專利名稱：一種治療血管性癡呆癥的中藥組合物及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及到一種用于治療血管性癡呆癥的中藥組合物及其制備方法，屬于中草藥制劑技術(shù)領(lǐng)域。臨床上主要用于治療血管性癡呆，證屬瘀血阻絡(luò)、痰濁閉竅型。癥見智能減退、頭痛，口唇爪甲青紫，頭重如裹，納呆腹脹，神情默默，面色晦暗，肌膚干燥，肢體困重，舌質(zhì)紫暗或有瘀斑瘀點(diǎn)，苔膩，脈滑或沉遲、澀。

背景技術(shù)：
血管性癡呆(Vascular Dementiva，VD)是由各種腦血管病所導(dǎo)致的癡呆綜合征。屬于中醫(yī)“呆病”、“文癡”、“健忘”等范疇。在我國，由于腦血管病的多發(fā)，使得VD成為高發(fā)疾病之一。大多數(shù)的資料表明，VD的發(fā)病率為70萬人/年，日本報(bào)道的患病率較歐美高。在中國，對VD患病率的多少報(bào)道不一，綜合11個(gè)城市和農(nóng)村的普查，60歲以上的老年人中，VD的患病率為342/10萬人口，其在城市和農(nóng)村的患病率分別為478/10萬和140/10萬，城市的患病率明顯高于農(nóng)村。據(jù)流行病學(xué)調(diào)查表明[i]，65歲以上人群VD發(fā)病率約為4％～6％，80歲以上則為15％～20％。由于其發(fā)病率、致殘率、病死率均較高，故已成為威脅高齡人群生命的重要疾病之一，并給社會和家庭帶來沉重負(fù)擔(dān)。因此，探索VD早期防治措施已成為現(xiàn)代科學(xué)研究及臨床實(shí)踐的重要課題。
迄今為止，對VD的核心癥狀即智能低下尚沒有較好的解決辦法。西醫(yī)對血管性癡呆患者的治療以改善大腦血液循環(huán)、促進(jìn)大腦代謝、增強(qiáng)神經(jīng)傳遞功能為主要途徑?？傮w而言，這些藥物對輕度癡呆患者能在一定程度上改善癡呆癥狀或延緩癡呆進(jìn)展，但收效并不明顯。中醫(yī)在VD的治療中顯示了良好的前景，其療效與目前的西藥相比具有一定優(yōu)勢。因此，探討中醫(yī)藥治療方法及其藥物對血管性癡呆影響的機(jī)制，將為血管性癡呆的有效防治提供必要的理論依據(jù)。
中醫(yī)藥對血管性癡呆的防治有悠久的歷史。中藥黃蒲清腦膠囊正是依據(jù)中醫(yī)藥理論，通過對血管性癡呆病機(jī)的深入探討，針對血管性癡呆臨床表現(xiàn)，提出血管性癡呆的瘀血阻絡(luò)、痰濁閉竅的病機(jī)特點(diǎn)，以活血通絡(luò)，化痰開竅為治療法則，結(jié)合多年臨床用藥經(jīng)驗(yàn)研制而成，旨在為血管性癡呆患者提供療效確切、服用安全的中藥新制劑。


發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一種療效顯著的治療血管性癡呆癥的中藥組合物及其制備方法。
血管性癡呆屬現(xiàn)代醫(yī)學(xué)之病名，中醫(yī)文獻(xiàn)將它稱之為“白癡”、“愚癡”、“呆病”、“神呆”、“癡呆”、“武癡”等，它包括現(xiàn)代醫(yī)學(xué)的老年性癡呆、腦血管性癡呆和混合性癡呆。
歷代醫(yī)家對本病的病因病機(jī)多有論述，認(rèn)識到本病病位在腦，并認(rèn)為腎虛、肝郁、痰濁、瘀血、血虛為導(dǎo)致癡呆的原因，而且還認(rèn)識到本病和中風(fēng)有關(guān)系。近年來，現(xiàn)代醫(yī)家結(jié)合各自的經(jīng)驗(yàn)體會和現(xiàn)代研究成果，進(jìn)一步完善了本病的病因病機(jī)內(nèi)容。VD病位在腦，涉及肝腎心脾諸臟，尤與腎中精氣的盛衰密切相關(guān)；多因年高正損、情志內(nèi)傷等因素引起臟腑陰陽氣血失調(diào)，以致痰瘀濁毒阻絡(luò)蒙竅，造成腦絡(luò)閉塞、神機(jī)失用而發(fā)??；本病病性為本虛標(biāo)實(shí)，其本為精氣虧虛，其標(biāo)為痰瘀濁毒內(nèi)阻。
綜上所述，瘀血阻絡(luò)、痰濁閉竅是本病證的基本病機(jī)。瘀血阻于腦絡(luò)，蒙蔽神明則智能減退、神情默默。瘀血阻滯脈道，“不通則痛”，故頭痛如刺，口唇爪甲青紫。血瘀不行，肌膚氣血不充，失于濡養(yǎng)，所以見面色晦暗，肌膚干燥。痰濁上蒙清竅，清陽不展，故頭重如裹，痰濁中阻，氣機(jī)不利，則納呆腹脹，脘悶不饑，痰濁阻滯于四肢，則肢體困重。舌質(zhì)紫暗或有瘀斑瘀點(diǎn)，苔膩，脈滑或沉遲、澀。亦是血瘀痰濁閉阻腦竅所致。故本病證應(yīng)以活血通絡(luò)為主、輔以豁痰開竅，使瘀血得行，痰濁得化，達(dá)開竅醒神之目的。
該中藥組合物，以姜黃為君藥，臣以三七、石菖蒲，以水蛭、茯苓、人參、白芍、制何首烏、豨薟草、黃連為佐藥，以遠(yuǎn)志為使藥，諸藥合用，活血祛瘀，開竅豁痰，醒神益智，使瘀血得行，痰濁得化，達(dá)開竅醒神之目的。
本處方有較好的臨床基礎(chǔ)，并經(jīng)過了大量患者的臨床觀察初步證明了其療效和安全性。目前運(yùn)用于醫(yī)藥市場的治療血管性癡呆的中藥準(zhǔn)字號藥品很少，中藥黃蒲清腦膠囊，正是依據(jù)中醫(yī)藥理論，結(jié)合多年臨床用藥經(jīng)驗(yàn)而研制的，旨在為血管性癡呆患者提供療效確切、服用安全的中藥新制劑。故相信本產(chǎn)品如開發(fā)成功，投放市場，必將為血管性癡呆患者的健康做出重要貢獻(xiàn)。
本發(fā)明藥物是由如下重量份比例的原料藥制成的 姜黃300-450份石菖蒲250-350份三七100-150份豨薟草200-300份 人參150-220份制何首烏150-220份 水蛭100-150份黃連150-220份 白芍200-300份茯苓150-220份 遠(yuǎn)志250-350份 上述原料藥的重量份比例優(yōu)選 姜黃375份石菖蒲312.5份 三七125份豨薟草250份 人參187.5份 制何首烏187.5份水蛭125份黃連187.5份 白芍250份茯苓187.5份遠(yuǎn)志312.5份 或 姜黃300份石菖蒲250份三七125份豨薟草300份 人參187.5份 制何首烏215份 水蛭100份黃連220份 白芍200份茯苓180份 遠(yuǎn)志350份 或 姜黃450份石菖蒲350份三七100份豨薟草300份 人參150份制何首烏150份 水蛭150份黃連180份 白芍300份茯苓155份 遠(yuǎn)志250份 本發(fā)明藥物可以按常規(guī)的制劑工藝制成藥劑學(xué)可接受的任意常規(guī)劑型，例如膠囊、片劑、丸劑、口服液等。
本發(fā)明藥物可通過以下制備方法制成 1)、取方中藥材，分別選凈，粗碎成5-10mm顆粒，按處方量稱量。
2)、取姜黃，加8-12倍量70-90％乙醇，加熱回流提取1-3次，第一次2-3小時(shí)，第二次1-2小時(shí)，提取液濾過，合并，減壓回收乙醇后，適當(dāng)濃縮成相對密度約為1.0-1.2(60℃熱測)，備用。
3)、取三七、豨薟草、制何首烏、黃連，加8-10倍量50-70％乙醇，加熱回流提取1-3次，每次2-3小時(shí)，提取液過濾，合并，減壓回收乙醇，濃縮成相對密度約為1.0-1.2(60℃熱測)，備用。
4)、取石菖蒲，加8-12倍量水，浸泡30-60分鐘后，提取揮發(fā)油4-8小時(shí)，揮發(fā)油另器收集，水提取液過濾，備用。
5)、取水蛭、白芍、茯苓、遠(yuǎn)志，加8-10倍量水，煎煮2-3次，每次1-2小時(shí)，提取液過濾，合并，加入石菖蒲提油后的水溶液，濃縮成相對密度為1.10-1.15(60℃熱測)清膏，與姜黃、三七等提取液合并，混勻，放入真空干燥箱，在溫度60-70℃，真空度0.04-0.06Mpa條件下減壓干燥，干膏粉碎成100目粉，備用。
6)、取人參，粉碎成100目粉，備用。
7)、取5)和6)制備的粉末，加適量輔料，按常規(guī)制劑方法，制成膠囊劑。
或者 將5)、6)制備的細(xì)粉，按常規(guī)制劑方法制成片劑、丸劑； 或 將2)、3)、4)、5)中制備的提取物，加入6)中所得的顆粒細(xì)粉，按常規(guī)方法制成口服液。

