示出紡錘體異常[30]并且發(fā)現(xiàn)polo編碼有絲分裂激酶[31]。在人體中，存在三種高度相關(guān)的PLKs[32]。其包含高度同源的氨基-端催化性激酶結(jié)構(gòu)域并且其羧基端包含兩個或三個保守區(qū)域，polo盒。目前不完全了解polo盒的功能，但是其參與將PLKs靶向亞細(xì)胞區(qū)[33，34]、調(diào)節(jié)與其他蛋白的相互作用[35]或可構(gòu)成了自調(diào)節(jié)結(jié)構(gòu)域部分[36]。此外，polo盒-依賴性PLK1活性對正確的中期/后期轉(zhuǎn)換以及胞質(zhì)分裂是必須的[37，38]。
研究表明人PLKs調(diào)節(jié)有絲分裂的一些基本方面[39，40]。具體地，據(jù)信PLK1活性對G2后期/前期早期中的中心體的功能性成熟以及隨后的雙極紡錘體的形成是必需的。通過小的干擾RNA(siRNA)技術(shù)消耗細(xì)胞內(nèi)PLK1已經(jīng)證實該蛋白對多重有絲分裂過程以及胞質(zhì)分裂的完成是必需的[41]。
在更優(yōu)選的本發(fā)明的實施方案中，式Ia化合物以足以抑制PLK1的量給藥。
在三種人PLK中，PLK1表征最為充分；其調(diào)節(jié)多種細(xì)胞裂分周期活性包括有絲分裂的起始[42，43]、DNA-損害關(guān)卡激活[44，45]、調(diào)節(jié)后期促進(jìn)復(fù)合物[46-48]、蛋白酶體的磷酸化[49]以及中心體的復(fù)制以及成熟[50]。
具體地，有絲分裂的啟動要求活化M-期促進(jìn)因子(MPF)，細(xì)胞周期蛋白依賴性激酶CDK1和B-型細(xì)胞周期蛋白之間的復(fù)合物[51]。后者在細(xì)胞周期的S和G2期聚集并促進(jìn)WEE1、MIK1和MYT1激酶對MPF復(fù)合物的磷酸化的抑制作用。在G2期末期，由雙重-特異性磷酸酶CDC25C導(dǎo)致的相應(yīng)脫磷酸作用引發(fā)MPF的活化[52]。在分裂間期，細(xì)胞周期蛋白B定位至細(xì)胞質(zhì)[53]，然后在前期磷酸化并且該事件引起核易位[54，55]。在前期的活性的MPF的核聚集被認(rèn)為對啟動M-期事件很重要[56]。但是，由于WEE1，核MPF保持無活性，除非被CDC25C中和。磷酸酶CDC25C自身在分裂間期定位至細(xì)胞質(zhì)，并在前期在核中聚集[57-59]。周期蛋白B[60]和CDC25C[61]二者的核進(jìn)入可被PLK1的磷酸化促進(jìn)[43]。這種激酶是M-期啟動的重要調(diào)節(jié)因子。
在一種特別地優(yōu)選的實施方案中，式Ia化合物為PLK1的ATP-拮抗抑制劑。
在本發(fā)明中，ATP拮抗性指抑制劑化合物減少或防止PLK催化活性，即從ATP磷酸轉(zhuǎn)移至大分子PLK底物的活性，以一種削弱或破壞ATP結(jié)合的方式可逆地或不可逆地結(jié)合酶活性位點。
在另一個優(yōu)選的實施方案中，式Ia化合物以足以抑制PLK2和/或PLK3的量給予。
哺乳動物PLK2(已知也為SNK)和PLK3(已知也為PRK和FNK)最初顯示為直接的早期基因產(chǎn)物。PLK3激酶活性似乎在S后期和G2期達(dá)到高峰。其也在DNA損害關(guān)卡活化以及嚴(yán)重的氧化應(yīng)激期間活化。PLK3也在細(xì)胞中微管動力學(xué)和中心體功能的調(diào)節(jié)中發(fā)揮重要作用，并且PLK3表達(dá)下調(diào)導(dǎo)致細(xì)胞周期停滯和細(xì)胞凋亡[62]。PLK2是三種PLKs中了解最少的。PLK2和PLK3二者可能還具有其他的重要的有絲分裂后功能[35]。
本發(fā)明的另一方面涉及一種治療PLK-依賴性疾病的方法，所述的方法包括對需要該治療的患者以足以抑制PLK的量給藥如上定義的式Ia的化合物，或其藥用鹽。
優(yōu)選地，PLK-依賴性疾病為增生性疾病，更優(yōu)選地，癌癥。
在另一種優(yōu)選的本發(fā)明的實施方案中，式Ia化合物以足以抑制aurora激酶的量給藥。
本發(fā)明另一方面涉及一種治療aurora激酶-依賴性疾病的方法，所述的方法包括對需要該治療的患者以足以抑制aurora激酶的量給藥如上定義的式Ia的化合物，或其藥用鹽。
優(yōu)選地，aurora激酶依賴性疾病為如上定義的病毒性疾病。
藥物組合物本發(fā)明的其他方面涉及一種藥物組合物，包括如第一方面定義的式Ia化合物與一種或多種可藥用稀釋劑、賦形劑或載體混合。甚至盡管本發(fā)明的化合物(包括其可藥用鹽、酯以及可藥用溶劑合物)可單獨給藥，通常它們與可藥用載體、賦形劑或稀釋劑一起給藥，尤其是用于人治療的時候。藥物組合物可用于人和獸醫(yī)中的人或動物使用。
對這里記載的藥物組合物的各種不同形式的合適的賦形劑的實例可見于“Handbook of Pharmaceutical Excipients，2ndEdition，(1994)，由A Wade和PJ Weller編著。
治療用途的可接受的載體或稀釋劑是制藥領(lǐng)域中公知的，并且，在例如，Remington′s Pharmaceutical Sciences，Mack Publishing Co.(A.R.Gennaro edit.1985)中進(jìn)行了記載。
合適的載體的實例包括乳糖、淀粉、葡萄糖、甲基纖維素、硬脂酸鎂、甘露醇、山梨醇等。合適的稀釋劑的實例包括乙醇、甘油和水。
藥用載體、賦形劑或稀釋劑可根據(jù)將要使用的給藥途徑以及標(biāo)準(zhǔn)的制藥規(guī)范進(jìn)行選擇。藥物組合物可包含作為或除了載體、賦形劑或稀釋劑以外的任何合適的粘合劑、潤滑劑、助懸劑、包衣劑、助溶劑。
合適的粘合劑的實例包括淀粉、明膠、天然糖類如葡萄糖、無水乳糖、自由流動的乳糖、β-乳糖、玉米甜料、天然和合成的橡膠，如阿拉伯樹膠、黃蓍樹膠或藻酸鈉、羧基甲基纖維素和聚乙二醇。
合適的潤滑劑的實例包括油酸鈉、硬脂酸鈉、硬脂酸鎂、苯甲酸鈉、乙酸鈉、氯化鈉等。
防腐劑、穩(wěn)定劑、染料以及甚至調(diào)味劑可在藥物組合物中提供。防腐劑的實例包括苯甲酸鈉、山梨酸以及p-羥基苯甲酸的酯類。也可使用抗氧化劑以及助懸劑。
鹽/酯式I、Ia、Ib、Ic或Id化合物可以鹽或酯尤其是藥物可接受的鹽或酯的形式提供。
