專利名稱：一組連有核苷堿基的格爾德霉素衍生物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一組連有核苷堿基的格爾德霉素衍生物；本發(fā)明又涉及所說化合物的制備方法和在抗病毒及抗腫瘤方面的應(yīng)用；本發(fā)明還涉及所說化合物的藥物組合物。
背景技術(shù)：
格爾德霉素為吸濕鏈霉菌發(fā)酵產(chǎn)生的苯醌安莎類抗生素，由一個(gè)苯醌結(jié)構(gòu)與一個(gè)平面性大環(huán)安莎橋構(gòu)成。格爾德霉素的作用靶點(diǎn)是熱休克蛋白Hsp90，它特異性地使Hsp90失活而抑制病毒的復(fù)制。格爾德霉素通過干擾Hsp90的正常功能，阻止Hsp90底物蛋白活化，誘導(dǎo)細(xì)胞周期阻斷而抑制病毒復(fù)制，從而起到抗病毒或抗腫瘤的作用。獨(dú)特的作用機(jī)理，使得格爾德霉素具有廣抗病毒/腫瘤譜、與其它藥物沒有交叉耐藥和本身難以產(chǎn)生耐藥性的特性。格爾德霉素是以細(xì)胞因子為靶點(diǎn)的新型抗病毒或抗腫瘤藥物合成與篩選的優(yōu)異先導(dǎo)化合物。
以格爾德霉素為先導(dǎo)物進(jìn)行結(jié)構(gòu)改造的工作已有一些專利或文獻(xiàn)報(bào)道，而國外研究多以抗腫瘤藥物篩選為目的。1979年Kazuya Sasaki等報(bào)道了格爾德霉素17位胺基取代衍生物的合成與抗腫瘤活性(Kazuya Sasaki et alJ.Antibiotics，32(8)849-851；1979)。其中，改造物17-環(huán)丙胺基和17-丙烯胺基衍生物的抗腫瘤活性強(qiáng)于格爾德霉素。而17-丙烯胺基衍生物的抗腫瘤活性較格爾德霉素有所提高的同時(shí)，肝毒性顯著降低，是第一個(gè)進(jìn)入臨床試驗(yàn)的Hsp90抑制劑。在較低的濃度下，該衍生物能夠迅速與腫瘤細(xì)胞來源的Hsp90靶向結(jié)合，主要聚集在腫瘤組織，優(yōu)先殺傷腫瘤細(xì)胞。在體外、體內(nèi)對(duì)p185erbB2具有較高的抑制活性(Schnur RC，Coman ML，Gallaschun RJ，et al.J Med Chem，38(19)3813-3820；1995)。
格爾德霉素的另一衍生物17-DMAG(17-二甲基氨基乙氨基-17-去甲氧基格爾德霉素鹽酸鹽)，也是通過與ATP競爭結(jié)合Hsp90N-末端結(jié)合域來抑制Hsp90活性，目前正在進(jìn)行I期臨床試驗(yàn)。在體外活性篩選中，17-DMAG的半數(shù)生長抑制數(shù)GI50為51nM，強(qiáng)于17-AAG的GI50120nM。17-DMAG對(duì)乳腺癌和白血病細(xì)胞系顯示了潛在的活性，而這二者對(duì)17-AAG不敏感；更重要的是，17-DMAG比17-AAG有更好的溶解性和口服生物利用度?？诜?7-DMAG 5天，每天2次，每次6.7mg/kg，能夠抑制種植胰腺瘤AsPC-1的生長，而17-AAG在此條件下沒有活性。17-DMAG注射或口服給藥對(duì)于黑色素瘤、腺癌、小細(xì)胞癌也顯示了明顯的抗腫瘤活性(Hollingshead M，et al.Cancer Chemother Pharmacol.56(2)115-125；2005)。
針對(duì)格爾德霉素在體內(nèi)分布不均、易集中于肝臟和肺部從而引起嚴(yán)重肝臟毒性的情況，Mandler R.等合成制備了激素或單克隆抗體與格爾德霉素的偶聯(lián)物，該類偶聯(lián)物能夠選擇性地引起雌激素受體和HER2的降解，對(duì)其它部位無明顯影響，增強(qiáng)了其組織分布選擇性和靶位專一性(Mandler R et alJ.Natl.CancerInst.，92(19)1573-1581；2000)。其中Linker為 的格爾德霉素-雌二醇結(jié)合物的抗腫瘤活性最為理想，對(duì)HER2和雌激素受體IC50分別為0.1μmol和0.08μmol，對(duì)Raf-1的IC50為1.5μmol。格爾德霉素與單克隆抗體Herceptin能免疫偶聯(lián)成復(fù)合物HAPA-GA。該免疫偶聯(lián)物在體外對(duì)MDA-361/DYT2細(xì)胞的IC50為0.2±0.03mg/mL，而未經(jīng)修飾的Herceptin在10mg/mL濃度下對(duì)MDA-361/DYT2細(xì)胞增生抑制率只有25％(Mandler R，Kobayashi H，Davis M，et al.Bioconjug Chem，13(4)786-791.2002)。Randall James等以篩選抗腫瘤藥物為目的，合成了一系列4，5-二氫格爾德霉素17-取代衍生物(RandallJames et alWO 9501342 A1)。Lin Zhang等以改善藥效學(xué)和生物學(xué)特性為目的，合成了格爾德霉素的二聚體類衍生物(Zhang Lin et alWO 2003066005 A2)，其中，以二乙二胺為橋的格爾德霉素17位二聚體對(duì)BT474和SKOV-3腫瘤模型具有抑制活性。
總之，文獻(xiàn)報(bào)道針對(duì)格爾德霉素的修飾，多為在17位引入脂肪性胺基取代基，或在17位引入單克隆抗體。在格爾德霉素17位引入核苷堿基篩選抗病毒藥物的合成研究，迄今尚未見有文獻(xiàn)報(bào)道。
中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院醫(yī)藥生物技術(shù)研究所以抗病毒藥物篩選研究為主要目的，對(duì)格爾德霉素進(jìn)行了系列研究，并擁有格爾德霉素抗病毒感染治療藥物用途的專利(ZL97100523)，對(duì)格爾德霉素的抗病毒活性、作用機(jī)理和開發(fā)應(yīng)用等作了深入研究(Li Yuhuan，Tao Peizheng et alAntimicrobial Agents and Chemotherapy，48(3)867-872；2004)。在體外抗病毒實(shí)驗(yàn)中，格爾德霉素顯著抑制非洲綠猴腎細(xì)胞(Vero)內(nèi)皰疹病毒HSV-1的復(fù)制，其IC50為0.093μmol，對(duì)Vero細(xì)胞的毒性(CC50)為350μmol。格爾德霉素體外對(duì)皰疹病毒HSV-2、水痘禽口疾疫病毒VSV、柯薩奇三型病毒Cox B3、脊髓灰質(zhì)炎病毒Polio-1、HIV-1和SARS冠狀病毒的IC50均在μmol水平，有明顯抑制活性。
格爾德霉素不影響病毒的吸附、穿入等，具有獨(dú)特的抗病毒作用機(jī)理以及廣抗病毒譜，并且具有與其它抗病毒藥物無交叉耐藥和本身難以產(chǎn)生耐藥性的特性。
有關(guān)研究顯示，格爾德霉素與核苷類抗病毒藥物聯(lián)合使具有協(xié)同作用，而且對(duì)耐藥毒株亦有明顯抑制活性。借鑒抗HIV治療中“雞尾酒療法”的經(jīng)驗(yàn)，考慮到聯(lián)合用藥的目的以及核苷堿基的強(qiáng)水溶性，本發(fā)明合成了一組連有核苷堿基的格爾德霉素衍生物，測定了所述化合物的抗病毒活性和抗病毒譜。
本發(fā)明的主要目的在于通過在格爾德霉素分子中引入水溶性強(qiáng)的核苷堿基，保留或增強(qiáng)格爾德霉素原有抗病毒活性的同時(shí)，通過改善其水溶性及組織分布等藥代動(dòng)力學(xué)性質(zhì)，以期獲得具有較小毒性和較高療效的新型化合物。其中，核苷堿基與格爾德霉素之間以帶有氨基的鏈狀結(jié)構(gòu)部分(稱為Linker)相連。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明提供了一組連有核苷堿基的格爾德霉素衍生物，其結(jié)構(gòu)如式(I)所示 其中Linker為含有3-20個(gè)碳的直鏈或支鏈、飽和或不飽和、脂肪性或芳香性、不含或含有醚鍵或酯鍵或酰胺鍵的聯(lián)結(jié)部分；
R為腺苷、鳥苷、胞苷、尿苷等核苷及其結(jié)構(gòu)類似物，或腺嘌呤、鳥嘌呤、胞嘧啶或尿嘧啶等核苷堿基，以及帶有取代基R1的上述官能團(tuán)；R1為含有1-8個(gè)碳原子的烴基、烴氧基，鹵素，巰基。
