專利名稱：胡蘆巴提取物及其制備方法和應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種從胡蘆巴中提取的胡蘆巴提取物及其制備方法；以該提取物為生物活性成分的藥物粗合物，以及它們?cè)谥委熖悄虿〖疤悄虿∧I病的藥物中的應(yīng)用；該提取物在制備具有調(diào)節(jié)血糖、調(diào)節(jié)保護(hù)腎臟功能和結(jié)構(gòu)作用的保健食品中的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
在我國(guó)糖尿病已成為一種重要的常見病和多發(fā)病。隨著糖尿病發(fā)病率的明顯升高，糖尿病慢性并發(fā)癥的發(fā)病情況相當(dāng)突出。糖尿病腎病是糖尿病常見的慢性并發(fā)癥，在1型和2型糖尿病其發(fā)病率分別為30～40％和15～20％，已成為威脅糖尿病患者生命和健康的主要原因。糖尿病腎臟病變將引起腎臟功能和結(jié)構(gòu)的嚴(yán)重?fù)p害，最終導(dǎo)致腎衰竭而威脅患者生命。估計(jì)在未來的20年中糖尿病腎病將成為終末期腎衰竭的最重要原因。因此，研發(fā)防治糖尿病腎病的方法及有效藥物迫在眉睫。
胡蘆巴為豆科一年生草本植物胡蘆巴(Trigonella foenum-graecum L.)的干燥成熟種子(fenugreek seeds)，俗稱香豆子、香草子等。目前在我國(guó)幾個(gè)省和自治區(qū)有種植。胡蘆巴為我國(guó)傳統(tǒng)中藥材之一，被中華人民共和國(guó)藥典(2000年版)收載。胡蘆巴味苦、性溫、無毒，具有溫腎陽、祛寒濕、止痛的功效，主要用于腎臟虛冷，小腹冷痛，小腸疝氣，寒濕腳氣等疾病。胡蘆巴為藥食兼用植物，在印度等國(guó)民間常應(yīng)用其果實(shí)作為調(diào)味品。陜甘一帶民間則以種子粉末放入面食中，治小兒食疾等。在食品工業(yè)胡蘆巴用于咖啡、咖喱、香精等的制作。用胡蘆巴種子內(nèi)胚乳可制成胡蘆巴膠，水浸后膨脹，具有增稠作用，已作為一種新型食品增稠劑，用于冷食、飲料、糕點(diǎn)等食品中。
目前針對(duì)胡蘆巴中對(duì)治療糖尿病的有效藥理學(xué)活性成分的研究有部分報(bào)導(dǎo)，如在申請(qǐng)?zhí)枮?3144071.1的專利申請(qǐng)中公開了一種具有有效生物學(xué)活性成分的胡蘆巴提取物為胡蘆巴總皂苷。該胡蘆巴提取物能提高胰島素敏感性，降低血糖和改善血脂紊亂。
在申請(qǐng)?zhí)枮?00410070104.6的專利申請(qǐng)中披露了一種胡蘆巴提取物，其有效生物學(xué)活性成分為多糖15～50％，總黃酮5～15％和皂苷10～30％，認(rèn)為該提取物中的3種成分相互協(xié)同作用具有顯著的降糖和降脂作用。其提取胡蘆巴提取物的方法為將胡蘆巴粗粉用醇水溶液滲漉提取，滲漉液減壓濃縮，再經(jīng)過富集精制而得。該提取方法決定了胡蘆巴提取物中的多糖是大極性的多糖類化合物。
糖尿病腎病變嚴(yán)重威脅患者生命，已成為糖尿病患者死亡的主要原因。雖然目前已應(yīng)用一些方法進(jìn)行治療，但很多患者的腎臟病變?nèi)赃M(jìn)行性發(fā)展，目前我國(guó)常用血管緊張素轉(zhuǎn)換酶抑制劑和血管緊張素II受體阻滯劑保護(hù)糖尿病腎臟，但僅在一部分病人有效，而且其價(jià)格昂貴，在部分患者出現(xiàn)副作用。開發(fā)更有效的治療藥物十分需要。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種具有藥用價(jià)值的胡蘆巴提取物及其從胡蘆巴植物中提取得方法；本發(fā)明的另一目的是提供一種用于治療糖尿病、糖尿病腎病的藥物組合物及用于調(diào)節(jié)血糖、調(diào)節(jié)保護(hù)腎臟功能和結(jié)構(gòu)的保健食品本發(fā)明的進(jìn)一步目的是提供上述胡蘆巴提取物在制備治療糖尿病、糖尿病腎病的藥物和制備調(diào)節(jié)血糖、調(diào)節(jié)保護(hù)腎臟功能和結(jié)構(gòu)的保健食品方面的用途。