具體實(shí)施例方式 下面結(jié)合本發(fā)明藥物膠囊劑、片劑、丸劑和口服液的制備的實(shí)例，說明本發(fā)明的具體實(shí)施方式
。
實(shí)施例1 姜黃375份 石菖蒲312.5份三七125份豨薟草250份 人參187.5份制何首烏187.5份 水蛭125份黃連187.5份 白芍250份 茯苓187.5份 遠(yuǎn)志312.5份 制備方法 1)、取方中藥材，分別選凈，粗碎成5-10mm顆粒，按處方量稱量。
2)、取姜黃，加10倍量80％乙醇，加熱回流提取2次，第一次2小時(shí)，第二次1.5小時(shí)，提取液濾過，合并，減壓回收乙醇后，適當(dāng)濃縮成相對密度約為1.0(60℃熱測)，備用。
3)、取三七、豨薟草、制何首烏、黃連，加8倍量60％乙醇，加熱回流提取2次，每次2小時(shí)，提取液過濾，合并，減壓回收乙醇，濃縮成相對密度約為1.0(60℃熱測)，備用。
4)、取石菖蒲，加12倍量水，浸泡45分鐘后，提取揮發(fā)油5小時(shí)，揮發(fā)油另器收集，出油率不得少于0.4％，水提取液過濾，備用。
5)、取水蛭、白芍、茯苓、遠(yuǎn)志，加8倍量水，煎煮2次，每次1.5小時(shí)，提取液過濾，合并，加入石菖蒲提油后的水溶液，濃縮成相對密度為1.10-1.15(60℃熱測)清膏，與姜黃、三七等提取液合并，混勻，放入真空干燥箱，在溫度60-70℃，真空度0.04-0.06Mpa條件下減壓干燥，干膏粉碎成100目粉，備用。
6)、取人參，粉碎成100目粉，備用。
7)、取5)和6)制備的粉末，加適量輔料，按常規(guī)制劑方法，制成膠囊劑。
實(shí)施例2 姜黃300份 石菖蒲250份 三七125份豨薟草300份 人參187.5份制何首烏215份 水蛭100份黃連220份 白芍200份 茯苓180份 遠(yuǎn)志350份 制備方法同實(shí)施例1中1)、2)、3)、4)、5)、6)步驟并按常規(guī)方法制成片劑。
實(shí)施例3 姜黃450份 石菖蒲350份 三七100份豨薟草300份 人參150份 制何首烏150份 水蛭150份黃連180份 白芍300份 茯苓155份 遠(yuǎn)志250份 制備方法同實(shí)施例1中1)、2)、3)、4)、5)、6)步驟并按常規(guī)方法制成丸劑。
實(shí)施例4 姜黃300份 石菖蒲350份 三七125份豨薟草200份 人參220份 制何首烏220份水蛭125份黃連150份 白芍250份 茯苓220份遠(yuǎn)志300份 制備方法同實(shí)施例1中1)、2)、3)、4)、5)步驟，加入6)中所得的顆粒細(xì)粉，按常規(guī)方法制成口服液。
藥理作用 本發(fā)明的藥物其膠囊劑(商品名為黃蒲清腦膠囊)進(jìn)行了下列動物試驗(yàn)以證明其療效 黃蒲清腦膠囊主要藥效學(xué)試驗(yàn) 摘要黃蒲清腦膠囊是河北天時(shí)醫(yī)藥技術(shù)開發(fā)有限公司開發(fā)的6類中藥新藥，功能活血通絡(luò)，豁痰開竅。用于治療血管性癡呆，證屬瘀血阻絡(luò)、痰濁閉竅型。癥見智能減退、頭痛，口唇爪甲青紫，頭重如裹，納呆腹脹，神情默默，面色晦暗，肌膚干燥，肢體困重。為證明該藥療效，我們進(jìn)行了藥效學(xué)試驗(yàn)，主要藥效學(xué)試驗(yàn)結(jié)果表明黃蒲清腦膠囊(0.28g/kg、0.56g/kg、1.12g/kg)可明顯提高雙側(cè)頸總動脈永久性結(jié)扎致血管性癡呆大鼠學(xué)習(xí)能力，提高血清及腦組織中SOD活力、降低MDA含量，增加腦皮層組織中的NE、DA含量；對腎上腺素加冰水引起的血瘀大鼠全血比粘度的升高有降低作用；可明顯改善局灶性腦缺血大鼠的神經(jīng)癥狀，縮小梗塞范圍，減輕局部腦缺血所致腦組織損傷。黃蒲清腦膠囊(0.36g/kg、0.72g/kg、1.44g/kg)可明顯改善腦缺血再灌注致小鼠記憶障礙，提高血清及腦組織中SOD、總NOS活力，降低MDA含量，抑制TChE活力；改善D-半乳糖致衰老小鼠的學(xué)習(xí)能力，提高血清及腦組織中SOD活力、降低MDA含量；可明顯改善東莨菪堿致小鼠記憶獲得障礙；明顯改善亞硝酸鈉致小鼠記憶鞏固障礙；明顯改善乙醇引起的記憶再現(xiàn)障礙；可延長小鼠斷頭后張口時(shí)間，對小鼠急性腦缺氧有一定的保護(hù)作用。研究結(jié)果為臨床用藥提供了必要的藥理學(xué)依據(jù)。
一、對雙側(cè)頸總動脈永久性結(jié)扎致血管性癡呆大鼠的影響 試驗(yàn)?zāi)康耐ㄟ^觀察黃蒲清腦膠囊對雙側(cè)頸總動脈永久性結(jié)扎致血管性癡呆大鼠的影響，評價(jià)其治療作用。
試驗(yàn)材料 藥物黃蒲清腦膠囊干粉(6.1g生藥/g干粉)，河北天時(shí)醫(yī)藥技術(shù)開發(fā)有限公司提供，批號041001；喜得鎮(zhèn)(甲磺酸雙氫麥角毒堿片)，天津華津制藥廠、北京諾華制藥有限公司合作生產(chǎn)，批號020632。
動物SD大鼠(二級)，體重180--200g，雄性，由河北省實(shí)驗(yàn)動物中心提供，許可證號為SCXK(冀)2003-1-003，動物飼料亦由該中心提供。
試劑超氧化物歧化酶(SOD)測試盒、丙二醛(MDA測)試盒，均為南京建成生物工程研究所產(chǎn)品；去甲腎上腺素(NE)、多巴胺(DA)、5-羥色胺(5-TH)標(biāo)準(zhǔn)品均由中國生物藥品制品檢定所提供。
儀器DTT-2避暗箱，中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院藥研所制；970MC熒光分光光度計(jì)，上海分析儀器總廠。
試驗(yàn)方法 參照趙憲林等雙側(cè)頸總動脈永久性結(jié)扎致血管性癡呆大鼠模型1。大鼠術(shù)前12小時(shí)禁食不禁水。用10％的水合氯醛350mg/kg腹腔注射麻醉，保證手術(shù)期間有自主呼吸。仰臥固定，頸前部去毛消毒后沿頸正中切開分離出雙側(cè)頸總動脈，雙側(cè)絲線結(jié)扎，術(shù)中大鼠肛溫保持在36.5℃～37.5℃。假手術(shù)組10只大鼠僅行頸前切開，不結(jié)扎頸總動脈。選手術(shù)成功后大鼠75只隨機(jī)分5組，每組15只，分別為模型對照組、黃蒲清腦膠囊小劑量組(0.28g/kg，折合生藥1.71g/kg，相當(dāng)于人臨床用量的3.5倍)、 黃蒲清腦膠囊中劑量組(0.56g/kg，折合生藥3.42g/kg，相當(dāng)于人臨床用量的7倍)、黃蒲清腦膠囊高劑量組(1.12g/kg，折合生藥6.83g/kg，相當(dāng)于人臨床用量的14倍)及陽性藥喜得鎮(zhèn)組(1.2mg/kg，相當(dāng)于人臨床用量的14倍)。給藥組大鼠每天灌胃給藥1次，容量為1ml/100g體重，假手術(shù)組及模型對照組大鼠給予等容量蒸餾水，連續(xù)60天。各組大鼠分別于手術(shù)后30天、45天、60天進(jìn)行避暗試驗(yàn)，測試其學(xué)習(xí)能力。測試時(shí)先將大鼠頭部背對洞口放入明室，大鼠進(jìn)入暗室受到電擊為錯誤反應(yīng)，記錄5min內(nèi)大鼠進(jìn)入暗室內(nèi)的潛伏期和錯誤次數(shù)。第60天測試完畢后，將大鼠斷頭取血，分離血清，3000rpm，4℃離心10min，取血清按說明書方法檢測MDA、SOD含量；各組動物快速斷頭取腦，在冰盤上立即分離大腦皮層組織，液氮冷凍，置-80℃冰箱中備用。定量稱取大腦皮層組織制成1％勻漿，取上清液按說明書方法檢測腦組織MDA、SOD等含量，組織蛋白含量測定按Lowry方法進(jìn)行。取大腦皮層組織加冷酸化正丁醇5ml勻漿，漩渦振蕩，3000r/min離心5min。取上清液2.0ml，加正庚烷4.0ml，0.1mol/L HCL5.0ml，漩渦振蕩，3000r/min離心5min。其水相測NE、DA、5-TH。
統(tǒng)計(jì)學(xué)處理數(shù)據(jù)用

