專利名稱：作為激酶抑制劑的吡咯并三嗪化合物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及抑制生長因子受體例如HER1、HER2和HER4的酪氨酸激酶活性的化合物，由此使其可用作抗癌劑。化合物也可用于治療除癌癥以外的疾病，其與通過生長因子受體例如HER1、HER2和HER4操作的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑有關(guān)。
背景技術(shù)：
受體酪氨酸激酶(RTKs)在生物化學(xué)信號橫跨細(xì)胞的質(zhì)膜的傳輸中很重要。這些跨膜分子特征性地由通過質(zhì)膜中的片段連接至細(xì)胞內(nèi)酪氨酸激酶域(domain)的細(xì)胞外配體結(jié)合域組成。
人類表皮生長因子受體(HER)家族是由四個(gè)稱為HER1、HER2、HER3和HER4的不同受體酪氨酸激酶所組成。這些激酶也稱為erbB1、erbB2等。HER1也普遍稱為表皮生長因子(EGF)受體。除HER3外，這些受體具有對磷酸基受體(phosphoacceptor)蛋白的酪氨酸殘基具有特異性的內(nèi)在蛋白激酶活性。HER激酶表現(xiàn)在大部分上皮細(xì)胞以及上皮起源的腫瘤細(xì)胞。他們也常常表現(xiàn)于間充質(zhì)(mesenchymal)起源的腫瘤細(xì)胞例如肉瘤或橫紋肌肉瘤(rhabdomyosarcomas)。RTKs例如HER1和HER2涉及細(xì)胞增殖且與疾病例如牛皮癬和癌有關(guān)。通過這些激酶的抑制作用破壞信號傳導(dǎo)將具有抗增殖和治療效果。
受體酪氨酸激酶的酶活性可通過過表達(dá)或通過配體介導(dǎo)的二聚合作用刺激。已證明HER受體家族用于均二聚物和異二聚物(heterodimer)的形成。均二聚合作用的例子為通過配體的EGF家族(其包括EGF、轉(zhuǎn)化生長因子α、β細(xì)胞素(betacellulin)、肝素結(jié)合的EGF和表皮調(diào)節(jié)素(epiregulin))之一的HER1(EGF受體)的二聚合作用。在四個(gè)HER受體激酶中的異二聚合作用可通過結(jié)合至配體的神經(jīng)調(diào)節(jié)素(heregulin)(也稱為神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白(neuregulin))家族的成員來促進(jìn)。該異二聚合作用如涉及HER2和HER3，或HER3/HER4組合，造成受體二聚物的酪氨酸激酶活性的顯著刺激，即使其中一個(gè)受體(HER3)為酶促(enzymatically)惰性的。HER2的激酶活性已顯示也由于受體單獨(dú)在各種細(xì)胞類型中的過表達(dá)而活化。受體均二聚物和異二聚物的活化造成酪氨酸殘基在受體上和在其它細(xì)胞內(nèi)蛋白上的磷酸化作用。此接著細(xì)胞內(nèi)信號途徑例如那些涉及與微管有關(guān)的蛋白激酶(MAP激酶)和磷脂酰肌醇(phosphatidylinositol)3-激酶(PI3激酶)的活化作用。這些途徑的活化已顯示導(dǎo)致細(xì)胞增殖和細(xì)胞凋亡的抑制作用。HER激酶信號的抑制作用已顯示抑制細(xì)胞增殖和生存。
所有的蛋白激酶包含約250-300個(gè)氨基酸殘基的結(jié)構(gòu)保守的催化域1。圖1顯示HER12的X射線結(jié)構(gòu)，其包含蛋白激酶家族所有成員的高保守特征。蛋白激酶折疊(fold)分成兩個(gè)亞域，或葉(lobe)。較小的N-端葉(terminallobe)，或N葉，由五個(gè)股β折疊(five-stranded βsheet)和一個(gè)顯著的(prominent)α螺旋，所謂的螺旋αC構(gòu)成。C葉較大且主要為螺旋狀。兩個(gè)葉通過單一多肽鏈(連接區(qū)/鉸鏈區(qū))連接，其用作一旦ATP和/或底物結(jié)合時(shí)兩個(gè)域可彼此相對旋轉(zhuǎn)的鉸鏈。ATP結(jié)合在兩個(gè)葉之間的深裂縫中并位于連接鏈β1和β2的高保守環(huán)下。此磷酸酯(phosphate)結(jié)合環(huán)，或P環(huán)，包含保守的富含甘氨酸的基序(GXGXψG)，其中ψ通常為酪氨酸或苯丙氨酸。甘氨酸殘基允許該環(huán)非常近地接近ATP的磷酸酯(phosphate)并通過主鏈相互作用配位。該保守的芳族側(cè)鏈封住(cap)磷酸酯(phosphate)轉(zhuǎn)移的位點(diǎn)。ATP通過其腺嘌呤部分和連接區(qū)的主鏈原子間的氫鍵固定到酶上和其核糖環(huán)接至C-端區(qū)的起始的殘基上。
最優(yōu)選磷酸轉(zhuǎn)移需要幾個(gè)在所有已知激酶中絕對保守的催化殘基的精確空間排列。Asp813和Asn818(HER1編號如參考文獻(xiàn)2中給出或編號為如于REFSEQ登記(accession)NM_005228中所發(fā)現(xiàn)的Asp 837和Asn842)從在活性位點(diǎn)的基部的高保守的環(huán)結(jié)構(gòu)，所謂的催化環(huán)放出。Asp813與底物(substrate)的攻擊(attacking)羥基側(cè)鏈相互作用，而Asn818參加定向Asp813的氫鍵合相互作用。在涉及三磷酸基的配位的兩個(gè)二價(jià)金屬陽離子間的結(jié)合也需要Asn818和另一絕對保守的催化殘基，Asp831(編號如在REFSEQ登記NM_005228中所發(fā)現(xiàn)的Asp855)。
很多結(jié)合至不同蛋白激酶的與ATP、其類似物、或小分子抑制劑復(fù)合的結(jié)構(gòu)已提供了對催化域和ATP-結(jié)合的裂縫和存在于結(jié)合域的類似和不同的組織的清楚描述3?，F(xiàn)清楚的是有一些結(jié)合裂縫內(nèi)的區(qū)域不被ATP占據(jù)，且這些顯示在激酶家族成員之間的結(jié)構(gòu)差異。圖2顯示具有人類細(xì)胞周期蛋白(cyclin)-依賴性激酶2(CDK2)的鉸鏈區(qū)的ATP的相互作用4。所有已知激酶ATP結(jié)合位點(diǎn)的總的區(qū)域描畫在圖中如(1)腺嘌呤結(jié)合區(qū)；(2)核糖袋(ribosepocket)；(3)磷酸酯結(jié)合袋(phosphate binding pocket)；(4)大部分疏水區(qū)1，在腺嘌呤環(huán)之后，和(5)區(qū)2，與核糖袋相鄰的裂縫或隧道和指向激酶域的表面-暴露區(qū)的腺嘌呤的N3氮。激酶/抑制劑復(fù)合物(complex)的有效結(jié)構(gòu)表明可利用不被ATP占據(jù)的區(qū)域，例如區(qū)域1和2，以增加結(jié)合相互作用并由此增加結(jié)合效力，以及也可能調(diào)整因?yàn)樵谶@些區(qū)域中的激酶間的序列不同的選擇性。
結(jié)晶學(xué)、建模、篩選和藥物化學(xué)努力的組合已導(dǎo)致對吡咯并三嗪化學(xué)型(chemotype)在ATP結(jié)合位點(diǎn)的結(jié)合方式的了解。根據(jù)吡咯并三嗪化學(xué)型抑制劑在VEGFR-2中的X射線結(jié)晶結(jié)構(gòu)，已顯示吡咯并三嗪環(huán)結(jié)合在腺嘌呤袋中且使得幾個(gè)主要與鉸鏈區(qū)域的相互作用相似于ATP。在此結(jié)合方式中，C5基團(tuán)定向進(jìn)入高保守的核糖-磷酸酯袋。C4基團(tuán)，視其化學(xué)選區(qū)(constituency)而定，可定向進(jìn)入特異性區(qū)域1內(nèi)并且C6基團(tuán)定向進(jìn)入特異性區(qū)域2內(nèi)。此化學(xué)型在HER1中的列舉實(shí)例的模型化顯示本發(fā)明所要求的C5基團(tuán)可至少占據(jù)(occupy)核糖-磷酸酯袋，并與至少一或多個(gè)涉及磷酸酯結(jié)合的絕對保守的殘基，例如，Asn818和Asp831(HER1編號)相互作用。
激酶催化核心結(jié)構(gòu)的保守性質(zhì)使其成為由吡咯并三嗪環(huán)和C5基團(tuán)提供的總激酶抑制劑模板的優(yōu)良目標(biāo)。此模板可被成功地衍生以通過靶向(targeting)ATP-結(jié)合位點(diǎn)的不良保守區(qū)來制備特異性和有效的激酶ATP-競爭性抑制劑。
已令人驚訝地發(fā)現(xiàn)本發(fā)明化合物和其它的化合物例如公開在美國專利US 5,457,105、5,616,582和5,770,599中，其包含小苯胺衍生物如二環(huán)的C4位點(diǎn)沒有取代基，顯示HER1和HER2活性。
參考文獻(xiàn)(1)S.K.Hanks and T.Hunter，Protein kinases 6.The eukaryotic proteinkinase superfamilykinase(catalytic)domain structure and classification.FASEBJ.9(1995)，pp.576-596.
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(3)H.M.Berman，J.Westbrook，Z.Feng，G.Gilliland，T.N.Bhat，H.Weissig，I.N.Shindyalov，P.E.Bourne.The Protein Data Bank.Nucleic Acids Research，28pp.235-242(2000)websitehttp://WWW.pdb.org/.
(4)PDB ID1HCKSchulze-Gahmen，U.，De Bondt，H.L.，Kim，S.H.High-resolution crystalstructures of human cyclin-dependent kinase 2with and without ATPboundwaters and naturalligand as guides for inhibitor design.J Med Chem 39pp.4540(1996).


圖1描述了HER1的X射線結(jié)構(gòu)，典型激酶的關(guān)鍵部分被有色標(biāo)識(color-coded)。
圖2描述了與ATP復(fù)合的CDK2的X射線結(jié)構(gòu)。描繪出典型的ATP-結(jié)合位點(diǎn)的不同區(qū)域。
發(fā)明詳述本發(fā)明提供式I的化合物，使用該化合物的藥物組合物及使用該化合物的方法。
根據(jù)本發(fā)明公開了式I化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽或立體異構(gòu)體，
其中符號具有下列意義且對于每次出現(xiàn)獨(dú)立地選自R1為環(huán)烷基或被取代的環(huán)烷基、芳基或被取代的芳基、雜環(huán)基或被取代的雜環(huán)基；R2為芳基、被取代的芳基、雜芳基或被取代的雜芳基、雜環(huán)基或被取代的雜環(huán)基；R3為氫、烷基或被取代的烷基；X為直接鍵(direct bond)、-NR3-或-O-；Y為直接鍵、烷基或被取代的烷基、鏈烯基或被取代的鏈烯基、炔基或被取代的炔基；條件是R2不是吲唑基或被取代的吲唑基。
這些化合物抑制生長因子受體例如HER2的酪氨酸激酶活性。
在另一具體實(shí)施方案中，本發(fā)明包含式I的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽或立體異構(gòu)體，其中R1為雜環(huán)基或被取代的雜環(huán)基；R2為芳基、被取代的芳基、雜芳基或被取代的雜芳基；R3為氫；X為-NR3-或-O-；Y為烷基或被取代的烷基。
優(yōu)選的R2取代基包括唑基、噻吩基、吡啶基、噻唑基、吡嗪基和苯基，其全部可適當(dāng)?shù)乇灰粋€(gè)或多個(gè)取代基所取代。
優(yōu)選的R1取代基包括芐基、咪唑基-乙基、(甲基-咪唑基)-乙基、哌啶基-乙基、吡啶基-丙基、吡啶基-甲基、嗎啉基-乙基、(甲基-咪唑基)-甲基、吡啶基-乙基、氨基-哌啶基-甲基、4-氨基-1-甲基-哌啶-3-醇、(甲基-哌嗪基)-乙基、吡啶基-乙基、(甲基-哌啶基)-乙基、(甲基-咪唑基)-丙基、(甲基-哌啶基)-甲基、(甲基-哌嗪基)-丙基、二異丙基氨基-乙基、哌啶基-丙基、二甲基氨基-乙基、二甲基氨基-丙基、[(三氟-乙?；?-哌啶基]-丙基、哌啶基-乙基、哌嗪基-乙基、哌嗪基-丙基、吡咯烷基-乙基、三唑基-乙基、三唑基-丙基、(二甲基氨基-乙氧基)-乙基、咪唑基-丙基、[(三氟-乙?；?-哌啶基]-丙基、(哌嗪基-乙氧基)-乙基、[(三氟-乙酰基)-哌嗪基]-丙基、[(三氟-乙?；?-哌嗪基]-乙基、哌啶基-甲基、吡唑基-乙基、(氨基-乙氧基)-乙基、(甲氧基-乙氧基)-乙基、吡唑基-丙基、[(甲氧基-乙基)-甲基-氨基]-乙基、嗎啉基-丙基、(氰基甲基-哌嗪基)-乙基、[(氰基-乙基)-甲基-氨基]-乙基、[(甲氧基-乙基)-哌啶基]-甲基、[(甲氧基-乙基)-哌啶基]-乙基、[(氟代-乙基)-甲基-氨基]-乙基、[(氟代-乙基)-甲基-氨基]-丙基、(甲基-哌啶基)-丙基、[(甲磺?；?乙基)-哌嗪基]-乙基、[(氰基-乙基)-哌嗪基]-乙基、[(甲氧基-乙基)-哌嗪基]-乙基、[(甲氧基-乙基)-甲基-氨基]-丙基、(氰基甲基-甲基-氨基)-丙基、(氰基甲基-甲基-氨基)-乙基、[(甲磺?；?乙基)-甲基-氨基]-丙基、(二氟-哌啶基)-丙基、(二氟-哌啶基)-乙基、[(氰基-乙基)-甲基-氨基]-丙基、[(甲磺?；?乙基)-甲基-氨基]-乙基、[(三氟-乙基)-哌嗪基]-乙基、[氰基甲基-(甲磺?；?乙基)-氨基]-丙基、[氰基甲基-(甲磺?；?乙基)-氨基]-乙基、(氰基甲基-哌嗪基)-丙基、[(甲磺?；?乙基)-哌嗪基]-丙基、[(氰基-乙基)-哌嗪基]-丙基、[(三氟-乙基)-哌嗪基]-丙基、(甲磺酰基-乙基-氨基)-乙基、[(氰基-乙基)-哌啶基]-甲基、(氰基甲基-哌啶基)-甲基、(羥基-哌啶基)-丙基、[(甲磺?；?乙基)-哌啶基]-甲基、哌啶基-甲基、哌啶基、咪唑基-丙基、1-甲基-[1，4]-二氮雜環(huán)庚烷-6-醇，甲磺?；?丙基、(甲磺?；?乙基-氨基)-丙基、吡咯烷基-甲基、甲磺?；?乙基、(氰基甲基-氨基)-乙基、(氰基甲基-氨基)-丙基、(二氧代-硫嗎啉基(thiomorpholinyl))-丙基、(氧代-哌啶基)-丙基、[(二氟-乙基)-甲基-氨基]-乙基、嗎啉基-甲基、(羥基-吡咯烷基)-丙基、(羥基-哌啶基)-丙基、吡咯烷基-甲基、(羥基-吡咯烷基)-丙基、甲基-哌啶基、(甲基-吡咯烷基)-甲基、嗎啉基-甲基、吡咯烷基-甲基、(甲基-四氫-吡啶基)-甲基、(氰基-乙基)-哌啶基、氮雜環(huán)丁烷基、(甲磺?；?乙基)-哌啶基、(氰基-甲基)-哌啶基、異丙基-哌啶基、丙基-哌啶基、乙酰基-哌啶基、乙基-哌啶基、烯丙基-哌啶基、四氫-吡喃基、(羥基-乙基)-哌啶基、(甲基-吡咯烷基)-甲基、(甲氧基乙基)-哌啶基、哌啶基、(甲氧基-乙基)-氮雜環(huán)丁烷基、(甲氧基-甲氧基甲基-乙基)-哌啶基、(甲氧基-乙?；?-哌啶基、甲氧基羰基-哌啶基、(羥基-乙?；?-哌啶基、哌啶-羧酸-乙酰氧基-乙基、哌啶-羧酸-乙酰氧基-甲基-乙基、羥基-哌啶基、氨基-環(huán)己基、哌啶基、哌啶-羧酸-甲基-氧代-二氧雜環(huán)戊烯基(dioxolyl)甲基、羥基甲基-哌啶基、(氨基甲基)-環(huán)己基、氨基-甲基-環(huán)己基、羥基-哌啶基-甲基、嗎啉基、氨基-環(huán)己基、羥基甲基-哌啶基、四氫-吡喃基、甲磺?；?丙基、氨基-甲基-丙基、氨基-環(huán)己基、氨基-甲基-環(huán)己基、(羥基-哌啶基)-丙基、哌啶基、氨基-丙基、嗎啉基-甲基、哌啶基、(叔-丁氧基羰基-嗎啉基)-甲基、芐基、咪唑基-乙基、哌啶基-乙基、甲氧基乙基、(二乙基氨基)-(甲氧基乙基)、吡咯烷基-乙基、乙酰胺和甲基。
在另-具體實(shí)施方案中，本發(fā)明包含式II的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽或立體異構(gòu)體， 其中X為直接鍵、-NR3-或-O-；Z為 或-NR7-；R2為芳基或被取代的芳基、雜芳基或被取代的雜芳基，R3、R4和R5獨(dú)立地選自氫、烷基和被取代的烷基；R6、R6a和R6b獨(dú)立地選自一或多個(gè)氫、鹵素、烷基、烷氧基、芳氧基、-CN、-NH2、-OH、-COOH、-CH2OR5、-CONHSO2R5、-CONR4R5、-NH烷基、-NHCO烷基、-NR4SO2烷基、-NR4SO2NR4R5、-OCONR4R5、-CF3和-OCF3，其中兩個(gè)可連接至相同的環(huán)碳原子上，條件是所得化合物為化學(xué)上穩(wěn)定的；R7為氫、烷基或-NH2，和n為0、1、2或3。
在另一具體實(shí)施方案中，本發(fā)明包含式III的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽或立體異構(gòu)體， 其中X為直接鍵、-NR3-或-O-；R2為芳基或被取代的芳基、雜芳基或被取代的雜芳基，
R3、R4和R5獨(dú)立地選自氫、烷基和被取代的烷基；R6、R6a和R6b獨(dú)立地選自一或多個(gè)氫、鹵素、烷基、烷氧基、芳氧基、-CN、-NH2、-OH、-COOH、-CH2OR5、-CONHSO2R5、-CONR4R5、-NH烷基、-NHCO烷基、-NR4SO2烷基、-NR4SO2NR4R5、-OCONR4R5、-CF3和-OCF3，其中兩個(gè)可連接至相同的環(huán)碳原子上，條件是所得化合物為化學(xué)上穩(wěn)定的；和n為0、1、2或3。
在另一具體實(shí)施方案中，本發(fā)明包含式III的化合物，其中R2為苯基、被取代的苯基、吡啶基、被取代的吡啶基、嘧啶基、被取代的嘧啶基、唑、被取代的唑、噻唑、被取代的噻唑、吡嗪基或被取代的吡嗪基；R6、R6a和R6b獨(dú)立地選自一或多個(gè)氫、-NH2、OH、烷氧基、-CONR4R5、-NR4SO2烷基、-NR4SO2NR4R5、-OCONR4R5、-NH烷基和-NHCO烷基；X為-NH-；和n為1或2。
本發(fā)明的優(yōu)選化合物包括下列5-[(4-氨基-1-哌啶基)甲基]-N-(3-氯-4-氟苯基)吡咯并[2，1-f][1，2，4]三嗪-4-胺，5-[(4-氨基-1-哌啶基)甲基]-N-2-萘基吡咯并[2，1-f][1，2，4]三嗪-4-胺，5-[(4-氨基-1-哌啶基)甲基]-N-苯基吡咯并[2，1-f][1，2，4]三嗪-4-胺，5-[(4-氨基-1-哌啶基)甲基]-N-(3-甲氧基苯基)吡咯并[2，1-f][1，2，4]三嗪-4-胺，5-[(4-氨基-1-哌啶基)甲基]-N-(3-乙炔基苯基)吡咯并[2，1-f][1，2，4]三嗪-4-胺，5-[(4-氨基哌啶-1-基)甲基]-N-(4-氟-3-甲氧基苯基)吡咯并[2，1-f][1，2，4]三嗪-4-胺，(3R，4R)-4-氨基-1-[[4-[(3-氯-4-氟苯基)氨基]吡咯并[2，1-f][1，2，4]三嗪-5-基]甲基]哌啶-3-醇，(3S，4S)-4-氨基-1-[[4-[(3-氯-4-氟苯基)氨基]吡咯并[2，1-f][1，2，4]三嗪-5-基]甲基]哌啶-3-醇，
(3R，4R)-4-氨基-1-[[4-[(3-甲氧基苯基)氨基]吡咯并[2，1-f][1，2，4]三嗪-5-基]甲基]哌啶-3-醇，(3S，4S)-4-氨基-1-[[4-[(3-甲氧基苯基)氨基]吡咯并[2，1-f][1，2，4]三嗪-5-基]甲基]哌啶-3-醇，(3R，4R)-4-氨基-1-[[4-[(3-甲氧基-4-氟苯基)氨基]吡咯并[2，1-f][1，2，4]三嗪-5-基]甲基]哌啶-3-醇，(3R，4R)-4-氨基-1-({4-[(3-乙炔基苯基)-氨基]吡咯并[2，1-f]-[1，2，4]-三嗪-5-基}-甲基)哌啶-3-醇，(3R，4R)-4-氨基-1-({4-[(3-乙氧基苯基)-氨基]-吡咯并[2，1-f]-[1，2，4]三嗪-5-基}-甲基)哌啶-3-醇(3R，4R)-4-氨基-1-{[4-(2-萘基氨基)-吡咯并[2，1-f][1，2，4]三嗪-5-基]甲基}哌啶-3-醇，(3R，4R)-4-氨基-1-({4-[(3-甲氧基-4-甲基-苯基)氨基]吡咯并[2，1-f][1，2，4]三嗪-5-基}-甲基)哌啶-3-醇，(3R，4R)-4-氨基-1-({4-[(3-溴苯基)氨基]吡咯并[2，1-f][1，2，4]-三嗪-5-基}甲基)-哌啶-3-醇，(3R，4R)-4-氨基-1-({4-[(3-氟-5-甲氧基-苯基)氨基]吡咯并[2，1-f][1，2，4]三嗪-5-基}-甲基)哌啶-3-醇，(3S，4R)-4-氨基-1-({4-[(3-甲氧基苯基)氨基]吡咯并[2，1-f][1，2，4]三嗪-5-基}甲基)哌啶-3-醇，(3R，4S)-4-氨基-1-({4-[(3-甲氧基苯基)氨基]吡咯并[2，1-f][1，2，4]三嗪-5-基}甲基)哌啶-3-醇，(3S，4R)-4-氨基-1-({4-[(3-氯苯基)氨基]-吡咯并[2，1-f][1，2，4]-三嗪-5-基}甲基)-哌啶-3-醇，(3S，4R)-4-氨基-1-({4-[(3-氯-4-氟-苯基)氨基]吡咯并[2，1-f][1，2，4]三嗪-5-基}-甲基)哌啶-3-醇，(3S，4R)-4-氨基-1-({4-[(3-乙炔基苯基)氨基]吡咯并[2，1-f][1，2，4]三嗪-5-基}甲基)哌啶-3-醇，(3R，4S)-4-氨基-1-({4-[(3-乙炔基苯基)-氨基]吡咯并[2，1-f][1，2，4]三嗪-5-基}甲基)哌啶-3-醇，(3R，4S)-4-氨基-1-({4-[(3-氯苯基)氨基]吡咯并[2，1-f][1，2，4]-三嗪-5-基}甲基)-哌啶-3-醇，(3R，4R)-4-氨基-1-({4-[(3-甲氧基苯基)氨基]吡咯并[2，1-f][1，2，4]三嗪-5-基}甲基)哌啶-3-基氨基甲酸酯，(3R，4R)-4-氨基-1-({4-[(3-乙炔基苯基)-氨基]吡咯并[2，1-f][1，2，4]三嗪-5-基}-甲基)哌啶-3-基氨基甲酸酯，(3R，4R)-4-氨基-1-({4-[(3-氯-4-氟-苯基)氨基]吡咯并[2，1-f][1，2，4]三嗪-5-基}-甲基)哌啶-3-基氨基甲酸酯，(3S，4R)-4-氨基-1-({4-[(3-氯-4-氟-苯基)氨基]吡咯并[2，1-f][1，2，4]三嗪-5-基}-甲基)哌啶-3-基氨基甲酸酯，(3S，4R)-4-氨基-1-({4-[(3-乙炔基苯基)-氨基]吡咯并[2，1-f][1，2，4]三嗪-5-基}-甲基)哌啶-3-基氨基甲酸酯，(3S，4R)-4-氨基-1-({4-[(3-甲氧基苯基)氨基]吡咯并[2，1-f][1，2，4]三嗪-5-基}甲基)-3-甲基哌啶-3-醇，(3R/S，5R/S)-4-氨基-1-({4-[(3-甲氧基苯基)氨基]吡咯并[2，1-f][1，2，4]三嗪-5-基}甲基)哌啶-3，5-二醇，(3S，5S)-4-氨基-1-({4-[(4-氟-3-甲氧基-苯基)氨基]吡咯并[2，1-f][1，2，4]三嗪-5-基}-甲基)哌啶-3，5-二醇，(3R，5R)-4-氨基-1-({4-[(3-乙炔基苯基)-氨基]吡咯并[2，1-f][1，2，4]三嗪-5-基}甲基)哌啶-3，5-二醇，5-{[(3R，4R)-4-氨基-3-甲氧基哌啶-1-基]甲基}-N-(3-甲氧基苯基)吡咯并[2，1-f][ 1，2，4]三嗪-4-胺，5-(((4aR，8aR)-rel-六氫-1H-吡啶并(pyrido)[3，4-b][1，4]嗪-6(7H)-基)甲基)-N-(3-甲氧基苯基)吡咯并[1，2-f][1，2，4]三嗪-4-胺，(3R，4R)-4-氨基-1-({4-[(3-甲氧基苯基)氨基]吡咯并[2，1-f][1，2，4]三嗪-5-基}甲基)-N-(甲基磺酰基)哌啶-3-甲酰胺，(3R，4R)-4-氨基-1-({4-[(3-乙炔基苯基)氨基]吡咯并[2，1-f][1，2，4]三嗪-5-基}甲基)-N-甲基哌啶-3-甲酰胺，(3R，4R)-4-氨基-1-({4-[(3-甲氧基苯基)氨基]吡咯并[2，1-f][1，2，4]三嗪-5-基}甲基)-N-甲基哌啶-3-甲酰胺，(3R，4R)-4-氨基-1-({4-[(3-甲氧基苯基)氨基]吡咯并[2，1-f][1，2，4]三嗪-5-基}甲基)哌啶-3-甲酰胺，
((3R，4R)-1-((4-(3-甲氧基苯基氨基)吡咯并[1，2-f][1，2，4]三嗪-5-基)甲基)-4-((R)-1-苯基乙基氨基)哌啶-3-基)甲醇，N-[(3R，4R)-4-氨基-1-({4-[(3-甲氧基苯基)氨基]吡咯并[2，1-f][1，2，4]三嗪-5-基}甲基)哌啶-3-基]脲，N-(3R，4R)-4-氨基-1-({4-[(3-甲氧基苯基)氨基]吡咯并[2，1-f][1，2，4]三嗪-5-基}甲基)哌啶-3-基]甲磺酰胺，和N-{(3S，4R)-4-氨基-1-({4-[(3-甲氧基苯基)氨基]吡咯并[2，1-f][1，2，4]三嗪-5-基}甲基)哌啶-3-基]甲磺酰胺，或其藥學(xué)上可接受的鹽。
下列為本說明書中所使用的術(shù)語的定義。除非另外指出，本文所提供的基團(tuán)或術(shù)語的最初定義單獨(dú)或作為其它基團(tuán)的一部分應(yīng)用于本說明書中。
術(shù)語″烷基″是指1至20個(gè)碳原子，優(yōu)選1至7個(gè)碳原子的直鏈或支鏈未被取代的烴基。術(shù)語″低級烷基″是指1至4個(gè)碳原子的未被取代的烷基。
術(shù)語″被取代的烷基″是指被例如一至四個(gè)如下列取代基所取代的烷基鹵素、羥基、烷氧基、氧代基、烷?；⒎佳趸?、烷酰氧基、氨基、烷基氨基、芳基氨基、芳烷基氨基、二取代的胺類，其中2個(gè)胺基取代基選自烷基、芳基或芳烷基；烷酰基氨基、芳酰基氨基、芳烷酰基氨基、被取代的烷酰基氨基、被取代的芳基氨基、被取代的芳烷?；被?、硫羥(thiol)、烷硫基、芳硫基、芳烷基硫基、烷基硫羰基、芳基硫羰基、芳烷基硫羰基、烷基磺酰基、芳基磺酰基、芳烷基磺酰基、磺酰胺基，例如SO2NH2，被取代的磺酰胺基、硝基、氰基、羧基、氨基甲?；?，例如CONH2、被取代的氨基甲?；鏑ONH烷基、CONH芳基、CONH芳烷基或其中在氮上有兩個(gè)選自烷基、芳基或芳烷基的取代基的情形；烷氧基羰基、芳基、被取代的芳基、胍基、雜環(huán)基例如吲哚基、咪唑基、呋喃基、噻吩基、噻唑基、吡咯烷基(pyrrolidyl)、吡啶基、嘧啶基、吡咯烷基(pyrrolidinyl)、哌啶基、嗎啉基、哌嗪基、高哌嗪基(homopiperazinyl)等等，和被取代的雜環(huán)基。其中上述取代基進(jìn)一步被烷基、烷氧基、芳基或芳烷基取代。
術(shù)語″鹵素″或″鹵代″是指氟、氯、溴和碘。
術(shù)語″芳基″是指在環(huán)部分具有6到12個(gè)碳原子的單環(huán)或雙環(huán)芳族烴基，例如苯基、萘基、聯(lián)苯基和二苯基，每個(gè)可被取代。
術(shù)語″芳烷基″是指通過烷基直接鍵合的芳基或被取代的芳基例如芐基。
術(shù)語″芳氧基″是指通過烷氧基(如甲氧基或乙氧基)直接鍵合的芳基或被取代的芳基。
