專利名稱：含有至少一種多拉司他汀10衍生物的新的藥物組合物的制作方法
已知多拉司他汀(Dolastatin)10是一種有效的抗有絲分裂的肽，分離自海洋軟體動(dòng)物截尾海兔(Dolabella auricularia)，其防止微管蛋白聚合并且是不同于紫杉烷類和長(zhǎng)春花屬的化學(xué)類別(Curr.Pharm.Des.1999，5139-162)。多拉司他汀10的臨床前研究已經(jīng)證明在培養(yǎng)物中以及在動(dòng)物中異種移植腫瘤模型中針對(duì)多種鼠科和人腫瘤細(xì)胞系的活性。在Drugs of thefuture 1999，24(4)404-409中描述了多拉司他汀10和兩種合成的多拉司他汀衍生物西馬多丁和TZT-1027。
隨后已經(jīng)發(fā)現(xiàn)式(I)的多拉司他汀10衍生物，其在dolaproine部分具有多種硫代-基團(tuán)，在人癌癥異種移植模型中顯示顯著改善的抗腫瘤活性和治療指數(shù)(WO 03/008378)。
化學(xué)治療并且更具體而言是組合的化學(xué)治療是對(duì)于對(duì)抗癌癥所充分接受的方法之一。因而，當(dāng)揭示大于加和的效果和/或觀察到較少毒性時(shí)，不同抗腫瘤試劑的組合可以是增加抗腫瘤功效的方式。
現(xiàn)在已經(jīng)發(fā)現(xiàn)，至少一種多拉司他汀10衍生物，特別是至少一種如下限定的式(I)，當(dāng)連同已知的抗腫瘤藥物適羅達(dá)(Xeloda)TM、HerceptinTM、OmnitargTM、CamptosarTM(在日本TopotecinTM)或PlatinolTM(在日本RandaTM)組合時(shí)顯示大于加和的效果。
因此，本發(fā)明涉及一種藥物組合物，所述藥物組合物包含至少一種式(I)的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽 并組合以卡培他濱；曲妥單抗；pertuzumab；伊立替康或其藥學(xué)上可接受的鹽；或順鉑，用于在癌癥治療中同時(shí)、順序或分別給藥；其中R1和R2是甲基；乙基；丙基；異丙基或丁基；R3是苯基烷基-，或苯基二烷基氨基或苯基烷氧基，具有(C1-C4)-亞烷基并且其中所述苯基任選可以用一個(gè)、兩個(gè)或三個(gè)選自由下列各項(xiàng)組成的組的取代基取代鹵素；烷氧羰基；氨磺酰；烷基羰氧基；氨基甲酰氧基；氰基；單-或二-烷基氨基；烷基；烷氧基；苯基；苯氧基；三氟甲基；三氟甲氧基；烷硫基；羥基；烷基羰基氨基；1，3-間二氧雜環(huán)戊烯基；1，4-間二氧雜環(huán)戊烯基；氨基和芐基。
在優(yōu)選實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及藥物組合物，所述藥物組合物包含至少一種式(I)的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽 并組合以卡培他濱；曲妥單抗或pertuzumab，用于在癌癥治療中同時(shí)、順序或分別給藥；其中
R1和R2是甲基；乙基；丙基；異丙基或丁基；R3是苯基烷基-，或苯基二烷基氨基或苯基烷氧基，具有(C1-C4)-亞烷基并且其中所述苯基任選可以用一個(gè)、兩個(gè)或三個(gè)選自由下列各項(xiàng)組成的組的取代基取代鹵素；烷氧羰基；氨磺酰；烷基羰氧基；氨基甲酰氧基；氰基；單-或二-烷基氨基；烷基；烷氧基；苯基；苯氧基；三氟甲基；三氟甲氧基；烷硫基；羥基；烷基羰基氨基；1，3-間二氧雜環(huán)戊烯基；1，4-間二氧雜環(huán)戊烯基；氨基和芐基。
HerceptinTM(曲妥單抗)是重組體DNA-來(lái)源的、人源化的單克隆抗體，其高親合性地選擇性結(jié)合到人表皮生長(zhǎng)因子受體2蛋白質(zhì)，HER2，的胞外域。
OmnitargTM(Pertuzumab；2C4)是已知為HER二聚抑制劑(HDIs)的人源化的抗體。HDIs阻滯HER2受體與其它HER受體家族成員(HER1/EGFR，HER3，和HER4)協(xié)同的能力。在癌細(xì)胞中，干涉HER2與其它HER家族受體協(xié)同的能力阻滯細(xì)胞信號(hào)傳導(dǎo)并且可以最終導(dǎo)致癌細(xì)胞生長(zhǎng)抑制以及癌細(xì)胞的死亡。HDIs，由于它們的獨(dú)特的作用方式，具有在各式各樣的腫瘤中起作用的潛力，包括不超表達(dá)HER2的那些。
適羅達(dá)(Xeloda)TM(卡培他濱)是具有抗腫瘤活性的氟代嘧啶氨基甲酸酯。
CamptosarTM(TopotecinTM；CamptoTM；伊立替康鹽酸鹽；CPT-11)是喜樹(shù)堿的半合成的、水溶性衍生物，它是從植物諸如喜樹(shù)(Camptothecaacuminate)萃取的細(xì)胞毒性的生物堿。伊立替康以及它的活性代謝物，SN-38，抑制拓?fù)洚悩?gòu)酶I的作用，所述拓?fù)洚悩?gòu)酶I在DNA復(fù)制期間產(chǎn)生可逆性DNA中的單鏈斷裂。
PlatinolTM(RandaTM；BriplatinTM；順式-二氨二氯鉑；CDDP；順鉑)是無(wú)機(jī)鉑(II)絡(luò)合物。它廣泛地為多種腫瘤(生殖細(xì)胞、晚期的膀胱癌、腎上腺皮質(zhì)癌、乳腺癌、頭和頸癌、肺癌)開(kāi)處方。將它連續(xù)一至五天靜脈內(nèi)施用，接著是2-3周的休眠期。
如這里所用的術(shù)語(yǔ)“藥學(xué)上可接受的鹽”指保留母體化合物，例如式(I)的化合物，的生物學(xué)效能和性質(zhì)的常規(guī)酸-或堿-加成鹽。根據(jù)本發(fā)明，酸-加成鹽是特別優(yōu)選的并且由適合的非毒性的有機(jī)或無(wú)機(jī)酸形成。樣品酸-加成鹽包括從無(wú)機(jī)酸諸如鹽酸、氫溴酸、氫碘酸、硫酸、氨基磺酸、磷酸和硝酸衍生的那些，和從有機(jī)酸諸如對(duì)-甲苯磺酸、萘磺酸、萘二磺酸、甲磺酸、乙磺酸、三氟乙酸等衍生的那些。將藥物化合物(即藥物)化學(xué)修飾成鹽對(duì)于藥物化學(xué)家是眾所周知的技術(shù)，以獲得化合物的改進(jìn)的物理和化學(xué)穩(wěn)定性、吸濕性、流動(dòng)性和溶解度。參見(jiàn)，例如，Ansel，H.，等，Pharmaceutical Dosage Forms and Drug Delivery Systems，6th ed.，1995。
關(guān)于式(I)的化合物，特別優(yōu)選用三氟乙酸或鹽酸形成的藥學(xué)上可接受的鹽。
本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方案是如上所述的藥物組合物，所述藥物組合物包含至少一種式(I)的化合物，其中R1和R2是甲基；并且R3如上所限定。
本發(fā)明另一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案是如上所限定的藥物組合物，其中所述式(I)的化合物是式(I-A)的化合物 本發(fā)明的另一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案是如上所限定的藥物組合物，其中將所述式(I)的化合物與曲妥單抗組合施用。
本發(fā)明的另一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案是如上所限定的藥物組合物，其中將所述式(I)的化合物與pertuzumab組合施用。
本發(fā)明的另一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案是如上所限定的藥物組合物，其中將所述式(I)的化合物與卡培他濱組合施用。
本發(fā)明的另一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案是如上所限定的藥物組合物，其中將所述式(I)的化合物與順鉑組合施用。
本發(fā)明另一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案是如上所限定的藥物組合物，其中將所述式(I)的化合物與伊立替康或其藥學(xué)上可接受的鹽組合施用。
本發(fā)明的另一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案是如上所限定的藥物組合物，其中將所述式(I)的化合物與伊立替康鹽酸鹽組合施用。
本發(fā)明的另一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案是如上所限定的藥物組合物，由此將所述式(I)的化合物與卡培他濱、曲妥單抗、pertuzumab、順鉑或伊立替康或其藥學(xué)上可接受的鹽同時(shí)施用。