本發(fā)明人通過對(duì)胡蘆巴有效活性成分的大量藥效學(xué)和藥理學(xué)實(shí)驗(yàn)研究，從胡蘆巴中分離提取出一種具有藥用價(jià)值的胡蘆巴提取物，其特征是該提取物中含有60％～80％重量百分比的多糖。且該多糖是胡蘆巴總多糖中能溶于水的中等極性以下的多糖類化合物。
本發(fā)明胡蘆巴提取物的制備方法，包括以下步驟a.將胡蘆巴用常規(guī)煎煮法進(jìn)行煎煮得到水煎液；b.向過濾除渣后的水煎液中加入乙醇進(jìn)行沉淀分離，其乙醇加入量為使水煎液中乙醇濃度達(dá)10％～50％；c.經(jīng)離心棄掉上清液，其沉淀用乙醇水溶液洗滌后經(jīng)離心棄掉上清液，經(jīng)減壓蒸餾法除去乙醇得到沉淀物；d.上述沉淀物經(jīng)干燥后得所需的胡蘆巴提取物。
其中步驟b中所述的乙醇加入量?jī)?yōu)選為使水煎液的乙醇濃度達(dá)15％～30％。該乙醇濃度析出的胡蘆巴多糖的生物學(xué)活性更強(qiáng)。
其中步驟d中所述干燥方式為任何常規(guī)干燥法，優(yōu)選減壓干燥或噴霧干燥。
發(fā)明人發(fā)現(xiàn)本發(fā)明胡蘆巴提取物具有防治糖尿病腎臟病變，保護(hù)糖尿病腎臟的功能和結(jié)構(gòu)的作用。其具體表現(xiàn)在能降低糖尿病腎臟病變時(shí)尿蛋白排泄率；降低糖尿病腎臟病變時(shí)升高的血清肌酐和尿素氮含量；減輕糖尿病大鼠腎臟肥大和降低腎小球體積；減輕糖尿病大鼠腎臟的組織病理學(xué)改變；減輕糖尿病大鼠腎臟組織超微結(jié)構(gòu)(電子顯微鏡下)病變和提高糖尿病大鼠腎臟抗氧化防御功能，即能升高糖尿病大鼠腎皮質(zhì)超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-Px)和過氧化氫酶(CAT)活性，降低腎皮質(zhì)丙二醛(MDA)含量。
發(fā)明人還發(fā)現(xiàn)本發(fā)明胡蘆巴提取物具有明顯降低糖尿病大鼠血糖含量；能改善糖尿病大鼠的葡萄糖耐量的作用。在用藥后3周時(shí)血糖含量明顯降低；而且停藥2周后，血糖回升較緩慢，血糖持續(xù)在較低水平的時(shí)間較長(zhǎng)。
本發(fā)明用于治療糖尿病、糖尿病腎病的藥物組合物，其中含有治療有效量的上述胡蘆巴提取物和藥學(xué)可接受的輔料。
本發(fā)明胡蘆巴提取物可用于制備治療糖尿病及糖尿病腎病的藥物。
本發(fā)明胡蘆巴提取物可用于制備調(diào)節(jié)血糖、調(diào)節(jié)保護(hù)腎臟功能和結(jié)構(gòu)的保健食品。
與背景技術(shù)中所述兩項(xiàng)申請(qǐng)專利相比較，本發(fā)明獲得的胡蘆巴提取物成分簡(jiǎn)單，生物活性作用明確。其主要成分為60％至80％胡蘆巴多糖，胡蘆巴多糖具有生物活性。除具有降低血糖、改善糖尿病大鼠血脂紊亂和葡萄糖耐量外，還具有顯著的防治糖尿病腎病的作用，對(duì)糖尿病及其糖尿病腎病具有較好的防治效果。由于本發(fā)明的分離提取及制備方法完全不同于上述專利，決定了胡蘆巴提取物中多糖含量和組分的不同。本發(fā)明獲得的胡蘆巴提取物中多糖主要為中等極性以下的多糖類化合物。
