專利名稱：用于治療和預(yù)防急性冠狀動脈綜合征的藥物制劑、方法和給藥方案的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明提供了用于治療或預(yù)防急性冠狀動脈綜合征的新制劑和方法。在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，該制劑是具有所指定pH、重量摩爾滲透壓濃度和純度的單一單位劑量。在一種優(yōu)選的方法中，該制劑以每次給藥約1mg/kg至約100mg/kg的劑量范圍被每周、每月或每年給藥一次。此外，還公開了一些劑量和給藥方案以及可以使用所說劑量或給藥方案的特定疾病。所說的制劑和方法使用一種載脂蛋白A-IMilano磷脂復(fù)合體。
2.背景技術(shù)自從20世紀(jì)的前50年以來，心肌梗死的控制和治療已經(jīng)發(fā)生了很大的改變，從臥床休息和觀察發(fā)展到強(qiáng)調(diào)技術(shù)(包括血液動力學(xué)監(jiān)測和氣囊式導(dǎo)管)，到越來越著重于血栓溶解療法。(Antman和Braunwald，心臟疾病中的“急性心肌梗死”(“Acute Myocardial Infarction”in Heart Disease)，一本心血管醫(yī)學(xué)中的教科書，第6版，第2卷，Braunwald等人主編，2001，W.B.Saunders Company，費(fèi)城)。在最近100年中，治療心血管疾病的療法取得了長足進(jìn)展，同時(shí)對其病理學(xué)基礎(chǔ)也也有了更透徹的了解。
幾乎全部心肌梗死都是由通常伴有并發(fā)的冠狀動脈血栓形成的冠狀動脈粥樣硬化產(chǎn)生的。由于形成了一些側(cè)副管，所以緩慢積聚的一些斑塊是無癥狀的。但是，動脈粥樣硬化斑塊，尤其是這些富含脂質(zhì)的斑塊易于突然發(fā)生斑塊破裂。斑塊破裂和相關(guān)的內(nèi)皮損傷造成了諸如血栓烷A2、血清素、二磷酸腺苷、凝血酶、血小板活化因子、組織因子和得自氧的自由基之類介質(zhì)的釋放。這些介質(zhì)促進(jìn)了血小板聚集和機(jī)械梗阻，其常常導(dǎo)致了干擾血流和供氧的血栓形成。持續(xù)和嚴(yán)重的干擾心肌供氧可導(dǎo)致急性心肌梗死。(見，Rioufol等人，2002，Circulation 106804，Timmis，2003，Heart 891268-72)。
動脈粥樣硬化藥物療法的主流一直是用于預(yù)防或減緩粥樣硬化斑塊形成的長期療法，其主要著眼于將降低LDL或“不良的膽固醇”作為治療終點(diǎn)。例如它汀(Statin)療法可以大大改善心血管健康；但是，不利作用如橫紋肌溶解仍然是一種障礙。此外，它汀類物質(zhì)在急性情況中幾乎沒有作用，例如幾乎不能降低局部缺血發(fā)作期間易受影響的不穩(wěn)定的動脈粥樣硬化斑塊。急性治療多依賴于血栓溶解劑(如tPA)和手術(shù)干預(yù)如經(jīng)皮經(jīng)腔冠狀血管成型術(shù)(PTCA)和冠狀動脈旁路搭橋術(shù)(CABG)。雖然血栓溶解劑通過降低或消除阻礙血流的血栓而提供了緩解作用，但是其并不能改變疾病的病理學(xué)基礎(chǔ)。一些干預(yù)手段如PTCA本身具有一些風(fēng)險(xiǎn)并常常不適用于患有急性情況的患者。因此，一旦不穩(wěn)定的斑塊成為危險(xiǎn)時(shí)，目前的藥理學(xué)療法對患者幾乎沒有幫助。(見，Newton and Krause 2002，Atherosclerosis S331-38)。
HDL療法是正在形成的一種治療血脂障礙和動脈粥樣硬化的新范例。同上。由于出乎意料地發(fā)現(xiàn)載脂蛋白A-I Milano(Apo A-I Milano)變型的載體具有低HDL(“良好的膽固醇”)水平和降低了心血管疾病的風(fēng)險(xiǎn)，所以一直對這種載脂蛋白感興趣。(見，F(xiàn)ranceschini等人，1980，J.Clin.Invest.66892-900，Weisgraber等人，1983，J.Biol.Chem.2582508-2513，F(xiàn)ranceschini等人，1985，Atherosclerosis58159-174，F(xiàn)ranceschini等人，1987，Arteriosclerosis 7426-435)。發(fā)現(xiàn)Apo A-I Milano同型二聚體降低了喂食膽固醇的兔子體內(nèi)的內(nèi)膜增厚(Ameli等人，1994，Circulation，901935-41和Soma等人，1995，Cir.Res.76405-11)。在ApoE不足的小鼠中，通過多次給予低劑量和單次給予高劑量Apo A-I Milano脂質(zhì)復(fù)合體降低了動脈粥樣硬化損害(Shah等人，1998，Circulation 97780-85和Shah等人，2001，Circulation 1033047-50)。還證明以每只兔子500mg和1000mg蛋白的劑量單次局部輸入Apo A-I Milano磷脂復(fù)合體可使得兔子的斑塊消退。(Chiesa等人，2002，Cir.Res.90974-80)。在兔子模型中誘導(dǎo)的損害大部分都包括巨噬細(xì)胞并且不能代表人的更復(fù)雜的損害。因此，不能確定類似的治療是否對人動脈粥樣硬化中所發(fā)現(xiàn)的復(fù)雜斑塊有效(Li等人，1999，Arterioscler ThrombVasc Biol19378-383和Shah等人，2001，Circulation 1033047-50)。
盡管對心肌梗死病理生理學(xué)的了解日益深入并且HDL療法取得了一些進(jìn)展，但是對于Apo A-I Milano或Apo A-I Milano脂質(zhì)復(fù)合體用于人的治療和預(yù)防應(yīng)用而言仍然希望有一些安全、有效的劑量、給藥方案和藥物制劑。
3.本發(fā)明的概述本發(fā)明提供了一些用于治療和預(yù)防心血管疾病或相關(guān)病癥(包括動脈粥樣硬化、急性冠狀動脈綜合征、局部缺血、局部缺血性再灌注損傷、心絞痛和心肌梗死)和減少或穩(wěn)定動脈粥樣硬化斑塊、減少閉合血管中的斑塊以及促進(jìn)膽固醇流出(cholesterol efflux)的方法。因此，本發(fā)明包括用于治療或預(yù)防心血管疾病或相關(guān)病癥(包括動脈粥樣硬化、急性冠狀動脈綜合征、局部缺血性再灌注損傷、心絞痛和心肌梗死)和減少或穩(wěn)定動脈粥樣硬化斑塊、降低閉合血管中的斑塊以及促進(jìn)膽固醇流出的用于Apo A-I Milano磷脂復(fù)合體的應(yīng)用的劑量和給藥方案以及Apo A-I Milano磷脂復(fù)合體的藥物制劑。這里所述的方法和制劑使得不穩(wěn)定的動脈粥樣硬化斑塊迅速減少或穩(wěn)定，而如果不用或者用常規(guī)方法對所說的斑塊進(jìn)行治療時(shí)，其可能會破裂并導(dǎo)致包括急性冠狀動脈綜合征在內(nèi)的局部缺血性事件。
申請人已經(jīng)確定了外源性產(chǎn)生的HDL類似物如Apo A-I Milano(優(yōu)選地為Apo A-I Milano磷脂復(fù)合體形式)，提供了一種治療和預(yù)防心血管疾病或相關(guān)病癥的獨(dú)特方法；該類病癥非限制性地包括動脈粥樣硬化、急性冠狀動脈綜合征、局部缺血、局部缺血性再灌注損傷、心絞痛和心肌梗死、或減少或穩(wěn)定狹窄或閉合血管中的動脈粥樣硬化斑塊。本發(fā)明的包括劑量和給藥方案的方法以及藥物制劑提供了一種安全有效的非手術(shù)治療，其迅速促進(jìn)了從動脈粥樣硬化斑塊的膽固醇流出和活動。迅速促進(jìn)膽固醇流出降低了一根或多根受影響血管中的粥樣斑體積。降低粥樣斑(動脈粥樣硬化血管中變質(zhì)的增厚了的動脈內(nèi)膜斑的質(zhì)量)使得血液可以更塊地流動并降低了局部缺血的風(fēng)險(xiǎn)，包括降低了不穩(wěn)定心絞痛、心肌梗死和急性冠狀動脈綜合征的風(fēng)險(xiǎn)。
在本發(fā)明提供用于治療和預(yù)防心血管疾病(包括急性冠狀動脈綜合征、動脈粥樣硬化、心絞痛、心肌梗死、和局部缺血性再灌注損傷)的ApoA-I M藥物制劑和特定的劑量之前，常規(guī)的動脈粥樣硬化療法著重于將降低LDL或“不良的膽固醇”作為治療終點(diǎn)。這些常規(guī)的LDL療法例如用它汀類物質(zhì)進(jìn)行的治療可能需要數(shù)月治療才能降低患者的LDL血清水平。在急性或突然發(fā)作的心血管病癥中，常規(guī)療法大多依賴于手術(shù)干預(yù)如經(jīng)皮冠狀動脈腔內(nèi)血管成型術(shù)(PTCA)和冠狀動脈旁路搭橋術(shù)(CABG)。但是，在突發(fā)情況中的一些患者，特別是總體健康情況較差的患者常常不能實(shí)施手術(shù)干預(yù)。此外，這些常規(guī)方法在急性情況中不能提供有效非手術(shù)性藥物學(xué)治療。此外，常規(guī)療法著重于治療心血管疾病和急性冠狀動脈綜合征的癥狀，尤其是循環(huán)系統(tǒng)中的癥狀。上述和在下面進(jìn)行了更詳細(xì)描述的常規(guī)療法著重于降低LDL膽固醇、降低血塊形成和降低血壓，其不能治療或預(yù)防心血管疾病和急性冠狀動脈綜合征的基本原因、穩(wěn)定、降低和改變血管內(nèi)的斑塊。
本文所提供的藥物制劑和包括劑量和給藥時(shí)間表在內(nèi)的方法安全有效并且可迅速起效來降低或穩(wěn)定動脈粥樣硬化斑塊。這里所述的劑量可迅速起效，從而用很少幾周的時(shí)間就通過促進(jìn)膽固醇活動而降低了動脈粥樣硬化斑塊。在某些實(shí)施方案中，可以用這里所述的劑量來治療患有急性冠狀動脈綜合征或與局部缺血或血管閉合有關(guān)的病癥的患者。在某些實(shí)施方案中，對患者來說一旦動脈粥樣硬化斑塊存在風(fēng)險(xiǎn)，可以用這里所述的劑量來預(yù)防疾病進(jìn)程。所防止的疾病進(jìn)程還可是血管閉合，或者可以預(yù)防可導(dǎo)致局部缺血性情況(包括急性冠狀動脈綜合征和局部缺血性再灌注損傷)的不穩(wěn)定的動脈粥樣硬化斑塊破裂。
這里所提供的方法和藥物制劑的有效性使得45mg/kg的單劑量可刺激膽固醇從動脈粥樣硬化斑塊上松動下來。在某些實(shí)施方案中，可以將高單劑量例如約45mg/kg的Apo A-I Milano磷脂復(fù)合體或其藥物制劑給藥于個(gè)體。在某些實(shí)施方案中，可以將Apo A-I Milano磷脂復(fù)合體或其藥物制劑的一個(gè)或多個(gè)高劑量給藥于個(gè)體，然后給予患者一個(gè)或多個(gè)相同劑量(45mg/kg)或更低劑量，例如約1mg/kg、約3mg/kg、約5mg/kg、約10mg/kg或約15mg/kg。例如，可以給個(gè)體使用兩個(gè)45mg/kg的劑量，然后再給予其10mg/kg的劑量。還可以使用相反的方案——先給予低劑量，然后給予高劑量。當(dāng)然，對于急性疾病情況而言，優(yōu)選地首先使用較高的劑量。在某些實(shí)施方案中，可以用Apo A-I Milano磷脂復(fù)合體或其藥物制劑每周一次地對個(gè)體治療幾周，然后根據(jù)需要對患者間歇治療以維持開放的不閉合血管和降低斑塊破裂的風(fēng)險(xiǎn)以及不利的血管事件，例如然后可以每年給藥兩次、每年給藥一次或每兩年給藥一次。
在某些實(shí)施方案中，治療或預(yù)防急性冠狀動脈綜合征的方法包括約每天、約每隔一天、約每3天、約每4天、約每5天、約每6天、約每7天、約每8至10天或約每11至14天地給需要其的個(gè)體使用ApoA-1 Milano磷脂復(fù)合體或其藥物制劑。在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，ApoA-I Milano磷脂復(fù)合體或其藥物制劑被約每7天給藥一次。在某些實(shí)施方案中，Apo A-I Milano磷脂復(fù)合體或其藥物制劑的給藥可以是一次性給藥。在某些實(shí)施方案中，可以連續(xù)給藥約1周、約2周、約3周、約4周、約5周、約6周、約7-12周、約13-24周或約25-52周。在某些優(yōu)選的實(shí)施方案中，Apo A-I Milano磷脂復(fù)合體或其藥物制劑的給藥為約每7天給藥一次給藥約5周。在某些實(shí)施方案中，在例如約5周后可以間歇給藥。例如，可以每周一次地對個(gè)體治療約5周，然后在次年治療約3至約4次。在某些實(shí)施方案中，這里所述的藥物制劑可以被間歇給藥于個(gè)體以維持血管的開放。例如，可以將約15mg/kg的劑量給藥于約每10天給藥一次的藥物制劑中給藥約7周，然后例如約26周后或約52周后再進(jìn)行治療。在下面對包括給藥時(shí)間表和與常規(guī)藥物療法和手術(shù)干預(yù)聯(lián)用方法的應(yīng)用的其它實(shí)施方案進(jìn)行了描述。
本發(fā)明提供了用于將載脂蛋白A-I Milano(Apo A-I Milano)給藥來治療或預(yù)防急性冠狀動脈綜合征和局部缺血性再灌注損傷的藥物制劑。在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，對于這里所述的方法而言，所說的ApoA-I Milano與脂質(zhì)復(fù)合。例如，所說的脂質(zhì)可以是磷脂，優(yōu)選地是1-棕櫚酰-2-油酰基-sn-甘油-3-磷酸膽堿(也被稱為1-棕櫚酰-2-油?；?磷脂酰膽堿或POPC)。在一個(gè)最優(yōu)選的實(shí)施方案中，所說的Apo A-IMilanoPOPC復(fù)合體可以是一種藥物制劑。在另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，可以以約1mg蛋白/kg至約100mg蛋白/kg的劑量將所說的ApoA-I Milano磷脂復(fù)合體或其藥物制劑對需要其的個(gè)體進(jìn)行給藥。
在某些實(shí)施方案中，該方法包括給予一些Apo A-I Milano磷脂復(fù)合體或其可注射或液體藥物制劑的劑量來治療急性冠狀動脈綜合征。在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，所說的ApoA I M磷脂復(fù)合體或其藥物制劑可以以約1mg(蛋白)/kg至約100mg(蛋白)/kg的劑量被給藥于需要其的個(gè)體。在某些實(shí)施方案中，該方法包括通過以靜脈內(nèi)輸入的形式給予Apo A-I Milano磷脂復(fù)合體或其藥物制劑來治療或預(yù)防急性冠狀動脈綜合征。在某些實(shí)施方案中，該方法包括以靜脈內(nèi)推注形式進(jìn)行給藥。靜脈內(nèi)推注指的是Apo A-I Milano磷脂或其藥物制劑在短時(shí)間內(nèi)例如在高至5分鐘，例如2-5分鐘內(nèi)被靜脈內(nèi)給藥。在某些實(shí)施方案中，Apo A-I Milano磷脂復(fù)合體或其藥物制劑的給藥包括連續(xù)靜脈內(nèi)輸入。連續(xù)靜脈內(nèi)輸入指的是在高于2-5分鐘，例如30分鐘至約3小時(shí)的時(shí)間內(nèi)連續(xù)給藥?？梢栽谳斠罕没蜉斎胙b置的幫助下來進(jìn)行連續(xù)靜脈內(nèi)輸入。在某些實(shí)施方案中，Apo A-I Milano磷脂或其藥物制劑的給藥可以是Apo A-I Milano磷脂復(fù)合體或其藥物制劑連續(xù)靜脈內(nèi)輸入和靜脈內(nèi)推注(“快速注射”)的組合。所述快速注射可以在連續(xù)輸注之前、之后或期間給藥。在某些實(shí)施方案中，Apo A-IMilano或脂質(zhì)復(fù)合體或其藥物制劑的給藥可以與治療或預(yù)防心血管疾病、相伴或comorbid疾病或緩解癥狀的其它藥物聯(lián)合進(jìn)行。其它藥物的給藥可以同時(shí)進(jìn)行或相繼進(jìn)行。
所說的方法提供了這里所述藥物制劑的靜脈內(nèi)給藥。可以用任何適宜的血管來進(jìn)行輸入，所說的血管包括外周血管如胳膊肘前窩中的血管或進(jìn)入胸部的重要血管。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，所說的藥物制劑被輸入到個(gè)體胳膊肘前窩處的頭側(cè)或前臂正中的血管中。
在某些實(shí)施方案中，該方法包括以高或低劑量或其組合給患者使用Apo A-I Milano磷脂復(fù)合體的藥物制劑。如下文所述的那樣，在短的給藥時(shí)間間隔內(nèi)給予所說藥物制劑的高劑量可安全有效地降低血管被部分或完全閉合的個(gè)體的粥樣斑體積。在某些實(shí)施方案中，可以在手術(shù)干預(yù)如PTCA之前、期間或之后將所說的藥物制劑給藥以打開被閉合的血管。在某些實(shí)施方案中，可以給患者使用一個(gè)或多個(gè)間歇劑量以維持之前被閉合血管的開放性(“維持劑量”)。
本發(fā)明提供了一種治療或預(yù)防局部缺血性再灌注損傷的新方法，即，使用這里所述的Apo A-I Milano復(fù)合體的藥物制劑或劑量來治療局部缺血性再灌注。用于這種治療的劑量包括將高至100mg/kg的ApoA-I Milano磷脂復(fù)合體給藥于需要其的個(gè)體。在某些實(shí)施方案中，該方法包括以約1mg/kg個(gè)體體重至約100mg/kg個(gè)體體重的劑量將ApoA-I Milano磷脂復(fù)合體的藥物組合物進(jìn)行給藥。在特定的實(shí)施方案中，該方法包括以約10mg/kg至約50mg/kg的劑量將Apo A-I Milano磷脂復(fù)合體的藥物組合物進(jìn)行給藥。在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，該方法包括以約15mg/kg的特定劑量將Apo A-I Milano磷脂復(fù)合體的藥物組合物進(jìn)行給藥。在另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，該方法包括以約45mg/kg的特定劑量將Apo A-I Milano磷脂復(fù)合體的藥物組合物進(jìn)行給藥。本發(fā)明還優(yōu)選地包括單獨(dú)使用15mg/kg或與45mg/kg的劑量聯(lián)用。同樣，對于局部缺血性再灌注損傷的治療而言，可以單獨(dú)使用45mg/kg的劑量或者與15mg/kg的劑量聯(lián)用。
這里所提供的藥物制劑包含適宜pH、重量摩爾滲透壓濃度、張度、純度以及無菌性的Apo A-I Milano磷脂復(fù)合體從而使得其可以安全地被給藥于個(gè)體。該藥物制劑可以被制備成用于單一的一次性應(yīng)用的制劑或者被制備成可提供適于多次給藥的藥物制劑的下述包含抗菌賦形劑的制劑。在某些實(shí)施方案中，該藥物制劑可以位于可以被冷凍或冷藏的無菌預(yù)填充的注射器中或者無菌預(yù)填充的袋中。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，所說的Apo A-I Milano脂質(zhì)復(fù)合體是Apo A-I Milano磷脂復(fù)合體。在更優(yōu)選的實(shí)施方案中，所說的Apo A-I Milano磷脂復(fù)合體是Apo A-I MilanoPOPC。