表示，統(tǒng)計(jì)學(xué)處理采用spss11.0 for window統(tǒng)計(jì)軟件。
試驗(yàn)結(jié)果 1.對雙側(cè)頸總動脈永久性結(jié)扎致血管性癡呆大鼠一般狀況的影響 在整個(gè)試驗(yàn)期內(nèi)，假手術(shù)組10只大鼠，活動及精神狀態(tài)良好，毛色光滑；模型對照組大鼠多出現(xiàn)眼瞼下垂，活動減少，精神狀態(tài)較差，術(shù)后24小時(shí)死亡4只，試驗(yàn)過程中死亡3只，共有7只死亡；其余各給藥組大鼠一般狀況均較模型對照組大鼠有明顯改善，術(shù)后24小時(shí)各有5只死亡，試驗(yàn)過程中均無一死亡。
2.對雙側(cè)頸總動脈永久性結(jié)扎致血管性癡呆大鼠學(xué)習(xí)能力的影響 結(jié)果見表1、表2，從結(jié)果可見，模型對照組大鼠在術(shù)后30天、45天、60天不同時(shí)間點(diǎn)潛伏期明顯短于假手術(shù)組(P＜0.01)，而5min錯誤次數(shù)明顯高于假手術(shù)組(P＜0.01)，說明大鼠持久性前腦灌注不足已致學(xué)習(xí)記憶障礙。黃蒲清腦膠囊(0.28g/kg、0.56g/kg、1.12g/kg)組大鼠在術(shù)后30天、45天、60天不同時(shí)間點(diǎn)學(xué)習(xí)記憶潛伏期明顯長于模型對照組(P＜0.01)，而5min錯誤次數(shù)少于模型對照組(P＜0.01)，表明其對慢性腦灌注不足大鼠學(xué)習(xí)記憶下降有改善作用。
表1 對血管癡呆大鼠學(xué)習(xí)能力的影響(避暗法)
注與模型對照組比較*p＜0.05；**p＜0.01 表2 對血管癡呆大鼠學(xué)習(xí)能力的影響(避暗法)
注與模型對照組比較*p＜0.05；**p＜0.01 3.對雙側(cè)頸總動脈永久性結(jié)扎致血管性癡呆大鼠血清SOD、MDA的影響 結(jié)果見表3，從結(jié)果可見，模型對照組大鼠血清MDA含量明顯明顯較假手術(shù)組升高(P＜0.01)，SOD活力明顯較假手術(shù)組明顯降低(P＜0.01)；黃蒲清腦膠囊(0.56g/kg)組大鼠MDA含量低于模型對照組，黃蒲清腦膠囊(0.28g/kg、0.56g/kg、1.12g/kg)組大鼠血清中SOD活力均明顯高于模型對照組(P＜0.01)。
表3 雙側(cè)頸總動脈永久性結(jié)扎致血管性癡呆血清SOD、MDA的影響
注與模型對照組比較*p＜0.05；**p＜0.01 4.對雙側(cè)頸總動脈永久性結(jié)扎致血管性癡呆大鼠腦組織SOD、MDA的影響 結(jié)果見表4，從結(jié)果可見，模型對照組大鼠腦組織SOD活力較假手術(shù)組明顯降低(P＜0.01)；MDA含量較假手術(shù)組明顯增高(P＜0.01)；黃蒲清腦膠囊(0.28g/kg、0.56g/kg、1.12g/kg)組大鼠腦組織SOD活力均明顯較模型對照組提高(P＜0.05或P＜0.01)，MDA含量均較模型對照組降低(P＜0.05或P＜0.01)。
表4 對雙側(cè)頸總動脈永久結(jié)扎致血管性癡呆大鼠腦組織SOD、MDA的影響
注與模型對照組比較*p＜0.05；**p＜0.01 5.黃蒲清腦膠囊對雙側(cè)頸總動脈永久性結(jié)扎致血管性癡呆大鼠大腦皮層中神經(jīng)遞質(zhì)的影響 結(jié)果見表5，從結(jié)果可見，模型對照組大鼠大腦皮層組織中NE、DA與假手術(shù)組相比明顯降低(P＜0.01)；黃蒲清腦膠囊(0.28g/kg、0.56g/kg、1.12g/kg)組大鼠腦組織中的NE、DA含量均較模型對照組明顯增高(P＜0.05或P＜0.01)，而5-TH雖有增高趨勢，但無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。
表5 對雙側(cè)頸總動脈永久結(jié)扎大鼠腦神經(jīng)遞質(zhì)的影響
與模型對照組比較*P＜0.05，**P＜0.01；各組動物數(shù)同上。
結(jié)論本試驗(yàn)結(jié)果表明黃蒲清腦膠囊對雙側(cè)頸總動脈永久性結(jié)扎致血管性癡呆大鼠的學(xué)習(xí)記憶能力障礙有一定的改善作用，可提高血清及腦組織SOD活力，降低MDA含量，增加大腦皮層組織中NE、DA的含量。
二、對腦缺血再灌注損傷致血管性癡呆小鼠的影響 試驗(yàn)?zāi)康耐ㄟ^觀察黃蒲清腦膠囊對腦缺血再灌注損傷性血管性癡呆小鼠的影響，評價(jià)其治療作用。
試驗(yàn)材料 藥物黃蒲清腦膠囊干粉(6.1g生藥/g干粉)，河北天時(shí)醫(yī)藥技術(shù)開發(fā)有限公司提供，批號041001；喜得鎮(zhèn)(甲磺酸雙氫麥角毒堿片)，天津華津制藥廠、北京諾華制藥有限公司合作生產(chǎn)，批號020632。
動物昆明種小鼠(二級)，體重25--28g，雄性，由河北省實(shí)驗(yàn)動物中心提供，許可證號為SCXK(冀)2003-1-003，動物飼料亦由該中心提供。
試劑超氧化物歧化酶(SOD)測試盒、丙二醛(MDA)測試盒、一氧化氮合酶測試盒、乙酰膽堿脂酶(TChE)測試盒，均為南京建成生物工程研究所產(chǎn)品。
儀器SMG-2程控水迷宮，中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院藥研所制；TDL-5-A型離心機(jī)，上海安亭科學(xué)儀器廠；FA2004型電子天平，上海精科天平儀器廠；722型光柵分光光度計(jì)，上海第三分析儀器廠。
試驗(yàn)方法 參照徐秋萍等制作腦缺血再灌注致小鼠血管性癡呆模型的方法2。選健康雄性小鼠，術(shù)前先進(jìn)行Morris水迷宮試驗(yàn)訓(xùn)練，水迷宮含4個(gè)盲端，終點(diǎn)有一高出水面的安全區(qū)。訓(xùn)練分3天進(jìn)行，條件控制在室溫(22±2)℃，水溫(25±1)℃。訓(xùn)練時(shí)先將小鼠置于臺階上10秒鐘，使其了解此安全區(qū)的存在，然后放在臺階附近，讓其自行爬梯2次，以熟悉逃生途徑。第1天訓(xùn)練A點(diǎn)，第2天訓(xùn)練B點(diǎn)，第3天訓(xùn)練C點(diǎn)，每次訓(xùn)練時(shí)間均限定在3min，超時(shí)者用玻璃棒引導(dǎo)動物游到臺階按3min計(jì)。剔除靈活性過差的小鼠，選學(xué)會游迷宮的小鼠用于試驗(yàn)。術(shù)前12h將小鼠禁食，不禁水。用10％水合氯醛(350mg/kg)腹腔注射麻醉，仰臥固定在手術(shù)臺上，常規(guī)消毒，頸部正中切口，分離出雙側(cè)頸總動脈(CCA)，在夾閉雙側(cè)CCA之前，從小鼠尾尖約1cm處斷尾放血約0.3ml(為循環(huán)血量的30％)，隨即用無創(chuàng)動脈夾夾閉雙側(cè)CCA，20min后，再通10min，再夾閉20min，再通后縫合傷口，放回籠中保溫飼養(yǎng)。假手術(shù)組動物僅行頸前切開，不阻斷CCA，不放血。術(shù)中小鼠肛溫保持在36.5℃～37.5℃。選手術(shù)成功的小鼠50只，隨機(jī)分為5組，每組10只。分別為模型對照組、黃蒲清腦膠囊低劑量組(0.36g/kg，折合生藥2.20g/kg，相當(dāng)于人臨床用量的4.5倍)、黃蒲清腦膠囊中劑量組(0.72g/kg，折合生藥4.39g/kg，相當(dāng)于人臨床用量的9倍)、黃蒲清腦膠囊高劑量組(1.44g/kg，折合生藥8.78g/kg，相當(dāng)于人臨床用量的18倍)及陽性藥喜得鎮(zhèn)組(1.5mg/kg，相當(dāng)于人臨床用量的18倍)。給藥組每天灌胃給藥，容量為0.2ml/10g體重，假手術(shù)組及模型對照組小鼠每天給予等容量蒸餾水，每日一次，手術(shù)后7天、14天開始Morris水迷宮測試，記錄到達(dá)終點(diǎn)的時(shí)間(到達(dá)時(shí)間)和進(jìn)入盲端的次數(shù)(錯誤次數(shù))。測試完畢后，斷頭取血，分離血清，3000rpm，4℃離心10min，取血清按說明書方法檢測MDA、SOD等含量各組動物快速斷頭取腦，在冰盤上立即分離大腦皮層組織，置-80℃冰箱中備用。定量稱取大腦皮層組織制成1％勻漿，取上清液按說明書方法檢測腦組織MDA含量和SOD、NOS、TChE活力，組織蛋白含量測定按Lowry方法進(jìn)行。
統(tǒng)計(jì)學(xué)處理數(shù)據(jù)用