本發(fā)明獲得的胡蘆巴提取物的分離提取工藝穩(wěn)定、簡(jiǎn)便，成本低；劑量小，無毒，無副作用，生物活性作用明確。對(duì)進(jìn)一步研究胡蘆巴提取物對(duì)防治糖尿病及糖尿病腎病的作用以及藥品和保健食品的開發(fā)，應(yīng)該具有良好的應(yīng)用前景。
具體實(shí)施例方式
從以下說明性實(shí)施例可進(jìn)一步理解本發(fā)明實(shí)質(zhì)，但并不能視為對(duì)本發(fā)明的唯一性限定。
實(shí)施例1本發(fā)明胡蘆巴提取物的制備稱取X克胡蘆巴，加大約5X克水，加熱使沸，保持微沸70min，將水煎液分出，胡蘆巴部分再加約4X克水，加熱使沸，保持微沸50min，合并兩次水煎液；過濾水煎液，向其中加入乙醇，使醇濃度達(dá)到25％，冷卻使沉淀析出；離心，棄掉上清。其沉淀加入25％乙醇洗滌三次，離心，棄掉上清。沉淀物經(jīng)減壓蒸餾法除去乙醇和減壓干燥，即得到胡蘆巴提取物。
所得胡蘆巴提取物的特征鑒定如下1.胡蘆巴提取物中胡蘆巴多糖類物質(zhì)的含量測(cè)定采用硫酸苯酚法，具體操作如下標(biāo)準(zhǔn)溶液的制備精確稱取經(jīng)80℃干燥的葡萄糖0.1000克，置于100ml容量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻；即得1000μg/ml葡萄糖溶液。經(jīng)反復(fù)稀釋配成標(biāo)準(zhǔn)系列葡萄糖溶液2.5μg/ml、5μg/ml、10μg/ml、15μg/ml和20μg/ml。
待測(cè)樣品的制備分別精確取一定量的胡蘆巴提取物經(jīng)適當(dāng)?shù)南♂?，定容，搖勻。待測(cè)。
測(cè)定分別精確量取標(biāo)準(zhǔn)系列葡萄糖溶液和待測(cè)樣品溶液0.50ml，加入6％苯酚溶液0.50ml，濃硫酸2.5ml，沸水水浴15分鐘，放至室溫，用分光光度計(jì)測(cè)定在490nm處的吸光度值。以標(biāo)準(zhǔn)系列葡萄糖溶液作標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算多糖含量。
結(jié)果胡蘆巴提取物中多糖含量為60％～80％；2.胡蘆巴提取物中蛋白質(zhì)的含量測(cè)定采用用考馬斯亮藍(lán)法(試劑盒)，具體操作如下標(biāo)準(zhǔn)溶液的制備精確量取試劑盒中濃度為56mg/ml標(biāo)準(zhǔn)蛋白液0.200ml，加水定容至10ml，即濃度為1.12mg/ml。將試劑盒中考馬斯亮藍(lán)試劑稀釋5倍，配成考馬斯亮藍(lán)溶液。
待測(cè)樣品的制備分別精確取一定量的胡蘆巴提取物經(jīng)適當(dāng)?shù)南♂?，定容，搖勻。待測(cè)。
測(cè)定分別精確量取濃度為1.12mg/ml標(biāo)準(zhǔn)蛋白溶液和待測(cè)樣品溶液0.050ml，加入考馬斯亮藍(lán)溶液3ml，放置10分鐘，用分光光度計(jì)測(cè)定在595nm處的吸光度值。按公式計(jì)算多糖含量待測(cè)蛋白質(zhì)濃度(mg/ml)＝待測(cè)蛋白質(zhì)吸光度值÷標(biāo)準(zhǔn)蛋白質(zhì)吸光度值×1.12結(jié)果胡蘆巴提取物中蛋白質(zhì)含量為10％～15％。
3.胡蘆巴提取物進(jìn)一步分離測(cè)定(1)去蛋白用常規(guī)除去除蛋白質(zhì)的方法去除胡蘆巴沉淀物中的蛋白質(zhì)。上清液經(jīng)醇沉淀法分離，減壓蒸發(fā)脫去醇和大部分水，得到去蛋白質(zhì)胡蘆巴沉淀物。常規(guī)除去除蛋白質(zhì)的方法包括三氯乙酸法、Sevag法、三氟三氯乙烷法、酚和鞣酸法等，優(yōu)選三氯乙酸法或Sevag法。