本發(fā)明提供了式(I)化合物的制備方法，其反應(yīng)路線如下 其中X為羧基、羥基、氨基或鹵素；R為核苷或R1取代的核苷(R1為1～8個(gè)碳原子數(shù)的烴基、烴氧基、鹵素、氨基或巰基)；M為羥基、巰基、氨基；Y代表酯鍵、酰胺鍵、醚鍵、硫醚鍵及亞胺鍵；n＝0～20。
該路線首先參照文獻(xiàn)方法(趙知中等，有機(jī)化學(xué)中的保護(hù)基團(tuán)，科學(xué)出版社，198441-49)，利用Boc2O(市售品)對(duì)起始化合物a(γ-氨基丁酸、δ-氨基戊酸、3-氨基丙酸、4-氨基丁醇、4-氨基丁硫醇、1，4-二氨基丁烷、1，3-二氨基丙烷等，均為市售品)的伯氨基進(jìn)行保護(hù)得到Boc保護(hù)的相應(yīng)產(chǎn)物b。
化合物b再與核苷或取代核苷R-M(環(huán)狀或非環(huán)狀腺苷、鳥苷、尿苷或胞苷，均購自Sigma試劑公司及北京試劑公司)的活潑羥基、胺基或巰基進(jìn)行縮合，形成酯鍵、酰胺鍵、醚鍵、硫醚鍵及亞胺鍵實(shí)現(xiàn)核苷部分與Linker的連接，得到化合物c。
在三氟醋酸的作用下，化合物c脫去Boc保護(hù)基(部分核苷的異丙叉保護(hù)基亦同時(shí)脫去)，得到帶有游離氨基的化合物d。
化合物d在鹵代烷烴類溶劑如氯仿、醇性溶劑如甲醇或極性非質(zhì)子性溶劑如N，N-二甲基甲酰胺、二甲亞砜、乙酸乙酯、乙腈、丙酮中，堿性條件(三乙胺、吡啶、N，N-二甲基吡啶、碳酸鉀、碳酸鈉、氫氧化鈣)下，與格爾德霉素(自制樣品，屬于市售商品，可購自Sigma等公司)發(fā)生親核取代反應(yīng)，得到目標(biāo)化合物(I)。
按照上述路線和方法制備得到了化合物1～27，結(jié)構(gòu)見表1。
本發(fā)明發(fā)現(xiàn)了式(I)化合物具有抗HBV、HIV、HSV作用。
本發(fā)明還提供了所說化合物的藥物組合物，可以含有治療有效量的上述化合物為活性成分，以及含有一種或多種藥學(xué)上可接受的載體。
本發(fā)明的化合物和藥物組合物可用于制備抗病毒或抗腫瘤藥物。
本發(fā)明藥物組合物的各種劑型可以按照藥學(xué)領(lǐng)域的常規(guī)生產(chǎn)方法制備，例如使活性成分與一種或多種載體混合，然后將其制成所需的劑型。
本發(fā)明的藥物組合物優(yōu)選含有重量比為0.1％-99.5％的活性成分，最優(yōu)選含有重量比為0.5％-99.5％的活性成分。
發(fā)明效果按照以上所說路線和方法，能夠穩(wěn)定、可重復(fù)性地合成得到本發(fā)明化合物。
本發(fā)明采用細(xì)胞培養(yǎng)法測定了發(fā)明化合物的體外抗病毒活性和抗病毒譜，結(jié)果發(fā)明化合物具有廣譜抗病毒活性，對(duì)逆轉(zhuǎn)錄病毒HIV-1和HBV的抑制作用較強(qiáng)，IC50在ng/ml水平，強(qiáng)于對(duì)照藥拉米夫定，對(duì)皰疹病毒HSV-1和2型的活性明顯強(qiáng)于對(duì)照藥阿昔洛韋。另外，發(fā)明化合物對(duì)CoX病毒也有較強(qiáng)抑制活性。各化合物的活性測定結(jié)果如表1所示。
表1發(fā)明化合物的抗病毒活性

具體實(shí)施例以下實(shí)施例可以使本專業(yè)技術(shù)人員更全面的理解本發(fā)明，但不以任何方式限制本發(fā)明。所有化合物的結(jié)構(gòu)均經(jīng)1H NMR或MS所確定。
實(shí)施例117-(4’-((5”-(4-氨基-2-氧代嘧啶-1(2H)-基)-1”，3”-氧硫雜環(huán)戊-2”-基)甲氧基)-4’-氧代丁胺)-17-去甲氧基格爾德霉素(1)的制備參照文獻(xiàn)(趙知中等，有機(jī)化學(xué)中的保護(hù)基團(tuán)，科學(xué)出版社，198441-49)，以Boc2O為原料，保護(hù)γ-氨基丁酸的伯氨基，得到γ-叔丁氧酰胺-丁酸。
取γ-叔丁氧酰胺-丁酸0.45g(2.22mmol)，加入5mL CHCl3。溶解后加入二環(huán)己基碳二亞胺(DCC)0.6g(2.91mmol)，室溫?cái)嚢?，出現(xiàn)大量白色混濁。反應(yīng)進(jìn)行4小時(shí)，濾除白色沉淀，含有γ-叔丁氧酰胺-丁酸酐的濾液備用。
取拉米夫定0.6g(2.63mmol)置250mL帶回流冷凝裝置的圓底燒瓶中，加入N，N-二甲基甲酰胺50mL，70℃攪拌，至拉米夫定完全溶解。將上步反應(yīng)所得濾液轉(zhuǎn)入反應(yīng)瓶，加入DCC 0.6g(2.91mmol)、N，N-二甲基吡啶(DMAP)0.06g(0.49mmol)，室溫?cái)嚢?，出現(xiàn)白色混濁。反應(yīng)進(jìn)行30小時(shí)，濾除不溶物，油泵減壓濃縮得略顯黃色的粘稠液體，加入乙醚20mL，攪拌，出現(xiàn)大量白色沉淀，減壓過濾，收集固體產(chǎn)物，得到拉米夫定與γ-叔丁氧酰胺-丁酸的酯化粗產(chǎn)物。
取上步所得拉米夫定與γ-叔丁氧酰胺-丁酸的酯化粗產(chǎn)物50mg(0.121mmol)，加入三氟醋酸0.5mL，N2保護(hù)下，室溫反應(yīng)約0.5小時(shí)。減壓濃縮，得淡黃色油狀液體。加入乙醚10mL攪拌，析出白色固體，過濾，得到拉米夫定與γ-氨基丁酸的酯化產(chǎn)物。
取格爾德霉素50mg(89.29μmol)，加入5mL CHCl3，甲醇0.5ml，攪拌至格爾德霉素溶解，反應(yīng)液呈橙黃色。加入上步操作所得拉米夫定與γ-氨基丁酸的酯化產(chǎn)物70mg(164μmol)，室溫反應(yīng)進(jìn)行4天，蒸干溶劑，得暗紫色固體，將固體殘留物溶于10mL乙酸乙酯，依次用去離子水，飽和NaHCO3，1mol/LHCl溶液，飽和食鹽水洗。有機(jī)相中加入無水Na2SO4干燥過夜。濾除干燥劑，有機(jī)相減壓濃縮。用硅膠柱進(jìn)行層析分離，得化合物(1)46.2mg(61.2％)。
1H-NMR δ(ppm)0.8～1.2(m，6H，C10-CH3，C14-CH3)；1.2～1.4(m，5H，C13-H2，C14-H，C15-H2)；1.5～1.7(m，2H，C17-NH-CH2-CH2-CH2-COO)；1.783(s，3H，C8-CH3)；2.011(s，3H，C2-CH3)；2.3～2.4(m，1H，C10-H)；2.532(s，2H，C17-NH-CH2-CH2-CH2-COO)；2.7～3.1(m，4H，C17-NH-CH2，氧硫雜環(huán)4位2H)；3.287(s，3H，C12-OCH3)；3.355(s，3H，C6-OCH3)；3.5～3.7(m，2H，C11-H，C12-H，)；4.3～4.6(m，2H，COO-CH2-CH-S-)；4.6～4.7(m，1H，C6-H)；4.902(br，2H，-NH2)；5.205(s，1H，C7-H)；5.3～5.4(m，1H，氧硫雜環(huán)2位1H)；5.8～5.9(m，2H，C9-H，C5-H)；6.281(s，1H，胞嘧啶C5-H)；6.409(s，1H，氧硫雜環(huán)5位1H)；6.562(t，J＝11.2Hz，1H，C4-H)；6.948(d，J＝11.6Hz，1H，C3-H)；7.224(s，1H，C19-H)；7.896(d，1H，J＝5.6Hz，胞嘧啶C6-H)。
MS(FAB)m/z＝845(M+2)，843(M+)，112(胞嘧啶)。
實(shí)施例217-(4’-((5”-(4-氨基-5-氟-2-氧代嘧啶-1(2H)-基)-1”，3”-氧硫雜環(huán)戊-2”-基)甲氧基)-4’-氧代丁胺)-17-去甲氧基格爾德霉素(2)的制備核苷堿基部分以5-氟拉米夫定為原料，Linker部分為γ-氨基丁酸，按實(shí)施例1類似方法合成得到(2)。