本發(fā)明的另一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案是如上所限定的藥物組合物，由此將所述式(I)的化合物與卡培他濱、曲妥單抗或pertuzumab同時(shí)施用。
本發(fā)明另一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案是如上所限定的藥物組合物，由此將所述式(I)的化合物與順鉑或伊立替康或其藥學(xué)上可接受的鹽同時(shí)施用。
本發(fā)明的另一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案是如上所限定的藥物組合物，由此將所述式(I)的化合物與伊立替康鹽酸鹽同時(shí)施用。
本發(fā)明的另一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案是如上所限定的藥物組合物，由此將所述式(I)的化合物與卡培他濱、曲妥單抗、pertuzumab、順鉑或伊立替康或其藥學(xué)上可接受的鹽順序施用。
本發(fā)明的另一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案是如上所限定的藥物組合物，由此將所述式(I)的化合物與卡培他濱、曲妥單抗或pertuzumab順序施用。
本發(fā)明另一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案是如上所限定的藥物組合物，由此將所述式(I)的化合物與順鉑或伊立替康或其藥學(xué)上可接受的鹽順序施用。
本發(fā)明的另一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案是如上所限定的藥物組合物，由此將所述式(I)的化合物與伊立替康鹽酸鹽順序施用。
本發(fā)明的另一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案是如上所限定的藥物組合物，由此將所述式(I)的化合物與卡培他濱、曲妥單抗、pertuzumab、順鉑或伊立替康或其藥學(xué)上可接受的鹽分別施用。
本發(fā)明的另一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案是如上所限定的藥物組合物，由此將所述式(I)的化合物與卡培他濱、曲妥單抗或pertuzumab分別施用。
本發(fā)明另一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案是如上所限定的藥物組合物，由此將所述式(I)的化合物與順鉑或伊立替康或其藥學(xué)上可接受的鹽分別施用。
本發(fā)明的另一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案是如上所限定的藥物組合物，由此將所述式(I)的化合物與伊立替康鹽酸鹽分別施用。
本發(fā)明另一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案是如上所述的藥物組合物用于癌癥治療的用途。
本發(fā)明另一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案是如上所述的藥物組合物用于實(shí)體瘤治療的用途。
本發(fā)明另一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案是如上所述的藥物組合物用于下列癌癥治療的用途結(jié)腸直腸癌、前列腺癌、胰腺癌、乳腺癌或肺癌。
本發(fā)明另一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案是如上所述的藥物組合物用于下列癌癥治療的用途結(jié)腸直腸癌、前列腺癌、胰腺癌或乳腺癌。
本發(fā)明另一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案是如上所述藥物組合物用于肺癌，優(yōu)選非小細(xì)胞肺癌(NSCLC)的治療的用途。
本發(fā)明另一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案是如上所述藥物組合物用于肺癌，優(yōu)選非小細(xì)胞肺癌(NSCLC)的治療的用途，所述藥物組合物含有式(I)或(I-A)的化合物，連同順鉑或伊立替康或其藥學(xué)上可接受的鹽。
本發(fā)明另一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案是如上所述藥物組合物用于肺癌，優(yōu)選非小細(xì)胞肺癌(NSCLC)的治療的用途，所述藥物組合物含有式(I)或(I-A)的化合物連同伊立替康鹽酸鹽。
本發(fā)明另一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案是如上所述的藥物組合物用于癌癥治療用的藥物生產(chǎn)的用途。
本發(fā)明另一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案是如上所述的藥物組合物用于實(shí)體瘤治療用的藥物生產(chǎn)的用途。
本發(fā)明另一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案是如上所述的藥物組合物用于下列癌癥治療用的藥物生產(chǎn)的用途結(jié)腸直腸癌、前列腺癌、胰腺癌、乳腺癌或肺癌。
本發(fā)明另一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案是如上所述的藥物組合物用于下列癌癥治療用的藥物生產(chǎn)的用途結(jié)腸直腸癌、前列腺癌、胰腺癌或乳腺癌。
本發(fā)明另一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案是如上所述的藥物組合物用于肺癌治療用的藥物生產(chǎn)的用途。
本發(fā)明另一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案是如上所述藥物組合物用于非小細(xì)胞肺癌治療用的藥物生產(chǎn)的用途。
特別是，本發(fā)明涉及用治療的、大于加和的組合的癌癥治療，所述組合為N-[1-({1-仲-丁基-4-[2-(2-{[2-(3-羥基-苯基)-乙基]-甲基-氨基甲酰基}-1-甲硫基-丙基)-吡咯烷-1-基]-2-甲氧基-4-氧代-丁基}-甲基-氨基甲?；?-2-甲基-丙基]-2-二甲基氨基-3-甲基-丁酰胺(式(I-A)的化合物)和卡培他濱、曲妥單抗、pertuzumab、順鉑和伊立替康或其藥學(xué)上可接受的鹽；以及這樣的組合用于癌癥的改善治療的用途，所述癌癥特別是實(shí)體瘤，更具體而言是上面限定的那些。
更具體而言，本發(fā)明涉及用治療的、大于加和的組合治療癌癥，所述組合為N-[1-({1-仲-丁基-4-[2-(2-{[2-(3-羥基-苯基)-乙基]-甲基-氨基甲?；鶀-1-甲硫基-丙基)-吡咯烷-1-基]-2-甲氧基-4-氧代-丁基}-甲基-氨基甲?；?-2-甲基-丙基]-2-二甲基氨基-3-甲基-丁酰胺(式(I-A)的化合物)和卡培他濱、曲妥單抗或pertuzumab；以及這樣的組合用于癌癥的改善治療的用途，所述癌癥特別是實(shí)體瘤，更具體而言是上面限定的那些。
更具體而言，本發(fā)明涉及用治療的、大于加和的組合治療癌癥，所述組合為N-[1-({1-仲-丁基-4-[2-(2-{[2-(3-羥基-苯基)-乙基]-甲基-氨基甲酰基}-1-甲硫基-丙基)-吡咯烷-1-基]-2-甲氧基-4-氧代-丁基}-甲基-氨基甲?；?-2-甲基-丙基]-2-二甲基氨基-3-甲基-丁酰胺(式(I-A)的化合物)和順鉑或伊立替康或其藥學(xué)上可接受的鹽；以及這樣的組合用于癌癥的改善治療的用途，所述癌癥特別是實(shí)體瘤，更具體而言是上面限定的那些。
更具體而言，本發(fā)明涉及用治療的、大于加和的組合治療癌癥，所述組合為N-[1-({1-仲-丁基-4-[2-(2-{[2-(3-羥基-苯基)-乙基]-甲基-氨基甲酰基}-1-甲硫基-丙基)-吡咯烷-1-基]-2-甲氧基-4-氧代-丁基}-甲基-氨基甲?；?-2-甲基-丙基]-2-二甲基氨基-3-甲基-丁酰胺(式(I-A)的化合物)和伊立替康鹽酸鹽；以及這樣的組合用于肺癌特別是非小細(xì)胞肺癌的改善治療的用途。