(3)DEAE-32纖維素分離取去蛋白質(zhì)胡蘆巴沉淀物溶液過DEAE-32纖維素柱，分別用蒸餾水和不同濃度的NaCl溶液進(jìn)行梯度洗脫。硫酸苯酚法檢測(cè)。得到5～10個(gè)多糖組分。
(4)測(cè)定分子量將葡聚糖Dextran T-10，T-40，T-70，T-90標(biāo)準(zhǔn)品分別配成1mg/ml溶液，過Sephadex G-100柱，0.05mol/L NaCl洗脫，分別得到4種標(biāo)準(zhǔn)品的洗脫體積。用標(biāo)準(zhǔn)品的洗脫體積對(duì)標(biāo)準(zhǔn)品的分子量對(duì)數(shù)作出分子量的標(biāo)準(zhǔn)曲線。將樣品上述多糖組分分別上Sephadex G-100柱，同樣洗脫液洗脫，得到5～10種樣品的洗脫體積，根據(jù)分子量標(biāo)準(zhǔn)曲線找到對(duì)應(yīng)的分子量。
結(jié)果胡蘆巴提取物含有多個(gè)分子量不等的多糖組分。說明胡蘆巴提取物中主要成分為胡蘆巴多糖混合物。
實(shí)施例2含有胡蘆巴提取物的沖劑的配比和制法取2000ml含有20％胡蘆巴提取物的水溶液，加入16g甜菊糖，待完全溶解混合后，噴霧干燥，將提取液干燥成提取物粉，加入84g糊精制成沖劑顆粒，其含66.7％胡蘆巴提取物。制成200袋，每袋裝1.5g。可作為藥品或保健食品施用于患者?？诜?，一日3次，每次1袋，每次一袋，服用時(shí)加水?dāng)嚢枞芙狻?br> 實(shí)施例3含有胡蘆巴提取物的膠囊的配比和制法將100g胡蘆巴提取物經(jīng)粉碎成細(xì)粉，制粒，裝膠囊；也可加入30～50g的乳糖或糊精，制粒，裝膠囊。裝量0.35～0.40g；可作為藥品或保健食品施用于患者?？诜蝗?次，每次3～4粒。
實(shí)施例4含有胡蘆巴提取物片劑的配比和制法原輔料 每片含量每萬片用量胡蘆巴提取物 0.250g 2.5kg淀粉 0.050g 0.5kg淀粉漿(17％) 0.080g 0.8kg硬脂酸鎂 0.050g 0.5kg微晶纖維素 0.030g 0.3kg胡蘆巴提取物粉碎細(xì)粉過20目篩，淀粉過120目篩，混合均勻，加入淀粉漿，攪拌，制成軟材，通過16目篩制粒，于70℃干燥，干粒經(jīng)14目篩整粒，加入硬脂酸鎂和微晶纖維素，混勻，用12mm平面沖模壓片?？勺鳛樗幤坊虮＝∈称肥┯糜诨颊?，口服，一日3次，每次4片。
實(shí)施例5胡蘆巴提取物對(duì)防治糖尿病腎病作用的活性研究實(shí)驗(yàn)。
選體重170～200g的Wistar健康大鼠，雌雄各半。實(shí)驗(yàn)組大鼠單次腹腔注射鏈脲佐菌素50mg/kg(溶于0.1mol/L檸檬酸緩沖液，pH 4.2)制備糖尿病模型。注射鏈脲佐菌素3天后檢測(cè)血糖和尿糖。尿糖≥3+，血糖≥16.7mmol/L列入糖尿病研究對(duì)象。對(duì)照組同時(shí)腹腔注射等體積的上述緩沖液。
實(shí)驗(yàn)方法一將成模的糖尿病大鼠隨機(jī)分為糖尿病組、陽性對(duì)照藥組和胡蘆巴提取液大、中、小劑量治療組，另設(shè)正常對(duì)照組。胡蘆巴提取液大、中、小劑量治療組灌胃給予胡蘆巴提取液1.5ml/100g體重(分別相當(dāng)于胡蘆巴提取物394、197和98.5mg/kg體重)。陽性對(duì)照藥洛汀新灌胃給予15mg/kg體重(1.5ml/100g體重)，對(duì)照組和糖尿病組僅灌胃給予1.5ml/100g體重飲用水。每日灌胃1次，共12周。