1H-NMR δ(ppm)0.9～1.3(m，6H，C10-CH3，C14-CH3)；1.3～1.4(m，5H，C13-H2，C14-H，C15-H2)；1.5～1.7(m，2H，C17-NH-CH2-CH2-CH2-COO)；1.983(s，3H，C8-CH3)；2.211(s，3H，C2-CH3)；2.3～2.4(m，1H，C10-H)；2.632(s，2H，CH2-COO)；2.8～3.0(m，4H，C17-NH-CH2，氧硫雜環(huán)4位2H)；3.182(s，3H，C12-OCH3)；3.458(s，3H，C6-OCH3)；3.5～3.7(m，4H，C11-H，C12-H)；4.2～4.3(m，2H，COO-CH2-CH-S)；4.6～4.7(m，1H，C6-H)；5.294(s，1H，C7-H)；5.3～5.4(m，1H，氧硫雜環(huán)2位1H)；5.9～6.2(m，2H，C9-H，C5-H)；6.427(s，1H，氧硫雜環(huán)5位1H)；6.692(t，J＝11.6Hz，1H，C4-H)；7.148(d，J＝11.4Hz，1H，C3-H)；7.524(s，1H，C19-H)；8.362(s，1H，胞嘧啶C6-H)。
MS(FAB)m/z＝863(M+2)，861(M+)。
實(shí)施例317-(4’-(2”-((2-氨基-6-氧-1，6-二氫-4H-嘌呤-9(5H)-基)甲氧基)乙氧基)-4’-氧代丁胺)-17-去甲氧基-格爾德霉素(3)的制備核苷堿基部分以阿昔洛韋為原料，Linker部分為γ-氨基丁酸，按實(shí)施例1類似方法合成得到(3)。
1H-NMR δ(ppm)0.7～1.1(m，6H，C10-CH3，C14-CH3)；1.2～1.5(m，5H，C13-H2，C14-H，C15-H2)；1.645(m，2H，C17-NH-CH2-CH2-CH2-COO)；2.135(s，3H，C8-CH3)；2.261(s，3H，C2-CH3)；2.3～2.4(m，1H，C10-H)；2.6～2.7(m，2H，CH2-COO)；2.7～2.9(m，2H，C17-NH-CH2)；3.242(s，3H，C12-OCH3)；3.388(s，3H，C6-OCH3)；3.5～3.9(m，6H，C11-H，C12-H，核苷側(cè)鏈O-CH2-CH2OOC)；4.1～4.4(m，2H，核苷側(cè)鏈OCH2-CH2-OOC)；4.6～4.8(m，1H，C6-H)；5.073(s，1H，C7-H)；5.283(s，2H，核苷側(cè)鏈N-CH2-O)；6.0～6.3(m，2H，C9-H，C5-H)；6.773(t，J＝11.4Hz，1H，C4-H)；6.9～7.1(m，1H，C3-H)；7.449(s，1H，C19-H)；7.862(s，1H，鳥嘌呤C7-H)。
MS(FAB)m/z＝842(M+1)，841(M+)。
實(shí)施例417-(4’-((5”-(6-氨基-9H-嘌呤-9-基)-3”，4”-二羥-四氫呋喃-2”-基)甲氧基)-4’-氧代丁胺)-17-去甲氧基-格爾德霉素(4)的制備核苷堿基部分以2’，3’-異丙叉腺苷為原料，Linker部分為γ-氨基丁酸，按實(shí)施例1類似方法合成得到(4)。
1H-NMR δ(ppm)0.8～1.2(m，6H，C10-CH3，C14-CH3)；1.3～1.4(m，5H，C13-H2，C14-H，C15-H2)；1.861(m，2H，C17-NH-CH2-CH2-CH2-COO)；1.943(s，3H，C8-CH3)；2.181(s，3H，C2-CH3)；2.3～2.4(m，1H，C10-H)；2.5～2.7(m，2H，CH2-COO)；2.8～2.9(m，2H，C17-NH-CH2)；3.231(s，3H，C12-OCH3)；3.428(s，3H，C6-OCH3)；3.5～3.7(m，4H，C11-H，C12-H，糖環(huán)3，4位H)；4.1～4.4(m，2H，-CH2OCO)；4.6～4.7(m，，1H，C6-H)；5.294(s，1H，C7-H)；5.6～6.2(m，3H，C9-H，C5-H，糖環(huán)2位H)；6.427(s，1H，糖環(huán)5位H)；6.6～6.7(m，1H，C4-H)；6.9～7.0(m，1H，C3-H)；7.524(s，1H，C19-H)；8.164(s，1H，腺嘌呤C2-H)；8.758(s，1H，腺嘌呤C7-H)。
MS(FAB)m/z＝883(M+2)，881(M+)實(shí)施例517-(4’-((5”-(2-氨基-6-氧代-1，6-二氫嘌呤-9-基)-3”，4-二羥-四氫呋喃-2”-基)甲氧基)-4’氧代丁胺)-17-去甲氧基-格爾德霉素(5)的制備核苷堿基部分以2’，3’-異丙叉鳥苷為原料，Linker部分為γ-氨基丁酸，按實(shí)施例1類似方法合成得到(5)。
1H-NMR δ(ppm)0.8～1.2(m，6H，C10-CH3，C14-CH3)；1.3～1.4(m，5H，C13-H2，C14-H，C15-H2)；1.728(m，2H，C17-NH-CH2-CH2-CH2-COO)；1.739(s，3H，C8-CH3)；1.927(s，3H，C2-CH3)；2.2～2.3(m，1H，C10-H)；2.3～2.5(m，2H，CH2-COO)；2.6～2.8(m，2H，C17-NH-CH2)；3.263(s，3H，C12-OCH3)；3.381(s，3H，C6-OCH3)；3.5～3.7(m，4H，C11-H，C12-H，糖環(huán)3，4位H)；4.1～4.3(m，2H，)；4.5～4.8(m，1H，C6-H)；4.972(s，1H，C7-H)；5.6～6.2(m，3H，C9-H，C5-H，糖環(huán)2位H)；6.3～6.4(m，1H，糖環(huán)5位H)；6.7～6.8(m，1H，C4-H)；7.0～7.1(m，1H，C3-H)；7.739(s，1H，C19-H)；8.258(s，1H，鳥嘌呤C7-H)。
MS(FAB)m/z＝898(M+1)，897(M+)實(shí)施例617-(4’-((5”-(4-氨基-2-氧代嘧啶-1(2H)-基)-3”，4”-二羥-四氫呋喃-2”-基)甲氧基)-4’-氧代丁胺)-17-去甲氧基-格爾德霉素(6)的制備核苷堿基部分以2’，3’-異丙叉胞苷為原料，Linker部分為γ-氨基丁酸，按實(shí)施例1類似方法合成得到(6)。
1H-NMR δ(ppm)0.7～1.2(m，6H，C10-CH3，C14-CH3)；1.3～1.5(m，5H，C13-H2，C14-H，C15-H2)；1.752(m，2H，C17-NH-CH2-CH2-CH2-COO)；1.815(s，3H，C8-CH3)；2.108(s，3H，C2-CH3)；2.1～2.4(m，3H，C10-H，CH2-COO)；2.6～2.8(m，2H，C17-NH-CH2)；3.183(s，3H，C12-OCH3)；3.377(s，3H，C6-OCH3)；3.5～4.4(m，7H，C11-H，C12-H，糖環(huán)3，4位H，-CH2OCO，糖環(huán)2位H)；4.6～5.0(m，3H，C6-H，糖環(huán)5位H，胞嘧啶C5-H)；5.359(s，1H，C7-H)；5.5～5.8(m，2H，C9-H，C5-H)；5.9～6.0(m，1H，C4-H)；6.2～6.4(m，1H，C3-H)；6.829(s，1H，C19-H)；7.441(s，1H，胞嘧啶C6-H)。
MS(FAB)m/z＝859(M+2)，857(M+)實(shí)施例717-(4’-((5”-(2，4-二氧代-3，4-二氫嘧啶-1(2H)-基)-3”，4”-二羥-四氫呋喃-2”-基)甲氧基)-4’-氧代丁胺)-17-去甲氧基-格爾德霉素(7)的制備核苷堿基部分以2’，3’-異丙叉尿苷為原料，Linker部分為γ-氨基丁酸，按實(shí)施例1類似方法合成得到(7)。
1H-NMR δ(ppm)0.8～1.1(m，6H，C10-CH3，C14-CH3)；1.2～1.4(m，5H，C13-H2，C14-H，C15-H2)；1.594(m，2H，C17-NH-CH2-CHH2-CH2-COO)；1.775(s，3H，C8-CH3)；1.972(s，3H，C2-CH3)；2.0～2.4(m，3H，C10-H)；2.5～2.8(m，4H，C17-NH-CH2-CH2-CH2-COO)；2.891(s，3H，C12-OCH3)；3.117(s，3H，C6-OCH3)；3.5～4.0(m，4H，C11-H，C12-H，糖環(huán)3，4位H)；4.1～4.3(m，3H，-CH2OCO，糖環(huán)2位H)；4.4～4.6(m，2H，C6-H，糖環(huán)5位H)；4.947(s，1H，C7-H)；5.2～5.5(m，2H，C9-H，C5-H)；5.6～6.1(m，2H，C4-H，尿嘧啶C5-H)；6.3～6.3(m，1H，C3-H)；6.582(s，1H，C19-H)；7.763(s，1H，尿嘧啶C6-H)。
