專利名稱：原人參二醇凍干乳劑及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，確切地說(shuō)涉及一種原人參二醇凍干乳劑及其制備方法。
背景技術(shù)：
人參在亞洲國(guó)家作為傳統(tǒng)藥物應(yīng)用已有二千多年歷史，現(xiàn)在世界范圍內(nèi)廣泛用于疾病的預(yù)防和治療。人參皂苷是人參的主要活性成分，從人參中分離并確定了結(jié)構(gòu)的人參皂苷類化合物有40余種，而它們的藥理作用有其各自的特點(diǎn)，有的甚至完全相反，因此制成單一的人參皂苷制劑很有必要?？鼓[瘤藥“參一膠囊”即由20(R)-人參皂苷Rg3單一成分組成，這是擁有自主知識(shí)產(chǎn)權(quán)、建國(guó)以來(lái)第一個(gè)國(guó)家批準(zhǔn)正式生產(chǎn)的中藥一類新藥，備受世人矚目。其抗腫瘤作用機(jī)制為誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡、抑制腫瘤細(xì)胞增殖和浸潤(rùn)、抗腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移、抑制血管內(nèi)皮細(xì)胞增殖以及提高荷瘤小鼠的免疫機(jī)能等(趙翌.臨床腫瘤學(xué)雜志2001；6(1)81-85)。但是人參皂苷Rg3的口服生物利用度極低，僅為0-2.63％，表明其在體內(nèi)可能被迅速代謝(Xie HT，et al.J Chromatogr.B 2005；818167-173；Qian T，et al.J Chromatogr.B 2005；816223-232.)。Bae等研究發(fā)現(xiàn)人參皂苷Rg3可被人糞便微生物代謝成為人參皂苷Rh2和苷元原人參二醇，且原人參二醇的抑瘤活性明顯高于人參皂苷Rg3，據(jù)此提出人參皂苷Rg3可能為前體藥物(Bae EA，etal.Biol.Pharm.Bull.2002；2558-63)。Ota等研究表明，20(S)-原人參二醇對(duì)黑色素瘤的抑瘤活性比人參皂苷Rh2更強(qiáng)(Ota T，et al.J Pharm Sci 1991；80(12)1141-1146)。
海南亞洲制藥有限公司經(jīng)過(guò)數(shù)年研究，成功解決了20(S)-原人參二醇原料藥在工業(yè)化生產(chǎn)上的技術(shù)難題，其純度可達(dá)97％以上；通過(guò)對(duì)原料藥及制劑“益今生”膠囊的藥效學(xué)研究結(jié)果表明，20(S)-原人參二醇膠囊具有良好的抗癌活性，25、50、100mg/kg劑量組對(duì)肝癌H22的平均抑瘤率分別為33.53％、40.10％、49.47％；對(duì)Lewis肺癌的平均抑瘤率分別為30.50％、37.20％、48.20％；對(duì)黑色素瘤B16的平均抑瘤率分別為40.87％、41.77％、45.27％。而且20(S)-原人參二醇膠囊對(duì)環(huán)磷酰胺等化療藥具有較明顯的增效、減毒作用。增強(qiáng)免疫功能及誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡可能是其主要的作用機(jī)制(專利公開(kāi)號(hào)CN1122042C，CN1418633A)。