本發(fā)明化合物的藥物可接受鹽包括它們合適的酸加成鹽或堿加成鹽。合適藥物鹽的綜述可見Berge等人的J.Pharm Sci，66，1-19(1977)。鹽為與例如以下酸形成的鹽強(qiáng)無機(jī)酸，如礦物酸，例如硫酸、磷酸或氫鹵酸；強(qiáng)有機(jī)羧酸，如未取代或取代(如被鹵代)的1至4個碳原子的鏈烷羧酸，例如乙酸；飽和或不飽和的二元羧酸，例如草酸、丙二酸、丁二酸、馬來酸、富馬酸、鄰苯二甲酸或四鄰苯二甲酸(tetraphthalic)；羥基羧酸，例如抗壞血酸、羥基乙酸、乳酸、蘋果酸、酒石酸或檸檬酸；氨基酸，例如天冬氨酸或谷氨酸；苯甲酸；或與有機(jī)磺酸，如未取代或取代(如被鹵代)的(C1-C4)烷基磺酸或芳基磺酸，如甲磺酸或?qū)妆交撬帷?br> 取決于被酯化的官能團(tuán)，使用有機(jī)酸或醇/氫氧化物形成酯。有機(jī)酸包括羧酸，如未取代或取代(如被鹵代)的1至12個碳原子的鏈烷羧酸，例如乙酸；飽和或不飽和的二元羧酸，例如草酸、丙二酸、丁二酸、馬來酸、富馬酸、鄰苯二甲酸或四鄰苯二甲酸；羥基羧酸，例如抗壞血酸、羥基乙酸、乳酸、蘋果酸、酒石酸或檸檬酸；氨基酸，例如天冬氨酸或谷氨酸；苯甲酸；或與有機(jī)磺酸，如未取代或取代(如被鹵代)的(C1-C4)烷基磺酸或芳基磺酸，如甲磺酸或?qū)妆交撬?。合適的氫氧化物包括無機(jī)氫氧化物，如氫氧化鈉、氫氧化鉀、氫氧化鈣、氫氧化鋁。醇包括未取代或取代(如被鹵代)的1至12個碳原子的鏈烷醇。
對映異構(gòu)體/互變異構(gòu)體在前述討論的本發(fā)明的所有方面中，本發(fā)明還適當(dāng)?shù)匕ㄊ絀、Ia、Ib、Ic或Id化合物的全部對映異構(gòu)體和互變異構(gòu)體。本領(lǐng)域的技術(shù)人員能認(rèn)識到具有光學(xué)性質(zhì)(一個或多個手性碳原子)或互變異構(gòu)特征的化合物。可通過本領(lǐng)域中已知的方法分離/制備相應(yīng)的對映異構(gòu)體和/或互變異構(gòu)體。
立體異構(gòu)體和幾何異構(gòu)體一些本發(fā)明的化合物可以立體異構(gòu)體和/或幾何異構(gòu)體的形式存在，例如其可具有一個或多個不對稱和/或幾何中心，并因此可以二種或多種立體異構(gòu)和/或幾何形式存在。本發(fā)明包括這些活性成分所有的單獨立體異構(gòu)體和幾何異構(gòu)體及其混合物的使用。權(quán)利要求中使用的術(shù)語包括這些形式，只要所述形式保留適當(dāng)?shù)墓δ芑钚?但不必到相同程度)。
本發(fā)明還包括活性成分或其藥物可接受鹽的所有合適的同位素變體。本發(fā)明藥劑或其藥物可接受鹽的同位素變體定義為其中至少一個原子被具有相同原子序數(shù)但原子質(zhì)量與自然界中通常發(fā)現(xiàn)的原子質(zhì)量不同的原子取代的物質(zhì)?？杀粨饺氲剿巹┖推渌幬锟山邮茺}的同位素的例子包括氫、碳、氮、氧、磷、硫、氟和氯的同位素，分別如2H、3H、13C、14C、15N、17O、18O、31P、32P、35S、18F和36Cl。本發(fā)明的活性成分和其藥物可接受鹽的一些同位素變體，例如結(jié)合放射性同位素如3H或14C的那些化合物，在藥物和/或底物組織分布研究中是有用的。含氚的即3H和碳-14即14C同位素因其容易制備和可檢測性而特別優(yōu)選。此外，用同位素如氘即2H的取代可因較大的代謝穩(wěn)定性而提供特定的治療益處，例如體內(nèi)半衰期增加或劑量要求降低，并因此可在一些情況下被優(yōu)選。通?？墒褂煤线m試劑的適當(dāng)同位素變體通過常規(guī)過程制備本發(fā)明藥劑和其藥物可接受鹽的同位素變體。
溶劑合物本發(fā)明還包括本發(fā)明藥劑的溶劑合物形式。權(quán)利要求中使用的術(shù)語包括這些形式。
多晶型物本發(fā)明還涉及用于本發(fā)明的化合物的各種結(jié)晶形式、多晶型形式和無水/水合形式。眾所周知，在藥物工業(yè)中可通過稍微改變這種化合物合成制備中所用溶劑的純化方法和或分離形式來分離得到化合物的任意這類形式。
前體藥物本發(fā)明還包括用于本發(fā)明的化合物的前體藥物形式。這種前體藥物通常為一個或多個適當(dāng)基團(tuán)已被修飾以使在對人或哺乳動物對象給藥后所述的修飾可被逆轉(zhuǎn)的式I、Ia、Ib、Ic或Id化合物。雖然為了實現(xiàn)體內(nèi)逆轉(zhuǎn)可與這種前體藥物一起給藥第二種藥劑，但通常通過在這類對象中天然存在的酶實現(xiàn)這種逆轉(zhuǎn)。這類修飾的例子包括酯(例如上述那些中的任一種)，其中可通過酯酶等進(jìn)行逆轉(zhuǎn)。其它這類系統(tǒng)為本領(lǐng)域中那些技術(shù)人員所熟知。
給藥可使本發(fā)明的藥物組合物適于口服、直腸、陰道、腸胃外、肌內(nèi)、腹膜內(nèi)、動脈內(nèi)、鞘內(nèi)、支氣管內(nèi)、皮下、皮內(nèi)、靜脈內(nèi)、鼻、口腔或舌下給藥途徑。
對于口服給藥，特別利用壓縮片劑、藥丸、片劑、凝膠(gellules)、滴劑和膠囊。優(yōu)選地，這些組合物每劑包含1-250mg和更優(yōu)選10-100mg的有效成分。
其它給藥形式包括溶液或乳液，它們可經(jīng)靜脈內(nèi)、動脈內(nèi)、鞘內(nèi)、皮下、皮內(nèi)、腹膜內(nèi)或肌內(nèi)給藥，并由無菌或可滅菌溶液制備。本發(fā)明的藥物組合物還可為栓劑、陰道栓劑、混懸劑、乳液、洗液、軟膏、乳膏劑、凝膠、噴霧劑、溶液或撲粉(dusting powder)的形式。
經(jīng)皮給藥的替代方式是利用皮膚貼片。例如，可將有效成分摻入到由聚乙二醇含水乳液或液體石蠟組成的乳膏劑內(nèi)。還可以1-10wt％的濃度將有效成分摻入到由白蠟或白色軟石蠟基質(zhì)與所需要的穩(wěn)定劑和防腐劑共同組成的軟膏內(nèi)。
可注射形式每劑可包含10-1000mg、優(yōu)選10-250mg的有效成分。
組合物可被配制成單元劑型，即包含單元劑量或單元劑量的多重單位或亞單位的形式的離散部分。
劑量本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員不用過度的試驗就可容易地確定對患者給藥的本發(fā)明的組合物的適宜劑量。典型地，醫(yī)師會確定對個體患者最適合的實際劑量，并且根據(jù)多種因素包括使用的具體化合物的活性、化合物的代謝穩(wěn)定性以及作用時間的長短、病人的年齡、體重、一般健康狀況、性別、飲食、給藥的方式以及時間、排泄速率、藥物組合以及具體疾病的嚴(yán)重程度以及接受治療的個體進(jìn)行調(diào)整。本文公開的劑量為一般情況的示例。當(dāng)然也可有有益的較高或較低劑量范圍個別情況，這都在本發(fā)明的范圍內(nèi)。
根據(jù)需要，可以0.01-30mg/kg體重，如0.1-10mg/kg體重，更優(yōu)選0.1-1mg/kg體重的劑量給藥所述藥劑。
在示例性的實施方案中，對病人施用一或多劑10～150mg/天。
組合在特別優(yōu)選的實施方案中，一或多種本發(fā)明的化合物與一或多種其他的治療活性劑組合給藥，例如，市場上提供的現(xiàn)有的藥物。在這種情況下，本發(fā)明的化合物可連續(xù)地、同時地或先后地與一或多種活性劑組合給藥。