表示，統(tǒng)計(jì)學(xué)處理采用spss11.0 for window統(tǒng)計(jì)軟件。
試驗(yàn)結(jié)果 1.對腦缺血再灌注癡呆小鼠記憶障礙的影響 結(jié)果見表6、表7，從結(jié)果可見，模型對照組小鼠在術(shù)后第7天、第14天到達(dá)時(shí)間明顯較假手術(shù)組延長(P＜0.01)，進(jìn)入盲端的錯誤次數(shù)明顯增加(P＜0.01)。黃蒲清腦膠囊(0.36g/kg、0.72g/kg、1.44g/kg)組小鼠在術(shù)后第7天、第14天到達(dá)時(shí)間明顯較模型對照組小鼠縮短(P＜0.01)，進(jìn)入盲端的錯誤次數(shù)明顯減少(P＜0.01)。
表6 對血管性癡呆小鼠記憶能力的影響(Morris水迷宮試驗(yàn))
與模型對照組比較*p＜0.05；**p＜0.01 表7 對血管性癡呆小鼠記憶能力的影響(Morris水迷宮試驗(yàn))
與模型對照組比較*p＜0.05；**p＜0.01 2.對腦缺血再灌注癡呆小鼠血清SOD、MDA的影響 結(jié)果見表8，從結(jié)果可見，模型對照組小鼠MDA含量明顯均較假手術(shù)組升高(P＜0.01)，血清SOD活力明顯較假手術(shù)組明顯降低(P＜0.01)；黃蒲清腦膠囊(0.36g/kg、0.72g/kg、1.44g/kg)組小鼠MDA含量均明顯低于模型對照組(P＜0.01)，血清SOD活力均明顯較模型對照組提高(P＜0.05)。
表8 對血管性癡呆小鼠血清SOD、MDA的影響
與模型對照組比較*P＜0.05，**P＜0.01 3.對腦缺血再灌注癡呆小鼠腦組織SOD、MDA的影響 結(jié)果見表9，從結(jié)果可見，模型對照組小鼠腦組織SOD活力較假手術(shù)組明顯降低(P＜0.01)；MDA含量較假手術(shù)組明顯增高(P＜0.05)；黃蒲清腦膠囊(0.36g/kg、0.72g/kg、1.44g/kg)組小鼠腦組織SOD活力均較模型對照組小鼠提高(P＜0.01)，MDA含量均較模型對照組降低(P＜0.01)。
表9 對血管性癡呆小鼠腦組織SOD、MDA的影響
與模型對照組比較*P＜0.05，**P＜0.01 4.對腦缺血再灌注癡呆小鼠腦組織NOS、TChE活力的影響 結(jié)果見表10，從結(jié)果可見，模型對照組小鼠腦組織NOS活力較假手術(shù)組明顯降低(P＜0.01)，TChE活力較假手術(shù)組明顯升高(P＜0.01)；黃蒲清腦膠囊(0.36g/kg、0.72g/kg、1.44g/kg)組小鼠腦組織NOS活力較模型對照組提高(P＜0.01)，TChE活力較模型對照組降低(P＜0.05或P＜0.01)。
表10 對血管性癡呆小鼠腦組織NOS、TChE的影響
與模型對照組比較*P＜0.05，**P＜0.01 結(jié)論本試驗(yàn)結(jié)果表明黃蒲清腦膠囊對腦缺血再灌注癡呆小鼠的學(xué)習(xí)記憶能力障礙有一定的改善作用，可提高血清及腦組織SOD活力，提高腦組織NOS活力，抑制TChE的活力，降低血清及腦組織MDA含量。
三、對D-半乳糖致衰老小鼠的影響 試驗(yàn)?zāi)康耐ㄟ^觀察黃蒲清腦膠囊對D-半乳糖致衰老小鼠的影響，評價(jià)其作用。
試驗(yàn)材料 藥物黃蒲清腦膠囊干粉(6.1g生藥/g干粉)，河北天時(shí)醫(yī)藥技術(shù)開發(fā)有限公司提供，批號041001；哈伯因(石杉堿甲片0.05mg/片)，河南竹林眾生制藥股份有限公司豫中制藥廠，批號050402。
動物昆明種小鼠(二級)，體重25-28g，雄性，由河北省實(shí)驗(yàn)動物中心提供，許可證號為SCXK(冀)2003-1-003，動物飼料亦由該中心提供。
試劑超氧化物歧化酶(SOD)測試盒、丙二醛(MDA測)試盒，均為南京建成生物工程研究所產(chǎn)品；D-半乳糖，上海試劑二廠產(chǎn)品。
儀器DT-200小鼠跳臺自動測試箱，成都泰盟科技有限公司；TDL-5-A型離心機(jī)，上海安亭科學(xué)儀器廠；FA2004型電子天平，上海精科天平儀器廠；722型光柵分光光度計(jì)，上海第三分析儀器廠。
試驗(yàn)方法 將60只小鼠隨機(jī)分成6組，每組10只，分別為正常對照組、模型對照組、黃蒲清腦膠囊低劑量組(0.36g/kg，折合生藥2.20g/kg，相當(dāng)于人臨床用量的4.5倍)、黃蒲清腦膠囊中劑量組(0.72g/kg，折合生藥4.39g/kg，相當(dāng)于人臨床用量的9倍)、黃蒲清腦膠囊高劑量組(1.44g/kg，折合生藥8.78g/kg，相當(dāng)于人臨床用量的18倍)及陽性藥哈伯因組(0.1mg/kg，相當(dāng)于人臨床用量的18倍)。給藥組每天灌胃給藥，容量為0.2ml/10g體重，正常對照組及模型對照組小鼠每天給予等容量蒸餾水，每日一次，同時(shí)頸背部Sc D-半乳糖120mg/kg，連續(xù)6周3。分別于實(shí)驗(yàn)的第2周、第4周、第6周進(jìn)行跳臺試驗(yàn)測試其學(xué)習(xí)能力，將小鼠放在跳臺儀內(nèi)的安全臺上適應(yīng)3min，然后接通電流，小鼠跳下跳臺即遭到電擊，為錯誤反應(yīng)，其正確反應(yīng)是受到電擊后跳上橡皮臺躲避電擊。記錄小鼠第1次跳下安全臺的時(shí)間(潛伏期)和5min內(nèi)錯誤次數(shù)。測試完畢后，將小鼠斷頭取血，分離血清，3000rpm，4℃離心10min，取血清按說明書方法檢測MDA、SOD含量；各組動物快速斷頭取腦，在冰盤上立即分離大腦皮層組織，置-80℃冰箱中備用。定量稱取大腦皮層組織制成1％勻漿，取上清液按說明書方法檢測腦組織MDA、SOD含量，組織蛋白含量測定按Lowry方法進(jìn)行。
統(tǒng)計(jì)學(xué)處理數(shù)據(jù)用