MS(FAB)m/z＝859(M+1)，858(M+)實(shí)施例817-(3’-((5”-(4-氨基-2-氧代嘧啶-1(2H)-基)-1”，3”-氧硫雜環(huán)戊-2”-基)甲氧基)-3’-氧代丙胺)-17-去甲氧基格爾德霉素(8)的制備核苷堿基部分以拉米夫定為原料，Linker部分為3-氨基丙酸，按實(shí)施例1類似方法合成得到(8)。
1H-NMR δ(ppm)0.8～1.2(m，6H，C10-CH3，C14-CH3)；1.1～1.4(m，5H，C13-H2，C14-H，C15-H2)；1.886(s，3H，C8-CH3)；2.113(s，3H，C2-CH3)；2.2～2.4(m，1H，C10-H)；2.523(s，2H，氧硫雜環(huán)4位2H)；2.6～2.8(m，2H，C17-NH-CH2)；3.179(s，3H，C12-OCH3)；3.325(s，3H，C6-OCH3)；3.5～3.9(m，4H，C11-H，C12-H，COO-CH2-CH-S-)；4.4～4.7(m，2H，C6-H，胞嘧啶C5-H)；4.886(br，2H，-NH2)；5.120(s，1H，C7-H)；5.8～5.9(m，3H，C9-H，C5-H，氧硫雜環(huán)2位1H)；6.113(s，1H，氧硫雜環(huán)5位1H)；6.2～6.4(m，1H，C4-H)；6.6～6.7(m，1H，C3-H)；6.972(s，1H，C19-H)；7.396(s，1H，胞嘧啶C6-H)。
MS(FAB)m/z＝831(M+2)，829(M+)。
實(shí)施例917-(3’-((5”-(2，4-二氧代-3，4-二氫嘧啶-1(2H)-基)-3”，4”-二羥-四氫呋喃-2”-基)甲氧基)-3’-氧代丙胺)-17-去甲氧基-格爾德霉素(9)的制備核苷堿基部分以2’，3’-異丙叉尿苷為原料，Linker部分為3-氨基丙酸，按實(shí)施例1類似方法合成得到(9)。
1H-NMR δ(ppm)0.6～1.0(m，6H，C10-CH3，C14-CH3)；1.1～1.5(m，5H，C13-H2，C14-H，C15-H2)；1.687(s，3H，C8-CH3)；1.904(s，3H，C2-CH3)；2.1～2.4(m，3H，C10-H，)；2.5～2.7(m，2H，CH2-COO)；2.731(s，3H，C12-OCH3)；2.8～3.0(m，2H，C17-NH-CH2)；3.317(s，3H，C6-OCH3)；3.6～4.0(m，4H，C11-H，C12-H，糖環(huán)3，4位H)；4.1～4.3(m，3H，-CH2OCO，糖環(huán)2位H)；4.4～4.6(m，2H，C6-H，糖環(huán)5位H)；5.073(s，1H，C7-H)；5.2～5.5(m，2H，C9-H，C5-H)；5.6～6.1(m，2H，C4-H，尿嘧啶C5-H)；6.3～6.4(m，1H，C3-H)；6.941(s，1H，C19-H)；7.795(s，1H，尿嘧啶C6-H)。
MS(FAB)m/z＝844(M+)實(shí)施例1017-(3’-((5”-(4-氨基-2-氧代嘧啶-1(2H))-3”，4”-二羥-四氫呋喃-2”-基)甲氧基)-3’-氧代丙胺)-17-去甲氧基-格爾德霉素(10)的制備核苷堿基部分以2’，3’-異丙叉胞苷為原料，Linker部分為3-氨基丙酸，按實(shí)施例1類似方法合成得到(10)。
1H-NMR δ(ppm)0.9～1.2(m，6H，C10-CH3，C14-CH3)；1.3～1.6(m，5H，C13-H2，C14-H，C15-H2)；1.742(s，3H，C8-CH3)；1.992(s，3H，C2-CH3)；2.2～2.5(m，3H，C10-H，CH2-COO)；2.6～2.8(m，2H，C17-NH-CH2)；3.205(s，3H，C12-OCH3)；3.385(s，3H，C6-OCH3)；3.5～4.2(m，7H，C11-H，C12-H，糖環(huán)3，4位H，-CH2OCO，糖環(huán)2位H)；4.4～4.8(m，3H，C6-H，糖環(huán)5位H，胞嘧啶C6-H)；5.497(s，1H，C7-H)；5.6～5.8(m，2H，C9-H，C5-H)；6.0～6.2(m，1H，C4-H)；6.3～6.4(m，1H，C3-H)；6.795(s，1H，C19-H)；7.418(s，1H，胞嘧啶C6-H)。
MS(FAB)m/z＝845(M+2)，843(M+)實(shí)施例1117-(5’-((5”-(2-氨基-6-氧代-1，6-二氫嘌吟-9-基)-3”，4-二羥-四氫呋喃-2”-基)甲氧基)-5’氧代戊胺)-17-去甲氧基-格爾德霉素(11)的制備核苷堿基部分以2’，3’-異丙叉鳥苷為原料，Linker部分為δ-氨基戊酸，按實(shí)施例1類似方法合成得到(11)。
1H-NMR δ(ppm)0.9～1.2(m，6H，C10-CH3，C14-CH3)；1.3～1.4(m，5H，C13-H2，C14-H，C15-H2)；1.5～1.7(m，4H，C17-NH-CH2-CH2-CH2-CH2-COO)；1.742(s，3H，C8-CH3)；1.875(s，3H，C2-CH3)；2.2～2.8(m，7H，C10-H，C17-NH-CH2-CH2-CH2-CH2-COO-CH2)；3.147(s，3H，C12-OCH3)；3.304(s，3H，C6-OCH3)；3.4～3.7(m，4H，C11-H，C12-H，糖環(huán)3，4位H)；4.1～4.3(m，2H，糖環(huán)2位H)；4.5～4.8(m，1H，C6-H)；4.855(s，1H，C7-H)；5.6～6.5(m，3H，C9-H，C5-H，糖環(huán)5位H)；6.5～6.6(m，1H，C4-H)；6.8～6.9(m，1H，C3-H)；7.334(s，1H，C19-H)；8.049(s，1H，鳥嘌呤C7-H)。
MS(FAB)m/z＝911(M+)實(shí)施例1217-(5’-((5”-(4-氨基-2-氧代嘧啶-1(2H)-基)-1”，3”-氧硫雜環(huán)戊-2”-基)甲氧基)-5’-氧代戊胺)-17-去甲氧基格爾德霉素(12)的制備核苷堿基部分以拉米夫定為原料，Linker部分為δ-氨基戊酸，按實(shí)施例1類似方法合成得到(12)。
1H-NMR δ(ppm)1.0～1.3(m，6H，C10-CH3，C14-CH3)；1.3～1.4(m，5H，C13-H2，C14-H，C15-H2)；1.5～1.7(m，4H，CONH-CH2-CH2-CH2-CH2-COO)；1.895(s，3H，C8-CH3)；2.007(s，3H，C2-CH3)；2.2～2.9(m，5H，C10-H，C17-NH-CH2-CH2-CH2-CH2-COO)；3.173(s，3H，C12-OCH3)；3.464(s，3H，C6-OCH3)；3.5～3.7(m，4H，C11-H，C12-H，氧硫雜環(huán)4位2H)；4.3～4.6(m，2H，COO-CH2-CH-S-)；4.6～4.7(m，2H，C6-H，胞嘧啶C5-H)；4.902(br，2H，-NH2)；5.325(s，1H，C7-H)；5.472(s，1H，氧硫雜環(huán)2位1H)；5.8～6.0(m，2H，C9-H，C5-H)；6.397(s，1H，氧硫雜環(huán)5位1H)；6.5～6.6(m，1H，C4-H)；6.7～6.8(m，1H，C3-H)；7.129(s，1H，C19-H)；7.382(s，1H，胞嘧啶C6-H)。
MS(FAB)m/z＝857(M+)。
實(shí)施例1317-(5’-((5”-(4-氨基-2-氧代嘧啶-1(2H)-基)-3”，4”-二羥-四氫呋喃-2”-基)甲氧基)-5’-氧代戊胺)-17-去甲氧基-格爾德霉素(13)的制備核苷堿基部分以2’，3’-異丙叉胞苷為原料，Linker部分為δ-氨基戊酸，按實(shí)施例1類似方法合成得到(13)。