但原人參二醇為四環(huán)三萜類藥物，不溶于水，具有很強(qiáng)的脂溶性，以普通制劑口服給藥，存在生物利用度低以及體內(nèi)缺乏足夠的靶向性等缺點(diǎn)。原人參二醇注射劑(專利公開(kāi)號(hào)CN1526407A)的制備需用有機(jī)溶媒或使用較大量的增溶劑如聚氧乙烯蓖麻油等，此類表面活性劑使用后病人會(huì)出現(xiàn)過(guò)敏反應(yīng)、呼吸困難、血壓升高等癥狀，此外原人參二醇在生理鹽水或5％葡萄糖稀釋液中不穩(wěn)定，易析出沉淀。有專利(公開(kāi)號(hào)CN1626101A)將原人參二醇制成注射用納米乳劑，但制備過(guò)程需經(jīng)熱壓滅菌，對(duì)藥物、油和磷脂等表面活性劑產(chǎn)生一定的破壞作用，且乳劑屬于熱力學(xué)不穩(wěn)定的非均相體系，在貯存過(guò)程中可能會(huì)出現(xiàn)分層、絮凝、轉(zhuǎn)相、破裂以及酸敗等現(xiàn)象。而原人參二醇凍干乳劑的研究國(guó)內(nèi)外未見(jiàn)報(bào)道。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種原人參二醇凍干乳劑及其制備方法。
本發(fā)明采用的技術(shù)方案如下一、原人參二醇凍干乳劑其組成為原人參二醇、注射用油、乳化劑、凍干保護(hù)劑的重量比為1∶5～50∶1～25∶10～200。
所述的原人參二醇為20(R)-原人參二醇、20(S)-原人參二醇或20(R， S)-原人參二醇。
所述的注射用油為豆油、茶油、橄欖油、紅花油、花生油、芝麻油中的一種或二種以上混合物。
所述的乳化劑為磷脂、泊洛沙姆188、聚氧乙烯氫化蓖麻油、蓖麻油聚烴氧酯、聚乙二醇硬脂酸酯中的一種或二種以上混合物。
所述的凍干保護(hù)劑為葡萄糖、乳糖、甘露醇、山梨醇、木糖醇、蔗糖、海藻糖、右旋糖苷、聚乙烯吡咯烷酮中的一種或二種以上混合物。
還包括延緩氧化的附加劑和pH調(diào)節(jié)劑。
所述的延緩氧化的附加劑為焦亞硫酸鈉、亞硫酸鈉、亞硫酸氫鈉、維生素C、硫代甘油、鹽酸半胱氨酸、二丁甲苯酚、叔丁基對(duì)羥基茴香醚、培酸丙酯、維生素E、氫醌、EDTA鈉鹽中的一種或二種以上混合物。
所述的pH調(diào)節(jié)劑為鹽酸、氫氧化鈉、碳酸氫鈉或磷酸鹽緩沖對(duì)。
二、原人參二醇凍干乳劑的制備方法，其制備步驟如下將1份原人參二醇溶于5～50份的注射用油，形成油相；將1～25份乳化劑加入100～1000份注射用水中，攪拌混勻，形成水相；將兩相混合，制成粗乳，用高壓乳勻機(jī)在5.0×107Pa～1.2×108Pa壓力下勻化，得到粒徑分布均勻的乳劑；加入10～200份凍干保護(hù)劑，在-20℃～-50℃溫度下預(yù)凍后，在0.13Pa～80Pa壓力下，經(jīng)冷凍干燥去除水分，得到原人參二醇凍干乳劑。
制得的凍干乳劑按需要量加水，復(fù)原成乳劑，其粒徑為50nm～1000nm。
凍干保護(hù)劑的作用是隨著乳劑的凍結(jié)和結(jié)晶的生長(zhǎng)，逐漸濃縮，并替換乳滴周圍的水分子，從而阻止凍干過(guò)程中乳滴的聚集和融合；能形成玻璃化，抑制冰晶的生長(zhǎng)，從而減少冰晶對(duì)乳滴的損傷；可以提高乳劑的玻璃化轉(zhuǎn)變溫度，使乳劑在一定的降溫速率下，實(shí)現(xiàn)部分玻璃化，減少了在通常的平衡凍結(jié)方法中由于冰晶生長(zhǎng)而引起的各種損傷，達(dá)到了保護(hù)的目的。
本發(fā)明具有的有益效果是1)制備工藝簡(jiǎn)便；2)穩(wěn)定性好以凍干態(tài)貯存，克服了液態(tài)乳劑的缺點(diǎn)，大大提高藥物和制劑的穩(wěn)定性；3)便于制劑的儲(chǔ)存和運(yùn)輸；4)使用方便臨用前按需要量加注射用水，經(jīng)水合振蕩即能回復(fù)成原人參二醇乳劑；5)可減少藥物的刺激性，增加藥物的穩(wěn)定性，提高藥物生物利用度，起到緩釋和控釋作用，靜脈給藥具有自然靶向作用，肌內(nèi)、皮下或腹腔注射給藥易濃集于淋巴系統(tǒng)。