術(shù)語″被取代的芳基″是指被例如一至四個(gè)下列取代基所取代的芳基如烷基、被取代的烷基、鏈烯基、被取代的鏈烯基、炔基、被取代的炔基、芳基、被取代的芳基、芳烷基、鹵基、三氟甲氧基、三氟甲基、羥基、烷氧基、烷酰基、烷酰氧基、芳氧基、芳烷氧基、氨基、烷基氨基、芳基氨基、芳烷基氨基、二烷基氨基、烷?；被⒘蛄u、烷硫基、脲基、硝基、氰基、羧基、羧基烷基、氨基甲?；?、烷氧基羰基、烷基硫羰基、芳基硫羰基、芳基磺?；贰⒒撬帷⑼榛酋；?、磺酰胺基、芳氧基等等。該取代基可進(jìn)一步被羥基、鹵基、烷基、烷氧基、鏈烯基、炔基、芳基或芳烷基取代。
術(shù)語″雜芳基″是指任意被取代的芳基，例如其為4至7員單環(huán)、7到11員二環(huán)，或10到15員三環(huán)環(huán)系，其具有包含至少一個(gè)雜原子和至少一個(gè)碳原子的環(huán)，例如，吡啶、四唑、吲唑。
術(shù)語″鏈烯基″是指2到20個(gè)碳原子，優(yōu)選2到15個(gè)碳原子，和最優(yōu)選2到8個(gè)碳原子的具有一到四個(gè)雙鍵的直鏈或支鏈烴基。
術(shù)語″被取代的鏈烯基″是指被例如一至兩個(gè)下列取代基所取代的鏈烯基如鹵基、羥基、烷氧基、烷?；?、烷酰氧基、氨基、烷基氨基、二烷基氨基、烷酰基氨基、硫羥、烷硫基、烷基硫羰基、烷基磺?；?、磺酰胺基、硝基、氰基、羧基、氨基甲?；?、被取代的氨基甲?；㈦一?、吲哚基、咪唑基、呋喃基、噻吩基、噻唑基、吡咯烷基、吡啶基、嘧啶基等等。
術(shù)語″炔基″是指2到20個(gè)碳原子，優(yōu)選2到15個(gè)碳原子，和最優(yōu)選2到8個(gè)碳原子的具有一到四個(gè)三鍵的直鏈或支鏈烴基。
術(shù)語″被取代的炔基″是指被例如下列取代基所取代的炔基如鹵基、羥基、烷氧基、烷?；⑼轷Ｑ趸?、氨基、烷基氨基、二烷基氨基、烷?；被?、硫羥、烷硫基、烷基硫羰基、烷基磺?；?、磺酰胺基、硝基、氰基、羧基、氨基甲?；⒈蝗〈陌被柞；?、胍基和雜環(huán)基，如咪唑基、呋喃基、噻吩基、噻唑基、吡咯烷基、吡啶基、嘧啶基等等。
術(shù)語″環(huán)烷基″是指任選被取代的飽和環(huán)烴環(huán)系統(tǒng)，優(yōu)選包含1到3個(gè)環(huán)和每個(gè)環(huán)為3到7個(gè)碳，其可進(jìn)一步與不飽和C3-C7碳環(huán)稠合。示例性的基團(tuán)包括環(huán)丙基、環(huán)丁基、環(huán)戊基、環(huán)己基、環(huán)庚基、環(huán)辛基、環(huán)癸基、環(huán)十二烷基和金剛烷基。示例性的取代基包括一或多個(gè)如上所述的烷基，或一或多個(gè)如上烷基取代基所述的基團(tuán)。
術(shù)語″雜環(huán)″、″雜環(huán)的″和″雜環(huán)基″是指任選被取代的完全飽和或不飽和的芳族或非芳族環(huán)基，例如，其為4到7員單環(huán)，7到11員二環(huán)，或10到15員的三環(huán)環(huán)系，其在至少一個(gè)含碳原子的環(huán)中具有至少一個(gè)雜原子。包含雜原子的雜環(huán)基的每個(gè)環(huán)可具有1、2或3個(gè)選自氮原子、氧原子和硫原子的雜原子，其中氮和硫雜原子也可任選被氧化，氮雜原子也可任選被季銨化。雜環(huán)基可連接于任何雜原子或碳原子上。
示例性的單環(huán)雜環(huán)基包括吡咯烷基、吡咯基、吲哚基、吡唑基、氧雜環(huán)丁基、吡唑啉基、咪唑基、咪唑啉基、咪唑烷基、唑基、唑烷基、異唑啉基、異唑基、噻唑基、噻二唑基、噻唑烷基、異噻唑基、異噻唑烷基、呋喃基、四氫呋喃基、噻吩基、二唑基、哌啶基、哌嗪基、2-氧代哌嗪基、2-氧代哌啶基、高哌嗪基、2-氧代高哌嗪基、2-氧代吡咯烷基、2-氧雜氮雜基(oxazepinyl)、氮雜?；?azepinyl)、4-哌啶酮基、吡啶基、N-氧代-吡啶基、吡嗪基、嘧啶基、噠嗪基、四氫吡喃基、嗎啉基、硫嗎啉基、硫嗎啉基亞砜(thiamorpholinyl sulfoxide)、硫嗎啉基砜(thiamorpholinyl sulfone)、1，3-二氧戊環(huán)(dioxolane)和四氫-1，1-二氧代噻吩基、二烷基、異噻唑烷基、硫雜環(huán)丁基(thietanyl)、硫雜環(huán)丙烷基(thiiranyl)、三嗪基和三唑基，等等。
示例性的二環(huán)雜環(huán)基包括2，3-二氫-2-氧代-1H-吲哚基、苯并噻唑基、苯并唑基、苯并噻吩基、奎寧環(huán)基、喹啉基、喹啉基-N-氧化物、四氫異喹啉基、異喹啉基、苯并咪唑基、苯并吡喃基、吲嗪基、苯并呋喃基、色酮基(chromonyl)、香豆素基(coumarinyl)、噌啉基、喹喔啉基、吲唑基、吡咯并吡啶基、呋喃并吡啶基(例如呋喃并[2，3-c]吡啶基、呋喃并[3，1-b]吡啶基]或呋喃并[2，3-b]吡啶基)、二氫異吲哚基、二氫喹唑啉基(例如3，4-二氫-4-氧代-喹唑啉基)、苯并異噻唑基、苯并異唑基、苯并二嗪基(benzodiazinyl)、苯并呋咱基(benzofurazanyl)、苯并噻喃基、苯并三唑基、苯并吡唑基、二氫苯并呋喃基、二氫苯并噻吩基、二氫苯并噻喃基、二氫苯并噻喃基砜(dihydrobenzothiopyranyl sulfone)、二氫苯并吡喃基、二氫吲哚基、吲唑基、異色滿基(isochromanyl)、異二氫氮雜茚基、1，5-二氮雜萘基(naphthyridinyl)、2，3-二氮雜萘基、胡椒基酰基、嘌呤基、吡啶并吡啶基、喹唑啉基、四氫喹啉基、噻吩并呋喃基、噻吩并吡啶基、噻吩并噻吩基等。
示例性的取代基包括一或多個(gè)如上所述的烷基或芳烷基，或一或多個(gè)如上所述作為烷基取代基的基團(tuán)。也包括較小的雜環(huán)基，例如環(huán)氧化物和氮雜環(huán)丙烷。
術(shù)語″碳環(huán)″是指3至7個(gè)碳原子的穩(wěn)定的飽和或部分不飽和單環(huán)烴環(huán)例如環(huán)丙基、環(huán)丁基、環(huán)戊基、環(huán)己基和環(huán)庚基。術(shù)語″任選被取代的″是指文中的″碳環(huán)″，其表示該碳環(huán)可在一或多個(gè)可取代環(huán)位置上被一個(gè)或多個(gè)獨(dú)立地選自下列的基團(tuán)所取代烷基(優(yōu)選低級烷基)、烷氧基(優(yōu)選低級烷氧基)、硝基、單烷基氨基(優(yōu)選低級烷基氨基)、二烷基氨基(優(yōu)選二[低級]烷基氨基)、氰基、鹵基、鹵代烷基(優(yōu)選三氟甲基)、烷?；被驶?、單烷基氨基羰基、二烷基氨基羰基、烷基酰氨基(優(yōu)選低級烷基酰氨基)、烷氧基烷基(優(yōu)選低級烷氧基[低級]烷基)、烷氧基羰基(優(yōu)選低級烷氧基羰基)、烷基羰基氧基(優(yōu)選低級烷基羰基氧基)和芳基(優(yōu)選苯基)，所述芳基任選被鹵基、低級烷基和低級烷氧基所取代。
術(shù)語″雜原子″將包括氧、硫和氮。
式I的化合物可形成鹽，其也是在本發(fā)明的范圍內(nèi)。藥學(xué)上可接受的(即無毒性的生理上可接受的)鹽為優(yōu)選，雖然其它鹽例如在分離或純化本發(fā)明的化合物中也是有用的。
式I化合物可與堿金屬例如鈉、鉀和鋰，與堿土金屬例如鈣和鎂，與有機(jī)堿例如二環(huán)己基胺、三丁胺、吡啶和氨基酸例如精氨酸、賴氨酸等形成鹽。這些鹽可按照本領(lǐng)域一般技術(shù)人員已知的方法形成。
式I化合物可與多種有機(jī)和無機(jī)酸形成鹽。這些鹽包括那些與氯化氫、溴化氫、甲磺酸、硫酸、乙酸、三氟乙酸、草酸、順丁烯二酸、苯磺酸、甲苯磺酸形成的鹽和各種其它的鹽(例如，硝酸鹽、磷酸鹽、硼酸鹽、酒石酸鹽、檸檬酸鹽、琥珀酸鹽、苯甲酸鹽、抗壞血酸鹽、水楊酸鹽等)。這些鹽可按照本領(lǐng)域一般技術(shù)人員已知的方法形成。
此外，可形成兩性離子(″內(nèi)鹽″)。
預(yù)料本發(fā)明化合物的所有立體異構(gòu)體為混合物或純的或基本上純的形式。根據(jù)本發(fā)明化合物的定義包含所有可能的立體異構(gòu)體和它們的混合物。其非常特別地包括消旋形式和具有特定活性的單獨(dú)的旋光異構(gòu)體。消旋形式可通過物理方法解析(resolved)，例如通過非對映異構(gòu)衍生物的分步結(jié)晶、分離或結(jié)晶，或者通過手性柱色譜法的分離。這些單獨(dú)的旋光異構(gòu)體可通過常規(guī)方法由外消旋物獲得，例如，與旋光性的酸形成鹽，接著結(jié)晶。
式I的化合物也可具有前藥形式。任何將在體內(nèi)被轉(zhuǎn)化以得到生物活性劑(也就是，式I的化合物)的化合物為本發(fā)明范圍和精神內(nèi)的前藥。
各種形式的前藥是本領(lǐng)域已知的。對于這些前藥衍生物的實(shí)例，參見a)Design of Prodrugs，edited by H.Bundgaard，(Elsevier，1985)andMethods in Enzymology，Vol.42，p.309-396，edited by K.Widder，et al.(Acamedic Press，1985)；b)A Textbook of Drug Design and Development，edited byKrosgaard-Larsen and H.Bundgaard，Chapter 5，“Design and Application ofProdrugs，”by H.Bundgaard，p.113-191(1991)；和c)H.Bundgaard，Advanced Drug Delivery Reviews，8，1-38(1992).
應(yīng)進(jìn)一步理解式I化合物的溶劑合物(例如水合物)也在本發(fā)明的范圍內(nèi)。溶劑化作用的方法一般是本領(lǐng)域已知的。
實(shí)用性本發(fā)明是基于某些吡咯并三嗪為蛋白激酶的抑制劑的發(fā)現(xiàn)。更詳細(xì)地說，例如那些在本發(fā)明中所描述的吡咯并三嗪類抑制受體的HER家族成員的蛋白酪氨酸激酶活性。這些抑制劑將可用于治療依賴于一種或多種這些受體產(chǎn)生信號的增殖疾病。這些疾病包括牛皮癬、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎和肺、頭和頸、乳房、結(jié)腸、卵巢和前列腺的實(shí)體瘤。本發(fā)明涉及式I化合物、或其藥學(xué)上可接受的鹽或水合物，以及藥學(xué)上可接受的載體在治療哺乳動(dòng)物的過增殖疾病(hyperproliferative disorder)的藥物組合物。特別地，該藥物組合物被預(yù)期抑制與HER1(EGF受體)和HER2有關(guān)的原發(fā)性和再發(fā)性實(shí)體瘤的生長，尤其是那些其生長和擴(kuò)散顯著地依賴HER1或HER2的腫瘤，例如包括膀胱、扁平細(xì)胞、頭、結(jié)腸直腸、食管、婦科(例如卵巢)、胰腺、乳房、前列腺、陰門(vulva)、皮膚、腦、生殖泌尿道、淋巴系統(tǒng)(例如甲狀腺)、胃、喉和肺的癌癥。在另一具體實(shí)施方案中，本發(fā)明的化合物也可用于非癌疾病例如牛皮癬和類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的治療。
因此根據(jù)本發(fā)明另外的方面，提供了式I的化合物、或其藥學(xué)上可接受的鹽在制造用于在溫血?jiǎng)游锢缛祟愔挟a(chǎn)生抗增殖效果的藥物中的用途。
因此根據(jù)本發(fā)明另外的方面，提供一種在需要該治療的溫血?jiǎng)游?如人類)中產(chǎn)生抗增殖效果的方法，所述方法包括將有效量的如本文所定義的式I化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽給藥于所述動(dòng)物。
由于其抑制HER1、HER2和HER4激酶的能力，本發(fā)明的化合物可用于治療增殖疾病，包括牛皮癬和癌。HER1受體激酶已顯示在許多包括頭和頸、前列腺、非小細(xì)胞肺、結(jié)腸直腸和乳癌的實(shí)體瘤中被表達(dá)和活化。同樣地，HER2受體激酶已經(jīng)顯示在乳腺癌、卵巢癌、肺癌和胃癌中過表達(dá)。向下調(diào)節(jié)HER2受體的豐度(abundance)或抑制通過HER1受體的信號的單克隆抗體已顯示在臨床前和臨床研究上具有抗腫瘤功效。因此預(yù)期HER1和HER2激酶的抑制劑將具有治療依賴于來自兩個(gè)受體的任一的信號的腫瘤的功效。此外，這些化合物將具有抑制依賴HER受體異二聚物信號的腫瘤的功效。這些化合物被預(yù)期作為單劑(single agent)或與其它化學(xué)治療劑例如Taxol、多柔比星(adriamycin)和順鉑組合(同時(shí)或順序地)具有功效。因?yàn)镠ER1和HER2信號已顯示調(diào)節(jié)血管生成因子例如血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)和白介素8(IL8)的表達(dá)，所以這些化合物被預(yù)期具有由于除了腫瘤細(xì)胞增殖和存活的抑制作用外的血管發(fā)生的抑制作用而產(chǎn)生的抗腫瘤功效。已顯示HER2受體涉及類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎中的滑膜細(xì)胞的過增生(hyperproliferation)，并可有助于炎性疾病狀態(tài)的血管發(fā)生成分(angiogenic component)。因此描述在本發(fā)明中的抑制劑被預(yù)期在治療類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎中是有效的。這些化合物抑制HER1的能力進(jìn)一步增加了它們作為抗血管發(fā)生劑的用途。參見下列的文件和其中所引用的參考文獻(xiàn)Schlessinger J.，“Cell signaling by receptortyrosine kinases”，Cell 103(2)，p.211-225(2000)；Cobleigh，M.A.，Vogel，C.L.，Tripathy，D.，Robert，N.J.，Scholl，S.，F(xiàn)ehrenbacher，L.，Wolter，J.M.，Paton，V.，Shak，S.，Lieberman，G.，and Slamon，D.J.，“Multinational study of theefficacy and safety of fhumanized anti-HER2monoclonal antibody in women whohave HER2-overexpressing metastatic breast cancer that has progressed afterchemotherapy for metastatic disease”，J.of Clin.Oncol.17(9)，p.2639-2648(1999)；Baselga，J.，Pfister，D.，Cooper，M.R.，Cohen，R.，Burtness，B.，Bos，M.，D’Andrea，G.，Seidman，A.，Norton，L.，Gunnett，K.，F(xiàn)alcey，J.，Anderson，V.，Waksal，H.，and Mendelsohn，J.，“Phase I studies of anti-epidermal growth factorreceptor chimeric antibody C225 alone and in combination with cisplatin”，J.Clin.Oncol.18(4)，p.904-914(2000)；Satoh，K.，Kikuchi，S.，Sekimata，M.，Kabuyama，Y.，Homma，M.K.，and Homma Y.，“Involvement of ErbB-2inrheumatoid synovial cell growth”，Arthritis Rheum.44(2)，p.260-265(2001).
之前在本文所定義的抗增殖治療可用作單獨(dú)治療(sole therapy)或除本發(fā)明化合物外，可包括一種或多種其它物質(zhì)及/或治療。這種聯(lián)合治療(conjointtreatment)可通過治療的個(gè)別成分的同時(shí)、順序(sequential)或分開給藥的方式完成。本發(fā)明的化合物也可與已知的抗癌劑和細(xì)胞毒素劑及治療包括輻射組合使用。如果配制成固定劑量，這些組合產(chǎn)物(combination products)使用在下述劑量范圍內(nèi)的本發(fā)明化合物和其它在其經(jīng)核準(zhǔn)的劑量范圍內(nèi)的藥學(xué)上的活性劑。當(dāng)組合制劑不適當(dāng)時(shí)，式I化合物可與已知的抗癌劑和細(xì)胞毒素劑及治療包括輻射順序地(sequentially)使用。
在醫(yī)學(xué)腫瘤學(xué)的領(lǐng)域中一般實(shí)踐為使用不同形式的治療的組合以治療每個(gè)癌癥病人。在醫(yī)學(xué)腫瘤學(xué)中，除了之前在本文所定義的抗增殖治療外，該聯(lián)合治療的其它成分可為外科手術(shù)、放射療法或化學(xué)療法。這些化學(xué)療法可包括三個(gè)主要種類的治療劑(i)通過與上述定義不同的機(jī)制作用的抗血管發(fā)生劑(例如，利諾胺(linomide)、整聯(lián)蛋白αvβ3功能的抑制劑、血管他丁(angiostatin)、雷佐生(razoxane))；(ii)細(xì)胞(生長)抑制劑(cytostatic agents)例如抗雌激素藥(例如他莫昔芬(tamoxifen)、托瑞米芬(toremifene)、雷洛昔芬(raloxifene)、屈洛昔芬(droloxifene)、吲哚昔芬(iodoxifene))、孕激素類(progestogens)(例如醋酸甲地孕酮(megestrol acetate)、芳香酶(aromatase)抑制劑(例如阿那曲唑(anastrozole)、來曲唑(letrozole)、伯拉唑(borazole)、依西美坦(exemestane))、抗激素(antihormones)、抗孕激素(antiprogestogens)、抗雄激素(antiandrogens)(例如氟他胺(flutamide)、尼魯米特(nilutamide)、比卡魯胺(bicalutamide)、醋酸環(huán)丙孕酮(cyproterone acetate))、LHRH激動(dòng)劑和拮抗劑(例如醋酸性瑞林(gosereline acetate)、醋酸亮丙瑞林(leuprolide))、睪酮5α-二氫還原酶的抑制劑(例如非那雄胺(finasteride))、法尼基轉(zhuǎn)移酶抑制劑、抗侵襲素(anti-invasion agents)(例如金屬蛋白酶抑制劑如馬立馬司他(marimastat)和尿激酶纖溶酶原激活物受體功能的抑制劑)和生長因子功能的抑制劑，(這些生長因子包括例如EGF、FGF、血小板衍生的生長因子和肝細(xì)胞生長因子，這些抑制劑包括生長因子抗體、生長因子受體抗體例如Avastin(貝伐單抗(bevacizurnab))和Erbitux(西妥昔單抗(cetuxirnab))；酪氨酸激酶抑制劑和絲氨酸/蘇氨酸激酶抑制劑)；和(iii)抗增殖/抗腫瘤藥和其組合(combinations)，如用于醫(yī)學(xué)腫瘤學(xué)，例如抗代謝物(例如抗葉酸劑(antifolates)例如甲氨蝶呤(methotrexate)、氟嘧啶類例如5-氟尿嘧啶、嘌呤和腺苷類似物、阿糖胞苷(cytosine arabinoside))；嵌入(intercalating)抗腫瘤抗生素類(例如蒽環(huán)類抗生素(anthracyclines)例如阿霉素(doxorubicin)、柔紅霉素(daunomycin)、表柔比星(epirubicin)和伊達(dá)比星(idarubicin)、絲裂霉素(mitomycin)-C、放線菌素D(dactinomycin)、普卡霉素(mithramycin))；鉑衍生物(例如順鉑(cisplatin)、卡鉑(Carboplatin))；烷化劑(例如氮芥、美法侖(melphalan)、苯丁酸氮芥(chlorambucil)、白消安(busulphan)、環(huán)磷酰胺、異環(huán)磷酰胺、亞硝基脲類(ifosfamide nitrosoureas)、塞替派(thiotepa)；抗(有絲分)裂劑(例如長春花生物堿(vinca alkaloids)像長春新堿(vincristine)、長春瑞濱(vinorelbine)、長春堿(vinblastine)和長春氟寧(vinflunine)和紫杉烷類(taxoids)例如Taxol(紫杉醇(paclitaxel)、Taxotere(多西紫杉醇(docetaxel))和比較新的微管劑(microbtubule agents)例如epothilone類似物、discodermolide類似物和eleutherobin類似物)；拓?fù)洚悩?gòu)酶(topoisomerase)抑制劑(例如表鬼臼毒素(epipodophyllotoxins)如依托泊苷(etoposide)和替尼泊苷(teniposide)、安吖啶(amsacrine)、托泊替康(topotecan)、伊立替康(irinotecan))；細(xì)胞周期抑制劑(例如flavopyridol)；生物反應(yīng)調(diào)節(jié)物和蛋白酶體(proteasome)抑制劑例如Velcade(bortezomib)。
如上所述，本發(fā)明的I式化合物感興趣的是它們的抗增殖效果。這些本發(fā)明的化合物被預(yù)期用于廣泛的疾病狀態(tài)，包括癌癥、牛皮癬和類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎。
更具體地，式I化合物可用于治療多種癌癥，包括(但不限于)下列-癌，包括膀胱癌、乳腺癌、結(jié)腸癌、腎臟癌、肝癌、肺癌(包括小細(xì)胞肺癌)、食道癌、膽囊癌、卵巢癌、胰腺癌、胃癌、子宮頸癌、甲狀腺癌、前列腺癌、和皮膚癌包括鱗狀細(xì)胞癌；-間充質(zhì)(Mesenchymal)起源的腫瘤，包括纖維肉瘤和橫紋肌肉瘤；-中樞神經(jīng)系統(tǒng)和周圍神經(jīng)系統(tǒng)的腫瘤，包括星形細(xì)胞瘤、成神經(jīng)細(xì)胞瘤、神經(jīng)膠質(zhì)瘤和神經(jīng)鞘瘤(schwannomas)；和
-其它的腫瘤，包括黑素瘤、精原細(xì)胞瘤、畸胎癌和骨肉瘤。
一般由于激酶在細(xì)胞增殖調(diào)節(jié)中的關(guān)鍵作用，抑制劑能夠充當(dāng)可用于治療任何以異常細(xì)胞增生為特征的疾病過程的可逆的細(xì)胞生長抑制劑，所述疾病過程例如良性前列腺增生、家族性腺瘤病息肉病(familial adenomatosispolyposis)、神經(jīng)纖維瘤病、肺纖維化、關(guān)節(jié)炎、牛皮癬、腎小球腎炎、血管成形術(shù)或血管手術(shù)后的再狹窄、肥大性瘢痕形成(hypertrophic scar formation)和炎性腸病。
式I的化合物尤其可用于治療酪氨酸激酶活性具有高度影響的腫瘤，例如結(jié)腸、肺和胰腺腫瘤。通過給藥本發(fā)明化合物的組合物(或組合(combination))，減少腫瘤在哺乳動(dòng)物宿主體內(nèi)的發(fā)展。
式I的化合物也可用于治療除癌癥以外的、與通過生長因子受體例如HER1(EGF受體)、HER2或HER4起作用的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑有關(guān)的疾病。
包含活性成分的本發(fā)明藥物組合物可為適合于口服使用的形式，例如，作為片劑、含片(troches)、錠劑、含水或含油懸浮液、分散性粉劑或粒劑、乳劑、硬或軟膠囊或糖漿劑或酏劑。意欲口服使用的組合物可根據(jù)任何制造藥物組合物的領(lǐng)域已知的方法制備，并且這些組合物可包含一種或多種選自甜味劑、調(diào)味劑、著色劑及防腐劑的試劑以便提供藥學(xué)上優(yōu)雅和美味的制劑。片劑包含與適合于片劑制造的非毒性藥學(xué)上可接受的賦形劑相混合的活性成分。這些賦形劑可為，例如惰性稀釋劑，例如碳酸鈣、碳酸鈉、乳糖、磷酸鈣或磷酸鈉；制粒及崩解劑，例如，微晶纖維素、交聯(lián)羧甲纖維素鈉、玉米淀粉或藻酸；粘合劑，例如淀粉、明膠、聚乙烯吡咯烷酮或阿拉伯膠，及潤滑劑，例如，硬脂酸鎂、硬脂酸或滑石。這些片劑可未被包衣(uncoated)或他們可通過已知技術(shù)包衣以遮蔽藥物的不悅味道或延遲在胃腸道中的崩解和吸收，由此提供較長期間的持續(xù)作用。例如，可使用水溶性味道遮蔽材料例如羥丙基-甲基纖維素或羥丙基-纖維素，或時(shí)間延遲材料例如乙基纖維素、丁酸乙酸纖維素(cellulose acetate buryrate)。
口服使用的制劑也可以硬明膠膠囊存在，其中活性成分與惰性固體稀釋劑例如碳酸鈣、磷酸鈣或高嶺土混合，或作為軟明膠膠囊存在，其中活性成分與水溶性載體例如聚乙二醇(polyethyleneglycol)或油介質(zhì)，例如花生油、液態(tài)石蠟或橄欖油混合。
含水懸浮液包含與適合于制造含水懸浮液的賦形劑相混合的活性物質(zhì)。這些賦形劑為助懸劑，例如羧甲基纖維素鈉、甲基纖維素、羥丙基甲基-纖維素、藻酸鈉、聚乙烯-吡咯烷酮、西黃蓍膠(gum tragacanth)和阿拉伯膠；分散或濕潤劑可為天然存在的磷脂，例如卵磷脂，或烯烴氧化物與脂肪酸的縮合產(chǎn)物，例如聚氧乙烯硬脂酸酯，或環(huán)氧乙烷與長鏈脂肪族醇的縮合產(chǎn)物，例如十七乙烯-氧基鯨蠟醇(heptadecaethylene-oxycetanol)，或環(huán)氧乙烷(ethylene oxide)與衍生自脂肪酸和己醣醇的部分酯例如聚氧乙烯山梨糖醇單油酸酯的縮合產(chǎn)物，或環(huán)氧乙烷與衍生自脂肪酸和己醣醇酐的部分酯例如聚乙烯去水山梨糖醇單油酸酯(polyethylene sorbitan monooleate)的縮合產(chǎn)物。含水懸浮液也可包含一種或多種防腐劑，例如對羥基苯甲酸乙酯或正-丙酯，一種或多種著色劑，一種或多種調(diào)味劑和一種或多種甜味劑，例如蔗糖、糖精或天冬甜素。
含油懸浮液可通過將活性成分懸浮在植物油例如花生油、橄欖油、芝麻油或椰子油中，或在礦物油例如液態(tài)石蠟中來配制。這些含油懸浮液可包含增稠劑，例如蜂蠟、硬石蠟或十六醇?？杉尤胩鹞秳├缒切┥衔乃龅?，和調(diào)味劑以得到美味的口服制劑。這些組合物可通過加入抗氧化劑例如丁基化羥苯甲醚(butylated hydroxyanisol)或α-生育酚防腐。
適合于通過加水制備的含水懸浮液的分散性粉劑和粒劑提供了與分散劑或濕潤劑、助懸劑和-種或多種防腐劑相混合的活性成分。示例性的合適分散劑或濕潤劑和助懸劑如上所述。也可存在另外的賦形劑，例如甜味劑、調(diào)味劑和著色劑。這些組合物可通過加入抗氧化劑例如抗壞血酸防腐。
本發(fā)明的藥物組合物也可為水包油型乳液的形式。油相可為植物油，例如橄欖油或花生油，或礦物油，例如液態(tài)石蠟或這些的混合物。合適的乳化劑可為天然存在的磷脂例如大豆磷脂，和衍生自脂肪酸和己醣醇酐的酯或部分酯例如去水山梨糖醇單油酸酯，及所述部分酯與環(huán)氧乙烷的縮合產(chǎn)物，例如聚氧乙烯去水山梨糖醇單油酸酯。這些乳液也可包含甜味劑、調(diào)味劑、防腐劑和抗氧化劑。