1H-NMR δ(ppm)0.9～1.2(m，6H，C10-CH3，C14-CH3)；1.2～1.5(m，5H，C13-H2，C14-H，C15-H2)；1.5～1.7(m，4H，-NH-CH2-CH2-CH2-CH2-COO)；1.874(s，3H，C8-CH3)；2.085(s，3H，C2-CH3)；2.2～2.7(m，7H，C10-H，C17-NH-CH2-CH2-CH2-CH2-COO)；2.987(s，3H，C12-OCH3)；3.149(s，3H，C6-OCH3)；3.3～4.1(m，7H，C11-H，C12-H，糖環(huán)3，4位H，-CH2OCO，糖環(huán)2位H)；4.4～4.8(m，3H，C6-H，糖環(huán)5位H，胞嘧啶C5-H)；5.239(s，1H，C7-H)；5.3～5.7(m，2H，C9-H，C5-H)；5.6～5.9(m，1H，C4-H)；6.1～6.3(m，1H，C3-H)；6.913(s，1H，C19-H)；7.294(s，1H，胞嘧啶C6-H)。
MS(FAB)m/z＝871(M+)實(shí)施例1417-(4’-((5”-(4-氨基-2-氧代嘧啶-1(2H)-基)-1”，3”-氧硫雜環(huán)戊-2”-基)甲胺基)-4’-氧代丁胺)-17-去甲氧基格爾德霉素(14)的制備核苷堿基部分以2’-氨甲基-2’-去羥甲基拉米夫定為原料，Linker部分為γ-氨基丁酸，按實(shí)施例1類似方法合成得到(14)。
1H-NMR δ(ppm)0.7～1.2(m，6H，C10-CH3，C14-CH3)；1.2～1.4(m，5H，C13-H2，C14-H，C15-H2)；1.5～1.8(m，2H，-NH-CH2-CH2-CH2-CONH)；1.893(s，3H，C8-CH3)；2.161(s，3H，C2-CH3)；2.3～2.4(m，1H，C10-H)；2.5～2.9(m，4H，C17-NH-CH2-CH2-CH2-COO)；3.351(s，3H，C12-OCH3)；3.497(s，3H，C6-OCH3)；3.5～3.8(m，4H，C11-H，C12-H，氧硫雜環(huán)4位2H)；4.3～4.6(m，2H，CONH-CH2-CH-S-)；4.6～4.7(m，1H，C6-H)；5.146(s，1H，C7-H)；5.350(s，1H，氧硫雜環(huán)2位1H)；5.8～5.9(m，2H，C9-H，C5-H)；6.341(s，1H，胞嘧啶C5-H)；6.495(s，1H，氧硫雜環(huán)5位1H)；6.5～6.6(m，1H，C4-H)；6.8～6.9(m，1H，C3-H)；7.329(s，1H，C19-H)；7.746(s，1H，胞嘧啶C6-H)。
MS(FAB)m/z＝859(M+1)，858(M+)。
實(shí)施例1517-(4’-(2”-((2-氨基-6-氧-1，6-二氫-4H-嘌呤-9(5H)-基)甲氧基)乙胺基)-4’-氧代丁胺)-17-去甲氧基-格爾德霉素(15)的制備核苷堿基部分以9-(O-(2’-氨基乙基)氧甲基)鳥嘌呤為原料，Linker部分仍為γ-氨基丁酸，按實(shí)施例1類似方法合成得到(15)。
1H-NMR δ(ppm)0.7～1.2(m，6H，C10-CH3，C14-CH3)；1.2～1.5(m，5H，C13-H2，C14-H，C15-H2)；1.6～1.7(m，2H，NH-CH2-CH2-CH2-CONH)；1.964(s，3H，C8-CH3)；2.219(s，3H，C2-CH3)；2.3～2.4(m，1H，C10-H)；2.5～2.9(m，4H，NH-CH2-CH2-CH2-CONH)；3.152(s，3H，C12-OCH3)；3.371(s，3H，C6-OCH3)；3.5～3.9(m，6H，C11-H，C12-H，核苷側(cè)鏈O-CH2-CH2NHCO)；4.1～4.4(m，2H，核苷側(cè)鏈OCH2-CH2-NHCO)；4.6～4.8(m，1H，C6-H)；5.124(s，1H，C7-H)；5.316(m，2H，核苷側(cè)鏈N-CH2-O)；6.0～6.3(m，2H，C9-H，C5-H)；6.6～6.8(m，1H，C4-H)；7.1～7.2(m，1H，C3-H)；7.267(s，1H，C19-H)；7.792(s，1H，鳥嘌呤C7-H)。
MS(FAB)m/z＝839(M+)。
實(shí)施例1617-(4’-((5”-(4-氨基-2-氧代嘧啶-1(2H)-基)-1”，3”-氧硫雜環(huán)戊-2”-基)甲氧基)丁胺)-17-去甲氧基格爾德霉素(16)的制備參照文獻(xiàn)(趙知中等，有機(jī)化學(xué)中的保護(hù)基團(tuán)，科學(xué)出版社，198441-49)以Boc2O為原料，保護(hù)4-氨基丁醇的伯氨基，得到N-叔丁氧酰-4-氨基-丁醇。
取2’-溴甲基-2’-去羥甲基拉米夫定1.0g(3.45mmol)溶于50mlDMSO中，加入N-叔丁氧酰-4-氨基-丁醇2.0g(10.64mmol)，KOH0.5g(8.93mmol)。反應(yīng)進(jìn)行8小時(shí)后，濾除不溶物，加入50mlH2O，用鹽酸調(diào)pH至7，用乙酸乙酯提取，乙酸乙酯相水洗后用無水硫酸鈉干燥過夜。濾除干燥劑后，濾液減壓濃縮，得到無色油狀液體(核苷部分與N-叔丁氧酰-4-氨基-丁醇的縮合粗產(chǎn)物)1.3g。
取得到的油狀液體0.5g，加入CHCl310ml和三氟醋酸1.05mL，室溫反應(yīng)0.5小時(shí)。減壓濃縮。加入乙醚10mL攪拌，析出白色固體，過濾，得核苷與4-氨基-丁醇的縮合產(chǎn)物247mg。
取格爾德霉素50mg(89.29μmol)，加入5mL CHCl3，甲醇0.5mL，攪拌至格爾德霉素溶解，反應(yīng)液呈橙黃色。加入上述白色固體50mg(166μmol)，室溫避光反應(yīng)2天，蒸干溶劑，得暗紫色固體，將固體殘留物溶于10mL乙酸乙酯，依次用去離子水10mL，1mol/LHCl溶液10mL，飽和食鹽水10mL洗。有機(jī)相中加入無水Na2SO4干燥過夜。濾除干燥劑，有機(jī)相減壓濃縮至約1mL，用自制制備型薄層板(20cm×20cm)進(jìn)行分離，得目標(biāo)化合物(16)43.8mg(59.2％)。
1H-NMR δ(ppm)0.7～1.1(m，6H，C10-CH3，C14-CH3)；1.2～1.4(m，5H，C13-H2，C14-H，C15-H2)；1.4～1.7(m，4H，-NH-CH2-CH2-CH2-CH2-O-)；1.832(s，3H，C8-CH3)；2.141(s，3H，C2-CH3)；2.3～2.4(m，1H，C10-H)；2.6～2.9(m，4H，C17-NH-CH2-CH2-CH2-CH2-O-)；3.187(s，3H，C12-OCH3)；3.389(s，3H，C6-OCH3)；3.6～3.9(m，4H，C11-H，C12-H，氧硫雜環(huán)4位2H)；4.3～4.6(m，2H，COO-CH2-CH-S-)；4.6～4.7(m，1H，C6-H)；5.116(s，1H，C7-H)；5.2～5.3(m，1H，氧硫雜環(huán)2位1H)；5.489(s，1H，胞嘧啶C5-H)；5.5～5.7(m，2H，C9-H，C5-H)；6.291(s，1H，氧硫雜環(huán)5位1H)；6.5～6.7(m，1H，C4-H)；6.8～6.9(m，1H，C3-H)；7.018(s，1H，C19-H)；7.583(s，1H，胞嘧啶C6-H)。
MS(FAB)m/z＝829(M+)。
實(shí)施例1717-(4’-((5”-(4-氨基-5-氟-2-氧代嘧啶-1(2H)-基)-1”，3”-氧硫雜環(huán)戊-2”-基)甲氧基)丁胺)-17-去甲氧基格爾德霉素(17)的制備核苷堿基部分以2’-溴甲基-2’-去羥甲基-5-氟拉米夫定為原料，Linker部分為4-氨基丁醇，按實(shí)施例16類似方法合成得到(17)。