在某些實(shí)施方案中，該藥物制劑可以是單位劑量或應(yīng)用單位(unit-of-use)包裝。正如本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的那樣，單位劑量包裝將單劑量藥物傳遞給個(gè)體。本發(fā)明的方法為包含例如每個(gè)包裝包含1050mg Apo A-I Milano蛋白的藥物制劑提供了一種單位劑量包裝。例如，1050mg Apo A-I Milano蛋白是以15mg/kg Apo A-I Milano的劑量給藥于70kg個(gè)體的數(shù)量。該單位可以是例如無菌的單次應(yīng)用的小瓶、無菌預(yù)填充的注射器、無菌預(yù)填充的袋(即piggybacks)等。
在某些實(shí)施方案中，該藥物制劑可以是應(yīng)用單位包裝。正如本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的那樣，應(yīng)用單位劑量包裝是由提供健康護(hù)理的人直接派給的具有處方大小的患者可以方便容易地使用的標(biāo)注單位。應(yīng)用單位包裝包含給定適應(yīng)癥典型的治療時(shí)間間隔和持續(xù)時(shí)間所必需數(shù)量的藥物制劑。本發(fā)明的方法提供了一種包含例如足以以15mg/kg Apo A-IMilano蛋白的數(shù)量在五周的時(shí)間中每周一次靜脈內(nèi)給藥于平均體形大小的成年男性或女性來對其進(jìn)行治療數(shù)量的Apo A-I Milano磷脂復(fù)合體的藥物制劑的應(yīng)用單位包裝。因此，上述應(yīng)用單位包裝具有五個(gè)Apo A-I Milano磷脂復(fù)合體劑量(在小瓶或預(yù)填充注射器中被獲得)。在一個(gè)實(shí)施方案中，該應(yīng)用單位劑量包括一種以足以以15mg/kg或45mg/kg劑量在六周的時(shí)間中每周一次給藥于平均體形大小的成年男性或女性來對其進(jìn)行治療數(shù)量的Apo A-I Milano磷脂復(fù)合體的藥物制劑。對本領(lǐng)域技術(shù)人員顯而易見得是，這里所述的劑量是以個(gè)體的體重為基礎(chǔ)的。
可以對該藥物制劑進(jìn)行標(biāo)記并且其具有所附的用于確定其中所包含的制劑和可為健康護(hù)理提供者和個(gè)體用于治療急性冠狀動脈綜合征的其它信息的標(biāo)簽，所說的信息非限制性地包括使用說明、劑量、給藥時(shí)間間隔、持續(xù)時(shí)間、適應(yīng)癥、禁忌癥、警告、預(yù)防措施、處理和儲存指導(dǎo)等。
4.附圖簡要說明

圖1提供了ETC-216的單劑量對正常男性個(gè)體血清HDL的急性作用；圖2(A)提供了在遠(yuǎn)側(cè)信托分枝(fiduciary branch)(部位C)處開始和在近枝(部位A)處結(jié)束的IVUS成像導(dǎo)管的motorized pullback。在該血管造影照片中說明了該導(dǎo)管的路徑；圖2(B)提供了每0.5mm直至達(dá)到近枝處時(shí)獲得的血管的典型橫截面；圖2(C)提供了血管的中間橫截面；圖2(D)提供了IVUS圖像中的遠(yuǎn)枝；圖3(A)提供了分析用的橫截面；圖3(B)提供了外彈性膜(EEM)；圖3(C)提供了腔面積；圖3(D)提供了通過從EEM的區(qū)域中減去該腔的橫切面面積測量的最大粥樣斑厚度的計(jì)算；圖4(A)提供了患者在接受ETC-216前血管的基礎(chǔ)影像；和圖4(B)提供了患者在接受ETC-216后隨訪時(shí)血管的影像。粥樣斑面積從8.1降低至5.35mm3，同時(shí)管腔面積實(shí)際上沒有變化。
圖5提供了一種方案的實(shí)例，其中在局部缺血發(fā)作前用基質(zhì)或本發(fā)明的蛋白/脂質(zhì)復(fù)合體(ETC-216)對離體兔心臟進(jìn)行處理；圖6提供了冠狀靜脈流出物中的肌酸激酶活性；圖7提供了在Langendorff裝置中由基質(zhì)和ETC-216處理的離體兔心臟收集的心臟功能的實(shí)時(shí)監(jiān)測；圖8提供了在全心缺血抑制30分鐘和再灌注的60分鐘之前、期間和之后離體兔心臟中左心室形成壓(LVDP)的瞬時(shí)改變；圖9提供了在全心缺血抑制30分鐘和再灌注的60分鐘之前、期間和之后離體兔心臟中左心室末期舒張壓(LVEDP)的瞬時(shí)改變；圖10提供了在全心缺血抑制30分鐘和再灌注的60分鐘之前、期間和之后離體兔心臟中冠狀動脈灌注壓(CPP)的瞬時(shí)改變；圖11提供了由全心缺血抑制30分鐘，然后再灌注60分鐘的基質(zhì)和ETC-216處理的兔心臟獲得的組織勻漿中的過氧化氫脂質(zhì)含量；圖12提供了由基質(zhì)和ETC-216處理的兔心臟獲得的心肌樣品的電子顯微鏡影像；圖13提供了另一種本發(fā)明的方案，其中在急性給藥組中在開始局部缺血前使用一種預(yù)處理和在長期給藥組中在開始局部缺血前進(jìn)行兩次預(yù)處理；圖14提供了一種測定梗死大小的方案；圖15提供了用ETC-216(100mg/kg)或等體積的基質(zhì)處理一次(即急性處理)或處理兩次(即長期處理)的兔有風(fēng)險(xiǎn)面積的梗死百分比、左心室的梗死百分比、和左心室有風(fēng)險(xiǎn)的面積百分比；圖16提供了另一種本發(fā)明的方案，其中在開始局部缺血前用基質(zhì)(組1)或10、3或1mg/kg ETC-216(組2)對兔子進(jìn)行預(yù)處理；圖17提供了各組用10、3或1mg/kg ETC-216或等體積的蔗糖-甘露醇基質(zhì)處理一次(即急性處理)時(shí)在兔體內(nèi)測得的有風(fēng)險(xiǎn)面積的梗死百分比、左心室的梗死百分比、和左心室中有風(fēng)險(xiǎn)的面積百分比；圖18提供了脂蛋白未酯化膽固醇的瞬時(shí)變化；圖19提供了另一種本發(fā)明的方案，其中在30分鐘局部缺血期的最后5分鐘用基質(zhì)或ETC-216進(jìn)行單次處理；和圖20提供了在兔體內(nèi)測得的有風(fēng)險(xiǎn)面積的梗死百分比、左心室的梗死百分比、和左心室中有風(fēng)險(xiǎn)的面積百分比。
5.本發(fā)明的詳細(xì)描述5.1.定義這里所用的下面的術(shù)語具有下面的含義術(shù)語“治療”指的是一種緩解或消除疾病、病癥和/或其癥狀的方法。
術(shù)語“治療有效量”指的是足以在一定程度上緩解被治療情況或病癥的一種或多種癥狀的Apo A-I Milano或脂質(zhì)復(fù)合體或其藥物制劑的數(shù)量。
術(shù)語“預(yù)防”指的是一種使患者不出現(xiàn)疾病、病癥和/或其癥狀的方法。在某些實(shí)施方案中，術(shù)語“預(yù)防”指的是一種降低患有疾病、病癥和/或其癥狀的風(fēng)險(xiǎn)的方法。
術(shù)語“預(yù)防有效量”指的是足以預(yù)防被治療情況或病癥的一種或多種癥狀的發(fā)作或復(fù)發(fā)的Apo A-I Milano或脂質(zhì)復(fù)合體或其藥物制劑的數(shù)量。
術(shù)語“急性冠狀動脈綜合征”指的是局部缺血性病癥如不穩(wěn)定心絞痛、Q波和非-Q波心肌梗死或者International Classification ofDisease，第9版(ICD-9)(其將被第10版(ICD-10)代替)中所提供的病癥。心肌梗死在心電圖中可能表現(xiàn)出或不表現(xiàn)出ST-段升高。
術(shù)語“局部缺血”指的是由于機(jī)械或生物學(xué)原因例如痙攣、血栓形成、血液供給的狹窄性梗阻(主要是動脈狹窄或破裂)誘導(dǎo)的局部貧血。術(shù)語“心肌局部缺血”指的是血液向心肌的循環(huán)不足，其通常是由于冠狀動脈疾病導(dǎo)致的。
術(shù)語“局部缺血性再灌注”指的是增加量的氧合血液向組織供血的重新建立。
術(shù)語“心血管疾病”指的是心臟、血管和血液循環(huán)疾病如心肌梗死、急性冠狀動脈綜合征、動脈粥樣硬化、心絞痛、局部缺血性再灌注損傷和相關(guān)病癥。
這里所用的術(shù)語“手術(shù)干預(yù)”指的是手動的非藥物性或者手術(shù)方法。手術(shù)干預(yù)可用于診斷、放射學(xué)、預(yù)防或治療目的。
術(shù)語“不穩(wěn)定心絞痛”指的是慢性穩(wěn)定心絞痛的癥狀在頻次、嚴(yán)重程度或持續(xù)時(shí)間方面的改變，如向頜部和手臂發(fā)散的胸部疼痛或上腹部疼痛。慢性穩(wěn)定心絞痛是由運(yùn)動、進(jìn)食和/或應(yīng)激導(dǎo)致的并且可以通過休息得到緩解的可能向個(gè)體的頜部和手臂發(fā)散的胸部疼痛(個(gè)體產(chǎn)生癥狀所需活動的頻率或嚴(yán)重程度沒有變化)。
術(shù)語“藥物制劑”指的是一種適于給藥于個(gè)體的包含Apo A-IMilano或Apo A-I Milano脂質(zhì)復(fù)合體和適宜稀釋劑、載體、基質(zhì)、或賦形劑的組合物。這種術(shù)語非限制性地包括下述的口服、胃腸外和局部組合物。
術(shù)語“約”指的是表示其所涉及的標(biāo)稱值加或減20％的近似值的相對術(shù)語。對于本文所屬領(lǐng)域而言，除非特定說明需要嚴(yán)格范圍，否則這種近似的水平都是適宜的。
術(shù)語“標(biāo)簽”指的是一種位于一件物品的直接容器上的文字、印刷或圖形物質(zhì)的表現(xiàn)形式，例如，位于包含藥學(xué)活性劑的小瓶上所顯示的文字材料。
術(shù)語“標(biāo)記”指的是位于任何物品或其任何容器或包裹物或該類物品附件上的所有標(biāo)簽和其它文字、印刷或圖形物質(zhì)，例如，包裝內(nèi)插物、指導(dǎo)性錄像帶或指導(dǎo)性DVDs附件或者與藥學(xué)活性劑的容器有關(guān)的物質(zhì)。
5.2.治療方法本發(fā)明提供了一些治療或預(yù)防急性冠狀動脈綜合征(包括不穩(wěn)定心絞痛、ST-段升高性心肌梗死和非Q波心肌梗死)的方法和制劑。本申請確定了這里所述藥物制劑用于治療和預(yù)防急性冠狀動脈綜合征的安全有效劑量。
根據(jù)目前的理解，提出了一種公認(rèn)臨床形式的參照標(biāo)準(zhǔn)，現(xiàn)在被稱為急性冠狀動脈綜合征(“ACS”)。Id.急性冠狀動脈綜合征包括不穩(wěn)定心絞痛、Q波和非ST-段升高性心肌梗死并且是發(fā)病率和致死率的主要原因，尤其是在出現(xiàn)后前24小時(shí)內(nèi)發(fā)病率和死亡率的主要原因。(Schoenhagen等人，2000，Circulation 101598-603)。ACS是在心電圖中不出現(xiàn)ST段升高的局部缺血性不適。該局部缺血常常發(fā)展成不穩(wěn)定心絞痛、Q波和非-Q波心肌梗死。(Antman and Braunwald，心臟病中的“急性心肌梗死”——心血管醫(yī)學(xué)中的教科書，第6版，第2卷，Braunwald等人編輯，2001，W.B.Saunders Company，費(fèi)城)。
本發(fā)明的方法和制劑提供了治療動脈粥樣硬化和急性冠狀動脈綜合征的獨(dú)特有效的方法。在本發(fā)明的方法中，Apo A-I Milano磷脂復(fù)合體或其藥物制劑提供了一種可以逆轉(zhuǎn)疾病的病理生理學(xué)基礎(chǔ)而不是緩解癥狀的非手術(shù)療法。本發(fā)明的方法提供了Apo A-I Milano，ApoA-I Milano磷脂復(fù)合體或其藥物制劑的給藥，其提供了促進(jìn)膽固醇流出、逆轉(zhuǎn)膽固醇轉(zhuǎn)運(yùn)和降低動脈粥樣硬化斑塊的HDL療法。不受任何理論束縛，相信Apo A-I Milano、Apo A-I Milano磷脂復(fù)合體或其藥物制劑摹擬了HDL功能，其促進(jìn)了膽固醇流出和逆轉(zhuǎn)了膽固醇轉(zhuǎn)運(yùn)、降低了粥樣斑體積并且可以穩(wěn)定動脈粥樣硬化斑塊。
本發(fā)明提供了治療急性冠狀動脈綜合征的方法。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，如下所述的那樣，Apo A-I Milano磷脂復(fù)合體或其藥物制劑可以以約1mg(蛋白)/kg至約100mg(蛋白)/kg的劑量，優(yōu)選1mg(蛋白)/kg至50mg(蛋白)/kg的劑量，最優(yōu)選15mg/kg或45mg/kg的劑量被給藥。申請人已經(jīng)證明這些劑量是安全有效的并且可以被患有或者有患這里進(jìn)行了詳細(xì)描述的急性冠狀動脈綜合征風(fēng)險(xiǎn)的患者很好地耐受。
本發(fā)明提供了治療或預(yù)防急性冠狀動脈綜合征(包括緩解或改善急性冠狀動脈綜合征的體征或癥狀)的方法。在某些實(shí)施方案中，該方法治療或降低了冠狀動脈粥樣硬化。在某些實(shí)施方案中，該方法促進(jìn)了膽固醇從受影響的血管中流出。在某些實(shí)施方案中，該方法促進(jìn)了膽固醇轉(zhuǎn)運(yùn)的逆轉(zhuǎn)。在一個(gè)實(shí)施方案中，該方法降低了受影響血管中的粥樣斑體積。在某些實(shí)施方案中，受影響的血管是冠狀動脈。如這里所述的這樣，可以用血管內(nèi)超聲(IVUS)來測定粥樣斑體積。在某些實(shí)施方案中，該方法降低了受影響血管的總斑塊體積。在某些實(shí)施方案中，該方法降低了受影響血管中平均最大斑塊厚度。在某些實(shí)施方案中，該方法降低了平均最大粥樣斑厚度。在某些實(shí)施方案中，該方法降低了最小百分比斑塊區(qū)域中的斑塊體積。在某些實(shí)施方案中，該方法降低了最大百分比斑塊面積。在某些實(shí)施方案中，該方法增加了受影響血管中的平均冠狀血管管腔直徑。在某些實(shí)施方案中，與沒有接受本發(fā)明方法和制劑的個(gè)體相比，接受了本發(fā)明方法和制劑的個(gè)體的血管造影損害降低。在某些實(shí)施方案中，該方法使得之前存在的損害消退。在某些實(shí)施方案中，該方法和藥物制劑使得被閉合的血管開放或者維持了被閉合血管的開放。
在某些實(shí)施方案中，約15mg/kg至約45mg/kg的Apo A-I Milano磷脂復(fù)合體劑量使得平均百分比粥樣斑體積降低了約2％、約1％或約0.05％。在某些實(shí)施方案中，約15mg/kg至約45mg/kg的Apo A-IMilano磷脂復(fù)合體劑量使得粥樣斑體積降低了約20mm3、約15mm3、約10mm3或約5mm3。在某些實(shí)施方案中，約15mg/kg至約45mg/kg的Apo A-I Milano磷脂復(fù)合體劑量使得平均最大粥樣斑厚度降低了約-0.039mm至-0.044mm。
在一個(gè)實(shí)施方案中，該方法提供對有急性冠狀動脈綜合征體征或癥狀的個(gè)體的急性冠脈綜合征的治療。在一個(gè)實(shí)施方案中，個(gè)體具有心肌局部缺血的體征和/或癥狀，例如胸部、頜、胳膊、或上腹部區(qū)域疼痛、心悸、呼吸短促、出汗、惡心和/或嘔吐。在另一實(shí)施方案中，該方法為表現(xiàn)出急性冠狀動脈綜合征的體征和癥狀并且在心電圖(“ECG”或“EKG”)中有變化例如ST段升高、T波改變?nèi)绶崔D(zhuǎn)、肌酸激酶部分、肌鈣蛋白I或C-反應(yīng)蛋白增加的個(gè)體提供了治療。
在一個(gè)實(shí)施方案中，該方法提供有形成急性冠狀動脈綜合征風(fēng)險(xiǎn)的個(gè)體的急性冠狀動脈綜合征的預(yù)防。有風(fēng)險(xiǎn)的個(gè)體包括各種年齡(例如18-24、約25、約30、約40、約50、約60、約70、約80或約90歲)的個(gè)體、有家族心血管疾病史或心血管疾病遺傳素質(zhì)的個(gè)體、患有糖尿病、高血壓、多血管或left-mainstem疾病的個(gè)體或者之前出現(xiàn)過心肌梗死的個(gè)體。
本領(lǐng)域技術(shù)人員清楚的是，本發(fā)明制劑的實(shí)際劑量可隨著個(gè)體的身高、體重、年齡、疾病的嚴(yán)重程度、存在并發(fā)的醫(yī)學(xué)病癥等來進(jìn)行變化。例如，可以用較低范圍的約1mg/kg(例如0.8mg/kg或0.9mg/kg)的劑量用Apo A-I Milano脂質(zhì)復(fù)合體對腎或肝功能受損的老年個(gè)體進(jìn)行治療?？梢杂幂^高范圍的約100mg/kg(例如，120mg/kg、119mg/kg、118mg/kg、115mg/kg等)的劑量用Apo A-I Milano脂質(zhì)復(fù)合體對患有嚴(yán)重急性冠狀動脈綜合征的肝腎功能良好的肥胖個(gè)體進(jìn)行治療。已經(jīng)表明這里所述制劑的劑量可以有效達(dá)到所需目的。這些劑量達(dá)到了循環(huán)濃度范圍(包括具有可接受的風(fēng)險(xiǎn)效益比的有效劑量)。
本發(fā)明提供了用足以治療急性冠狀動脈綜合征的給藥時(shí)間表來治療或預(yù)防需要該類治療的患者的急性冠狀動脈綜合征的方法。在某些實(shí)施方案中，下述的Apo A-I Milano磷脂復(fù)合體或其藥物制劑可以被約每天給藥、約每隔一天、約每3天、約每4天、約每5天、約每6天、約每7天、約每8-10天或約每11-14天給藥。這些時(shí)期也被稱為給藥間隔或時(shí)間間隔。在某些實(shí)施方案中，該給藥間隔可以是每一個(gè)月、每六個(gè)月、每12個(gè)月、每18個(gè)月或每24個(gè)月進(jìn)行給藥。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，所說Apo A-I Milano、脂質(zhì)復(fù)合體或其藥物制劑的給藥可以是約每7天進(jìn)行一次。在某些實(shí)施方案中，Apo A-I Milano磷脂復(fù)合體或其藥物制劑的給藥可以是一種一次性給藥。在某些實(shí)施方案中，持續(xù)給藥約1周、約2周、約3周、約4周、約5周、約6周、約7-12周、約13-24周、約52周或者個(gè)體終生給藥。這種時(shí)期也被稱為給藥期、治療期或持續(xù)時(shí)間。因此，一種給藥時(shí)間表是例如每7天進(jìn)行一次Apo A-I Milano磷脂復(fù)合體藥物制劑的給藥，給藥約6周。在某些實(shí)施方案中，在約52周后可以間歇性繼續(xù)該給藥間隔。例如，可以每周一次地對個(gè)體治療約52周，次年治療約3至約4次。在某些優(yōu)選的實(shí)施方案中，約每7天進(jìn)行一次包含Apo A-I Milano磷脂復(fù)合體的藥物制劑的給藥，給藥約5周。使用各種給藥間隔和持續(xù)時(shí)間的其它給藥時(shí)間表也在這里所述的本發(fā)明的范圍內(nèi)。
在治療期內(nèi)Apo A-I Milano磷脂復(fù)合體或其藥物制劑的劑量可以發(fā)生變化。例如，可以每周一次以45mg/kg Apo A-I Milano磷脂復(fù)合體藥物制劑的劑量對個(gè)體治療3周，然后以15mg/kg Apo A-I Milano磷脂復(fù)合體藥物制劑的劑量每四個(gè)月或每年一次對患者進(jìn)行終生治療?？梢杂迷擃愰g歇給藥來維持血管的開放。為了維持降低的粥樣斑體積和增加血管管腔而對個(gè)體終生間歇給藥在本發(fā)明的范圍內(nèi)。