出乎意料地發(fā)現(xiàn)，卡培他濱、曲妥單抗、pertuzumab、順鉑或伊立替康或其藥學(xué)上可接受的鹽的每一個(gè)與根據(jù)本發(fā)明的N-[1-({1-仲-丁基-4-[2-(2-{[2-(3-羥基-苯基)-乙基]-甲基-氨基甲?；鶀-1-甲硫基-丙基)-吡咯烷-1-基]-2-甲氧基-4-氧代-丁基}-甲基-氨基甲?；?-2-甲基-丙基]-2-二甲基氨基-3-甲基-丁酰胺的給藥導(dǎo)致改善的、大于加和的抗腫瘤效果。這意味著所述抗腫瘤效果顯著優(yōu)于通過(guò)單獨(dú)的每一化合物的效果的簡(jiǎn)單加和而獲得的結(jié)果。即，根據(jù)本發(fā)明的每一組合的施用與任何一種單獨(dú)組分相比，在不顯著增加毒性的情況下導(dǎo)致改善的治療指數(shù)(即，優(yōu)越的功效)，即通過(guò)在所述研究期間的體重控制判斷。備選地，本發(fā)明可以減少至少一種組分的量(比較在單一療法中一般給定的量)同時(shí)保持合乎需要的治療指數(shù)。在優(yōu)選實(shí)施方案中，兩個(gè)組分的量(與單一療法中一般給定的量相比)是減少的，提供減少的毒性，同時(shí)仍保持合乎需要的治療指數(shù)。
更具體而言，本發(fā)明涉及治療癌癥的方法，所述方法包含將有效量的治療組合物施用至需要其的患者，所述組合物含有至少一種由式(I)或(I-A)的化合物組成的第一組分，和由卡培他濱、曲妥單抗、pertuzumab、順鉑或伊立替康或其藥學(xué)上可接受的鹽組成的第二組分；所述方法特征在于，相對(duì)于它的單獨(dú)有效組分的每一個(gè)的效果，所述組合物顯示大于加和的效果。
對(duì)此更進(jìn)一步，本發(fā)明涉及治療癌癥的方法，所述方法包含將有效量的治療組合物施用至需要其的患者，所述組合物至少含有一種由式(I)或(I-A)的化合物組成的第一組分，和由卡培他濱、曲妥單抗或pertuzumab組成的第二組分；所述方法特征在于，相對(duì)于它的單獨(dú)有效組分的每一個(gè)的效果，所述組合物顯示大于加和的效果。
更具體而言，本發(fā)明涉及治療非小細(xì)胞肺癌的方法，所述方法包含將有效量的治療組合物施用至需要其的患者，所述組合物含有至少一種由式(I)或(I-A)的化合物組成的第一組分，和由順鉑或伊立替康或其藥學(xué)上可接受的鹽組成的第二組分；所述方法特征在于，相對(duì)于它的單獨(dú)有效組分的每一個(gè)的效果，所述組合物顯示大于加和的效果。
根據(jù)本發(fā)明的方法，兩種組分式(I)或(I-A)的化合物和卡培他濱、曲妥單抗、pertuzumab、順鉑或伊立替康或其藥學(xué)上可接受的鹽可以是同時(shí)、分別或隨著時(shí)間順序施用的。當(dāng)分別施用時(shí)，可以首先施用式(I)或(I-A)的化合物，或者可以首先施用卡培他濱、曲妥單抗、pertuzumab、順鉑或伊立替康或其藥學(xué)上可接受的鹽。
如上所限定的治療組合物至少包含有效治療量的式(I)或(I-A)的化合物和卡培他濱、曲妥單抗、pertuzumab、順鉑或伊立替康或其藥學(xué)上可接受的鹽和藥物上可接受的載體，而一起或分別形成一種或多種液體組合物諸如溶液或混懸劑，如這樣或在膠囊中；或者形成一種或多種固體組合物諸如壓制片、丸劑、散劑等。優(yōu)選的劑量和劑型相應(yīng)于在每一種上述產(chǎn)品的單一療法中典型推薦的那些，并且本領(lǐng)域技術(shù)人員容易從相應(yīng)的公布得到。優(yōu)選地，根據(jù)依賴于癌癥類型并且更具體而言依賴于腫瘤類型的治療方案，進(jìn)行式(I)或(I-A)的化合物和第二附加組分的施用。根據(jù)本發(fā)明的式(I)或(I-A)的化合物和卡培他濱、曲妥單抗、pertuzumab、順鉑或伊立替康或其藥學(xué)上可接受的鹽的組合，所述組合的施用劑量范圍也可以隨著給藥途徑、還有所述患者的狀態(tài)(年齡、所述疾病的程度)而改變。
不考慮所述施用的使用，即同時(shí)地、分別地或隨著時(shí)間順序地，所述兩個(gè)組分，式(I)或(I-A)的化合物和卡培他濱、曲妥單抗、pertuzumab、順鉑或伊立替康或其藥學(xué)上可接受的鹽，可以通過(guò)相同或不同的給藥途徑施用。當(dāng)它們以分開(kāi)的形式存在時(shí)，可以將它們通過(guò)相同或不同的給藥途徑施用，并且當(dāng)它們以不分開(kāi)的形式存在時(shí)，通過(guò)相同的給藥途徑。
卡培他濱、曲妥單抗、pertuzumab、順鉑或伊立替康鹽酸鹽對(duì)于本領(lǐng)域技術(shù)人員是已知的。它們的優(yōu)選劑量和劑型是充分備有證明文件的并且對(duì)于本領(lǐng)域技術(shù)人員是容易得到的。根據(jù)本發(fā)明的優(yōu)選劑量是5至50mg/kg，優(yōu)選15至30mg/kg的曲妥單抗；5至60mg/kg，優(yōu)選20至40mg/kg的pertuzumab；和50至550mg/kg，優(yōu)選150至400mg/kg，更優(yōu)選300至400mg/kg的卡培他濱。以0.5和10mg/kg之間，優(yōu)選4和7mg/kg之間的劑量使用順鉑；并且伊立替康鹽酸鹽以10至120mg/kg，優(yōu)選30至100mg/kg，更優(yōu)選60至90mg/kg之間的劑量。
對(duì)于式(I-A)的化合物，在根據(jù)本發(fā)明的研究中將最大耐受劑量(MTD)確定成6mg/kg。因此可以以0.1和6mg/kg之間的劑量，優(yōu)選以1和6mg/kg之間的劑量，更優(yōu)選以3、4和6mg/kg的劑量施用式(I-A)的化合物。應(yīng)當(dāng)理解，一些式(I)的化合物可以顯示更高的MTD’s，因此可應(yīng)用大于6mg/kg的劑量而不背離本發(fā)明的實(shí)質(zhì)。
特別是，對(duì)于根據(jù)本發(fā)明的三個(gè)組合觀察到下列結(jié)果式(I-A)的化合物與曲妥單抗(HerceptinTM；KPL-4異種移植模型)與用式(I-A)化合物或曲妥單抗的單一療法結(jié)果相反，3、4和6mg/kg式(I-A)化合物與20mg/kg曲妥單抗的組合研究在KPL-4人乳腺癌模型中，在全部劑量，導(dǎo)致更長(zhǎng)持續(xù)時(shí)間(至少達(dá)到第70天)的顯著腫瘤退行。以3mg/kg(1/2MTD)或4mg/kg(2/3MTD)的式(I-A)化合物加20mg/kg(MTD)曲妥單抗，在第28天后不存在可觸摸的腫瘤。用式(I-A)化合物和曲妥單抗的組合的小鼠中抗腫瘤活性的觀察延續(xù)直到第252天。6mg/kg(MTD)的式(I-A)化合物加20mg/kg(MTD)曲妥單抗的組合也導(dǎo)致腫瘤退行。而且，在3mg/kg式(I-A)化合物加20mg/kg曲妥單抗的5只小鼠中的2只中以及在4或6mg/kg式(I-A)化合物加20mg/kg曲妥單抗的全部5只小鼠中觀察到完全的腫瘤退行。
為了量化每種藥物在組合中的效能，用最后注射后一周時(shí)收集的數(shù)據(jù)進(jìn)行了統(tǒng)計(jì)分析。相比于2.5％DMSO-鹽水加20mg/kg人IgG對(duì)照的腫瘤體積，用3、4、或6mg/kg的式(I-A)化合物治療的腫瘤體積顯著減小。另外，將3、4、或6mg/kg的式(I-A)化合物與20mg/kg曲妥單抗的組合治療的腫瘤體積與式(I-A)化合物的單一療法的那些在第21天相比與單一療法的那個(gè)相比，每個(gè)組合都顯示優(yōu)越的抗腫瘤活性。
基于這些發(fā)現(xiàn)，本發(fā)明的特別優(yōu)選實(shí)施方案是3mg/kg式(I-A)化合物與20mg/kg曲妥單抗的組合。
本發(fā)明的另一個(gè)特別優(yōu)選實(shí)施方案是4或6mg/kg式(I-A)化合物與20mg/kg曲妥單抗的組合。
本發(fā)明的又一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案是如上所限定的組合用于制造乳腺癌治療用的藥物。
式(I-A)化合物與pertuzumab(OmnitargTM；KPL-4異種移植模型)在這些組合研究中，利用KPL-4人乳腺癌異種移植模型，在式(I-A)化合物的全部劑量下觀察到顯著的腫瘤退行。在4mg/kg式(I-A)化合物加30mg/kg pertuzumab下，在第28天后通過(guò)觸診沒(méi)有檢出腫瘤的證據(jù)。在用式(I-A)化合物和pertuzumab的組合的小鼠中的抗腫瘤活性觀察延續(xù)直到第133天。4mg/kg式(I-A)化合物加30mg/kg的pertuzumab的組合顯示有效的腫瘤退行。而且，在4mg/kg式(I-A)化合物加30mg/kg的pertuzumab的5只小鼠的3只中的腫瘤完全退行。