1H-NMR δ(ppm)0.8～1.3(m，6H，C10-CH3，C14-CH3)；1.3～1.4(m，5H，C13-H2，C14-H，C15-H2)；1.4～1.8(m，4H，-NH-CH2-CH2-CH2-CH2-O-)；2.036(s，3H，C8-CH3)；2.315(s，3H，C2-CH3)；2.3～2.4(m，1H，C10-H)；2.6～3.0(m，4H，-NH-CH2-CH2-CH2-CH2-O-)；3.215(s，3H，C12-OCH3)；3.341(s，3H，C6-OCH3)；3.4～3.9(m，4H，C11-H，C12-H，氧硫雜環(huán)4位2H)；4.2～4.4(m，2H，COO-CH2-CH-S)；4.6～4.7(m，1H，C6-H)；5.047(s，1H，C7-H)；5.2～5.4(m，1H，氧硫雜環(huán)2位1H)；5.5～5.8(m，2H，C9-H，C5-H)；6.264(s，1H，氧硫雜環(huán)5位1H)；6.4～6.6(m，1H，C4-H)；6.7～6.8(m，1H，C3-H)；7.261(s，1H，C19-H)；8.024(s，1H，胞嘧啶C6-H)。
MS(FAB)m/z＝847(M+)。
實(shí)施例1817-(4’-((5”-(2，4-二氧代-3，4-二氫嘧啶-1(2H)-基)-3”，4”-二羥-四氫呋喃-2”-基)甲氧基)丁胺)-17-去甲氧基-格爾德霉素(18)的制備核苷堿基部分以1’-溴-2’，3’-異丙叉尿苷為原料，Linker部分為4-氨基丁醇，按實(shí)施例16類似方法合成得到(18)。
1H-NMR δ(ppm)0.9～1.2(m，6H，C10-CH3，C14-CH3)；1.2～1.4(m，5H，C13-H2，C14-H，C15-H2)；1.4～1.6(m，4H，-NH-CH2-CH2-CH2-CH2-O-)；1.724(s，3H，C8-CH3)；1.899(s，3H，C2-CH3)；1.9～2.2(m，3H，C10-H，)；2.3～2.6(m，6H，-NH-CH2-CH2-CH2-CH2-O-CH2-)；2.773(s，3H，C12-OCH3)；3.057(s，3H，C6-OCH3)；3.3～4.0(m，4H，C11-H，C12-H，糖環(huán)3，4位H)；4.1～4.4(m，1H，糖環(huán)2位H)；4.4～4.6(m，2H，C6-H，糖環(huán)5位H)；4.826(s，1H，C7-H)；5.1～5.3(m，2H，C9-H，C5-H)；5.7～6.0(m，2H，C4-H，尿嘧啶C5-H)；6.3～6.5(m，1H，C3-H)；6.831(s，1H，C19-H)；7.572(s，1H，尿嘧啶C6-H)。
MS(FAB)m/z＝844(M+)實(shí)施例1917-(4’-(2”-((2-氨基-6-氧-1，6-二氫-4H-嘌呤-9(5H)-基)甲氧基)乙氧基)丁胺)-17-去甲氧基-格爾德霉素(19)的制備核苷堿基部分以9-(O-(2’-溴乙基)氧甲基)鳥嘌呤為原料，Linker部分為4-氨基丁醇，按實(shí)施例16類似方法合成得到(19)。
1H-NMR δ(ppm)0.7～1.2(m，6H，C10-CH3，C14-CH3)；1.2～1.4(m，5H，C13-H2，C14-H，C15-H2)；1.4～1.8(m，4H，-NH-CH2-CH2-CH2-CH2-O-)；2.036(s，3H，C8-CH3)；2.194(s，3H，C2-CH3)；2.3～2.5(m，1H，C10-H)；2.6～3.1(m，4H，C17-NH-CH2-CH2-CH2-CH2-O-)；3.252(s，3H，C12-OCH3)；3.329(s，3H，C6-OCH3)；3.5～3.9(m，4H，C11-H，C12-H，核苷側(cè)鏈O-CH2-CH2-O-)；4.2～4.3(m，2H，核苷側(cè)鏈OCH2-CH2-O-)；4.6～4.8(m，1H，C6-H)；4.957(s，1H，C7-H)；5.1～5.3(m，2H，核苷側(cè)鏈N-CH2-O)；6.1～6.4(m，2H，C9-H，C5-H)；6.5～6.6(m，1H，C4-H)；6.8～7.0(m，1H，C3-H)；7.252(s，1H，C19-H)；7.742(s，1H，鳥嘌呤C7-H)。
MS(FAB)m/z＝828(M+1)，827(M+)實(shí)施例2017-(4’-((5”-(4-氨基-2-氧代嘧啶-1(2H)-基)-1”，3”-氧硫雜環(huán)戊-2”-基)甲硫基)丁胺)-17-去甲氧基格爾德霉素(20)的制備核苷堿基部分以2’-溴甲基-2’-去羥甲基拉米夫定為原料，Linker部分為4-氨基丁硫醇，按實(shí)施例16類似方法合成得到(20)。
1H-NMR δ(ppm)0.6～1.2(m，6H，C10-CH3，C14-CH3)；1.2～1.4(m，5H，C13-H2，C14-H，C15-H2)；1.4～1.6(m，4H，-NH-CH2-CH2-CH2-CH2-S-)；1.921(s，3H，C8-CH3)；2.024(s，3H，C2-CH3)；2.3～2.4(m，1H，C10-H)；2.6～2.8(m，2H，C17-NH-CH2)；3.078(s，3H，C12-OCH3)；3.254(s，3H，C6-OCH3)；3.3～3.5(m，2H，-NH-CH2-CH2-CH2-CH2-S-)；3.6～3.8(m，4H，C11-H，C12-H，氧硫雜環(huán)4位2H)；4.2～4.5(m，2H，COO-CH2-CH-S-)；4.5～4.6(m，1H，C6-H)；4.984(s，1H，C7-H)；5.1～5.2(m，1H，氧硫雜環(huán)2位1H)；5.329(s，1H，胞嘧啶C5-H)；5.5～5.7(m，2H，C9-H，C5-H)；6.029(s，1H，氧硫雜環(huán)5位1H)；6.5～6.6(m，1H，C4-H)；6.9～7.0(m，1H，C3-H)；7.215(s，1H，C19-H)；7.483(s，1H，胞嘧啶C6-H)。
MS(FAB)m/z＝844(M+)。
實(shí)施例2117-(4’-(2”-((2-氨基-6-氧-1，6-二氫-4H-嘌呤-9(5H)-基)甲氧基)乙硫基)丁胺)-17-去甲氧基-格爾德霉素(21)的制備核苷堿基部分以9-(O-(2’-溴乙基)氧甲基)鳥嘌呤為原料，Linker部分為4-氨基丁硫醇，按實(shí)施例16類似方法合成得到(21)。
1H-NMR δ(ppm)0.7～1.1(m，6H，C10-CH3，C14-CH3)；1.1～1.5(m，5H，C13-H2，C14-H，C15-H2)；1.5～1.6(m，4H，-NH-CH2-CH2-CH2-CH2-S-)；1.875(s，3H，C8-CH3)；2.096(s，3H，C2-CH3)；2.4～2.5(m，1H，C10-H)；2.7～2.8(m，2H，C17-NH-CH2)；3.0～3.2(m，2H，-NH-CH2-CH2-CH2-CH2-S-)；3.275(s，3H，C12-OCH3)；3.367(s，3H，C6-OCH3)；3.4～4.0(m，6H，C11-H，C12-H，核苷側(cè)鏈O-CH2-CH2-O-)；4.2～4.3(m，2H，核苷側(cè)鏈OCH2-CH2-O-)；4.7～4.8(m，1H，C6-H)；4.931(s，1H，C7-H)；5.3～5.5(m，2H，核苷側(cè)鏈N-CH2-O)；6.2～6.4(m，2H，C9-H，C5-H)；6.6～6.7(m，1H，C4-H)；6.8～6.8(m，1H，C3-H)；7.229(s，1H，C19-H)；7.685(s，1H，鳥嘌呤C7-H)。
MS(FAB)m/z＝312(M+)實(shí)施例2217-(4’-((5”-(4-氨基-2-氧代嘧啶-1(2H)-基)-3”，4”-二羥-四氫呋喃-2”-基)甲硫基)丁胺)-17-去甲氧基-格爾德霉素(22)的制備核苷堿基部分以1’-溴-2’，3’-異丙叉胞苷為原料，Linker部分為4-氨基丁硫醇，按實(shí)施例16類似方法合成得到(22)。