糖漿劑和酏劑可與甜味劑，例如甘油、丙二醇、山梨糖醇或蔗糖配制。這些制劑還可包含緩和劑、防腐劑、調(diào)味劑和著色劑及抗氧化劑。
藥物組合物可為無菌注射水溶液的形式。其中可使用的可接受的媒介物和溶劑為水、Ringer氏溶液和等滲氯化鈉溶液。
無菌可注射制劑也可為無菌可注射的水包油型微乳液，其中活性成分溶解在油相中。例如，可先將活性成分溶解在大豆油和卵磷脂的混合物中。然后將油溶液引入到水和甘油混合物中，并加工以形成微乳液。
可注射溶液或微乳液可通過局部的快速濃注(bolus injection)引進(jìn)至病人血流內(nèi)?；蛘?，以維持本發(fā)明化合物的恒定循環(huán)濃度的方式給予溶液或微乳液是有利的。為了維持該恒定的濃度，可利用連續(xù)靜脈內(nèi)的遞送裝置。該裝置的例子為Deltec CADD-PLUS.TM.型號5400靜脈內(nèi)泵的裝置。
這些藥物組合物可為肌內(nèi)和皮下給藥的滅菌注射水或油性懸浮液的形式。此懸浮液可依照已知的技術(shù)使用上述適當(dāng)?shù)姆稚┗驖駶檮┖椭鷳覄┡渲啤缇⑸渲苿┮部蔀樵诜嵌拘阅c胃外的可接受的稀釋劑或溶劑例如1，3-丁二醇溶液中的滅菌注射溶液或懸浮液。此外，常規(guī)使用的滅菌非揮發(fā)性油類(fixed oils)作為溶劑或懸浮介質(zhì)。為此目的可使用任何溫和的非揮發(fā)性油，包括合成的甘油單-或二酯。此外，發(fā)現(xiàn)脂肪酸例如油酸可用于制備注射劑。
式I的化合物還可以用于藥物直腸給藥的栓劑的形式給予。這些組合物可通過混合藥物與在常溫下為固體但在直腸溫度為液體且因此將在直腸熔化釋放藥物的適當(dāng)非刺激性賦形劑制備得到。這些材料包括可可脂、甘油明膠、氫化植物油類、各種分子量的聚乙二醇的混合物和聚乙烯二醇類的脂肪酸酯。
對于局部使用，使用包含式I的化合物的乳劑、軟膏劑、凝膠劑、溶液或懸浮液等。(為此施用目的，局部施用將包括口洗劑及含漱劑)。
本發(fā)明的化合物可通過適當(dāng)?shù)谋莾?nèi)媒介物(vehicles)和遞送裝置的局部使用以鼻內(nèi)形式，或通過經(jīng)皮途徑，使用本領(lǐng)域一般技術(shù)人員所熟知的經(jīng)皮皮膚貼片的形式給藥。為了以經(jīng)皮遞送系統(tǒng)的形式給藥，當(dāng)然，劑量給予在整個(gè)劑量服用法中將為連續(xù)的而非間斷的。本發(fā)明的化合物也可以使用基質(zhì)例如可可脂、甘油明膠、氫化植物油類、各種分子量的聚乙二醇的混合物和聚乙二醇類的脂肪酸酯的栓劑遞送。
當(dāng)將根據(jù)本發(fā)明的化合物給藥于人類患者時(shí)，每日劑量將正常地由主治醫(yī)師依照個(gè)別患者的年齡、體重、性別和反應(yīng)，以及患者癥狀的嚴(yán)重性而改變的一般通常劑量來決定。
如果配制成固定劑量，這些組合產(chǎn)物(combination products)使用在上述劑量范圍內(nèi)的本發(fā)明化合物和在其認(rèn)可的劑量范圍內(nèi)的其它藥學(xué)上的活性劑或治療。當(dāng)組合制劑(combination formulation)不適當(dāng)時(shí)，也可將式I的化合物與已知的抗癌劑或細(xì)胞毒素劑順續(xù)地給藥。本發(fā)明不限制給藥的順序；式I的化合物可在給予已知的抗癌劑或細(xì)胞毒素劑之前或之后給予。
化合物可以在約0.05至200mg/kg/天，優(yōu)選少于100mg/kg/天的劑量范圍內(nèi)，以單一劑量或2至4個(gè)分開劑量給藥。
生物學(xué)試驗(yàn)HER1、HER2或HER4激酶試驗(yàn)將感興趣的化合物在包含20mM Tris.HCl，pH7.5、10mM MnCl2、0.5mM二硫蘇糖醇、0.1mg/ml的牛血清白蛋白、0.1mg/ml的聚(glu/tyr，4∶1)，1μM ATP和4μCi/ml的[γ-33P]ATP的激酶緩沖液中測定。聚(glu/tyr，4∶1)為一種合成聚合物，其用作磷?；荏w，并購自Sigma Chemicals。該激酶反應(yīng)通過加入酶來啟動(dòng)，并將該反應(yīng)混合物在26℃下孵育1小時(shí)。該反應(yīng)通過加入EDTA至50mM來終止，并通過加入三氯乙酸至5％來沉淀蛋白。在Packard Unifilter板上過濾回收沉淀的蛋白，并在Topcount閃爍計(jì)數(shù)器中測量結(jié)合的放射性的量。
對于重組體HER1和HER4的制備，受體的細(xì)胞質(zhì)序列在昆蟲細(xì)胞中表達(dá)為GST融合蛋白，其通過親和色譜法純化。將HER2的細(xì)胞質(zhì)序列亞克隆(subcloned)至桿狀病毒表達(dá)載體pBlueBac4(Invitrogen)中，并在昆蟲細(xì)胞中表達(dá)為未標(biāo)記的蛋白。通過離子交換色譜法部分地純化重組蛋白質(zhì)。
本發(fā)明化合物具有在0.001到25μM之間的IC50值抑制HER1、HER2和HER4激酶。優(yōu)選的化合物具有在0.001-5.0μM之間的IC50值。更優(yōu)選的化合物具有在0.001-1.0μM之間的IC50值。最優(yōu)選化合物具有在0.001-0.1μM之間的IC50值。
制備方法通常，某些式I化合物可根據(jù)下列方案和本領(lǐng)域一般技術(shù)人員的知識制備得到。補(bǔ)充的制備信息還可見于在審的2000年5月18日提交的美國專利申請序號09/573,829和國際公開號WO 00/71129，兩者引入本文作為參考。
方案1
其中X＝鹵素，Y＝N或O，烷基＝CH3或nBu步驟1方案1的第一個(gè)步驟是通過用硫醇例如甲硫醇或丁硫醇或它們的鈉鹽在無水溶劑例如THF中在惰性氣氛例如N2下處理化合物i(參考WO 03/042172A2)以得到化合物ii而完成的。
步驟2化合物ii的5-甲基基團(tuán)的鹵化作用是通過用鹵化試劑例如N-溴琥珀酰亞胺處理而得到的。該反應(yīng)在惰性氣氛例如Ar氣下，在催化劑例如過氧化二苯甲?；?，2′-偶氮二異丁腈存在下完成，并得到5-鹵代甲基-吡咯并三嗪化合物iii。
步驟3將化合物iii用伯胺或仲胺或醇在堿例如NaHCO3或三乙胺或二異丙基乙胺存在下，在溶劑例如乙腈或N，N-二甲基甲酰胺中處理，得到中間體化合物iv。
步驟4將中間體化合物iv用苯胺在HgCl2存在下，在溶劑例如甲苯中處理，得到4-取代的吡咯并三嗪化合物v。
步驟5或者可將式iv化合物用合適的氧化劑例如間-氯過苯甲酸在溶劑例如CH2Cl2中處理，得到砜vi。
步驟6通過在惰性溶劑例如CH2Cl2中，用伯胺或仲胺或醇處理可將砜vi轉(zhuǎn)化為化合物v。
或者，通式I的化合物可按照方案2所示制備。
方案2 其中X＝鹵素，Y＝N或O步驟1方案2的第一個(gè)步驟是通過用鹵化試劑例如N-溴琥珀酰亞胺在惰性氣氛例如Ar氣下處理化合物i(參考WO 03/042172A2)而完成。該反應(yīng)在合適的溶劑例如CCl4中，在催化劑例如過氧化二苯甲?；?，2′-偶氮二異丁腈存在下完成，得到二鹵代吡咯并三嗪化合物vii。
步驟2化合物vii可通過在無水溶劑例如THF中用叔堿例如三乙胺處理而轉(zhuǎn)化成銨鹽化合物viii。
步驟3將化合物viii用胺或其陰離子在無水溶劑例如乙腈、氯仿或THF中處理，得到銨鹽化合物ix。
步驟4使化合物ix轉(zhuǎn)化為吡咯并三嗪化合物v可通過在堿例如二異丙基乙胺存在下，在溶劑例如乙腈中用伯胺或仲胺或醇處理化合物ix來完成。
通過上述方法制備的具有方案3中的通式x的化合物，其中5-甲基取代基包含保護(hù)基例如叔-丁氧基羰基，可在步驟1中通過用無水HCl的乙醚或1，4-二烷溶液處理或通過用三氟乙酸處理化合物的CH2Cl2溶液除去保護(hù)基而進(jìn)一步改性制備得到游離胺xi。進(jìn)一步的改性可在步驟2中通過在還原劑例如三乙酰氧基硼氫化鈉存在下，在溶劑例如CH2Cl2中用羰基化合物例如丙醛處理化合物xi以得到被取代的胺xii而完成。
方案3 更多的化合物可按照方案4所示制備。在步驟1中，可在堿例如二異丙基乙胺存在下于適當(dāng)溶劑例如乙腈中，將化合物ix用仲胺例如雙-(2-氯乙基)胺處理而得到化合物xii。在步驟2中化合物xii可進(jìn)一步用親核試劑例如肼處理而得到化合物xiii。
方案4 可根據(jù)方案5制備得到另外的5-取代的吡咯并三嗪。
方案5
步驟1可將化合物i在高溫下在溶劑例如CCl4中用兩當(dāng)量的溴化試劑例如N-溴琥珀酰亞胺處理?？蓪⑺玫?-二溴吡咯并三嗪在堿例如NaHCO3存在下，使用甲醇轉(zhuǎn)化成相應(yīng)的二甲基乙縮醛(dimethylacetal)，并然后在水存在下用酸例如三氟乙酸處理中間體乙酰醛而轉(zhuǎn)化成醛化合物xiv。
步驟2將醛化合物xiv用有機(jī)金屬試劑例如Grignard試劑在無水溶劑例如THF中處理，得到醇xv。
步驟3可在適當(dāng)溶劑例如乙腈中，在堿例如NaHCO3存在下，將醇xv用伯胺或仲胺或醇處理以得到式xvi化合物。
此外，其它的式I化合物可使用本領(lǐng)域一般技術(shù)人員通常已知的步驟制備。特別地，下列實(shí)施例提供了制備本發(fā)明化合物的另外的方法。
本發(fā)明現(xiàn)在將通過下列操作實(shí)施例進(jìn)一步描述，其為本發(fā)明的優(yōu)選具體實(shí)施方案。所有的溫度為攝氏度(℃)，除非另外指出?！癏PLC保留時(shí)間”為在下列條件下獲得的HPLC保留時(shí)間柱類型和長度，梯度時(shí)間[除非另外指出，否則所有的梯度都以100％溶劑A(10％MeOH，90％H2O，0.1％TFA)開始并以100％溶劑B(90％MeOH，10％H2O，0.1％TFA)結(jié)束]，流速(mL/min)。UV檢測總是在220nM進(jìn)行。這些實(shí)施例為說明而非限制性的，并且應(yīng)當(dāng)理解可有落在如所附權(quán)利要求所限定的本發(fā)明的精神和范圍內(nèi)的其它具體實(shí)施方案。
實(shí)施例15-[(4-氨基-1-哌啶基)甲基]-N-(3-氯-4-氟苯基)吡咯并[2，1-f][1，2，4]三嗪-4-胺
1A.5-甲基-4-甲硫基-吡咯并[2，1-f][1，2，4]三嗪的制備 在0℃下，將NaSMe(1.85g，26.3mmol)加入到以N2鼓泡(sparged)的4-氯-5-甲基-吡咯并[2，1-f][1，2，4]三嗪(4.02g，24.0mmol)(參考WO 03/042172A2)在無水THF(200毫升)中的溶液中。繼續(xù)鼓泡5分鐘。反應(yīng)混合物然后在室溫下攪拌過夜，在真空中濃縮至剩下約50毫升體積。以H2O(280毫升)稀釋并于0℃下攪拌。過濾固體，以冷水洗滌，干燥以得到1A(3.91g，91％)。其具有分析HPLC保留時(shí)間＝3.38分鐘。(YMC S5ODS柱4.6×50毫米，10-90％甲醇水溶液，包含0.2％磷酸，經(jīng)歷4分鐘，4毫升/分鐘，于220nm監(jiān)測)和LC/MS M++1＝180。
1B.[1-(4-甲硫基-吡咯并[2，1-f][1，2，4]三嗪-5-基甲基)-哌啶-4-基]-氨基甲酸叔-丁酯的制備 將1A(1.94g，10.8mmol)、過氧化二苯甲酰(0.262g，1.08mmol)、NBS(2.12g，11.90mmol)在CCl4(100毫升)中的混合物以N2鼓泡，然后立刻于85℃加熱1.5小時(shí)?；旌衔锢鋮s至室溫，并過濾掉沉淀物。濾液在真空中濃縮，以二氯乙烷(35毫升)稀釋，并加入DIEA(2.24毫升，12.96mmol)和哌啶-4-基-氨基甲酸叔-丁基酯(2.38g，11.90mmol)。反應(yīng)混合物在室溫下攪拌1小時(shí)?；旌衔镆燥柡蚇aHCO3(70毫升)稀釋，并用EtOAc(3×100毫升)萃取。合并的EtOAc萃取物以鹽水(1×100毫升)洗滌，干燥(MgSO4)，過濾并在真空中濃縮。殘余物通過硅膠快速柱純化以得到1B(2.87g，70％)(0.1％-2％MeOH-CH2Cl2)。其具有分析HPLC保留時(shí)間＝2.12分鐘。(YMC S5ODS柱4.6×50毫米，10-90％甲醇水溶液，包含0.2％磷酸，經(jīng)歷4分鐘，4毫升/分鐘，于220nm監(jiān)測)和LC/MS M++1＝378。
1C.5-溴甲基-4-氯-吡咯并[2，1-f][1，2，4]三嗪的制備 將4-氯-5-甲基-吡咯并[2，1-f][1，2，4]三嗪(2.0g，11.93mmol)(參考WO03/042172A2)和AIBN(195mg，1.19mmol)在CCl4(80毫升)中的混合物在N2下于100℃加熱5分鐘，加入NBS(2.55g，14.3mmol)。將反應(yīng)混合物攪拌10分鐘，然后冷卻至室溫，過濾。CCl4層以稀NaHCO3水溶液洗滌，干燥(MgSO4)，過濾并濃縮以得到1C(2.70g，92％)。
1D.(4-氯-吡咯并[2，1-f][1，2，4]三嗪-5-基甲基)-三乙基-銨溴化物的制備 將1C(2.7g，11mmol)、Et3N(5毫升，36mmol)在THF(20毫升)中的混合物于室溫下攪拌12小時(shí)。過濾固體，并以THF及Et2O沖洗，干燥以得到1D(3.38g，89％)。其具有分析HPLC保留時(shí)間＝0.776分鐘(ChromolithSpeedROD 4.6×50毫米，10-90％甲醇水溶液，包含0.1％TFA，經(jīng)歷4分鐘，4毫升/分鐘，于220nm監(jiān)測)和LC/MS M+＝267。
1E.[4-(3-氯-4-氟-苯基氨基)-吡咯并[2，1-f][1，2，4]三嗪-5-基甲基]-三乙基-銨溴化物鹽酸鹽的制備 將1C(1.0g，2.2mmol)和3-氯-4-氟-苯胺(418mg，2.87mmol)在CHCl3(10毫升)中的混合物于50℃加熱2小時(shí)。過濾固體，并以CHCl3沖洗，干燥以得到1E(1.24g，87.4％)。其具有分析HPLC保留時(shí)間＝2.19分鐘(ChromolithSpeedROD 4.6×50毫米，10-90％甲醇水溶液，包含0.1％TFA，經(jīng)歷4分鐘，4毫升/分鐘，于220nm監(jiān)測)和LC/MSM+＝376。
1F.{1-[4-(3-氯-4-氟-苯基氨基)-吡咯并[2，1-f][1，2，4]三嗪-5-基甲基]-哌啶-4-基}-氨基甲酸叔-丁酯的制備 方法一將1B(30mg，0.08mmol)、3-氯-4-氟-苯胺(11mg，0.08mmol)和HgCl2(24mg，0.088mmol)在甲苯(2毫升)中的混合物加熱回流8小時(shí)。冷卻至室溫，以EtOAc(5毫升)稀釋并過濾。濃縮濾液，及通過制備型HPLC純化殘余物以得到油1F。
方法二在70℃下，將1E(9.1g，18.4mmol)和DIPEA(3.2毫升，18.4mmol)在CH3CN(40毫升)中的混合物用40分鐘的時(shí)間逐滴加入到哌啶-4-基-氨基甲酸叔-丁基酯(4.1g，20.3mmol)在CH3CN(55毫升)中的懸浮液中。反應(yīng)混合物于70℃下攪拌1小時(shí)，然后冷卻至室溫，之后慢慢地加入H2O(155毫升)。過濾固體，并以15％CH3CN/H2O，然后用H2O沖洗，并在真空下干燥以得到1F(7.84g，90％)。其具有分析HPLC保留時(shí)間＝2.73分鐘(ChromolithSpeedROD 4.6×50毫米，10-90％甲醇水溶液，包含0.1％TFA，經(jīng)歷4分鐘，4毫升/分鐘，于220nm監(jiān)測)和LC/MS M++1＝475。
1G.5-[(4-氨基-1-哌啶基)甲基]-N-(3-氯-4-氟苯基)吡咯并[2，1-f][1，2，4]三嗪-4-胺的制備將化合物1F(得自方法一)于0℃用20％TFA/CH2Cl2(3毫升)處理，然后在室溫下攪拌2小時(shí)。濃縮反應(yīng)混合物并通過制備型HPLC純化以得到TFA鹽的產(chǎn)物，TFA鹽以飽和NaHCO3處理以得到游離堿1G(兩個(gè)步驟為4mg，13％)。其具有分析HPLC保留時(shí)間＝1.49分鐘(Chromolith SpeedROD 4.6×50毫米，10-90％甲醇水溶液，包含0.1％TFA，經(jīng)歷4分鐘，4毫升/分鐘，于220nm監(jiān)測)和LC/MS M++1＝375。
實(shí)施例25-[(4-氨基-1-哌啶基)甲基]-N-4-吡啶基吡咯并[2，1-f][1，2，4]三嗪-4-胺 將NaHMDS的THF溶液(722微升，0.722mmol)加入到吡啶-4-基胺(34mg，0.361mmol)在THF(500微升)中的混合物中?；旌衔锢鋮s到0℃并加入1D(125mg，0.27mmol)在DMF(800微升)中的懸浮液。混合物在此溫度下攪拌0.5小時(shí)，并將哌啶-4-基-氨基甲酸叔-丁基酯(144mg，0.72mmol)加至冷混合物中。反應(yīng)混合物于50℃加熱10分鐘并濃縮以除去THF。加入TFA(1毫升)，攪拌混合物直到保護(hù)基被除去(2小時(shí))(過程是通過HPLC監(jiān)測)。在真空中除去TFA，并加入飽和NaHCO3?；旌衔镆訣tOAc萃取，且干燥合并的萃取物，濃縮，并先用Et2O一起研磨以得到標(biāo)題化合物(46mg，53％)。分析HPLC保留時(shí)間＝0.51分鐘(Chromolith SpeedROD 4.6×50毫米，10-90％甲醇水溶液，包含0.1％TFA，經(jīng)歷4分鐘，4毫升/分鐘，于220nm監(jiān)測)和LC/MS M++1＝324。
實(shí)施例3-37 化合物3-37是使用與實(shí)施例2中的化合物相似的方法使用相應(yīng)的胺制備得到。




實(shí)施例38-121 方法一化合物(具有HPLC注解(a))是通過下列標(biāo)準(zhǔn)方法制備。
在1打蘭(dram)管形瓶中加入1D(55.0mg，0.16mmol)、苯胺(0.16mmol，1.0當(dāng)量)和CH3CN(1毫升)。混合物在65℃下振蕩過夜。向該混合物中加入哌啶-4-基-氨基甲酸叔-丁基酯(34.9mg，0.17mmol)，接著加入DIEA(28微升，16mmol)。將反應(yīng)于65℃繼續(xù)3小時(shí)。濃縮混合物；通過制備型HPLC純化殘余物，并收集和濃縮所需的級分(fraction)。所得殘余物在高真空下干燥過夜。
將CH2Cl2(1.5毫升)和TFA(0.2毫升)加入到上述殘余物中，并將反應(yīng)混合物在室溫下振蕩2小時(shí)。濃縮混合物，且在迅速真空(speed vacuum)中干燥過夜以得到固體產(chǎn)物。只有當(dāng)固體不純時(shí)，進(jìn)一步使用制備型HPLC。
方法二化合物(具有HPLC符號(b))是通過下列標(biāo)準(zhǔn)方法制備。
將1D(75mg，0.216mmol)和苯胺(1.0當(dāng)量，0.216mmol)在N，N-二甲基乙酰胺(0.5毫升)中的混合物在小管形瓶中于70℃下加熱3-5小時(shí)直到獲得透明溶液。使用HPLC來追蹤反應(yīng)的進(jìn)展。將反應(yīng)混合物冷卻至室溫，并加入哌啶-4-基-氨基甲酸叔-丁基酯(43mg，0.216mmol)，接著加入N，N-二異丙基乙胺(75微升)。將反應(yīng)混合物再次于70℃加熱過夜。一旦冷卻，將反應(yīng)混合物用CH2Cl2(0.5毫升)稀釋，并冷卻到0℃。加入TFA(1.0毫升)，并將混合物在環(huán)境溫度下攪拌過夜。在減壓(speedVac)下除去溶劑，并將殘余物溶于甲醇中，并通過制備型(Prep)HPLC純化以得到所要的產(chǎn)物。








HPLC條件(a)(YMC S5 ODS柱4.6×50毫米，10-90％甲醇水溶液，包含0.2％H3PO4，經(jīng)歷4分鐘，3毫升/分鐘，于220nm監(jiān)測)(b)(Chromolith SpeedROD 4.6×50毫米，10-90％甲醇水溶液，包含0.1％TFA，經(jīng)歷4分鐘，4毫升/分鐘，于220nm監(jiān)測)注解實(shí)施例97-99、101和104因重復(fù)已經(jīng)從表中刪除。
實(shí)施例122-132 化合物122-132是由化合物1D、3-氯-4-氟苯胺和相應(yīng)的胺或Boc保護(hù)的胺通過類似于制備化合物38-121所使用的途徑制備得到。

實(shí)施例1335-[(4-氨基-1-哌嗪基)甲基]-N-(3-氯-4-氟苯基)吡咯并[2，1-f][1，2，4]三嗪-4-胺 133A(5-{[雙-(2-氯-乙基)-氨基]-甲基}-吡咯并[2，1-f][1，2，4]三嗪-4-基)-(3-氯-4-氟-苯基)-胺的制備 將化合物1E(50mg，0.1mmol)、雙-(2-氯乙基)胺鹽酸鹽(18mg，0.1mmol)、DIEA(36微升，0.2mmol)在CH3CN(0.5毫升)中的混合物于60℃加熱3小時(shí)。將混合物冷卻至室溫并濃縮以得到化合物133A，其直接用于下一步驟。133A具有分析HPLC保留時(shí)間＝2.986分鐘(Chromolith SpeedROD 4.6×50毫米，10-90％甲醇水溶液，包含0.1％TFA，經(jīng)歷4分鐘，4毫升/分鐘，于220nm監(jiān)測)和LC/MS M++1＝416。
將得自最后步驟的粗品133A溶解在純凈無水的N2H4(0.5毫升)中，并于100℃加熱幾個(gè)小時(shí)。混合物冷卻至室溫，以H2O稀釋并用CH2Cl2萃取。合并的萃取物以鹽水洗滌，經(jīng)Na2SO4干燥，并在真空中濃縮。通過制備型HPLC純化殘余物，中和并萃取(用CH2Cl2)之后，得到化合物133(兩個(gè)步驟為38.8mg，100％)。分析HPLC保留時(shí)間＝1.709分鐘(Chromolith SpeedROD4.6×50毫米，10-90％甲醇水溶液，包含0.1％TFA，經(jīng)歷4分鐘，4毫升/分鐘，于220nm監(jiān)測)和LC/MS M++1＝376。
實(shí)施例134(3-氯-4-氟-苯基)-[5-(嗎啉-2-基甲氧基甲基)-吡咯并[2，1-f][1，2，4]三嗪-4-基]-胺 134A 2-(4-甲硫基-吡咯并[2，1-f][1，2，4]三嗪-5-基甲氧基甲基)-嗎啉-4-羧酸叔-丁酯的制備 將化合物1A(1.0g，5.6mmol)在CCl4(50毫升)中的溶液用氮?dú)鈨艋恍r(shí)。加入過氧化二苯甲酰(270mg，1.12mmol)，并將反應(yīng)混合物加熱到86℃。以一批加入N-溴琥珀酰亞胺(1.04g，5.88mmol)。30分鐘之后，將反應(yīng)冷卻到室溫并過濾。濃縮濾液，再溶解于甲苯(10毫升)中，并用2-羥基甲基-嗎啉-4-羧酸叔-丁酯(1.5g，6.9mmol)處理。將溶液于110℃加熱8小時(shí)，冷卻到室溫并濃縮。在二氧化硅(20％EtOAc/己烷)上進(jìn)行快速色譜法，得到淡黃色油的產(chǎn)物，靜置結(jié)晶(770mg，32％)。HPLC tR＝3.783分鐘(YMC S5ODS4.6×50毫米，10-90％甲醇水溶液，4分鐘梯度，于220nm監(jiān)測)。LC/MS(M+H)＝178。
134B 2-[4-(3-氯-4-氟-苯基氨基)-吡咯并[2，1-f][1，2，4]三嗪-5-基甲氧基甲基]-嗎啉-4-羧酸叔-丁酯的制備 將2-(4-甲硫基-吡咯并[2，1-f][1，2，4]三嗪-5-基甲氧基甲基)-嗎啉-4-羧酸叔-丁酯(60mg，0.15mmol)在CH2Cl2(3毫升)中的溶液冷卻到0℃，并用mCPBA(56mg，0.32mmol)的CH2Cl2(2毫升)溶液處理。將反應(yīng)于0℃攪拌15分鐘然后溫?zé)嶂潦覝亍?-氯-4-氟苯胺加入到此溶液中，并在室溫下攪拌一小時(shí)。將所得橙色溶液以CH2Cl2稀釋，并用飽和NaHCO3水溶液、然后用飽和NaCl水溶液洗滌。將有機(jī)層干燥(Na2SO4)，過濾并濃縮。經(jīng)制備型反相HPLC，得到所需的化合物(30mg，41％)。HPLC tR＝4.383分鐘(YMC S5ODS 4.6×50毫米，10-90％甲醇水溶液，4分鐘梯度，于220nm監(jiān)測)。LC/MS(M+H)＝492。
將134B(30mg，0.06mmol)的CH2Cl2(3毫升)溶液于0℃下用三氟乙酸(0.3毫升)通過滴加處理。將反應(yīng)攪拌兩個(gè)小時(shí)，然后以CH2Cl2稀釋，并以飽和NaHCO3水溶液洗滌。分離有機(jī)層，干燥(Na2SO4)，過濾并濃縮。將粗品化合物通過徑向色譜法(1毫米板，15％MeOH/CH2Cl2至30％MeOH/CH2Cl2)純化，得到化合物134(17mg，67％)。HPLC tR＝2.83分鐘(YMC S5ODS 4.6×50毫米，10-90％甲醇水溶液，4分鐘梯度，于220nm監(jiān)測)。LC/MS(M+H)＝392。
實(shí)施例1354-氨基-1-[[4-[(3-氯-4-氟苯基)氨基]吡咯并[2，1-f][1，2，4]三嗪-5-基]甲基]-(3R，4R)-rel-3-哌啶醇 化合物135A 向1，2，3，6-四氫吡啶(1.66g，20.0mmol)在無水CH2Cl2(10毫升)中的溶液中加入三乙胺(3.35毫升，24.0mmol)，隨后加入N-(芐氧基羰氧基)琥珀酰亞胺(5.23g，21.0mmol)的無水CH2Cl2(10毫升)溶液。將反應(yīng)混合物在室溫下攪拌過夜。反應(yīng)混合物以CH2Cl2(50毫升)稀釋，并以10％檸檬酸、飽和NaHCO3、鹽水洗滌，并經(jīng)無水Na2SO4干燥。在減壓下濃縮以得到4.34克的油狀物的化合物135A(100％)。分析HPLC保留時(shí)間＝2.996分鐘(ChromolithSpeedROD柱4.6×50毫米，10-90％甲醇水溶液，包含0.1％TFA，經(jīng)歷4分鐘，4毫升/分鐘，于254nm監(jiān)測)。
1H-NMR(CDCl3)7.20-7.35(m，5H)，5.88(bs，1H)，5.60-5.78(m，1H)，5.18(s，2H)，3.99(t，J＝2.64，2H)，3.59(t，J＝5.69，2H)，2.18(m，2H).
化合物135B 向冷卻至0℃的化合物135A(1.1g，5.0mmol)的無水CH2Cl2(10毫升)溶液中加入75％m-CPBA(1.38g，6.0mmol)在無水CH2Cl2(5毫升)中的溶液。反應(yīng)混合物于0℃下攪拌15分鐘，然后在室溫下攪拌3小時(shí)。將反應(yīng)混合物用CH2Cl2(20毫升)稀釋，并以飽和Na2S2O3、飽和NaHCO3、鹽水洗滌，并經(jīng)無水Na2SO4干燥。在減壓下濃縮以得到1.14克(98％)油狀物的化合物135B。分析HPLC保留時(shí)間＝2.279分鐘(Chromolith SpeedROD柱4.6×50毫米，10-90％甲醇水溶液，包含0.1％TFA，經(jīng)歷4分鐘，4毫升/分鐘，于254nm監(jiān)測)。
1H-NMR(CDCl3)7.20-7.36(m，5H)，5.05(s，2H)，3.80-3.96(m，1H)，3.70(m，1H)，3.47(m，1H)，3.22(bs，1H)，3.07-3.20(m，2H)2.00(m，1H)，1.87(m，1H).