本發(fā)明的方法和制劑可以與手術(shù)干預(yù)聯(lián)用，即可以在手術(shù)前、手術(shù)期間或手術(shù)后進(jìn)行應(yīng)用。手術(shù)干預(yù)可包括血管成形術(shù)、血管內(nèi)超聲、冠狀動脈旁路搭橋術(shù)(CABG)、冠狀動脈血管造影術(shù)、血管斯滕特氏固定模的移植、冠狀血管經(jīng)皮干預(yù)(PCI)和/或斑塊的穩(wěn)定。在某些實(shí)施方案中，該方法在手術(shù)干預(yù)前或手術(shù)干預(yù)后進(jìn)行Apo A-I Milano磷脂復(fù)合體或其藥物制劑的給藥以打開閉合的血管或降低血管中的動脈粥樣硬化斑塊。手術(shù)干預(yù)指的是用于對疾病或情況的診斷、成像(放射學(xué))預(yù)防或治療的手動的、非藥物學(xué)或操作性方法。例如，血管內(nèi)超聲(IVUS)和冠狀動脈血管造影術(shù)是可以為所負(fù)擔(dān)的斑塊提供定量評估(診斷目的)的方法，血管造影術(shù)可以提供血管的影像(放射學(xué)目的)，血管成形術(shù)可以打開閉合的血管(治療目的)。其都包括在這里所用的手術(shù)干預(yù)內(nèi)。
5.3.載脂蛋白A-I Milano一方面，本發(fā)明提供了一些通過使用包含Apo A-I Milano的制劑來用于治療、降低或預(yù)防由急性冠狀動脈綜合征導(dǎo)致的損傷的方法和制劑。在某些實(shí)施方案中，可以將Apo A-I Milano(Apo A-I Milano)與脂質(zhì)復(fù)合。
人Apo A-I Milano是ApoA-1的天然變型(Weisgraber等人，1980，J.Clin.Invest.66901-907)。在Apo A-I Milano中，氨基酸精氨酸(Arg173)被氨基酸半胱氨酸(Cys173)代替。因?yàn)锳po A-I Milano每根多肽鏈包含一個(gè)半胱氨酸殘基，所以其可以以單體、同型二聚體、或雜二聚體(heterodimeric)形式存在。(見，US專利5,876,968，其在這里被全部引入作為參考)。這些形式可以化學(xué)相互轉(zhuǎn)化，且術(shù)語Apo A-I Milano在這些形式之間沒有差異。在DNA水平上，該變型形式是在基因序列中通過從C至T取代，即密碼子CGC變成TGC，從而使得半胱氨酸(Cys)代替第173位氨基酸的精氨酸(Arg)進(jìn)行轉(zhuǎn)錄來產(chǎn)生的。
在某些實(shí)施方案中，該Apo A-I Milano可以是一種變型或保守取代的Apo A-I Milano。保守取代指的是Apo A-I Milano的某些氨基酸殘基可以在不會顯著對該蛋白的活性產(chǎn)生有害影響的情況下被其它氨基酸殘基代替。因此，本發(fā)明還考慮其中該結(jié)構(gòu)中至少一個(gè)確定的氨基酸殘基被另一種氨基酸殘基取代的Apo A-I Milano的改變或被取代形式。為了確定保守氨基酸取代，可以方便地主要根據(jù)該氨基酸側(cè)鏈的物理-化學(xué)特性將該氨基酸分類成兩種主要的類型--親水性和疏水性?？梢詫⑦@兩種主要類型進(jìn)一步分成一些小類，這些小類對該氨基酸側(cè)鏈進(jìn)行了更明確的定義。例如，親水性氨基酸可以進(jìn)一步被細(xì)分為酸性、堿性和極性氨基酸。疏水性氨基酸可以進(jìn)一步被細(xì)分為非極性和芳族氨基酸。定義了結(jié)構(gòu)(I)的各種氨基酸類的定義如下“親水性氨基酸”指的是根據(jù)Eisenberg等人，1984，J.Mol.Biol.179125-142的標(biāo)準(zhǔn)化一致性疏水性標(biāo)度(normalized consensushydrophobility scale)表現(xiàn)出小于零的疏水性的氨基酸。遺傳上編碼的親水性氨基酸包括Thr(T)、Ser(S)、His(H)、Glu(E)、Asn(N)、Gln(Q)、Asp(D)、Lys(K)和Arg(R)。
“酸性氨基酸”指的是具有小于7的側(cè)鏈pK值的親水性氨基酸。由于失去了氫離子，所以酸性氨基酸在生理學(xué)pH下通常具有荷負(fù)電的側(cè)鏈。遺傳上編碼的酸性氨基酸包括Glu(E)和Asp(D)。
“堿性氨基酸”指的是具有高于7的側(cè)鏈pK值的親水性氨基酸。由于締合了水合氫離子，所以堿性氨基酸在生理學(xué)pH下通常具有荷正電的側(cè)鏈。遺傳上編碼的堿性氨基酸包括His(H)、Arg(R)和Lys(K)。
“極性氨基酸”指的是在生理學(xué)pH下不帶電，但是具有至少一種其中兩個(gè)原子共享的電子對離其中一個(gè)原子更近的鍵的親水性氨基酸。遺傳上編碼的極性氨基酸包括Asn(N)、Gln(Q)Ser(S)和Thr(T)。
“疏水性氨基酸”指的是根據(jù)Eisenber g，1984，J Mol.Biol.179125-142標(biāo)準(zhǔn)化一致性疏水性標(biāo)度表現(xiàn)出高于零的疏水性的氨基酸。遺傳上編碼的疏水性氨基酸包括Pro(P)、Ile(I)、Phe(F)、Val(V)、Leu(L)、Trp(W)、Met(M)、Ala(A)、Gly(G)和Tyr(Y)。
“芳族氨基酸”指的是具有有至少一個(gè)芳族或雜芳族環(huán)的側(cè)鏈的疏水性氨基酸。所說的芳族或雜芳族環(huán)可以包含一個(gè)或多個(gè)取代基如--OH、--SH、--CN、--F、--Cl、--Br、--I、--NO2、--NO、--NH2、--NHR、--NRR、--C(O)R、--C(O)OH、--C(O)OR、--C(O)NH2、--C(O)NHR、--C(O)NRR等，其中各R獨(dú)立地是(C1-C6)烷基、被取代的(C1-C6)烷基、(C1-C6)鏈烯基、被取代的(C1-C6)鏈烯基、(C1-C6)炔基、被取代的(C1-C6)炔基、(C5-C20)芳基、被取代的(C5-C20)芳基、(C6-C26)烷芳基、被取代的(C6-C26)烷芳基、5-20員雜芳基、被取代的5-20員雜芳基、6-26員烷基雜芳基或被取代的6-26員烷基雜芳基。遺傳上編碼的芳族氨基酸包括Phe(F)、Tyr(Y)和Trp(W)。
“非極性氨基酸”指的是具有在生理學(xué)pH條件下不帶電荷和具有其中兩個(gè)原子共享的成對電子被兩個(gè)原子各自相等地持有的鍵的側(cè)鏈的疏水性氨基酸(即，該側(cè)鏈?zhǔn)欠菢O性的)。遺傳上編碼的非極性氨基酸包括Leu(L)、Val(V)、Ile(I)、Met(M)、Gly(G)和Ala(A)。
“脂族氨基酸”指的是具有脂族烴側(cè)鏈的疏水性氨基酸。遺傳上編碼的脂族氨基酸包括Ala(A)、Val(V)、Leu(L)和Ile(I)。
氨基酸殘基Cys(C)不常見，這是因?yàn)槠淇梢耘c其它Cys(C)殘基或其它包含硫烷基的氨基酸形成雙硫橋。Cys(C)殘基(和其它具有包含--SH側(cè)鏈的氨基酸)以還原的游離--SH或被氧化的雙硫橋形式在肽中存在的能力影響著Cys(C)殘基對于肽貢獻(xiàn)凈疏水性還是親水性特性。雖然根據(jù)Eisenberg(Eisenberg，1984，同上)的標(biāo)準(zhǔn)化一致性標(biāo)度Cys(C)表現(xiàn)出0.29的疏水性，但應(yīng)當(dāng)清楚的是對于本發(fā)明的目的而言，盡管上面定義了其一般性分類，但是Cys(C)在本發(fā)明中被歸類為極性親水性氨基酸。
正如本領(lǐng)域技術(shù)人員將意識到的那樣，上述分類并不是要相互排除。因此，具有表現(xiàn)出兩種或多種物理-化學(xué)性質(zhì)的側(cè)鏈的氨基酸可以被包括在多類中。例如，具有被極性取代基諸如Tyr(Y)進(jìn)一步取代的芳族部分的氨基酸側(cè)鏈可能既表現(xiàn)出芳族的疏水性又表現(xiàn)出極性或親水性，因此既可以被包括在芳族類氨基酸中又可以被包括在極性氨基酸中。任何氨基酸的適宜分類對于本領(lǐng)域技術(shù)人員而言將是顯而易見的，并且尤其是根據(jù)這里提供的詳細(xì)公開將是顯而易見的。在某些實(shí)施方案中，Apo A-I Milano被取代的或被改變的形式不是Apo A-I。
本發(fā)明所用的Apo A-I Milano可以得自任何可獲得的來源。例如，該Apo A-I Milano可以是重組、合成、半合成或精制Apo A-I Milano。在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，該Apo A-I Milano可以是US專利US5,721,114和歐洲專利EP 0 469 017和EP 0 267 703(其在這里被全部引入作為參考)中所述的在酵母菌或大腸桿菌表達(dá)的重組蛋白(rApoA-I Milano)。獲得本發(fā)明所用Apo A-I Milano的方法是現(xiàn)有技術(shù)中眾所周知的方法。例如，Apo A-I Milano可以分離自血漿，例如通過密度梯度離心法，然后通過脂蛋白的脫脂、還原、變性和凝膠過濾色譜法、離子交換色譜法、疏水性例如苯基瓊脂糖相互作用色譜法或免疫親合色譜法來進(jìn)行分離或者可以合成、半合成制備或者用本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的重組DNA技術(shù)和隨后進(jìn)行現(xiàn)有技術(shù)人員熟悉的純化來進(jìn)行制備。(見，例如，US專利6,107,467；6,559,284；6,423,830；6,090,921；5,834,596；5,990,081；6,506,879，Mulugeta等人，1998，J.Chromatogr.798(1-2)83-90；Chung等人，1980，J.Lipid Res.21(3)284-91；Cheung等人，1987，J.Lipid Res.28(8)913-29；Persson，等人，1998，J.Chromatogr.71197-109；US專利5,059,528、5,834,596、5,876,968和5,721,114；以及PCT公開物WO 86/04920和WO 87/02062)。
如果所說的Apo A-I Milano是由天然來源獲得的，則其可以得自任何種屬的任何動物來源。在某些實(shí)施方案中，Apo A-I Milano可以得自哺乳動物來源。在某些實(shí)施方案中，Apo A-I Milano可以由人獲得。在本發(fā)明優(yōu)選的實(shí)施方案中，Apo A-I Milano得自與Apo A-IMilano被給藥的個(gè)體的種屬相同的種屬。在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，Apo A-I Milano是重組的Apo A-I Milano蛋白(rApo A-I Milano)。
5.4.給藥方法所說的Apo A-I Milano磷脂復(fù)合體或其藥物制劑可以用本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的可以確保其在循環(huán)中的生物利用度的任何適宜途徑來進(jìn)行給藥?？梢允褂锰峁┝酥委熡行Я勘景l(fā)明制劑的任何給藥途徑。給藥途徑可以由藥物制劑的類型來表明。例如，可注射的制劑可以被胃腸外給藥，非限制性地包括靜脈內(nèi)(IV)、肌內(nèi)(IM)、真皮內(nèi)、皮下(SC)、冠狀動脈內(nèi)、動脈內(nèi)、心包、關(guān)節(jié)內(nèi)和腹膜內(nèi)(IP)注射。(見，例如，Robinson等人，1989，藥物療法一種病理生理療法，第2章，第15-34頁，其在這里被全文引入作為參考。)在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，所說的Apo A-I Milano磷脂復(fù)合體或其藥物制劑可以被胃腸外給藥。在一個(gè)更優(yōu)選的實(shí)施方案中，所說的胃腸外給藥是靜脈內(nèi)給藥。靜脈內(nèi)給藥可以為推注形式，例如在約2-3分鐘內(nèi)被給藥或者可以為連續(xù)輸入的形式，例如在約1小時(shí)內(nèi)通過一種泵來進(jìn)行給藥，或者可以在約24小時(shí)內(nèi)連續(xù)輸入。在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，輸入時(shí)間為約1至約3小時(shí)。
所說的方法提供了這里所述藥物制劑的靜脈內(nèi)輸入。可以用任何適宜的血管作為輸入部位，包括外周血管如手臂肘前窩處的血管或進(jìn)入胸部的中線處的血管。
在優(yōu)選的實(shí)施方案中，該藥物制劑被輸入到個(gè)體手臂肘前窩處頭側(cè)或正中的肘血管中。
在某些實(shí)施方案中，可以通過一種機(jī)械泵或傳遞裝置，例如，心包傳遞裝置(PerDUCER)或心肺分流機(jī)來進(jìn)行給藥。
5.5.脂質(zhì)復(fù)合體在某些實(shí)施方案中，本發(fā)明的方法包括給予Apo A-I Milano的脂質(zhì)復(fù)合體。在某些實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了Apo A-I Milano磷脂復(fù)合體的藥物制劑。可以通過將脂質(zhì)與Apo A-I Milano復(fù)合來增強(qiáng)功效。典型地在給藥前將脂質(zhì)與Apo A-I Milano混合?？梢詫po A-IMilano和脂質(zhì)以適宜的比例在水溶液中進(jìn)行混合并且可以用現(xiàn)有技術(shù)中已知的方法來對其進(jìn)行復(fù)合，所說的方法包括冷凍干燥，清潔劑增溶然后透析、微流化、聲處理、和勻化?？梢酝ㄟ^例如改變壓力、超聲頻率、或清潔劑濃度來對復(fù)合效率進(jìn)行優(yōu)化。制備Apo A-I Milano磷脂復(fù)合體的常用清潔劑實(shí)例是膽酸鈉。
在一些情況中，優(yōu)選地在基本不含脂質(zhì)的情況下單獨(dú)給予Apo A-IMilano來治療或預(yù)防急性冠狀動脈綜合征。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，將Apo A-I Milano脂質(zhì)復(fù)合體給藥于需要其的個(gè)體。
在一個(gè)實(shí)施方案中，該Apo A-I Milano磷脂復(fù)合體是具有適宜藥用稀釋劑的溶液。在另一些實(shí)施方案中，在給藥前用適宜的藥用稀釋劑對Apo A-I Milano磷脂復(fù)合體的冷凍干燥或凍干制劑進(jìn)行水合或重組。在另一實(shí)施方案中，Apo A-I Milano脂質(zhì)復(fù)合體是一種冷凍制劑，在被給藥于需要其的個(gè)體前對其進(jìn)行解凍直至獲得一種均勻的溶液。
所說的脂質(zhì)可以是本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的任何適宜脂質(zhì)?？梢允褂貌缓椎闹|(zhì)，包括硬脂酰胺、十二烷胺、棕櫚酸乙酰酯、(1，3)-D-甘露糖基(mannosyl)-(1，3)甘油二酯、氨基苯基糖苷、3-膽甾醇基-6′-(葡硫基)己基醚糖脂、氯化N-(2，3-二(9-(Z)-十八烯氧基))-丙-1-基-N，N，N-三甲基銨和脂肪酸酰胺。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，所說的脂質(zhì)是磷脂。
所說的磷脂可以得自本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的任何來源。例如，所說的磷脂可以得自商業(yè)來源、天然來源或者可以用本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的合成或半合成方法來獲得(Mel′nichulc等人，1987，Ukr.Biokhim.Zh.59(6)75-7；Mel′nichuk等人，1987，Ukr.Biokhim.Zh.59(5)66-70；Ramesh等人，1979，J Am.Oil Chem.Soc.56(5)585-7；Patel和Sparrow，1978，J.Chromatogr.150(2)542-7；Kaduce等人，1983，J.Lipid Res.24(10)1398-403；Schlueter等人，2003，Org.Lett.5(3)255-7；Tsuji等人，2002，NipponYakurigaku Zasshi120(1)67P-69P)。
在優(yōu)選的實(shí)施方案中，所說的脂質(zhì)可以是磷脂。該磷脂可以是本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的任何磷脂。例如，該磷脂可以是小烷基鏈的磷脂、磷脂酰膽堿、卵磷脂酰膽堿、大豆磷脂酰膽堿、二棕櫚?；字Ｄ憠A、大豆磷脂酰甘油、二硬脂酰基磷脂酰甘油、二肉豆蔻酰磷脂酰膽堿、二硬脂酰磷脂酰膽堿、二月桂基磷脂酰膽堿、1-肉豆蔻酰-2-棕櫚?；字Ｄ憠A、1-棕櫚?；?2-肉豆蔻酰磷脂酰膽堿、1-棕櫚?；?2-硬脂酰磷脂酰膽堿、1-硬脂酰-2-棕櫚?；字Ｄ憠A、二油酰基磷脂酰膽堿、1-棕櫚酰基-2-油?；字Ｄ憠A、1-油?；?2-棕櫚酰磷脂酰膽堿、二油?；字Ｒ掖及?、二月桂酰磷脂酰甘油、磷脂酰絲氨酸、磷脂酰乙醇胺、磷脂酰肌醇、磷脂酰甘油、二磷脂酰甘油、二肉豆蔻酰磷脂酰甘油、二棕櫚?；字８视?、二硬脂酰磷脂酰甘油、二油?；字８视?、磷脂酸、二肉豆蔻酰磷脂酸、二棕櫚酰基磷脂酸、二肉豆蔻酰磷脂酰乙醇胺、二棕櫚?；字Ｒ掖及?、二肉豆蔻酰磷脂酰絲氨酸、二棕櫚酰基磷脂酰絲氨酸、腦磷脂酰絲氨酸、鞘磷脂、鞘脂類、腦鞘磷脂、二棕櫚?；柿字?、二硬脂酰鞘磷脂、半乳糖腦苷脂、神經(jīng)節(jié)苷脂、腦苷脂、磷脂酰甘油、磷脂酸、溶血卵磷脂、溶血磷脂酰乙醇胺、腦磷脂、心磷脂、磷酸二鯨蠟酯、二硬脂酰-磷脂酰乙醇胺和膽固醇以及其衍生物。
該磷脂還可以是上述任何一種磷脂的衍生物或類似物。在某些實(shí)施方案中，該Apo A-I Milano磷脂復(fù)合體可包含兩種或多種磷脂的組合。
在優(yōu)選的實(shí)施方案中，本發(fā)明的方法提供了Apo A-I Milano磷脂復(fù)合體的給藥。在一個(gè)更優(yōu)選的實(shí)施方案中，所說的脂質(zhì)是磷脂，優(yōu)選地是1-棕櫚?；?2-油?；字Ｄ憠A(“POPC”)或(“1-棕櫚酰基-2-油?；?sn-甘油-3-磷酸膽堿”)。還是在一個(gè)更優(yōu)選的實(shí)施方案中，所說的Apo A-I MilanoPOPC復(fù)合體包含重量比約1∶1的Apo A-IMilanoPOPC。在一個(gè)最優(yōu)選的實(shí)施方案中，所說的Apo A-I MilanoPOPC復(fù)合體是一種藥物制劑。所說的Apo A-I MilanoPOPC復(fù)合體被稱為ETC-216。
包含Apo A-I Milano和脂質(zhì)的復(fù)合體可以包含可有效治療或預(yù)防急性冠狀動脈綜合征的任何數(shù)量的脂質(zhì)(優(yōu)選磷脂)和任何數(shù)量的ApoA-I Milano。在某些實(shí)施方案中，該Apo A-I Milano可以包含重量比為約1∶約1的Apo A-I Milano和磷脂的復(fù)合體。但是，該Apo A-IMilano可以包含具有其它磷脂Apo A-I Milano比例如約100∶1、約10∶1、約5∶1、約3∶1、約2∶1、約1∶1、約1∶2、約1∶3、約1∶5、約1∶10和約1∶100(蛋白重量/脂質(zhì)重量)的復(fù)合體。優(yōu)選用約1∶0.5至約1∶3(蛋白重量/脂質(zhì)重量)，更優(yōu)選約1∶0.8至約1∶1.2(蛋白重量/脂質(zhì)重量)的比例來制備最同質(zhì)的群體和制備穩(wěn)定和可再現(xiàn)的批次。在一個(gè)更優(yōu)選的實(shí)施方案中，Apo A-I Milano與磷脂的比例為1∶0.95(蛋白重量/脂質(zhì)比例)。
