專利名稱：西藏胡黃連在制備治療動脈粥樣硬化藥物中的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及西藏胡黃連的新用途，特別涉及西藏胡黃連在制備治療動脈粥樣硬化藥物中的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
在我國，動脈粥樣硬化的人群日益增多，已成為最為常見的疾病。因此，加強(qiáng)上述疾病的防治是我國乃至全球性亟待解決的問題。但是，迄今為止，尚缺乏有效的針對上述疾病的防治手段和藥物。
胡黃連是原產(chǎn)于印度的一種玄參科植物，其根莖可入藥。作為中藥材始見于《唐本草》，具有清熱涼血、燥濕消疳作用，用于小兒驚癇、疳積、瀉痢、骨蒸癆熱、自汗、盜汗、吐血等癥。在20世紀(jì)70年代以前，我國的胡黃連一直依賴進(jìn)口主產(chǎn)于印度的胡黃連(Picrorhiza kurrooa Royle ex Benth)。1965年在西藏東南部及云南西北部發(fā)現(xiàn)了與印度胡黃連同屬植物，其生藥形態(tài)、組織及性味等方面與前者非常相似，可以代替印度胡黃連用藥，命名為西藏胡黃連(Picrorhiza scrophulariifora Pennell)。目前《中國藥典》收載的胡黃連即西藏胡黃連。國內(nèi)關(guān)于西藏胡黃連的研究報(bào)道以及專利文獻(xiàn)均集中于其保肝作用、抗糖尿病活性等，未有對該中藥在動脈粥樣硬化方面的用途進(jìn)行研究。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供西藏胡黃連在制備治療動脈粥樣硬化藥物中的應(yīng)用，開辟了西藏胡黃連作為中藥的一種新用途，也為動脈粥樣硬化的治療提供了一種新的途徑。
本發(fā)明所述的西藏胡黃連的新應(yīng)用，是將西藏胡黃連作為原料藥用于制備治療動脈粥樣硬化的藥物。主要采用西藏胡黃連的根莖，也可采用西藏胡黃連植物的其他有效部位。
優(yōu)選的是采用西藏胡黃連的根莖的醇提取物?；蛘卟捎闷渌袡C(jī)溶劑提取，具有類似的藥效。
優(yōu)選的生產(chǎn)方法是將西藏胡黃連的根莖風(fēng)干后粉碎成顆粒狀粉末，浸泡于50-95％乙醇或甲醇中，室溫過夜提純，過濾，蒸餾，經(jīng)冷凍干燥制成西藏胡黃連提取物。
所述西藏胡黃提取物的密度范圍為1.0005～1.0269g/ml。
本發(fā)明將西藏胡黃連用于制備治療動脈粥樣硬化藥物時(shí)，藥物的劑型為藥劑學(xué)上允許的口服劑型。具體是將西藏胡黃連提取物經(jīng)過常規(guī)生產(chǎn)工藝，添加常規(guī)的口服劑型的輔料，制成片劑、膠囊、顆粒劑、散劑、口服液等各種劑型。使用方法成人0.5～2g(以原料計(jì))，2～3次/日，口服。兒童減半。
本發(fā)明所述的西藏胡黃連還可以與目前已知的其他治療動脈粥樣硬化的藥，如他汀類調(diào)脂藥等制成復(fù)方制劑，用于治療動脈粥樣硬化。
本發(fā)明通過各種動物模型及實(shí)驗(yàn)證明，西藏胡黃連對動脈粥樣硬化具有確切的療效。由于西藏胡黃連來源方便、廣泛，提取物的制備方法簡單，不需要貴重儀器設(shè)備和試劑，因此本發(fā)明提供了一種簡便、價(jià)廉、高效的治療動脈粥樣硬化的藥物。
具體實(shí)施例方式
實(shí)施例一西藏胡黃連提取物的制備本發(fā)明所述的西藏胡黃連提取物是通過以下方法制備的取西藏胡黃連(生藥)的根莖，風(fēng)干后機(jī)械粉碎成顆粒狀粉末(顆粒大小適中，約20mm3左右)。350g原料浸泡于50-95％乙醇2000ml中，滲漉過夜提純，負(fù)壓過濾，蒸餾至少兩次，最后經(jīng)冷凍干燥制成胡黃連提取物醇提取物，密閉干燥保存。1g醇提取物相當(dāng)于3.5g生藥。提取物的密度范圍為1.0005～1.0269g/ml。浸泡提取過程中所采用的有機(jī)溶劑也可采用其他醇類，如甲醇等。