化合物135C和135D
將疊氮化鈉(100mg，1.5mmol)在丙酮-水的2∶1混合物(2毫升)中的溶液加入到化合物135B(233mg，1.0mmol)在無水DMF(2毫升)中的溶液。將反應(yīng)混合物在80℃下加熱過夜。在減壓下除去溶劑，并將殘余物溶解在EtOAc(20毫升)中，用水、10％LiCl和鹽水洗滌，并經(jīng)無水Na2SO4干燥。在減壓下濃縮以得到油狀物。經(jīng)硅膠快速色譜法(己烷-乙酸乙酯8∶2到7∶3)，得到180mg油狀物的化合物135C(早先的洗脫液(early eluent)，主要的異構(gòu)體)和98mg油狀物的化合物135D(后面的洗脫液(late eluent)，次要的異構(gòu)體)。
化合物135C1H-NMR(CDCl3)7.28-7.40(m，5H)，5.10(s，2H)，4.14(dd，J1＝4.03，J2＝13.44，1H)，4.02(m，1H)，3.50(m，1H)，3.38(m，1H)，3.00(m，1H)，2.88(m，1H)，2.70和2.40(部份m，1H)，2.00(m，1H)，1.50(m，1H).
化合物135D1H-NMR(CDCl3)7.20-7.35(m，5H)，5.06(s，2H)，4.25和4.10(部份m，1H)，3.99(d，J＝13.44，1H)，3.50(m1，1H)，3.22(m，1H)，2.85(t，J＝2.69，1H)，2.73(m，1H)，2.40(m1，H)，1.90(m，1H)，1.45(m，1H).
化合物135E 將水(0.05毫升)及三苯基膦(340mg，1.3mmol)加到化合物135C(180mg，0.65mmol)在THF(5毫升)中的溶液中，并將反應(yīng)混合物加熱回流6小時(shí)。冷卻到室溫之后，將EtOAc(20毫升)加至反應(yīng)混合物中。有機(jī)層以1.0N HCl(10毫升x2)萃取，并將合并的水層用EtOAc(5毫升)回洗一次。將1.0N NaOH加至水層以使其成為pH10.0及混合物以EtOAc(20毫升×2)萃取。合并的有機(jī)層經(jīng)無水Na2SO4干燥。在減壓下濃縮以得到165mg無色油的胺中間體。
將三乙胺(0.11毫升，0.78mmol)，隨后Boc2O(156mg，0.72mmol)加到165mg胺中間體在無水CH2Cl2(4毫升)中的溶液中?；旌衔镌谑覝叵聰嚢柽^夜。將反應(yīng)混合物以CH2Cl2稀釋，并以飽和NaHCO3洗滌，并經(jīng)無水Na2SO4干燥。通過硅膠快速色譜法(己烷-EtOAc∶9∶1到8∶2)純化，得到170mg白色固體的化合物135E。分析HPLC保留時(shí)間＝2.859分鐘(ChromolithSpeedROD柱4.6×50毫米，10-90％甲醇水溶液，包含0.1％TFA，經(jīng)歷4分鐘，4毫升/分鐘，于254nm監(jiān)測)和aLC/MSM++1＝351+.1H-NMR(CDCl3)7.29-7.40(m，5H)，5.10(s，2H)，4.61(bs，1H)，4.32(bs，1H)，3.90-4.30(m，1H)，3.30-3.60(m，2H)，2.80(m，1H)，2.66(m，1H)，1.90(m，1H)，1.45(s，9H)，1.40(m，1H).
化合物135F 將化合物135E(170mg)在包含10mg Pd(OH)2的5毫升MeOH中的溶液在氫氣氛(氣瓶(balloon))下攪拌過夜。通過過濾除去催化劑，并以MeOH沖洗。將合并的濾液在減壓下濃縮以得到138mg的油狀化合物135F。分析HPLC保留時(shí)間＝1.270分鐘(Chromolith SpeedROD柱4.6×50毫米，10-90％甲醇水溶液，包含0.1％TFA，經(jīng)歷4分鐘，4毫升/分鐘，于220nm監(jiān)測)和LC/MS M++1＝217+。
化合物135G 化合物135G是通過與化合物135E相似的步驟由化合物135D制備。分析HPLC保留時(shí)間＝2.849分鐘(Chromolith SpeedROD柱4.6×50毫米，10-90％甲醇水溶液，包含0.1％TFA，經(jīng)歷4分鐘，4毫升/分鐘，于254nm監(jiān)測)。
1H-NMR(CDCl3)7.40-7.52(m，5H)，5.20(s，2H)，4.30(m，2H)，3.40(m，1H)，2.95(m，1H)，2.67(m，2H)，2.08(m，1H)，1.45-1.96(m，3H)，1.45(s，9H).
化合物135H 化合物135H是通過與化合物135F相似的步驟由化合物135G制備。分析HPLC保留時(shí)間＝1.380分鐘(Chromolith SpeedROD柱4.6×50毫米，10-90％甲醇水溶液，包含0.1％TFA，經(jīng)歷4分鐘，4毫升/分鐘，于220nm監(jiān)測)。
化合物135化合物135是通過與實(shí)施例1相似的方法使用化合物135F和1E制備?；衔?35為一種具有分析HPLC保留時(shí)間＝1.666分鐘(ChromolithSpeedROD柱4.6×50毫米，10-90％甲醇水溶液，包含0.1％TFA，經(jīng)歷4分鐘，4毫升/分鐘，于254nm監(jiān)測)和LC/MS M++1＝391+的固體。
1H-NMR(CDCl3)11.62(s，1H)，7.94(s，1H)，7.89(dd，J1＝2.60，J2＝6.61，1H)，7.48(d，J＝2.60，1H)，7.45(m，1H)，7.15(t，J＝8.72，1H)，6.51(d，J＝2.60，1H)，3.82(AB，J＝13.60，Δv＝26.94，2H)，3.33(m，1H)，3.25(m，1H)，3.08(d，J＝12.09，1H)，2.57(m，1H)，2.22(t，J＝12.03，1H)，2.05(m，1H)，1.97(m，1H)，1.43(m，1H).
或者，化合物135可按照如下所示制備。
化合物135J的制備 化合物135J是根據(jù)公開的文獻(xiàn)步驟Jacob Szmuszkovicz等人，Heterocycles，1994，39(1)，163-170制備。
化合物135K的制備
化合物135K是根據(jù)公開的文獻(xiàn)步驟Jacob Szmuszkovicz等人，Heterocycles，1994，39(1)，163-170制備。
化合物135L的制備 化合物135L以與化合物1C相似的方法由化合物135K制備。分析HPLC保留時(shí)間＝2.323分鐘(Chromolith SpeedROD柱4.6×50毫米，10-90％甲醇水溶液，包含0.1％TFA，經(jīng)歷4分鐘，4毫升/分鐘，于220nm監(jiān)測)。
1H-NMR(CDCl3)4.11(dd，J1＝3.09，J2＝13.29，1H)，3.95(m，1H)，3.50(m，1H)，3.38(m，1H)，2.90(m，1H)，2.79(dd，J1＝9.27，J2＝13.29，1H)，2.45(m，1H)，2.00(m，1H)，1.55(m，1H)，1.46(s，9H).
化合物135M的制備 將三氟乙酸(5毫升)加到化合物135L(0.6g，2.48mmol)在0℃下冷卻的無水CH2Cl2中的溶液中。反應(yīng)混合物于0℃下攪拌15分鐘，然后加溫到室溫且攪拌3小時(shí)。在減壓下除去溶劑和TFA，并將殘余物溶解于CH2Cl2(20毫升)中。有機(jī)層以飽和NaHCO3洗滌，并將水層以固體NaCl過飽和，及以EtOAc(15毫升×10)回萃取。將合并的有機(jī)萃取物經(jīng)無水Na2SO4干燥。在真空中濃縮以得到350mg的油狀化合物135M。1H-NMR(CDCl3+CD3OD)3.55(m，1H)，3.43(m，1H)，3.18(dd，J1＝3.95，J2＝12.63，1H)，3.07(d of t，J1＝12.90，J2＝4.78，1H)，2.74(m，1H)，2.63(dd，J1＝8.28，J2＝12.58，1H)，2.10(m，1H)，1.57(m，1H).
化合物135N的制備 將化合物135N以與實(shí)施例1中的化合物1F(使用方法二)相似的方法由化合物135M和實(shí)施例1的1E開始制備?；衔?35N為固體且具有分析HPLC保留時(shí)間＝2.099分鐘(Chromolith SpeedROD柱4.6×50毫米，10-90％甲醇水溶液，包含0.1％TFA，經(jīng)歷4分鐘，4毫升/分鐘，于254nm監(jiān)測)和LC/MS M++1＝417+。
將三苯基膦(262mg，1.0mmol)加到上述制備的化合物135N(0.5mmol)在THF(5毫升)和水(0.05毫升)的混合物中的溶液中。將反應(yīng)混合物加熱回流8小時(shí)。冷卻到室溫之后，在減壓下蒸發(fā)溶劑，并將殘余物直接地在硅膠上通過快速色譜法純化(CH2Cl2-MeOH-NH4OH95∶5∶0.5)以得到166mg固體的化合物135。
實(shí)施例1363-氨基-1-[[4-[(3-氯-4-氟苯基)氨基]吡咯并[2，1-f][1，2，4]三嗪-5-基]甲基]-(3R，4R)-rel-4-哌啶醇 化合物136以與實(shí)施例1相似的方法使用化合物135H和1E制備?；衔?36為固體，具有分析HPLC保留時(shí)間＝1.953分鐘(ChromolithSpeedROD柱4.6×50毫米，10-90％甲醇水溶液，包含0.1％TFA，經(jīng)歷4分鐘，4毫升/分鐘，于254nm監(jiān)測)和LC/MS M++1＝391+。
實(shí)施例1374-氨基-1-[[4-[(3-氯-4-氟苯基)氨基]吡咯并[2，1-f][1，2，4]三嗪-5-基]甲基]-(3R，4R)-(+)-rel-3-哌啶醇 實(shí)施例1384-氨基-1-[[4-[(3-氯-4-氟苯基)氨基]吡咯并[2，1-f][1，2，4]三嗪-5-基]甲基]-(3R，4R)-(-)-rel-3-哌啶醇 外消旋化合物135是使用正相手性制備型HPLC(ChiralpakAD)使用己烷-異丙醇-二乙胺(80∶20∶0.05)作為流動(dòng)相進(jìn)行解析。獲得以單一對映異構(gòu)體具有＞99％ee的化合物137(對映異構(gòu)體A)和化合物138(對映異構(gòu)體B)。
實(shí)施例139N-(3-氯-4-氟苯基)-5-[[4-[(2，2-二甲基丙基)氨基]-1-哌啶基]甲基]吡咯并[2，1-f][1，2，4]三嗪-4-胺
將冰醋酸(0.05毫升)、隨后3，3-二甲基丁醛(0.008毫升，0.073mmol)和三乙酰氧基硼氫化鈉(25mg，0.12mol)加到實(shí)施例1的化合物(19mg，0.05mmol)在CH2Cl2(1毫升)中的溶液中?；旌衔镌谑覝叵聰嚢?0小時(shí)。反應(yīng)混合物以CH2Cl2稀釋，以水、飽和NaHCO3、鹽水洗滌及經(jīng)無水Na2SO4干燥。在真空中濃縮接著經(jīng)硅膠快速色譜法(CH2Cl2-MeOH-NH4OH98∶2∶0.2到98∶5∶0.5)以得到油狀的化合物139。分析HPLC保留時(shí)間＝1.976分鐘(Chromolith SpeedROD柱4.6×50毫米，10-90％甲醇水溶液，包含0.1％TFA，經(jīng)歷4分鐘，4毫升/分鐘，于254nm監(jiān)測)和LC/MS M++1＝445+。
實(shí)施例140N-(3-氯-4-氟苯基)-5-[[4-(丙胺基)-1-哌啶基]甲基]-吡咯并[2，1-f][1，2，4]三嗪-4-胺 化合物140以與化合物139相似的方法由化合物1制備?；衔?40為固體且具有分析HPLC保留時(shí)間＝1.689分鐘(Chromolith SpeedROD柱4.6×50毫米，10-90％甲醇水溶液，包含0.1％TFA，經(jīng)歷4分鐘，4毫升/分鐘，于254nm監(jiān)測)和LC/MS M++1＝417+。
實(shí)施例1411-[[4-[(3-氯-4-氟苯基)氨基]吡咯并[2，1-f][1，2，4]三嗪-5-基]甲基]-4-哌啶醇
化合物141以與化合物1相似的方法由實(shí)施例1的1E制備?；衔?41為固體且具有分析HPLC保留時(shí)間＝1.803分鐘(Chromolith SpeedROD柱4.6×50毫米，10-90％甲醇水溶液，包含0.1％TFA，經(jīng)歷4分鐘，4毫升/分鐘，于254nm監(jiān)測)和LC/MS M++1＝376+。
實(shí)施例142反式-4-[4-(3-氯-4-氟-苯基氨基)-吡咯并[2，1-f][1，2，4]三嗪-5-基甲基]-環(huán)己醇 A.4-氯-吡咯并[2，1-f][1，2，4]三嗪-5-甲醛的制備 將4-氯-5-甲基-吡咯并[2，1-f][1，2，4]三嗪(1.68g，10mmole)在CCl4中的溶液以N2鼓泡20分鐘，然后加入NBS(3.74g，21mmole)接著加入過氧化二苯甲酰(242mg，1mmole)。將反應(yīng)混合物放進(jìn)100℃油浴內(nèi)并回流3小時(shí)。在冷卻至室溫之后，將其過濾及除去溶劑。將殘余物懸浮在CH3OH(100毫升)中并加入固體NaHCO3(5克)。激烈地?cái)嚢璺磻?yīng)混合物1小時(shí)，過濾及除去溶劑。將殘余油狀物再懸浮于DCM中，過濾，并濃縮以得到粗品的二甲基乙縮醛，其以DCM(20毫升)/H2O(20毫升)/TFA(1毫升)處理。在激烈地?cái)嚢?.5小時(shí)之后，將其以飽和NaHCO3水溶液中和，并用DCM萃取。干燥合并的萃取物(Na2SO4)，濃縮，并經(jīng)色譜法(以DCM洗脫的3×15cm硅膠柱)，得到固體的標(biāo)題化合物(1.02g，56％)。MS182(M+H)+；HPLC保留時(shí)間0.79分鐘(Xterra 3.0×50毫米S7柱，2分鐘梯度，5毫升/分鐘)；B.[4-(叔-丁基-二甲基-甲硅烷氧基)-環(huán)己基]-(4-氯-吡咯并[2，1-f][1，2，4]三嗪-5-基)-甲醇的制備 將反式-4-叔-丁基-二甲基甲硅烷氧基-環(huán)己基溴化鎂(Bioorg.and Med.Chem.，1996，6，201)在THF(4當(dāng)量)中的溶液慢慢地加到4-氯-吡咯并[2，1-f][1，2，4]三嗪-5-基)-甲醛(1.05克5.8mmole)在THF(15毫升)中的冰-冷卻的溶液中。在1小時(shí)之后，加入飽和的NH4Cl(15毫升)水溶液，并將水層以EtOAc/己烷(1∶1)(50毫升×2)萃取。將合并的有機(jī)萃取物通過Na2SO4干燥并在真空中濃縮。將粗物質(zhì)通過徑向色譜法(4毫米硅膠板，以0-15％EtOAc的DCM溶液進(jìn)行梯度洗脫)純化以得到標(biāo)題化合物189mg的順式-異構(gòu)體，496mg的反式-異構(gòu)體和415mg的混合物(總產(chǎn)率48％，順式反式的比為約1∶4)。順式-異構(gòu)體MS396(M+H)+；HPLC保留時(shí)間2.10分鐘(Xterra 3.0×50毫米S7柱，2分鐘梯度，5毫升/分鐘)；反式-異構(gòu)體MS396(M+H)+；HPLC保留時(shí)間2.08分鐘(Xterra 3.0×50毫米S7柱，2分鐘梯度，5毫升/分鐘)。
C.[4-(3-氯-4-氟-苯基氨基)-吡咯并[2，1-f][1，2，4]三嗪-5-基]-[4-(1-甲基-1-三甲基甲硅烷基-乙氧基)-環(huán)己基]-甲醇的制備 將反式-[4-(叔-丁基二甲基甲硅烷氧基)-環(huán)己基]-(4-氯-吡咯并[2，1-f][1，2，4]三嗪-5-基)-甲醇(840mg，2.13mmole)、3-氯-4-氟苯胺(309mg，2.13mmole)和NaHCO3(536mg，6.39mmole)在CH3CN(10毫升)中的混合物于70℃下加熱過夜。除去溶劑，并將殘余物懸浮在DCM中，以水洗滌，并經(jīng)Na2SO4干燥。除去溶劑，隨后經(jīng)徑向色譜法(4毫米硅膠板，以0-2％NH3在MeOH(2N)的DCM溶液中的溶液梯度洗脫)，得到固體的標(biāo)題化合物(612mg，57％)MS506(M+H)+；HPLC保留時(shí)間2.29分鐘(Xterra 3.0×50毫米S7柱，2分鐘梯度，5毫升/分鐘)。
D.反式-4-[4-(3-氯-4-氟-苯基氨基)-吡咯并[2，1-f][1，2，4]三嗪-5-基甲基]-己醇的制備將[4-(3-氯-4-氟-苯基氨基)-吡咯并[2，1-f][1，2，4]三嗪-5-基]-[4-(1-甲基-1-三甲基甲硅烷基-乙氧基)-環(huán)己基]-甲醇(448mg，0.887mmole)、三乙基甲硅烷(1.03g，8.87mmole)在TFA(8毫升)中的混合物在耐壓瓶中于N2、75℃下加熱過夜。除去溶劑，并將殘余物溶解在CH3OH(10毫升)中并加入固體Na2CO3(2.0克)。在激烈攪拌1小時(shí)之后，除去溶劑，并將殘余物在DCM(200毫升)和H2O(50毫升)之間分配。分離有機(jī)相，通過Na2SO4干燥，并除去溶劑。通過徑向色譜法(2毫米硅膠板，以0-4％NH3在MeOH(2N)的DCM溶液中的溶液梯度洗脫)純化，得到固體的標(biāo)題化合物(209mg，63％)MS375(M+H)+；HPLC保留時(shí)間1.49分鐘(Xterra 3.0×50毫米S7柱，2分鐘梯度，5毫升/分鐘)。
實(shí)施例143順式-4-[4-(3-氯-4-氟-苯基氨基)-吡咯并[2，1-f][1，2，4]三嗪-5-基甲基]-環(huán)己醇 同樣地，標(biāo)題化合物是由順式-{4-(叔-丁基二甲基甲硅烷氧基)-環(huán)己基]-(4-氯-吡咯并[2，1-f][1，2，4]三嗪-5-基)-甲醇制備375(M+H)+；HPLC保留時(shí)間1.56分鐘(Xterra 3.0×50毫米S7柱，2分鐘梯度，5毫升/分鐘)。
實(shí)施例1444-[4-(3-氯-4-氟-苯基氨基)-吡咯并[2，1-f][1，2，4]三嗪-5-基甲基]-環(huán)己酮 將順式-[4-(叔-丁基二甲基甲硅烷氧基)-環(huán)己基]-(4-氯-吡咯并[2，1-f][1，2，4]三嗪-5-基)-甲醇(53mg，0.14mmole)、4-甲基嗎啉N-氧化物(25mg，0.21mmole)、TPAP(5mg，0.1當(dāng)量)和粉化4A分子篩(100mg)在DCM(3毫升)中的溶液在N2下于RT攪拌。在5小時(shí)之后，將此溶液過濾，并除去溶劑。經(jīng)徑向色譜法(1毫米硅膠板，以0-5％NH3在MeOH(2N)的DCM溶液中的溶液梯度洗脫)，得到固體的標(biāo)題化合物(25mg，47％)MS373(M+H)+；HPLC保留時(shí)間1.50分鐘(Xterra 3.0×50毫米S7柱，2分鐘梯度，5毫升/分鐘)。
實(shí)施例1454-氨基-1-[4-(3-氯-4-氟-苯基氨基)-吡咯并[2，1-f][1，2，4]三嗪-5-基甲基]-環(huán)己醇 將粉化3A分子篩(24mg)、(10當(dāng)量)NH4OAc(48mg，0.06mmole)和NaCNBH3(4mg，0.06mmole)加到4-[4-(3-氯-4-氟-苯基氨基)-吡咯并[2，1-f][1，2，4]三嗪-5-基甲基]-4-羥基-環(huán)己酮(24mg，0.06mmole)在無水MeOH(0.5毫升)中的溶液中；將反應(yīng)在氮?dú)庀聰嚢?2小時(shí)。過濾反應(yīng)混合物，并加入15％NaOH溶液。10分鐘之后，將混合物以DCM(50毫升)稀釋并以水洗滌。干燥有機(jī)相(Na2SO4)并除去溶劑。將物質(zhì)通過制備型HPLC純化和分離以得到標(biāo)題化合物(3.5mg，15％)和順式異構(gòu)體(7.9mg，32％)。標(biāo)題化合物MS390(M+H)+；HPLC保留時(shí)間2.070分鐘(XTERRA 4.6×50毫米S5柱，3分鐘梯度，4毫升/分鐘)。順式異構(gòu)體MS390(M+H)+；HPLC保留時(shí)間2.190分鐘(XTERRA 4.6×50毫米S5柱，3分鐘梯度，4毫升/分鐘)。
實(shí)施例146(3R，4R)-4-氨基-1-[[4-[(3-甲氧基苯基)氨基]吡咯并[2，1-f][1，2，4三嗪-5-基]甲基]哌啶-3-醇 化合物146A和146B的制備(3R，4R)-4-疊氮基-3-羥基-哌啶-1-羧酸叔-丁酯(146A) (3S，4S)-4-疊氮基-3-羥基-哌啶-1-羧酸叔-丁酯(146B) 化合物146A和146B是由化合物135L通過使用正相手性制備型HPLC(Chiralpak AD)使用MeOH-EtOH(50∶50)作為流動(dòng)相的光學(xué)拆分獲得的?；衔?46A(第一個(gè)洗脫液)和化合物146B(第二個(gè)洗脫液)作為具有＞99％ee的單一對映異構(gòu)體的形式獲得?；衔?46A的絕對立體化學(xué)(3R，4R)是通過單一X射線結(jié)晶分析確定的。
化合物146C的制備
將三氟乙酸(10毫升)加到化合物146A(1.76g，7.26mmol)在無水CH2Cl2(15毫升)中的于0℃冷卻的溶液中。反應(yīng)混合物于0℃下攪拌15分鐘，然后加溫到室溫且攪拌3小時(shí)。在減壓下除去溶劑和TFA，并將殘余物與CH2Cl2共沸蒸發(fā)幾次，以得到TFA鹽形式的化合物146C。
化合物146D的制備 以與化合物146C相似的方法使用化合物146B制備TFA鹽形式的化合物146D。
化合物146E的制備 化合物146E是通過實(shí)施例105(使用方法一)相似的方法，由化合物146C替代哌啶-4-基-氨基甲酸叔-丁酯制備得到的?；衔?46E為固體且具有分析HPLC保留時(shí)間＝2.019分鐘(Chromolith SpeedROD柱4.6×50毫米，10-90％甲醇水溶液，包含0.1％TFA，經(jīng)歷4分鐘，4毫升/分鐘，于254nm監(jiān)測)和LC/MS M++1＝395+。
化合物146是通過化合物135相似的方法由化合物146E制備得到的?；衔?46為固體，具有分析HPLC保留時(shí)間＝1.213分鐘(ChromolithSpeedROD柱4.6×50毫米，10-90％甲醇水溶液，包含0.1％TFA，經(jīng)歷4分鐘，4毫升/分鐘，于254nm監(jiān)測)和LC/MS M++1＝369+?；衔?46的對映異構(gòu)體過量(ee)為＞99％(Chiralpak AD，250×4.6毫米10微米，EtOH-MeOH-Et2NH50∶50∶0.1)。
化合物146的替代性制備化合物146F的制備 將固體K2CO3(235克)加到1-甲基-1，2，3，6-四氫哌啶HCl鹽(227克)在570毫升水中的溶液中，并將混合物在室溫下攪拌30分鐘?；旌衔镆约妆?500毫升x3)萃取，并將合并的萃取物經(jīng)無水MgSO4干燥。過濾以除去MgSO4，并將濾液置于3-升三-頸RB燒瓶中。將K2CO3(22.7克)加至濾液中，并將混合物加熱到溫和回流(水浴溫度110℃)。通過加料漏斗(additional funnel)經(jīng)過2.5小時(shí)慢慢地加入氯甲酸乙酯(318毫升)(反應(yīng)急劇放熱因此大力地推薦慢慢地加入且磁性攪拌)。一旦加入完成，將混合物再回流2.0小時(shí)且冷卻到室溫。反應(yīng)混合物以水、鹽水洗滌，并經(jīng)無水MgSO4干燥。過濾并真空濃縮，得到188.6克(72％)的油狀化合物146F。1H-NMR(400MHz，CDCl3)。
化合物146G(外消旋)的制備
于0℃下將固體m-CPBA(386g，1.72mol，77％max)以小份(small portions)加到化合物146F(178.2g，1.15mol)在2升無水CH2Cl2中的溶液中。反應(yīng)混合物于0℃下攪拌1.0小時(shí)和然后在室溫下過夜。通過過濾除去沉淀物及濾餅以CH2Cl2洗滌。合并的濾液和洗滌液以20％Na2S2O3(3升×3)、飽和NaHCO3(3升×3)洗滌，并經(jīng)無水Na2SO4干燥。過濾接著在真空中濃縮，得到170克油狀的化合物146G。此物質(zhì)直接用于下一個(gè)反應(yīng)步驟中而沒有進(jìn)一步的純化。
化合物146H(手性)的制備 將化合物146G(140g，0.818mol)、NaN3(68.9g，1.06mol)和NH4Cl(56.7g，1.06mol)在乙醇(600毫升)和水(150毫升)中的混合物在70℃下加熱過夜。一旦冷卻到室溫，通過過濾除去固體并用乙醇沖洗。將合并的濾液在真空中濃縮到小體積(約80毫升)，然后以水(500毫升)稀釋且用EtOAc(500毫升×4)萃取。合并的萃取物經(jīng)無水Na2SO4干燥。過濾接著在真空中濃縮，通過硅膠快速色譜法(己烷-EtOAc 7∶3到6∶4)純化，得到下列級分(fractions)的油狀化合物146G∶80.7克的第一級分(AP＞98％)，22.7克的第二級分(AP92-95％)和15.8克的第三級分(AP＜60％)。此物質(zhì)直接用于下一個(gè)反應(yīng)步驟中而沒有進(jìn)一步的純化。合并第一和第二級分，并使用具有下列條件的手性制備型HPLC進(jìn)行光學(xué)拆分Chiralpak AD柱，以MeOH-EtOH(1∶1)洗脫。收集第一個(gè)洗脫峰(Rt＝5.605分鐘)，得到47.52克的化合物146H，具有＞99％ee。
化合物146I(手性)的制備 將KOH(112g，1.7mol，85％)在240毫升水中的溶液加到化合物146H(36.42g，0.17mol)在480毫升的EtOH中的溶液中?；旌衔锛訜峄亓?.0小時(shí)，并通過TLC監(jiān)測反應(yīng)進(jìn)展。一旦冷卻到室溫，在真空中濃縮混合物以得到漿狀物。加入固體NaCl及以EtOAc(500毫升×3)萃取混合物。合并的有機(jī)層經(jīng)無水Na2SO4干燥。過濾接著在減壓下除去溶劑以得到23克(77％)固體的粗化合物146I。與乙醚(250毫升)一起研磨以得到18.53克固體的化合物146I(AP99％)。在真空中濃縮母液，加入固體NaCl并進(jìn)一步以更多的EtOAc(250毫升×4)萃取以得到額外4.2克(AP＜85％)的粗化合物146I。
化合物146是按照制備化合物146E的步驟由化合物146I制備。
實(shí)施例147(3S，4S)-4-氨基-1-[[4-[(3-甲氧基苯基)氨基]吡咯并[2，1-f][1，2，4]三嗪-5-基]甲基]3-哌啶-3-醇 化合物147A的制備 化合物147A是通過實(shí)施例105(使用方法一)相似的方法，以化合物130D替代哌啶-4-基-氨基甲酸叔-丁酯制備?；衔?47A為固體且具有分析HPLC保留時(shí)間＝？分鐘(Chromolith SpeedROD柱4.6×50毫米，10-90％甲醇水溶液，包含0.1％TFA，經(jīng)歷4分鐘，4毫升/分鐘，于254nm監(jiān)測)和LC/MS M++1＝395+。
化合物147是通過化合物135相似的方法由化合物147A制備?；衔?47為固體，具有分析HPLC保留時(shí)間＝1.213分鐘(Chromolith SpeedROD柱4.6×50毫米，10-90％甲醇水溶液，包含0.1％TFA，經(jīng)歷4分鐘，4毫升/分鐘，于254nm監(jiān)測)和LC/MS M++1＝369+?；衔?47的對映異構(gòu)體過量(ee)為＞99％(Chiralpak AD，250×4.6毫米10微米，EtOH-MeOH-Et2NH50∶50∶0.1)。
實(shí)施例148(3R，4R)-4-氨基-1-[[4-[(3-甲氧基-4-氟苯基)氨基]吡咯并[2，1-f][1，2，4]三嗪-5-基]甲基]哌啶-3-醇 化合物148是通過化合物135相似的方法由化合物146C制備。化合物148為固體，具有分析HPLC保留時(shí)間＝1.187分鐘(Chromolith SpeedROD柱4.6×50毫米，10-90％甲醇水溶液，包含0.1％TFA，經(jīng)歷4分鐘，4毫升/分鐘，于254nm監(jiān)測)和LC/MS M++1＝387+?；衔?48的對映異構(gòu)體過量(ee)為＞99％(Chiralpak AD，250×4.6毫米10微米，EtOH-MeOH-Et2NH50∶50∶0.1)。
實(shí)施例149(3S，4S)-4-氨基-1-[[4-[(3-甲氧基-4-氟苯基)氨基]吡咯并[2，1-f][1，2，4]三嗪-5-基]甲基]-哌啶-3-醇 化合物149是通過化合物135相似的方法由化合物146D制備?；衔?49為固體，具有分析HPLC保留時(shí)間＝1.187分鐘(Chromolith SpeedROD柱4.6×50毫米，10-90％甲醇水溶液，包含0.1％TFA，經(jīng)歷4分鐘，4毫升/分鐘，于254nm監(jiān)測)和LC/MS M++1＝387+?；衔?49的對映異構(gòu)體過量(ee)為＞99％(Chiralpak AD，250×4.6毫米10微米，EtOH-MeOH-Et2NH50∶50∶0.1)。
實(shí)施例150-200化合物150-200(具有HPLC注解(b))如化合物146同樣地由146I制備。





aHPLC的2分鐘梯度時(shí)間。bHPLC(Phenom-prime S5C184.6×30毫米柱)的2分鐘梯度時(shí)間。
實(shí)施例201rac-(3S，4R)-4-氨基-1-({4-[(3-甲氧基苯基)氨基]吡咯并[2，1-f][1，2，4]三嗪-5-基}甲基)哌啶-3-醇
201A4-疊氮基-3-氧代哌啶-1-羧酸(±)-叔-丁酯的制備 將無水DMSO(0.28毫升，3.79mmole)于-78℃在氬氣下加至乙二酰氯(0.172毫升，1.96mmol)在6毫升無水CH2Cl2中的攪拌溶液中。10分鐘之后，逐滴加入化合物135L(396mg，1.63mmol)在4.5毫升的無水CH2Cl2中的溶液，并將反應(yīng)混合物于-78℃攪拌30分鐘。加入三乙胺(1.38毫升，10.0mmol)且使反應(yīng)混合物加溫到室溫。加入2.0毫升的pH 7.0緩沖液及以CH2Cl2(x3)萃取混合物。合并的有機(jī)層以鹽水洗滌，并經(jīng)無水Na2SO4干燥。真空中濃縮以得到油狀的粗品201A，其直接用于下一個(gè)反應(yīng)步驟中。1H-NMR(400MHz，CDCl3)4.30(d，J＝17.84，1H)，4.05(m，1H)，3.90-4.00(m 1H)，3.45(m，1H)，2.85(m，1H)，2.33(m，1H)，1.86(m，1H)，1.47(s，9H).
