專利名稱：一種注射用參芪扶正凍干粉針劑及其制備方法
技術領域：
本發(fā)明涉及一種注射用參芪扶正制劑及其制備方法。
背景技術：
參芪扶正注射液以黨參、黃芪為主藥，根據(jù)中醫(yī)辨證論治的精湛理論而配方研制，是目前臨床應用較為廣泛的中藥注射劑。
參芪扶正注射液臨床上對氣虛型的晚期腫瘤患者有良好的療效，具有益肺健脾，補氣養(yǎng)血的扶正作用，能明顯改善病、患者的臨床癥狀，提高生存質量。與化療藥物配合應用，具有增效減毒，提高自身免疫力的作用。
目前，注射用的劑型多為液體，穩(wěn)定性較差，貯存一定時間后往往出現(xiàn)pH值改變，引起外觀色澤變深，甚至出現(xiàn)渾濁或沉淀，使澄明度不合格。同時，有效成分含量低，雜質含量較高，不便于運輸和貯藏，更不便于醫(yī)護的臨床應用。

發(fā)明內容
本發(fā)明需要解決的技術問題在于提供一種注射用參芪扶正凍干粉針劑的及其制備方法，以克服現(xiàn)有技術存在的上述缺陷。
本發(fā)明的注射用參芪扶正凍干粉針劑的組分和重量份數(shù)含量如下藥效成分0.8～20份賦形劑 0.2～10份注射用水1～90份使凍干前的藥液的pH為4.5～6.0的pH調節(jié)劑；所說的藥效成分是采用如下重量份數(shù)的原料制備的黨參1～10份黃芪1～10份所說的pH調節(jié)劑選自氫氧化鈉、碳酸氫鈉、碳酸鈉中的一種或其混合物；所說的賦形劑選自甘露醇、右旋糖酐、乳糖中的一種或二種的混合物；本發(fā)明的注射用參芪扶正凍干粉針劑的制備方法包括如下步驟(1)將粉碎后的藥材黨參和黃芪顆粒，按照比例在5～15倍重量的水中浸泡20～40分鐘，攪拌煎煮1～5小時，濾液減壓濃縮至每1ml含總藥材量0.8～1.2g，然后加入重量濃度為85～95％的乙醇，使藥液含醇重量為60～70％，5～10℃冷藏靜置24～48小時，濾過，濾液減壓濃縮至每1ml含總藥材量1.8～2.2g，加入無水乙醇，使藥液含醇重量為80～85％，5～10℃冷藏靜置24～48小時，濾過，濾液減壓濃縮至干，干膏加適量水溶解，制成每1ml含總藥材量1.0～2.5g的浸膏溶液，5～10℃冷藏靜置48～60小時，濾過，過0.3～0.45μm的微孔濾膜，得藥效成分。
上述“每1ml含總藥材量”指的是每1ml濃縮液相當于藥材黨參和黃芪的總重量。該定義在“參芪扶正注射液”質量標準中有所提及。
(2)按照比例，將藥效成分加入賦形劑，用全量的體積的70～90％的注射用水稀釋成溶液，采用pH調節(jié)劑調節(jié)溶液pH4.5～6.0，然后以1000克藥材黨參和黃芪的重量為基準，補水至1500～2500ml的全量，混勻，過中空纖維膜(截留分子量1000～10000)，分裝，采用本領域常規(guī)的方法冷凍干燥，即得注射用參芪扶正凍干粉針劑。
本發(fā)明采用水提法，在原參芪扶正注射液的提取純化工藝基礎上，對醇沉工藝進行了系統(tǒng)研究，使有效成分的含量得以提高的同時，使無效組分進一步去除，可使藥液的濃縮程度進一步增大，且性質穩(wěn)定。這樣可采用高濃度的藥液凍干，使凍干量減小，既節(jié)約成本，又便于運輸和貯藏，更便于醫(yī)護的臨床應用。制備工藝合理可靠，性質穩(wěn)定，運輸、貯存、臨床應用更為方便的注射用參芪扶正凍干粉針制劑。
采用本工藝制備的產(chǎn)品，具有有效成分濃度高，溶解性好，性質穩(wěn)定等特點。
實施例一1、處方黨參2500g，黃芪2500g；2、工藝取處方量的黨參、黃芪，用去離子水沖洗干凈，加入去離子水浸泡30分鐘，攪拌煎煮3次，水量分別為8倍、6倍、6倍，時間分別為1小時、1小時、0.5小時。合并三次提取液，減壓濃縮至每1ml含總藥材量1.0g，在攪拌下加入95％乙醇，使含醇重量達70％，5℃冷藏靜置24小時，濾過，濾液回收乙醇并減壓濃縮至每1ml含總藥材量2.0g，在攪拌下加入無水乙醇，使含醇重量達80％，5℃冷藏靜置24小時，濾過，濾液減壓濃縮至干，加注射用水充分溶解，制成每1ml含總藥材量2.0g的藥液，5℃冷藏靜置48小時，濾過，并過0.45μm的微孔濾膜，得藥效成分。