表示，統(tǒng)計(jì)學(xué)處理采用spss11.0for window統(tǒng)計(jì)軟件。
試驗(yàn)結(jié)果 1.對D-半乳糖致衰老小鼠學(xué)習(xí)能力的影響 結(jié)果見表11、表12，從結(jié)果可見，模型對照組小鼠在實(shí)驗(yàn)的第4周、第6周兩個(gè)時(shí)間點(diǎn)潛伏期明顯較正常對照組縮短(P＜0.01)，5min錯誤次數(shù)明顯多于正常對照組(P＜0.01)，說明小鼠皮下注射D-半乳糖120mg/kg已致學(xué)習(xí)記憶障礙。黃蒲清腦膠囊(0.36g/kg、0.72g/kg、1.44g/kg)組小鼠在實(shí)驗(yàn)的第4周、第6周兩個(gè)時(shí)間點(diǎn)潛伏期明顯較模型對照組小鼠延長(P＜0.05或P＜0.01)，5min錯誤次數(shù)明顯少于模型對照組(P＜0.05或P＜0.01)，表明其對小鼠學(xué)習(xí)記憶下降有改善作用。
表11 對D-半乳糖致衰老小鼠學(xué)習(xí)能力的影響(跳臺法)(

，n＝10) 注與模型對照組比較*p＜0.05；**p＜0.01 表12 對D-半乳糖致衰老小鼠學(xué)習(xí)能力的影響(跳臺法)(

，n＝10) 注與模型對照組比較*p＜0.05；**p＜0.01 2.對D-半乳糖致衰老小鼠血清SOD、MDA含量的影響 結(jié)果見表13，從結(jié)果可見，模型對照組小鼠MDA含量明顯較正常對照組升高(P＜0.01)，血清SOD活力較正常對照組明顯降低(P＜0.01)；黃蒲清腦膠囊(0.36g/kg、0.72g/kg、1.44g/kg)組小鼠MDA含量均明顯低于模型對照組(P＜0.05或P＜0.01)，血清SOD活力均高于模型對照組(P＜0.05)。
表13 對D-半乳糖致衰老小鼠血清SOD、MDA的影響(

，n＝10) 與模型對照組比較*P＜0.05，**P＜0.01 3.對D-半乳糖致衰老小鼠腦組織SOD、MDA含量的影響 結(jié)果見表13，從結(jié)果可見，模型對照組小鼠腦組織SOD活力均較正常對照組明顯降低(P＜0.01)；MDA含量均較正常對照組明顯增高(P＜0.01)；黃蒲清腦膠囊(0.36g/kg、0.72g/kg、1.44g/kg)組小鼠腦組織SOD活力均較模型對照組提高(P＜0.01)，MDA含量均較模型對照組降低(P＜0.01)。
表14 對D-半乳糖致衰老小鼠腦組織SOD、MDA的影響(

，n＝10) 與模型對照組比較*P＜0.05，**P＜0.01 結(jié)論本試驗(yàn)結(jié)果表明黃蒲清腦膠囊對D-半乳糖致衰老小鼠的學(xué)習(xí)記憶能力障礙有一定的改善作用，可提高血清及腦組織SOD活力，降低MDA含量，糾正氧自由基代謝的紊亂，有一定的抗氧化作用。
四、對大鼠局灶性腦缺血的保護(hù)作用 試驗(yàn)?zāi)康耐ㄟ^觀察黃蒲清腦膠囊對大鼠局灶性腦缺血的影響，評價(jià)其防治作用。
試驗(yàn)材料 藥物黃蒲清腦膠囊干粉(6.1g生藥/g干粉)，河北天時(shí)醫(yī)藥技術(shù)開發(fā)有限公司提供，批號041001；喜得鎮(zhèn)(甲磺酸雙氫麥角毒堿片)，天津華津制藥廠、北京諾華制藥有限公司合作生產(chǎn)，批號020632。
動物SD大鼠(二級)，體重180--200g，雄性，由河北省實(shí)驗(yàn)動物中心提供，許可證號為SCXK(冀)2003-1-003，動物飼料亦由該中心提供。
試劑三氯化鐵，北京化學(xué)試劑公司，批號03227；紅四氮唑，北京化學(xué)試劑公司。
試驗(yàn)方法 將60只大鼠，隨機(jī)分為6組，每組10只，分別為假手術(shù)組、模型對照組、黃蒲清腦膠囊小劑量組(0.28g/kg，折合生藥1.71g/kg，相當(dāng)于人臨床用量的3.5倍)、黃蒲清腦膠囊中劑量組(0.56g/kg，折合生藥3.42g/kg，相當(dāng)于人臨床用量的7倍)、 黃蒲清腦膠囊高劑量組(1.12g/kg，折合生藥6.83g/kg，相當(dāng)于人臨床用量的14倍)及陽性藥喜得鎮(zhèn)組(1.2mg/kg，相當(dāng)于人臨床用量的14倍)。給藥組大鼠每天灌胃給藥1次，容量為lml/100g體重，假手術(shù)組、模型對照組大鼠給予等容量蒸餾水，連續(xù)7天。第6天給藥后2小時(shí)，分別將各組大鼠用水合氯醛麻醉(35mg/Kg，ip)，參照文獻(xiàn)方法[4]，在右眼和右耳之間的中點(diǎn)作一縱向1.5cm的切口，仔細(xì)分開顳肌，暴露顴突和顳骨，在顴突之頭端1-2mm處，用牙科鉆開一直徑為2mm的小孔，并暴露中動脈起始部位。用分針將腦膜挑開，將吸有50％三氯化鐵溶液10μl的定量濾紙條敷在此段大腦中動脈上，30分鐘后取下濾紙，再用0.9％生理鹽水清洗局部，縫合皮膚，放回籠中飼養(yǎng)。假手術(shù)組大鼠除不敷三氯化鐵溶液濾紙條外，其余手術(shù)步驟同模型對照組。術(shù)后繼續(xù)給藥1天，并分別在術(shù)后8小時(shí)、24小時(shí)，按Bederson等的方法改進(jìn)后進(jìn)行神經(jīng)癥狀評分[5]。評分標(biāo)準(zhǔn)①提鼠尾觀察前肢屈曲情況，如雙前肢對稱前伸，記為0分；如手術(shù)對側(cè)前肢出現(xiàn)肩屈曲、肘屈曲、肩內(nèi)旋或兼具，記為1分。②將大鼠置于平面上，分別推雙肩向?qū)?cè)移動，檢查阻力。如雙側(cè)阻力對等且有力記為0分；如手術(shù)對側(cè)阻力下降，記為1分。③將大鼠兩前肢置一金屬網(wǎng)上，觀察肌張力。如雙側(cè)肌張力對等且有力記為0分；如手術(shù)對側(cè)前肢肌張力下降，記為1分。④提鼠尾，動物有不停地向手術(shù)對側(cè)旋轉(zhuǎn)者，記為1分。根據(jù)以上評分標(biāo)準(zhǔn)，滿分為4分，分?jǐn)?shù)越高，動物的神經(jīng)癥狀越嚴(yán)重。24小時(shí)時(shí)間點(diǎn)評分后處死大鼠，剖取大腦，去掉嗅球和低位腦干，以均等間距冠狀切成五片，分別置入2％TTC溶液中染色。染色后非缺血區(qū)為玫瑰紅色，梗塞區(qū)為白色。將梗塞區(qū)腦組織仔細(xì)挖下，稱重。以梗塞組織重量與全腦重量的百分比作為腦梗塞范圍。
統(tǒng)計(jì)學(xué)處理數(shù)據(jù)用