201B.4-疊氮基-3-羥基哌啶-1-羧酸(±)-叔-丁酯的制備 將L-Selectride(在THF中的1.0M，0.98毫升，0.98mmol)加到上述制備的化合物201A在無水THF(2毫升)中的于-78℃冷卻的溶液中?；旌衔镉?78℃攪拌2.0小時(shí)。加入飽和NH4Cl(2毫升)，且使反應(yīng)混合物加溫到室溫?；旌衔镆运♂?，并以EtOAc(3x)萃取。合并的有機(jī)層以鹽水洗一次并經(jīng)無水Na2SO4干燥。在真空中濃縮接著通過硅膠快速色譜法(己烷-EtOAc 4∶1)以得到44mg的油狀化合物201B。
1H-NMR(400mHz，CDCl3)3.84(m，1H)，3.69(m，1H)，3.58(m，2H)，3.40(m，1H)，3.30(m，1H)，1.96(m，1H)，1.73(m，1H)，1.46(s，9H).201C.(±)-4-疊氮基哌啶-3-醇的制備 將化合物201B(44mg，0.18mmol)以CH2Cl2和TFA的混合物(1∶1，2毫升)處理30分鐘。在減壓下除去揮發(fā)性物質(zhì)，并將殘余物與庚烷-CH2Cl2一起共沸蒸發(fā)三次以得到TFA鹽的化合物201C，在沒有步驟進(jìn)一步純化下將其直接用于下一個(gè)反應(yīng)中。
201D的制備 化合物201D是通過化合物146E相似的方法由化合物201C制備為固體。其具有分析HPLC保留時(shí)間＝1.795分鐘(Chromolith SpeedROD 4.6×50毫米，10-90％甲醇水溶液，包含0.1％TFA，經(jīng)歷4分鐘，4毫升/分鐘，于220nm監(jiān)測)和LC/MS M+＝395。
化合物201以與化合物146相似的方法由化合物201D制備。其具有分析HPLC保留時(shí)間＝1.169分鐘(Chromolith SpeedROD 4.6×50毫米，10-90％甲醇水溶液，包含0.1％TFA，經(jīng)歷4分鐘，4毫升/分鐘，于220nm監(jiān)測)和LC/MS M+＝369。
實(shí)施例202A和202B(3S，4R)-4-氨基-1-({4-[(3-甲氧基苯基)氨基]吡咯并[2，1-f][1，2，4]三嗪-5-基}甲基)哌啶-3-醇(對映異構(gòu)體A，手性)
和(3R，4S)-4-氨基-1-({4-[(3-甲氧基苯基)氨基]吡咯并[2，1-f][1，2，4]三嗪-5-基}甲基)哌啶-3-醇(對映異構(gòu)體B，手性) 化合物202A(15mg)和化合物202B(15mg)是通過使用下列方法的化合物201(30mg)的光學(xué)拆分獲得使用6.0毫升/分鐘流速的梯度的己烷-異丙醇-二乙胺(50∶50∶0.1)洗脫和在220nm檢測的Chiralpak AD手性制備型柱。第一個(gè)洗脫峰對應(yīng)于具有ee％≥98％的化合物202A(保留時(shí)間＝4.337分鐘)；第兩個(gè)洗脫峰對應(yīng)于具有ee％≥98％的化合物202B(保留時(shí)間＝6.050分鐘)。
實(shí)施例203(3S，4R)-4-氨基-1-({4-[(3-甲基苯基)氨基]吡咯并[2，1-f][1，2，4]三嗪-5-基}甲基)哌啶-3-醇(手性) 化合物203A和203B(手性)的制備
和 將196.5毫升的48％HBr通過加料漏斗逐滴加到化合物146G(100g，0.585mol)在2升氯仿中的于-60℃冷卻的溶液中，同時(shí)保持內(nèi)部溫度在-60℃以下。一旦加入完成，將反應(yīng)混合物于-60℃再攪拌1.0小時(shí)。使反應(yīng)混合物加溫到室溫，并以水(1升×2)、鹽水(1升)洗滌，并經(jīng)無水MgSO4干燥。過濾接著真空中濃縮以得到134.2克(91％)的油狀粗品化合物(外消旋混合物203A和203B)。
1H-NMR(400MHz，CDCl3)4.25(m，1H)，4.15(q，J＝7.10，2H)，4.00(m，1H)，3.90(bs，1H)，3.75(m，1H)，2.85-3.15(m，2H)，2.32(m，1H)，2.00(m，1H)，1.28(t，J＝7.10，3H).
化合物203A和203B是通過正相手性制備型HPLC(Chirlapak AD)使用CH3CN作為流動(dòng)相由上述外消旋混合物的光學(xué)拆分獲得。54.77克的化合物203B(第一個(gè)洗脫液，Rt＝5.861分鐘)和53.71克的化合物203A(第兩個(gè)洗脫液，Rt＝8.719分鐘)以具有＞99％ee的單一對映異構(gòu)體獲得。化合物203B的絕對立體化學(xué)(3R，4S)是根據(jù)化合物203的單一X射線結(jié)晶分析確定的。
化合物203C(手性)的制備 將咪唑(21.8g，0.32mol)，接著將叔-丁基二甲基甲硅烷基氯化物(38.5g，0.258mol)于0℃加到化合物203A(53.7g，0.213mol)在250毫升DMF中的溶液中。反應(yīng)混合物在環(huán)境溫度下攪拌過夜。于0℃下將乙醚(1升)接著將水(1升)加至反應(yīng)混合物中。分開有機(jī)層。水層以乙醚(1升×2)萃取，并將合并的有機(jī)層以10％LiCl(750毫升×3)洗滌，經(jīng)無水MgSO4干燥。過濾接著在真空中濃縮以得到油狀的粗品化合物203C，其沒有進(jìn)一步純化而直接使用。
化合物203D(手性)的制備
化合物203D是通過化合物203C相似的方法由化合物203B制備。
化合物203E(手性)的制備 將NaN3(15.3g，0.234mol)加到化合物203C(0.213mol)在300毫升DMSO中的溶液中，并將混合物于85℃下加熱12個(gè)小時(shí)。加入額外NaN3(15.0g，0.230mol)，并將反應(yīng)混合物加熱過夜。一旦冷卻到室溫，將冰水加至反應(yīng)混合物中且以乙醚(1升×3)萃取。合并的有機(jī)層以鹽水(1升)洗滌一次并經(jīng)無水MgSO4干燥。過濾接著在真空中濃縮以得到油狀的粗化合物203E，其沒有進(jìn)一步的純化而直接使用。
化合物203F(手性)的制備 化合物203F是通過化合物203E相似的方法由化合物203D制備。
化合物203G(手性)的制備
將上述制備的化合物203E(0.213mol)和TBAFXH2O(67g，0.255mol)在200毫升THF中的混合物在室溫下攪拌3.0小時(shí)。加入乙醚(1升)且混合物以水(IL)洗滌。水相以乙醚(1升×2)萃取。合并的有機(jī)層以水(1升)洗滌一次并經(jīng)無水MgSO4干燥。真空中濃縮，接著經(jīng)硅膠快速色譜法(CH2Cl2-EtOAc4∶1)，得到29.8克的油狀化合物203G。經(jīng)第二個(gè)硅膠快速色譜法(己烷-EtOAc6.5∶3.5)以得到20克(44％)的油狀化合物203G。
1H-NMR(400MHz，CDCl3)4.15(q，J＝7.10，2H)，3.86(bs，1H)，3.70(bs，1H)，3.65(m，1H)，3.47(dd，J＝3.20，J＝13.62，1H)，3.35(m，1H)，2.02(m，1H)，1.79(bs，1H)，1.28(t，J＝7.10，3H).
化合物203H(手性)的制備 化合物203H是通過化合物203G相似的方法由化合物203F制備。
化合物203I(手性)的制備 化合物203I是通過化合物146I相似的方法由化合物203G制備。化合物203I為一種具有≥99ee％的固體。
1H-NMR(400MHz，CDCl3)3.80(m，1H)，3.44(m，1H)，3.04(m，2H)，2.72(m，1H)，2.69(m，1H)，1.90(m，1H)，1.75(m，1H).
化合物203J(手性)的制備 化合物203J是通過化合物146I相似的方法由化合物203H制備?；衔?03J為一種具有≥99ee％的固體。
化合物203是通過化合物146相似的方法由化合物1B、間-甲基苯胺和化合物203I制備。其具有分析HPLC保留時(shí)間＝1.278分鐘(ChromolithSpeedROD 4.6×50毫米柱，10-90％甲醇水溶液，包含0.1％TFA，經(jīng)歷4分鐘，4毫升/分鐘，于220nm監(jiān)測)和LC/MS M++1＝353。
實(shí)施例204-211化合物204-211(具有HPLC注解(b))如化合物146所使用，由化合物1B、相應(yīng)的苯胺和化合物203I類似地制備。

實(shí)施例212-219化合物212-219(具有HPLC注解(b))如化合物146所使用，由化合物1B、相應(yīng)的苯胺和化合物203J類似地制備。

實(shí)施例220(3R，4R)-4-氨基-1-({4-[(3-甲氧基苯基)氨基]吡咯并[2，1-f][1，2，4]-三嗪-5-基}甲基)-哌啶-3-基氨基甲酸酯
化合物220A(手性)的制備 將三氯乙?；惽杷狨?0.075毫升，0.6mmol)加到化合物146A(121mg，0.5mmol)在1毫升無水CH2Cl2中的于0℃冷卻的溶液中。反應(yīng)混合物于0℃下攪拌1.0小時(shí)。加入MeOH(0.5毫升)及在真空中濃縮反應(yīng)混合物以得到泡沫狀的粗化合物220A。
1H-NMR(400MHz，CDCl3)8.35(bs，1H)，4.67(bs，1H)，3.90(m，1H)，3.65(m，2H)，3.25(m，2H)，2.02(m，1H)，1.60(m，1H)，1.38(s，9H).
化合物220B(手性)的制備 20％K2CO3水溶液的溶液(2毫升)加到220A(0.5mmol)在3毫升無水MeOH中的溶液中，并將反應(yīng)混合物在室溫下攪拌2.0小時(shí)。加水(15毫升)及通過旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)除去MeOH。混合物以EtOAc(x2)萃取，并經(jīng)無水Na2SO4干燥。在真空中濃縮以得到油狀的粗220B。1H-NMR(400MHz，CDCl3)4.70(bs，2H)，4.50(m，1H)，3.90(bs，1H)，3.68(m，1H)，3.50(m，1H)，3.03(m，1H)，1.90(m，1H)，1.50(m，1H)，1.38(s，9H).
化合物220C(手性)的制備 將220B(0.5mmol)在5毫升無水CH2Cl2和5毫升TFA中的混合物于0℃攪拌1.0小時(shí)。在真空中濃縮混合物，與CH2Cl2-MeOH-己烷共沸蒸發(fā)幾次，并在高真空下干燥以得到油狀的粗220C。
化合物220D(手性)的制備 化合物220D以與化合物146E相似的方法由化合物220C制備。其具有分析HPLC保留時(shí)間＝1.793分鐘(Chromolith SpeedROD 4.6×50毫米，10-90％甲醇水溶液，包含0.1％TFA，經(jīng)歷4分鐘，4毫升/分鐘，于220nm監(jiān)測)和LC/MS M+＝438。
化合物220以與化合物146相似的方法由化合物220D制備。其具有分析HPLC保留時(shí)間＝1.310分鐘(Chromolith SpeedROD 4.6×50毫米，10-90％甲醇水溶液，包含0.1％TFA，經(jīng)歷4分鐘，4毫升/分鐘，于220nm監(jiān)測)和LC/MS M+＝412。
實(shí)施例221-227化合物221-227(具有HPLC注解(b))是如化合物146，由化合物1B、相應(yīng)的苯胺和化合物220C類似地制備。

實(shí)施例229(3R，4S)-4-氨基-1-({4-[(3-甲氧基苯基)氨基]吡咯并[2，1-f][1，2，4]三嗪-5-基}甲基)哌啶-3-基氨基甲酸酯
229A.化合物229A(手性)的制備 化合物229A是通過化合物135E步驟2相似的方法由化合物203I制備。
229B.化合物229B(手性)的制備 化合物229B是通過化合物220A相似的方法由化合物229A制備。
229C.化合物229C(手性)的制備 化合物229C是通過化合物220B相似的方法由化合物229B制備。
229D.化合物229D的制備
化合物229D是通過化合物220C相似的方法由化合物229C制備。
化合物229是通過化合物146相似的方法由化合物229D制備。其具有分析HPLC保留時(shí)間＝1.229分鐘(Chromolith SpeedROD 4.6×50毫米，10-90％甲醇水溶液，包含0.1％TFA，經(jīng)歷4分鐘，4毫升/分鐘，于220nm監(jiān)測)和LC/MS M+＝412。
實(shí)施例230-236 化合物230-236(具有HPLC注解(b))是如化合物146，由化合物1B、相應(yīng)的苯胺和化合物229D類似地制備。

實(shí)施例237(3R，4R)-4-氨基-1-({4-[(3-甲氧基苯基)氨基]吡咯并[2，1-f][1，2，4]三嗪-5-基}甲基)-3-甲基哌啶-3-醇(手性，對映異構(gòu)體A) 化合物237A(外消旋)的制備
在室溫下將固體NaHCO3(4.2g，49mmol)、接著將氯甲酸甲酯(9.3毫升，120mmol)通過注射器逐滴加到N-芐基四氫吡啶(100mmol)在150毫升苯中的溶液中。反應(yīng)混合物加熱回流3小時(shí)。在冷卻到室溫之后，在減壓下蒸發(fā)除去揮發(fā)性物質(zhì)，并將殘余物溶解在EtOAc(100毫升)中，并以水(20毫升×2)，0.5M HCl(20毫升)和鹽水(20毫升)洗滌，并經(jīng)無水MgSO4干燥。在真空中濃縮反應(yīng)混合物及在高真空下(bp.42-50℃/2毫米汞柱，浴溫75-80℃)進(jìn)一步除去殘余的芐基氯以得到粘稠的漿狀物化合物237A。經(jīng)硅膠快速色譜法(己烷-EtOAc9.5∶0.5到9∶1)，得到11.77克(產(chǎn)率76％)油狀的化合物237A。
1H-NMR(400MHz，CDCl3)5.52(bs，1H)，3.78(m，2H)，3.70(s，3H)，3.46(m，2H)，2.08(m，2H)，1.68(s，3H).
化合物237B(外消旋)制備 將化合物237A(775mg，5.0mmol)和m-CPBA(1.21g，7.0mmol，77％max)在10毫升無水CH2Cl2中的混合物在室溫下攪拌過夜。通過過濾除去沉淀物，并將濾液以10％Na2S2O3、飽和NaHCO3和鹽水洗滌，并經(jīng)無水MgSO4干燥。在真空中濃縮，得到油狀的粗化合物237B。
1H-NMR(400MHz，CDCl3)3.65-3.75(m，2H)，3.68(s，3H)，3.60(m，1H)，3.33(m，2H)，3.12(m，1H)，2.07(m，1H)，1.92(m，1H)，1.35(s，3H).
化合物237C(外消旋)制備
將NaN3(810mg，12.4mmol)在10毫升丙酮-H2O的2∶1混合物中加到化合物237B(5.0mmol)在10毫升DMF中的溶液中，并將混合物于80℃下加熱過夜。冷卻至室溫之后，加入EtOAc及以水，10％LiCl水溶液洗滌混合物且經(jīng)無水Na2SO4干燥。在真空中濃縮以得到1.09克油狀的化合物237C。
1H-NMR(400MHz，CDCl3)3.70(s，3H)，3.72(m，1H)，3.50(m，2H)，3.35(m，1H)，3.20(bs，1H)，2.03(m，1H)，1.63(m，1H)，1.20(s，3H).
化合物237D(外消旋)制備 將化合物237C(428mg，2.0mmol)和150mg的Pd(OH)2在10毫升MeOH中的混合物在氫氣下(氣瓶)攪拌4.0小時(shí)。通過過濾除去催化劑及在真空中濃縮濾液以得到粗殘余物。
將殘余物溶解在5毫升無水CH2Cl2中，向其中加入Boc2O(460mg，2.10mmol)和三乙胺(0.334毫升，2.40mmol)。在室溫下攪拌過夜之后，以CH2Cl2稀釋反應(yīng)混合物，并以10％檸檬酸、飽和NaHCO3洗滌并干燥(Na2SO4)。在真空中濃縮接著經(jīng)硅膠快速色譜法(己烷-EtOAc7∶3到1∶1)以得到330mg油狀的237D。
1H-NMR(400MHz，CDCl3)4.78(m，1H)，3.90-4.40(m，3H)，3.70(s，3H)，3.60(m，1H)，2.70-3.00(m，2H)，1.80(m，1H)，1.45(s，9H)，1.40(m，1H)，1.10(s，3H).
化合物237E(外消旋)制備
化合物237E是通過化合物146I相似的方法由化合物237D制備。
化合物237F(外消旋)制備 化合物237F是通過化合物1D相似的方法由化合物237E制備。
化合物237G(外消旋)制備 化合物237G是通過化合物1E相似的方法由化合物237F制備。其具有分析HPLC保留時(shí)間＝1.262分鐘(Chromolith SpeedROD 4.6×50毫米，10-90％甲醇水溶液，包含0.1％TFA，經(jīng)歷4分鐘，4毫升/分鐘，于220nm監(jiān)測)和LC/MS M++1＝383。
化合物237是通過手性制備型HPLC分離(Chiralpak AD，250×4.6毫米，10微米，以EtOH/MeOH/DEA 50∶50∶0.1洗脫)由237G以具有ee％≥99％的第一個(gè)峰(Rt＝5.390分鐘)獲得。其具有分析HPLC保留時(shí)間＝1.51分鐘(Chromolith SpeedROD 4.6×50毫米柱，10-90％甲醇水溶液，包含0.1％TFA，經(jīng)歷4分鐘，4毫升/分鐘，于220nm監(jiān)測)和LC/MS M++1＝383。
實(shí)施例238(3S，4R)-4-氨基-1-({4-[(3-甲氧基苯基)氨基]吡咯并[2，1-f][1，2，4]三嗪-5-基}甲基)-3-甲基哌啶-3-醇(手性，對映異構(gòu)體B) 化合物238是通過手性制備型HPLC分離(Chiralpak AD，250×4.6毫米，10微米，以EtOH/MeOH/DEA 50∶50∶0.1洗脫)由237G以具有ee％≥99％的第二個(gè)峰(Rt＝8.523分鐘)獲得。其具有分析HPLC保留時(shí)間＝1.51分鐘(Chromolith SpeedROD 4.6×50毫米柱，10-90％甲醇水溶液，包含0.1％TFA，經(jīng)歷4分鐘，4毫升/分鐘，于220nm監(jiān)測)和LC/MS M++1＝383。
實(shí)施例239(3R，4R，5S)-4-氨基-1-({4-[(3-甲氧基苯基)氨基]吡咯并[2，1-f][1，2，4]三嗪-5-基}甲基)哌啶-3，5-二醇 239A.(±)-乙基3-乙酰氧基-4-溴哌啶-1-羧酸酯的制備 將化合物203A/B(外消旋混合物)(107g，371mmol)和乙酸酐(101毫升)在165毫升的無水吡啶中的混合物在室溫下攪拌2.0小時(shí)。在減壓下除去溶劑，并將殘余物以水稀釋，并以K2CO3堿化?；旌衔镆月确螺腿?250毫升×3)，并將合并的萃取物以水洗滌，并經(jīng)無水MgSO4干燥。在真空中濃縮，得到油狀的粗239A。
1H-NMR(400MHz，CDCl3)4.90(bs，1H)，4.13(q，J＝7.08，2H)，4.10(m，1H)，3.89(m，1H)，3.60(m，1H)，3.50(m，2H)，2.34(m，1H)，2.08(s 3H)，1.93(m，1H)，1.27(t，J＝7.80，3H).
239B.(±)-乙基5-乙酰氧基-5，6-二氫吡啶-1(2H)-羧酸酯的制備 將化合物239A(371mmol)和DBU(92g，604mmol)的混合物于90-110℃加熱30分鐘。冷卻至室溫之后，混合物以甲苯稀釋，并攪拌額外30分鐘。通過過濾除去沉淀物并用甲苯?jīng)_洗。合并的濾液以1.0N HCl、水洗滌，并經(jīng)無水MgSO4干燥。在真空中濃縮，得到67.56克(產(chǎn)率85.4％)油狀的239B。
1H-NMR(400MHz，CDCl3)6.00(bs，1H)，5.90(bs，1H)，5.20(m，1H)，4.20(q，J＝7.08，2H)，4.19(m，1H)，3.85(m，1H)，3.80(m，1H)，3.55(m，1H)，2.08(s，3H)，1.28(t，J＝7.08，3H).
239C.(±)-乙基5-羥基-5，6-二氫吡啶-1(2H)-羧酸酯的制備 將0.2N NaOH在EtOH(65毫升)中的溶液加到化合物239B(10.5g，49.2mmol)在30毫升EtOH中的溶液中，并將混合物在0℃下攪拌30分鐘。加溫到室溫之后，反應(yīng)混合物以冰醋酸中和。在真空中濃縮，得到8.5克油狀的239C。
1H-NMR(400MHz，CDCl3)5.90(m，1H)，5.82(bs，1H)，4.20(bs，1H)，4.18(q，J＝7.08，2H)，4.04(m，1H)，3.85(m，1H)，3.55(m，2H)，1.28(t，J＝7.08，3H).
239D.(±)-乙基5-(叔-丁基二甲基甲硅烷氧基)-5，6-二氫吡啶-1(2H)-羧酸酯的制備 將咪唑(9.5g，140.0mmol)和叔-丁基二甲基甲硅烷基氯化物(15.5g，102.8mmol)于0℃加到化合物239C(16g，93.5mmol)在150毫升無水CH2Cl2中的溶液中，并將混合物在環(huán)境溫度下攪拌過夜。將反應(yīng)混合物于0℃以乙醚(500毫升)和水(1升)稀釋。分離有機(jī)相，并以10％LiCl(150毫升×3)洗滌，經(jīng)無水MgSO4干燥。在真空中濃縮，接著經(jīng)快速色譜法(己烷-EtOAc15∶1到10∶1)，得到25.2克(產(chǎn)率94.4％)油狀的239D。
239E.(±)-乙基5-羥基-7-氧雜-3-氮雜-雙環(huán)[4.1.0]庚烷-3-羧酸酯的制備 將固體m-CPBA(39.6g，176.6mmol，77％max)于0℃下以小批加到化合物239D(25.2g，88.3mmol)在250毫升CH2Cl2中的溶液中，同時(shí)使內(nèi)部溫度在加入期間保持在0℃以下?；旌衔镉?℃下攪拌30分鐘然后在室溫下4.0小時(shí)。以小批加入更多固體m-CPBA(39.6g，176.6mmol，77％max)及混合物在室溫下攪拌三天。通過過濾除去沉淀物，并將濾液以20％Na2S2O3(500毫升×3)、飽和NaHCO3(500毫升×3)和鹽水(250毫升)洗滌，經(jīng)無水Na2SO4干燥。通過硅膠快速色譜法(己烷-EtOAc9.5∶0.5到9∶1)純化，得到4.33克的油狀239E(低Rf)。
239F.(±)-乙基5-(叔-丁基二甲基甲硅烷氧基)-7-氧雜-3-氮雜-雙環(huán)[4.1.0]
庚烷-3-羧酸酯的制備 化合物239F是通過化合物239E相同的反應(yīng)由239D制備，為油狀物。
239G.(±)-乙基5-羥基-7-氧雜-3-氮雜-雙環(huán)[4.1.0]庚烷-3-羧酸酯的制備 將TBAF(17.2毫升，17.2mmol)在THF中的溶液加到化合物239E(4.33g，14.4mmol)在10毫升的無水THF中的溶液中?；旌衔镌谑覝叵聰嚢柽^夜。加水及以EtOAc(100毫升×3)萃取反應(yīng)混合物。合并的有機(jī)層以鹽水洗滌，并通過Na2SO4干燥。在真空中濃縮接著經(jīng)硅膠快速色譜法(己烷-EtOAc1∶1到1∶2)，得到2.01克(產(chǎn)率74.5％)油狀的239G。
1H-NMR(400MHz，CDCl3)4.13(q，J＝7.08，2H)，4.05(m，1H)，3.80(m，1H)，3.70(d，J＝10.15，1H)，3.62(m，1H)，3.45(m，2H)，3.13(dd，J＝10.15，J＝7.63，1H)，2.40及2.25(部份，1H)，1.27(t，J＝7.08，3H).
239H.(±)-乙基5-羥基-7-氧雜-3-氮雜-雙環(huán)[4.1.0]庚烷-3-羧酸酯的制備 將TBAF(67.6毫升，67.6mmol)在THF中的溶液加到化合物239F(13.6g，45.1mmol)在10毫升無水THF中的溶液中?；旌衔镌谑覝叵聰嚢柽^夜。加水及反應(yīng)混合物以EtOAc萃取(250毫升×3)。合并的有機(jī)層以鹽水洗滌，并經(jīng)無水Na2SO4干燥。在真空中濃縮接著經(jīng)硅膠快速色譜法(己烷-EtOAc1∶1到1∶2)，得到6.03克(產(chǎn)率75％)油狀的239H。
1H-NMR(400MHz，CDCl3)4.15(m，1H)，4.13(q，J＝7.08，2H)，3.95(m，1H)，3.75(m，1H)，3.52(m，1H)，3.32(m，1H)，3.25(m，2H)，3.10及2.55(部份，1H)，1.27(t，J＝7.08，3H).
239I.(±)-乙基4-疊氮基-3，5-二羥基哌啶-1-羧酸酯制備 將NaN3(3.5g，53.4mmol)和NH4Cl(2.3g，42.72mmol)加到化合物239G(2.0g，10.7mmol)在2-甲氧基乙醇(40毫升)中的溶液中。反應(yīng)混合物在125℃下加熱過夜。冷卻至室溫之后，在減壓下除去溶劑及殘余物溶解在EtOAc(50毫升)中，以水(10毫升×2)洗滌，并經(jīng)無水Na2SO4干燥。在真空中濃縮接著經(jīng)硅膠快速色譜法(己烷-EtOAc1∶1到1∶2)，得到0.64克的239I(較高Rf)的結(jié)晶物質(zhì)。立體化學(xué)是通過單一X-射線結(jié)晶測定確認(rèn)。
239J.(±)-乙基4-疊氮基-3，5-二羥基哌啶-1-羧酸酯的制備 239J是通過化合物239I相似的反應(yīng)由239H制備，為結(jié)晶物質(zhì)。
239K.(內(nèi)消旋)-4-疊氮基-3，5-雙(甲氧基甲氧基)哌啶的制備
將i-Pr2NEt(5.9毫升33.4mmol)，接著MOMCl(1.69毫升，22.2mmol)加到化合物239I(640mg，2.78mmol)在無水CH2Cl2(5毫升)中的溶液中。反應(yīng)混合物在60℃下加熱過夜。冷卻至室溫之后，反應(yīng)以CH2Cl2稀釋，以10％檸檬酸、飽和NaHCO3和鹽水洗滌，并經(jīng)無水Na2SO4干燥。在真空中濃縮以得到油狀的粗中間體，其直接用于下一個(gè)反應(yīng)步驟中而沒有進(jìn)一步的純化。
將上述制備的中間體和KOH(1.84g，85％)在8毫升的EtOH和4毫升水中的混合物加熱到回流過夜。冷卻至室溫之后，在減壓下除去溶劑及殘余物以水稀釋并用CH2Cl2萃取(x2)。將合并的有機(jī)層經(jīng)無水Na2SO4干燥。在真空中濃縮，得到662mg油狀的239K。此物質(zhì)直接用于下一個(gè)反應(yīng)步驟中而沒有進(jìn)一步純化。
1H-NMR(400MHz，CDCl3)4.73(q，J＝6.82Hz，4H)，3.41(s，6H)，3.20-3.40(m 5H)，2.46(m，2H).
239L.(±)-(3R，5R)-rel-4-疊氮基-3，5-雙(甲氧基甲氧基)-哌啶的制備 化合物239L是通過化合物239K相似的反應(yīng)由239J制備，為結(jié)晶物質(zhì)。
1H-NMR(400MHz，CDCl3)4.72(q，J＝6.82Hz，4H)，3.92(m，1H)，3.79(m，1H)，3.49(m，1H)，3.42(s，3H)，3.41(s，1H)，3.25(m，1H)，3.03(m，1H)，2.70(m，1H)，2.53(m，1H).