為了評(píng)價(jià)組合中每種藥物的效能，利用在最后注射后的一周時(shí)評(píng)價(jià)的腫瘤體積的結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。相比于對(duì)照的腫瘤體積，用式(I-A)化合物以3、4、或6mg/kg治療的腫瘤體積顯著減??；利用Tukey檢驗(yàn)法在第21天觀察到顯著的差異(以3mg/kg時(shí)P＝0.0038，以及對(duì)于4和6mg/kg時(shí)P＜0.0001)。另外，將3、4、或6mg/kg的式(I-A)化合物與pertuzumab的組合治療的腫瘤體積與式(I-A)化合物的單一療法的那些在第21天相比與式(I-A)化合物單一療法的那個(gè)相比，每個(gè)組合都顯示優(yōu)越的抗腫瘤活性。
基于這些發(fā)現(xiàn)，本發(fā)明的特別優(yōu)選實(shí)施方案是4mg/kg式(I-A)化合物與30mg/kg的pertuzumab的組合。
本發(fā)明的又一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案是如上所限定的組合用于制造乳腺癌治療用的藥物。
式(I-A)化合物與卡培他濱(XelodaTM；MAXF-401異種移植模型)式(I-A)化合物的每個(gè)劑量(3、4、或6mg/kg)與359mg/kg卡培他濱組合的抗腫瘤活性顯示等于單一試劑的任何一個(gè)在MAXF-401人乳腺癌異種移植模型中的抗腫瘤活性。式(I-A)化合物的每種劑量加539mg/kg(MTD)卡培他濱的組合顯示不太有利的效果。
為了評(píng)價(jià)抗腫瘤效果，利用在最后注射后的一周時(shí)評(píng)定的腫瘤體積的結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。在2.5％DMSO對(duì)照中，用式(I-A)化合物以3、4、或6mg/kg治療的腫瘤體積顯著地減小。另外，將3、4、或6mg/kg的式(I-A)化合物與卡培他濱的組合治療的腫瘤體積與式(I-A)化合物的單一療法的那些在第21天相比組合導(dǎo)致與用單一療法觀察到的類似的抗腫瘤活性。然而，用組合治療觀察的退行持續(xù)時(shí)間比用卡培他濱單一療法更長(zhǎng)。
基于這些發(fā)現(xiàn)，本發(fā)明的特別優(yōu)選實(shí)施方案是4mg/kg式(I-A)化合物與359mg/kg卡培他濱的組合。
本發(fā)明的又一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案是如上所限定的組合用于制造乳腺癌治療用的藥物。
式(I-A)化合物與順鉑(PlatinolTM，CDDP；NCI-H460異種移植模型)檢驗(yàn)了與CDDP組合的式(I-A)化合物在NCI-H460人大細(xì)胞肺癌異種移植模型中的抗腫瘤活性。將式(I-A)的化合物每周施用，連續(xù)3周，并且將CDDP在治療的第一天施用。在2mg/kg(1/3的最大耐受劑量，MTD)和3mg/kg(1/2MTD)的劑量，在第12天，式(I-A)化合物將腫瘤生長(zhǎng)分別減少45％和93％。在5mg/kg(1/2MTD)和6.7mg/kg(2/3MTD)的劑量，在第12天，CDDP將腫瘤生長(zhǎng)分別減少56％和66％。2mg/kg式(I-A)化合物和6.7mg/kg的CDDP的組合將腫瘤生長(zhǎng)減少104％，其大于單獨(dú)用相應(yīng)劑量的式(I-A)化合物或CDDP觀察到的，在第12天由體重?fù)p失判斷無(wú)毒性。3mg/kg的式(I-A)化合物和5mg/kg的CDDP的組合將腫瘤生長(zhǎng)減少108％，其大于單獨(dú)用相應(yīng)劑量的式(I-A)化合物或CDDP觀察到的，在第12天由體重?fù)p失判斷無(wú)毒性。
因此，本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方案是2mg/kg式(I-A)化合物連同6.7mg/kg的CDDP的組合。
本發(fā)明的又一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案是3mg/kg式(I-A)化合物和5mg/kg的CDDP的組合。
本發(fā)明的再另一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案是如上所限定的組合用于制造非小細(xì)胞肺癌治療用的藥物。
式(I-A)化合物與伊立替康(CamptosarTM；Calu-6異種移植模型)利用Calu-6人肺癌異種移植模型確定與伊立替康組合的式(I-A)化合物的抗腫瘤活性。根據(jù)上述的實(shí)驗(yàn)，將化合物(I-A)和伊立替康的最大耐受劑量(MTD)定義為6mg/kg和120mg/kg。將式(I-A)化合物每周施用，連續(xù)3周，并且將伊立替康每周施用，連續(xù)2周，接著暫停一周。劑量為0.375mg/kg、0.75mg/kg、1.5mg/kg、和3mg/kg的式(I-A)化合物，取決于所述劑量，分別抑制腫瘤生長(zhǎng)11％、21％、41％、和117％，并且在接種以后的第32天測(cè)量。在80mg/kg(2/3MTD)的伊立替康時(shí)，在第32天將所述腫瘤的生長(zhǎng)抑制68％。與80mg/kg(2/3MTD)伊立替康組合的1.5mg/kg(1/4MTD)式(I-A)化合物的抗腫瘤活性在第32天是110％。相對(duì)于單一試劑，該效果是大于加和的。如體重?fù)p失所判斷，用該組合沒(méi)有觀察到毒性。在第32天，與80mg/kg伊立替康組合的0.375mg/kg(1/16MTD)或0.75mg/kg(1/8MTD)的式(I-A)化合物的抗腫瘤活性與單獨(dú)伊立替康的那些是一致的。3mg/kg(1/2MTD)式(I-A)化合物和80mg/kg(2/3MTD)伊立替康的組合是毒性的。
因此，本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方案是1.5mg/kg式(I-A)化合物連同80mg/kg伊立替康鹽酸鹽的組合。
本發(fā)明的又一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案是如上所限定的組合用于制造非小細(xì)胞肺癌治療用的藥物的用途。
式(I-A)化合物與卡培他濱(XelodaTM；HT-29異種移植模型)檢驗(yàn)了與卡培他濱組合的式(I-A)化合物在HT-29人結(jié)腸直腸腺癌異種移植模型中的抗腫瘤活性。式(I-A)化合物每周施用，連續(xù)3周，并且卡培他濱每天施用達(dá)14天。在劑量為3mg/kg(1/2的最大耐受劑量，MTD)和4mg/kg(2/3MTD)，在第31天，式(I-A)化合物將腫瘤生長(zhǎng)分別減少76％和101％。在359mg/kg(2/3MTD)和539mg/kg(MTD)的劑量，在第31天，卡培他濱將腫瘤生長(zhǎng)分別減少32％和50％。3mg/kg(1/2MTD)式(I-A)化合物和539mg/kg(MTD)卡培他濱的組合減少腫瘤生長(zhǎng)111％。4mg/kg(2/3MTD)式(I-A)化合物和359mg/kg(2/3MTD)卡培他濱的組合在第31天減少腫瘤生長(zhǎng)115％。用這些組合觀察到比相應(yīng)劑量的單獨(dú)的式(I-A)化合物或卡培他濱增加的抗腫瘤活性，由第31天的最小體重?fù)p失判斷無(wú)毒性。
因此，本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方案是3mg/kg式(I-A)化合物連同539mg/kg卡培他濱的組合。
本發(fā)明另一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案是4mg/kg式(I-A)化合物連同359mg/kg卡培他濱的組合。
本發(fā)明的又一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案是如上所限定的兩個(gè)組合的任一個(gè)用于制造結(jié)腸直腸癌治療用的藥物的用途。
除非以另一種方式限定，在這里使用的全部技術(shù)和科學(xué)術(shù)語(yǔ)和縮寫(xiě)具有如本發(fā)明所屬領(lǐng)域中普通技術(shù)人員通常理解的含義。類似地，將這里提到的全部出版物、專利申請(qǐng)、全部專利和全部其它參考文獻(xiàn)經(jīng)由參考結(jié)合。