具體實(shí)施例方式
下面結(jié)合具體實(shí)施例作進(jìn)一步說(shuō)明，但本發(fā)明的內(nèi)容并不局限于此。
實(shí)施例11)將0.5g 20(S)-原人參二醇和0.01g叔丁基對(duì)羥基茴香丁烷加入到2.5g注射用茶油中，55℃加熱溶解，形成油相；2)將0.5g注射用卵磷加入到50g注射用水中，55℃加熱溶解，形成水相；3)在55℃攪拌下將水相加入油相中，繼續(xù)攪拌20min后，經(jīng)高壓乳勻機(jī)在5.0×107Pa壓力下勻化3次；4)加入5g海藻糖，經(jīng)0.22μm濾膜過(guò)濾除菌，在-30℃預(yù)凍2h，啟動(dòng)真空泵，使真空度達(dá)到30Pa，經(jīng)冷凍干燥去除水分，得到原人參二醇凍干乳劑。
實(shí)施例21)將0.2g 20(S)-原人參二醇加入到4g注射用大豆油中，60℃加熱溶解形成油相；
2)將2g的注射用蛋黃卵磷脂分散于200g注射用水中，并加入0.02g亞硫酸鈉，60℃加熱，攪拌混勻，形成水相；3)在60℃攪拌下將油相加入水相中，繼續(xù)攪拌25min后，經(jīng)高壓乳勻機(jī)在1.2×108Pa壓力下勻化6次；4)加入20g蔗糖，經(jīng)0.22μm濾膜過(guò)濾除菌，在-45℃預(yù)凍5h，啟動(dòng)真空泵，使真空度達(dá)到5Pa，經(jīng)冷凍干燥去除水分，得到原人參二醇凍干乳劑。
實(shí)施例31)將0.2g 20(S)-原人參二醇加入到10g注射用橄欖油中，50℃加熱溶解，形成油相；2)將5g的CremophorELP加入到200g的注射用水中，50℃加熱溶解，形成水相；3)在50℃攪拌下將油相加入到水相中，繼續(xù)攪拌30min后，經(jīng)高壓乳勻機(jī)在1.0×108Pa壓力下勻化5次；4)加入20g乳糖和20g甘露醇，經(jīng)0.22μm濾膜過(guò)濾除菌，在-20℃預(yù)凍2h，啟動(dòng)真空泵，使真空度達(dá)到60Pa，經(jīng)冷凍干燥去除水分，得到原人參二醇凍干乳劑。
實(shí)施例41)將0.3 20(R)-原人參二醇、0.02g培酸丙酯加入到2g注射用花生油中，60℃加熱溶解，形成油相；2)將1g的CremophorRH40加入到200g注射用水中，60℃加熱溶解，形成水相；3)在60℃攪拌下將水相加入到油相中，繼續(xù)攪拌30min后，經(jīng)高壓乳勻機(jī)在8.0×107Pa壓力下勻化4次；4)加入5g葡萄糖和5g山梨醇，經(jīng)0.22μm濾膜過(guò)濾除菌，在-50℃預(yù)凍3h，啟動(dòng)真空泵，使真空度達(dá)到20Pa，經(jīng)冷凍干燥去除水分，得到原人參二醇凍干乳劑。
實(shí)施例51)將0.1g 20(R)-原人參二醇、0.02g維生素E加入到2ml注射用紅花油中，60℃加熱溶解，形成油相；2)將0.5g的SolutolHS15加入到100g注射用水中，60℃加熱溶解，形成水相；3)在60℃攪拌下將水相加入到油相中，繼續(xù)攪拌30min后，經(jīng)高壓乳勻機(jī)在1.0×108Pa壓力下勻化6次；4)加入8g的木糖醇，經(jīng)0.22μm濾膜過(guò)濾除菌，在-45℃預(yù)凍2h，啟動(dòng)真空泵，使真空度達(dá)20Pa以下，經(jīng)冷凍干燥去除水分，得到原人參二醇凍干乳劑。