實(shí)施例二西藏胡黃連提取物對新西蘭白兔動脈粥樣硬化的治療作用1.1體外制備AGE(晚期糖基化終產(chǎn)物)及AOPP(晚期蛋白質(zhì)氧化產(chǎn)物)修飾的兔血清白蛋白高純度無內(nèi)毒素兔血清白蛋白(RSA)由美國Sigma公司提供。無內(nèi)毒素蒸餾水由美國Endos公司提供。實(shí)驗(yàn)中所有玻璃器皿均經(jīng)250℃烘烤4小時(shí)處理。按文獻(xiàn)方法(ou FF，Chertow GM，Kay J，et al.Interaction between bet 2-micreoglobulin and advancedglycation end products in the development of dialysis related-amyloidosis.Kidney Int，1997，51(5)1541-9)，用葡萄糖孵育法制備AGE修飾的兔血清白蛋白(AGE-RSA)。簡言之，1.75mg/ml RSA同100mmol/L D-葡萄糖、400mmol/L磷酸緩沖液在37℃孵育8周，以經(jīng)過同樣處理但未加葡萄糖孵育的RSA作為對照。按文獻(xiàn)方法(Witko-Sarsat V，F(xiàn)riedlander M，Nguyen Khoa T，et al.Advanced oxidation protein products as novelmarker of oxidative stress in uremia.Kidney Int，1996，49(5)1304-13)制備AOPP修飾的兔血清白蛋白(AOPP-RSA)。簡言之，將RSA與次氯酸(HOCl)按照1∶60(摩爾比)混合，室溫孵育30min，用PBS緩沖液，4℃透析過夜，以碘試法檢測直至透析液中無HOCl。體外制備的AGE-RSA經(jīng)熒光分光光度法鑒定，AGE含量為85.2U/mg蛋白質(zhì)。對照樣本AGE含量不超過0.9U/mg蛋白質(zhì)。所有樣品均經(jīng)TCL試劑盒(Endos公司，美國)檢測，其內(nèi)毒素含量均低于0.25EU/ml。
1.2動物模型70只12周齡雄性新西蘭白兔(南方醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動物中心提供)在恒溫清潔環(huán)境飼養(yǎng)，經(jīng)一周飼養(yǎng)后隨機(jī)分為7組。分別為①注射AGE組，用含0.5％(質(zhì)量分?jǐn)?shù))膽固醇(Yakult公司，日本)飼料喂飼，經(jīng)耳緣靜脈注射AGE修飾的RSA(5mg/kg，1次/隔日)；②注射AOPP組，飼養(yǎng)方法同上，經(jīng)耳緣靜脈注射AOPP修飾的RSA(5mg/kg，1次/隔日)；③注射正常RSA組，飼養(yǎng)方法同上，經(jīng)耳緣靜脈注射正常RSA(5mg/kg，1次/隔日)；④AGE+西藏胡黃連提取物組，處理與①同，并予灌服西藏胡黃連提取物(40mg/kg，1次/隔日)；⑤AOPP+西藏胡黃連提取物組，處理與②同，并予灌服西藏胡黃連提取物(40mg/kg，1次/隔日)；⑥cho+西藏胡黃連提取物組，處理與③同，并予灌服西藏胡黃連提取物(40mg/kg，1次/隔日)；⑦正常飼料對照組(normal組)，用普通飼料喂養(yǎng)。于10周時(shí)處死，采血，分離血清貯存于-70℃冰箱以備各血清學(xué)指標(biāo)檢測；分離主動脈全段，4％(體積分?jǐn)?shù))甲醛(pH7.4)固定。
1.3動脈粥樣硬化斑塊相對面積測定將主動脈以蘇丹IV染色，在PHOTOSHOP軟件下以“魔棒”工具選擇紅色的粥樣斑塊，利用“容差”進(jìn)行調(diào)節(jié)直至恰好所有的紅色斑塊區(qū)域都被選中，計(jì)算粥樣斑塊的面積。再以類似方法計(jì)算內(nèi)膜總面積。粥樣斑塊大小以相對面積(粥樣斑塊的面積/內(nèi)膜總面積)表示。
1.4血清指標(biāo)檢測用Olympus NU800自動生化分析儀檢測血清總膽固醇、甘油三酯水平；ELISA法檢測血清氧化型低密度脂蛋白(Ox-LDL)、腫瘤壞死因子α(TNF-α)水平，熒光比色法檢測硫代巴比妥酸反應(yīng)物質(zhì)(TBARS)，按文獻(xiàn)方法(Flohe L，Gunzler WAAssays ofglutathione peroxidase.Methods Enzymol.1984，105114-120)檢測血漿谷胱甘肽過氧化物酶(GSHPx)活性。
1.5組織學(xué)和免疫組織化學(xué)檢測動脈組織標(biāo)本用10％甲醛溶液固定，石蠟包埋，連續(xù)切片，常規(guī)脫蠟、脫水。部分切片行油紅染色，其余切片行免疫組化學(xué)檢測，第一抗體分別為抗Ox-LDL單克隆抗體，抗巨嗜細(xì)胞單克隆抗體RAM-11，抗平滑肌α-actin單克隆抗體(均購自丹麥DAKO公司)。用Evision試劑盒(丹麥DAKO公司)檢測ox-LDL、巨嗜細(xì)胞和平滑肌細(xì)胞，蘇木素復(fù)染，脫水，封片。Macintosh圖像分析系統(tǒng)(Adobe Photoshop 5.10)測定ox-LDL面積，結(jié)果以μm2表示，采用目鏡網(wǎng)格測微尺計(jì)數(shù)RAM-11和α-actin陽性細(xì)胞數(shù)目，結(jié)果以個(gè)/0.01mm2表示。