用注射用水稀釋成9000ml的溶液，加入注射用甘露醇700g，注射用右旋糖酐-40 300g，溶解后用重量濃度10％的NaOH溶液調節(jié)pH為5.0～5.3，補水至10000ml，混勻，過中空纖維膜(截留分子量6000)，分裝于西林瓶中，采用本領域共知的方法冷凍干燥，即得注射用參芪扶正凍干粉針劑。
實施例二1、處方黨參1000g，黃芪4000g；2、工藝取處方量的黨參、黃芪，用去離子水沖洗干凈，加入去離子水浸泡20分鐘，攪拌煎煮3次，水量分別為10倍、8倍、8倍，時間分別為1小時、1小時、0.5小時。合并三次提取液，減壓濃縮至每1ml含總藥材量1.2g，在攪拌下加入95％乙醇，使含醇重量達60％，5℃冷藏靜置24小時，濾過，濾液回收乙醇并減壓濃縮至每1ml含總藥材量2.0g，在攪拌下加入無水乙醇，使含醇重量達80％，5℃冷藏靜置24小時，濾過，濾液減壓濃縮至干，加注射用水充分溶解，制成每1ml含總藥材量1.0g的藥液，5℃冷藏靜置48小時，濾過，并過0.45μm的微孔濾膜，得藥效成分。
用注射用水稀釋成9000ml的溶液，加入注射用甘露醇1000g，溶解后用重量濃度5％的NaOH溶液調節(jié)pH為5.4～5.7，補水至10000ml，混勻，過中空纖維膜(截留分子量6000)，分裝于西林瓶中，采用本領域共知的方法冷凍干燥，即得注射用參芪扶正凍干粉針劑。
實施例三1、處方黨參3000g，黃芪2000g；2、工藝取處方量的黨參、黃芪，用去離子水沖洗干凈，加入去離子水浸泡40分鐘，攪拌煎煮3次，水量分別為8倍、8倍、8倍，時間分別為1小時、1小時、0.5小時。合并三次提取液，減壓濃縮至每1ml含總藥材量1.0g，在攪拌下加入90％乙醇，使含醇重量達70％，5℃冷藏靜置24小時，濾過，濾液回收乙醇并減壓濃縮至每1ml含總藥材量1.8g，在攪拌下加入無水乙醇，使含醇重量達80％，5℃冷藏靜置24小時，濾過，濾液減壓濃縮至干，加注射用水充分溶解，制成每1ml含總藥材量2.5g的藥液，5℃冷藏靜置48小時，濾過，并過0.45μm的微孔濾膜，得藥效成分。
用注射用水稀釋成9000ml的溶液，加入注射用甘露醇1000g，注射用右旋糖酐-40 200g，溶解后用重量濃度10％的NaOH溶液調節(jié)pH為5.7～6.0，補水至10000ml，混勻，過中空纖維膜(截留分子量6000)，分裝于西林瓶中，采用本領域共知的方法冷凍干燥，即得注射用參芪扶正凍干粉針劑。
實施例四注射用參芪扶正凍干粉針劑實施例一的3批中試樣品穩(wěn)定性試驗結果1、實施例一第1批中試樣品初步穩(wěn)定性試驗結果見表1。
表1第1批中試樣品初步穩(wěn)定性試驗結果

2、實施例一第2批中試樣品初步穩(wěn)定性試驗結果見表2。
表2第2批中試樣品初步穩(wěn)定性試驗結果


3、實施例一第3批中試樣品初步穩(wěn)定性試驗結果見表3。
表3第3批中試樣品初步穩(wěn)定性試驗結果


對注射用參芪扶正凍干粉針劑實施例一的3批中試樣品進行初步穩(wěn)定性試驗，考察注射用參芪扶正凍干粉針劑的性狀、鑒別、澄明度、pH值、水分、無菌、過敏性、溶血性、刺激性、熱原、含量。經(jīng)過六個月的考察，結果表明，所有項目指標均無明顯變化。