239M(±)-(3S，4R，5R)-rel-4-疊氮基-1-((4-(3-甲氧基苯基氨基)-吡咯并[1，2-f][ 1，2，4]三嗪-5-基)甲基)-3，5-雙(甲氧基甲氧基)-哌啶的制備 化合物239M是通過化合物146E相同的反應(yīng)由239K制備，為泡沫狀?；衔?39M具有分析HPLC保留時(shí)間＝2.582分鐘(Chromolith SpeedROD柱4.6×50毫米，10-90％甲醇水溶液，包含0.1％TFA，經(jīng)歷4分鐘，4毫升/分鐘，于254nm監(jiān)測)和LC/MS M++1＝502+。
239N.(3S，4R，5R)-rel-4-疊氮基-1-((4-(3-甲氧基苯基氨基)吡咯并[1，2-f][1，2，4]三嗪-5-基)甲基)哌啶-3，5-二醇的制備 將化合物239M(0.65mmol)和6N HCI(2毫升)在3毫升THF中的混合物于50℃下加熱2小時(shí)。冷卻至室溫之后，混合物以NaOH堿化，以EtOAc萃取，并經(jīng)無水Na2SO4干燥。在真空中濃縮，得到260mg的固體239N。化合物239N具有分析HPLC保留時(shí)間＝2.063分鐘(Chromolith SpeedROD柱4.6×50毫米，10-90％甲醇水溶液，包含0.1％TFA，經(jīng)歷4分鐘，4毫升/分鐘，于254nm監(jiān)測)和LC/MS M++1＝411+。
將化合物239N(260mg，0.633mmol)和Ph3P(332mg，1.27mmol)在THF(3毫升)和水(0.3毫升)中的混合物于70℃下加熱過夜。冷卻至室溫之后，混合物以水稀釋，以2N HCl酸化，并以EtOAc洗滌(2x)。水層以2N NaOH堿化且以EtOAc萃取(2x)。合并的有機(jī)層以水洗滌一次并經(jīng)無水Na2SO4干燥。在真空中濃縮接著與乙醚一起研磨，得到180mg的固體239。化合物239具有分析HPLC保留時(shí)間＝1.211分鐘(Chromolith SpeedROD柱4.6×50毫米，10-90％甲醇水溶液，包含0.1％TFA，經(jīng)歷4分鐘，4毫升/分鐘，于254nm監(jiān)測)和LC/MS M++1＝385+。
實(shí)施例240(3R/S，5R/S)-4-氨基-1-({4-[(3-甲氧基苯基)氨基]吡咯并[2，1-f][1，2，4]三嗪-5-基}甲基)哌啶-3，5-二醇 化合物240是通過化合物239相似的方法由239L制備?；衔?40為固體且具有分析HPLC保留時(shí)間＝1.045分鐘(Chromolith SpeedROD柱4.6×50毫米，10-90％甲醇水溶液，包含0.1％TFA，經(jīng)歷4分鐘，4毫升/分鐘，于254nm監(jiān)測)和LC/MS M++1＝384+。
實(shí)施例241A(3S，5S)-4-氨基-1-({4-[(3-甲氧基苯基)氨基]吡咯并[2，1-f][1，2，4]三嗪-5-基}甲基)哌啶-3，5-二醇(對映異構(gòu)體A，手性) 化合物241A(對映異構(gòu)體A)是通過手性制備型HPLC分離(使用ChiralpakAD，并用EtOH/DEA∶100/0.1洗脫)由240制備，為具有ee≥99％的第一個(gè)峰(Rt＝5.827分鐘)。
化合物241A為固體且具有分析HPLC保留時(shí)間＝1.044分鐘(ChromolithSpeedROD柱4.6×50毫米，10-90％甲醇水溶液，包含0.1％TFA，經(jīng)歷4分鐘，4毫升/分鐘，于254nm監(jiān)測)和LC/MS M++1＝384+。
實(shí)施例241B(3R，5R)-4-氨基-1-({4-[(3-甲氧基苯基)氨基]吡咯并[2，1-f][1，2，4]三嗪-5-基}甲基)哌啶-3，5-二醇(對映異構(gòu)體B，手性) 化合物241B(對映異構(gòu)體B)是通過手性制備型HPLC分離(使用Chiralpak AD，并用EtOH/DEA∶100/0.1洗脫)由240制備，為具有ee≥96％的第二個(gè)峰(Rt＝8.430分鐘)。
實(shí)施例242-246化合物242-246(具有HPLC注解(b))是通過化合物239相似的方法由239L制備。

a手性正相HPLC條件Chiralpak AD，isocractic，以EtOH-DEA100/0.1洗脫。
實(shí)施例247rac-5-{[(3R，4R)-4-氨基-3-甲氧基哌啶-1-基]甲基}-N-(3-甲氧基苯基)吡咯并[2，1-f][1，2，4]三嗪-4-胺 247A.(3R，4R)-rel-叔-丁基4-疊氮基-3-甲氧基哌啶-1-羧酸酯制備
將95％NaH(40.0mg，1.58mmol)在氮?dú)狻⑹覝叵录拥?46A(320mg，1.32mmol)和碘甲烷(0.25毫升，3.96mmol)在4毫升無水THF中的攪拌混合物中。此混合物在室溫下攪拌15小時(shí)，并然后通過加入30毫升的水來停止反應(yīng)。水溶液以EtOAc(2×40毫升)萃取。合并的EtOAc萃取物以鹽水(30毫升)洗滌，干燥(MgSO4)，過濾并在真空中濃縮以得到310mg(產(chǎn)率92％)的247A。其具有分析HPLC保留時(shí)間＝2.86分鐘(Phenomenox S5 C18-HC4.6×50毫米柱，10-90％甲醇水溶液，包含0.1％TFA，經(jīng)歷4分鐘，4毫升/分鐘，于220nm監(jiān)測)和LC/MS M++Na＝279。
247B.5-(((3R，4R)-rel-4-疊氮基-3-甲氧基哌啶-1-基)甲基)-N-(3-甲氧基苯基)吡咯并[1，2-f][1，2，4]三嗪-4-胺的制備 將TFA(2.00毫升，26.0mmol)在室溫下加到247A(310mg，1.21mmol)在2毫升CH2Cl2中的攪拌溶液中。將此混合物在室溫下攪拌15分鐘并在真空中濃縮以得到390mg的(3R，4R)-rel-4-疊氮基-3-甲氧基哌啶的TFA鹽?；衔?47B是通過146E所述相似的方法由此TFA鹽(52.0mg，0.19mmol)制備。其具有分析HPLC保留時(shí)間＝1.97分鐘(Phenomenox S5C18-HC 4.6×50毫米柱，10-90％甲醇水溶液，包含0.1％TFA，經(jīng)歷4分鐘，4毫升/分鐘，于220nm監(jiān)測)和LC/MS M++1＝409。
247C.5-(((3R，4R)-4-氨基-3-甲氧基哌啶-1-基)甲基)-N-(3-甲氧基苯基)吡咯并[1，2-f][1，2，4]三嗪-4-胺(外消旋)的制備化合物247C(外消旋)是通過146所述相似的方法由此247B制備。化合物247C通過1克SCX藥筒(cartridge)，以MeOH(16毫升)洗脫，接著用在MeOH(16毫升)中的2M NH3洗脫。洗脫液在真空中濃縮并通過制備型HPLC進(jìn)一步地純化以得到26mg(產(chǎn)率42％)的固體247C。其具有分析HPLC保留時(shí)間＝1.51分鐘(Phenomenox S5C18-HC 4.6×50毫米柱，10-90％甲醇水溶液，包含0.1％TFA，經(jīng)歷4分鐘，4毫升/分鐘，于220nm監(jiān)測)和LC/MS M++1＝383。
247D.5-(((3R，4R)-4-氨基-3-甲氧基哌啶-1-基)甲基)-N-(3-甲氧基苯基)吡咯并[1，2-f][1，2，4]三嗪-4-胺(對映異構(gòu)體A)的制備 化合物247D是通過手性制備型HPLC分離(Chiralpak AD，10微米，2×5cm柱，220nm，20毫升/分鐘，EtOH/MeOH/DEA，50/50/0.1)由化合物247C獲得?；衔?47D為固體且具有＞99％ee與HPLC保留時(shí)間＝6.5分鐘(Chiralpak AD，250×4.6毫米，10微米；EtOH/MeOH/DEA∶50/50/0.1，0.8毫升/分鐘，220nM)。
247E.5-(((3S，4S)-4-氨基-3-甲氧基哌啶-1-基)甲基)-N-(3-甲氧基苯基)吡咯并[1，2-f][1，2，4]三嗪-4-胺(對映異構(gòu)體B)的制備 化合物247E是通過手性制備型HPLC分離(Chiralpak AD，10微米，2×5cm柱，220nm，20毫升/分鐘，EtOH/MeOH/DEA，50/50/0.1)由化合物247C獲得?；衔?47E為固體且具有＞99％ee與HPLC保留時(shí)間＝8.9分鐘(ChiralpakAD，250×4.6毫米，10微米；EtOH/MeOH/DEA∶50/50/0.1，0.8毫升/分鐘，220nM)。
實(shí)施例248rac-5-{[(3R，4R)-4-氨基-3-甲氧基哌啶-1-基]甲基}-N-(4-氟-3-甲氧基苯基)吡咯并[2，1-f][1，2，4]三嗪-4-胺 化合物248是通過化合物247相似的方法由247A制備且具有分析HPLC保留時(shí)間＝1.18分鐘(Phenomenox S5 C18-HC 4.6×50毫米柱，10-90％甲醇水溶液，包含0.1％TFA，經(jīng)歷4分鐘，4毫升/分鐘，于220nm監(jiān)測)和LC/MSM++1＝401。
實(shí)施例249(4aR，8aR)-rel-6-((4-(3-甲氧基苯基氨基)吡咯并[1，2-f][1，2，4]三嗪-5-基)甲基)-六氫-1H-吡啶并[3，4-b][1，4]嗪-2(3H)-酮 249A.(3R，4R)-rel-叔-丁基4-氨基-3-羥基哌啶-1-羧酸酯的制備 將20％Pd(OH)2/C(108mg)在N2下加到15A(540mg，2.23mmol)在10毫升MeOH中的攪拌溶液中。將反應(yīng)燒瓶以H2凈化幾次，并在氫氣下攪拌18小時(shí)。通過4μM聚碳酸酯膜過濾除去催化劑，并以MeOH(6×30毫升)沖洗。在真空中濃縮濾液以得到453mg(產(chǎn)率94％)的249A。其具有分析HPLC保留時(shí)間＝0.73分鐘(Chromolith SpeedROD 4.6×50毫米，10-90％甲醇水溶液，包含0.2％磷酸，經(jīng)歷4分鐘，4毫升/分鐘，于220nm監(jiān)測)和LC/MS M++1＝217。
249B.(3R，4R)-rel-叔-丁基4-(2-氯乙酰胺基)-3-羥基哌啶-1-羧酸酯的制備 將氯乙酰氯(0.17毫升，2.08mmol)在N2下于0℃經(jīng)5分鐘逐滴加到249A(428mg，1.98mmol)和NaOAc(325mg，3.96mmol)在2.5毫升丙酮和0.8毫升水中的攪拌混合物中。將此混合物于0℃下攪拌10分鐘，并在室溫下25分鐘?；旌衔镆?60毫升的EtOAc稀釋和以水(2×40毫升)、飽和NaHCO3溶液(1×30毫升)和鹽水(1×30毫升)洗滌。將EtOAc層干燥(MgSO4)，過濾并在真空中濃縮以得到415mg(產(chǎn)率72％)的249B。其具有分析HPLC保留時(shí)間＝1.96分鐘(Chromolith SpeedROD 4.6×50毫米，10-90％甲醇水溶液，包含0.2％磷酸，經(jīng)歷4分鐘，4毫升/分鐘，于220nm監(jiān)測)和流動(dòng)注射(flowinjection)MS M-＝291。
249C.(4aR，8aR)-rel-叔-丁基2-氧代-六氫-1H-吡咯并[3，4-b][1，4]嗪-6(7H)-羧酸酯的制備 將60％NaH(84.0mg，2.10mmol)在N2下于室溫加到249B(410mg，14.0mmol)在10毫升無水THF中的攪拌混合物中。此混合物在室溫下攪拌45分鐘且以3毫升飽和NH4Cl溶液停止反應(yīng)。在真空中濃縮混合物且用40毫升飽和NaHCO3溶液稀釋。水溶液以EtOAc(3×60毫升)萃取。合并的EtOAc萃取物以鹽水(1×30毫升)洗滌。將EtOAc層干燥(MgSO4)，過濾并在真空中濃縮以得到344mg(產(chǎn)率96％)的249C。其具有分析HPLC保留時(shí)間＝2.01分鐘(Chromolith SpeedROD 4.6×50毫米，10-90％甲醇水溶液，包含0.2％磷酸，經(jīng)歷4分鐘，4毫升/分鐘，于220nm監(jiān)測)和LC/MS M+＝257。
249D.(4aR，8aR)-rel-六氫-1H-吡咯并[3，4-b][1，4]嗪-2(3H)-酮的制備 在室溫下將TFA(2.00毫升，25.9mmol)加到249C(70.0mg，0.0.27mmol)在1毫升CH2Cl2中的攪拌混合物中?；旌衔镌谑覝叵聰嚢?小時(shí)并在真空中濃縮以得到粗249D。此物質(zhì)和DMA混合以制造2毫升儲備溶液，并將其如此用于下一個(gè)步驟反應(yīng)中。
化合物249是通過化合物146相似的方法由249D制備。其具有分析HPLC保留時(shí)間＝1.85分鐘(Phenomenox S5C18-HC 4.6×50毫米柱，10-90％甲醇水溶液，包含0.1％TFA，經(jīng)歷4分鐘，4毫升/分鐘，于220nm監(jiān)測)和LC/MS M++1＝409。
實(shí)施例2505-(((4aR，8aR)-rel-六氫-1H-吡啶并[3，4-b][1，4]嗪-6(7H)-基)甲基)-N-(3-甲氧基苯基)吡咯并[1，2-f][1，2，4]三嗪-4-胺 將1M LiAlH4/乙醚溶液(0.70毫升，0.70mmol)逐滴加到于室溫下的化合物249(100mg，0.24mmol)在4毫升無水THF中的攪拌混合物中。此混合物在室溫下攪拌70分鐘，并以加入200mg的Celite和200mg的脫水硫酸鈉停止反應(yīng)?；旌衔镌谑覝叵聰嚢?0分鐘。過濾不溶解物且以MeOH(3×15毫升)沖洗。在真空中濃縮濾液并通過制備型HPLC純化以得到78mg(產(chǎn)率81％)的化合物250。其具有分析HPLC保留時(shí)間＝1.68分鐘(Phenomenox S5C18-HC 4.6×50毫米柱，10-90％甲醇水溶液，包含0.1％TFA，經(jīng)歷4分鐘，4毫升/分鐘，于220nm監(jiān)測)和LC/MS M++1＝395。
實(shí)施例251N-(4-氟-3-甲氧基苯基)-5-(((4aR，8aR)-rel-六氫-1H-吡啶并[3，4-b][1，4]嗪-6(7H)-基)甲基)吡咯并[1，2-f][1，2，4]三嗪-4-胺 化合物251是通過化合物250相似的方法由249D制備。其具有分析HPLC保留時(shí)間＝1.64分鐘(Phenomenox S5C18-HC 4.6×50毫米柱，10-90％甲醇水溶液，包含0.1％TFA，經(jīng)歷4分鐘，4毫升/分鐘，于220nm監(jiān)測)和LC/MS M++1＝413。
實(shí)施例252(3R，4R)-4-氨基-1-({4-[(3-甲氧基苯基)氨基]吡咯并[2，1-f][1，2，4]三嗪-5-基}甲基)-N-(甲基磺?；?哌啶-3-甲酰胺 252A.1-叔-丁基3-乙基4-氧代哌啶-1，3-二羧酸酯的制備
將4-氧代哌啶-3-羧酸乙酯(16.2g，95mmol)在CHCl3(160毫升)中的溶液以NaHCO3(9.6g，114mmol)在水(170毫升)中的溶液處理。此二相反應(yīng)以Boc2O(20.7g，95mmol)在CHCl3(60毫升)中的溶液處理。所得反應(yīng)加熱回流18小時(shí)，冷卻到室溫，并分離這些層。水層以CHCl3(2×100毫升)萃取。干燥(Na2SO4)合并的有機(jī)層，過濾并濃縮以得到22克(產(chǎn)率86％)的油狀化合物252A。
252B.(R)-1-叔-丁基3-乙基4-(1-苯基乙基氨基)-5，6-二氫-吡啶-1，3(2H)-二羧酸酯的制備 將252A(22g，81mmol)和甲苯(400毫升)的溶液以(R)-1-苯乙胺(12.5毫升，97mmol)和p-TsOH(1.5克)處理。反應(yīng)混合物使用Dean-Stark阱(trap)加熱回流23小時(shí)?；旌衔锢鋮s到室溫，以飽和NaHCO3水溶液(2×200毫升)和鹽水(2×200毫升)洗滌。干燥(Na2SO4)合并的有機(jī)層，過濾并濃縮。將粗物質(zhì)通過二氧化硅墊過濾(100％CH2Cl2)并濃縮以得到14.7克(產(chǎn)率49％)的油狀化合物252B。
252C.(3S，4R)-1-叔-丁基3-乙基4-((R)-1-苯基乙基氨基)-哌啶-1，3-二羧酸酯的制備
向裝備機(jī)械攪拌器和加料漏斗的1升3-頸圓底燒瓶中進(jìn)料252B(14.7g，39mmol)和乙腈(200毫升)和乙酸(100毫升)。溶液冷卻到0℃，并用兩小時(shí)的時(shí)間以三批加入Na(OAc)3BH(33.3g，157mmol)。在最后加入之后反應(yīng)在此溫度下攪拌兩小時(shí)?；旌衔锶缓罄鋮s到-10℃及通過加入1N NaOH(100毫升)、4N NaOH(100毫升)、6N NaOH(100毫升)接著50％NaOH(50毫升)來慢慢地停止反應(yīng)。使反應(yīng)加溫到室溫及分離這些層。水層以CH2Cl2(2×250毫升)萃取及干燥(Na2SO4)合并的有機(jī)層，過濾并在真空中濃縮。通過硅膠上的快速色譜法(10％到30％EtOAc/己烷梯度)的純化，得到6.0克(產(chǎn)率41％)的化合物252C。
252D.(3R，4R)-1-叔-丁基3-乙基4-((R)-1-苯基乙基氨基)-哌啶-1，3-二羧酸酯的制備 將252C(2.90g，7.71mmol)在乙醇(70毫升)中的溶液以在乙醇(7.5毫升)中的21％NaOEt處理。反應(yīng)混合物于50℃加熱三小時(shí)，冷卻到室溫，然后濃縮。所得油溶解在二氯甲烷(150毫升)中，以20％NH4Cl(2×50毫升)洗滌。干燥(Na2SO4)有機(jī)層并濃縮為油狀物。通過硅膠上的快速色譜法(10％到25％EtOAc/己烷梯度)的純化，得到1.20克(產(chǎn)率41％)油狀的化合物252D。
252E.(3R，4R)-1-叔-丁基3-乙基4-氨基哌啶-1，3-二羧酸酯的制備。
252D(1.18g，3.13mmol)在MeOH(31毫升)中的溶液以甲酸銨(1.58g，25.1mmol)和10％Pd/C處理。反應(yīng)混合物加熱回流14小時(shí)然后冷卻到室溫。通過過濾移去所得固體和以MeOH洗滌。干燥(Na2SO4)濾液和在減壓下濃縮以得到0.82克(產(chǎn)率96％)油狀的化合物252E。
252F.(3R，4R)-1-叔-丁基3-乙基4-氨基哌啶-1，3-二羧酸酯的制備 252E(0.80g，2.94mmol)在二氯甲烷(29毫升)中的溶液于0℃下以二異丙基乙胺(0.41g，3.23mmol)處理。經(jīng)過30分鐘慢慢地加入烯丙基氯甲酸酯(0.46g，3.83mmol)在二氯甲烷(29毫升)中的溶液。反應(yīng)混合物于0℃下攪拌16小時(shí)，然后慢慢地加溫到室溫。所得溶液以二氯甲烷稀釋。并以飽和NaHCO3(2×50毫升)洗滌。干燥(Na2SO4)有機(jī)層，并在減壓下濃縮。所得油通過硅膠上的快速色譜法(20到25％EtOAc/己烷)純化以得到0.88克(產(chǎn)率84％)油狀的化合物252F。
252G.(3R，4R)-甲基4-(烯丙氧基羰基)哌啶-3-羧酸酯的制備
252F(0.87g，2.44mmol)在二氯甲烷(12毫升)中的溶液于0℃下以TFA(2.4毫升)處理。反應(yīng)混合物于0℃下攪拌一個(gè)小時(shí)然后慢慢地加溫到室溫。在此溫度下繼續(xù)攪拌五小時(shí)，濃縮，并與MeOH和甲苯共沸蒸發(fā)。所得油通過硅膠上的快速色譜法(0到2％MeOH/CH2Cl2)純化以得到0.47克(產(chǎn)率79％)油狀的化合物252G。
252H.(3R，4R)-甲基4-(烯丙氧基羰基)-1-((4-(3-甲氧基苯基-氨基)吡咯并[1，2-f][1，2，4]三嗪-5-基)甲基)哌啶-3-羧酸酯的制備 將252G(0.21g，0.87mmol)、4-(3-甲氧基苯基氨基)-吡咯并[1，2，4]三嗪-5-基甲基三乙基溴化銨(0.40g，0.87mmol)和二異丙基乙胺(0.11g，0.87mmol)在MeCN(15毫升)中的懸浮液于60℃加熱一小時(shí)然后在真空中濃縮。所得油通過硅膠上的快速色譜法(2到5％MeOH/CH2Cl2)純化，以得到0.33克(產(chǎn)率77％)固體的化合物252H。
252I.(3R，4R)-4-(烯丙氧基羰基)-1-((4-(3-甲氧基苯基氨基)-吡咯并[1，2-f][1，2，4]三嗪-5-基)甲基)哌啶-3-羧酸的制備 252H(0.33g，0.67mmol)在MeOH/THF/水(3/3/1/毫升)中的溶液以LiOH單水合物(0.25g，6.7mmol)處理。攪拌反應(yīng)混合物14小時(shí)，以飽和NaHCO3水溶液中和至pH＝7，然后濃縮到1毫升的體積。所得漿狀物溶解在MeOH中并通過制備型HPLC純化(YMC ODS-A 5微米，20×100毫米，溶劑A10％MeOH-90％H2O-0.1％TFA，溶劑B 90％MeOH-10％H2O-0.1％TFA，梯度0-.00％B，12分鐘)。合并所需的級分和在減壓下濃縮以除去大部份MeOH，以飽和NaHCO3中和到pH＝7及以EtOAc(2×50毫升)萃取。干燥(Na2SO4)合并的有機(jī)層并濃縮以得到0.30克(產(chǎn)率94％)固體的化合物252I。
252J.(3R，4R)-1-((4-(3-甲氧基苯基氨基)吡咯并[1，2-f][1，2，4]-三嗪-5-基)甲基)-3-(甲基磺酰基氨基甲?；?哌啶-4-基氨基甲酸烯丙基酯的制備 252I(0.30g，0.63mmol)在MeCN(6.2毫升)中的溶液以二甲基氨基哌啶(77mg，0.63mmol)、DECI(0.18g，0.94mmol)，接著甲磺酰胺(0.18g，1.88mmol)處理。反應(yīng)混合物攪拌兩小時(shí)，以水停止反應(yīng)，并濃縮。所得漿狀物溶解在MeOH中并通過制備型HPLC(YMC ODS-A 5微米，20×100毫米，溶劑A10％MeOH-90％H2O-0.1％TFA，溶劑B 90％MeOH-10％H2O-0.1％TFA，梯度0-100％B，12分鐘)純化。合并所需的級分并在真空中濃縮，以飽和NaHCO3水溶液中和到pH＝10，和以EtOAc(2×50毫升)萃取。干燥(Na2SO4)合并的有機(jī)層并濃縮以得到0.22克(產(chǎn)率62％)固體的化合物252J。
252J(100mg，0.18mmol)在THF(4毫升，以氬氣除氣)中的溶液以Pd(PPh3)4(21mg，0.018mmol)和Et2NH(33mg，0.45mmol)處理。反應(yīng)混合物攪拌90分鐘然后濃縮。所得固體溶解在MeOH中，通過制備型HPLC(YMCODS-A5微米，20×100毫米，溶劑A 10％MeOH-90％H2O-0.1％TFA，溶劑B90％MeOH-10％H2O-0.1％TFA，梯度0-100％B，12分鐘)純化。濃縮所需的級分，以飽和NaHCO3水溶液中和到pH＝10，和以EtOAc(2×50毫升)萃取。干燥(Na2SO4)合并的有機(jī)層并濃縮以得到36mg(產(chǎn)率42％)固體的化合物252。其具有分析HPLC保留時(shí)間＝1.62分鐘(Phenomenex Su C184.6×50毫米柱10-90％甲醇水溶液包含0.2％H3PO4，4分鐘梯度，于220nm監(jiān)測)，[M+H]+＝474。
實(shí)施例253(3R，4R)-4-氨基-1-({4-[(3-乙炔基苯基)氨基]吡咯并[2，1-f][1，2，4]三嗪-5-基}甲基)-N-甲基哌啶-3-甲酰胺 253A.(3R，4R)-甲基-4-(烯丙氧基羰基)-1-((4-(3-乙炔基苯基-氨基)吡咯并[1，2-f][1，2，4]三嗪-5-基)甲基)哌啶-3-羧酸酯的制備 將252G(0.24g，1.0mmol)、4-(3-乙炔基苯基氨基)-吡咯并[1，2，4]三嗪-5-基甲基三乙基溴化銨(0.43g，1.0mmol)和二異丙基乙基胺(0.13g，1.0mmol)在MeCN(15毫升)中的懸浮液于60℃加熱一小時(shí)，然后在真空中濃縮。殘余物通過硅膠快速色譜法(2到5％MeOH/CH2Cl2)純化，以得到0.24克(產(chǎn)率50％)固體的化合物253A。
253B.(3R，4R)-4-(烯丙氧基羰基)-1-((4-(3-乙炔基苯基氨基)-吡咯并[1，2-f][1，2，4]三嗪-5-基)甲基)哌啶-3-羧酸的制備
將253A(0.24g，0.50mmol)在MeOH/THF/水(3/3/1/毫升)中的溶液在室溫下以LiOH單水合物(0.21g，5.0mmol)處理。攪拌反應(yīng)混合物14小時(shí)，以飽和NaHCO3水溶液中和到pH＝7，然后濃縮。所得漿狀物溶解在MeOH中并通過制備型HPLC(YMC ODS-A 5微米，20×100毫米，溶劑A10％MeOH-90％H2O-0.1％TFA，溶劑B 90％MeOH-10％H2O-0.1％TFA，梯度0-100％B，12分鐘)純化。濃縮所需的級分，以飽和NaHCO3中和到pH＝7，和以EtOAc(2×50毫升)萃取。干燥(Na2SO4)合并的有機(jī)層并在真空中濃縮以得到0.22克(產(chǎn)率93％)固體的化合物253B。
253C.(3R，4R)-1-((4-(3-乙炔基苯基氨基)吡咯并[1，2-f][1，2，4]-三嗪-5-基)甲基)-3-(甲基氨基甲?；?哌啶-4-基氨基甲酸烯丙酯的制備 253B(0.22g，0.46mmol)在MeCN(4.6毫升)中的溶液以二異丙基乙胺(59mg，0.46mmol)、苯并三唑-1-基氧基-三(二甲基氨基)六氟磷酸鹽(后文稱為″Bop試劑″)(0.36g，0.69mmol)和在THF中的2N甲胺(0.70毫升，1.38mmol)處理。反應(yīng)混合物攪拌兩小時(shí)，以水停止反應(yīng)，并濃縮。所得漿狀物溶解在MeOH中，并通過制備型HPLC(YMC ODS-A 5微米，20×100毫米，溶劑A10％MeOH-90％H2O-0.1％TFA，溶劑B90％MeOH-10％H2O-0.1％TFA，梯度0-100％B，12分鐘)純化。濃縮所需的級分，以飽和NaHCO3水溶液中和到pH＝10，并以EtOAc(2×50毫升)萃取。干燥(Na2SO4)合并的有機(jī)層并在真空中濃縮以得到0.21克(產(chǎn)率92％)固體的化合物253C。
253C(100mg，0.20mmol)在THF(5毫升，以氬氣除氣)中的溶液以Pd(PPh3)4(23mg，0.020mmol)和Et2NH(37mg，0.51mmol)處理。攪拌反應(yīng)混合物90分鐘，然后濃縮。所得固體溶解在MeOH中并通過制備型HPLC(YMCODS-A5微米，20×100毫米，溶劑A 10％MeOH-90％H2O-0.1％TFA，溶劑B 90％MeOH-10％H2O-0.1％TFA，梯度0-100％B，12分鐘)純化。濃縮所需的級分，以飽和NaHCO3水溶液中和到pH＝10，并以EtOAc(2×50毫升)萃取。干燥(Na2SO4)合并的有機(jī)層并在真空中濃縮以得到36mg(產(chǎn)率42％)固體的化合物253。其具有分析HPLC保留時(shí)間＝1.96分鐘(PhenomenexSu C184.6×50毫米柱10-90％甲醇水溶液，包含0.2％H3PO4，4分鐘梯度，于220nm監(jiān)測)，[M+H]+＝404。
實(shí)施例254(3R，4R)-4-氨基-1-({4-[(3-甲氧基苯基)氨基]吡咯并[2，1-f][1，2，4]三嗪-5-基}甲基)-N-甲基哌啶-3-甲酰胺 254A.(3R，4R)-1-叔-丁基3-乙基4-(苯甲氧基羰基)哌啶-1，3-二羧酸酯的制備