例如，已知抗癌癥藥通常在組合使用的時候更有效。尤其地，組合療法可以避免主要毒性作用、作用機(jī)制以及耐藥機(jī)制的重疊。此外，也可以以最大耐受劑量并在這些劑量之間以最小的時間間隔施用大多數(shù)藥物?；瘜W(xué)治療藥物組合的主要優(yōu)勢在于可能通過生化相互作用促進(jìn)加和的或可能的協(xié)同作用，并且也可能降低在早期腫瘤細(xì)胞中的耐藥性的出現(xiàn)，后者響應(yīng)于用單藥進(jìn)行的初始化療。在選擇藥物組合時候利用生化相互作用的實例通過下述事實得到證實施用亞葉酸增加5-氟尿嘧啶的活性細(xì)胞內(nèi)代謝物對其靶標(biāo)胸苷酸合酶的結(jié)合，從而增加其細(xì)胞毒性活性。
許多組合目前已經(jīng)用于癌癥和白血病的治療中。醫(yī)學(xué)實踐的更廣泛的評論可見″Oncologic Therapies″，由E.E.Vokes和H.M.Golomb編著，由Springer出版。
可通過研究受試化合物與已知的或認(rèn)為在最初治療具體的癌癥中或衍生自癌癥的細(xì)胞系中有價值的化合物的抑制活性而暗示有利的組合。這種方法也可用于測定施用藥劑的順序，即，之前、同時或之后。所述的給藥方案可為這里鑒定的所有的細(xì)胞周期作用藥物的特征。
測定本發(fā)明另一方面涉及如前定義的本發(fā)明的化合物在用于鑒別其他的候選化合物的分析中的用途，所述候選化合物能抑制一或多種蛋白激酶的活性。
本發(fā)明另一方面涉及本發(fā)明的化合物在用于識別其他的候選化合物中的用途，所述的其他的候選化合物能抑制周期蛋白依賴性激酶、aurora激酶、GSK和PLK中的一或多種。
更優(yōu)選地，所述的分析為競爭性結(jié)合分析。
更優(yōu)選地，競爭性結(jié)合分析包括將本發(fā)明的化合物與蛋白激酶以及候選化合物接觸并檢測本發(fā)明的化合物和蛋白激酶之間的相互作用的任何變化。
本發(fā)明一方面涉及一種方法，包括下述步驟(a)進(jìn)行上述的分析方法；(b)鑒別一或多種能結(jié)合至配體結(jié)合結(jié)構(gòu)域的配體；以及(c)制備一定量的所述的一或多種配體。
本發(fā)明另一方面提供了一種方法，包括下述步驟(a)進(jìn)行上述的分析方法；(b)鑒別一或多種能結(jié)合至配體結(jié)合結(jié)構(gòu)域的配體；以及(c)制備包括所述的一或多種配體的藥物組合物。
本發(fā)明另一方面涉及一種方法，包括下述步驟(a)進(jìn)行上述的分析方法；(b)鑒別一或多種能結(jié)合至配體結(jié)合結(jié)構(gòu)域的配體；以及(c)修飾一或多種所述的能結(jié)合至配體結(jié)合結(jié)構(gòu)域的配體；(d)進(jìn)行上述的分析方法；(e)任選地制備包括所述的一或多種配體的藥物組合物。
本發(fā)明還涉及利用上述方法鑒定的配體。
本發(fā)明另一方面還涉及包括利用上述方法鑒定的配體的藥物組合物。
本發(fā)明另一方面涉及利用上述方法鑒定的配體在制備用于治療增生性疾病、病毒性疾病、CNS疾病、中風(fēng)、脫發(fā)和糖尿病的藥物組合物中的用途。
優(yōu)選地，所述的候選化合物通過對本發(fā)明化合物的常規(guī)的SAR修飾而產(chǎn)生。
這里所用的術(shù)語“常規(guī)的SAR修飾”指通過化學(xué)衍生化改變給定的化合物的本領(lǐng)域的公知的標(biāo)準(zhǔn)方法。
上述方法可用于篩選用作一或多種蛋白激酶抑制劑的配體。
合成通式I和Ia的化合物可利用本領(lǐng)域的任何公知的方法制備得到。制備式I和Ia化合物的兩種常規(guī)合成路線顯示在下述方案1中
方案1雜芳基硼酸(III，W＝B(OH)2)或其衍生物[63]與2，4-二鹵代嘧啶(II；例如，V1＝V2＝Cl，Y＝N)或吡啶(II；例如，V1＝I，V2＝Cl/Br，或F，Y＝CR8)[64]的鈀-催化的交叉偶聯(lián)得到4-雜芳基化的2-鹵代嘧啶IV，其用苯胺V氨基化。或者，在其中Y為N的情形下，酰基雜環(huán)化合物VI，其能從雜環(huán)前體化合物例如通過Friedel-Crafts酰基化制備得到，進(jìn)一步用例如R4COCl?；?，從而提供二酮VII。這些化合物然后烯胺化得到VIII[65]，然后與芳基胍IX[66]縮合。
因此，本發(fā)明另一方面涉及一種制備如上定義的式Ib的化合物的方法，所述的方法包括下述步驟
(i)將式III的雜芳基硼酸與式II的2，4-二鹵代嘧啶或吡啶反應(yīng)以形成式IV的化合物；(ii)將所述的式IV化合物與式V的苯胺反應(yīng)以形成式Ib的化合物。
本發(fā)明另外一方面涉及一種制備如上定義的式Ib的化合物的方法，所述的方法包括下述步驟 (i)將式VI的?；s環(huán)化合物與R4COCl反應(yīng)以形成式VII的二酮；(ii)將所述的式VII的二酮轉(zhuǎn)化成式VIII的化合物；(iii)將所述的式VIII的化合物與式IX的芳基胍反應(yīng)以形成所述的式Ib化合物。
本發(fā)明進(jìn)一步通過下述非限制性實施例進(jìn)行說明。
實施例一般條件
HPLC保留時間(tR)用Vydac 218TP54柱(C18反相固定相；4.5×250mm柱)測量，以1mL/分鐘的流速用標(biāo)示的乙腈的水溶液(包含0.1％CF3COOH)進(jìn)行線性梯度洗脫，然后等梯度洗脫(isocratic elution)。使用UV監(jiān)測器(254nm)。除非另有說明，所有的純化工作，利用硅膠60A(粒徑35-70微米)進(jìn)行。1H-NMR譜利用500MHz儀器進(jìn)行?；瘜W(xué)位移用TMS作為標(biāo)準(zhǔn)以ppm給出并且耦合常數(shù)(J)以Hz表示。質(zhì)譜以陽離子或陰離子電噴霧(ESI)或延遲萃取基質(zhì)輔助激光解吸離子飛行時間(DE MALDI-TOF)條件進(jìn)行記錄。
選擇的本發(fā)明化合物的結(jié)構(gòu)顯示在表1中。-吡啶-3-基-胺(1)。
將3-二甲基氨基-1-(2，4-二甲基噻唑-5-基)-丙烯酮(0.30g，1.56mmol)、N-吡啶-3-基-胍二鹽酸鹽(0.39g，1.87mmol)以及K2CO3(0.54g，3.93mmol)在2-甲氧基乙醇(9mL)中的混合物加熱回流18小時。將混合物蒸發(fā)至干并將殘留物經(jīng)純化SiO2凝膠層析。從EtOAc重結(jié)晶后得到淺褐色固體的標(biāo)題化合物(0.11g，24％)m.p.159-162℃。
1H-NMR(DMSO-d6)δ2.63(s，3H，CH3)，2.65(s，3H，CH3)，7.14(d，1H，J＝5.4Hz，嘧啶-H)，7.32(dd，1H，J＝8.1，4.4Hz，吡啶-H)，8.16-8.19(m，2H，吡啶-H)，8.55(d，1H，J＝5.4Hz，嘧啶-H)，8.92(d，1H，J＝2.4Hz，吡啶-H)，9.86(bs，1H，NH)。
MS(DE MALDI-TOF)m/z 283.17[M]，C14H13N5S理論值283.35.