可用于本發(fā)明方法的另外的脂質(zhì)是本領(lǐng)域技術(shù)人員眾所周知的并且在許多眾所周知的資料中對其進(jìn)行了列舉，所說的資料例如McCutcheon′s清潔劑和乳化劑以及McCutcheon′s的功能性材料，Allured Publishing Co.，Ridgewood，N.J.，其在這里都被引入作為參考。
通常希望所說的脂質(zhì)在37℃、35℃、或32℃下是液晶態(tài)。液晶態(tài)中的脂質(zhì)通?？梢员饶z態(tài)的脂質(zhì)更有效地接受膽固醇。因?yàn)閭€(gè)體的體內(nèi)溫度通常為約37℃，所以在37℃下為液晶態(tài)的脂質(zhì)在治療期間通常為液晶態(tài)。
5.6.脂質(zhì)復(fù)合體的制備所說的Apo A-I Milano脂質(zhì)復(fù)合體可以用本領(lǐng)域技術(shù)人員眾所周知的方法來進(jìn)行制備。在一些情況中，希望在給藥前將脂質(zhì)與Apo A-IMilano進(jìn)行混合。脂質(zhì)可以是溶液形式或者用標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)如勻化、聲處理或擠出形成的脂質(zhì)體或乳劑形式。通常用tip超聲波儀如Bransontip超聲波儀在冰浴上來進(jìn)行聲處理。通常將混懸液進(jìn)行幾次聲處理循環(huán)?？梢杂蒙锬D出機(jī)，如Lipex Biomembrane ExtruderTM(LipexBiomembrane Extruder，Inc.Vancouver，加拿大)來進(jìn)行擠出。擠出濾器中確定的孔徑可以產(chǎn)生特定大小的單層脂質(zhì)體囊。還可以通過將其由不對稱的陶瓷濾器，如通過商業(yè)途徑得自Norton Company，Worcester Mass的Ceraflow MicrofilterTM或者通過聚碳酸酯濾器或本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的其它類型的聚合材料(即塑料)擠出來形成脂質(zhì)體。
Apo A-I Milano脂質(zhì)復(fù)合體可以被制備成許多形式，非限制性地包括囊泡、脂質(zhì)體或脂蛋白體。可以用許多本領(lǐng)域技術(shù)人員眾所周知的方法來制備Apo A-I Milano脂質(zhì)復(fù)合體?？梢杂迷S多可獲得的技術(shù)來制備脂質(zhì)體或脂蛋白體。例如，可以將Apo A-I Milano與適宜的脂質(zhì)一起超聲(使用一種浴或探針超聲波儀)來形成脂質(zhì)復(fù)合體。在某些實(shí)施方案中，可以將Apo A-I Milano與預(yù)先形成的脂質(zhì)囊結(jié)合到一起，從而自發(fā)形成載脂蛋白脂質(zhì)復(fù)合體。在另一實(shí)施方案中，還可以用清潔劑透析法來制備Apo A-I Milano；例如，可以對Apo A-IMilano、脂質(zhì)和清潔劑如膽酸鹽的混合物透析以除去所說的清潔劑，然后將其重組以制備所說的脂質(zhì)復(fù)合體。(見，例如，Jonas等人，1986，Methods Enzymol.128，553-82)。
在另一些實(shí)施方案中，可以用US專利6,287,590和6,455,088所述的共冷凍干燥來制備所說的脂質(zhì)復(fù)合體，兩篇專利的內(nèi)容在這里都被全部引入作為參考。在例如US專利6,004,925、6,037,323和6,046,166(其在這里都被全部引入作為參考)中公開了其它方法。制備Apo A-I Milano脂質(zhì)復(fù)合體的其它方法對于本領(lǐng)域技術(shù)人員而言將是顯而易見的。
在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，所說的脂質(zhì)復(fù)合體是通過勻化來進(jìn)行制備的。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，當(dāng)用注射用水將重組Apo A-I Milano稀釋至15mg/ml的濃度時(shí)開始形成Apo A-I Milano脂質(zhì)復(fù)合體。向其中加入磷酸鈉至9-15mM磷酸鹽的終濃度并將其pH調(diào)至約7.0至約7.8。向其中加入甘露醇至約0.8％至約1％甘露醇(w/v)的終濃度。然后，向其中加入POPC從而得到一種約1∶0.95(蛋白重量/脂質(zhì)重量)的Apo A-I Milano二聚體POPC混合物。在將其溫度維持在37℃至43℃之間時(shí)用高架螺旋槳和Ultra Turrax將該混合物在5000rpm下攪拌約20分鐘。在將其溫度維持在32℃至43℃之間的同時(shí)用串聯(lián)熱交換器(Avestin，Inc.)將飼料容器在300rpm下連續(xù)攪拌。首先，在50MPa(7250psi)下勻化30分鐘，其后，將其壓力維持在80-120MPa(11600-17400psi)下直至用凝膠滲透色譜法在進(jìn)行中進(jìn)行分析時(shí)證明與蛋白標(biāo)準(zhǔn)品之間的％AUC＞70％。該復(fù)合體還可以被制備為10mg/ml、11mg/ml、12mg/ml、13mg/ml和14mg/ml的制劑，其中的重量是蛋白的重量。
5.7.聯(lián)合治療在本發(fā)明的方法中，所說的Apo A-I Milano或脂質(zhì)復(fù)合體或其藥物制劑可以單獨(dú)使用或者與其它干預(yù)聯(lián)合進(jìn)行治療。該類療法非限制性地包括與其它藥物同時(shí)或順序給藥。
在某些實(shí)施方案中，可以將本發(fā)明的方法和制劑與其它藥物聯(lián)用從而完成這里所提供的方法。共同給藥的其它藥物可用于治療、預(yù)防或改善并發(fā)的疾病、情況、病癥或癥狀，例如用抗心律失常藥來治療共存的心律失常。在某些實(shí)施方案中，所說的方法提供了用于治療或預(yù)防伴有疼痛的急性冠狀動脈綜合征的共同給藥。
如上所述的那樣，用于包括心肌梗死、心絞痛和急性冠狀動脈綜合征在內(nèi)的局部缺血性事件的常規(guī)療法不是靶向于破裂或不穩(wěn)定的動脈粥樣硬化斑塊的基礎(chǔ)病理學(xué)。例如，出現(xiàn)心臟胸部不適或其它局部缺血性癥狀的個(gè)體可以用抗凝藥或抗血栓形成藥來準(zhǔn)備突發(fā)的冠狀血管經(jīng)皮干預(yù)(PCI)，所說的藥物如阿司匹林、氯吡格雷、肝素、依替巴肽或阿昔單抗?？梢杂忙?腎上腺素能阻滯劑(β-阻滯劑)來降低心率。推薦給患有充血性心衰(CHF)或左心室(LV)機(jī)能障礙并發(fā)癥的個(gè)體使用血管緊張素轉(zhuǎn)化酶抑制劑(ACE抑制劑)。對于已經(jīng)從突然的心源性死亡中復(fù)生的個(gè)體而言，推薦給其使用胺碘酮。常常給患者供氧，通常通過面罩或鼻套管來供氧，并對其生命體征密切進(jìn)行監(jiān)測，包括通過脈搏血氧定量法對氧飽和度進(jìn)行監(jiān)測。對于長期治療而言，常常給該個(gè)體使用HMGCoA還原酶抑制劑類的它汀類物質(zhì)(statins)以降低其LDC水平。
例如，可以將該Apo A-I Milano或脂質(zhì)復(fù)合體或其藥物制劑與其它藥學(xué)活性藥物一起給藥，所說的其它藥學(xué)活性藥物非限制性地包括α/β腎上腺素能拮抗劑、腎上腺素能阻斷劑、α-1腎上腺素能拮抗劑、β腎上腺素能拮抗劑、AMP激酶活化劑、血管緊張素轉(zhuǎn)化酶(ACE)抑制劑、血管緊張素II受體拮抗劑、鈣通道阻滯劑、抗心律失常藥、血管舒張藥、硝酸鹽類、血管加壓藥、影響肌力藥、利尿劑、抗凝劑、抗血小板聚集藥、血栓溶解劑、治療糖尿病的藥物、抗氧劑、抗炎劑、膽汁酸螯合劑、它汀類、膽固醇酯轉(zhuǎn)移蛋白(CETP)抑制劑、膽固醇還原劑/脂質(zhì)調(diào)節(jié)劑、阻斷花生四烯酸轉(zhuǎn)化的藥物、雌激素替代療法、脂肪酸類似物、脂肪酸合成抑制劑、貝特類物質(zhì)(fibrates)、組氨酸、煙酸衍生物、過氧化物酶體增殖子活化劑受體激動劑或拮抗劑、脂肪酸氧化抑制劑、沙利度胺或噻唑烷二酮類(Drug Facts andComparisons，每月更新，2003年1月，Wolters Kluwer Company，St.Louis，MO；Physicians Desk Reference(第56版，2002)MedicalEconomics)。
可以與Apo A-I Milano、其脂質(zhì)復(fù)合體或藥物制劑的益處加和或協(xié)同起效的單獨(dú)或聯(lián)合使用的其它藥物非限制性地包括α/β腎上腺素能拮抗劑(“β-阻滯劑”)如ca rvediol(Coreg)；拉貝洛爾HCl(Normodyne)；腎上腺素能阻斷劑如胍那決爾(Hylorel)；胍乙啶(Ismelin)；利血平、可樂定，(Catapres和Catapres-TTS)；胍法辛(Tenex)；胍那芐(Wytensin)；甲基多巴和甲基多巴乙酯(methyldopate)(Aldomet)；α-1腎上腺素能拮抗劑如多沙唑嗪(Cardura)；哌唑嗪(Minipress)；特拉唑嗪(Hytrin)；和酚妥拉明(Regitine)；β腎上腺素能拮抗劑如索他洛爾(BetapaceAF和Betapace)；噻嗎洛爾(Blocadren)；普萘洛爾(InderalLA和Inderal)；倍他洛爾(Kerlone)；醋丁洛爾(Sectral)；阿替洛爾(Tenormin)；美托洛爾(Lopressor和Toprol-XL)；比索洛爾(Zebata)；卡替洛爾(Cartrol)；艾司洛爾(Brevibloc)；naldolol(Corgard)；噴布洛爾(Levatol)；和吲哚洛爾(Visken)；AMP激酶活化劑如ESP 31015(ETC-1001)；ESP 31084，ESP31085，ESP 15228，ESP 55016和ESP 24232；gemcabene(PD 72953和CI-1027)；和MEDICA 16；血管緊張素轉(zhuǎn)化酶(ACE)抑制劑如喹那普利(Accupril)；貝那普利(Lotensin)；卡托普利(Capoten)；依那普利(Vasotec)；雷米普利(Altace)；福辛普利(Monopril)；莫昔普利(Univasc)；賴諾普利(Prinivil和Zestril)；群多普利(Mavik)、培哚普利(Aceon)；和血管緊張素II受體拮抗劑如candesaartan(Atacand)；依貝沙坦(Avapro)；氯沙坦(Cozaar)；纈沙坦(Divoan)；替米沙坦(Micardis)；依普沙坦(Tevetan)；和奧美沙坦(Benicar)；鈣通道阻滯劑如硝苯地平(Adalat，AdalatCC，Procardia和Procardia XL)；維拉帕米(Calan，CalanSR，Covera-HS，IsoptinSR，Verelan和VerelanPM)；地爾硫卓(Cardizem，CardizemCD和Tiazac)；尼莫地平(Nimotop)；氨氯地平(Norvasc)；非洛地平(Plendil)；尼索地平(Sular)；芐普地爾(Vascor)；依拉地平(DynaCirc)；和尼卡地平(Cardene)；抗心律失常藥如各種奎尼丁類物質(zhì)；普魯卡因酰胺(Pronestyl和Procan)；利多卡因(Xylocaine)；mexilitine(Mexitil)；妥卡尼(Tonocard)；氟卡尼(Tambocor)；普羅帕酮(Rythmol)、莫雷西嗪(Ethmozine)；伊布利特(Covert)；丙吡胺(Norpace)；溴芐胺(Bretylol)；胺碘酮(Cordarone)；腺苷(Adenocard)；多非利特(Tikosyn)；和地高辛(Lanoxin)；血管舒張藥如二氮嗪(HyperstatIV)；肼屈嗪(Apresoline)；非諾多泮(Corolpam)；米諾地爾(Loniten)；和硝普鹽(Nipride)；硝酸鹽類如硝酸異山梨醇酯；(Isordil和Sorbitrate)；單硝酸異山梨醇酯(Imdur，Ismo和Monoket)；硝酸甘油糊(Nitrol)；各種硝酸甘油貼劑；硝酸甘油SL(Nitrostat)、Nitrolingual噴霧；和硝酸甘油IV(Tridil)；血管加壓藥如去甲腎上腺素(Levophed)；和苯福林(Neo-Synephrine)；影響肌力藥如氨力農(nóng)(Inocor)；多巴胺(Intropine)；多巴酚丁胺(Dobutrex)；腎上腺素(Adrenalin)；isoproternol(Isuprel)、米利酮(Primacor)；利尿劑如螺內(nèi)酯(Aldactone)；托塞米(Demadex)；氫氟噻嗪(Diucardin)；氯噻嗪(Diuril)；依他尼酸(Edecrin)；氫氯噻嗪(hydroDIURIL和Microzide)；阿米洛利(Midamor)；氯噻酮(Thalitone和Hygroton)；布美他尼(Bumex)；呋塞米(Lasix)；吲達(dá)胺(Lozol)；美托拉宗(Zaroxolyn)；氨苯蝶啶(Dyrenium)；以及氨苯蝶啶和氫氯噻嗪(Dyazide和Maxzide)的混合物；抗血栓形成藥/抗凝劑/抗血小板藥如比伐盧定(Angiomax)；來匹盧定(Refludan)；各種肝素；達(dá)那肝素(Orgaran)；各種低分子量的肝素；dalteparin(Fragmin)；依諾肝素(Lovenox)；tinzaparin(Innohep)；華法林(Coumadin)；雙香豆素(Dicoumarol)；茴茚二酮(Miradone)；阿司匹林；阿加曲班(Argatroban)；阿昔單抗(Reopro)；依替巴肽(Integrilin)；替羅非班(Aggrastat)；氯吡格雷(Plavix)；噻氯匹定(Ticlid)和雙嘧達(dá)莫(Persantine)；血栓溶解劑如阿替普酶(Activase)；組織纖溶酶原活化劑(TPA)(Activase)；阿尼普酶，APSAC(Eminase)；瑞替普酶，rPA(Retavasae)；鏈激酶，SK(Streptase)；尿激酶(Abbokinase)；治療糖尿病藥如甲福明(Glucophage)；格列吡嗪(Glucotrol)；氯磺丙脲(Diabinese)；醋磺己脲(Dymelor)；妥拉磺脲(Tolinase)；glimepride(Amaryl)；格列本脲(DiaBeta和Micronase)；阿卡波糖(Precose)；米格列醇(Glyset)；repaflinide(Prandin)；那格列奈(Starlix)；羅格列酮(Avandia)；和吡咯列酮(Actos)；抗氧劑和抗炎劑；膽汁酸螯合劑如消膽胺(LoCholest，Prevalite和Questran)；考來替泊(Colestid)；和考來維侖(Welchol)；它汀類物質(zhì)(抑制HMGCoA還原酶的藥物)如rovastatin(Crestor)；氟伐它汀(Lescol)；阿伐它汀(Lipitor)；洛伐它汀(Mevacor)；普伐他汀(Pravachol)；和辛伐它汀(Zocor)；CETP抑制劑；阻斷花生四烯酸轉(zhuǎn)化的藥物雌激素替代療法；脂肪酸類似物如PD 72953、MEDICA 16、ESP 24232、和ESP 31015；脂肪酸合成抑制劑；脂肪酸合成抑制劑；脂肪酸氧化抑制劑，雷諾嗪(Ranexa)；貝特類物質(zhì)如氯貝特(Atromid-S)；吉非羅齊(Lopid)；微粉化非諾貝特膠囊(Tricor)；苯扎貝特和環(huán)丙貝特；組氨酸；煙酸衍生物如煙酸長效釋放片劑(NIaspan)；過氧化物酶體增殖子活化劑受體激動劑和拮抗劑；沙利度胺(Thalomid)和在US專利6,459,003、6,506,799和公開號為20030022865、20030018013、20020077316、以及20030078239的美國專利申請(它們在這里都被引入作為參考)中所述的化合物。
可以與Apo A-I Milano或其脂質(zhì)復(fù)合體或其藥物制劑的有益作用加和或協(xié)同的其它單獨(dú)或聯(lián)用的藥物包括例如抗增生藥如紫杉醇和托泊替康(Brehm等人，2001，Biochemical Pharmacology，61(1)119-127)和抗炎藥如甾族和非甾族抗炎劑(包括環(huán)氧合酶-2(COX-2)抑制劑)。
5.8.藥物制劑本發(fā)明一方面提供了一些通過使用包含Apo A-I Milano的藥物制劑來用于治療、降低或預(yù)防由急性冠狀動脈綜合征造成的損傷的制劑。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，將Apo A-I Milano(Apo A-I Milano)與脂質(zhì)復(fù)合。在一個(gè)更優(yōu)選的實(shí)施方案中，將Apo A-I Milano與POPC復(fù)合。
可以以藥物制劑的形式將Apo A-I Milano或其脂質(zhì)復(fù)合體進(jìn)行給藥。這里所述的藥物制劑包含加入的例如可藥用的稀釋劑、賦形劑、基質(zhì)或載體。如現(xiàn)有技術(shù)中已知的那樣，加入一種或多種稀釋劑、賦形劑、基質(zhì)或載體可以提供適于給藥于個(gè)體的制劑并且其還可提供其它有利性質(zhì)如延長保存期。
該藥物制劑典型地包含可藥用的載體或基質(zhì)?？梢允褂迷S多可藥用的載體或基質(zhì)。這里所述的實(shí)例利用了蔗糖-甘露醇。常常用生理鹽水作為藥用載體或基質(zhì)。其它適宜的載體或基質(zhì)包括葡萄糖、海藻糖、蔗糖、無菌水、進(jìn)行了緩沖的水、0.45％鹽水(半生理鹽水)、和0.3％甘氨酸，并且還可包括用于增強(qiáng)穩(wěn)定性的糖蛋白，如白蛋白?？梢杂帽娝苤某Ｒ?guī)滅菌技術(shù)對這些制劑進(jìn)行滅菌?？梢詫⑺玫乃芤涸跓o菌條件下進(jìn)行包裝以便應(yīng)用或?qū)⑵溥^濾并將其冷凍干燥(凍干)。然后在給藥前將該冷凍干燥制劑與無菌水溶液相結(jié)合。
該藥物制劑還可根據(jù)需要包含可藥用的賦形劑以接近生理學(xué)條件，如pH調(diào)節(jié)劑和緩沖劑，和張度調(diào)節(jié)劑，例如醋酸鈉、乳酸鈉、氯化鈉、氯化鉀、和氯化鈣。可以向其中加入抗菌劑例如苯酚、苯扎氯銨或芐索氯銨以維持產(chǎn)品的無菌性，對用于多劑量胃腸外應(yīng)用的藥物制劑而言尤其如此。在本發(fā)明的制劑中還可以使用混懸液、穩(wěn)定和/或分散劑。
該藥物制劑還可以包含鹽形式的載脂蛋白(Apo A-I Milano)。例如，因?yàn)檫@些蛋白可能包含酸性和/或堿性末端和/或側(cè)鏈，所以藥物制劑中的Apo A-I Milano可以為游離酸或堿形式或者可以為可藥用鹽形式?？伤幱玫柠}可包括能與Apo A-I Milano形成鹽的適宜酸例如無機(jī)酸如鹽酸、氫溴酸、高氯酸、硝酸、硫氰酸、硫酸、磷酸等；和有機(jī)酸如甲酸、醋酸、丙酸、乙醇酸、乳酸、丙酮酸、草酸、丙二酸、琥珀酸、馬來酸、富馬酸、鄰氨基苯甲酸、肉桂酸、萘磺酸、對氨基苯磺酸等。能與Apo A-I Milano形成鹽的適宜堿可包括例如無機(jī)堿如氫氧化鈉、氫氧化銨、氫氧化鉀等；和有機(jī)堿如單-、二-和三-烷基胺(例如三乙胺、二異丙基胺、甲胺、二甲胺等)和任選地被取代的乙醇胺類(例如乙醇胺、二乙醇胺等)。