附圖

圖1a在用式I-A化合物(3.0mg/kg)單獨(dú)和與曲妥單抗(HerceptinTM；Her；20mg/kg)組合的KPL-4腫瘤細(xì)胞初始治療以后，與天數(shù)相對(duì)的平均腫瘤體積(T.V.；mm3)。也給出了單獨(dú)用曲妥單抗(20mg/kg)治療以及賦形劑的數(shù)據(jù)。
圖1b在用式I-A化合物(4.0mg/kg)單獨(dú)和與曲妥單抗(HerceptinTM；Her；20mg/kg)組合的KPL-4腫瘤細(xì)胞初始治療以后，與天數(shù)相對(duì)的平均腫瘤體積(T.V.；mm3)。也給出了單獨(dú)用曲妥單抗(20mg/kg)治療以及賦形劑的數(shù)據(jù)。
圖1c在用式I-A化合物(6.0mg/kg)單獨(dú)和與曲妥單抗(HerceptinTM；Her；20mg/kg)組合的KPL-4腫瘤細(xì)胞初始治療以后，與天數(shù)相對(duì)的平均腫瘤體積(mm3)。也給出了單獨(dú)用曲妥單抗(20mg/kg)治療以及賦形劑的數(shù)據(jù)。
圖2a在用式I-A化合物(3.0mg/kg)單獨(dú)和與pertuzumab(OmnitargTM；2C4；30mg/kg)組合的KPL-4腫瘤細(xì)胞初始治療以后，與天數(shù)相對(duì)的平均腫瘤體積(T.V.；mm3)。也給出了單獨(dú)用pertuzumab(30mg/kg)治療以及賦形劑的數(shù)據(jù)。
圖2b在用式I-A化合物(4.0mg/kg)單獨(dú)和與pertuzumab(OmnitargTM；2C4；30mg/kg)組合的KPL-4腫瘤細(xì)胞初始治療以后，與天數(shù)相對(duì)的平均腫瘤體積(T.V.；mm3)。也給出了單獨(dú)用pertuzumab(30mg/kg)治療以及賦形劑的數(shù)據(jù)。
圖2c在用式I-A化合物(6.0mg/kg)單獨(dú)和與pertuzumab(OmnitargTM；2C4；30mg/kg)組合的KPL-4腫瘤細(xì)胞初始治療以后，與天數(shù)相對(duì)的平均腫瘤體積(T.V.；mm3)。也給出了單獨(dú)用pertuzumab(30mg/kg)治療以及賦形劑的數(shù)據(jù)。
圖3a在用式I-A化合物(2mg/kg)單獨(dú)和與順鉑(RandaTM；CDDP；6.7mg/kg)組合的接種以后，與天數(shù)相對(duì)的NCI-H460腫瘤細(xì)胞的腫瘤體積(mm3)。也給出了單獨(dú)用順鉑(RandaTM；CDDP；6.7mg/kg)的治療以及賦形劑的數(shù)據(jù)。
圖3b在用式I-A化合物(3mg/kg)單獨(dú)和與順鉑(RandaTM；CDDP；5mg/kg)組合的接種以后，與天數(shù)相對(duì)的NCI-H460腫瘤細(xì)胞的腫瘤體積(mm3)。也給出了單獨(dú)用順鉑(RandaTM；CDDP；5mg/kg)的治療以及賦形劑的數(shù)據(jù)。
圖4在用式I-A化合物(1.5mg/kg)單獨(dú)和與伊立替康鹽酸鹽(TopotecinTM；CPT-11；80mg/kg)組合的接種以后，與天數(shù)相對(duì)的Calu-6腫瘤細(xì)胞的腫瘤體積(mm3)。也給出了單獨(dú)的伊立替康鹽酸鹽(TopotecinTM；CPT-11；80mg/kg)的治療以及賦形劑的數(shù)據(jù)。
5a在用式I-A化合物(3mg/kg)單獨(dú)和與卡培他濱(XelodaTM；539mg/kg)組合的接種以后，與天數(shù)相對(duì)的HT-29腫瘤細(xì)胞的腫瘤體積(mm3)。也給出了單獨(dú)的卡培他濱(XelodaTM；539mg/kg)的治療以及賦形劑的數(shù)據(jù)。
圖5b在用式I-A化合物(4mg/kg)單獨(dú)和與卡培他濱(XelodaTM；359mg/kg)組合的接種以后，與天數(shù)相對(duì)的HT-29腫瘤細(xì)胞的腫瘤體積(mm3)。也給出了單獨(dú)的卡培他濱(XelodaTM；359mg/kg)的治療以及賦形劑的數(shù)據(jù)。
如這里所用的術(shù)語(yǔ)“賦形劑”指將單獨(dú)或與各自的藥物組合的式I-A化合物，或單獨(dú)的各自的藥物，溶解在其中用于隨后的施用的溶液。根據(jù)本發(fā)明的這樣溶液以及它們的用途和效果的進(jìn)一步說(shuō)明由下列實(shí)施例說(shuō)明，必須決不將其認(rèn)為是限制本發(fā)明的范圍。
在下面實(shí)施例中，本化合物特別是式I-A化合物在多種異種移植模型中的抗腫瘤活性測(cè)定，根據(jù)由Plowman J，Dykes DJ，Hollingshead M，Simpson-Herren L和Alley MC，在Anticancer Drug Development GuidePreclinical Screening，Clinical Trials and Approval，Teicher B(ed)，HumanaPress Inc，Totowa(NJ)，1997，pp 101-125(第6章Human Tumor XenograftModels in NCI Drug Development)描述的方法進(jìn)行。
實(shí)施例實(shí)施例1N-[1-({1-叔-丁基-4-[2-(2-{[2-(3-羥基-苯基)-乙基]-甲基-氨基甲酰基}-1-甲硫基-丙基)-吡咯烷-1-基]-2-甲氧基-4-氧代-丁基}-甲基-氨基甲?；?-2-甲基-丙基]-2-二甲基氨基-3-甲基-丁酰胺(式(I-A)化合物)與曲妥單抗(HerceptinTM)組合人腫瘤細(xì)胞系KPL-4人乳腺癌細(xì)胞系由Kawasaki Medical Center的Kurebayashi教授惠贈(zèng)。將所述細(xì)胞培養(yǎng)在用5％(v/v)胎牛血清(Roche Diagnostics)補(bǔ)充的Dulbecco’s MEM(Sigma Chemical Co.)中。
動(dòng)物從Charles River Japan，Inc.(Yokohama，日本)購(gòu)買一百四十(140)只5-周齡的雌性無(wú)胸腺裸鼠(BALB/c nu/nu)。使所述小鼠在12h光/暗周期下住在裝有空氣調(diào)節(jié)設(shè)備的房間(溫度22±2℃，相對(duì)濕度55±10％)中。為所述小鼠無(wú)限制地提供滅菌的CE-2和含有25μg/mL慶大霉素的自來(lái)水。在Nippon Roche Research Center(目前是Chugai Pharmaceutical Co.，Ltd.的Kamakura Research Laboratories)的動(dòng)物設(shè)施中隔離14天后，使小鼠進(jìn)行所述實(shí)驗(yàn)。
藥物在Chugai Pharmaceutical Co.，Ltd.的Kamakura Research Laboratories合成標(biāo)題化合物(式(I-A)化合物)。從Chugai Pharmaceutical Co.，Ltd.購(gòu)買曲妥單抗(Herceptin)。在施用之前，將標(biāo)題化合物溶解在二甲亞砜(DMSO，WakoPure Chemical Industries Ltd.)中并用鹽水(用于注射，OhtsukaPharmaceutical Co.，Ltd.)稀釋成2.5％DMSO。在施用之前將曲妥單抗溶解并用鹽水稀釋。將純化的人IgG(ICN Pharmaceuticals，Inc.)溶解并用鹽水稀釋成20mg/mL用于儲(chǔ)備溶液。在施用之前，將儲(chǔ)備溶液用鹽水稀釋成20mg/kg的劑量。
抗腫瘤活性測(cè)定將常規(guī)培養(yǎng)在燒瓶中的KPL-4(每只小鼠4×106細(xì)胞)的單細(xì)胞懸浮液，在無(wú)胸腺裸鼠右側(cè)上的第二乳房脂肪墊的乳頭下以100μL的體積同位移植。在腫瘤移植后的第43天選擇含有225和485mm3之間腫瘤的小鼠并且隨機(jī)分成8組，每組由5只小鼠組成。所選擇小鼠的平均腫瘤體積和體重分別是340mm3和18.6g。在將所述小鼠分組后開(kāi)始藥物施用。將標(biāo)題化合物(3mg/kg，4mg/kg，或6mg/kg)或它的賦形劑靜脈內(nèi)施用(0.2mL/小鼠)每周一次，連續(xù)三周。將曲妥單抗或IgG溶液腹膜內(nèi)施用(0.2mL/小鼠)每周兩次，施用三周，在第0，4，7，11，14，和18天。為對(duì)照組中的小鼠提供與治療組中的那些相同體積的賦形劑對(duì)于標(biāo)題化合物的0.2mL鹽水中的2.5％DMSO和對(duì)于曲妥單抗的0.2mL的20mg/kg人IgG。每周測(cè)量?jī)纱蚊總€(gè)小鼠的腫瘤體積和體重。通過(guò)利用方程ab2/2估計(jì)腫瘤體積，其中a和b分別表示腫瘤長(zhǎng)度和寬度。最后注射后的一周，利用式(1-T/C)×100(％)計(jì)算腫瘤生長(zhǎng)抑制(TGI)，其中T(治療組)和C(對(duì)照組)表示平均腫瘤體積變化。利用XL擬合程序從第21天的腫瘤生長(zhǎng)抑制值計(jì)算ED50值。將最大耐受劑量(MTD)定義為既不致死也不超過(guò)20％體重?fù)p失的劑量。