1H-NMR δ(ppm)0.6～1.1(m，6H，C10-CH3，C14-CH3)；1.2～1.4(m，5H，C13-H2，C14-H，C15-H2)；1.4～1.6(m，4H，-NH-CH2-CH2-CH2-CH2-S-)；1.873(s，3H，C8-CH3)；2.122(s，3H，C2-CH3)；2.3～2.4(m，1H，C10-H)；2.6～2.8(m，6H，C17-NH-CH2-CH2-CH2-CH2-S-CH2-)；2.994(s，3H，C12-OCH3)；3.164(s，3H，C6-OCH3)；3.6～3.9(m，3H，C11-H，C12-H，糖環(huán)3位H)；4.2～4.5(m，2H，糖環(huán)4位H，糖環(huán)2位H)；4.5～4.6(m，1H，C6-H)；4.984(s，1H，C7-H)；5.329(s，1H，胞嘧啶C5-H)；5.5～5.7(m，2H，C9-H，C5-H)；6.029(s，1H，糖環(huán)5位H)；6.5～6.6(m，1H，C4-H)；6.8～7.0(m，1H，C3-H)；7.215(s，1H，C19-H)；7.483(s，1H，胞嘧啶C6-H)。
MS(FAB)m/z＝859(M+)。
實(shí)施例2317-(4’-((5”-(4-氨基-2-氧代嘧啶-1(2H)-基)-1”，3”-氧硫雜環(huán)戊-2”-基)甲胺基)丁胺)-17-去甲氧基格爾德霉素(23)的制備核苷堿基部分以2’-溴甲基-2’-去羥甲基-拉米夫定為原料，Linker部分為1，4-二氨基丁烷，按實(shí)施例16類似方法合成得到(23)。
1H-NMR δ(ppm)0.7～1.1(m，6H，C10-CH3，C14-CH3)；1.2～1.4(m，5H，C13-H2，C14-H，C15-H2)；1.4～1.7(m，4H，C17-NH-CH2-CH2-CH2-CH2-NH-)；1.917(s，3H，C8-CH3)；2.129(s，3H，C2-CH3)；2.3～2.4(m，1H，C10-H)；2.5～3.1(m，6H，C17-NH-CH2-CH2-CH2-CH2-NH-CH2-)；3.187(s，3H，C12-OCH3)；3.254(s，3H，C6-OCH3)；3.6～3.9(m，4H，C11-H，C12-H，氧硫雜環(huán)4位2H)；4.6～4.7(m，1H，C6-H)；4.964(s，1H，C7-H)；5.146(s，1H，氧硫雜環(huán)2位1H)；5.392(s，1H，胞嘧啶C5-H)；5.4～5.7(m，2H，C9-H，C5-H)；6.096(s，1H，氧硫雜環(huán)5位1H)；6.4～6.6(m，1H，C4-H)；6.7～6.9(m，1H，C3-H)；7.186(s，1H，C19-H)；7.338(s，1H，胞嘧啶C6-H)。
MS(FAB)m/z＝827(M+)。
實(shí)施例2417-(4’-(2”-((2-氨基-6-氧-1，6-二氫-4H-嘌呤-9(5H)-基)甲氧基)乙胺基)丁胺)-17-去甲氧基-格爾德霉素(24)的制備核苷堿基部分以9-(O-(2’-溴乙基)氧甲基)鳥嘌呤為原料，Linker部分為1，4-二氨基丁烷，按實(shí)施例16類似方法合成得到(24)。
1H-NMR δ(ppm)0.7～1.2(m，6H，C10-CH3，C14-CH3)；1.2～1.5(m，5H，C13-H2，C14-H，C15-H2)；1.6～1.7(m，2H，C17-NH-CH2-CH2-CH2-CH2-NH)；1.924(s，3H，C8-CH3)；2.879(s，3H，C2-CH3)；2.3～2.4(m，1H，C10-H)；2.5～3.0(m，6H，C17-NH-CH2-CH2-CH2-CH2-NH-CH2)；3.248(s，3H，C12-OCH3)；3.451(s，3H，C6-OCH3)；3.5～3.9(m，6H，C11-H，C12-H，核苷側(cè)鏈O-CH2-CH2NH)；4.6～4.8(m，1H，C6-H)；5.075(s，1H，C7-H)；5.1～5.3(m，2H，核苷側(cè)鏈N-CH2-O)；6.0～6.3(m，2H，C9-H，C5-H)；6.6～6.8(m，1H，C4-H)；7.1～7.2(m，1H，C3-H)；7.314(s，1H，C19-H)；7.498(s，1H，鳥嘌呤C7-H)。
MS(FAB)m/z＝825(M+)。
實(shí)施例2517-(4’-((5”-(4-氨基-2-氧代嘧啶-1(2H)-基)-3”，4”-二羥-四氫呋喃-2”-基)甲胺基)丁胺)-17-去甲氧基-格爾德霉素(25)的制備核苷堿基部分以1’-溴-2’，3’-異丙叉胞苷為原料，Linker部分為1，4-二氨基丁烷，按實(shí)施例16類似方法合成得到(25)。
1H-NMR δ(ppm)0.6～1.2(m，6H，C10-CH3，C14-CH3)；1.2～1.4(m，5H，C13-H2，C14-H，C15-H2)；1.4～1.6(m，4H，C17-NH-CH2-CH2-CH2-CH2-NH-)；1.916(s，3H，C8-CH3)；2.209(s，3H，C2-CH3)；2.3～2.4(m，1H，C10-H)；2.6～2.8(m，6H，C17-NH-CH2-CH2-CH2-CH2-NH-CH2-) ；3.024(s，3H，C12-OCH3)；3.352(s，3H，C6-OCH3)；3.6～4.0(m，3H，C11-H，C12-H，糖環(huán)3-H)；4.1～4.5(m，3H，糖環(huán)4位-H，糖環(huán)2位-H)；4.5～4.6(m，1H，C6-H)；5.046(s，1H，C7-H)；5.142(s，1H，胞嘧啶C5-H)；5.5～5.7(m，2H，C9-H，C5-H)；5.961(s，1H，糖環(huán)5位-H)；6.4～6.6(m，1H，C4-H)；6.8～7.0(m，1H，C3-H)；7.159(s，1H，C19-H)；7.571(s，1H，胞嘧啶C6-H)。
MS(FAB)m/z＝842(M+)。
實(shí)施例2617-(3’-((5”-(4-氨基-2-氧代嘧啶-1(2H)-基)-1”，3”-氧硫雜環(huán)戊-2”-基)甲胺基)丙胺)-17-去甲氧基格爾德霉素(26)的制備核苷堿基部分以2’-溴甲基-2’-去羥甲基-拉米夫定為原料，Linker部分為1，4-二氨基丙烷，按實(shí)施例16類似方法合成得到(26)。
1H-NMR δ(ppm)0.7～1.2(m，6H，C10-CH3，C14-CH3)；1.2～1.4(m，5H，C13-H2，C14-H，C15-H2)；1.5～1.7(m，2H，C17-NH-CH2-CH2-CH2-NH-)；1.927(s，3H，C8-CH3)；2.216(s，3H，C2-CH3)；2.2～2.4(m，1H，C10-H)；2.5～2.8(m，4H，C17-NH-CH2-CH2-CH2-NH-)；3.006(s，3H，C12-OCH3)；3.149(s，3H，C6-OCH3)；3.2～3.6(m，4H，C11-H，C12-H，氧硫雜環(huán)4位2H)；4.3～4.6(m，2H，-S-CH-CH2-NH-)；4.6～4.7(m，1H，C6-H)；5.017(s，1H，C7-H)；5.314(s，1H，氧硫雜環(huán)2位1H)；5.489(s，1H，胞嘧啶C5-H)；5.5～5.7(m，2H，C9-H，C5-H)；6.168(s，1H，氧硫雜環(huán)5位1H)；6.3～6.5(m，1H，C4-H)；6.6～6.8(m，1H，C3-H)；6.902(s，1H，C19-H)；7.371(s，1H，胞嘧啶C6-H)。
MS(FAB)m/z＝813(M+)。
實(shí)施例2717-(3’-(2”-((2-氨基-6-氧-1，6-二氫-4H-嘌呤-9(5H)-基)甲氧基)乙胺基)丙胺)-17-去甲氧基-格爾德霉素(27)的制備核苷堿基部分以9-(O-(2’-溴乙基)氧甲基)鳥嘌呤為原料，Linker部分為1，4-二氨基丙烷，按實(shí)施例16類似方法合成得到(27)。
1H-NMR δ(ppm)0.8～1.2(m，6H，C10-CH3，C14-CH3)；1.2～1.5(m，5H，C13-H2，C14-H，C15-H2)；1.6～1.8(m，4H，C17-NH-CH2-CH2-CH2-NH-)；1.994(s，3H，C8-CH3)；2.182(s，3H，C2-CH3)；2.3～2.5(m，1H，C10-H)；2.6～3.0(m，6H，C17-NH-CH2-CH2-CH2-NH-CH2-)；3.177(s，3H，C12-OCH3)；3.281(s，3H，C6-OCH3)；3.5～3.9(m，4H，C11-H，C12-H，核苷側(cè)鏈O-CH2-CH2-NH-)；4.4～4.6(m，1H，C6-H)；4.883(s，1H，C7-H)；4.9～5.1(m，2H，核苷側(cè)鏈N-CH2-O)；5.9～6.3(m，2H，C9-H，C5-H)；6.5～6.7(m，1H，C4-H)；6.7～6.8(m，1H，C3-H)；7.172(s，1H，C19-H)；7.604(s，1H，鳥嘌呤C7-H)。