該藥物制劑可以為適于任何給藥途徑的各種形式，非限制性地包括胃腸外、腸內(nèi)、局部或吸入給藥。胃腸外給藥指的是不通過消化道的任何給藥途徑，非限制性地包括注射給藥(即這里所述的靜脈內(nèi)、肌內(nèi)等)。腸內(nèi)給藥指的是使用消化道、口腔或直腸的任何給藥途徑，非限制性地包括這里所述的片劑、膠囊、口服溶液、混懸液、噴霧劑等。對于本申請的目的而言，本文中的腸內(nèi)給藥還涉及陰道給藥。局部給藥指的是通過皮膚進(jìn)行的任何給藥途徑，非限制性地包括乳膏、軟膏、凝膠和經(jīng)皮貼劑(還可參見Remington′s Pharmaceutical Sciences，第18版，Gennaro等人編輯)Mack Printing Company，Easton，Pennsylvania，1990)。
本發(fā)明的胃腸外藥物制劑可以通過注射例如注射到靜脈(靜脈內(nèi))、動脈(動脈內(nèi))、肌肉(肌內(nèi))內(nèi)、皮膚下(皮下或儲庫制劑)、心包中、冠狀動脈內(nèi)來進(jìn)行給藥?？勺⑸涞乃幬镏苿┛梢允强芍苯咏o藥于心臟、心包或冠狀動脈內(nèi)的適宜藥用的制劑。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，該藥物制劑被輸入到個(gè)體的外周血管中，例如被輸入到手臂或肘前窩處的血管中。
可注射的藥物制劑可以是無菌的位于水性或油性基質(zhì)中的混懸液、溶液或乳劑。注射用制劑可以以單位劑型形式存在，例如存在于安瓿中或多劑量容器中，并且可以包含所加入的防腐劑。胃腸外藥物制劑優(yōu)選的緩沖劑有磷酸鹽、枸櫞酸鹽和醋酸鹽。
在另一些實(shí)施方案中，該藥物制劑可以為在使用前用適宜基質(zhì)重組的粉末形式，所說的適宜基質(zhì)非限制性地包括無菌無熱源的水、鹽水或葡萄糖。為此，可以如上所述的那樣根據(jù)適宜的情況將Apo A-IMilano冷凍干燥或者將其與脂質(zhì)一起冷凍干燥。在另一實(shí)施方案中，該藥物制劑可以以單位劑型形式被供給并在使用前被重組。
對于長期傳遞而言，該藥物制劑可以以儲庫制劑的形式被提供，用于通過植入；例如通過皮下、真皮內(nèi)、或肌內(nèi)注射被給藥。因此，例如，可以用適宜的聚合或疏水性材料來對該藥物制劑進(jìn)行制備(例如將其制備為位于可接受油中的乳劑形式)或者用離子交換樹脂對其進(jìn)行配制，或者將其制備成微溶的衍生物；例如Apo A-I Milano微溶的鹽形式或Apo A-I Milano脂質(zhì)復(fù)合體。
在另一些實(shí)施方案中，該藥物制劑是一種被制造為可以緩慢釋放活性成分進(jìn)行經(jīng)皮吸收的粘著的圓盤或貼劑形式的經(jīng)皮傳遞系統(tǒng)。在這種實(shí)施方案中，可以用滲透促進(jìn)劑來促進(jìn)Apo A-I Milano的經(jīng)皮滲透。在另一實(shí)施方案中，該經(jīng)皮藥物制劑還可包含用于心絞痛患者的硝酸甘油。
對于吸入給藥而言，該藥物制劑可以通過氣霧劑噴霧由加壓包裝或使用適宜推進(jìn)劑例如二氯二氟甲烷、三氯氟甲烷、二氯四氟乙烷、二氧化碳或其它適宜氣體的霧化器被傳遞。在加壓氣霧劑的情況中，可以通過提供一種傳遞計(jì)量數(shù)量的閥，例如計(jì)量劑量的吸入器來確定該劑量單位。例如用于吸入器或吹入器的明膠膠囊和藥筒可被制備成包含Apo A-I Milano和適宜粉末基質(zhì)如乳糖或淀粉的粉末混合物。
如果需要的話，該制劑可以存在于包含一種或多種含有Apo A-IMilano藥物制劑的單位劑型的包裝或分配裝置中。該包裝例如可包括金屬或塑料箔，例如水皰眼包裝。所說的包裝或分配裝置可以伴有用于說明如何進(jìn)行給藥的說明或標(biāo)簽。
在某些實(shí)施方案中，Apo AI-M or Apo A-I Milano脂質(zhì)復(fù)合體的藥物制劑可包含濃度足以對需要其的個(gè)體進(jìn)行治療的Apo A-IMilano。在某些實(shí)施方案中，Apo A-I Milano或Apo A-I Milano脂質(zhì)復(fù)合體的藥物制劑可包含濃度為約5mg/ml至約50mg/ml的Apo A-IMilano。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，該制劑包含的Apo A-I Milano濃度為約10mg/ml至約20mg/ml。在一個(gè)更優(yōu)選的實(shí)施方案中，該制劑包含的Apo A-I Milano濃度為約13mg/ml至約16mg/ml?？梢杂帽绢I(lǐng)域技術(shù)人員已知的任何適宜技術(shù)來確定Apo A-I Milano的濃度。在某些實(shí)施方案中，用分子排阻高效液相色譜法(SE-HPLC)來確定Apo A-IMilano的濃度。
在某些實(shí)施方案中，ApoAI-M或Apo A-I Milano脂質(zhì)復(fù)合體的藥物制劑可包含濃度足以與Apo A-I Milano形成復(fù)合體的脂質(zhì)。在某些實(shí)施方案中，該脂質(zhì)是磷脂。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，該脂質(zhì)是POPC。在某些實(shí)施方案中，Apo A-I Milano或Apo A-I Milano脂質(zhì)復(fù)合體的藥物制劑可包含濃度為約1mg/ml至約50mg/ml的POPC。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，這些制劑中POPC的濃度為約5mg/ml至約25mg/ml。在一個(gè)更優(yōu)選的實(shí)施方案中，該制劑中POPC的濃度為約10mg/ml至約20mg/ml。在一個(gè)更優(yōu)選的實(shí)施方案中，制劑的POPC濃度為約11mg/ml至約17mg/ml?？梢杂帽绢I(lǐng)域技術(shù)人員已知的任何適宜技術(shù)來確定POPC的濃度。在某些實(shí)施方案中，用高效液相色譜法來確定POPC的濃度。
在優(yōu)選的實(shí)施方案中，Apo A-I Milano脂質(zhì)復(fù)合體的藥物制劑包含數(shù)量足以制備適宜藥用的Apo A-I Milano或Apo A-I Milano脂質(zhì)復(fù)合體制劑的蔗糖。在某些實(shí)施方案中，該藥物制劑包含約0.5％至約20％的蔗糖。在某些實(shí)施方案中，該藥物制劑包含約3％至約12％的蔗糖。在某些實(shí)施方案中，該藥物制劑包含約5％至約7％的蔗糖。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，該藥物制劑包含約6.0％至約6.4％的蔗糖。在一個(gè)最優(yōu)選的實(shí)施方案中，該藥物制劑包含6.2％的蔗糖。
在優(yōu)選的實(shí)施方案中，Apo A-I Milano脂質(zhì)復(fù)合體的藥物制劑包含數(shù)量足以制備適宜藥用的Apo A-I Milano或Apo A-I Milano脂質(zhì)復(fù)合體制劑的甘露醇。在某些實(shí)施方案中，該藥物制劑包含約0.01％至約5％的甘露醇。在某些實(shí)施方案中，該藥物制劑包含約0.1％至約3％的甘露醇。在某些實(shí)施方案中，該藥物制劑包含約0.5％至約2％的蔗糖。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，該藥物制劑包含約0.8％至約1％的甘露醇。在一個(gè)最優(yōu)選的實(shí)施方案中，該藥物制劑包含0.9％的甘露醇。
在某些實(shí)施方案中，Apo A-I Milano脂質(zhì)復(fù)合體的藥物制劑包含數(shù)量足以制備適宜藥用的Apo A-I Milano或Apo A-I Milano脂質(zhì)復(fù)合體制劑的緩沖劑。在某些實(shí)施方案中，該藥物制劑包含磷酸鹽緩沖劑。在某些實(shí)施方案中，緩沖劑濃度為約3mM至約25mM。在某些實(shí)施方案中，緩沖劑濃度為約5mM至約20mM。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，緩沖劑濃度為約8mM至約15mM。在某些實(shí)施方案中，向其中加入適宜的緩沖劑以將藥物制劑的pH調(diào)節(jié)至適于給藥于個(gè)體的范圍內(nèi)。在某些實(shí)施方案中，該藥物制劑具有約6.8至約7.8的pH。在某些實(shí)施方案中，該藥物制劑具有約7.0至約7.8的pH。在某些實(shí)施方案中，該藥物制劑具有約7.2至約7.5的pH。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，該藥物制劑具有約7.5的pH。
在某些實(shí)施方案中，Apo A-I Milano脂質(zhì)復(fù)合體的藥物制劑具有適于給藥于個(gè)體的重量摩爾滲透壓濃度。在某些實(shí)施方案中，該制劑的重量摩爾滲透壓濃度為約200至約400mOsm。在某些實(shí)施方案中，該藥物制劑的重量摩爾滲透壓濃度為約220至約380mOsm。在某些實(shí)施方案中，該藥物制劑的重量摩爾滲透壓濃度為約260mOsm至約340mOsm。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，該藥物制劑的重量摩爾滲透壓濃度為約280mOsm至約320mOsm。在一個(gè)最優(yōu)選的實(shí)施方案中，該藥物制劑的重量摩爾滲透壓濃度為約290mOsm。
本發(fā)明的制劑提供了具有使得可以給藥于個(gè)體的足夠純的Apo A-IMilano脂質(zhì)復(fù)合體。在某些實(shí)施方案中，該藥物制劑以約98％或更高、約96％或更高、約95％或更高、約93％或更高、約91％或更高或約90％或更高的純度包含Apo A-I Milano。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，Apo A-I Milano的純度為約90％或更高?？梢杂帽绢I(lǐng)域技術(shù)人員已知的任何適宜技術(shù)來確定Apo A-I Milano的純度。在某些實(shí)施方案中，可以用分子排阻HPLC來確定Apo A-I Milano的純度。
本發(fā)明的制劑提供了一種具有使得可以給藥于個(gè)體的足夠純的POPC的Apo A-I Milano脂質(zhì)復(fù)合體。在某些實(shí)施方案中，該藥物制劑以約98％或更高、約96％或更高、約95％或更高、約93％或更高、約91％或更高或約90％或更高的純度包含POPC。在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，POPC的純度高于約90％?？梢杂帽绢I(lǐng)域技術(shù)人員已知的任何適宜技術(shù)來確定POPC的純度。在某些實(shí)施方案中，可以用HPLC來確定POPC的純度。
在某些優(yōu)選的實(shí)施方案中，該Apo A-I Milano脂質(zhì)復(fù)合體具有約10％或更低、約8％或更低、約6％或更低、約4％或更低、約2％或更低、約1％或低于氧化亞鐵/二甲苯酚橙色分析(Jiang，等人，1992，Anal.Biochem 202384-389)的檢測限的過氧化氫脂質(zhì)數(shù)量。在某些實(shí)施方案中，在用凝膠滲透色譜法測定時(shí)，該Apo A-IMPOPC復(fù)合體具有高于85％的純度(以總峰面積％的形式測定的)。在某些實(shí)施方案中，該制劑幾乎沒有或沒有內(nèi)毒素。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，該制劑的內(nèi)毒素＜0.04EU/mg Apo A-I Milano。
在某些實(shí)施方案中，在用不透光度進(jìn)行測定時(shí)，該制劑粒度高于10μm的微粒的數(shù)量為每個(gè)50mL的小瓶＜約6,000個(gè)。在某些實(shí)施方案中，在用不透光度進(jìn)行測定時(shí)，高于25μm的微粒的數(shù)量為每個(gè)50mL的小瓶＜約600個(gè)。
在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，該Apo A-I Milano脂質(zhì)復(fù)合體藥物制劑是通過用注射用水將rApo A-I Milano稀釋至15mg/ml的濃度來進(jìn)行制備的。向其中加入磷酸鈉至9-15mM磷酸鹽的終濃度并且將其pH調(diào)至約7.0至約7.8。向其中加入甘露醇至約0.8％至約1％的甘露醇(w/v)濃度。然后，向其中加入POPC，從而使得Apo A-I Milano二聚物與POPC的比例為1∶0.95(蛋白重量/脂質(zhì)重量)。在將其溫度維持在37℃至43℃的同時(shí)，用高架螺旋槳和Ultra Turrax在5000rpm下將該混合物攪拌約20分鐘。在將其溫度維持在32℃至43℃之間的同時(shí)用串聯(lián)熱交換器(Avestin，Inc.)將飼料容器在300rpm下連續(xù)攪拌。首先，在50MPa(7250psi)下勻化30分鐘，其后，將其壓力維持在80-120MPa(11600-17400psi)下直至用凝膠滲透色譜法在進(jìn)行中進(jìn)行分析時(shí)證明與蛋白標(biāo)準(zhǔn)品之間的％AUC＞70％。然后，通過加入6.0％至6.4％的蔗糖來將該復(fù)合體的重量摩爾滲透壓濃度調(diào)節(jié)至約。然后，通過用0.22μM濾器過濾來對該Apo A-I MilanoPOPC復(fù)合體的藥物制劑進(jìn)行滅菌。
在另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，該藥物制劑包含約12至約18mg/ml重組的Apo A-I Milano、約11至約17mg/ml 1-棕櫚酰-2-油酰基-sn-甘油-3-磷酸膽堿(pH7.4)、6.2％的蔗糖和0.9％的甘露醇，其重量摩爾滲透壓濃度為約280mOsm至約320mOsm。該藥物制劑具有純度為約90％的rAPO A-I-M、純度為約97％的POPC。在某些實(shí)施方案中，沒有任何一種雜質(zhì)的純度高于約2％。
該藥物制劑可以被冷凍儲存(約-15℃至約-25℃)。在某些實(shí)施方案中，該制劑可以是冷溶液、被冷凍的溶液或被冷凍干燥的溶液。優(yōu)選地在給藥于個(gè)體前將該類制劑解凍并使之加溫至室溫。建議溫和解凍和加溫以避免蛋白變性。
在另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，該制劑位于約2mL至約250mL，優(yōu)選約10mL至約100mL，最優(yōu)選約50mL的無菌玻璃小瓶中，所說的小瓶包含含有Apo A-I Milano磷脂復(fù)合體的藥物制劑。在某些實(shí)施方案中，該藥物制劑以每個(gè)小瓶約39至41ml的最終填充體積包含約10mg/mL至約15mg/mL的Apo A-I Milano磷脂復(fù)合體。Apo A-IMilano磷脂復(fù)合體的數(shù)量可以為每個(gè)50ml的小瓶約500mg至750mg。
該藥物制劑可用于單獨(dú)、一次應(yīng)用或者可如上所述那樣包含抗菌劑，從而使得該藥物制劑適于多次應(yīng)用，例如一種多次應(yīng)用小瓶。在某些實(shí)施方案中，該藥物制劑可以是應(yīng)用單位包裝。正如本領(lǐng)域技術(shù)人員公知的那樣，應(yīng)用單位包裝是一種標(biāo)明由提供健康護(hù)理的人直接分配的具有方便的處方大小的患者可以容易應(yīng)用的單位。應(yīng)用單位包裝包含對于給定適應(yīng)癥而言典型治療時(shí)間間隔和持續(xù)時(shí)間所必需數(shù)量的藥物制劑。本發(fā)明的方法和制劑提供了包含以15mg/kg的劑量每周給藥一次給藥5周對平均尺度的成年男性或女性進(jìn)行治療時(shí)足夠的Apo A-I Milano磷脂復(fù)合體數(shù)量的藥物制劑的應(yīng)用單位包裝。在一個(gè)實(shí)施方案中，該應(yīng)用單位包裝包含含有數(shù)量足以以45mg/kg的劑量每周治療一次對平均尺度的成人個(gè)體治療6周的Apo A-I Milano磷脂復(fù)合體的藥物制劑。對本領(lǐng)域技術(shù)人員顯而易見的是這里所述的劑量是以個(gè)體的體重為基礎(chǔ)的。
可以給該藥物制劑貼標(biāo)簽并且其可具有用于確定包含于其中的制劑和在心血管和血管病癥、急性冠狀動脈綜合征、局部缺血性病癥的治療和預(yù)防以及用于對斑塊進(jìn)行穩(wěn)定時(shí)對提供健康護(hù)理的人和個(gè)體有用的其它信息的伴隨標(biāo)簽，所說的其它信息非限制性地包括使用說明、劑量、給藥間隔、持續(xù)時(shí)間、適應(yīng)癥、禁忌癥、警告、預(yù)防措施、處理和儲存說明等。
在另一些實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了用于治療或預(yù)防心血管和血管病癥、急性冠狀動脈綜合征、局部缺血性病癥和用于穩(wěn)定斑塊的試劑盒。該試劑盒包含一種或多種Apo A-I Milano或Apo A-I Milano脂質(zhì)復(fù)合體或其藥物制劑的有效劑量，還具有一種標(biāo)簽或貼標(biāo)簽，在所說的標(biāo)簽上表明了根據(jù)本發(fā)明的方法將Apo A-I Milano或Apo A-IMilano脂質(zhì)復(fù)合體或其藥物制劑用于治療或預(yù)防急性冠狀動脈綜合征。在某些實(shí)施方案中，所說的試劑盒可包含用于進(jìn)行所說方法的組分，如用于傳遞Apo A-I Milano或Apo A-I Milano脂質(zhì)復(fù)合體或其藥物制劑的裝置和用于對這些裝置安全進(jìn)行處理的組分，例如鋒利的(sharps)容器。在某些實(shí)施方案中，所說的試劑盒在預(yù)填充的注射器、單位劑量或應(yīng)用單位包裝中包含ApoA-I Milano或Apo A-I Milano脂質(zhì)復(fù)合體或其藥物制劑。
6.實(shí)施例通過參考下面非限制性的實(shí)施例可以進(jìn)一步理解本發(fā)明。
6.1.實(shí)施例1ETC-216的耐受性本實(shí)施例在健康志愿者中證明了ETC-216的安全性和耐受性。
進(jìn)行一種雙盲安慰劑對照研究來確定Apo A-I Milano和磷脂的安全性和耐受性。以1∶1的重量比將Apo A-I Milano與磷脂(POPC)復(fù)合，其被稱為ETC-216。該研究用健康男性志愿者對ETC-216單次靜脈內(nèi)輸入的五個(gè)逐步增加的劑量的安全性和耐受性進(jìn)行了評估并用健康的女性志愿者在兩個(gè)不同劑量下對安全性和耐受性進(jìn)行了評估。在研究前所有的志愿者都表示同意進(jìn)行研究。
用ETC-216對年齡為18-50歲的32名健康志愿者(“個(gè)體”)進(jìn)行靜脈內(nèi)給藥。對男性個(gè)體而言，給藥劑量高至并包括100mg/kg。對女性個(gè)體而言，給藥劑量高至并包括50mg/kg。個(gè)體的性別、劑量和速率如下面的表1所示。
表1.