統(tǒng)計(jì)分析將整裝軟件(SAS臨床前整裝版本5.0，SAS Institute Japan，Ltd.)用于統(tǒng)計(jì)分析。為了評(píng)價(jià)所述藥物的效能，將處理的單獨(dú)腫瘤體積的值與對(duì)照利用Tukey檢驗(yàn)相比較。利用XL擬合程序#509(MS Excel Add Version 3.0.5Build-InXLfit3 12，ID Business Solutions Ltd.)從腫瘤生長(zhǎng)抑制百分比的值計(jì)算ED50s。
實(shí)施例2N-[1-({1-叔-丁基-4-[2-(2-{[2-(3-羥基-苯基)-乙基]-甲基-氨基甲?；鶀-1-甲硫基-丙基)-吡咯烷-1-基]-2-甲氧基-4-氧代-丁基}-甲基-氨基甲酰基)-2-甲基-丙基]-2-二甲基氨基-3-甲基-丁酰胺(式(I-A)化合物)與pertuzumab(OmnitargTM)組合人腫瘤細(xì)胞系KPL-4人乳腺癌細(xì)胞系由Kawasaki Medical Center的Kurebayashi教授惠贈(zèng)。將所述細(xì)胞培養(yǎng)在用5％(v/v)胎牛血清(Roche Diagnostics)補(bǔ)充的Dulbecco’s MEM(Sigma Chemical Co.)中。
動(dòng)物從Charles River Japan，Inc.(Yokohama，日本)購(gòu)買一百(100)只5-周齡的雌性無(wú)胸腺裸鼠(BALB/c nu/nu)。使所述小鼠在12h光/暗周期下住在裝有空氣調(diào)節(jié)設(shè)備的房間(溫度22±2℃，相對(duì)濕度55±10％)中。為所述小鼠無(wú)限制地提供滅菌的CE-2和含有25μg/mL慶大霉素的自來(lái)水。在Nippon Roche Research Center(目前是Chugai Pharmaceutical Co.，Ltd.的Kamakura Research Laboratories)的動(dòng)物設(shè)施中隔離14天后，使小鼠進(jìn)行所述實(shí)驗(yàn)。
藥物在Chugai Pharmaceutical Co.，Ltd.的Kamakura Research Laboratories合成標(biāo)題化合物(式(I-A)化合物)。Pertuzumab由Roche Diagnostics GmbH惠贈(zèng)。在施用之前，將標(biāo)題化合物溶解在二甲基亞砜(DMSO，Wako PureChemical Industries Ltd.)中并用鹽水(用于注射，Ohtsuka Pharmaceutical Co.，Ltd.)稀釋成2.5％DMSO。在施用之前將Pertuzumab溶解并用緩沖溶液稀釋。將純化的人IgG(ICN Pharmaceuticals，Inc.)溶解并用鹽水稀釋成25mg/mL用于儲(chǔ)備溶液。在施用之前，將儲(chǔ)備溶液用鹽水稀釋成30mg/kg的劑量。
抗腫瘤活性測(cè)定將常規(guī)培養(yǎng)在燒瓶中的KPL-4(每只小鼠4.5×106細(xì)胞)的單細(xì)胞懸浮液，在無(wú)胸腺裸鼠右側(cè)上的第二乳房脂肪墊的乳頭下以100μL的體積同位移植。在腫瘤移植后的第18天選擇含有190和356mm3之間腫瘤的小鼠并且隨機(jī)分成9組，每組由5只小鼠組成。所選擇小鼠的平均腫瘤體積和體重分別是226mm3和20g。在將所述小鼠分組后開(kāi)始藥物施用。將標(biāo)題化合物(3mg/kg，4mg/kg，或6mg/kg)或它的賦形劑靜脈內(nèi)施用(0.2mL/小鼠)每周一次，連續(xù)三周。將Pertuzumab或IgG溶液腹膜內(nèi)施用(0.2mL/小鼠)每周一次，施用三周，在第0，7，和14天施用。為對(duì)照組中的小鼠提供與治療組中的那些相同體積的賦形劑對(duì)于標(biāo)題化合物的0.2mL鹽水中的2.5％DMSO和對(duì)于Pertuzumab的0.2mL的25mg/kg人IgG。將每個(gè)小鼠的腫瘤體積和體重每周測(cè)量?jī)纱?。通過(guò)利用方程ab2/2估計(jì)腫瘤體積，其中a和b分別表示腫瘤長(zhǎng)度和寬度。最后注射后的一周，利用式(1-T/C)×100(％)計(jì)算腫瘤生長(zhǎng)抑制(TGI)，其中T(治療組)和C(對(duì)照組)表示平均腫瘤體積變化。利用XL擬合程序從第21天的腫瘤生長(zhǎng)抑制計(jì)算ED50值。將最大耐受劑量(MTD)定義為既不致死也不超過(guò)20％體重?fù)p失的劑量。
統(tǒng)計(jì)分析將整裝軟件(SAS臨床前整裝版本5.0，SAS Institute Japan，Ltd.)用于統(tǒng)計(jì)分析。為了評(píng)價(jià)所述藥物的效能，將處理的單獨(dú)腫瘤體積的值與對(duì)照利用Tukey檢驗(yàn)相比較。利用XL擬合程序#509(MS Excel Add Version 3.0.5Build-InXL fit3 12，ID Business Solutions Ltd.)從腫瘤生長(zhǎng)抑制百分比的值計(jì)算ED50s。
實(shí)施例3N-[1-({1-叔-丁基-4-[2-(2-{[2-(3-羥基-苯基)-乙基]-甲基-氨基甲酰基}-1-甲硫基-丙基)-吡咯烷-1-基]-2-甲氧基-4-氧代-丁基}-甲基-氨基甲酰基)-2-甲基-丙基]-2-二甲基氨基-3-甲基-丁酰胺(式(I-A)化合物)與卡培他濱(XelodaTM)組合人腫瘤細(xì)胞系MAXF-4人乳腺癌細(xì)胞系從Fiebig教授(University of Freiburg，Germany)獲得。該細(xì)胞系保持在小鼠中；在使用之前將腫瘤碎片皮下移植并在小鼠中連續(xù)傳代。
動(dòng)物從Charles River Japan，Inc.(Yokohama，日本)購(gòu)買一百(100)只5-周齡的雌性無(wú)胸腺裸鼠(BALB/c nu/nu)。使所述小鼠在12h光/暗周期下住在裝有空氣調(diào)節(jié)設(shè)備的房間(溫度22±2℃，相對(duì)濕度55±10％)中。為所述小鼠無(wú)限制地提供滅菌的CE-2和含有25μg/mL慶大霉素的自來(lái)水。在Nippon Roche Research Center(目前是Chugai Pharmaceutical Co.，Ltd.的Kamakura Research Laboratories)的動(dòng)物設(shè)施中隔離5天后，使小鼠進(jìn)行所述實(shí)驗(yàn)。
藥物在Chugai Pharmaceutical Co.，Ltd.的Kamakura Research Laboratories合成標(biāo)題化合物(式(I-A)化合物)和卡培他濱。在施用之前，將標(biāo)題化合物溶解在二甲基亞砜(DMSO，Wako Pure Chemical Industries Ltd.)中并用鹽水(用于注射，Ohtsuka Pharmaceutical Co.，Ltd.)稀釋成2.5％DMSO。在施用之前將卡培他濱溶解并用5％阿拉伯膠-40mM檸檬酸鹽緩沖液(pH 6)稀釋。
抗腫瘤活性測(cè)定將十至二十mg(大約2×2×2mm3)的MAMF401的腫瘤碎片皮下移植在每只小鼠的右側(cè)。在腫瘤移植后的第35天選擇含有245和588mm3之間腫瘤的小鼠并且隨機(jī)分成11組，每組由5只小鼠組成。所選擇小鼠的平均腫瘤體積和體重分別是401mm3和22g。在將所述小鼠分組后開(kāi)始藥物施用。將標(biāo)題化合物(3mg/kg，4mg/kg，或6mg/kg)或它的賦形劑靜脈內(nèi)施用(0.2mL/小鼠)每周一次，連續(xù)三周。將卡培他濱或或它的賦形劑經(jīng)口施用(0.5mL/小鼠)每天一次，連續(xù)14天。為對(duì)照組中的小鼠提供與治療組中的那些相同體積的賦形劑對(duì)于標(biāo)題化合物的0.2mL鹽水中的2.5％DMSO和對(duì)于卡培他濱的0.5mL的5％阿拉伯膠-40mM檸檬酸鹽緩沖液(pH6)。將每個(gè)小鼠的腫瘤體積和體重每周測(cè)量?jī)纱?。通過(guò)利用方程ab2/2估計(jì)腫瘤體積，其中a和b分別表示腫瘤長(zhǎng)度和寬度。最后注射后的一周，利用式(1-T/C)×100(％)計(jì)算腫瘤生長(zhǎng)抑制(TGI)，其中T(治療組)和C(對(duì)照組)表示平均腫瘤體積變化。利用XL擬合程序從第21天的腫瘤生長(zhǎng)抑制計(jì)算ED50值。將最大耐受劑量(MTD)定義為既不致死也不超過(guò)20％體重?fù)p失的劑量。