實(shí)驗(yàn)方法二將成模的糖尿病大鼠隨機(jī)分為糖尿病組和胡蘆巴提取液治療組，另設(shè)正常對(duì)照組。胡蘆巴提取液治療組灌胃給予胡蘆巴提取液1.5ml/100g體重(相當(dāng)于胡蘆巴提取物394mg/kg體重)。對(duì)照組和糖尿病組僅灌胃給予1.5ml/100g體重飲用水。實(shí)驗(yàn)共6周。
統(tǒng)計(jì)學(xué)處理數(shù)據(jù)結(jié)果以x±s表示，組間比較采用方差分析。
1.胡蘆巴提取物對(duì)糖尿病大鼠尿蛋白排泄率、血清肌酐和尿素氮含量的影響。
按實(shí)驗(yàn)方法一，于第12周末用代謝籠收集24小時(shí)尿液，測(cè)量體重，用考馬斯亮藍(lán)法測(cè)定尿蛋白含量，計(jì)算24小時(shí)尿蛋白排泄率(UAlb)。乙醚麻醉下摘眼球采血后處死動(dòng)物，用日立7150型自動(dòng)生化分析儀測(cè)定血清肌酐和尿素氮。結(jié)果見表1。
表1 各組動(dòng)物尿蛋白排泄率、血Scr和BUN的比較(x±s)

與對(duì)照組比較，**P＜0.01；與糖尿病組比較，△P＜0.05，△△P＜0.01結(jié)論胡蘆巴提取液大、中、小劑量治療組尿蛋白排泄率、血肌酐和尿素氮含量均明顯降低，其效果與陽性對(duì)照藥洛汀新的作用相近。
2.胡蘆巴提取物對(duì)糖尿病大鼠的腎臟和腎小球肥大的影響。
按實(shí)驗(yàn)方法一，取腎臟稱腎重，計(jì)算腎重/體重比值。常規(guī)制備石蠟切片，HE、PAS染色，光鏡觀察。用點(diǎn)計(jì)數(shù)法測(cè)量腎小球截面積[A]，每個(gè)腎臟至少測(cè)量30個(gè)腎小球，按V＝β/k×[A]3/2計(jì)算腎小球平均體積V。結(jié)果見表2。
表2 各組動(dòng)物腎重/體重和腎小球體積的比較(x±s)

與對(duì)照組比較，**P＜0.01；與糖尿病組比較，△P＜0.05，△△P＜0.01結(jié)論胡蘆巴提取液大、中劑量治療組腎重/體重比值和腎小球體積均明顯降低，其效果接近或優(yōu)于陽性對(duì)照藥洛汀新的作用，表明胡蘆巴提取液能減輕糖尿病大鼠的腎臟和腎小球的肥大。
3.胡蘆巴提取物對(duì)糖尿病大鼠腎臟抗氧化功能的影響。
按實(shí)驗(yàn)方法一，取腎臟分離腎皮質(zhì)，制備腎皮質(zhì)勻漿液。進(jìn)行以下指標(biāo)檢測(cè)1.用鄰苯三酚自氧抑制法測(cè)定腎皮質(zhì)超氧化物歧化酶(SOD)活性。2.用DTNB直接法測(cè)定谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-Px)活性。3.用四硼酸鹽底物法檢測(cè)過氧化氫酶(CAT)活性。4.用TBA法測(cè)定丙二醛(MDA)含量。結(jié)果見表3。
表3 各組動(dòng)物腎皮質(zhì)MDA含量、CAT、GSH-Px和SOD活性的比較(x±s)

對(duì)照組比較，與**P＜0.01；與糖尿病組比較，△P＜0.05，△△P＜0.01結(jié)論胡蘆巴提取液能升高糖尿病大鼠腎皮質(zhì)超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-Px)和過氧化氫酶(CAT)活性，降低腎皮質(zhì)丙二醛(MDA)含量。表明胡蘆巴提取液能提高糖尿病大鼠腎臟抗氧化酶活性，抑制脂質(zhì)過氧化反應(yīng)，對(duì)糖尿病大鼠腎臟病變具有改善作用。
4.胡蘆巴提取物對(duì)腎臟組織病理學(xué)改變的影響。
按實(shí)驗(yàn)方法一，光學(xué)顯微鏡下糖尿病組大鼠腎小球系膜區(qū)PAS染色陽性物質(zhì)明顯增多，系膜區(qū)明顯擴(kuò)寬，部分毛細(xì)血管塌陷，部分腎小管上皮細(xì)胞腫脹，少數(shù)腎小管腔內(nèi)可見蛋白樣管型。陽性對(duì)照藥洛汀新組、胡蘆巴提取液大、中、小劑量治療組的大鼠，腎臟病變均有明顯改善，腎小球系膜區(qū)PAS染色陽性物質(zhì)明顯減少，系膜區(qū)無明顯增寬，毛細(xì)血管開放，腎小管上皮細(xì)胞病變明顯減輕。