不良事件監(jiān)測包括臨床實(shí)驗(yàn)室評估、醫(yī)生檢查和生命體征。在給藥后對個(gè)體監(jiān)測27天。
本研究的32名個(gè)體中有20名報(bào)告了不良事件，這些不良事件都是輕微至中度的不良事件。認(rèn)為在兩名或多名個(gè)體中發(fā)生的不良作用可能與研究藥物的治療有關(guān)。經(jīng)歷這些不良事件個(gè)體的這些不良事件和數(shù)目為淋巴細(xì)胞減少(11名個(gè)體)、白細(xì)胞增多(10名個(gè)體)、惡心(6名個(gè)體)、頭痛和腹瀉(4名個(gè)體)、嘔吐(3名個(gè)體)以及腹痛和高甘油三酯血癥(2名個(gè)體)。大多數(shù)可能相關(guān)的不利事件(胃腸和白細(xì)胞病癥)是男性個(gè)體在輸入50mg/kg或100mg/kg ETC-216后報(bào)道的。認(rèn)為用安慰劑進(jìn)行處理的個(gè)體中發(fā)生的兩種不利事件(低蛋白血癥和肝功能異常)可能與研究治療有關(guān)。沒有死亡、嚴(yán)重的不利事件或由于不利事件而導(dǎo)致撤出。
如圖1所示，在以15mg/kg和更高劑量給予ETC-216的單劑量后30分鐘男性個(gè)體體內(nèi)HDL未酯化的膽固醇血清水平升高。
在輸入前到輸入后高至27天內(nèi)對血清中Apo A-I Milano的抗體滴度進(jìn)行分析。在單劑量給藥后在任何個(gè)體體內(nèi)都沒有顯著的抗體應(yīng)答。
約100小時(shí)的末端半衰期支持了用每7天的給藥方案用人進(jìn)行的初始多劑量研究的基本原理。
這些結(jié)果表明ETC-216在所有的劑量下都是安全的并且可以被良好耐受，而且沒有發(fā)生嚴(yán)重的不利事件。
6.2.實(shí)施例2ETC-16的不同劑量在動脈粥樣硬化消退中的功效本實(shí)施例證明了ETC-21615mg/kg和45mg/kg的劑量在消退患有急性冠脈綜合征個(gè)體的冠狀動脈粥樣硬化中的功效。
這種研究是一種隨機(jī)雙盲安慰劑對照的多劑量研究，其通過用血管內(nèi)超聲進(jìn)行評估對ETC-216對患有急性冠狀動脈綜合征個(gè)體的功效和安全性進(jìn)行了評估。在開始任何特定的研究操作前，所有的個(gè)體都得到了Institutional Review Board(IRB)批準(zhǔn)用于各參與機(jī)構(gòu)的試服志愿書并表示同意。
合格的個(gè)體是這些在進(jìn)行篩選前14天內(nèi)被診斷患有急性冠狀動脈綜合征(不穩(wěn)定心絞痛、非Q波心肌梗死或ST升高的心肌梗死)的個(gè)體并且其被安排進(jìn)行了冠狀動脈血管造影術(shù)和/或冠狀血管經(jīng)皮干預(yù)(PCI)并且在該操作后預(yù)期停留24-小時(shí)。如果主治醫(yī)師認(rèn)為其疾病過程很緊迫和/或認(rèn)為有高風(fēng)險(xiǎn)的急性并發(fā)癥，則將符合這種標(biāo)準(zhǔn)的個(gè)體排除在外。
第一功效終點(diǎn)是用血管內(nèi)超聲(IVUS)進(jìn)行評估的一根目標(biāo)(被成像的)冠狀動脈的30-80mm片段內(nèi)粥樣斑體積百分比的變化(治療終點(diǎn)減預(yù)處理)。陽性結(jié)果被定義為用不包括零的置信區(qū)間(CIs)時(shí)粥樣斑體積百分比的陰性變化。
第二功效終點(diǎn)是總粥樣斑體積和平均最大粥樣斑厚度的平均變化。用IVUS和血管造影術(shù)來確定第二功效終點(diǎn)。對IVUS而言，第二功效終點(diǎn)為1)用目標(biāo)冠狀動脈解剖學(xué)相當(dāng)片段的所有切片的平均斑塊面積測得的總斑塊“體積”的標(biāo)稱變化(Nominal change)(治療終點(diǎn)減預(yù)處理)；2)目標(biāo)冠狀動脈解剖學(xué)相當(dāng)片段的所有切片的平均最大斑塊厚度的標(biāo)稱變化(治療終點(diǎn)減預(yù)處理)；3)最輕微和最嚴(yán)重疾病片段的“體積”a)斑塊區(qū)域百分比最低的基準(zhǔn)(被定義為疾病最輕微的片段)上10mm鄰近切片的片段斑塊“體積”的標(biāo)稱變化(治療終點(diǎn)減預(yù)處理)；b)斑塊區(qū)域百分比最高的基準(zhǔn)(被定義為疾病最嚴(yán)重的片段)上10mm鄰近切片的片段斑塊“體積”的標(biāo)稱變化(治療終點(diǎn)減預(yù)處理)。
血管造影術(shù)的第二功效終點(diǎn)為1)所測量的所有冠狀動脈片段中的平均冠狀動脈管腔直徑；2)各治療亞組中新血管造影損害的數(shù)目；3)在治療結(jié)束時(shí)出現(xiàn)一處或多處新血管造影冠狀動脈損害的個(gè)體的比例；4)預(yù)先存在的損害消退的部位的數(shù)目；5)預(yù)先存在的損害發(fā)展的部位的數(shù)目；6)任何預(yù)先存在的損害處表現(xiàn)出消退的個(gè)體的比例；7)所有預(yù)先存在的損害都表現(xiàn)出“發(fā)展或沒有變化”的個(gè)體的比例；8)所有預(yù)先存在的損害都表現(xiàn)出“消退或沒有變化”的個(gè)體的比例。
IVUS方法的分析如Nissen2001，Am.J.Cardiol.8715A-20A(其在這里被全部引入作為參考)所述。簡單地說，操作者將該IVUS錄像帶數(shù)字化，回顧該pullback并選擇最遠(yuǎn)側(cè)-分支的端點(diǎn)作為開始點(diǎn)來進(jìn)行分析，如圖2(A)所示。隨后，每30幅圖像選擇第30幅圖象進(jìn)行分析，其表示距離恰好為0.5mm的一系列橫截面。最后進(jìn)行分析的橫截面是該序列中最接近冠狀動脈左總干或冠狀動脈右口的圖象(臨近的fiduciary部位)，如圖2(B)-2(D)所示。在隨訪檢查中用相同的界標(biāo)重復(fù)該操作以確保在兩個(gè)時(shí)間點(diǎn)對相同的片段進(jìn)行分析。
進(jìn)行直接的和衍生的IVUS測量。根據(jù)American College ofCardiology and European Society of Cardiology(Mintz等人，2001，J.Am.Coll.Cardiol.371478-92，其在這里被全部引入作為參考)的標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行直接IVUS測量。使用National Institute of HealthImage 1.62(NIH public domain software)，操作者通過用掃描儀測量在IVUS圖象中編碼的1-mm網(wǎng)格標(biāo)記來進(jìn)行校準(zhǔn)。對于各橫截面而言，操作者手動測定面積以描繪血管管腔的前沿和外彈性膜邊界(圖3(A)-3(D))。還可以直接測量最大粥樣斑厚度。之前已經(jīng)對這些方法的精度和再現(xiàn)性進(jìn)行了報(bào)道，證明在校準(zhǔn)后，對于范圍為3.24mm2至27.99mm2的精確鉆孔的Lucite phantoms而言，平均IVUS橫截面積測量在0.5％的實(shí)際大小內(nèi)(Schoenhagen等人，2003，J.AmSoc.Echocardiogr.16277-84，其在這里被全部引入作為參考)。多位觀察者進(jìn)行的測量的變異性表現(xiàn)出的標(biāo)準(zhǔn)偏差為2.9％。
衍生的I VUS測量包括以外彈性膜(EEM)面積減去管腔面積的形式來計(jì)算粥樣斑面積。因?yàn)閳D象的橫截面是以0.5-mm的間隔獲得的，所以可以用Simpson法則計(jì)算總粥樣斑體積，其是通過用平均粥樣斑面積乘以單位為毫米的pullback長度來進(jìn)行計(jì)算的。粥樣斑體積百分比被計(jì)算為(∑粥樣斑面積/∑EEM面積)×100(見，例如Nissen等人，2003，JAMA 2902292-2300)。在Cleveland Clinic Foundation在中心實(shí)驗(yàn)室用被設(shè)計(jì)用來降低測量變異性的標(biāo)準(zhǔn)方法來對冠狀動脈血管造影術(shù)進(jìn)行分析。通過將血管造影導(dǎo)管尖端的直徑與其已知尺寸進(jìn)行比較來對該系統(tǒng)進(jìn)行校準(zhǔn)。血管造影的終點(diǎn)是隨后平均冠狀動脈管腔直徑與基準(zhǔn)相比的變化。
57名個(gè)體每個(gè)第7天(±1天)隨機(jī)接受15mg/kg ETC-216、45mg/kgETC-216或體積相配的安慰劑，最多高至5次靜脈內(nèi)給藥。以2∶2∶1的比例將個(gè)體隨機(jī)分為15mg/kg ETC-216、45mg/kg ETC-216或安慰劑組。57名個(gè)體都完成了研究。
在約50分鐘內(nèi)靜脈內(nèi)輸入15mg/kg的劑量并且在約150分鐘內(nèi)靜脈內(nèi)輸入45mg/kg的劑量。由于出現(xiàn)了惡心，所以對于一些個(gè)體而言增加輸入速率。所有的靜脈內(nèi)輸入都是外周給予的。
用一些臨床實(shí)驗(yàn)室參數(shù)對個(gè)體進(jìn)行監(jiān)測，所說的參數(shù)包括ETC-216的抗體水平、身體檢查、生命體征、心電圖(EKGs)和臨床不利事件的頻率和強(qiáng)度。每名患者進(jìn)行兩次血管造影術(shù)和IVUS。第一次是在完成最初的篩選檢查后，第二次是在給予最后一次研究藥物約2周(±7天)進(jìn)行。
第一功效終點(diǎn)獲得的陽性結(jié)果如下面的表2所述。在聯(lián)合治療組(患者接受15mg/kg或45mg/kg的ETC-216)，粥樣斑體積百分比變化的均值(標(biāo)準(zhǔn)偏差或SD)為-1.06％(3.17％)。中值為-0.81％(95％CI，-1.53％至-0.34％；與基準(zhǔn)相比p＝0.02。安慰劑組的該均值(SD)變化為0.14％(3.09％)。中值為0.03％(95％CI，-1.11％至1.43％；與基準(zhǔn)相比p-0.97)表2.目標(biāo)冠狀動脈片段中粥樣斑體積百分比
1標(biāo)準(zhǔn)偏差。
2Interquartile范圍。
3置信區(qū)間。
4Wilcoxon符號秩檢驗(yàn)的組內(nèi)比較P值。對于ETC-216的組間比較而言，將Apo A-I MilanoPOPC聯(lián)合與安慰劑進(jìn)行比較，該比較是由與基準(zhǔn)相比改變的秩的協(xié)方差進(jìn)行分析進(jìn)行的，用基準(zhǔn)值作為共變量，p＝0.029。
5預(yù)定(Prespecified)的第一功效終點(diǎn)。
對第二終點(diǎn)而言，也獲得了一些陽性結(jié)果，結(jié)果如下面的表3所示。與基準(zhǔn)相比，聯(lián)合治療組總粥樣斑體積的均值(SD)變化為-14.1mm3(39.5mm3；中值為-13.3mm3；95％CI，-20.7至-7.2；p＜0.001)。對于安慰劑組而言，相應(yīng)的變化為-2.9mm3(23.3mm3)。該中值為-0.2mm3(23.3mm3)。該中值為-0.2mm3；95％CI，-8.6至8.2；p＝0.97)。聯(lián)合治療組相對于基準(zhǔn)而言最大粥樣斑厚度的變化均值(SD)為-0.042mm(0.080mm)。該中值為-0.035mm(95％CI，-0.058至-0.020；p＜0.002)。對安慰劑組而言，相應(yīng)的變化為-0.008mm(0.061mm；中值-0.009(95％CI，-0.035至0.026；p＝0.83)。見下面的表4。
表3.目標(biāo)冠狀動脈片段中的總粥樣斑體積
1Wilcoxon符號秩檢驗(yàn)的組內(nèi)比較P值。對于ETC-216的組間比較而言，將Apo A-I MilanoPOPC聯(lián)合與安慰劑進(jìn)行比較，該比較是由與基準(zhǔn)相比改變的秩的協(xié)方差進(jìn)行分析進(jìn)行的，用基準(zhǔn)值作為covariate，p＝0.018。
2預(yù)定(Prespecified)的第一功效終點(diǎn)。
表4.目標(biāo)冠狀動脈片段內(nèi)的平均最大粥樣斑厚度
1Wilcoxon符號秩檢驗(yàn)的組內(nèi)比較P值。對于ETC-216的組間比較而言，將Apo A-I MilanoPOPC聯(lián)合與安慰劑進(jìn)行比較，該比較是由與基準(zhǔn)相比改變的秩的協(xié)方差進(jìn)行分析進(jìn)行的，用基準(zhǔn)值作為covariate，p＝0.023。
2預(yù)定(Prespecified)的第一功效終點(diǎn)。
這些結(jié)果表明ETC-216可有效降低斑塊大小。在兩個(gè)治療組都證明動脈粥樣硬化發(fā)生了統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著的消退。
6.3.實(shí)施例3活體外Langendorff本實(shí)施例證明了ETC-216在再灌注的局部缺血性離體兔心臟中預(yù)防性的心臟保護(hù)作用。在本研究中使用得自Charles River的重約2-3kg的雄性新西蘭白兔。選擇雄性新西蘭白兔作為本研究的適宜試驗(yàn)系統(tǒng)。用局部缺血-再灌注的離體兔心臟作為人心肌梗死模型。在送抵時(shí)，給動物指定獨(dú)特的識別號碼。
根據(jù)University of Michigan Committee on the Use and Careof Animals的指導(dǎo)方針將動物飼養(yǎng)在不銹鋼籠子中。獸醫(yī)護(hù)理是由University of Michigan Unit for the Laboratory Animal Medicine提供的。American Association of Accreditation of LaboratoryAnimal Health Care認(rèn)可了University of Michigan，并且用動物護(hù)理應(yīng)用程序與Guide for the Care and use of Laboratory Animals，DHEW(NIH)Publ.No.86-23中的標(biāo)準(zhǔn)相一致。
ETC-216是重量比為1∶1的重組載脂蛋白A-I Milano/1-棕櫚酰-2-油酰基磷脂酰膽堿復(fù)合體。ETC-216的儲備液在每ml蔗糖甘露醇緩沖劑中包含14mg蛋白。因?yàn)檎崽?甘露醇緩沖劑與Krebs-Henseleit緩沖劑不相容并且控制了單獨(dú)使用甘露醇的任何獨(dú)立作用，所以對ETC-216進(jìn)行透析從而得到由2％葡萄糖的4mM磷酸鹽(pH7.4)溶液組成的背景緩沖劑。用Krebs-Henseleit緩沖劑對ETC-216進(jìn)行稀釋，從而使得藥物濃度為0.45mg/ml。相似地對基質(zhì)進(jìn)行稀釋。
劑量選擇是以在Esperion′s人I期單劑量安全性臨床試驗(yàn)中所用劑量的歷史數(shù)據(jù)為基礎(chǔ)的，在所說的試驗(yàn)中將高至100mg/kg的ETC-216給藥于人。對于本方案中所概括的研究而言，0.5mg/ml的濃度大約等于給藥于人的25mg/kg的靜脈內(nèi)劑量。
這些實(shí)驗(yàn)是用Langendorff裝置對兔心臟進(jìn)行灌注來進(jìn)行的。通過頸脫位法使兔子喪失意識并迅速取出其心臟并將其連接到一根套管上以通過主動脈對其進(jìn)行灌注。灌注介質(zhì)由循環(huán)的Krebs-Henseleit緩沖劑(pH7.4，37℃；“KH”)組成，使其與95％ O2/5％ CO2的混合物連續(xù)進(jìn)行接觸并以20-25ml/min的恒定速率對其進(jìn)行傳遞。在該方案中通過與右心房相連的電極使心臟節(jié)奏均勻地跳動。起搏刺激是由實(shí)驗(yàn)室矩形波發(fā)生器(高于生理性起搏10％，持續(xù)時(shí)間為1msec，Grass588，Quincy，MA)傳遞的。向肺動脈中插入SilasticTM管以幫助收集肺動脈流出物(其代表了返回冠狀竇中的冠狀靜脈情況)。將上腔靜脈和下腔靜脈以及肺靜脈結(jié)扎以防止灌注液從該另外斷開的血管流失。將左心室引流、熱敏電阻探針、和乳膠氣球通過左心房插入到其中并將其定位到左心室中。將填充了液體的乳膠氣球與剛性管一起連接到Miller Catheter壓力傳感器中從而使得可以測量左心室形成壓。用蒸餾水?dāng)U大心室內(nèi)的氣球以得到約10mm Hg的初始的左心室末期舒張壓基準(zhǔn)。用與主動脈插管側(cè)枝相連的壓力傳感器來測量冠狀動脈灌注壓。因?yàn)楣跔顒用}灌注速率被維持恒定，所以把冠狀動脈灌注壓的改變作為冠狀動脈阻力變化的指示劑。用與Polyview Software DataAcquisition System相接的多道記錄儀如Grass Polygraph79D(Quincy，MA)來連續(xù)對所有的血液動力學(xué)參數(shù)進(jìn)行監(jiān)測。在實(shí)驗(yàn)期間，通過將心臟裝入到溫度受控的雙腔玻璃室中并使灌注介質(zhì)通過一種熱儲庫和傳遞系統(tǒng)而將心臟溫度維持在37℃。