3-[4-(2，4-二甲基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基氨基]-1-甲基-吡啶鎓(2)。
將化合物1(0.035g，0.12mmol)在無水Me2CO(6mL)中的溶液用碘甲烷(12μL，0.19mmol)處理。加熱回流18小時后，將反應(yīng)混合物冷卻到室溫并傾析出上清液。將剩余的淺褐色固體用Et2O洗滌并真空干燥得到標(biāo)題化合物(17mg，33％)m.p.297-300℃。
1H-NMR(DMSO-d6)δ2.66(s，3H，CH3)，2.67(s，3H，CH3)，4.38(s，3H，N-CH3)，7.35(d，1H，J＝5.1Hz，嘧啶-H)，8.04(t，1H，J＝5.5Hz，吡啶-H)，8.57-8.59(m，2H，吡啶-H)，8.68(d，1H，J＝5.4Hz，嘧啶-H)，9.44(s，1H，吡啶-H)，10.75(s，1H，NH)。
MS(DE MALDI-TOF)m/z 299.97[M+H]，C15H16N5S理論值298.39。
5-[2-(6-氯-吡啶-3-基氨基)-嘧啶-4-基]-3，4-二甲基-3H-噻唑-2-酮(4)。
將5-(3-二甲基氨基-丙烯酰基)-3，4-二甲基-3H-噻唑-2-酮(120mg，5.0mmol)和N-(6-氯-吡啶-3-基)-胍硝酸鹽(170mg，7.0mmol)，通過6-氯-吡啶-3-基胺與氨腈的水溶液在HNO3存在下制備得到，在MeCN(5mL)中用NaOH(0.60g，15mmol)處理。在微波反應(yīng)器(Smith Creator，Personal Chemistry Ltd.)中在160℃加熱20分鐘后，蒸發(fā)溶劑并將殘留物經(jīng)SiO2凝膠層析純化(EtOAc/PE，1∶1)。從MeOH中重結(jié)晶后得到為灰色固體的標(biāo)題化合物(97mg，58％)。分析型RP-HPLCtR＝17.8分鐘(0-60％MeCN，純度＞95％)。
1H-NMR(DMSO-d6)δ2.61(s，3H，CH3)，3.33(s，3H，CH3)，7.09(d，1H，J＝5.5Hz，嘧啶-H)，7.51(d，1H，J＝8.5Hz，吡啶-H)，8.27(m，1H，吡啶-H)，8.53(d，1H，J＝5.5Hz，嘧啶-H)，8.81(1H，d，J＝2.75Hz，吡啶-H)。
MS(ESI+)m/z 334.04[M+H]+，C14H12N5OSCl理論值333.80.
下述化合物按照類似的方式進(jìn)行制備(6-氯-吡啶-3-基)-[4-(2，4-二甲基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基]-胺(3)。
黃色固體(29％)。
分析型RP-HPLCtR＝20.3分鐘(0-60％MeCN，純度＞95％)。
1H-NMR(CD3OD)δ2.68(s，3H，CH3)，2.69(s，3H，CH3)，7.14(d，1H，J＝5.0Hz，嘧啶-H)，7.38(d，1H，J＝9.0Hz，p吡啶-H)，8.24(m，1H，吡啶-H)，8.49(d，1H，J＝5.0Hz，嘧啶-H)，8.78(1H，d，J＝2.5Hz，吡啶-H)。-(6-甲氧基-吡啶-3-基)-胺(5)。
黃色固體。
分析型RP-HPLCtR＝8.6分鐘(10-70％MeCN，純度＞95％)。
1H-NMR(DMSO-d6)δ2.41(s，3H，CH3)，3.80(s，3H，OCH3)，6.75(d，1H，J＝8.5Hz，吡啶-H)，6.85(d，1H，J＝5.5Hz，嘧啶-H)，7.49(s，2H，NH2)，7.97(m，1H，吡啶-H)，8.28(d，1H，J＝5.5Hz，嘧啶-H)，8.54(sbr，1H，吡啶-H)，9.32(sbr，1H，NH)。
MS(ESI+)m/z 315.14[M+H]+，C14H14N6OS理論值314.37.-(6-甲氧基-吡啶-3-基)-胺(6)。
淺黃色固體。
分析型RP-HPLCtR＝12.1分鐘(10-70％MeCN，純度＞95％)。
1H-NMR(DMSO-d6)δ2.49(s，3H，CH3)，2.63(s，3H，CH3)，3.81(s，3H，OCH3)，6.79(d，1H，J＝8.0Hz，吡啶-H)，7.05(d，1H，J＝5.0Hz，嘧啶-H)，7.99(m，1H，吡啶-H)，8.48(m，2H，嘧啶-H和吡啶-H)，9.56(sbr，1H，NH)。
MS(ESI+)m/z 314.01[M+H]+，C15H15N5OS理論值313.38.-(6-氯-吡啶-3-基)-胺(7)。
褐色固體。
分析型RP-HPLCtR＝10.6分鐘(10-70％MeCN，純度＞95％)。
1H-NMR(DMSO-d6)δ2.42(s，3H，CH3)，6.95(d，1H，J＝5.0Hz，嘧啶-H)，7.40(d，1H，J＝9.0Hz，吡啶-H)，7.55(sbr，2H，NH2)，8.12(m，1H，吡啶-H)，8.36(d，1H，J＝5.5Hz，嘧啶-H)，8.88(m，1H，吡啶-H)，9.77(sbr，1H，NH)。
MS(ESI+)m/z 319.00[M+H]+，C13H11ClN6S理論值318.79.
(6-甲氧基-吡啶-3-基)-[4-(4-甲基-2-甲基氨基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基]-胺(8)。
褐色固體。
分析型RP-HPLCtR＝9.2分鐘(10-70％MeCN，純度＞95％)。
1H-NMR(DMSO-d6)δ2.44(s，3H，CH3)，3.23(s，3H，CH3)，3.80(s，3H，OCH3)，6.75(d，1H，J＝8.5Hz，吡啶-H)，6.86(d，1H，J＝4.5Hz，嘧啶-H)，7.98(m，1H，吡啶-H)，8.04(sbr，1H，NH)，8.28(d，1H，J＝5.5Hz，嘧啶-H)，8.50(m，1H，吡啶-H)，9.32(sbr，1H，NH)。
MS(ESI+)m/z 329.04[M+H]+，C15H16N6OS理論值328.39.