結(jié)論胡蘆巴提取物能減輕糖尿病大鼠腎臟肥大和降低腎小球體積；減輕糖尿病大鼠腎臟的組織病理學(xué)改變。
5.胡蘆巴提取物對(duì)腎小球超微結(jié)構(gòu)病變的影響。
按實(shí)驗(yàn)方法一，常規(guī)制備腎透射電鏡標(biāo)本，用日本JEM-1200EX型透射電子顯微鏡觀察腎小球病變。透射電子顯微鏡下，糖尿病組大鼠腎小球基膜呈節(jié)段性增厚，系膜基質(zhì)明顯增多，上皮足突呈不同程度融合。陽性對(duì)照藥組、胡蘆巴提取液大、中、小劑量治療組的腎小球超微結(jié)構(gòu)均有明顯改善作用，其中大、中劑量組的效果最明顯。
結(jié)論胡蘆巴提取物能減輕糖尿病大鼠腎臟組織超微結(jié)構(gòu)病變。
實(shí)施例6胡蘆巴提取物的降糖活性研究實(shí)驗(yàn)。
1.胡蘆巴提取物對(duì)糖尿病大鼠血糖影響的時(shí)效關(guān)系。
按實(shí)施例5實(shí)驗(yàn)方法一，于給藥前及給藥后的第3周、4周、6周、8周和12周各檢測(cè)血糖含量，結(jié)果見表4。
表4 胡蘆巴提取物對(duì)糖尿病大鼠血糖影響的時(shí)效關(guān)系1(x±s)

與糖尿病組比較，*P＜0.05，**P＜0.01；與對(duì)照組比較，△P＜0.05，△△P＜0.01結(jié)論胡蘆巴提取物能顯著降低糖尿病大鼠血糖含量。在用藥后3周時(shí)血糖含量顯著降低，4周時(shí)降至與對(duì)照組無顯著差別，并持續(xù)到12周。
按實(shí)施例5實(shí)驗(yàn)方法二，前4周給藥，每日灌胃1次，后2周停藥，共6周。于第1周、3周、4周、5周和6周各檢測(cè)血糖和尿糖含量，結(jié)果見表5。
表5 胡蘆巴提取物對(duì)糖尿病大鼠血糖影響的時(shí)效關(guān)系2(x±s)

與糖尿病組比較，*P＜0.05，**P＜0.01；與對(duì)照組比較，△P＜0.05，△△P＜0.01結(jié)論胡蘆巴提取物能顯著降低糖尿病大鼠血糖含量。在用藥后3周時(shí)血糖含量顯著降低；而且停藥2周，血糖回升較緩慢，血糖持續(xù)顯著低于糖尿病大鼠的時(shí)間較長(zhǎng)。
2.胡蘆巴提取物對(duì)糖尿病大鼠葡萄糖耐受試驗(yàn)按實(shí)施例5實(shí)驗(yàn)方法二，于4周末做葡萄糖耐受試驗(yàn)，大鼠給予葡萄糖后30分鐘、60分鐘、90分鐘和120分鐘測(cè)定血糖含量，結(jié)果見表6。
表6 胡蘆巴提取物給藥對(duì)糖尿病大鼠葡萄糖耐受試驗(yàn)的結(jié)果(x±s)

與糖尿病組比較，*P＜0.05，**P＜0.01；與對(duì)照組比較，△P＜0.05，△△P＜0.01結(jié)論胡蘆巴提取物能改善糖尿病大鼠的葡萄糖耐量。
經(jīng)過上述大量的藥效學(xué)和藥理學(xué)實(shí)驗(yàn)證明胡蘆巴提取物的生物學(xué)活性如下1.能降低糖尿病大鼠尿蛋白排泄率。
2.能降低糖尿病腎臟病變時(shí)升高的血清肌酐和尿素氮含量。
3.能減輕糖尿病大鼠腎臟肥大和降低腎小球體積。
4.能減輕糖尿病大鼠腎臟的組織病理學(xué)改變。
5.能減輕糖尿病大鼠腎臟組織超微結(jié)構(gòu)(電子顯微鏡下)病變。
6.能治療糖尿病腎臟病變，保護(hù)糖尿病腎臟的功能和結(jié)構(gòu)。