實施例五一、主要藥效學研究采用實施例一的注射用參芪扶正凍干粉針劑對動物免疫作用的實驗研究結果顯示，與模型組相比，注射用參芪扶正凍干粉針劑(3g生藥/kg)劑量組可顯著提高S180荷瘤小鼠的血清半數(shù)溶血值(P＜0.05)。與S180荷瘤對照組相比，注射用參芪扶正凍干粉針劑(9、3g生藥/kg)、可顯著提高小鼠的廓清指數(shù)K及吞噬系數(shù)α值和肝臟系數(shù)值(P＜0.01，P＜0.05)。
采用實施例一的注射用參芪扶正凍干粉針劑對放、化療藥物的減毒作用研究結果顯示，與環(huán)磷酰胺(Cy)模型組相比，注射用參芪扶正凍干粉針劑(3、1g生藥/kg)劑量組可顯著地抑制由Cy造成的EC荷瘤小鼠外周血白細胞、骨髓有核細胞數(shù)和脾臟系數(shù)的下降(P＜0.01，P＜0.05)；與環(huán)磷酰胺(Cy)模型組相比，注射用參芪扶正凍干粉針劑(9g生藥/kg)劑量組可顯著地抑制由Cy造成的EC荷瘤小鼠外周血白細胞、脾臟系數(shù)的下降(P＜0.01)；與60Co照射模型組相比，注射用參芪扶正凍干粉針劑(3g生藥/kg)劑量組可顯著地抑制由60Co照射造成的EC荷瘤小鼠外周血白細胞、骨髓有核細胞數(shù)和脾臟指數(shù)的下降(P＜0.05)。
采用實施例一的注射用參芪扶正凍干粉針劑的抗腫瘤作用研究結果顯示，與空白對照組相比，注射用參芪扶正凍干粉針劑靜脈注射(iv)(9,3g/kg)對小鼠移植瘤肉瘤180(S180)、艾氏癌實體型(EC)，肝癌實體型(Heps)的腫瘤生長具有明顯的抑制作用(P＜0.01)。
綜上所述本發(fā)明的注射用參芪扶正凍干粉針劑不僅可顯著提高機體的免疫功能，而且對Cy射引起的毒性反應具有顯著的減毒作用，對60Co照射引起的毒性反應具有一定的減毒作用，同時注射用參芪扶正凍干粉針劑亦具有一定的抗腫瘤作用。
二、一般藥理研究的試驗研究本試驗探討了注射用參芪扶正凍干粉針劑對犬心血管系統(tǒng)、呼吸系統(tǒng)及小鼠神經(jīng)系統(tǒng)的影響。結果表明，注射用參芪扶正凍干粉針劑2.64g生藥/kg、1.32g生藥/kg和0.66g生藥/kg三個劑量組和陰性對照組(0.9％氯化鈉注射液)經(jīng)股靜脈滴注給藥后180min內，受試麻醉犬各劑量組各時間點血壓、呼吸頻率、呼吸幅度及各項心電圖指標給藥前后自身對照無顯著差異(P＞0.05)。表明該藥在受試劑量范圍內對家犬心血管和呼吸系統(tǒng)均無明顯影響。
注射用參芪扶正凍干粉針劑對小鼠神經(jīng)系統(tǒng)試驗的結果表明，該藥16g生藥/kg、8g生藥/kg和4g生藥/kg三個劑量組和陰性對照組(0.9％氯化鈉注射液)尾靜脈注射給藥，高、中、低三個劑量組對小鼠耳殼血管及尾色澤、正?；顒訜o明顯影響，對小鼠機能協(xié)調無明顯影響。該藥各劑量組與閾下劑量的戊巴比妥鈉無明顯協(xié)同作用，對小鼠自發(fā)活動亦無明顯影響(P＞0.05)。
三、急性毒性實驗注射用參芪扶正凍干粉針劑靜脈給藥小鼠LD50為29.9g生藥/kg，95％可信限為25.8～34.6g生藥/kg。
注射用參芪扶正凍干粉針劑腹腔給藥小鼠LD50為52.1g生藥/kg，95％可信限為43.7～62.1g生藥/kg。
四、大鼠長期毒性試驗研究注射用參芪扶正凍干粉針劑30g/kg，15g/kg，7.5g/kg(相當于人用劑量的90.9倍、45.5倍、22.7倍)生藥腹腔注射給藥，每天一次，連續(xù)給藥六個月，于給藥三、六個月及恢復期測量大鼠的血液學指標、血液生化學指標，并于實驗過程中觀察動物的一般表現(xiàn)，記錄食耗量和體重變化。于給藥三、六個月及恢復期每組分別取10只、20只和10只動物進行系統(tǒng)尸解，計算臟器指數(shù)，并對臟器進行病理組織學檢測。
實驗結果表明，注射用參芪扶正凍干粉針劑于給藥六個月及恢復期對動物的一般表現(xiàn)、進食量、體重、臟器指數(shù)及臟器組織學均無明顯影響。