表示，統(tǒng)計(jì)學(xué)處理采用spss11.0for window統(tǒng)計(jì)軟件。
試驗(yàn)結(jié)果 1.對局灶性腦缺血大鼠神經(jīng)癥狀的影響 結(jié)果見表15，從結(jié)果可見，模型對照組大鼠神經(jīng)癥狀嚴(yán)重，黃蒲清腦膠囊(0.28g/kg、0.56g/kg、1.12g/kg)組大鼠在術(shù)后8小時(shí)、24小時(shí)兩個(gè)時(shí)間點(diǎn)神經(jīng)癥狀均較模型對照組大鼠減輕，評分減低(P＜0.01)。
表15 對腦缺血大鼠神經(jīng)癥狀的影響
與模型對照組比較*p＜0.05；**p＜0.01 2.對局灶性腦缺血大鼠腦梗塞范圍的影響 結(jié)果見表16，從結(jié)果可見，黃蒲清腦膠囊(0.28g/kg、0.56g/kg、1.12g/kg)組大鼠梗塞組織重量與全腦重量的百分比均較模型對照組大鼠減小(P＜0.01)。。
表16 黃蒲清腦膠囊對大鼠實(shí)驗(yàn)性腦梗塞梗塞范圍的影響
注與模型對照組比較*p＜0.05；**p＜0.01 結(jié)論本試驗(yàn)結(jié)果表明黃蒲清腦膠囊(0.28g/kg、0.56g/kg、1.12g/kg)可明顯改善局灶性腦缺血大鼠的神經(jīng)癥狀，縮小梗塞范圍，減輕局部腦缺血所致腦組織損傷。
四、對東莨菪堿致小鼠記憶獲得障礙的影響 試驗(yàn)?zāi)康挠^察黃蒲清腦膠囊對東莨菪堿致小鼠記憶獲得障礙的影響。
試驗(yàn)材料 藥物黃蒲清腦膠囊干粉(6.1g生藥/g干粉)，河北天時(shí)醫(yī)藥技術(shù)開發(fā)有限公司提供，批號041001；哈伯因(石杉堿甲片0.05mg/片)，河南竹林眾生制藥股份有限公司豫中制藥廠，批號050402；氫溴酸東莨菪堿注射液(0.3mg)，上海禾豐制藥有限公司，批號20050206。
動物昆明種小鼠(二級)，體重25--28g，雄性，由河北省實(shí)驗(yàn)動物中心提供，許可證號為SCXK(冀)2003-1-003，動物飼料亦由該中心提供。
儀器DT-200小鼠跳臺自動測試箱，成都泰盟科技有限公司。
試驗(yàn)方法 將60只小鼠隨機(jī)分成6組，分別為正常對照組、模型對照組、黃蒲清腦膠囊低劑量組(0.36g/kg，折合生藥2.20g/kg，相當(dāng)于人臨床用量的4.5倍)、黃蒲清腦膠囊中劑量組(0.72g/kg，折合生藥4.39g/kg，相當(dāng)于人臨床用量的9倍)、黃蒲清腦膠囊高劑量組(1.44g/kg，折合生藥8.78g/kg，相當(dāng)于人臨床用量的18倍)及陽性藥哈伯因組(0.1mg/kg，相當(dāng)于人臨床用量的18倍)，每組10只。給藥組每天灌胃給藥一次，容量為0.2ml/10g體重，正常對照組、模型對照組每天給予等容量蒸餾水，連續(xù)12天。除正常對照組外，其余各組小鼠均腹腔注射東莨菪堿5mg/kg，30分鐘后開始訓(xùn)練6。訓(xùn)練時(shí)，將小鼠放入跳臺裝置內(nèi)，先適應(yīng)3分鐘，然后通電。動物受到電擊時(shí)，正常反應(yīng)是跳回平臺以避免電擊，小鼠雙足著銅柵為觸電，視為錯誤反應(yīng)。訓(xùn)練5分鐘并記錄小鼠5分鐘內(nèi)錯誤反應(yīng)次數(shù)。24小時(shí)后進(jìn)行測試，記錄5分鐘內(nèi)錯誤反應(yīng)次數(shù)，即記憶期5分鐘內(nèi)錯誤反應(yīng)次數(shù)。
統(tǒng)計(jì)學(xué)處理數(shù)據(jù)用

表示，統(tǒng)計(jì)學(xué)處理采用spss11.0for window統(tǒng)計(jì)軟件。
試驗(yàn)結(jié)果 結(jié)果見表17，從結(jié)果可見，模型對照組小鼠在訓(xùn)練期和記憶期5分鐘錯誤反應(yīng)次數(shù)均明顯較正常對照組增多(P＜0.01)，說明已造成學(xué)習(xí)記憶獲得障礙。黃蒲清腦膠囊(0.36g/kg、0.72g/kg、1.44g/kg)組小鼠在訓(xùn)練期和記憶期5分鐘錯誤反應(yīng)次數(shù)均明顯較模型對照組減少(P＜0.01)。
表17 黃蒲清腦膠囊對東莨菪堿致小鼠記憶獲得障礙的影響
注與模型對照組比較*p＜0.05；**p＜0.01 結(jié)論本試驗(yàn)結(jié)果表明黃蒲清腦膠囊可明顯改善東莨菪堿致小鼠記憶獲得障礙。
五、對亞硝酸鈉致小鼠記憶鞏固障礙的影響 試驗(yàn)?zāi)康挠^察黃蒲清腦膠囊對亞硝酸鈉致小鼠記憶鞏固障礙的影響。
試驗(yàn)材料 藥物黃蒲清腦膠囊干粉(6.1g生藥/g干粉)，河北天時(shí)醫(yī)藥技術(shù)開發(fā)有限公司提供，批號040220，膠囊內(nèi)容物置于乳缽中研細(xì)加水研勻，制成不同濃度的混懸液備用；哈伯因(石杉堿甲片0.05mg/片)，河南竹林眾生制藥股份有限公司豫中制藥廠，批號050402；亞硝酸鈉(分析純)，天津市標(biāo)準(zhǔn)科技有限公司，批號20050714。
動物昆明種小鼠(二級)，體重25--28g，雄性，由河北省實(shí)驗(yàn)動物中心提供，許可證號為SCXK(冀)2003-1-003，動物飼料亦由該中心提供。
儀器DT-200小鼠跳臺自動測試箱，成都泰盟科技有限公司。
試驗(yàn)方法 將60只小鼠隨機(jī)分成6組，分別為正常對照組、模型對照組、黃蒲清腦膠囊低劑量組(0.36g/kg，折合生藥2.20g/kg，相當(dāng)于人臨床用量的4.5倍)、黃蒲清腦膠囊中劑量組(0.72g/kg，折合生藥4.39g/kg，相當(dāng)于人臨床用量的9倍)、黃蒲清腦膠囊高劑量組(1.44g/kg，折合生藥8.7gg/kg，相當(dāng)于人臨床用量的18倍)及陽性藥哈伯因組(0.1mg/kg，相當(dāng)于人臨床用量的18倍)，每組10只。給藥組每天灌胃給藥一次，容量為0.2ml/10g體重，正常對照組、模型對照組每天給予等容量蒸餾水，連續(xù)12天。末次給藥30分鐘后開始訓(xùn)練。訓(xùn)練時(shí)，將小鼠放入反射箱內(nèi)，先適應(yīng)3分鐘，然后通電。動物受到電擊時(shí)，正常反應(yīng)是跳回跳臺以避免電擊，小鼠雙足著銅柵為觸電，視為錯誤反應(yīng)。訓(xùn)練5分鐘，并記錄5分鐘內(nèi)錯誤反應(yīng)次數(shù)。訓(xùn)練結(jié)束后，除正常對照組外，其余各組小鼠均腹腔注射亞硝酸鈉120mg/kg，24小時(shí)后進(jìn)行測試6，記錄5分鐘內(nèi)錯誤反應(yīng)次數(shù)。
統(tǒng)計(jì)學(xué)處理數(shù)據(jù)用