該實(shí)驗(yàn)操作使用兩個(gè)如下所示的治療組。
組 治療 實(shí)驗(yàn)物質(zhì)濃度(mg/ml)1局部缺血&再灌注基質(zhì)02局部缺血&再灌注ETC-216 0.45如圖5所示那樣對心臟進(jìn)行實(shí)驗(yàn)處理。在誘導(dǎo)全心局部缺血前將離體心臟在含氧量正常(正常氧氣水平)的條件下穩(wěn)定20分鐘。在這時(shí)，在最初10分鐘內(nèi)，使心臟與KH緩沖劑單獨(dú)接觸，然后將其再與包含基質(zhì)(組1)或ETC-216(組2)的KH緩沖劑接觸10分鐘。然后，使心臟經(jīng)歷30分鐘的局部缺血期，然后用包含基質(zhì)(組1)或ETC-216(組2)的KH緩沖液對心臟再灌注60分鐘。通過停止流入到心臟中的灌注液來誘導(dǎo)全心局部缺血，并通過打開泵恢復(fù)最初的流速來完成對心臟的再灌注。
在基準(zhǔn)時(shí)(局部缺血前)所有組都從心臟收集肺靜脈流出物的等分試樣，并且從最初每分鐘到高至每5分鐘收集，和其后在再灌注期間每5分鐘進(jìn)行收集。對流出物的肌酸激酶濃度——一種組織損傷指數(shù)進(jìn)行分析(圖6)。肌酸激酶是由被不可逆損傷的細(xì)胞釋放的細(xì)胞溶質(zhì)酶。連續(xù)對心臟功能進(jìn)行監(jiān)測(圖7)。
進(jìn)行心臟終點(diǎn)測定1-心電圖-心率(節(jié)奏均勻的)以探測是否存在心律失常；2-左心室形成壓(圖8)(數(shù)據(jù)被表示為各組中所示數(shù)目心臟的均值±均值的平均標(biāo)準(zhǔn)誤差)；3-左心室dP/dt4-左心室末期舒張壓(圖9)(數(shù)據(jù)被表示為各組中所示數(shù)目心臟的均值±均值的平均標(biāo)準(zhǔn)誤差)；5-冠狀動脈灌注壓(圖10)(數(shù)據(jù)被表示為各組中所示數(shù)目心臟的均值±均值的平均標(biāo)準(zhǔn)誤差)；6-收集淋巴導(dǎo)液以測定再灌注前和再灌注后的組織肌酸激酶釋放(圖6)在對實(shí)驗(yàn)方案進(jìn)行總結(jié)時(shí)，將從各治療組高至5個(gè)心臟獲得的心臟活組織檢查物立即浸入到液氮中并將其儲存在-80℃下以用其進(jìn)行隨后的過氧化氫脂質(zhì)分析。在對脂質(zhì)過氧化物進(jìn)行分析前將這些勻漿樣品標(biāo)準(zhǔn)化成蛋白含量(圖11)。
在此實(shí)施例中，ETC-216將心臟過氧化氫脂質(zhì)降低了46％。
在完成指定的方案時(shí)，用2.5％戊二醛和1％ LaCl3的0.1M sodiumcalcodylate緩沖劑(pH7.4)將各組的兩個(gè)心臟灌注3分鐘。該趨滲的LaCl3在正常條件下被保留在血管腔系中被束縛到血管壁上并作為血管完整性的指示劑。通過LaCl3向血管外空間中的外滲來表明存在血管損傷。從左心室心肌上取下一些組織樣品并將其切割成一些片段，并在側(cè)面上約1mm進(jìn)行測量。將這些樣品在4℃下在上述緩沖劑中再固定2小時(shí)。其后，將這些樣品在一系列乙醇中脫水并將其植入到EMbed-812(Electron Microscopy Sciences，F(xiàn)t，華盛頓，PA)中。用Reichert超薄切片機(jī)將這些組織團(tuán)(blocs)切片并將其放到formvar-涂覆的銅載網(wǎng)上，然后用4％醋酸雙氧鈾對其進(jìn)行染色。用PhillipsCM-10電子顯微鏡對這些切片進(jìn)行觀察。
用透射電子顯微鏡檢查來對得自各研究組的心肌樣品進(jìn)行檢查。圖象表明基質(zhì)處理的心臟肌節(jié)結(jié)構(gòu)被消滅并且存在一些痙攣區(qū)帶。線粒體顯著膨脹，同時(shí)具有一些斷裂的晶體和趨滲包涵體。在ETC-216治療的心臟中，肌節(jié)結(jié)構(gòu)相對正常并且線粒體顯得相對完整，其僅具有最小程度的膨脹。實(shí)際上不存在收縮帶也與在對照心臟中觀察到的這些情況顯著相反。ETC-216防止收縮區(qū)壞死的能力與觀察到用ETC-216進(jìn)行了預(yù)處理的心臟在再灌注時(shí)沒有表現(xiàn)出LVEDP增加的觀察結(jié)果相一致。收縮帶壞死和LVEDP持續(xù)增加都與細(xì)胞內(nèi)鈣過載增加和不可逆的細(xì)胞損傷有關(guān)。出現(xiàn)Z-帶的肌原纖維模糊和肌纖維結(jié)構(gòu)的破裂是廣泛損害的象征。預(yù)期到的其它形態(tài)學(xué)損害包括線粒體的嵴和基體破裂以及線粒體中大的電子密集體。兩幅顯微照片中的放大因子都是7900x(圖12)。
肌酸激酶濃度分析(圖6)表明在再灌注時(shí)存在酶釋放到靜脈流出物中的快相。與用ETC-216處理的心臟相比，對照心臟(用基質(zhì)處理的心臟)表現(xiàn)出顯著的肌酸激酶釋放。此外，與對照心臟相比，ETC-216處理的心臟的左心室末期舒張壓降低(圖7和9)、左心室形成壓升高(圖8)、冠狀動脈灌注壓降低(圖10)和過氧化氫脂質(zhì)(LHP)降低(圖11)。此外，ETC-216保護(hù)對抗了心肌中的形態(tài)變化(圖12)。這些結(jié)果證明了當(dāng)在局部缺血性事件前被給藥時(shí)ETC-216的心臟保護(hù)作用。
6.4.實(shí)施例4在LAD閉合的再灌注兔心臟中在100mg/kg的劑量下的急性和長期給藥本實(shí)施例證明了ETC-216在局部心肌缺血和再灌注的體內(nèi)模型中的心臟保護(hù)作用。用選擇雄性新西蘭白兔作為本研究的適宜試驗(yàn)系統(tǒng)，因?yàn)檫@種兔子沒有向心臟的側(cè)支血液供應(yīng)，從而使得其不必需使用心肌血流測定。在本研究中，在不同的兔子(通過冠狀動脈結(jié)扎和再灌注而經(jīng)歷了30分鐘的局部心肌缺血)組中使用不同的給藥方案。使用兩種給藥方案。在第一種方案中，用ETC-216作為單一預(yù)處理進(jìn)行了試驗(yàn)，其中就在開始局部缺血前，使心臟與100mg/kg的活性劑進(jìn)行接觸，而在第二個(gè)方案中，進(jìn)行兩次100mg/kg的預(yù)處理，一次在開始局部缺血前一天和一次在開始局部缺血前立即進(jìn)行。這些方案如(圖13)所示。本研究著眼于作為心臟保護(hù)劑的ETC-216在其中使兔心臟局部心肌缺血30分鐘，然后再灌注最少4小時(shí)的體內(nèi)研究中的作用。本實(shí)施例證明了當(dāng)在局部缺血性事件后被給藥時(shí)ETC-216是一種心臟保護(hù)劑。
本研究中所用的方法與University of Michigan Committee on theUse and Care of Animals的指導(dǎo)方針相一致。獸醫(yī)護(hù)理是由University of Michigan Unit for Laboratory Animal Medicine提供的。American Association of Accreditation of LaboratoryAnimal Health Care許可了University of Michigan，并且動物護(hù)理應(yīng)用程序與Guide for the Care and use of Laboratory AnimalsDHEW(NIH)Publ.No.86-23的標(biāo)準(zhǔn)相一致。
在本研究中使用得自Charles River的重約2-3kg的雄性新西蘭白兔。在抵達(dá)時(shí)，給這些動物指定獨(dú)特的識別號碼。通過肌內(nèi)給予甲苯噻嗪(3.0mg/kg)和氯胺酮(35mg/kg)的混合物，然后靜脈內(nèi)注射戊巴比妥鈉(30mg/kg)來將兔子麻醉。通過靜脈內(nèi)注射戊巴比妥鈉(30mg/ml)來維持麻醉。插入膠管管頭的氣管內(nèi)插管，并將動物放到與室內(nèi)空氣通風(fēng)換氣的正氣通氣中。分離出右頸靜脈并對其插管以進(jìn)行ETC-216或匹配體積基質(zhì)的給藥。分離出右頸動脈并將其與MillarTM導(dǎo)管micro-tip壓力傳感器相連，所說的傳感器就被放在主動脈瓣上以監(jiān)測主動脈血壓和獲得壓脈的第一導(dǎo)數(shù)(dP/dt)。在實(shí)驗(yàn)期間對lead II心電圖進(jìn)行監(jiān)測。進(jìn)行左胸廓切開術(shù)和心包切開術(shù)，然后確定左前降支(LAD)冠狀動脈。將一根縫合絲線(3.0；Deknatel，F(xiàn)allRiver，MA)從該動脈下穿過來并將該縫合線的兩端插入到一根短聚乙烯管中。在該縫合線的游離端上施加上拉張力時(shí)在該聚乙烯管上向下的壓力壓縮下面的冠狀動脈，從而閉合了血管和產(chǎn)生了局部心肌缺血。將該閉合維持30分鐘，其后釋放該縫合線上的張力并抽出該聚乙烯管從而使得發(fā)生再灌注。通過在閉合血管分布區(qū)中存在一種區(qū)域和與存在透壁局部心肌缺血(ST-段升高)相一致的心電圖改變來證實(shí)局部心肌缺血。
主要終點(diǎn)測定包括測量梗死大小占左心室的百分比和有風(fēng)險(xiǎn)面積的百分比(圖14和15)。在對該研究進(jìn)行總結(jié)時(shí)，給予被麻醉的兔子肝素(1,000U靜脈內(nèi)給藥)，其后將其安樂死。將心臟切下來，然后將其制備成在Langendorff裝置上用Krebs-Henseleit Buffer緩沖劑以22-24ml/min的恒定速率通過主動脈進(jìn)行灌注。用緩沖劑將這些心臟洗滌10分鐘以確保該組織是清潔的。使45毫升1％氯化三苯基四唑(TTC)在磷酸緩沖劑(pH7.4)中的溶液通過心臟進(jìn)行灌注。TTC用磚紅色在有風(fēng)險(xiǎn)的區(qū)域中區(qū)別出了沒有梗死的心肌，表明存在由于有活力的心肌組織中存在的輔酶對TTC還原所產(chǎn)生的甲 沉淀。缺乏細(xì)胞溶質(zhì)脫氫酶的被不可逆損傷的組織不能形成甲 沉淀并且顯現(xiàn)出淡黃色。在等同于誘導(dǎo)局部心肌缺血過程中被結(jié)扎面積的位置將左前降支(LAD)動脈結(jié)扎。停止灌注泵并通過與主動脈插管相連的側(cè)枝口緩慢注射2ml 0.25％伊文思藍(lán)的溶液。使該染料通過心臟10秒鐘以確保染料相等分布。與有風(fēng)險(xiǎn)的區(qū)域相反，用出現(xiàn)伊文思藍(lán)來區(qū)分沒有出現(xiàn)局部缺血的左心室組織。將心臟從該灌注裝置上取下來并在與垂直軸成將直角的方向上將其切成橫切片。棄去右心室、尖端、和房組織。在透明的醋酸鹽薄片上對各橫切片的兩面進(jìn)行描繪。將該圖象影印并放大。對這些影印本進(jìn)行掃描并將其下載到Adobe PhotoShop(AdobeSystems Inc.，Seattle，WA)中。通過用Adobe Photo Shop Software計(jì)算占據(jù)各面積的象素?cái)?shù)來確定正常左心室(NLV)無風(fēng)險(xiǎn)區(qū)域的面積、有風(fēng)險(xiǎn)區(qū)域的面積、和梗死面積。將有風(fēng)險(xiǎn)的總面積以占左心室百分比的形式進(jìn)行表示。將梗死面積表示為有風(fēng)險(xiǎn)面積(ARR)的百分比(圖14和15)。
用ETC-216(100mg/kg)或等體積的基質(zhì)治療一次(即急性治療)或治療兩次(即長期治療)的兔子左心室有風(fēng)險(xiǎn)區(qū)域的梗死百分比、左心室的梗死百分比、和左心室有風(fēng)險(xiǎn)區(qū)域的百分比。數(shù)據(jù)是均值±均值的平均標(biāo)準(zhǔn)誤差，每組n＝6只動物。圖14中的星號表示與相應(yīng)對照有顯著差異。
進(jìn)行了其它終點(diǎn)測定。可以通過增加或降低心肌的氧利用量來影響最終的梗死面積。心肌氧代償?shù)膬蓚€(gè)重要決定因素是心率和壓力負(fù)荷。心率-收縮壓乘積(心率×平均動脈血壓)提供了心臟心肌氧需求改變的近似值。因此，可以計(jì)算心率-收縮壓乘積來確定觀察到的梗死面積降低是否與該心率-收縮壓乘積改變相關(guān)。在實(shí)驗(yàn)方案中連續(xù)對心率和平均主動脈壓進(jìn)行監(jiān)測并用這些數(shù)據(jù)來計(jì)算本研究中各實(shí)驗(yàn)組在特定時(shí)間點(diǎn)的心率-收縮壓乘積。
與對照相比，在急性和慢性給藥中，在用ETC-216處理的心臟中左心室的風(fēng)險(xiǎn)面積降低，但是，該結(jié)果在統(tǒng)計(jì)學(xué)上不顯著。與對照相比，對急性和長期給藥而言，在用ETC-216處理的心臟中，左心室有風(fēng)險(xiǎn)區(qū)域的梗死百分比和梗死百分比都被顯著降低。這些結(jié)果表明當(dāng)被急性和長期給藥時(shí)，ETC-216都具有心臟保護(hù)作用。
可以對有風(fēng)險(xiǎn)和沒有風(fēng)險(xiǎn)區(qū)域中心肌組織的肌酸激酶活性進(jìn)行比較。該試驗(yàn)的原理是由于NAD等克分子還原成NADH而使得反應(yīng)混合物在340nm下的吸收增加。吸收的改變速度直接與肌酸激酶活性成比例。在該試驗(yàn)操作的條件下每分鐘產(chǎn)生一微摩爾NADPH的酶數(shù)量被定義為一個(gè)單位。
沒有進(jìn)行再灌注的長期缺乏血流(局部缺血)的心肌組織將發(fā)生形態(tài)學(xué)變化，特征為壞死同時(shí)出現(xiàn)炎癥細(xì)胞。局部缺血誘導(dǎo)的細(xì)胞死亡的形態(tài)外觀與由于再灌注而導(dǎo)致的細(xì)胞死亡的外觀不同。后者的特征為有一些收縮帶并且被稱為收縮帶壞死。保留得自各組的心臟組織并對其進(jìn)行制備以對其進(jìn)行電子顯微鏡檢查。
局部缺血性再灌注損傷與有風(fēng)險(xiǎn)區(qū)域中的炎癥細(xì)胞——主要是嗜中性白細(xì)胞積聚有關(guān)。髓過氧化物酶(MPO)是一種幾乎僅存在于嗜中性白細(xì)胞中的酶(Liu等人，，J.Pharmacol.Exp.Ther.287527-537，1998)。因此，預(yù)期可以對得自心臟各區(qū)域的組織的MPO活性進(jìn)行分析以表明其是否出現(xiàn)損傷。還預(yù)期與得自沒有進(jìn)行治療的動物的風(fēng)險(xiǎn)區(qū)域的心臟組織相比，能降低炎性響應(yīng)的干預(yù)將與再灌注的有風(fēng)險(xiǎn)區(qū)域中的MPO活性的降低有關(guān)。因此，與用基質(zhì)處理的對照心臟相比，在用藥物處理的心臟中將降低MPO活性的百分比(有風(fēng)險(xiǎn)的區(qū)域/無風(fēng)險(xiǎn)的區(qū)域)變化。
在該實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)，在一種初步的未進(jìn)行控制的未進(jìn)行校正的試驗(yàn)中測定了組織髓過氧化物酶(MPO)活性。從有風(fēng)險(xiǎn)的區(qū)域和無風(fēng)險(xiǎn)區(qū)域獲得一些心臟組織樣品，將其在0.5％溴化十六烷基三甲銨中勻化并將其溶解于50mM磷酸鉀緩沖液(pH6.0)中(還可參見Liu等人，，1998，J.Pharmacol.Exp.Ther.287527-537)。將該組織勻漿在4℃下在12,500g下離心30分鐘。收集上清液并將其與位于50mM磷酸鉀緩沖液(pH6.0)中的0.167mg/ml鄰-聯(lián)二茴香胺二鹽酸鹽(Sigma)和0.0005％H2O2進(jìn)行反應(yīng)。用分光光度法在460nm下測量吸收度的變化。將在25℃下每分鐘水解1mmol H2O2的酶數(shù)量定義為MPO的一個(gè)單位。在這里沒有給出的得自這種初步實(shí)驗(yàn)的結(jié)果表明用ETC-216處理和用基質(zhì)處理的心臟在局部缺血性再灌注損傷方面沒有差異，但是，該結(jié)果還需驗(yàn)證，例如通過與局部缺血性再灌注損傷前MPO水平進(jìn)行比較來進(jìn)行驗(yàn)證。
正如左心室有風(fēng)險(xiǎn)區(qū)域的梗死百分比和梗死百分比降低所證明的那樣，用ETC-216處理的心臟被保護(hù)不受局部缺血性再灌注損傷的影響。兩種給藥方案都可產(chǎn)生心臟保護(hù)作用，所說的兩種給藥方案即在開始局部缺血前將ETC-216以100mg/kg的單劑量進(jìn)行給藥或者給予兩個(gè)100mg/kg劑量的ETC-216，一個(gè)劑量在開始局部缺血前一天給藥，和在局部缺血前立即給予第二個(gè)劑量。
6.5.實(shí)施例5LAD閉合-再灌注兔心臟中急性給藥最小有效劑量的確定本實(shí)施例證明了當(dāng)就在開始局部缺血前進(jìn)行單次預(yù)處理時(shí)各種劑量ETC-216的預(yù)防功效。實(shí)施例2中的研究著眼于ETC-216在體內(nèi)研究(其中使兔心臟局部缺血30分鐘，然后將其在再灌注至少4小時(shí))中作為心臟保護(hù)劑的作用。使用兩種給藥方案。在第一種方案中，以單次預(yù)處理的形式對ETC-216進(jìn)行試驗(yàn)，其中就在開始局部缺血前使體循環(huán)中出現(xiàn)100mg/kg的該活性劑，而在第二種方案中，在開始局部缺血前一天和開始前立即以100mg/kg的劑量進(jìn)行兩次預(yù)處理。兩種方案表明用100mg/kgETC-216處理一次或兩次都具有心臟保護(hù)作用。