MS(FAB)m/z＝812(M+)實(shí)施例28測定化合物抗單純皰疹病毒1型(VR733株)病毒活性的實(shí)驗(yàn)方法在長滿VERO細(xì)胞的培養(yǎng)瓶內(nèi)加入0.25％胰酶0.1ml，0.02％EDTA 5ml。于37℃消化20～25分鐘。廢棄消化液，加培養(yǎng)液吹打。1∶3傳代，3天長滿。配制成每毫升20～30萬個(gè)細(xì)胞，接種到96孔細(xì)胞培養(yǎng)板，每孔0.1ml。于37℃，5％CO2條件下培養(yǎng)24小時(shí)，細(xì)胞長成單層后進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。
取20～30萬個(gè)VERO細(xì)胞每毫升的細(xì)胞培養(yǎng)液接種96孔細(xì)胞培養(yǎng)板，每孔0.1ml。于37℃，5％CO2條件下培養(yǎng)24小時(shí)。棄去培養(yǎng)液，加入適量HSV-1病毒，吸附1小時(shí)后，棄去病毒液。加入測試藥物，每濃度2孔。于37℃，5％CO2條件下培養(yǎng)。48小時(shí)后觀察細(xì)胞病變。按下式計(jì)算藥物抑制病毒的半數(shù)有效濃度(IC50)，結(jié)果見表1。
IC50=Antilog(A+50-AB-A×C)]]>A＝log(病變＜50％的藥物濃度)B＝log(病變＞50％的藥物濃度)C＝log(稀釋倍數(shù))實(shí)施例29測定化合物抗單純皰疹病毒2型(SAV株)活性的實(shí)驗(yàn)方法按實(shí)施例28類似的方法測定化合物抗HSV-2病毒IC50值，結(jié)果見表1。
實(shí)施例30抗HBV病毒活性的測定采用細(xì)胞培養(yǎng)法，測定了本發(fā)明化合物在體外對(duì)乙肝病毒和HIV病毒復(fù)制的影響?？挂腋尾《净钚匝芯恐?，樣品細(xì)胞毒性試驗(yàn)方法為將試驗(yàn)細(xì)胞配制成每毫升10萬個(gè)細(xì)胞接種細(xì)胞培養(yǎng)板，96孔板每孔100μl，37℃ 5％CO2培養(yǎng)24小時(shí)，細(xì)胞長成單層后進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。目標(biāo)化合物和對(duì)照藥用培養(yǎng)液配制成所需濃度后加入96孔細(xì)胞培養(yǎng)板，每濃度4孔，每4天換同濃度藥液一次，同時(shí)設(shè)無藥物細(xì)胞對(duì)照組。以觀察細(xì)胞病變?yōu)橹笜?biāo)，8天顯微鏡下觀察細(xì)胞病變程度。樣品抑制肝炎病毒活性試驗(yàn)方法為每毫升10萬個(gè)試驗(yàn)細(xì)胞接種96孔細(xì)胞培養(yǎng)板，每孔100μl，37℃ 5％CO2培養(yǎng)24小時(shí)，加入藥物，同時(shí)設(shè)細(xì)胞對(duì)照組，4天換原濃度藥液或?qū)φ张囵B(yǎng)液一次。細(xì)胞裂解后按分子克隆實(shí)驗(yàn)技術(shù)方法提取HBVDNA。各樣品斑點(diǎn)雜交、放射自顯影、測量各雜交點(diǎn)的A值后，利用標(biāo)準(zhǔn)曲線的回歸方程計(jì)算細(xì)胞對(duì)照及給藥組的HBV DNA含量后，計(jì)算半數(shù)有效濃度(IC50)，結(jié)果見表1。
實(shí)施例31藥物抑制HIV-1活性測定在96孔細(xì)胞培養(yǎng)中加入8個(gè)不同稀釋濃度的藥液和陽性對(duì)照藥液，每個(gè)稀釋度重復(fù)2孔，設(shè)細(xì)胞對(duì)照；再將2×105細(xì)胞/ml 100μl接種于含藥96孔細(xì)胞培養(yǎng)板內(nèi)。置37℃、5％CO2和飽和濕度培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)，每天觀察細(xì)胞病變。按HIV-1P24抗原試劑盒提供的操作步驟，測定加藥后第4天(96小時(shí))細(xì)胞培養(yǎng)上清HIV-1 P24抗原含量，計(jì)算藥物半數(shù)有效濃度(IC50)，結(jié)果見表1。
實(shí)施例32測定化合物抗Cox B3病毒活性的實(shí)驗(yàn)方法按實(shí)施例28類似的方法測定化合物抗Cox B3型病毒IC50值，結(jié)果見表1。
實(shí)施例33測定化合物抗Cox B6病毒活件的實(shí)驗(yàn)方法按實(shí)施例28類似的方法測定化合物抗Cox B6型病毒IC50值，結(jié)果見表1。
實(shí)施例34測定化合物抗VSV病毒活性的實(shí)驗(yàn)方法按實(shí)施例28類似的方法測定化合物抗VSV病毒IC50值，結(jié)果見表1。
權(quán)利要求
1.一組連有核苷堿基的格爾德霉素衍生物，其結(jié)構(gòu)如式(I)所示 其中Linker為含有3-20個(gè)碳的直鏈或支鏈、飽和或不飽和、脂肪性或芳香性、不含或含有醚鍵或酯鍵或酰胺鍵的聯(lián)結(jié)部分；R為腺苷、鳥苷、胞苷、尿苷等核苷及其結(jié)構(gòu)類似物，或腺嘌呤、鳥嘌呤、胞嘧啶或尿嘧啶等核苷堿基，以及帶有取代基R1的上述官能團(tuán)；R1為含有1-8個(gè)碳原子的烴基、烴氧基，鹵素，巰基。
2.一種制備權(quán)利要求1所述式(I)化合物的方法，其反應(yīng)式如下 其中，X為羧基、羥基、氨基或鹵素；R為核苷或R1取代的核苷；M為羥基、巰基、氨基；Y代表酯鍵、酰胺鍵、醚鍵、硫醚鍵及亞胺鍵；n＝0～20；具體反應(yīng)步驟為A、利用Boc2O對(duì)起始化合物a的伯氨基進(jìn)行保護(hù)，得到Boc保護(hù)的相應(yīng)產(chǎn)物b；B、化合物b再與核苷或取代核苷R-M的活潑羥基、胺基或巰基進(jìn)行縮合，形成酯鍵、酰胺鍵、醚鍵、硫醚鍵及亞胺鍵，實(shí)現(xiàn)核苷部分與Linker的連接，得到化合物c；C、在三氟醋酸的作用下，化合物c脫去Boc保護(hù)基，得到帶有游離氨基的化合物d；D、化合物d在堿性條件下，與格爾德霉素發(fā)生親核取代反應(yīng)，得到目標(biāo)化合物(I)。
3.權(quán)利要求1所述化合物的藥物組合物，可以含有治療有效量的上述化合物為活性成分，并含有一種或多種藥學(xué)上可接受的載體。
4.權(quán)利要求1所述化合物及其藥物組合物在制備抗病毒或抗腫瘤藥物中的應(yīng)用。
5.權(quán)利要求1所述化合物的各種劑型可以按照藥學(xué)領(lǐng)域的常規(guī)生產(chǎn)方法制備，如使活性成分與一種或多種載體混合，然后將其制成所需的劑型。
6.權(quán)利要求1所述化合物的藥物組合物優(yōu)選含有重量比為0.1％-99.5％的活性成分，最優(yōu)選含有重量比為0.5％-99.5％的活性成分。
全文摘要
本發(fā)明涉及一組連有核苷堿基的格爾德霉素衍生物，它是通過在格爾德霉素分子中引入水溶性強(qiáng)的核苷堿基，保留或增強(qiáng)格爾德霉素原有抗病毒活性的同時(shí)，通過改善其水溶性及組織分布等藥代動(dòng)力學(xué)性質(zhì)，以獲得具有較小毒性和較高療效的新型化合物，其中，核苷堿基與格爾德霉素之間以帶有氨基的鏈狀結(jié)構(gòu)部分(稱為Linker)相連接。
文檔編號(hào)A61P31/00GK1817866SQ20061006523
公開日2006年8月16日 申請(qǐng)日期2006年3月21日 優(yōu)先權(quán)日2006年3月21日
發(fā)明者李卓榮, 陶佩珍, 山廣志, 李玉環(huán) 申請(qǐng)人:中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院醫(yī)藥生物技術(shù)研究所