血常規(guī)指標檢測表明，注射用參芪扶正凍干粉針劑高劑量組于給藥三個月嗜酸細胞顯著降低(P＜0.05)，給藥六個月嗜酸細胞顯著升高(P＜0.05)，嗜堿細胞極顯著降低(P＜0.01)，但其值仍在正常范圍之內，見參考文獻[2]；各劑量組給藥三、六個月及恢復期其他血液學各項指標數(shù)值與對照組相比無明顯差異。
血生化指標檢測表明，注射用參芪扶正凍干粉針劑高劑量組給藥六個月丙氨酸氨基轉換酶(谷丙轉氨酶)、堿性磷酸酶和總膽固醇極顯著降低(P＜0.01)，天門冬氨酸氨基轉換酶(谷草轉氨酶)顯著降低(P＜0.05)；中劑量組給藥三個月谷草轉氨酶及堿性磷酸酶極顯著降低(P＜0.01)，給藥六個月葡萄糖顯著降低(P＜0.05)。低劑量組給藥三個月谷丙轉氨酶顯著降低(P＜0.05)，谷草轉氨酶及堿性磷酸酶極顯著降低(P＜0.01)；低劑量組給藥六個月總膽紅素顯著升高(P＜0.05)，但其值仍在正常范圍之內。除此之外，各組的其他各項指標與對照組相比均無明顯差異。
五、Beagle犬長期毒性試驗注射用參芪扶正凍干粉針劑20g/kg，10g/kg，5g/kg生藥(相當于人用劑量的60.6倍、30.3倍、15.2倍)，靜脈滴注給藥，每天一次，連續(xù)給藥六個月，于給藥前、給藥三個月、給藥六個月及恢復期測量動物的心電圖、血液學指標、血液生化學指標及尿常規(guī)指標，并于實驗過程中觀察動物的一般表現(xiàn)和體重變化。于給藥三、六個月及恢復期每組分別取2、4只、2只動物進行系統(tǒng)尸解，計算臟器指數(shù)，并對臟器進行病理組織學檢測。實驗結果表明，注射用參芪扶正凍干粉針劑對動物的一般表現(xiàn)、心電圖、進食量、體重、臟器指數(shù)及臟器組織學均無明顯影響。
血常規(guī)指標檢測表明，注射用參芪扶正凍干粉針劑高劑量組于給藥三個月嗜酸粒細胞顯著降低(P＜0.05)，中劑量組給藥三個月，六個月單核細胞顯著降低(P＜0.05)，但其值仍在正常范圍之內。各時期的其它血液學指標數(shù)值與對照組相比均無明顯差異。
血生化指標檢測表明，注射用參芪扶正凍干粉針劑高劑量組于給藥三個月總膽固醇值顯著升高，中劑量組六個月總膽紅素顯著降低(P＜0.05)，但其值仍在正常范圍之內[1]。動物各時期的其它生化學指標數(shù)值與對照組相比均無明顯差異。
尿常規(guī)檢測表明，對照組在給藥前、給藥三、六個月及恢復期分別有2、3、0、0條Beagle犬出現(xiàn)隱血，在給藥前、給藥三、六個月及恢復期分別有1、0、2、0條Beagle犬出現(xiàn)尿蛋白；高劑量組在給藥前、給藥三、六個月及恢復期分別有4、2、2、1條Beagle犬出現(xiàn)隱血，在給藥前、給藥三、六個月及恢復期分別有0、0、1、0條Beagle犬出現(xiàn)尿蛋白；中劑量組在給藥前、給藥三、六個月及恢復期分別有4、3、1、0條Beagle犬出現(xiàn)隱血，在給藥前、給藥三、六個月及恢復期分別有2、0、0、0條Beagle犬出現(xiàn)尿蛋白；低劑量組在給藥前、給藥三、六個月及恢復期分別有3、1、1、0條Beagle犬出現(xiàn)隱血，在給藥前、給藥三、六個月及恢復期分別有1、2、0、1條Beagle犬出現(xiàn)尿蛋白；上述結果表明，給藥前、給藥三、六個月及恢復期隱血和尿蛋白的出現(xiàn)與藥物無明顯相關性。結果表明，注射用參芪扶正凍干粉針劑三個劑量組(高、中、低劑量組)于給藥三、六個月及恢復期對犬的各項尿常規(guī)指標無明顯影響。
六、過敏性、溶血性和局部刺激性試驗研究1.靜脈刺激性試驗以無菌操作方法向家兔右、左耳緣靜脈滴注注射用參芪扶正凍干粉針劑及0.9％氯化鈉注射液12.5ml/kg，每日給藥一次，連續(xù)3次，未發(fā)現(xiàn)給藥的靜脈有明顯的刺激作用，注射藥物的靜脈血管與氯化鈉注射液對照組相比結構正常，未見內皮細胞損傷、血栓形成及其他病理變化。