2結(jié)果如下表 結(jié)果顯示(1)所有高膽固醇飼料喂飼的動物，其主動脈內(nèi)膜均可見明顯的動脈粥樣硬化斑塊形成，斑塊中ox-LDL沉積，斑塊周圍區(qū)域巨嗜細(xì)胞和平滑肌細(xì)胞明顯增多；血清中膽固醇、ox-LDL(氧化型低密度脂蛋白)、MDA(丙二醛)和TNF-α水平明顯增高，SeGSHPx(硒谷胱甘肽過氧化物酶)降低。
(2)靜脈注射AGE或AOPP修飾的RSA可顯著增強(qiáng)上述病理和血清學(xué)改變。
(3)灌服西藏胡黃連提取物的④、⑤、⑥三組動物分別與接受同樣處理但未灌服西藏胡黃連提取物的①、②、③三組比較，其主動脈壁上粥樣斑塊的相對面積、斑塊中ox-LDL沉積、斑塊周圍炎癥細(xì)胞浸潤和平滑肌細(xì)胞遷移及血清中膽固醇、ox-LDL、MDA和TNF-α水平均明顯降低，而SeGSHPx增高。
結(jié)論西藏胡黃連提取物可顯著緩解高膽固醇和糖化氧化蛋白產(chǎn)物所致的動脈粥樣硬化，其機(jī)制可能同西藏胡黃連提取物抗氧化、抗炎、降膽固醇作用相關(guān)。以上結(jié)果提示西藏胡黃連可能對動脈粥樣硬化具有防治作用。
實(shí)施例三以西藏胡黃連配制的口服劑型本發(fā)明所述的西藏胡黃連可以配制成片劑、膠囊、顆粒劑、散劑、口服液等口服劑型。
(一)制成片劑將西藏胡黃連經(jīng)醇提后的提取物，加入適量潤滑劑制成軟材，用10目篩制粒，干燥，干粒加入硬脂酸鎂，混勻，壓片機(jī)壓片成片劑，薄膜包衣，分裝，即得包衣片劑。
(二)制成膠囊劑將西藏胡黃連經(jīng)醇提后的提取物，噴霧干燥制成粉末，過100-120目左右篩，與輔料混合均勻，裝膠囊，分裝，即得膠囊劑。
(三)制成顆粒劑將西藏胡黃連經(jīng)醇提后的提取物，加入賦形劑，制粒，干燥，過8-10目篩，分裝，制成顆粒劑。
(四)制成散劑將西藏胡黃連粉碎，加入適量賦形劑后混勻，分裝，制成散劑。
(五)制成口服液將西藏胡黃連經(jīng)醇提后的提取物，加水溶解，加入矯味劑，加水調(diào)節(jié)容量，制成口服液。
(六)使用方法成人0.5～2g(以原料計(jì))，2～3次/日，口服。兒童減半。
權(quán)利要求
1.西藏胡黃連在制備治療動脈粥樣硬化藥物中的應(yīng)用。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其特征在于采用西藏胡黃連的根莖的醇提取物。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的應(yīng)用，其特征在于采用將西藏胡黃連的根莖風(fēng)干后粉碎成顆粒狀粉末，浸泡于50-95％乙醇或甲醇中，室溫過夜提純，過濾，蒸餾，經(jīng)冷凍干燥制成的西藏胡黃連提取物。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的應(yīng)用，其特征在于所述西藏胡黃連提取物的密度范圍為1.0005～1.0269g/ml。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其特征在于藥物的劑型為藥劑學(xué)上允許的口服劑型。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的應(yīng)用，其特征在于所述的口服劑型包括片劑、膠囊、顆粒劑、口服液、散劑。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其特征在于采用西藏胡黃連與其他治療動脈粥樣硬化的藥制成復(fù)方制劑。
全文摘要
本發(fā)明涉及西藏胡黃連的新用途，具體是西藏胡黃連在制備治療動脈粥樣硬化藥物中的應(yīng)用。采用西藏胡黃連的根莖的醇提取物。藥物的劑型為藥劑學(xué)上允許的口服劑型。本發(fā)明通過各種動物模型及實(shí)驗(yàn)證明，西藏胡黃連對動脈粥樣硬化具有確切的療效。由于西藏胡黃連來源方便、廣泛，提取物的制備方法簡單，不需要貴重儀器設(shè)備和試劑，因此本發(fā)明提供了一種簡便、價(jià)廉、高效的治療動脈粥樣硬化的藥物。
文檔編號A61P9/00GK1927305SQ20061003718
公開日2007年3月14日 申請日期2006年8月24日 優(yōu)先權(quán)日2006年8月24日
發(fā)明者劉尚喜, 侯凡凡, 梁敏 申請人:南方醫(yī)科大學(xué)