(6-氯-吡啶-3-基)-[4-(4-甲基-2-甲基氨基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基]-胺(9)。
褐色固體。
分析型RP-HPLCtR＝11.3分鐘(10-70％MeCN，純度＞95％)。
1H-NMR(DMSO-d6)δ2.43(s，3H，CH3)，3.25(s，3H，CH3)，6.97(d，1H，J＝5.5Hz，嘧啶-H)，7.40(d，1H，J＝9.0Hz，吡啶-H)，8.37(m，1H，吡啶-H)，8.37(m，1H，嘧啶-H)，8.84(m，1H，吡啶-H)，9.77(sbr，1H，NH)。
MS(ESI+)m/z 333.01[M+H]+，C14H13ClN6S理論值332.81.-(6-甲氧基-吡啶-3-基)-胺(10)。
褐色固體。
分析型RP-HPLCtR＝10.1分鐘(10-70％MeCN，純度＞95％)。
1H-NMR(DMSO-d6)δ2.46(s，3H，CH3)，3.08(s，3H，CH3)，3.80(s，1H，OCH3)，6.78(d，1H，J＝9.0Hz，吡啶-H)，6.88(d，1H，J＝5.0Hz，嘧啶-H)，8.04(d，1H，J＝9.0Hz，吡啶-H)，8.29(d，1H，J＝5.0Hz，嘧啶-H)，8.44(m，1H，吡啶-H)，9.33(sbr，1H，NH)。
MS(ESI+)m/z 343.14[M+H]+，C16H18N6OS理論值342.42.
3-乙基-5-[2-(6-甲氧基-吡啶-3-基氨基)-嘧啶-4-基]-4-甲基-3H-噻唑-2-酮(11)褐色固體(39％)。
分析型RP-HPLCtR＝15.6分鐘(0-60％MeCN，純度＞95％)。
1H-NMR(DMSO-d6)δ1.15(t，3H，J＝6.83Hz，CH3)，2.55(s，1H，CH3)，3.81(s，3H，OCH3)，3.26(m，2H，CH2)，6.79(d，1H，J＝9.3Hz，吡啶-H)，6.91(d，1H，J＝5.4Hz，嘧啶-H)，7.97(dd，1H，J＝9.28，2.93Hz，吡啶-H)，8.38(d，1H，J＝5.37Hz，嘧啶-H)，8.44(d，1H，J＝2.93，吡啶-H)，9.50(s，1H，NH)。
13C-NMR(DMSO-d6)δ14.5，14.7，37.3，53.7，109.0，110.3，128.4，131.82，132.4，137.8，138.4，152.7，159.5，160.3，164.7，170.1.
MS(ESI+)m/z 342.09[M+H]+，C16H17N5O2S理論值343.40.-(6-甲氧基-吡啶-3-基)-胺(12)黃色固體。
分析型RP-HPLCtR＝10.1分鐘(10-70％MeCN，純度100％)。
1H-NMR(DMSO-d6)δ1.16(m，3H，CH3)，2.48(s，1H，CH3)，3.26(m，2H，CH2)，3.80(s，3H，OCH3)，6.76(d，1H，J＝8.0Hz，吡啶基-H)，6.86(d，1H，J＝5.5Hz，嘧啶基-H)，7.98(m，1H，吡啶基-H)，8.09(t，1H，J＝5.5Hz，吡啶基-H)，8.28(d，1H，J＝5.5Hz，嘧啶基-H)，8.50(s，1H，NH)，9.32(s，1H，NH)。
MS(ESI+)m/z 343.25[M+H]+，C16H18N6OS理論值342.42.
{4-[2-(2-甲氧基-乙基氨基)-4-甲基-噻唑-5-基]-嘧啶-2-基}-(6-甲氧基-吡啶-3-基)-胺(13)黃色固體。
分析型RP-HPLCtR＝18.1分鐘(10-70％MeCN，純度＞95％)。
1H-NMR(DMSO-d6)δ2.43(s，3H，CH3)，3.23(t，2H，J＝7.2Hz，CH2)，3.41(t，2H，J＝7.2Hz，CH2)，3.46(s，3H，OCH3)，3.80(s，3H，OCH3)，6.75(d，1H，J＝8.8Hz，吡啶基-H)，6.87(d，1H，J＝5.4Hz，嘧啶基-H)，7.99(dd，1H，J＝2.9，8.8Hz，吡啶基-H)，8.18(s，1H，NH)，8.29(d，1H，J＝5.4Hz，嘧啶基-H)，8.51(d，1H，J＝2.9Hz，吡啶基-H)，9.33(s，1H，NH)。
MS(ESI+)m/z 373.75[M+H]+，C17H20N6O2S理論值372.45.-(6-吡咯烷-1-基-吡啶-3-基)-胺(14)黃色固體。
分析型RP-HPLCtR＝16.5分鐘(0-60％MeCN，純度100％)。
1H-NMR(CDCl3)δ2.01(m，4H，CH2)，2.66(s，3H，CH3)，2.71(s，3H，CH3)，3.47(m，3H，CH3)，6.40(d，1H，J＝9.0Hz，吡啶基-H)，6.84(d，1H，J＝5.5Hz，嘧啶基-H)，7.78(d，1H，J＝9.0Hz，吡啶基-H)，8.24(d，1H，J＝3.0，吡啶基-H)，8.34(d，1H，J＝5.0Hz，嘧啶基-H)。
MS(ESI+)m/z 353.32[M+H]+，C18H20N6S理論值352.46.-[6-(4-甲基-哌嗪-1-基)-吡啶-3-基]-胺(15)黃色固體。
分析型RP-HPLCtR＝7.1分鐘(10-70％MeCN，純度100％)。
1H-NMR(DMSO-d6)δ2.21(s，3H，CH3)，2.40(m，4H，CH2)，2.45(s，3H，CH3)，2.84(sbr，3H，CH3)，3.36(m，4H，CH2)，6.79(d，1H，J＝8.5Hz，吡啶基-H)，6.82(d，1H，J＝5.5Hz，嘧啶基-H)，7.86(dd，1H，J＝2.0，8.5Hz，吡啶基-H)，8.02(m，1H，NH)，8.26(d，1H，J＝5.0Hz，嘧啶基-H)，8.45(d，1H，J＝2.5Hz，吡啶基-H)，9.16(s，1H，NH)。
MS(ESI+)m/z 397.36[M+H]+，C19H24N8S理論值396.51.
(6-甲氧基-吡啶-3-基)-[4-(4-甲基-2-嗎啉-4-基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基]-胺(16)黃色固體。
分析型RP-HPLCtR＝11.5分鐘(10-70％MeCN，純度＞95％)。
1H-NMR(DMSO-d6)δ2.48(s，3H，CH3)，3.46(t，4H，J＝5.0Hz，CH2)，3.71(t，4H，J＝5.0Hz，CH2)，3.81(s，3H，OCH3)，6.80(d，1H，J＝9.0Hz，吡啶基-H)，6.91(d，1H，J＝5.0Hz，嘧啶基-H)，8.04(dd，1H，J＝3.0，9.0Hz，吡啶基-H)，8.33(d，1H，J＝5.5Hz，嘧啶基-H)，8.43(d，1H，J＝2.5Hz，吡啶基-H)，9.39(s，1H，NH)。
MS(ESI+)m/z 385.48[M+H]+，C18H20N6O2S理論值384.46.