因此，以單次處理形式對ETC-216進(jìn)行試驗(yàn)，其中就在開始局部缺血前使心臟與單劑量的活性劑或等體積的基質(zhì)相接觸以確定對心臟保護(hù)的影響。用與實(shí)施例2中所用方法相同的方法對心臟進(jìn)行分析。此外，還可用這種方案來發(fā)現(xiàn)治療兔心臟保護(hù)其不受局部缺血影響的ETC-216的最小有效劑量。
為了確定ETC-216的最小有效劑量，使用與急性處理的方案相同的方案(見圖13)，其中動物接受10、3或1mg/kg ETC-216或等體積基質(zhì)的單次治療，如圖16所示。在10mg/kg治療組中，對照組和治療組中被表示為總左心室百分比的有風(fēng)險(xiǎn)區(qū)域(AAR)或局部缺血性區(qū)域相似(圖17)。與用基質(zhì)處理的兔子相比，用10mg/kg ETC-216處理的兔子形成的梗死(被表示為AAR的百分比)更少(p＜0.0005)(圖18)。當(dāng)將該數(shù)據(jù)表示為總左心室百分比形式時(shí)也觀察到了心肌梗死尺寸降低(p＜0.0001)(圖17)。
用3mg/kg的劑量觀察到了相似的結(jié)果。被表示為總左心室百分比形式的AAR在ETC-216處理和基質(zhì)處理組之間是相似的(圖17)。與用基質(zhì)處理的兔子相比，用3mg/kg ETC-216處理的兔子形成的被表示為有風(fēng)險(xiǎn)區(qū)域百分比形式的梗死更少(p＜0.05)(圖17)。當(dāng)將該數(shù)據(jù)表示為總左心室百分比形式時(shí)觀察到了心肌梗死尺寸降低(p＜0.05)(圖17)。
劑量為1mg/kg時(shí)，注意到ETC-216和基質(zhì)在用左心室百分比形式表示的AAR大小方面沒有顯著差異(圖17)。在1mg/kg下，注意到這些組之間的AAR百分比(圖17)和被表示為總左心室百分比形式的心肌梗死尺寸之間沒有顯著差異(圖17)。
在圖17中對由四個(gè)急性治療組(即100、10、3和1mg/kg)的各組以及其各自的對照組獲得的數(shù)據(jù)進(jìn)行了概述。在這四組中各自梗死的AAR相似。在這四個(gè)給藥方案中，與各對照相比，不管是用有風(fēng)險(xiǎn)區(qū)域百分比還是用左心室百分比的形式表示的，在100、10和3mg/kg的ETC-216劑量下梗死面積都有降低。相反，接受1mg/kg劑量的動物組中的梗死面積與各基質(zhì)處理組中觀察到的沒有差異。
圖18表示脂蛋白未酯化膽固醇瞬時(shí)變化的實(shí)施例。就在給予1、3、10或100mg/kg的ETC-216或基質(zhì)前和給藥后定期獲取血樣。表示了有代表性的瞬時(shí)血清樣品種獲得的未酯化的膽固醇水平，其中用在線未酯化膽固醇分析通過一定尺度的凝膠過濾色譜法將血清脂蛋白分離出來。注意到在給予ETC-216后，尤其是以100mg/kg的劑量給藥后45分鐘時(shí)高密度膽固醇未酯化膽固醇升高并且盡管在靜脈內(nèi)給予ETC-216試驗(yàn)劑后實(shí)際上不存在未酯化的膽固醇，但是在10mg/kg下也有小幅度升高。還注意到在以10mg/kg或100mg/kg的ETC-216劑量給藥后210和270分鐘，極低密度脂蛋白未酯化膽固醇延遲性顯著升高。還注意到在所評估的時(shí)間點(diǎn)，用3mg/kg ETC-216劑量處理時(shí)脂蛋白未酯化膽固醇變化并不明顯，但是，如圖17所示，這種劑量也有心臟保護(hù)作用。
這些結(jié)果證明100mg/kg、10mg/kg和3mg/kg的劑量是ETC-216有效的預(yù)防劑量。
6.6.實(shí)施例6在閉合-再灌注兔心臟中在開始LAD閉合后被給藥時(shí)ETC-216防止了局部缺血-再灌注損傷本實(shí)施例證明了在局部缺血性或閉合事件后被給藥時(shí)ETC-216預(yù)防或降低局部缺血性再灌注損傷的功效。實(shí)施例2和3中的研究說明了在開始局部缺血前對心肌進(jìn)行處理的預(yù)防益處。因此，為了確定ETC-216是否能在局部缺血后保護(hù)心肌，在給予試驗(yàn)物質(zhì)或基質(zhì)前將LAD閉合。在這種方案中，以單次處理形式對ETC-216進(jìn)行試驗(yàn)，其中在局部缺血的最后5分鐘期間進(jìn)行給藥和在再灌注的最初55分鐘內(nèi)進(jìn)行給藥使心臟與10mg/kg的活性劑或等體積的基質(zhì)進(jìn)行接觸(圖19)。對10mg/kg的治療組而言，表示為總左心室百分比形式的AAR或局部缺血性區(qū)域與對照組相似(圖20)。用ETC-216處理的兔子形成的梗死(以AAR百分比表示的)比用基質(zhì)處理的兔子少(圖20)。當(dāng)將該數(shù)據(jù)表示為總左心室百分比時(shí)也觀察到心肌梗死面積降低(p＜0.0005)(圖20)。
本實(shí)施例證明在局部缺血性事件后單次給藥治療減輕或降低了局部缺血性再灌注損傷。
已經(jīng)對本發(fā)明的各種實(shí)施方案進(jìn)行了描述。說明書和實(shí)施例是為了對本發(fā)明進(jìn)行說明而不是要對其進(jìn)行限制。實(shí)際上，對本領(lǐng)域技術(shù)人員顯而易見的是可以對本發(fā)明所述的各種實(shí)施方案進(jìn)行不脫離本發(fā)明精神或下述所附權(quán)利要求的范圍的改變。
這里所列舉的所有參考資料在這里都被全部引入作為參考。
權(quán)利要求
1.一種治療需要該類治療的個(gè)體的急性冠狀動脈綜合征的方法，所說的方法包括以約1mg蛋白/kg至約100mg蛋白/kg的劑量給予載脂蛋白A-1 Milano1-棕櫚酰-2-油?；?sn-甘油-3-磷酸膽堿復(fù)合體(Apo A-IM:POPC復(fù)合體)。
2.如權(quán)利要求1所述的方法，其中所說的Apo A-IM:POPC復(fù)合體以約15mg/kg的劑量被給藥于個(gè)體。
3.如權(quán)利要求1所述的方法，其中所說的Apo A-IM:POPC復(fù)合體以約45mg/kg的劑量被給藥于個(gè)體。
4.如權(quán)利要求1所述的方法，其中所說的Apo A-IM:POPC復(fù)合體以約15mg/kg至約45mg/kg的劑量被給藥于個(gè)體。
5.如權(quán)利要求1所述的方法，其中所說的Apo A-I Milano是重組的Apo A-I Milano。
6.如權(quán)利要求1所述的方法，其中所說的Apo A-IMPOPC復(fù)合體由載脂蛋白A-1 Milano和1-棕櫚酰-2-油酰基-sn-甘油-3-磷酸膽堿所組成，蛋白/脂質(zhì)的重量比為約1∶1。
7.如權(quán)利要求1所述的方法，其中所說的Apo A-IM:POPC復(fù)合體是一種無菌的液體藥物制劑。
8.如權(quán)利要求7所述的方法，其中所說的藥物制劑以約15mg/kg的劑量被給藥于個(gè)體。
9.權(quán)利要求7所述的方法，其中所說的藥物制劑以約45mg/kg的劑量被給藥于個(gè)體。
10.如權(quán)利要求7所述的方法，其中每周一次地將所說的藥物制劑給藥于個(gè)體，給藥約6個(gè)月、約5個(gè)月、約4個(gè)月、約3個(gè)月、約2個(gè)月或約1個(gè)月。
11.如權(quán)利要求7所述的方法，其中所說的藥物制劑大約被每天給藥于個(gè)體給藥約1個(gè)月。
12.如權(quán)利要求7所述的方法，其中每3天將所說的藥物制劑給藥于給體給藥約1個(gè)月至約6個(gè)月。
13.如權(quán)利要求7所述的方法，其中每10天將所說的藥物制劑給藥于給體給藥約1個(gè)月至約6個(gè)月。
14.如權(quán)利要求7所述的方法，其中每14天將所說的藥物制劑給藥于給體給藥約1個(gè)月至約6個(gè)月。
15.如權(quán)利要求1所述的方法，其還包括手術(shù)干預(yù)。
16.如權(quán)利要求15所述的方法，所說的手術(shù)干預(yù)包括經(jīng)皮冠狀動脈腔內(nèi)血管成型術(shù)或冠狀動脈旁路搭橋術(shù)。
17.如權(quán)利要求1所述的方法，其還包括使用用于治療、預(yù)防或改善與急性冠狀動脈綜合征有關(guān)的疾病、病癥、癥狀或疼痛的另外的藥物。
18.如權(quán)利要求1所述的方法，其中個(gè)體受影響血管中的粥樣斑體積百分比被降低了約-0.73％至約-1.29％。
19.如權(quán)利要求1所述的方法，其中所述個(gè)體目標(biāo)血管中的總粥樣斑體積被降低了約-15.1mm3至約-12.6mm3。
20.如權(quán)利要求1所述的方法，其中所述個(gè)體目標(biāo)冠狀動脈部分中的平均最大粥樣斑厚度被降低了約-0.039mm至-0.044mm。
21.如權(quán)利要求7所述的方法，其中所說的藥物制劑被靜脈內(nèi)給藥。
22.如權(quán)利要求21所述的方法，其中所說的藥物制劑被給藥經(jīng)歷約1小時(shí)。
23.如權(quán)利要求21所述的方法，其中所說的藥物制劑被給藥經(jīng)歷約3小時(shí)。
24.如權(quán)利要求7所述的方法，其中所說的藥物制劑包含Apo A-IMilano、POPC、蔗糖-甘露醇載體和磷酸鹽緩沖劑。
25.如權(quán)利要求24所述的方法，其中所說的蔗糖-甘露醇載體由約6.0％至約6.4％的蔗糖和約0.8％至約1％的甘露醇組成。
26.如權(quán)利要求25所述的方法，其中所說的蔗糖-甘露醇載體由約6.2％的蔗糖和約0.9％的甘露醇組成。
27.如權(quán)利要求7所述的方法，其中所說的藥物制劑具有約7.0至約7.8的pH。
28.如權(quán)利要求27所述的方法，其中所說的pH為約7.5。
29.如權(quán)利要求7所述的方法，其中所說的藥物制劑包含約12mg/ml至約18mg/ml Apo A-I Milano。
30.如權(quán)利要求7所述的方法，其中所說的藥物制劑包含約11mg/ml至約17mg/ml的POPC。
31.如權(quán)利要求7所述的方法，其中所說的藥物制劑每50mL包含小于6,000個(gè)粒度高于10μm的微粒。
32.如權(quán)利要求7所述的方法，其中所說的藥物制劑每50mL包含小于600個(gè)粒度高于25μm的微粒。
33.如權(quán)利要求7所述的方法，其中所說的藥物制劑具有約280至約320mOsm的重量摩爾滲透壓濃度。
34.如權(quán)利要求33所述的方法，其中所說的藥物制劑具有約290mOsm的重量摩爾滲透壓濃度。
35.一種降低需要該類降低的個(gè)體的動脈粥樣硬化斑塊的方法，所說的方法包括給所說的個(gè)體使用至少一次45mg/kg重組的Apo A-IMilano:POPC復(fù)合體。
36.如權(quán)利要求35所述的方法，其中所說的重組Apo A-I Milano:POPC復(fù)合體每周、每月或每年給藥一次。
37.如權(quán)利要求35所述的方法，其中該重組的Apo A-I Milano:POPC復(fù)合體被每周給藥一次給藥約3-5周。
38.如權(quán)利要求35所述的方法，其還包括15mg/kg的劑量將重組Apo A-I Milano:POPC復(fù)合體給藥于個(gè)體至少一次。
39.如權(quán)利要求38所述的方法，其中所說的復(fù)合體被每周、每月或每年給藥一次。
40.如權(quán)利要求35所述的方法，其中還用另外的藥物對所說個(gè)體進(jìn)行治療以治療、預(yù)防或改善與急性冠狀動脈綜合征有關(guān)的疾病、病癥、癥狀或疼痛。
41.如權(quán)利要求40所述的方法，其中所說的藥物是它汀、β-阻滯劑、ACE抑制劑、抗血栓形成藥、血管舒張藥或其組合。
42.一種液體藥物制劑，其在緩沖液中包含重組的Apo A-IMilano或其變型/1-棕櫚酰-2-油?；?sn-甘油-3-磷酸膽堿復(fù)合體，所說的緩沖劑包含約6.0％至約6.4％的蔗糖，還包含約0.8至約1％的甘露醇，所說的緩沖液具有約7.0至約7.8的pH。
43.如權(quán)利要求42所述的藥物制劑，其包含約6.2％的蔗糖。
44.如權(quán)利要求42所述的藥物制劑，其包含約0.9％的甘露醇。
45.如權(quán)利要求42所述的藥物制劑，其中所說的pH為約7.5。
46.如權(quán)利要求42所述的藥物制劑，其中rApo A-I Milano的濃度為每ml所說的緩沖液約12mg至約18mg。
47.一種藥物制劑，其包含與1-棕櫚酰-2-油?；?sn-甘油-3-磷酸膽堿復(fù)合的重組的Apo A-I Milano或其變型和pH為約7.0至約7.8的磷酸鹽緩沖液，所說的緩沖液包含2％的葡萄糖和4mM的磷酸鈉。
48.如權(quán)利要求47所述的藥物制劑，其包含磷酸鹽緩沖液以達(dá)到約7.5的pH。
49.如權(quán)利要求42或47所述的藥物制劑，其中所說的重組的ApoA-I Milano是保守取代的Apo A-I Milano。
50.如權(quán)利要求42或47所述的藥物制劑，其中所說的重組的ApoA-I Milano和POPC以1∶0.95的重組Apo A-I Milano:POPC(蛋白重量/脂質(zhì)重量)比例被復(fù)合。
51.如權(quán)利要求42或47所述的藥物制劑，其每50mL包含小于6,000個(gè)粒度高于10μm的微粒。
52.如權(quán)利要求42或47所述的藥物制劑，其每50mL包含小于600個(gè)粒度高于25μm的微粒。
53.如權(quán)利要求42或47所述的藥物制劑，其中所說的重量摩爾滲透壓濃度為約280至約320mOsm。
54.如權(quán)利要求53所述的藥物制劑，其中所說的重量摩爾滲透壓濃度為約290mOsm。
55.如權(quán)利要求42或47所述的藥物制劑，其是無菌的。
56.如權(quán)利要求42或47所述的藥物制劑，其是冷凍的。
57.如權(quán)利要求42或47所述的藥物制劑，其位于無菌小瓶、無菌預(yù)填充的袋或預(yù)填充的注射器中。
58.一種冷凍干燥的藥物制劑，其包含a)與1-棕櫚酰-2-油?；?sn-甘油-3-磷酸膽堿復(fù)合的重組ApoA-I Milano或其變型；b)約6.0％至約6.4％的蔗糖；和c)約0.8至約1％的甘露醇。
59.如權(quán)利要求58所述的藥物制劑，其包含約6.2％的蔗糖。
60.如權(quán)利要求58所述的藥物制劑，其包含約0.9％的甘露醇。
61.如權(quán)利要求58所述的藥物制劑，其還包含緩沖液，所說的緩沖液具有約7.5的pH。
62.如權(quán)利要求58所述的藥物制劑，其中所說的重組Apo A-IMilano是保守取代的Apo A-I Milano。
63.如權(quán)利要求58所述的藥物制劑，其中POPC的濃度為約11mg/ml至約17mg/ml。
64.如權(quán)利要求58所述的藥物制劑，其中重組的Apo A-I Milano和POPC是以1∶0.95重組的Apo A-I Milano:POPC(蛋白重量/脂質(zhì)重量)比例復(fù)合的。
65.如權(quán)利要求58所述的藥物制劑，其每50mL包含小于6,000個(gè)粒度高于10μm的微粒。
66.如權(quán)利要求58所述的藥物制劑，其每50mL包含小于600個(gè)粒度高于25μm的微粒。
67.如權(quán)利要求58所述的藥物制劑，其中其重量摩爾滲透壓濃度為約280至約320mOsm。
68.如權(quán)利要求67所述的藥物制劑，其中所說的重量摩爾滲透壓濃度為約290mOsm。
69.如權(quán)利要求58所述的藥物制劑，其是無菌的。
70.如權(quán)利要求58所述的藥物制劑，其位于無菌小瓶、無菌預(yù)填充的袋或預(yù)填充的注射器中。
71.一種治療需要該類治療的個(gè)體的局部缺血性再灌注的方法，所說的方法包括以約15mg蛋白/kg的劑量給予載脂蛋白A-IMilano:1-棕櫚酰-2-油?；?sn-甘油-3-磷酸膽堿復(fù)合體(Apo A-IM:POPC復(fù)合體)。
72.一種治療需要該類治療的個(gè)體的局部缺血性再灌注的方法，所說的方法包括以約45mg蛋白/kg的劑量給予載脂蛋白A-IMilano:1-棕櫚酰-2-油?；?sn-甘油-3-磷酸膽堿復(fù)合體(Apo A-IM:POPC復(fù)合體)。
73.如權(quán)利要求2、8或71所述的方法，其中所說的方法還包括給予45mg蛋白/kg。
74.如權(quán)利要求3、9或72所述的方法，其中所說的方法還包括給予15mg蛋白/kg。
全文摘要
本發(fā)明提供了用于治療和預(yù)防急性冠狀動脈綜合征的方法和制劑。本發(fā)明的方法提供了用于降低和穩(wěn)定動脈粥樣硬化斑塊的載脂蛋白A－I Milano磷脂復(fù)合體的安全有效劑量。還提供了Apo A－I Milano磷脂復(fù)合體的藥物制劑。
文檔編號A61K38/00GK1870894SQ200480031007
公開日2006年11月29日 申請日期2004年10月19日 優(yōu)先權(quán)日2003年10月20日
發(fā)明者C·L·貝斯蓋爾, W·V·羅德里格斯, N·D·拉勒萬尼, D·哈特曼, J·約翰森 申請人:埃斯普里昂治療公司