252E(180mg，0.66mmol)在CH2Cl2(5毫升)中的溶液以苯甲氧基氯甲酸酯(0.1毫升，0.73mmol)和三乙胺(0.12毫升，0.86mmol)處理。反應(yīng)在室溫下攪拌18小時(shí)，以CH2Cl2(10毫升)稀釋，并以水(2×10毫升)、0.1N HCl(2×10毫升)、飽和NaHCO3水溶液(2x10毫升)和鹽水(1×10毫升)洗滌。干燥(Na2SO4)有機(jī)層，過濾并濃縮以得到243mg(產(chǎn)率91％)油狀的化合物254A。
254B.(3R，4R)-乙基4-(苯甲氧基羰基)哌啶-3-羧酸酯的制備 在0℃下，將254A(243mg，0.60mmol)在CH2Cl2(3毫升)中的溶液以三氟乙酸(0.3毫升)處理。反應(yīng)在室溫下攪拌一小時(shí)，然后濃縮為油狀物。將粗胺溶解在EtOAc(10毫升)中，以飽和NaHCO3水溶液洗滌并干燥(Na2SO4)，過濾并在真空中濃縮。產(chǎn)物通過快速硅膠色譜法(10％MeOH/CH2Cl2)純化，以得到95mg(產(chǎn)率52％)的化合物254B。
254C.(3R，4R)-甲基4-(苯甲氧基羰基)-1-((4-(3-甲氧基苯基-氨基)吡咯并[1，2-f][1，2，4]三嗪-5-基)甲基)哌啶-3-羧酸酯 N，N-二乙基-N-((4-(3-甲氧基苯基氨基)吡咯并[1，2-f][1，2，4]三嗪-5-基)甲基)乙銨(ethanaminium)溴化物(1.7g，3.62mmol)和254B(1.06g，3.6mmol)在乙腈(75毫升)中的懸浮液以DIEA(0.63毫升，3.6mmol)處理，并加溫到55℃經(jīng)12小時(shí)。濃縮反應(yīng)，溶于EtOAc(100毫升)中，并以水(2×100毫升)洗滌。干燥(Na2SO4)粗物質(zhì)，過濾并濃縮以得到1.7克(產(chǎn)率89％)的化合物254C。
254D.(3R，4R)-4-(苯甲氧基羰基)-1-((4-(3-甲氧基苯基氨基)-吡咯并[1，2-f][1，2，4]三嗪-5-基)甲基)哌啶-3-羧酸的制備 254D(1.67g，產(chǎn)率100％)是通過化合物252I所使用的相似方法由254C(1.7g，3.13mmol)制備。
254E.(3R，4R)-1-((4-(3-甲氧基苯基氨基)吡咯并[1，2-f][1，2，4]三嗪-5-基)甲基)-3-(甲基氨基甲?；?哌啶-4-基氨基甲酸苯甲酯的制備 化合物254E(790mg，產(chǎn)率54％)是通過化合物253C所使用的相似方法由254D(1.44g，2.71mmol)制備。
將254E(1.66g，3.13mmol)在MeOH(50毫升)中的溶液以氬氣凈化30分鐘。加入5％Pd/C(300mg)。反應(yīng)混合物在氫氣下攪拌三小時(shí)，然后通過Celite墊過濾。在真空中濃縮濾液以得到1.21克(產(chǎn)率94％)固體的化合物254。其具有分析HPLC保留時(shí)間＝1.57分鐘(YMC S5ODS 4.6×50毫米，10-90％甲醇水溶液，包含0.2％H3PO4，4分鐘梯度，于220nm監(jiān)測)，[M+H]+＝410。
實(shí)施例255
(3R，4R)-4-氨基-1-({4-[(3-甲氧基苯基)氨基]吡咯并[2，1-f][1，2，4]三嗪-5-基}甲基)哌啶-3-羧酸 化合物255(33mg，產(chǎn)率89％)是通過化合物254所使用的相似方法由254D(50mg，0.094mmol)制備。其具有分析HPLC保留時(shí)間＝1.54分鐘(YMCS5ODS 4.6×50毫米，10-90％甲醇水溶液，包含0.2％H3PO4，4分鐘梯度，于220nm監(jiān)測)。[M+H]+＝397。
實(shí)施例256(3R，4R)-4-氨基-1-({4-[(3-甲氧基苯基)氨基]吡咯并[2，1-f][1，2，4]三嗪-5-基}甲基)哌啶-3-甲酰胺 256A.(3R，4R)-3-((3，4-二甲氧基芐基)氨基甲?；?-1-((4-(3-甲氧基苯基氨基)吡咯并[1，2-f][1，2，4]三嗪-5-基)甲基)哌啶-4-基氨基甲酸苯甲酯的制備
254D(150mg，0.23mmol)在DMF(5毫升)中的溶液以3，4-二甲氧基苯甲胺(77mg，0.46mmol)、DIEA(80微升，0.46mmol)和Bop試劑(132mg，0.25mmol)處理。反應(yīng)在室溫下攪拌四小時(shí)，然后倒進(jìn)EtOAc(25毫升)中?；旌衔镆燥柡蚇aHCO3水溶液(3×25毫升)洗滌，并干燥(Na2SO4)，過濾并在真空中濃縮。粗產(chǎn)物通過硅膠上的快速色譜法(3％MeOH/CH2Cl2)純化以得到174mg(產(chǎn)率95％)的化合物256A。
256A(50mg，0.06mmol)在TFA(3毫升)中的溶液于室溫下攪拌5天。濃縮反應(yīng)并通過制備型HPLC純化以得到7mg(產(chǎn)率30％)固體的化合物256。其具有分析HPLC保留時(shí)間＝1.62分鐘(YMC S5ODS 4.6×50毫米，10-90％甲醇水溶液，包含0.2％H3PO4，4分鐘梯度，于220nm監(jiān)測)，[M+H]+＝396。
實(shí)施例257(3S，4R)-4-氨基-1-({4-[(3-甲氧基苯基)氨基]吡咯并[2，1-f][1，2，4]三嗪-5-基}甲基)-N-(甲基磺?；?哌啶-3-甲酰胺 257A.(3S，4R)-1-叔-丁基3-甲基4-氨基哌啶-1，3-二羧酸酯的制備 化合物257A(447mg，63％)是通過252E所使用的相似方法制備。
257B.(3S，4R)-1-叔-丁基3-甲基4-(苯甲氧基羰基)哌啶-1，3-二羧酸酯的制備
將257A(447mg，1.7mmol)在CH2Cl2(20毫升)中的溶液于室溫下以三乙胺(0.3毫升，2.2mmol)接著氯甲酸苯甲酯(0.27毫升，1.9mmol)處理。將反應(yīng)混合物攪拌18小時(shí)，然后以水(25毫升)洗滌。水層以CH2Cl2(25毫升)萃取及合并的有機(jī)物以飽和NaHCO3水溶液、0.1N HCl和鹽水洗滌。干燥(Na2SO4)有機(jī)層，過濾并在真空中濃縮為油狀物。粗物質(zhì)通過硅膠上的快速色譜法(30％EtOAc/己烷)純化以得到411mg(產(chǎn)率75％)的油狀化合物257B。
257C.(3S，4R)-甲基4-(苯甲氧基羰基)哌啶-3-羧酸酯的制備 257B(411mg，1.04mmol)在CH2Cl2(5毫升)中的溶液于室溫下以TFA(0.5毫升)處理。將反應(yīng)混合物攪拌5.0小時(shí)，然后在真空中濃縮。殘余物溶解在EtOAc(10毫升)中，并以飽和NaHCO3水溶液洗滌。干燥(Na2SO4)有機(jī)物，過濾并在真空中濃縮以得到365mg的固體257C。
257D.(3S，4R)-甲基4-(苯甲氧基羰基)-1-((4-(3-甲氧基苯基-氨基)吡咯并[1，2-f][1，2，4]三嗪-5-基)甲基)哌啶-3-羧酸酯的制備
257C(292mg，0.62mmol)和N，N-二乙基-N-((4-(3-甲氧基苯基氨基)吡咯并[1，2-f][1，2，4]三嗪-5-基)甲基)乙銨溴化物(292mg，0.62mmol)在乙腈(10毫升)中的懸浮液在室溫下以DIEA(0.2毫升，1.24mmol)處理。反應(yīng)混合物加溫到55℃經(jīng)3.0小時(shí)，然后在真空中濃縮到干。粗殘余物通過硅膠上的快速色譜法(30％EtOAc/己烷)純化以得到269mg(產(chǎn)率80％)的257D。
257E.(3S，4R)-4-(苯甲氧基羰基)-1-((4-(3-甲氧基苯基氨基)-吡咯并[1，2-f][1，2，4]三嗪-5-基)甲基)哌啶-3-羧酸的制備 257D(200mg，0.37mmol)在THF/MeOH(1∶1，4毫升)中的溶液在室溫下以在水(1毫升)中的LiOH單水合物(30mg，0.74mmol)處理。反應(yīng)混合物攪拌八小時(shí)，然后濃縮至1毫升。殘余物以水(10毫升)稀釋，并以EtOAc(3×10毫升)萃取。干燥(Na2SO4)有機(jī)物，過濾并在真空中濃縮，以得到200mg(產(chǎn)率100％)固體的化合物257E。
257F.(3S，4R)-1-((4-(3-甲氧基苯基氨基)吡咯并[1，2-f][1，2，4]三嗪-5-基)甲基)-3-(甲基磺?；被柞；?哌啶-4-基氨基甲酸酯酸(carbamate acid)的制備 257E(30mg，0.06mmol)在DMF(2毫升)中的溶液以甲磺酰胺(11mg，0.11mmol)、DMAP(7mg，0.06mmol)和EDAC(13mg，0.07mmol)處理。反應(yīng)混合物在室溫下攪拌48小時(shí)。所得的懸浮液以EtOAc(10毫升)稀釋，以鹽水(3×10毫升)、飽和NaHCO3水溶液(2×10毫升)洗滌，干燥(Na2SO4)，過濾并在真空中濃縮以得到35mg的257E，其沒有進(jìn)一步的純化而使用。
257F(35mg)在MeOH(3毫升)中的溶液以10％Pd/C(15mg)處理，并在室溫下、氫氣下攪拌三小時(shí)。通過尼龍濾器過濾漿狀物及濃縮濾液。粗物質(zhì)通過制備型HPLC純化以得到12mg的固體化合物257。其具有分析HPLC保留時(shí)間＝1.77分鐘(YMC S5ODS 4.6×50毫米，10-90％甲醇水溶液，包含0.2％H3PO4，4分鐘梯度，于220nm監(jiān)測)，[M+H]+＝474。
實(shí)施例258(3R，4S)-4-氨基-1-({4-[(3-甲氧基苯基)氨基]吡咯并[2，1-f][1，2，4]三嗪-5-基}甲基)-N-(甲基磺?；?哌啶-3-甲酰胺 258A.(3R，4S)-1-叔-丁基3-甲基4-((S)-1-苯基乙基氨基)-哌啶-1，3-二羧酸酯的制備 化合物258A是通過252C相同的方法使用適當(dāng)起始物制備。
258B.(3R，4S)-1-叔-丁基3-甲基4-氨基哌啶-1，3-二羧酸酯的制備 化合物258B是根據(jù)實(shí)施例257所述的步驟使用適當(dāng)起始物制備。
化合物258是通過257所述的相同方法由258B制備?；衔?58具有分析HPLC保留時(shí)間＝1.77分鐘(YMC S5ODS 4.6×50毫米，10-90％甲醇水溶液，包含0.2％H3PO4，4分鐘梯度，于220nm監(jiān)測)，[M+H]+＝474。
實(shí)施例259(3S，4R)-4-氨基-1-({4-[(3-乙炔基苯基)氨基]吡咯并[2，1-f][1，2，4]三嗪-5-基}甲基)-N-甲基哌啶-3-甲酰胺 259A.(3S，4R)-1-叔-丁基3-乙基4-氨基哌啶-1，3-二羧酸酯的制備 252C(2.6g，6.9mmol)在EtOH(100毫升)中的溶液以甲酸銨(3.5g，55.3mmol)和10％Pd/C(390mg)處理。反應(yīng)混合物在氮?dú)夥障录訜峄亓魅r(shí)。所得懸浮液通過Celite墊過濾并在真空中濃縮以得到1.8克(產(chǎn)率96％)固體的化合物259A。
259B.((3S，4R)-1-叔-丁基3-乙基4-(烯丙氧基羰基)哌啶-1，3-二羧酸酯的制備
259A(900mg，3.3mmol)在CH2Cl2(20毫升)中的溶液在室溫下以三乙胺(0.64毫升，4.62mmol)和烯丙基氯甲酸酯(0.35毫升，3.96mmol)處理。攪拌混合物四小時(shí)，然后以0.1N HCl(2×10毫升)、1N NaOH(2×10毫升)和鹽水(10毫升)洗滌。干燥(Na2SO4)有機(jī)層，過濾并在真空中濃縮以得到680mg(產(chǎn)率58％)油狀的化合物259B。
259C.(3S，4R)-乙基4-(烯丙氧基羰基)哌啶-3-羧酸酯的制備 259B(680mg，1.9mmol)在CH2Cl2(10毫升)中的溶液在室溫下以TFA(1毫升)處理。將反應(yīng)混合物攪拌16小時(shí)，然后濃縮。殘留物溶解在EtOAc(20毫升)中，并以飽和NaHCO3(2×20毫升)洗滌，干燥(Na2SO4)，過濾并在真空中濃縮以得到170mg的化合物259C。
259D.(3S，4R)-甲基4-(烯丙氧基羰基)-1-((4-(3-乙炔基苯基氨基)-吡咯并[1，2-f][1，2，4]三嗪-5-基)甲基)哌啶-3-羧酸酯的制備 將259C(50mg，0.2mmol)和N，N-二乙基-N-((4-(3-乙炔基苯基-氨基)吡咯并[1，2-f][1，2，4]三嗪-5-基)甲基)乙銨溴化物(82mg，0.18mmol)在乙腈(2毫升)中的懸浮液以DIEA(31微升，0.18mmol)處理?；旌衔镉?5℃加熱6.0小時(shí)，冷卻到室溫并濃縮。粗物質(zhì)通過徑向色譜法(SiO2，2毫米板，100％CH2Cl2到1％MeOH/CH2Cl2的梯度)純化以得到63mg(產(chǎn)率70％)的化合物259D。
259E.(3S，4R)-4-(烯丙氧基羰基)-1-((4-(3-乙炔基苯基氨基)-吡咯并[1，2-f][1，2，4]三嗪-5-基)甲基)哌啶-3-羧酸的制備 將259D(63mg，0.13mmol)在THF/MeOH(1∶1，4毫升)中的溶液在室溫下以LiOH單水合物(17mg，0.39mmol)的溶液處理。反應(yīng)混合物攪拌18小時(shí)，然后濃縮到0.5毫升體積。殘留物以水(5毫升)稀釋且以飽和NH4Cl水溶液至pH為6?；旌衔镆訣tOAc(2×10毫升)萃取，干燥(Na2SO4)有機(jī)層，過濾并在真空中濃縮以得到56mg(產(chǎn)率92％)的化合物259E。
259F.(3S，4R)-1-((4-(3-乙炔基苯基氨基)吡咯并[1，2-f][[1，2，4]三嗪-5-基)甲基)-3-(甲基氨基甲?；?哌啶-4-基氨基甲酸烯丙基酯的制備 以甲胺(在THF中的2M，0.12毫升，0.24mmol)、DIEA(0.02毫升，0.12mmol)和Bop試劑(68mg，0.13mmol)連續(xù)地處理259E(56mg，0.12mmol)在DMF(3毫升)中的溶液。反應(yīng)混合物在室溫下攪拌18小時(shí)。所得混合物以EtOAc(25毫升)稀釋，以鹽水(3×15毫升)洗滌，干燥(Na2SO4)，過濾并在真空中濃縮。粗259E(71mg)沒有進(jìn)一步的純化而使用。
將259F(71mg，0.15mmol)在THF(3毫升)中的溶液以氬氣除氣，并用二乙胺(28mg，0.38mmol)和Pd(PPh3)4(17mg，0.02mmol)處理。反應(yīng)在氬氣氛下攪拌2.0小時(shí)，然后在真空中濃縮并通過制備型HPLC純化以得到14mg的化合物259。其具有分析HPLC保留時(shí)間＝2.10分鐘(YMC S5ODS 4.6×50毫米，10-90％甲醇水溶液，包含0.2％H3PO4，4分鐘梯度，于220nm監(jiān)測)，[M+H]+＝404。
實(shí)施例260(3S，4S)-4-氨基-1-((4-(3-甲氧基苯基氨基)吡咯并[1，2-f][1，2，4]三嗪-5-基)甲基)-N-甲基哌啶-3-甲酰胺 260A.(3S，4S)-1-叔-丁基3-甲基4-((S)-1-苯基乙基氨基)-哌啶-1，3-二羧酸酯的制備 將258A(4.50g，12.4mmol)在甲醇(124毫升)中的溶液在室溫下以在甲醇中的25％NaOMe(8.04毫升)處理。此反應(yīng)混合物于50℃加熱3.0小時(shí)，冷卻到室溫，然后在真空中濃縮。將油狀殘余物溶解在二氯甲烷(200毫升)中且以20％NH4Cl(2×75毫升)洗滌。有機(jī)層通過Na2SO4干燥并在真空中濃縮。殘余物通過硅膠上的快速色譜法(10到25％EtOAc/己烷)純化以得到1.50克(產(chǎn)率30％)油狀的化合物260A。
260B.(3S，4S)-1-叔-丁基3-甲基4-氨基哌啶-1，3-二羧酸酯的制備 260A(1.10g，3.03mmol)在MeOH(31毫升)中的溶液在室溫下以甲酸銨(1.51g，24.3mmol)和10％Pd/C(110mg)處理。反應(yīng)混合物加熱回流14小時(shí)，然后冷卻到室溫。通過過濾除去固體物質(zhì)，并以MeOH洗滌。在真空中濃縮濾液以得到0.75克(產(chǎn)率96％)油狀的化合物260B。
260C.(3S，4S)-1-叔-丁基3-甲基4-(苯甲氧基羰基)哌啶-1，3-二羧酸酯的制備 260B(0.75g，2.90mmol)在二氯甲烷(30毫升)中的溶液于0℃以三乙胺(0.35g，3.48mmol)和N-(苯甲氧基羰氧基)琥珀酰亞胺(0.72g，2.90mmol)處理。使反應(yīng)混合物加溫到室溫，并攪拌16小時(shí)。反應(yīng)混合物以二氯甲烷稀釋，以10％檸檬酸(2×50毫升)，然后飽和NaHCO3(2×50毫升)洗滌。有機(jī)層通過Na2SO4干燥并在真空中濃縮以得到1.01克(產(chǎn)率89％)的油狀化合物260C。沒有進(jìn)一步純化而將其用于下一個(gè)步驟。
260D.4-(苯甲氧基羰基)哌啶-3-羧酸(3S，4S)-甲酯的制備
260C(1.0g，2.58mmol)在二氯甲烷(50毫升)中的溶液于0℃以TFA(5毫升)處理。反應(yīng)混合物于0℃攪拌1.0小時(shí)然后慢慢地加溫到室溫，并再攪拌2.0小時(shí)。濃縮混合物，然后與MeOH和甲苯共沸蒸發(fā)。殘余物溶解在二氯甲烷中，并以飽和NaHCO3(2×50毫升)洗滌。有機(jī)層通過Na2SO4干燥并在真空中濃縮以得到0.61克(產(chǎn)率81％)的油狀化合物260D。沒有進(jìn)一步純化而將其用于下一個(gè)步驟。
260E.4-(苯甲氧基羰基)-1-((4-(3-甲氧基苯基-氨基)吡咯并[1，2-f][1，2，4]三嗪-5-基)甲基)哌啶-3-羧酸(3S，4S)-甲基酯的制備 260D(0.18g，0.61mmol)、4-(3-甲氧基苯基氨基)-吡咯并[1，2，4]三嗪-5-基甲基三乙基溴化銨(0.29g，0.61mmol)和二異丙基乙基胺(79mg，0.61mmol)在MeCN(6毫升)中的反應(yīng)混合物于55℃加熱12小時(shí)并在真空中濃縮。殘余物溶解在二氯甲烷中，并以水(2×50毫升)洗滌。將二氯甲烷部分通過Na2SO4干燥，并在真空中濃縮以得到0.33克(產(chǎn)率99％)的油狀化合物260E。沒有進(jìn)一步純化而將其用于下一個(gè)步驟。(M+H)+＝545。
260F.(3S，4S)-4-(苯甲氧基羰基)-1-((4-(3-甲氧基苯基氨基)-吡咯并[1，2-f][1，2，4]三嗪-5-基)甲基)哌啶-3-羧酸的制備
260E(95mg，0.18mmol)在MeOH/THF/水(1/1/0.5毫升)中的溶液在室溫下以LiOH單水合物(75mg，1.8mmol)處理。將反應(yīng)混合物攪拌18小時(shí)，以飽和NH4Cl(5毫升)停止反應(yīng)，和以EtOAc(3×15毫升)萃取。EtOAc層通過Na2SO4干燥并在真空中濃縮以得到80mg(產(chǎn)率89％)薄膜狀的化合物260F。沒有進(jìn)一步純化而將其用于下一個(gè)步驟。質(zhì)量(M+H)+＝531。
260G.(3S，4S)-1-((4-(3-甲氧基苯基氨基)吡咯并[1，2-f][1，2，4]三嗪-5-基)甲基)-3-(甲基氨基甲?；?哌啶-4-基氨基甲酸苯甲酯的制備 260F(40mg，0.075mmol)在DMF(0.8毫升)中的溶液在室溫下以二異丙基乙胺(10mg，0.075mmol)、Bop試劑(59mg，0.11mmol)、然后在THF中的2N甲胺(0.12毫升，0.23mmol)處理。將反應(yīng)混合物攪拌16小時(shí)，以水停止反應(yīng)，并濃縮。所得懸浮液溶解在MeOH中且通過制備型HPLC(YMC ODS-A 5微米，20×100毫米，溶劑A 10％MeOH-90％H2O-0.1％TFA，溶劑B 90％MeOH-10％H2O-0.1％TFA，梯度0-100％B，12分鐘)。濃縮所需的級分以除去大部份MeOH，以飽和NaHCO3水溶液中和到pH＝10，并以EtOAc(2×50毫升)萃取。合并的有機(jī)層通過Na2SO4干燥并在真空中濃縮以得到38mg(產(chǎn)率93％)的固體260G。質(zhì)量(M+H)+＝544。
260G(38mg，0.070mmol)在MeOH(2毫升)中的溶液在室溫下以5％Pd/C(10mg)處理。反應(yīng)混合物在氫氣下攪拌16小時(shí)。通過過濾除去催化劑。在真空中濃縮濾液以得到25mg(產(chǎn)率87％)的固體化合物260。其具有分析HPLC保留時(shí)間＝1.71分鐘(Phenomenex Su C184.6×50毫米柱，10-90％甲醇水溶液，包含0.2％H3PO4，4分鐘梯度，于220nm監(jiān)測)。質(zhì)量[M+H]+＝410。
實(shí)施例261((3R，4R)-1-((4-(3-甲氧基苯基氨基)吡咯并[1，2-f][1，2，4]三嗪-5-基)甲基)-4-((R)-1-苯基乙基氨基)哌啶-3-基)甲醇 261A.(3R，4R)-1-(叔-丁氧基羰基)-4-((R)-1-苯基乙基氨基)-哌啶-3-羧酸的制備 252D(460mg，1.22mmol)和NaOEt(1.25毫升，在EtOH中的21重量％)在EtOH(10毫升)中的混合物于50℃攪拌3小時(shí)，然后在室溫下約48小時(shí)。在真空中濃縮反應(yīng)混合物，接著加水?；旌衔镆?N HCl酸化至pH為4-5，并通過過濾收集固體，以水洗滌并干燥以得到300mg(產(chǎn)率71％)的252A。其具有分析HPLC保留時(shí)間＝2.065分鐘(Chromolith SpeedROD柱4.5×50毫米，10-90％甲醇水溶液，包含0.1％TFA，經(jīng)歷4分鐘，4毫升/分鐘，于220nm監(jiān)測)。質(zhì)量(M+1)+349。
261B.(3R，4R)-1-叔-丁基3-甲基4-((R)-1-苯基乙基氨基)-哌啶-1，3-二羧酸酯的制備 將TMSCHN2的溶液(0.82毫升，1.64mmol，在己烷中的2N)加到261A(280mg，0.80mmol)在6毫升的1∶1CH2Cl2/MeOH中的溶液中?；旌衔镌谑覝叵聰嚢?0分鐘，然后在真空中濃縮，并通過快速色譜法在硅膠上純化(己烷/EtOAc∶80∶20)以得到油狀化合物261B。其具有分析HPLC保留時(shí)間＝2.187分鐘(Chromolith SpeedROD柱4.5×50毫米，10-90％甲醇水溶液，包含0.1％TFA，經(jīng)歷4分鐘，4毫升/分鐘，于220nm監(jiān)測)。質(zhì)量(M+1)+＝363。
261C.((3R，4R)-4-((R)-1-苯基乙基氨基)哌啶-3-基)甲醇的制備 將LiBH4(15.5mg，0.71mmol)加到261B(270mg，0.75mmol)的溶液中?；旌衔锛訜峄亓?.0小時(shí)。HPLC顯示仍有一些殘余的起始物質(zhì)。加入更多的LiBH4(15.5mg，0.71mmol)，并將混合物再加熱2.0小時(shí)。冷卻到室溫之后，加冰水，且在真空中濃縮混合物以除去THF。以EtOAc(x3)萃取含水殘余物，并干燥(Na2SO4)合并的萃取物，并在真空中濃縮。殘余物溶解在2毫升CH2Cl2中并加入2毫升的TFA?；旌衔镌谑覝叵聰嚢?0分鐘。混合物在真空中濃縮，接著在高真空下干燥過夜以得到油狀的261C。其具有分析HPLC保留時(shí)間＝0.590分鐘(Chromolith SpeedROD柱4.5×50毫米，10-90％甲醇水溶液，包含0.1％TFA，經(jīng)歷4分鐘，4毫升/分鐘，于220nm監(jiān)測)及LC/MS M++1＝235。此物質(zhì)直接地用于下一個(gè)反應(yīng)步驟中而沒有進(jìn)一步的純化。
261D.((3R，4R)-1-((4-(3-甲氧基苯基氨基)吡咯并[1，2-f][1，2，4]-三嗪-5-基)甲基)-4-((R)-1-苯基乙基氨基)哌啶-3-基)甲醇的制備 化合物261D是通過化合物146E所使用的相似方法由261C制備。其具有分析HPLC保留時(shí)間＝1.761分鐘(Chromolith SpeedROD柱4.5×50毫米，10-90％甲醇水溶液，包含0.1％TFA，經(jīng)歷4分鐘，4毫升/分鐘，于220nm監(jiān)測)及LC/MS M++1＝487。
261D(160mg，0.33mmol)、10％Pd/C(39mg)和甲酸銨(166mg，2.63mmol)在MeOH(15毫升)中的混合物加熱回流1.0小時(shí)。冷卻到室溫之后，通過過濾除去催化劑，并在真空中濃縮濾液。殘余物溶解在水中，以NaHCO3水溶液堿化，并以EtOAc萃取(3x)。干燥(Na2SO4)合并的萃取物并在真空中濃縮以得到64mg(產(chǎn)率51％)固體的化合物261(64mg，51％)。其具有分析HPLC保留時(shí)間＝1.137分鐘(Chromolith SpeedROD柱4.5×50毫米，10-90％甲醇水溶液，包含0.1％TFA，經(jīng)歷4分鐘，4毫升/分鐘，于220nm監(jiān)測)及LC/MSM++1＝383。
實(shí)施例262rac-(3R，4R)-1-({4-[(3-甲氧基苯基)氨基]吡咯并[2，1-f][1，2，4]三嗪-5-基}甲基)哌啶-3，4-二胺
262A.4-(苯甲氧基羰基)-3-羥基哌啶-1-羧酸(3R，4R)-叔-丁酯的制備 將Et3N(1.08毫升，7.76mmol)，接著將Cbz-OSu(1.69g，6.80mmol)加到化合物249A(1.40g，6.47mmol)在10毫升CH2Cl2中的攪拌混合物中。反應(yīng)混合物在室溫下攪拌16小時(shí)，然后以300毫升的EtOAc稀釋。有機(jī)層以5％檸檬酸溶液(2×40毫升)、5％K2CO3溶液(2×40毫升)和鹽水(40毫升)洗滌，并干燥(MgSO4)。過濾殘余物并在真空中濃縮以得到2.25克(產(chǎn)率99％)的化合物262A。其具有分析HPLC保留時(shí)間＝3.02分鐘(Phenomenox S5C18-HC 4.6×50毫米柱，10-90％甲醇水溶液，包含0.1％TFA，經(jīng)歷4分鐘，4毫升/分鐘，于220nm監(jiān)測)和LC/MS M++1＝351。
262B/C.3-疊氮基-4-(苯甲氧基羰基)哌啶-1-羧酸(3R，4R)-叔-丁酯的制備 262B(順式)262C(反式)非對映異構(gòu)體A 非對映異構(gòu)體B在0℃下在氮?dú)庀?，?分鐘的時(shí)間將甲磺酰氯(0.49毫升，6.36mmol)加到化合物262A(2.23g，6.36mmol)和Et3N(1.20毫升，0.83mmol)在30毫升CH2Cl2中的攪拌溶液中。混合物于0℃下攪拌35分鐘然后以40毫升的CH2Cl2稀釋?；旌衔镆运?2×25毫升)、鹽水(20毫升)洗滌，并干燥(MgSO4)。過濾混合物并在真空中濃縮以得到粗品甲磺酸鹽。將NaN3(1.65g，25.5mmol)加到在20毫升DMSO中的甲磺酸鹽中?；旌衔镉?0℃加熱17小時(shí)且冷卻到室溫?；旌衔镆?00毫升EtOAc稀釋，并以水(4×200毫升)、飽和NaHCO3溶液(40毫升)、鹽水(40毫升)洗滌和干燥(MgSO4)。過濾，在真空中濃縮，接著經(jīng)硅膠快速色譜法(己烷中的15-50％EtOAc)，得到696mg(29％)的262B(非對映異構(gòu)體A，Rf＝0.65)和262C(非對映異構(gòu)體B，Rf＝0.70)。262B具有分析HPLC保留時(shí)間＝3.51分鐘(Phenomenox S5C18-HC 4.6×50毫米柱，10-90％甲醇水溶液，包含0.1％TFA，經(jīng)歷4分鐘，4毫升/分鐘，于220nm監(jiān)測)和LC/MS M++1＝376。262C具有分析HPLC保留時(shí)間＝3.51分鐘(Phenomenox S5C18-HC 4.6×50毫米柱，10-90％甲醇水溶液，包含0.1％TFA，經(jīng)歷4分鐘，4毫升/分鐘，于220nm監(jiān)測)和LC/MS M++1＝376。