表示，統(tǒng)計(jì)學(xué)處理采用spss11.0for window統(tǒng)計(jì)軟件。
試驗(yàn)結(jié)果 結(jié)果見表18，從結(jié)果可見，各組小鼠在訓(xùn)練期5分鐘錯誤次數(shù)無明顯區(qū)別，在測試期，黃蒲清腦膠囊(0.36g/kg、0.72g/kg、1.44g/kg)可明顯減少5分鐘錯誤反應(yīng)次數(shù)(P＜0.05或P＜0.01)。
表18 黃蒲清腦膠囊對亞硝酸鈉致小鼠記憶鞏固障礙的影響
注與模型對照組比較*p＜0.05；**p＜0.01 結(jié)論本試驗(yàn)結(jié)果表明黃蒲清腦膠囊可明顯改善亞硝酸鈉致小鼠記憶獲得障礙。
六、對40％乙醇所致小鼠記憶再現(xiàn)障礙的影響 試驗(yàn)?zāi)康挠^察黃蒲清腦膠囊對40％乙醇所致小鼠記憶再現(xiàn)障礙的影響。
試驗(yàn)材料 藥物黃蒲清腦膠囊干粉(6.1g生藥/g干粉)，河北天時(shí)醫(yī)藥技術(shù)開發(fā)有限公司提供，批號041001；哈伯因(石杉堿甲片0.05mg/片)，河南竹林眾生制藥股份有限公司豫中制藥廠，批號050402；無水乙醇(分析純)，天津市永大化學(xué)試劑開發(fā)中心，批號20040304。
動物昆明種小鼠(二級)，體重25--28g，雄性，由河北省實(shí)驗(yàn)動物中心提供，許可證號為SCXK(冀)2003-1-003，動物飼料亦由該中心提供。
儀器DT-200小鼠跳臺自動測試箱，成都泰盟科技有限公司。
試驗(yàn)方法 將60只小鼠隨機(jī)分成6組，分別為正常對照組、模型對照組、黃蒲清腦膠囊低劑量組(0.36g/kg，折合生藥2.20g/kg，相當(dāng)于人臨床用量的4.5倍)、黃蒲清腦膠囊中劑量組(0.72g/kg，折合生藥4.39g/kg，相當(dāng)于人臨床用量的9倍)、黃蒲清腦膠囊高劑量組(1.44g/kg，折合生藥8.78g/kg，相當(dāng)于人臨床用量的18倍)及陽性藥哈伯因組(0.1mg/kg，相當(dāng)于人臨床用量的18倍)，每組10只。給藥組每天灌胃給藥一次，容量為0.2ml/10g體重，正常對照組、模型對照組每天給予等容量蒸餾水，連續(xù)12天。于末次給藥后1小時(shí)開始訓(xùn)練，訓(xùn)練時(shí)將小鼠放入跳臺裝置內(nèi)，先適應(yīng)3分鐘，然后通電，小鼠受到電擊時(shí)，正常反應(yīng)是跳回平臺以躲避電擊，小鼠雙足著銅柵為觸電，視為錯誤反應(yīng)。訓(xùn)練5分鐘并記錄5分鐘內(nèi)錯誤次數(shù)。24小時(shí)后進(jìn)行測試，于測試前30分鐘模型組與各給藥組小鼠灌胃40％乙醇0.1ml/10g體重6，正常對照組小鼠灌胃等容量生理鹽水。30分鐘后，測試5分鐘內(nèi)小鼠錯誤反應(yīng)次數(shù)。
統(tǒng)計(jì)學(xué)處理數(shù)據(jù)用

表示，統(tǒng)計(jì)學(xué)處理采用spss11.0for window統(tǒng)計(jì)軟件。
試驗(yàn)結(jié)果 結(jié)果見表19，從結(jié)果可見，各組小鼠在訓(xùn)練期5分鐘錯誤反應(yīng)次數(shù)無明顯區(qū)別，模型對照組小鼠在測試期5分鐘錯誤反應(yīng)次數(shù)明顯較正常對照組增多(P＜0.01)，說明小鼠灌胃40％乙醇已造成學(xué)習(xí)記憶再現(xiàn)障礙。黃蒲清腦膠囊(0.36g/kg、0.72g/kg、1.44g/kg)組小鼠5分鐘錯誤反應(yīng)次數(shù)均明顯較模型對照組減少(P＜0.05或P＜0.01)。
表19 對40％乙醇致小鼠記憶再現(xiàn)障礙的影響
注與模型對照組比較*p＜0.05；**p＜0.01 結(jié)論本試驗(yàn)結(jié)果表明黃蒲清腦膠囊可明顯改善40％乙醇引起的小鼠記憶再現(xiàn)障礙。
七、對急性腦缺氧小鼠的保護(hù)作用 試驗(yàn)?zāi)康挠^察黃蒲清腦膠囊對急性腦缺氧小鼠的保護(hù)作用。
試驗(yàn)材料 藥物黃蒲清腦膠囊干粉(6.1g生藥/g干粉)，河北天時(shí)醫(yī)藥技術(shù)開發(fā)有限公司提供，批號041001；哈伯因(石杉堿甲片0.05mg/片)，河南竹林眾生制藥股份有限公司豫中制藥廠，批號050402。
動物昆明種小鼠(二級)，體重18--22g，雄性，由河北省實(shí)驗(yàn)動物中心提供，許可證號為SCXK(冀)2003-1-003，動物飼料亦由該中心提供。
試驗(yàn)方法 將50只小鼠隨機(jī)分成5組，每組10只，分別為空白對照組、黃蒲清腦膠囊低劑量組(0.36g/kg，折合生藥2.20g/kg，相當(dāng)于人臨床用量的4.5倍)、黃蒲清腦膠囊中劑量組(0.72g/kg，折合生藥4.39g/kg，相當(dāng)于人臨床用量的9倍)、黃蒲清腦膠囊高劑量組(1.44g/kg，折合生藥8.78g/kg，相當(dāng)于人臨床用量的18倍)及陽性藥哈伯因組(0.1mg/kg，相當(dāng)于人臨床用量的18倍)。給藥組每天灌胃給藥，容量為0.2m1/10g體重，空白對照組每天給予等容量生理鹽水，每日一次連續(xù)12天，末次給藥后40分鐘時(shí)斷頭，記錄斷頭張口動作持續(xù)時(shí)間。
統(tǒng)計(jì)學(xué)處理數(shù)據(jù)用

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試驗(yàn)結(jié)果 結(jié)果見表20，結(jié)果表明，黃蒲清腦膠囊(0.36g/kg、0.72g/kg、1.44g/kg)均可延長小鼠斷頭后張口時(shí)間(p＜0.01)。
表20 對急性腦缺氧小鼠張口時(shí)間的影響
注與空白對照組比較*p＜0.05；**p＜0.01 結(jié)論本試驗(yàn)結(jié)果表明黃蒲清腦膠囊對小鼠急性腦缺氧有一定的保護(hù)作用。
八、對血瘀大鼠血液流變性的影響 試驗(yàn)?zāi)康挠^察黃蒲清腦膠囊對血瘀模型大鼠血液流變性的影響。
試驗(yàn)材料 藥物黃蒲清腦膠囊干粉(6.1g生藥/g干粉)，河北天時(shí)醫(yī)藥技術(shù)開發(fā)有限公司提供，批號041001；復(fù)方丹參片，山西新雙鶴藥業(yè)有限公司生產(chǎn)，批號040321；鹽酸腎上腺素注射液(1mg/ml)，由天津金耀氨基酸有限公司生產(chǎn)，批號031110。
動物SD大鼠(二級)，體重180--200g，雄性，由河北省實(shí)驗(yàn)動物中心提供，許可證號為SCXK(冀)2003-1-003，動物飼料亦由該中心提供。
儀器全自動自清洗血流變儀LBY-N6B，北京普利生儀器有限公司。
試驗(yàn)方法 將60只大鼠，隨機(jī)分為6組，每組10只，分別為空白對照組、模型對照組、黃蒲清腦膠囊小劑量組(0.28g/kg，折合生藥1.71g/kg，相當(dāng)于人臨床用量的3.5倍)、黃蒲清腦膠囊中劑量組(0.56g/kg，折合生藥3.42g/kg，相當(dāng)于人臨床用量的7倍)、黃蒲清腦膠囊高劑量組(1.12g/kg，折合生藥6.83g/kg，相當(dāng)于人臨床用量的14倍)及陽性藥復(fù)方丹參片組(0.5g/kg，相當(dāng)于人臨床用量的14倍)。給藥組大鼠每天灌胃給藥1次，容量為1ml/100g體重，空白對照組及模型對照組大鼠給予等容量蒸餾水，連續(xù)7天。于第8天空白對照組皮下注射生理鹽水，其它各組均皮下注射2次鹽酸腎上腺素，第一次給8μg/kg，第二次給6μg/kg，中間間隔4小時(shí)，第一次給腎上腺素后2小時(shí)，將動物置冰水中5min7，處置后24小時(shí)，用20％烏拉坦麻醉，腹主動脈取血，其中1.5ml血迅速注入肝素抗凝管內(nèi)，搖勻后用于測定血流變學(xué)指標(biāo)；另1.2ml血用毛細(xì)血管法測定血漿黏度和紅細(xì)胞壓積值。
統(tǒng)計(jì)學(xué)處理數(shù)據(jù)用