統(tǒng)計(jì)分析將整裝軟件(SAS臨床前整裝版本5.0，SAS Institute Japan，Ltd.)用于統(tǒng)計(jì)分析。為了評(píng)價(jià)所述藥物的效能，將處理的單獨(dú)腫瘤體積的值與對(duì)照利用Tukey檢驗(yàn)相比較。利用XL擬合程序#509(MS Excel Add Version 3.0.5Build-InXLfit3 12，ID Business Solutions Ltd.)從腫瘤生長(zhǎng)抑制百分比的值計(jì)算ED50s。
實(shí)施例4N-[1-({1-叔-丁基-4-[2-(2-{[2-(3-羥基-苯基)-乙基]-甲基-氨基甲?；鶀-1-甲硫基-丙基)-吡咯烷-1-基]-2-甲氧基-4-氧代-丁基}-甲基-氨基甲?；?-2-甲基-丙基]-2-二甲基氨基-3-甲基-丁酰胺(式(I-A)化合物)與順鉑(RandaTM，CDDP)組合人腫瘤細(xì)胞系NCI-H460人大細(xì)胞肺癌細(xì)胞系從美國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心(AmericanType Culture Collection)(Rockville，MD，美國(guó))購(gòu)買。將所述細(xì)胞培養(yǎng)在補(bǔ)充有10％(v/v)胎牛血清(cat.#047115，lot#31300124；Roche DiagnosticsKK，東京，日本)的RPMI-1640培養(yǎng)基(cat.#R8758，lot 12K2310，exp 01/03；lot 82K2497，exp 08/03；Sigma-Aldrich corporation，MO，美國(guó))中。
動(dòng)物從Charles River Japan，Inc.(Yokohama，日本)購(gòu)買六十只5-周齡的雄性無(wú)胸腺裸鼠(BALB/c nu/nu)。將全部小鼠在Chugai Pharmaceutical Co.，Ltd.的Kamakura Research Laboratories的動(dòng)物設(shè)施中保持8天，之后使小鼠進(jìn)行所述實(shí)驗(yàn)。
藥物在Chugai Pharmaceutical Co.，Ltd.的Kamakura Research Laboratories合成標(biāo)題化合物。CDDP(RandaTM，lot#924150)從Nippon Kayaku Co.，Ltd.(東京，日本)獲得。在施用當(dāng)天，將標(biāo)題化合物溶解在二甲基亞砜(DMSO)中并用鹽水(用于注射，Ohtsuka Pharmaceutical Co.，Ltd.，Tokushima，Japan)稀釋成2.5％DMSO溶液。在施用當(dāng)天用鹽水稀釋CDDP。
抗腫瘤活性測(cè)定將NCI-H460(每只小鼠5.6×106細(xì)胞)的單細(xì)胞懸浮液皮下接種在每只小鼠的右側(cè)。通過(guò)利用方程ab2/2估計(jì)腫瘤體積，其中a和b分別表示腫瘤長(zhǎng)度和寬度。在腫瘤接種后的第7天選擇含有150和245mm3之間腫瘤的小鼠并且隨機(jī)分成8組，每組由5只小鼠組成。所選擇小鼠的平均腫瘤體積和體重分別是187mm3和24.3g。在將所述小鼠分組后開(kāi)始藥物施用。將標(biāo)題化合物(2mg/kg或3mg/kg)，CDDP(5mg/kg或6.7mg/kg)和各自的賦形劑靜脈內(nèi)施用。將每個(gè)小鼠的腫瘤體積和體重每周測(cè)量?jī)纱?。?dāng)施用期間觀察到至少一只死亡小鼠時(shí)，或者當(dāng)在使用期間相比于開(kāi)始的治療日有一半或更多的小鼠顯示超過(guò)20％的連續(xù)體重?fù)p失時(shí)，將那個(gè)劑量定義為毒性的。利用方程(1-ΔT/ΔC)×100計(jì)算腫瘤生長(zhǎng)抑制，其中ΔT表示腫瘤體積與治療組的開(kāi)始的治療日的差異，并且ΔC表示腫瘤體積與賦形劑組的開(kāi)始的治療日的差異。
實(shí)施例5N-[1-({1-叔-丁基-4-[2-(2-{[2-(3-羥基-苯基)-乙基]-甲基-氨基甲?；鶀-1-甲硫基-丙基)-吡咯烷-1-基]-2-甲氧基-4-氧代-丁基}-甲基-氨基甲?；?-2-甲基-丙基]-2-二甲基氨基-3-甲基-丁酰胺(式(I-A)化合物)與伊立替康(TopotecinTM)組合人腫瘤細(xì)胞系Calu-6人肺癌細(xì)胞系從美國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心(MD，美國(guó))購(gòu)買。將所述細(xì)胞培養(yǎng)在Eagle’s MEM(Sigma-Aldrich corporation，MO，U.S.A.)中，其補(bǔ)充有0.1毫摩爾/L非必需氨基酸(Invitrogen corporation，CA，U.S.A.)，1毫摩爾/L丙酮酸鈉(Invitrogen corporation，CA，U.S.A.)，和10％(v/v)胎牛血清(Roche Diagnostics KK，Tokyo，Japan)。
動(dòng)物從Charles River Japan，Inc.(Yokohama，日本)購(gòu)買60只5-周齡的雄性無(wú)胸腺裸鼠(BALB/c nu/nu)。將全部小鼠在Chugai Pharmaceutical Co.，Ltd.的Kamakura Research Laboratories的動(dòng)物設(shè)施中保持8天，之后使小鼠進(jìn)行所述實(shí)驗(yàn)。
藥物在Chugai Pharmaceutical Co.，Ltd.的Kamakura Research Laboratories合成標(biāo)題化合物。伊立替康(TopotecinTM，lot.No.EQAZF13)從DaiichiPharmaceutical Co.，Ltd.(東京，日本)獲得。在施用當(dāng)天，將標(biāo)題化合物溶解在二甲基亞砜(DMSO)中并用鹽水(用于注射，Ohtsuka Pharmaceutical Co.，Ltd.，Tokushima，Japan)稀釋成2.5％DMSO溶液。在施用當(dāng)天用鹽水稀釋伊立替康。
抗腫瘤活性測(cè)定將Calu-6(每只小鼠5.7×106細(xì)胞)的單細(xì)胞懸浮液皮下接種在每只小鼠的右側(cè)。通過(guò)利用方程ab2/2估計(jì)腫瘤體積，其中a和b分別表示腫瘤長(zhǎng)度和寬度。在腫瘤接種后的第11天選擇含有181和326mm3之間腫瘤的小鼠并且隨機(jī)分成10組，每組由5只小鼠組成。所選擇小鼠的平均腫瘤體積和體重分別是251mm3和24.7g。在將所述小鼠隨機(jī)化并分組后開(kāi)始藥物施用。將標(biāo)題化合物(0.375mg/kg；0.75mg/kg；1.5mg/kg或3mg/kg)，伊立替康(80mg/kg)和各自的賦形劑靜脈內(nèi)施用。將每個(gè)小鼠的腫瘤體積和體重每周測(cè)量?jī)纱?。?dāng)施用期間觀察到至少一只死亡小鼠時(shí)，或者當(dāng)在使用期間相比于開(kāi)始的治療日有一半或更多的小鼠顯示超過(guò)20％的連續(xù)體重?fù)p失時(shí)，將那個(gè)劑量定義為毒性的。利用方程(1-ΔT/ΔC)×100計(jì)算腫瘤生長(zhǎng)抑制，其中ΔT表示腫瘤體積與治療組的開(kāi)始的治療日的差異，并且ΔC表示腫瘤體積與賦形劑組的開(kāi)始的治療日的差異。
實(shí)施例6N-[1-({1-叔-丁基-4-[2-(2-{[2-(3-羥基-苯基)-乙基]-甲基-氨基甲?；鶀-1-甲硫基-丙基)-吡咯烷-1-基]-2-甲氧基-4-氧代-丁基}-甲基-氨基甲?；?-2-甲基-丙基]-2-二甲基氨基-3-甲基-丁酰胺(式(I-A)化合物)與卡培他濱(XelodaTM)組合人腫瘤細(xì)胞系HT-29人結(jié)腸直腸癌細(xì)胞系從美國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心(MD，美國(guó))購(gòu)買。將所述細(xì)胞培養(yǎng)在補(bǔ)充有10％(v/v)胎牛血清(Roche Diagnostics KK，Tokyo，Japan)的McCoy’s 5a培養(yǎng)基(Sigma-Aldrich Corporation，MO，U.S.A.)中。