實(shí)施例61)將1.0g 20(R，S)-原人參二醇加入到5ml注射用芝麻油中，50℃加熱溶解，形成油相；2)將1.0g脂泊洛沙姆188和0.01g EDTA二鈉加入到200ml的注射用水中，50℃加熱，攪拌混勻，形成水相；3)在50℃攪拌的條件下將水相加入到油相中，繼續(xù)攪拌30min，經(jīng)高壓乳勻機(jī)在1.0×108Pa壓力下勻化6次；4)加入20g蔗糖，經(jīng)0.22μm濾膜過(guò)濾除菌，在-45℃預(yù)凍2h，啟動(dòng)真空泵，使真空度達(dá)20Pa以下，經(jīng)冷凍干燥去除水分，得到原人參二醇凍干乳劑。實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析采用溫度30℃±2℃、相對(duì)濕度65％±5％的條件進(jìn)行試驗(yàn)，對(duì)制劑(三批)的外觀性狀、含量、粒度、分層現(xiàn)象等項(xiàng)目進(jìn)行考察，實(shí)驗(yàn)方法和結(jié)果如下(一)實(shí)驗(yàn)方法1、外觀性狀。外觀性狀是對(duì)制劑的色澤和外表感觀的規(guī)定，是評(píng)價(jià)制劑穩(wěn)定性的一個(gè)直觀指標(biāo)。乳劑的評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)為均勻、乳白色(--)；均勻、微黃色(-+)；分層、絮凝、黃色(++)；凍干乳劑的評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)為白色、飽滿(--)；微黃，略有皺縮(-+)；黃色，皺縮(++)。
2、HPLC法測(cè)定主藥的含量。將凍干乳劑加水復(fù)原后，用甲醇稀釋至適宜濃度，過(guò)0.22μm有機(jī)膜后，取10μL注入液相色譜儀，記錄色譜峰面積，外標(biāo)法定量。色譜條件如下色譜柱Hypersil ODS C18柱(4.6mm×200mm，5μm)；流動(dòng)相甲醇-1.4％醋酸(V∶V＝90∶10)；柱溫30℃；流速1.0mL/min；檢測(cè)波長(zhǎng)203nm。
3、粒度測(cè)定。用NicompTM380粒徑測(cè)定儀測(cè)定乳劑以及水化后的凍干乳劑的平均粒徑。
4、分層現(xiàn)象。量取乳劑或水化后的凍干乳劑3ml置于5ml的離心管中，以半徑為10cm的離心機(jī)每分鐘4000轉(zhuǎn)的轉(zhuǎn)速(約1800×g)離心15min，觀察是否有分層現(xiàn)象。評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)為(-)無(wú)分層；(+)有分層。
(二)實(shí)驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)下表
表1凍干前后平均粒粒變化(n＝3，Mean±SD)

由上表可知，與凍干前相比，原人參二醇凍干乳劑水化后的平均粒徑基本保持不變，或略有增加。
表2兩種劑型理化性質(zhì)比較(實(shí)施例二)(n＝3，Mean±SD)

注乳劑按實(shí)施例二制備，不加凍干保護(hù)劑，未進(jìn)行凍干；*表示粒子聚集，無(wú)法測(cè)定。
由上表可知，在溫度30℃±2℃、相對(duì)濕度65％±5％的條件下，乳劑放置2個(gè)月后色澤加深，含量有所下降，液滴出現(xiàn)部分聚集，平均粒徑增大，還出現(xiàn)了分層現(xiàn)象；與之相比，原人參二醇凍干乳劑的穩(wěn)定性有了明顯提高，在考察的3個(gè)月內(nèi)各項(xiàng)指標(biāo)均無(wú)顯著變化。
權(quán)利要求