7.提取物A能提高糖尿病大鼠腎臟抗氧化防御功能，能升高糖尿病大鼠腎皮質(zhì)超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-Px)和過氧化氫酶(CAT)活性，降低腎皮質(zhì)丙二醛(MDA)含量。
8.能明顯降低糖尿病大鼠血糖含量；能改善糖尿病大鼠的葡萄糖耐量。在用藥后3周時(shí)血糖含量明顯降低；而且停藥2周后，血糖回升較緩慢，血糖持續(xù)在較低水平的時(shí)間較長(zhǎng)。
綜上所述，胡蘆巴提取物能明顯降低糖尿病大鼠的血糖水平、改善糖尿病大鼠血脂紊亂和保護(hù)腎臟功能及結(jié)構(gòu)，表現(xiàn)出對(duì)糖尿病主要生化、病理改變的復(fù)合治療作用。上述研究結(jié)果表明，胡蘆巴對(duì)糖尿病及其慢性并發(fā)癥——糖尿病腎病具有較好的防治效果。
權(quán)利要求
1.一種從胡蘆巴中提取的胡蘆巴提取物，其特征在于該提取物中含有60％～80％重量百分比的多糖。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的胡蘆巴提取物，其特征在于所說的多糖是胡蘆巴總多糖中能溶于水的中等極性以下的多糖類化合物。
3.權(quán)利要求1所述的胡蘆巴提取物的制備方法，其特征在于包括以下步驟a.將胡蘆巴用常規(guī)煎煮法進(jìn)行煎煮得到水煎液；b.向過濾除渣后的水煎液中加入乙醇進(jìn)行沉淀分離，其乙醇加入量為使水煎液中乙醇濃度達(dá)10％～50％；c.經(jīng)離心棄掉上清液，其沉淀用乙醇水溶液洗滌后經(jīng)離心棄掉上清液，經(jīng)減壓蒸餾法除去乙醇得到沉淀物；d.上述沉淀物經(jīng)干燥后得所需的胡蘆巴提取物。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的制備方法，其特征在于其中步驟b中所述的乙醇加入量?jī)?yōu)選為使水煎液的乙醇濃度達(dá)15％～30％。
5.用于治療糖尿病、糖尿病腎病的藥物組合物，其中含有治療有效量的權(quán)利要求1所述胡蘆巴提取物和藥學(xué)可接受的輔料。
6.權(quán)利要求1所述的胡蘆巴提取物在制備治療糖尿病及糖尿病腎病藥物中的應(yīng)用。
7.用于調(diào)節(jié)血糖、調(diào)節(jié)保護(hù)腎臟功能和結(jié)構(gòu)的保健食品，其中含有有效量的權(quán)利要求1所述胡蘆巴提取物和保健食品可接受的添加劑。
8.權(quán)利要求1所述的胡蘆巴提取物在制備具有調(diào)節(jié)血糖、調(diào)節(jié)保護(hù)腎臟功能和結(jié)構(gòu)作用的保健食品中的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種從胡蘆巴中提取的胡蘆巴提取物及其制備方法和應(yīng)用，該提取物中含有60％～80％重量百分比的多糖，其制備方法是將用煎煮法進(jìn)行煎煮得到的胡蘆巴水煎液中加入乙醇進(jìn)行沉淀分離、經(jīng)離心棄掉上清夜，其沉淀經(jīng)減壓蒸餾法除去乙醇和干燥，即獲得所需的胡蘆巴提取物。該胡蘆巴提取物具有顯著的防治糖尿病腎病的生物學(xué)活性，該提取物可用于制備防治糖尿病及糖尿病腎病的藥物和具有調(diào)節(jié)血糖、調(diào)節(jié)保護(hù)腎臟功能和結(jié)構(gòu)作用的保健食品。
文檔編號(hào)A61P3/00GK1733055SQ20051001707
公開日2006年2月15日 申請(qǐng)日期2005年8月25日 優(yōu)先權(quán)日2005年8月25日
發(fā)明者卜鳳泉, 李才, 劉忠英, 石艷, 苗春生, 張靜 申請(qǐng)人:吉林大學(xué)