激酶分析考察上述實施例的化合物抑制多種蛋白激酶酶活性的能力。通過測量來自ATP的放射活性磷酸對適當(dāng)?shù)亩嚯牡孜锏膿饺攵鴮崿F(xiàn)。制備或通過商業(yè)途徑得到重組蛋白激酶和激酶復(fù)合物。分析利用96-孔板以及適當(dāng)?shù)姆治鼍彌_液(通常為25mM β-甘油磷酸，20mM MOPS，5mM EGTA，1mM DTT，1mM Na3VO3，pH 7.4)進(jìn)行，向其中加入2-4μg活性酶以及適當(dāng)?shù)牡孜?。通過加入Mg/ATP混合物(15mM MgCl2+100μM ATP以及30-50kBq/孔的[γ-32p]-ATP)啟動反應(yīng)并將混合物在30℃下按照需要孵育。將反應(yīng)在冰上終止，然后濾過p81濾板或GF/C濾板(Whatman Polyfiltronics，Kent，UK)。用75mM正磷酸水溶液洗滌3次后，將板干燥，加入閃爍體并在閃爍計數(shù)器(TopCount，Packard Instruments，Pangbourne，Berks，UK)上測量摻入的放射活性。用于激酶分析的化合物配制成10mM的DMSO儲存液并用分析緩沖液稀釋成10％DMSO的溶液。利用曲線擬合軟件(GraphPad Prism version 3.00for Windows，GraphPad Software，San Diego Califomia USA)分析數(shù)據(jù)以確定IC50值(50％抑制激酶活性的測試化合物的濃度)。選擇化合物的IC50值顯示在表1中。
MTT細(xì)胞毒性分析將實施例的化合物進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)的細(xì)胞增殖分析，利用從ATCC(AmericanType Culture Collection，10801 University Boulevard，Manessas，VA20110-2209，USA)得到的人腫瘤細(xì)胞系。進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)的72-小時MTT(噻唑藍(lán)；3-[4，5-二甲基噻唑-2-基]-2，5-二苯基四唑溴化物)分析[67，68]。簡言之將細(xì)胞根據(jù)倍增時間接種到96-孔板上并在37℃培養(yǎng)過夜。將測試化合物配制成DMSO溶液并以1/3連續(xù)稀釋配制成100μL細(xì)胞培養(yǎng)基溶液，加入至細(xì)胞(一式三份)中并在37℃培養(yǎng)72小時。將MTT制備成5mg/mL在細(xì)胞培養(yǎng)基中的儲存液并過濾滅菌。從細(xì)胞中移去培養(yǎng)基然后用200μL PBS洗滌。然后將MTT溶液以20μL/孔加入并在37℃避光培養(yǎng)4小時。移出MTT溶液并將細(xì)胞再次以200μL PBS洗滌。在振蕩下將MTT染料用200μL/孔的DMSO溶解。在540nm處讀取吸光度并利用曲線擬合軟件(GraphPad Prismversion 3.00 for Windows，GraphPad Software，San Diego California USA)進(jìn)行數(shù)據(jù)分析以測定IC50值(抑制50％細(xì)胞生長的測試化合物的濃度)。并且選擇化合物的IC50值顯示在表2中。
在不偏離本發(fā)明的范圍和精神情形下，描述的本發(fā)明方面的各種修飾以及變體對本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員而言是顯而易見的。盡管本發(fā)明結(jié)合具體的優(yōu)選的實施方案進(jìn)行了描述，應(yīng)該理解為要求保護(hù)的本發(fā)明不應(yīng)該過度地限制到所述的具體的實施方案。實際上，對化學(xué)領(lǐng)域或相關(guān)領(lǐng)域的普通技術(shù)人員而言明顯的實施本發(fā)明的多種修飾都包括在下述權(quán)利要求的范圍之內(nèi)。
表1.實施例化合物的結(jié)構(gòu)及其對多種蛋白激酶的抑制活性。


表2.實施例化合物體外對轉(zhuǎn)化的人細(xì)胞系的抗增殖活性
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權(quán)利要求
1.式I的化合物，或其藥用鹽， 其中(A)“a”為單鍵并且“b”為雙鍵；R1和R2各自獨立地如下定義；R10不存在；或者(B)“a”為雙鍵且“b”為單鍵；R1為氧；R2如下定義；并且R10為H或烷基；X為S、O、NH，或NR7；Y為N或CR8；Z1、Z2以及Z3之一為N或N+Ra并且其余的各自獨立地為CR7；R1、R2、R5和R6各自獨立地為R7；R3和R4各自獨立地為R8；各R7獨立地為H、鹵素、NRbRc、ORd或任選被一或多個R9基團(tuán)取代的烴基；各R8獨立地為H或(CH2)nR9，其中n為0或1；各R9獨立地選自H、鹵素、NO2、CN、Re、NHCORf、CF3、CORg、NRhRi、CONRjRk、SO2NR1Rm、SO2Rn、ORp、OCH2CH2ORq、嗎啉代、哌啶基和哌嗪基；并且Ra-q各自獨立地為H或烷基，其中所述的烷基任選被一或多個R9基團(tuán)取代；其中該化合物不是[4-(2，4-二甲基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基]-吡啶-2-基-胺以及4-[4-氟苯基)-1-(1-甲基-4-哌啶基)-1H-咪唑-5-基]-N-4-吡啶基-2-嘧啶胺。
2.式Ib的化合物，或其藥用鹽， 其中X為S、O、NH，或NR7；Y為N或CR8；Z1、Z2和Z3之一為N或N+Ra并且其余的各自獨立地為CR7；R1、R2、R5和R6各自獨立地為R7；R3和R4各自獨立地為R8；各R7獨立地為H、鹵素、NRbRc、ORd或任選被一或多個R9基團(tuán)取代的烴基；各R8獨立地為H或(CH2)nR9，其中n為0或1；各R9獨立地選自H、鹵素、NO2、CN、Re、NHCORf、CF3、CORg、NRhRi、CONRjRk、SO2NRlRm、SO2Rn、ORp、OCH2CH2ORq、嗎啉代、哌啶基和哌嗪基；并且Ra-q各自獨立地為H或烷基，其中所述的烷基任選被一或多個R9基團(tuán)取代；其中該化合物不是[4-(2，4-二甲基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基]-吡啶-2-基-胺和4-[4-氟苯基)-1-(1-甲基-4-哌啶基)-1H-咪唑-5-基]-N-4-吡啶基-2-嘧啶胺。
3.權(quán)利要求1或2的化合物，其中各R7獨立地為H、鹵素、NRbRc、ORd或包含1～20個C原子的飽和的或不飽和的基團(tuán)，所述的基團(tuán)任選包含一或多個選自N、S和O的雜原子，并任選被一或多個R9基團(tuán)取代。
4.根據(jù)前述權(quán)利要求中任一項的化合物，其中各R7獨立地為H、鹵素、NRbRc、ORd或為脂環(huán)族基、烷基、環(huán)烷基、芳基或芳烷基，各基團(tuán)任選包含1～6個選自N、S和O的雜原子，并且各個基團(tuán)任選被1～6個R9基團(tuán)取代。
5.根據(jù)前述權(quán)利要求中任一項的化合物，其中各R7獨立地選自H、ORd、NRbRc、鹵素和任選包含一或多個雜原子并任選任選被一或多個R9基團(tuán)取代的脂環(huán)族基。
6.根據(jù)前述權(quán)利要求中任一項的化合物，其中各R7獨立地選自H、ORd、NRbRc、鹵素以及選自吡咯烷基、哌啶基、嗎啉代和哌嗪基的脂環(huán)族基，各基團(tuán)任選被一或多個R9基團(tuán)取代。