1.原人參二醇凍干乳劑，其特征在于原人參二醇、注射用油、乳化劑、凍干保護(hù)劑的重量比為1∶5～50∶1～25∶10～200。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的原人參二醇凍干乳劑，其特征在于所述的原人參二醇為20(R)-原人參二醇、20(S)-原人參二醇或20(R，S)-原人參二醇。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的原人參二醇凍干乳劑，其特征在于所述的注射用油為豆油、茶油、橄欖油、紅花油、花生油、芝麻油中的一種或二種以上混合物。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的原人參二醇凍干乳劑，其特征在于所述的乳化劑為磷脂、泊洛沙姆188、聚氧乙烯氫化蓖麻油、蓖麻油聚烴氧酯、聚乙二醇硬脂酸酯中的一種或二種以上混合物。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的原人參二醇凍干乳劑，其特征在于所述的凍干保護(hù)劑為葡萄糖、乳糖、甘露醇、山梨醇、木糖醇、蔗糖、海藻糖、右旋糖苷、聚乙烯吡咯烷酮中的一種或二種以上混合物。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的原人參二醇凍干乳劑，其特征在于還包括延緩氧化的附加劑和pH調(diào)節(jié)劑。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的原人參二醇凍干乳劑，其特征在于所述的延緩氧化的附加劑為焦亞硫酸鈉、亞硫酸鈉、亞硫酸氫鈉、維生素C、硫代甘油、鹽酸半胱氨酸、二丁甲苯酚、叔丁基對(duì)羥基茴香醚、培酸丙酯、維生素E、氫醌、EDTA鈉鹽中的一種或二種以上混合物。
8.根據(jù)權(quán)利要求6所述的原人參二醇凍干乳劑，其特征在于所述的pH調(diào)節(jié)劑為鹽酸、氫氧化鈉、碳酸氫鈉或磷酸鹽緩沖對(duì)。
9.一種原人參二醇凍干乳劑的制備方法，其特征在于其制備步驟如下將1份原人參二醇溶于5～50份的注射用油，形成油相；將1～25份乳化劑加入100～1000份注射用水中，攪拌混勻，形成水相；將兩相混合，制成粗乳，用高壓乳勻機(jī)在5.0×107Pa～1.2×108Pa壓力下勻化，得到粒徑分布均勻的乳劑；加入10～200份凍干保護(hù)劑，在-20℃～-50℃溫度下預(yù)凍后，在0.13Pa～80Pa壓力下，經(jīng)冷凍干燥去除水分，得到原人參二醇凍干乳劑。
全文摘要
本發(fā)明公開(kāi)了一種原人參二醇凍干乳劑及其制備方法。原人參二醇、注射用油、乳化劑、凍干保護(hù)劑的重量比為1∶5～50∶1～25∶10～200。將原人參二醇溶于注射用油，形成油相；將乳化劑加入注射用水中，攪拌混勻，形成水相；將兩相混合，制成粗乳，用高壓乳勻機(jī)勻化后，加入凍干保護(hù)劑，在－20℃～－50℃溫度下預(yù)凍后，在0.13Pa～80Pa壓力下，經(jīng)冷凍干燥去除水分，得到原人參二醇凍干乳劑。本發(fā)明工藝簡(jiǎn)便；穩(wěn)定性好；使用方便；可減少藥物的刺激性，增加藥物的穩(wěn)定性，提高藥物生物利用度，起到緩釋和控釋作用，靜脈給藥具有自然靶向作用，肌內(nèi)、皮下或腹腔注射給藥易濃集于淋巴系統(tǒng)。
文檔編號(hào)A61P35/00GK1850099SQ20061004961
公開(kāi)日2006年10月25日 申請(qǐng)日期2006年2月27日 優(yōu)先權(quán)日2006年2月27日
發(fā)明者金圣煊, 孫靜蕓, 林燕飛, 晏桂敏, 雷榮劍 申請(qǐng)人:杭州創(chuàng)新中藥標(biāo)準(zhǔn)化研究所有限公司