2.溶血試驗注射用參芪扶正凍干粉針劑在試管里最高濃度為0.008g生藥/ml時對家兔紅細胞無溶血和凝集作用。
3.過敏性實驗項實驗探討豚鼠對注射用參芪扶正是否具有過敏反應。結果表明，在本實驗條件下，注射用參芪扶正凍干粉針劑對受試動物豚鼠無致敏作用。
4.被動皮膚過敏實驗注射用參芪扶正凍干粉針劑被動皮膚過敏實驗表明，卵白蛋白組發(fā)生被動皮膚過敏反應，陰性對照組和注射用參芪扶正組均未發(fā)生被動皮膚過敏反應(兩組皮膚內層斑點均值均小于5mm)。
權利要求
1.一種注射用參芪扶正凍干粉針劑，其特征在于，組分和重量份數(shù)含量如下藥效成分 0.8～20份賦形劑 0.2～10份注射用水 1～90份使凍干前的藥液的pH為4.5～6.0的pH調節(jié)劑；所說的藥效成分是采用如下重量份數(shù)的原料制備的黨參 1～10份黃芪 1～10份。
2.根據(jù)權利要求1所述的注射用參芪扶正凍干粉針劑，其特征在于，所說的pH調節(jié)劑選自氫氧化鈉、碳酸氫鈉、碳酸鈉中的一種或幾種的混合物。
3.根據(jù)權利要求1所述的注射用參芪扶正凍干粉針劑，其特征在于，所說的賦形劑選自甘露醇、右旋糖酐、乳糖中的一種或二種的混合物。
4.根據(jù)權利要求2所述的注射用參芪扶正凍干粉針劑，其特征在于，所說的賦形劑選自甘露醇、右旋糖酐、乳糖中的一種或二種的混合物。
5.根據(jù)權利要求1～4任意項所述的注射用參芪扶正凍干粉針劑的制備方法，其特征在于，包括如下步驟(1)將粉碎后的藥材黨參和黃芪顆粒，按照比例在5～15倍重量的水中浸泡20～40分鐘，攪拌煎煮1～5小時，濾液減壓濃縮至每1ml含總藥材量0.8～1.2g，然后加入重量濃度為85～95％的乙醇，使藥液含醇重量為60～70％，5～10℃冷藏靜置24～30小時，濾過，濾液減壓濃縮至每1ml含總藥材量1.8～2.2g，加入無水乙醇，使藥液含醇重量為80～85％，5～10℃冷藏靜置24～30小時，濾過，濾液減壓濃縮至干，干膏加適量水溶解，制成每1ml含總藥材量1.0～2.5g的浸膏溶液，5～10℃冷藏靜置48～60小時，濾過，過0.3～0.45μm的微孔濾膜，即得藥效成分；(2)按照比例，將藥效成分加入賦形劑，用全量的體積的70～90％的注射用水稀釋成溶液，采用pH調節(jié)劑調節(jié)溶液pH4.5～6.0，然后以1000克藥材黨參和黃芪的重量為基準，補水至1500～2500ml的全量，混勻，過中空纖維膜(截留分子量1000～10000)，分裝，冷凍干燥，即得注射用參芪扶正凍干粉針劑。
6.根據(jù)權利要求5所述的方法，其特征在于，將粉碎后的藥材黨參和黃芪顆粒，按照比例在5～15倍重量的水中浸泡20～40分鐘，攪拌，煎煮1～5小時。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種注射用參芪扶正凍干粉針劑及其制備方法。其特征在于對黨參和黃芪采用水提法提取，提取液濃縮到一定濃度后，經(jīng)兩次醇沉，濃縮至干，加適量水溶解，濾過后即得藥效成分；加入適量賦形劑，將其配成溶液，過中空纖維膜，分裝，低溫冷凍干燥即得注射用參芪扶正。采用本法制備的產(chǎn)品疏松多孔、復溶性好，有效成分含量高，性質穩(wěn)定，臨床應用方便，療效好，無毒副作用。
文檔編號A61K9/19GK1772035SQ200510095219
公開日2006年5月17日 申請日期2005年11月3日 優(yōu)先權日2005年11月3日
發(fā)明者宋建國, 耿伯顯, 孫福寶, 溫泉 申請人:南京易川藥物研究所