7.根據(jù)前述權(quán)利要求中任一項的化合物，其中各R7獨立地選自Me、Cl、OMe、OEt、NH2、NHMe、NHEt、NMe2、N-吡咯烷基、N-哌啶基、N-嗎啉代和N-哌嗪基。
8.根據(jù)前述權(quán)利要求中任一項的化合物，其中Ra-q各自獨立地為H、Me或Et，所述的Me或Et基團(tuán)任選被一或多個R9基團(tuán)取代。
9.根據(jù)前述權(quán)利要求中任一項的化合物，其中R9選自H、鹵素、NO2、CN、OH、NH2、NHCOMe、CF3、COMe、Me、Et、1Pr、NHMe、NMe2、CONH2、CONHMe、CONMe2、SO2NH2、SO2NHMe、SO2NMe2、SO2Me、OMe、OEt、OCH2CH2OH、OCH2CH2OMe、嗎啉代、哌啶基和哌嗪基。
10.根據(jù)前述權(quán)利要求中任一項的化合物，其中R9選自O(shè)Me、鹵素、NH2、CN、NO2、CF3、OEt、NMe2、NHMe和OH。
11.根據(jù)前述權(quán)利要求中任一項的化合物，其中Z2為N或NRa+并且Z1和Z3各自獨立地為CR7。
12.根據(jù)前述權(quán)利要求中任一項的化合物，其中Z2為N或NRa+，Z1為C-H并且Z3為C-Cl或C-OMe。
13.根據(jù)前述權(quán)利要求中任一項的化合物，其中Y為N。
14.根據(jù)前述權(quán)利要求中任一項的化合物，其中X為S。
15.根據(jù)前述權(quán)利要求中任一項的化合物，其中R1選自Me、OMe、OEt、NH2、NHMe、NHEt和NMe2。
16.根據(jù)前述權(quán)利要求中任一項的化合物，其中R2為Me。
17.根據(jù)前述權(quán)利要求中任一項的化合物，其中R3、R4、R5和R6都為H。
18.權(quán)利要求1的式Id的化合物，或其藥用鹽， 其中R2-6、R10、X、Y、Z1、Z2和Z3如權(quán)利要求1，或3～17中任一項定義。
19.權(quán)利要求1的化合物，選自下述化合物[4-(2，4-二甲基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基]-吡啶-3-基-胺[1]；3-[4-(2，4-二甲基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基氨基]-1-甲基-吡啶鎓[2]；(6-氯-吡啶-3-基)-[4-(2，4-二甲基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基]-胺[3]；5-[2-(6-氯-吡啶-3-基氨基)-嘧啶-4-基]-3，4-二甲基-3H-噻唑-2-酮[4]；[4-(2-氨基-4-甲基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基]-(6-甲氧基-吡啶-3-基)-胺[5]；[4-(2，4-二甲基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基]-(6-甲氧基-吡啶-3-基)-胺[6]；[4-(2-氨基-4-甲基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基]-(6-氯-吡啶-3-基)-胺[7]；(6-甲氧基-吡啶-3-基)-[4-(4-甲基-2-甲基氨基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基]-胺[8]；(6-氯-吡啶-3-基)-[4-(4-甲基-2-甲基氨基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基]-胺[9]；[4-(2-二甲基氨基-4-甲基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基]-(6-甲氧基-吡啶-3-基)-胺[10]；3-乙基-5-[2-(6-甲氧基-吡啶-3-基氨基)-嘧啶-4-基]-4-甲基-3H-噻唑-2-酮[11]；[4-(2-乙基氨基-4-甲基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基]-(6-甲氧基-吡啶-3-基)-胺[12]；{4-[2-(2-甲氧基-乙基氨基)-4-甲基-噻唑-5-基]-嘧啶-2-基}-(6-甲氧基-吡啶-3-基)-胺[13]；[4-(2，4-二甲基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基]-(6-吡咯烷-1-基-吡啶-3-基)-胺[14]；[4-(4-甲基-2-甲基氨基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基]-[6-(4-甲基-哌嗪-1-基)-吡啶-3-基]-胺[15]；和(6-甲氧基-吡啶-3-基)-[4-(4-甲基-2-嗎啉-4-基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基]-胺[16]。
20.權(quán)利要求19的化合物，選自下述化合物[1]、[5]、[7]、[8]、[9]、[10]、[12]和[15]。
21.權(quán)利要求19的化合物，選自下述化合物[8]、[10]、[12]和[14]。
22.一種藥物組合物，包括根據(jù)前述權(quán)利要求中任一項的化合物以及可藥用稀釋劑、賦形劑或載體。
23.式Ia的化合物，或其藥用鹽在制備用于治療增生性疾病的藥物中的用途 其中(A)“a”為單鍵并且“b”為雙鍵；R1和R2各自獨立地如下定義；R10不存在；或者(B)“a”為雙鍵且“b”為單鍵；R1為氧；R2如下定義；并且R10為H或烷基；X為S、O、NH，或NR7；Y為N或CR8；Z1、Z2和Z3之一為N或N+Ra并且其余的各自獨立地為CR7；R1、R2、R5和R6各自獨立地為R7；R3和R4各自獨立地為R8；各R7獨立地為H、鹵素、NRbRc、ORd或任選被一或多個R9基團(tuán)取代的烴基；各R8獨立地為H或(CH2)nR9，其中n為0或1；各R9獨立地選自H、鹵素、NO2、CN、Re、NHCORf、CF3、CORg、NRhRi、CONRjRk、SO2NRlRm、SO2Rn、ORp、OCH2CH2ORq、嗎啉代、哌啶基和哌嗪基；并且Ra-q各自獨立地為H或烷基，其中所述的烷基任選被一或多個R9基團(tuán)取代。
24.根據(jù)權(quán)利要求23的用途，其中增生性疾病為癌癥或白血病。
25.根據(jù)權(quán)利要求23的用途，其中增生性疾病為腎小球腎炎、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、牛皮癬或慢性阻塞性肺病。
26.式Ia的化合物，或其藥用鹽在制備用于治療病毒性疾病的藥物中的用途 其中(A)“a”為單鍵并且“b”為雙鍵；R1和R2各自獨立地如下定義；R10不存在；或者(B)“a”為雙鍵且“b”為單鍵；R1為氧；R2如下定義；并且R10為H或烷基；X為S、O、NH，或NR7；Z1、Z2和Z3之一為N或N+Ra并且其余的各自獨立地為CR7；R1、R2、R5和R6各自獨立地為R7；R3和R4各自獨立地為R8；各R7獨立地為H、鹵素、NRbRc、ORd或任選被一或多個R9基團(tuán)取代的烴基；各R8獨立地為H或(CH2)nR9，其中n為0或1；各R9獨立地選自H、鹵素、NO2、CN、Re、NHCORf、CF3、CORg、NRhRi、CONRjRk、SO2NRlRm、SO2Rn、ORp、OCH2CH2ORq、嗎啉代、哌啶基和哌嗪基；并且Ra-q各自獨立地為H或烷基，其中所述的烷基任選被一或多個R9基團(tuán)取代。