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試驗(yàn)結(jié)果 結(jié)果見表21，從結(jié)果可見，各組大鼠血漿粘度和紅細(xì)胞壓積無明顯區(qū)別，模型對照組大鼠全血粘度(高、中、低切)均較空白對照組升高(P＜0.001)，說明大鼠皮下注射腎上腺素加冰水刺激已致血瘀模型形成。黃蒲清腦膠囊(1.12g/kg)組大鼠全血粘度(高、中、低切)均較模型對照組大鼠降低(P＜0.01)，黃蒲清腦膠囊(0.56g/kg)組大鼠全血粘度(低切)均較模型對照組大鼠降低(P＜0.05)。
表21 黃蒲清腦膠囊對血瘀癥大鼠的血液流變學(xué)的影響
與模型對照組比較*P＜0.05，**P＜0.01 結(jié)論本試驗(yàn)結(jié)果表明黃蒲清腦膠囊可改善血瘀大鼠血流變學(xué)指標(biāo)異常，具有一定的活血化瘀作用。
小結(jié) 主要藥效學(xué)試驗(yàn)結(jié)果表明黃蒲清腦膠囊(0.28g/kg、0.56g/kg、1.12g/kg)可明顯提高雙側(cè)頸總動脈永久性結(jié)扎致血管性癡呆大鼠學(xué)習(xí)能力，提高血清及腦組織中SOD活力、降低MDA含量，增加腦皮層組織中的NE、DA含量；對腎上腺素加冰水引起的血瘀大鼠全血比粘度的升高有降低作用；可明顯改善局灶性腦缺血大鼠的神經(jīng)癥狀，縮小梗塞范圍，減輕局部腦缺血所致腦組織損傷。黃蒲清腦膠囊(0.36g/kg、0.72g/kg、1.44g/kg)可明顯改善腦缺血再灌注致小鼠記憶障礙，提高血清及腦組織中SOD、總NOS活力，降低MDA含量，抑制TChE活力；改善D-半乳糖致衰老小鼠的學(xué)習(xí)能力，提高血清及腦組織中SOD活力、降低MDA含量；可明顯改善東莨菪堿致小鼠記憶獲得障礙；明顯改善亞硝酸鈉致小鼠記憶鞏固障礙；明顯改善乙醇引起的記憶再現(xiàn)障礙；可延長小鼠斷頭后張口時(shí)間，對小鼠急性腦缺氧有一定的保護(hù)作用。研究結(jié)果為臨床用藥提供了必要的藥理學(xué)依據(jù)。
權(quán)利要求
1、一種治療血管性癡呆癥的中藥組合物，其特征在于是由如下重量份比例的原料藥制成的
姜黃300-450份石菖蒲250-350份三七100-150份豨薟草200-300份
人參150-220份制何首烏150-220份 水蛭100-150份黃連150-220份
白芍200-300份茯苓150-220份 遠(yuǎn)志250-350份
2、根據(jù)權(quán)利要求1所述的藥物，其原料藥的重量份比例為
姜黃375份石菖蒲312.5份三七125份豨薟草250份
人參187.5份 制何首烏187.5份 水蛭125份黃連187.5份
白芍250份茯苓187.5份 遠(yuǎn)志312.5份
3、根據(jù)權(quán)利要求1所述的藥物，其原料藥的重量份比例為
姜黃300份 石菖蒲250份三七125份豨薟草300份
人參187.5份制何首烏215份 水蛭100份黃連220份
白芍200份 茯苓180份 遠(yuǎn)志350份
4、根據(jù)權(quán)利要求1所述的藥物，其原料藥的重量份比例為
姜黃450份石菖蒲350份三七100份豨薟草300份
人參150份制何首烏150份 水蛭150份黃連180份
白芍300份茯苓155份 遠(yuǎn)志250份
5、根據(jù)權(quán)利要求1-4任一所述的藥物，其特征在于該藥物為膠囊劑、片劑、丸劑或口服液。
6、根據(jù)權(quán)利要求5所述的藥物，其特征在于該藥物為膠囊劑。
7、權(quán)利要求6所述藥物的制備方法，其特征在于包括以下步驟
1)、取方中藥材，分別選凈，粗碎成5-10mm顆粒，按處方量稱量。
2)、取姜黃，加8-12倍量70-90％乙醇，加熱回流提取1-3次，第一次2-3小時(shí)，第二次1-2小時(shí)，提取液濾過，合并，減壓回收乙醇后，適當(dāng)濃縮成相對密度約為1.0-1.2(60℃熱測)，備用。
3)、取三七、豨薟草、制何首烏、黃連，加8-10倍量50-70％乙醇，加熱回流提取1-3次，每次2-3小時(shí)，提取液過濾，合并，減壓回收乙醇，濃縮成相對密度約為1.0-1.2(60℃熱測)，備用。
4)、取石菖蒲，加8-12倍量水，浸泡30-60分鐘后，提取揮發(fā)油4-8小時(shí)，揮發(fā)油另器收集，水提取液過濾，備用。
5)、取水蛭、白芍、茯苓、遠(yuǎn)志，加8-10倍量水，煎煮2-3次，每次1-2小時(shí)，提取液過濾，合并，加入石菖蒲提油后的水溶液，濃縮成相對密度為1.10-1.15(60℃熱測)清膏，與姜黃、三七等提取液合并，混勻，放入真空干燥箱，在溫度60-70℃，真空度0.04-0.06Mpa條件下減壓干燥，干膏粉碎成100目粉，備用。
6)、取人參，粉碎成100目粉，備用。
7)、取5)和6)制備的粉末，加適量輔料，按常規(guī)制劑方法，制成膠囊劑。
8、權(quán)利要求5所述藥物的制備方法，其特征在于
將權(quán)利要求7中步驟5)、6)制備的細(xì)粉，按常規(guī)制劑方法制成片劑、丸劑；
或
將2)、3)、4)、5)中制備的提取物，加入6)中所得的顆粒細(xì)粉，按常規(guī)方法制成口服液。
全文摘要
本發(fā)明提供了一種治療血管性癡呆癥的中藥組合物及其制備方法。本發(fā)明是依據(jù)傳統(tǒng)中醫(yī)藥理論，通過對血管性癡呆癥的病因病機(jī)的深入探討，針對本病的臨床表現(xiàn)，提出淤血阻絡(luò)、痰濁閉竅是本病證的基本病機(jī)，應(yīng)以活血通絡(luò)為主、輔以豁痰開竅，使淤血得行，痰濁得化，達(dá)開竅醒神之目的。該中藥組合物，以姜黃為君藥，臣以三七、石菖蒲，以水蛭、茯苓、人參、白芍、制何首烏、豨薟草、黃連為佐藥，以遠(yuǎn)志為使藥，諸藥合用，活血祛淤，開竅豁痰，醒神益智，使淤血得行，痰濁得化，達(dá)開竅醒神之目的。
文檔編號A61K35/56GK101069734SQ20061007884
公開日2007年11月14日 申請日期2006年5月10日 優(yōu)先權(quán)日2006年5月10日
發(fā)明者牛麗穎, 陰建友, 李向軍, 劉敏彥, 王玉峰 申請人:河北天時(shí)醫(yī)藥技術(shù)開發(fā)有限公司