動(dòng)物從Charles River Japan，Inc.(Yokohama，日本)購(gòu)買60只5-周齡的雄性無(wú)胸腺裸鼠(BALB/c nu/nu)。將全部小鼠在Chugai Pharmaceutical Co.，Ltd.的Kamakura Research Laboratories的動(dòng)物設(shè)施中保持9天，之后使小鼠進(jìn)行所述實(shí)驗(yàn)。
藥物在Chugai Pharmaceutical Co.，Ltd.的Kamakura Research Laboratories合成標(biāo)題化合物(式(I-A)化合物)?？ㄅ嗨麨I(Lot.No.26954-190A-MIL)從F.Hoffmann-La Roche Ltd(巴塞爾，瑞士)購(gòu)買。在施用當(dāng)天，將式I-A化合物溶解在二甲基亞砜((DMSO；Wako Pure Chemical Industries，Ltd.，大阪，日本)中并用鹽水(用于注射，Ohtsuka Pharmaceutical Industry Co.，Ltd.，Tokushima，日本)稀釋成2.5％DMSO溶液。用40毫摩爾/L檸檬酸鹽緩沖的-5％阿拉伯膠溶液(pH 6.0；Chugai Pharmaceutical Co.，Ltd.)溶解卡培他濱。
抗腫瘤活性測(cè)定將HT-29(每只小鼠1.1×107細(xì)胞)的單細(xì)胞懸浮液皮下接種在每只小鼠的右側(cè)。通過(guò)利用方程ab2/2估計(jì)腫瘤體積，其中a和b分別表示腫瘤長(zhǎng)度和寬度。在腫瘤接種后的第10天選擇含有172和282mm3之間腫瘤的小鼠并且隨機(jī)分成7組，每組由6只小鼠組成。所選擇小鼠的平均腫瘤體積和體重分別是217mm3和25.0g。在將所述小鼠分組后開(kāi)始藥物施用。將式I-A化合物(3mg/kg或4mg/kg)和它的賦形劑靜脈內(nèi)施用。將卡培他濱(359mg/kg或539mg/kg)和它的賦形劑經(jīng)口施用。將每個(gè)小鼠的腫瘤體積和體重每周測(cè)量?jī)纱?。?dāng)施用期間觀察到至少一只死亡小鼠時(shí)，或者當(dāng)在使用期間相比于開(kāi)始的治療日有一半或更多的小鼠顯示超過(guò)20％的連續(xù)體重?fù)p失時(shí)，將那個(gè)劑量定義為毒性的。利用方程(1-ΔT/ΔC)×100計(jì)算腫瘤生長(zhǎng)抑制，其中ΔT表示腫瘤體積與治療組的開(kāi)始的治療日的差異，并且ΔC表示腫瘤體積與賦形劑組的開(kāi)始的治療日的差異。
權(quán)利要求
1.一種藥物組合物，所述藥物組合物包含至少一種式(I)的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽 并組合以卡培他濱；曲妥單抗；pertuzumab；伊立替康或其藥學(xué)上可接受的鹽；或順鉑用于在癌癥治療中同時(shí)、順序或分別給藥；其中R1和R2是甲基；乙基；丙基；異丙基或丁基；R3是苯基烷基-，或苯基二烷基氨基或苯基烷氧基，具有(C1-C4)-亞烷基并且其中所述苯基任選可以用一個(gè)、兩個(gè)或三個(gè)選自由下列各項(xiàng)組成的組的取代基取代鹵素；烷氧羰基；氨磺酰；烷基羰氧基；氨基甲酰氧基；氰基；單-或二-烷基氨基；烷基；烷氧基；苯基；苯氧基；三氟甲基；三氟甲氧基；烷硫基；羥基；烷基羰基氨基；1，3-間二氧雜環(huán)戊烯基；1，4-間二氧雜環(huán)戊烯基；氨基和芐基。
2.一種藥物組合物，所述藥物組合物包含至少一種式(I)的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽 并組合以卡培他濱；曲妥單抗或pertuzumab用于在癌癥治療中同時(shí)、順序或分別給藥；其中R1和R2是甲基；乙基；丙基；異丙基或丁基；R3是苯基烷基-，或苯基二烷基氨基或苯基烷氧基，具有(C1-C4)-亞烷基并且其中所述苯基任選可以用一個(gè)、兩個(gè)或三個(gè)選自由下列各項(xiàng)組成的組的取代基取代鹵素；烷氧羰基；氨磺酰；烷基羰氧基；氨基甲酰氧基；氰基；單-或二-烷基氨基；烷基；烷氧基；苯基；苯氧基；三氟甲基；三氟甲氧基；烷硫基；羥基；烷基羰基氨基；1，3-間二氧雜環(huán)戊烯基；1，4-間二氧雜環(huán)戊烯基；氨基和芐基。
3.根據(jù)權(quán)利要求1的藥物組合物，其中R1和R2是甲基；并且R3如上所限定。
4.根據(jù)權(quán)利要求1的藥物組合物，其中所述式(I)的化合物是式(I-A)的化合物
5.根據(jù)權(quán)利要求1的藥物組合物，其中將所述式(I)化合物與曲妥單抗組合施用。
6.根據(jù)權(quán)利要求1的藥物組合物，其中將所述式(I)化合物與pertuzumab組合施用。
7.根據(jù)權(quán)利要求1的藥物組合物，其中將所述式(I)化合物與卡培他濱組合施用。
8.根據(jù)權(quán)利要求1的藥物組合物，其中將所述式(I)化合物與順鉑組合施用。
9.根據(jù)權(quán)利要求1的藥物組合物，其中所述式(I)的化合物與伊立替康或其藥學(xué)上可接受的鹽組合施用。
10.根據(jù)權(quán)利要求1的藥物組合物，由此將所述式(I)的化合物與卡培他濱、曲妥單抗、pertuzumab、順鉑或伊立替康或其藥學(xué)上可接受的鹽同時(shí)施用。
11.根據(jù)權(quán)利要求1的藥物組合物，由此將所述式(I)的化合物與卡培他濱、曲妥單抗或pertuzumab同時(shí)施用。
12.根據(jù)權(quán)利要求1的藥物組合物，由此將所述式(I)的化合物與順鉑或伊立替康或其藥學(xué)上可接受的鹽同時(shí)施用。
13.根據(jù)權(quán)利要求1的藥物組合物，由此將所述式(I)的化合物與卡培他濱、曲妥單抗、pertuzumab、順鉑或伊立替康或其藥學(xué)上可接受的鹽順序施用。
14.根據(jù)權(quán)利要求1的藥物組合物，由此將所述式(I)的化合物與卡培他濱、曲妥單抗或pertuzumab順序施用。
15.根據(jù)權(quán)利要求1的藥物組合物，由此將所述式(I)的化合物與卡培他濱、曲妥單抗、pertuzumab、順鉑或伊立替康或其藥學(xué)上可接受的鹽分別施用。
16.根據(jù)權(quán)利要求1的藥物組合物，由此將所述式(I)的化合物與卡培他濱、曲妥單抗或pertuzumab分別施用。
17.根據(jù)權(quán)利要求1的藥物組合物用于癌癥治療的用途。
18.根據(jù)權(quán)利要求1的藥物組合物用于實(shí)體瘤治療的用途。
19.根據(jù)權(quán)利要求1的藥物組合物用于結(jié)腸直腸癌、前列腺癌、胰腺癌、乳腺癌或肺癌的治療的用途。
20.根據(jù)權(quán)利要求1的藥物組合物用于結(jié)腸直腸癌、前列腺癌、胰腺癌或乳腺癌的治療的用途。
21.根據(jù)權(quán)利要求1的藥物組合物用于非小細(xì)胞肺癌治療的用途。
22.根據(jù)權(quán)利要求1的藥物組合物用于制備治療癌癥的藥物的用途。
23.根據(jù)權(quán)利要求1的藥物組合物用于制備治療實(shí)體瘤的藥物的用途。
24.根據(jù)權(quán)利要求1的藥物組合物用于制備治療結(jié)腸直腸癌、前列腺癌、胰腺癌、乳腺癌或肺癌的藥物的用途。
25.根據(jù)權(quán)利要求1的藥物組合物用于制備治療結(jié)腸直腸癌、前列腺癌、胰腺癌或乳腺癌的藥物的用途。
26.根據(jù)權(quán)利要求1的藥物組合物用于制備治療非小細(xì)胞肺癌的藥物的用途。
27.如上文中所描述的本發(fā)明。
全文摘要
本發(fā)明涉及藥物組合物，所述藥物組合物包含至少一種式(I)的化合物與卡培他濱、曲妥單抗、pertuzumab、順鉑或伊立替康組合，用于癌癥治療中的同時(shí)、順序或分別給藥。
文檔編號(hào)A61K39/395GK101076371SQ200580042538
公開(kāi)日2007年11月21日 申請(qǐng)日期2005年12月5日 優(yōu)先權(quán)日2004年12月13日
發(fā)明者青木祐子, 三和正則, 沢村文惠, 谷村弘美, 山崎敏一 申請(qǐng)人:霍夫曼-拉羅奇有限公司