27.權(quán)利要求26的用途，其中病毒性疾病選自人巨細(xì)胞病毒(HCMV)、1型單純皰疹病毒(HSV-1)、1型人免疫缺陷病毒(HIV-1)以及水痘-帶狀皰疹病毒(VZV)。
28.式Ia的化合物，或其藥用鹽在制備用于治療CNS疾病的藥物中的用途 其中(A)“a”為單鍵并且“b”為雙鍵；R1和R2各自獨立地如下定義；R10不存在；或者(B)“a”為雙鍵且“b”為單鍵；R1為氧；R2如下定義；并且R10為H或烷基；X為S、O、NH，或NR7；Y為N或CR8；Z1、Z2和Z3之一為N或N+Ra并且其余的各自獨立地為CR7；R1、R2、R5和R6各自獨立地為R7；R3和R4各自獨立地為R8；各R7獨立地為H、鹵素、NRbRc、ORd或任選被一或多個R9基團(tuán)取代的烴基；各R8獨立地為H或(CH2)nR9，其中n為0或1；各R9獨立地選自H、鹵素、NO2、CN、Re、NHCORf、CF3、CORg、NRhRi、CONRjRk、SO2NRlRm、SO2Rn、ORp、OCH2CH2ORq、嗎啉代、哌啶基和哌嗪基；并且Ra-q各自獨立地為H或烷基，其中所述的烷基任選被一或多個R9基團(tuán)取代。
29.根據(jù)權(quán)利要求28的用途，其中CNS疾病為阿耳茨海默氏病或雙相性精神障礙。
30.式Ia的化合物，或其藥用鹽在制備用于治療脫發(fā)的藥物中的用途 其中(A)“a”為單鍵并且“b”為雙鍵；R1和R2各自獨立地如下定義；R10不存在；或者(B)“a”為雙鍵且“b”為單鍵；R1為氧；R2如下定義；并且R10為H或烷基；X為S、O、NH，或NR7；Y為N或CR8；Z1、Z2和Z3之一為N或N+Ra并且其余的各自獨立地為CR7；R1、R2、R5和R6各自獨立地為R7；R3和R4各自獨立地為R8；各R7獨立地為H、鹵素、NRbRc、ORd或任選被一或多個R9基團(tuán)取代的烴基；各R8獨立地為H或(CH2)nR9，其中n為0或1；各R9獨立地選自H、鹵素、NO2、CN、Re、NHCORf、CF3、CORg、NRhRi、CONRjRk、SO2NRlRm、SO2Rn、ORp、OCH2CH2ORq、嗎啉代、哌啶基和哌嗪基；并且Ra-q各自獨立地為H或烷基，其中所述的烷基任選被一或多個R9基團(tuán)取代。
31.式Ia的化合物，或其藥用鹽在制備用于治療中風(fēng)的藥物中的用途 其中(A)“a”為單鍵并且“b”為雙鍵；R1和R2各自獨立地如下定義；R10不存在；或者(B)“a”為雙鍵且“b”為單鍵；R1為氧；R2如下定義；并且R10為H或烷基；X為S、O、NH，或NR7；Y為N或CR8；Z1、Z2和Z3之一為N或N+Ra并且其余的各自獨立地為CR7；R1、R2、R5和R6各自獨立地為R7；R3和R4各自獨立地為R8；各R7獨立地為H、鹵素、NRbRc、ORd或任選被一或多個R9基團(tuán)取代的烴基；各R8獨立地為H或(CH2)nR9，其中n為0或1；各R9獨立地選自H、鹵素、NO2、CN、Re、NHCORf、CF3、CORg、NRhRi、CONRjRk、SO2NRlRm、SO2Rn、ORp、OCH2CH2ORq、嗎啉代、哌啶基和哌嗪基；并且Ra-q各自獨立地為H或烷基，其中所述的烷基任選被一或多個R9基團(tuán)取代。
32.權(quán)利要求23～31中任一項的用途，其中式I化合物以足以抑制至少一種PLK酶的量給藥。
33.權(quán)利要求32的用途，其中PLK酶為PLK1。
34.權(quán)利要求23～31中任一項的用途，其中式I化合物以足以抑制至少一種CDK酶的量給藥。
35.權(quán)利要求34的用途，其中CDK酶為CDK1、CDK2、CDK3、CDK4、CDK6、CDK7、CDK8和/或CDK9。
36.權(quán)利要求23～31中任一項的用途，其中式I化合物以足以抑制aurora激酶的量給藥。
37.式Ia的化合物，或其藥用鹽在制備用于治療糖尿病的藥物中的用途 其中(A)“a”為單鍵并且“b”為雙鍵；R1和R2各自獨立地如下定義；R10不存在；或者(B)“a”為雙鍵且“b”為單鍵；R1為氧；R2如下定義；并且R10為H或烷基；X為S、O、NH，或NR7；Y為N或CR8；Z1、Z2和Z3之一為N或N+Ra并且其余的各自獨立地為CR7；R1、R2、R5和R6各自獨立地為R7；R3和R4各自獨立地為R8；各R7獨立地為H、鹵素、NRbRc、ORd或任選被一或多個R9基團(tuán)取代的烴基；各R8獨立地為H或(CH2)nR9，其中n為0或1；各R9獨立地選自H、鹵素、NO2、CN、Re、NHCORf、CF3、CORg、NRhRi、CONRjRk、SO2NRlRm、SO2Rn、ORp、OCH2CH2ORq、嗎啉代、哌啶基和哌嗪基；并且Ra-q各自獨立地為H或烷基，其中所述的烷基任選被一或多個R9基團(tuán)取代。
38.根據(jù)權(quán)利要求37的用途，其中糖尿病為II型糖尿病。
39.根據(jù)權(quán)利要求37或38任一項的用途，其中式I化合物以足以抑制GSK的量給藥。
40.根據(jù)權(quán)利要求39的用途，其中式I化合物以足以抑制GSK3β的量給藥。
41.如權(quán)利要求23、26、28、30、31或37中任一項定義的式Ia的化合物在鑒定能抑制周期蛋白依賴性激酶、aurora激酶、GSK和PLK酶中的一或多種的其他候選化合物的測試中的用途。
42.權(quán)利要求41的用途，其中所述的測試為競爭性結(jié)合測試。
43.一種制備如權(quán)利要求23、26、28、30、31或37中任一項定義的式Ib的化合物的方法，所述的方法包括下述步驟 (i)將式III的雜芳基硼酸與式II的2，4-二鹵代嘧啶或吡啶反應(yīng)以形成式IV的化合物；(ii)將所述的式IV化合物與式V的苯胺反應(yīng)以形成式Ib的化合物。
44.一種制備如權(quán)利要求23、26、28、30、31或37中任一項定義的式Ib的化合物的方法，所述的方法包括下述步驟 (i)將式VI的酰基雜環(huán)化合物與R4COCl反應(yīng)以形成式VII的二酮；(ii)將所述的式VII的二酮轉(zhuǎn)化成式VIII的化合物；(iii)將所述的式VIII化合物與式IX的芳基胍反應(yīng)以形成所述的式Ib化合物。
45.一種治療GSK3-依賴性疾病的方法，所述的方法包括對需要該治療的患者給藥足以抑制GSK3量的如權(quán)利要求23、26、28、30、31或37中任一項定義的式Ia的化合物，或其藥用鹽。
46.一種治療PLK-依賴性疾病的方法，所述的方法包括對需要該治療的患者給藥足以抑制PLK量的如權(quán)利要求23、26、28、30、31或37中任一項定義的式Ia的化合物，或其藥用鹽。
47.一種治療aurora激酶-依賴性疾病的方法，所述的方法包括對需要該治療的患者給藥足以抑制aurora激酶量的如權(quán)利要求23、26、28、30、31或37中任一項定義的式Ia的化合物，或其藥用鹽。
48.一種治療CDK-依賴性疾病的方法，所述的方法包括對需要該治療的對象給藥足以抑制周期蛋白依賴性激酶量的如權(quán)利要求23、26、28、30、31或37中任一項定義的式Ia的化合物，或其藥用鹽。
全文摘要
本發(fā)明涉及式I化合物，或其藥用鹽，其中(A)“a”為單鍵并且“b”為雙鍵；R
文檔編號A61K31/506GK1835949SQ200480022906
公開日2006年9月20日 申請日期2004年7月30日 優(yōu)先權(quán)日2003年7月30日
發(fā)明者王淑東, 克里斯托弗·米德斯, 達(dá)倫·吉布森, 彼得·費希爾 申請人:西克拉塞爾有限公司