262D.(3R，4R)-3-疊氮基-1-((4-(3-甲氧基苯基氨基)吡咯并[1，2-f][1，2，4]三嗪-5-基)甲基)哌啶-4-基氨基甲酸芐基酯的制備 化合物262D是通過化合物247A所述相似的方法由化合物262B制備。其具有分析HPLC保留時(shí)間＝2.96分鐘(Phenomenox S5C18-HC 4.6×50毫米柱，10-90％甲醇水溶液，包含0.1％TFA，經(jīng)歷4分鐘，4毫升/分鐘，于220nm監(jiān)測)和LC/MS M++1＝528。
化合物262是通過化合物249A所述相似的方法由化合物262D制備。其具有分析HPLC保留時(shí)間＝1.27分鐘(Phenomenox S5C18-HC 4.6×50毫米柱，10-90％甲醇水溶液，包含0.1％TFA，經(jīng)歷4分鐘，4毫升/分鐘，于220nm監(jiān)測)和LC/MS M++1＝368。
實(shí)施例263rac-N-[(3R，4R)-4-氨基-1-({4-[(3-甲氧基苯基)氨基]吡咯并[2，1-f][1，2，4]三嗪-5-基}甲基)哌啶-3-基]脲
263A.(3R，4R)-3-氨基-1-((4-(3-甲氧基苯基氨基)吡咯并[1，2-f][1，2，4]三嗪-5-基)甲基)哌啶-4-基氨基甲酸苯甲酯(手性，非對映異構(gòu)體A)的制備 化合物263A是通過用于化合物146E所述的相似方法由化合物262C制備。其具有分析HPLC保留時(shí)間＝2.71分鐘(Phenomenox S5C18-HC 4.6×50毫米柱，10-90％甲醇水溶液，包含0.1％TFA，經(jīng)歷4分鐘，4毫升/分鐘，于220nm監(jiān)測)和LC/MS M++1＝502。
263B.(3R，4R)-1-((4-(3-甲氧基苯基氨基)吡咯并[1，2-f][1，2，4]三嗪-5-基)甲基)-3-脲基哌啶-4-基氨基甲酸苯甲酯的制備 于0℃下，將三氯乙酰異氰酸酯(28.9mg，0.18mmol)加到化合物
263A(77.0mg，0.15mmol)在2毫升CH2Cl2中的攪拌混合物中?；旌衔镉?℃下攪拌30分鐘，并加入1毫升的甲醇。此混合物然后在真空中濃縮以得到粗油。此粗物質(zhì)溶解在3毫升的甲醇中并加入2毫升的20％K2CO3溶液?；旌衔镌谑覝叵聰嚢?小時(shí)，然后以10毫升的水稀釋。其在真空中濃縮以除去甲醇然后以EtOAc(3×15毫升)萃取。合并的EtOAc萃取物以鹽水(10毫升)洗滌，并干燥(MgSO4)。過濾接著在真空中濃縮以得到70mg(產(chǎn)率84％)的化合物263B。其具有分析HPLC保留時(shí)間＝2.51分鐘(Phenomenox S5C18-HC 4.6×50毫米柱，10-90％甲醇水溶液，包含0.1％TFA，經(jīng)歷4分鐘，4毫升/分鐘，于220nm監(jiān)測)和LC/MS M++1＝545。
化合物263是通過化合物249A所述相似的方法由化合物263B制備。其具有分析HPLC保留時(shí)間＝1.32分鐘(Phenomenox S5C18-HC 4.6×50毫米柱，10-90％甲醇水溶液，包含0.1％TFA，經(jīng)歷4分鐘，4毫升/分鐘，于220nm監(jiān)測)和LC/MS M++1＝411。
實(shí)施例264rac-N-[(3R，4R)-4-氨基-1-({4-[(3-甲氧基苯基)氨基]吡咯并[2，1-f][1，2，4]三嗪-5-基}甲基)哌啶-3-基]甲磺酰胺 264A.7-(甲基磺?；?-3，7-二氮雜-雙環(huán)[4.1.0]庚烷-3-羧酸苯甲酯(外消旋)的制備 將三乙胺(0.74毫升，5.31mmol)，接著將甲磺酰氯(0.18毫升，2.30mmol)加到3，7-二氮雜-雙環(huán)[4.1.0]庚烷-3-羧酸苯甲酯(410mg，1.77mmol，如Tetrahedron Letters，43(23)，4289-4293，2002所示制備)在5毫升CH2Cl2中的攪拌混合物中?；旌衔镌谑覝叵聰嚢?.5小時(shí)然后以120毫升EtOAc稀釋。此混合物以5％檸檬酸溶液(3×30毫升)、飽和NaHCO3溶液(30毫升)和鹽水(30毫升)洗滌。干燥(MgSO4)有機(jī)層，過濾并在真空中濃縮以得到定量產(chǎn)率的化合物264A。其具有分析HPLC保留時(shí)間＝2.56分鐘(Phenomenox S5C18-HC 4.6×50毫米柱，10-90％甲醇水溶液，包含0.1％TFA，經(jīng)歷4分鐘，4毫升/分鐘，于220nm監(jiān)測)和LC/MS M++Na＝333。
264B.(3R，4R)-rel-芐基4-疊氮基-3-(甲基磺酰胺基)哌啶-1-羧酸酯的制備 將NaN3(458mg，7.08mmol)加到化合物264A(549mg，1.77mmol)在4毫升DMSO中的攪拌混合物中?；旌衔镌谑覝叵聰嚢?小時(shí)，并以80毫升的EtOAc稀釋。混合物以水(3×100毫升)、飽和NaHCO3溶液(40毫升)和鹽水(40毫升)洗滌。干燥(MgSO4)EtOAc層，過濾并在真空中濃縮，得到530mg(產(chǎn)率85％)的化合物264B。其具有分析HPLC保留時(shí)間＝2.90分鐘(Phenomenox S5C 18-HC 4.6×50毫米柱，10-90％甲醇水溶液，包含0.1％TFA，經(jīng)歷4分鐘，4毫升/分鐘，于220nm監(jiān)測)和LC/MS M++1＝354。
264C.(3R，4R)-rel-芐基4-氨基-3-(甲基磺酰胺基)哌啶-1-羧酸酯的制備
將Ph3P(900mg，3.43mmol)加到化合物264B(530mg，1.50mmol)在6毫升THF和1毫升水中的攪拌混合物中。反應(yīng)混合物在70℃下加熱15小時(shí)，并冷卻到室溫。此混合物在真空中濃縮，以15毫升的2N HCl溶液稀釋，然后以CHCl3(3×20毫升)洗滌。通過加入50％NaOH水溶液堿化到pH 12，以NaCl飽和，然后以EtOAc(3×25毫升)萃取。合并的EtOAc萃取物以鹽水(15毫升)洗滌，干燥(MgSO4)，過濾并在真空中濃縮以得到490mg(產(chǎn)率100％)的化合物264C。其具有分析HPLC保留時(shí)間＝1.67分鐘(Phenomenox S5C18-HC 4.6×50毫米柱，10-90％甲醇水溶液，包含0.1％TFA，經(jīng)歷4分鐘，4毫升/分鐘，于220nm監(jiān)測)和LC/MS M++1＝328。
264D.(3R，4R)-rel-1-((4-(3-甲氧基苯基氨基)吡咯并[1，2-f][1，2，4]三嗪-5-基)甲基)-3-(甲基磺酰胺基)哌啶-4-基氨基甲酸叔-丁酯的制備 將Et3N(0.63毫升，4.50mmol)，接著將二碳酸二-叔丁酯(390mg，1.80mmol)加到化合物264C(490mg，1.50mmol)在6毫升CH2Cl2中的攪拌溶液中。反應(yīng)混合物在室溫下攪拌3小時(shí)?；旌衔镆?0毫升的EtOAc稀釋，以飽和NaHCO3溶液(2×15毫升)和鹽水(15毫升)洗滌。干燥(MgSO4)有機(jī)相，過濾并在真空中濃縮以得到粗中間體。將粗中間體通過硅膠上的快速色譜法(己烷-EtOAc)純化以得到131mg的純物質(zhì)。將20％Pd(OH)2/C(30mg)在氮?dú)庀录拥皆?毫升甲醇中的此中間體中。反應(yīng)混合物以氫氣凈化幾次，并在氫氣下攪拌18小時(shí)。通過使用4μM聚碳酸酯膜過濾除去催化劑，并以MeOH(4×10毫升)沖洗。將合并的濾液在真空中濃縮以得到89mg的粗胺中間體。
化合物264D是通過146E所述相似的方法由此中間體制備。其具有分析HPLC保留時(shí)間＝2.72分鐘(Phenomenox S5C18-HC 4.6×50毫米柱，10-90％甲醇水溶液，包含0.1％TFA，經(jīng)歷4分鐘，4毫升/分鐘，于220nm監(jiān)測)和LC/MS M++1＝546。
將TFA(2.5毫升，32.4mmol)加到化合物264D(120mg，0.22mmol)在3毫升的CH2Cl2中的攪拌溶液中?；旌衔镌谑覝叵聰嚢?0分鐘，在真空中濃縮，并通過制備型HPLC純化以得到71mg(產(chǎn)率73％)的化合物264。其具有分析HPLC保留時(shí)間＝1.54分鐘(Phenomenox S5C18-HC 4.6×50毫米柱，10-90％甲醇水溶液，包含0.1％TFA，經(jīng)歷4分鐘，4毫升/分鐘，于220nm監(jiān)測)和LC/MS M++1＝446。
實(shí)施例265N-[(3S，4R)-4-氨基-1-({4-[(3-甲氧基苯基)氨基]吡咯并[2，1-f][1，2，4]三嗪-5-基}甲基)哌啶-3-基]甲磺酰胺 化合物265A的制備 化合物265A是通過化合物262D所述相似的方法由化合物262C(手性，區(qū)域異構(gòu)體(regioisomer)B)制備。其具有分析HPLC保留時(shí)間＝2.73分鐘(Phenomenox S5C18-HC 4.6×50毫米柱，10-90％甲醇水溶液，包含0.1％TFA，經(jīng)歷4分鐘，4毫升/分鐘，于220nm監(jiān)測)和LC/MS M++1＝502。
化合物265B的制備 將甲磺酰氯(15.0mg，0.13mmol)加到化合物265A(60.0mg，0.12mmol)和Et3N(0.05毫升，0.36mmol)在4毫升的DCM中的攪拌混合物中。此反應(yīng)混合物在室溫下攪拌20小時(shí)然后以100毫升的EtOAc稀釋。混合物以飽和NaHCO3溶液(20毫升)和鹽水(20毫升)洗滌。將EtOAc層干燥(MgSO4)，過濾并在真空中濃縮以得到70mg的定量產(chǎn)率的化合物265B。化合物265B具有分析HPLC保留時(shí)間＝2.61分鐘(Phenomenox S5C18-HC 4.6×50毫米柱，10-90％甲醇水溶液，包含0.1％TFA，經(jīng)歷4分鐘，4毫升/分鐘，于220nm監(jiān)測)和LC/MS M++1＝580。
化合物265是通過化合物249A所述相似的方法由化合物265B(手性，區(qū)域異構(gòu)體B)制備?；衔?65的結(jié)構(gòu)是根據(jù)將其1H-NMR與化合物264的1H-NMR相比較來確定的。該化合物具有分析HPLC保留時(shí)間＝1.50分鐘(Phenomenox S5 C18-HC 4.6×50毫米柱，10-90％甲醇水溶液，包含0.1％TFA，經(jīng)歷4分鐘，4毫升/分鐘，于220nm監(jiān)測)和LC/MS M++1＝446。
實(shí)施例266N-[(3R，4R)-4-氨基-1-({4-[(3-甲氧基苯基)氨基]吡咯并[2，1-f][1，2，4]三嗪-5-基}甲基)哌啶-3-基]甲磺酰胺(對映異構(gòu)體A) 266(對映異構(gòu)體A)
化合物266是由264通過手性制備型HPLC分離以具有ee≥99％的第一洗脫峰獲得?；衔?27A具有HPLC保留時(shí)間＝6.3分鐘(手性Pak，AD250×4.6毫米柱，10微米，220nM，0.8毫升/分鐘，EtOH作為洗脫劑)。LC/MSM++1＝446。
實(shí)施例267N-(3S，4S)-4-氨基-1-({4-[(3-甲氧基苯基)氨基]吡咯并[2，1-f][1，2，4]三嗪-5-基}甲基)哌啶-3-基]甲磺酰胺(對映異構(gòu)體B) 267(對映異構(gòu)體B)化合物267是由264通過手性制備型HPLC分離以具有ee≥99％的第二洗脫峰獲得?；衔?67具有HPLC保留時(shí)間＝7.9分鐘(手性Pak，AD250×4.6毫米柱，10微米，220nM，0.8毫升/分鐘，EtOH作為洗脫劑)。LC/MSM++1＝446。
權(quán)利要求
1.式(I)化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽或立體異構(gòu)體， 其中R1為環(huán)烷基或被取代的環(huán)烷基、芳基或被取代的芳基、雜環(huán)基或被取代的雜環(huán)基；R2為芳基、被取代的芳基、雜芳基或被取代的雜芳基、雜環(huán)基或被取代的雜環(huán)基；R3為氫、烷基或被取代的烷基；X為直接鍵、-NR3-或-O-；Y為直接鍵、烷基或被取代的烷基、鏈烯基或被取代的鏈烯基、炔基或被取代的炔基；條件是R2不是吲唑基或被取代的吲唑基。
2.下式的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽或立體異構(gòu)體， 其中X為直接鍵、-NR3-或-O-；Z為 或-NR7-；R2為芳基或被取代的芳基、雜芳基或被取代的雜芳基，R3、R4和R5獨(dú)立地選自氫、烷基和被取代的烷基；R6、R6a和R6b獨(dú)立地選自一或多個(gè)氫、鹵素、烷基、烷氧基、芳氧基、-CN、-NH2、-OH、-COOH、-CH2OR5、-CONHSO2R5、-CONR4R5、-NH烷基、-NHCO烷基、-NR4SO2烷基、-NR4SO2NR4R5、-OCONR4R5、-CF3和-OCF3，其中兩個(gè)可連接至相同的環(huán)碳原子上，條件是所得化合物為化學(xué)上穩(wěn)定的；R7為氫、烷基或-NH2，和n為0、1、2或3。
3.下式的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽或立體異構(gòu)體， 其中X為直接鍵、-NR3-或-O-；R2為芳基或被取代的芳基、雜芳基或被取代的雜芳基，R3、R4和R5獨(dú)立地選自氫、烷基和被取代的烷基；R6、R6a和R6b獨(dú)立地選自一或多個(gè)氫、鹵素、烷基、烷氧基、芳氧基、-CN、-NH2、-OH、-COOH、-CH2OR5、-CONHSO2R5、-CONR4R5、-NH烷基、-NHCO烷基、-NR4SO2烷基、-NR4SO2NR4R5、-OCONR4R5、-CF3和-OCF3，其中兩個(gè)可連接至相同的環(huán)碳原子上，條件是所得化合物為化學(xué)上穩(wěn)定的；和n為0、1、2或3。
4.根據(jù)權(quán)利要求3的化合物，其中R2為苯基、被取代的苯基、吡啶基、被取代的吡啶基、嘧啶基、被取代的嘧啶基、唑、被取代的唑、噻唑、被取代的噻唑、吡嗪基或被取代的吡嗪基；R6、R6a和R6b獨(dú)立地選自一或多個(gè)氫、-NH2、OH、烷氧基、-CONR4R5、-NR4SO2烷基、-NR4SO2NR4R5、-OCONR4R5、-NH烷基和-NHCO烷基；X為-NH-；和n為1或2。
5.選自下列的化合物5-[(4-氨基-1-哌啶基)甲基]-N-(3-氯-4-氟苯基)吡咯并[2，1-f][1，2，4]三嗪-4-胺，5-[(4-氨基-1-哌啶基)甲基]-N-2-萘基吡咯并[2，1-f][1，2，4]三嗪-4-胺，5-[(4-氨基-1-哌啶基)甲基]-N-苯基吡咯并[2，1-f][1，2，4]三嗪-4-胺，5-[(4-氨基-1-哌啶基)甲基]-N-(3-甲氧基苯基)吡咯并[2，1-f][1，2，4]三嗪-4-胺，5-[(4-氨基-1-哌啶基)甲基]-N-(3-乙炔基苯基)吡咯并[2，1-f][1，2，4]三嗪-4-胺，5-[(4-氨基哌啶-1-基)甲基]-N-(4-氟-3-甲氧基苯基)吡咯并[2，1-f][1，2，4]三嗪-4-胺，(3R，4R)-4-氨基-1-[[4-[(3-氯-4-氟苯基)氨基]吡咯并[2，1-f][1，2，4]三嗪-5-基]甲基]哌啶-3-醇，(3S，4S)-4-氨基-1-[[4-[(3-氯-4-氟苯基)氨基]吡咯并[2，1-f][1，2，4]三嗪-5-基]甲基]哌啶-3-醇，(3R，4R)-4-氨基-1-[[4-[(3-甲氧基苯基)氨基]吡咯并[2，1-f][1，2，4]三嗪-5-基]甲基]哌啶-3-醇，(3S，4S)-4-氨基-1-[[4-[(3-甲氧基苯基)氨基]吡咯并[2，1-f][1，2，4]三嗪-5-基]甲基]哌啶-3-醇，(3R，4R)-4-氨基-1-[[4-[(3-甲氧基-4-氟苯基)氨基]吡咯并[2，1-f][1，2，4]三嗪-5-基]甲基]哌啶-3-醇，(3R，4R)-4-氨基-1-({4-[(3-乙炔基苯基)-氨基]吡咯并[2，1-f]-[1，2，4]-三嗪-5-基}-甲基)哌啶-3-醇，(3R，4R)-4-氨基-1-({4-[(3-乙氧基苯基)-氨基]-吡咯并[2，1-f]-[1，2，4]三嗪-5-基}-甲基)哌啶-3-醇(3R，4R)-4-氨基-1-{[4-(2-萘基氨基)-吡咯并[2，1-f][1，2，4]三嗪-5-基]甲基}哌啶-3-醇，(3R，4R)-4-氨基-1-({4-[(3-甲氧基-4-甲基-苯基)氨基]吡咯并[2，1-f][1，2，4]三嗪-5-基}-甲基)哌啶-3-醇，(3R，4R)-4-氨基-1-({4-[(3-溴苯基)氨基]吡咯并[2，1-f][1，2，4]-三嗪-5-基}甲基)-哌啶-3-醇，(3R，4R)-4-氨基-1-({4-[(3-氟-5-甲氧基-苯基)氨基]吡咯并[2，1-f][1，2，4]三嗪-5-基}-甲基)哌啶-3-醇，(3S，4R)-4-氨基-1-({4-[(3-甲氧基苯基)氨基]吡咯并[2，1-f][1，2，4]三嗪-5-基}甲基)哌啶-3-醇，(3R，4S)-4-氨基-1-({4-[(3-甲氧基苯基)氨基]吡咯并[2，1-f][1，2，4]三嗪-5-基}甲基)哌啶-3-醇，(3S，4R)-4-氨基-1-({4-[(3-氯苯基)氨基]-吡咯并[2，1-f][1，2，4]-三嗪-5-基}甲基)-哌啶-3-醇，(3S，4R)-4-氨基-1-({4-[(3-氯-4-氟-苯基)氨基]吡咯并[2，1-f][1，2，4]三嗪-5-基}-甲基)哌啶-3-醇，(3S，4R)-4-氨基-1-({4-[(3-乙炔基苯基)氨基]吡咯并[2，1-f][1，2，4]三嗪-5-基}甲基)哌啶-3-醇，(3R，4S)-4-氨基-1-({4-[(3-乙炔基苯基)-氨基]吡咯并[2，1-f][1，2，4]三嗪-5-基}甲基)哌啶-3-醇，(3R，4S)-4-氨基-1-({4-[(3-氯苯基)氨基]吡咯并[2，1-f][1，2，4]-三嗪-5-基}甲基)-哌啶-3-醇，氨基甲酸(3R，4R)-4-氨基-1-({4-[(3-甲氧基苯基)氨基]吡咯并[2，1-f][1，2，4]三嗪-5-基}甲基)哌啶-3-基酯，氨基甲酸(3R，4R)-4-氨基-1-({4-[(3-乙炔基苯基)-氨基]吡咯并[2，1-f][1，2，4]三嗪-5-基}-甲基)哌啶-3-基酯，氨基甲酸(3R，4R)-4-氨基-1-({4-[(3-氯-4-氟-苯基)氨基]吡咯并[2，1-f][1，2，4]三嗪-5-基}-甲基)哌啶-3-基酯，氨基甲酸(3S，4R)-4-氨基-1-({4-[(3-氯-4-氟-苯基)氨基]吡咯并[2，1-f][1，2，4]三嗪-5-基}-甲基)哌啶-3-基酯，氨基甲酸(3S，4R)-4-氨基-1-({4-[(3-乙炔基苯基)-氨基]吡咯并[2，1-f][1，2，4]三嗪-5-基}-甲基)哌啶-3-基酯，(3S，4R)-4-氨基-1-({4-[(3-甲氧基苯基)氨基]吡咯并[2，1-f][1，2，4]三嗪-5-基}甲基)-3-甲基哌啶-3-醇，(3R/S，5R/S)-4-氨基-1-({4-[(3-甲氧基苯基)氨基]吡咯并[2，1-f][1，2，4]三嗪-5-基}甲基)哌啶-3，5-二醇，(3S，5S)-4-氨基-1-({4-[(4-氟-3-甲氧基-苯基)氨基]吡咯并[2，1-f][1，2，4]三嗪-5-基}-甲基)哌啶-3，5-二醇，(3R，5R)-4-氨基-1-({4-[(3-乙炔基苯基)-氨基]吡咯并[2，1-f][1，2，4]三嗪-5-基}甲基)哌啶-3，5-二醇，5-{[(3R，4R)-4-氨基-3-甲氧基哌啶-1-基]甲基}-N-(3-甲氧基苯基)吡咯并[2，1-f][1，2，4]三嗪-4-胺，5-(((4aR，8aR)-rel-六氫-1H-吡啶并[3，4-b][1，4]嗪-6(7H)-基)甲基)-N-(3-甲氧基苯基)吡咯并[1，2-f][1，2，4]三嗪-4-胺，(3R，4R)-4-氨基-1-({4-[(3-甲氧基苯基)氨基]吡咯并[2，1-f][1，2，4]三嗪-5-基}甲基)-N-(甲基磺?；?哌啶-3-甲酰胺，(3R，4R)-4-氨基-1-({4-[(3-乙炔基苯基)氨基]吡咯并[2，1-f][1，2，4]三嗪-5-基}甲基)-N-甲基哌啶-3-甲酰胺，(3R，4R)-4-氨基-1-({4-[(3-甲氧基苯基)氨基]吡咯并[2，1-f][1，2，4]三嗪-5-基}甲基)-N-甲基哌啶-3-甲酰胺，(3R，4R)-4-氨基-1-({4-[(3-甲氧基苯基)氨基]吡咯并[2，1-f][1，2，4]三嗪-5-基}甲基)哌啶-3-甲酰胺，((3R，4R)-1-((4-(3-甲氧基苯基氨基)吡咯并[1，2-f][1，2，4]三嗪-5-基)甲基)-4-((R)-1-苯基乙基氨基)哌啶-3-基)甲醇，N-[(3R，4R)-4-氨基-1-({4-[(3-甲氧基苯基)氨基]吡咯并[2，1-f][1，2，4]三嗪-5-基}甲基)哌啶-3-基]脲，N-(3R，4R)-4-氨基-1-({4-[(3-甲氧基苯基)氨基]吡咯并[2，1-f][1，2，4]三嗪-5-基}甲基)哌啶-3-基]甲磺酰胺，和N-{(3S，4R)-4-氨基-1-({4-[(3-甲氧基苯基)氨基]吡咯并[2，1-f][1，2，4]三嗪-5-基}甲基)哌啶-3-基]甲磺酰胺，或其藥學(xué)上可接受的鹽。
6.藥物組合物，其包含一種或多種權(quán)利要求1的化合物和藥學(xué)上可接受的載體。
7.藥物組合物，其包含一種或多種權(quán)利要求2的化合物和藥學(xué)上可接受的載體。
8.藥物組合物，其包含一種或多種權(quán)利要求3的化合物和藥學(xué)上可接受的載體。
9.藥物組合物，其包含一種或多種權(quán)利要求5的化合物和藥學(xué)上可接受的載體。
10.藥物組合物，其包含一種或多種權(quán)利要求1的化合物與藥學(xué)上可接受的載體和一種或多種其它抗癌劑或細(xì)胞毒素劑組合。
11.根據(jù)權(quán)利要求10的藥物組合物，其中所述抗癌劑或細(xì)胞毒素劑選自他莫昔芬、托瑞米芬、雷洛昔芬、屈洛昔芬、吲哚昔芬(iodoxifene)、醋酸甲地孕酮、阿那曲唑、來曲唑、伯拉唑(borazole)、依西美坦、氟他胺、尼魯米特、比卡魯胺、醋酸環(huán)丙孕酮、醋酸性瑞林(gosereline acetate)、醋酸亮丙瑞林、非那雄胺、金屬蛋白酶抑制劑、尿激酶型纖溶酶原激活物受體功能的抑制劑、生長因子抗體、生長因子受體抗體、貝伐單抗(bevacizurnab)、西妥昔單抗(cetuxirnab)、司徒曼布(trastuzumab)、erlotinib、酪氨酸激酶抑制劑、絲氨酸/蘇氨酸激酶抑制劑、甲氨蝶呤、5-氟尿嘧啶、嘌呤和腺苷類似物、阿糖胞苷、阿霉素、柔紅霉素、表柔比星、伊達(dá)比星、絲裂霉素-C、放線菌素D、普卡霉素、順鉑、卡鉑、氮芥、美法侖、苯丁酸氮芥、白消安、環(huán)磷酰胺、異環(huán)磷酰胺、亞硝基脲類、塞替派、長春新堿、長春瑞濱、長春堿、長春氟寧、紫杉醇、多西紫杉醇、epothilone類似物、discodermolide類似物、eleutherobin類似物、依托泊苷、替尼泊苷、安吖啶、托泊替康、flavopyridol、bortezomib和生物反應(yīng)調(diào)節(jié)物。
12.治療增殖疾病的方法，所述方法包括將治療有效量的一種或多種根據(jù)權(quán)利要求1的化合物給藥于需要該治療的哺乳動(dòng)物。
13.根據(jù)權(quán)利要求12的方法，其中所述增殖疾病選自癌癥、牛皮癬和類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎。
14.根據(jù)權(quán)利要求13的方法，其中所述增殖疾病為癌癥。
15.根據(jù)權(quán)利要求14的方法，其進(jìn)一步包括將治療有效量的一種或多種其它抗癌劑或細(xì)胞毒素劑與一種或多種根據(jù)權(quán)利要求1的化合物組合給藥于需要該治療的溫血?jiǎng)游铩?br> 16.根據(jù)權(quán)利要求15的方法，其中所述抗癌劑或細(xì)胞毒素劑選自他莫昔芬、托瑞米芬、雷洛昔芬、屈洛昔芬、吲哚昔芬(iodoxifene)、醋酸甲地孕酮、阿那曲唑、來曲唑、伯拉唑(borazole)、依西美坦、氟他胺、尼魯米特、比卡魯胺、醋酸環(huán)丙孕酮、醋酸性瑞林(gosereline acetate)、醋酸亮丙瑞林、非那雄胺、金屬蛋白酶抑制劑、尿激酶型纖溶酶原激活物受體功能的抑制劑、生長因子抗體、生長因子受體抗體、貝伐單抗(bevacizurnab)、西妥昔單抗(cetuxirnab)、司徒曼布、erlotinib、酪氨酸激酶抑制劑、絲氨酸/蘇氨酸激酶抑制劑、甲氨蝶呤、5-氟尿嘧啶、嘌呤和腺苷類似物、阿糖胞苷、阿霉素、柔紅霉素、表柔比星、伊達(dá)比星、絲裂霉素-C、放線菌素D、普卡霉素、順鉑、卡鉑、氮芥、美法侖、苯丁酸氮芥、白消安、環(huán)磷酰胺、異環(huán)磷酰胺、亞硝基脲類、塞替派、長春新堿、長春瑞濱、長春堿、長春氟寧、紫杉醇、多西紫杉醇、epothilone類似物、discodermolide類似物、eleutherobin類似物、依托泊苷、替尼泊苷、安吖啶、托泊替康、flavopyridol、bortezomib和生物反應(yīng)調(diào)節(jié)物。
17.調(diào)節(jié)受體酪氨酸激酶活性的方法，所述方法包括將有效量的一種或多種根據(jù)權(quán)利要求1的化合物給藥于需要該治療的哺乳動(dòng)物。
18.根據(jù)權(quán)利要求17的方法，其中所述受體酪氨酸激酶選自HER1、HER2和HER4。
19.治療與通過生長因子受體起作用的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑有關(guān)的疾病的方法，所述方法包括將治療有效量的一種或多種根據(jù)權(quán)利要求1的化合物給藥于需要該治療的哺乳動(dòng)物。
20.鑒定激酶ATP-競爭性抑制劑的方法，所述方法包括選擇權(quán)利要求1所限定的化合物，其結(jié)合在如圖2所示的腺嘌呤袋、核糖袋、磷酸酯結(jié)合袋、激酶的特異性區(qū)域1和特異性區(qū)域2中，其中占據(jù)核糖和/或磷酸酯結(jié)合袋的基團(tuán)可與一個(gè)或多個(gè)涉及磷酸酯結(jié)合的絕對保守的殘基互相作用。
21.根據(jù)權(quán)利要求20的方法，其中所述基團(tuán)與殘基Asn818和/或Asp831(HER1編號)或在核糖/磷酸酯結(jié)合袋的不同激酶中的相應(yīng)殘基互相作用。
全文摘要
本發(fā)明提供式(I)的化合物和其藥學(xué)上可接受的鹽。這些式(I)化合物抑制生長因子受體例如HER1、HER2和HER4的酪氨酸激酶活性，由此使得該化合物可用作抗增殖劑。式(I)化合物也可用于治療其它與通過生長因子受體起作用的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑有關(guān)的疾病。
文檔編號A61K31/53GK1922182SQ200480042198
公開日2007年2月28日 申請日期2004年12月23日 優(yōu)先權(quán)日2003年12月29日
發(fā)明者布賴恩·E·芬克, 阿什維尼庫馬·V·加韋, 格雷戈里·D·維特, 陳平, 哈羅德·馬斯塔勒茲, 德里克·J·諾里斯, 約翰·S·托卡斯基, 趙玉芬, 韓文景 申請人:布里斯托爾-邁爾斯·斯奎布公司