專利名稱：一種丹參酮類成分注射劑的制備及其應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明設(shè)計一種丹參酮類成分制成的針劑，具體為丹參酮I、丹參酮IIA、丹參酮IIB、隱丹參酮、異丹參酮、二氫丹參酮I等二萜醌類化合物制成的中藥有效部位注射劑及其在心腦血管領(lǐng)域的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
丹參酮是中藥丹參根中的脂溶性成分，主要包括丹參酮I、丹參酮IIA、丹參酮IIB、隱丹參酮、異丹參酮、二氫丹參酮I等二萜醌類化合物，其共同特點是具有鄰醌或?qū)︴Y(jié)構(gòu)?，F(xiàn)代藥理研究表明，丹參酮類成分具有天然抗氧化作用、抗動脈粥樣硬化、降低心肌耗氧量等心血管藥理作用、抗菌消炎作用及抗腫瘤作用。
目前市面上使用的相關(guān)的注射劑有丹參酮IIA磺酸鈉注射液、丹參注射液及復(fù)方丹參注射液，臨床上常用于心腦血管疾病的治療。其中丹參注射液和復(fù)方丹參注射液為純中藥注射劑，由于其成分復(fù)雜，不易控制質(zhì)量，且臨床應(yīng)用的不良反應(yīng)報道較多。另外，獲得丹參酮單體的操作繁瑣，獲得量少，且常常用到大量的有毒溶劑，增加了不良反應(yīng)的危險性。
中藥注射劑代表了中藥制劑的最高水平，發(fā)現(xiàn)中藥當中的有效部位，制成注射劑，可以極大的改善中藥的治療作用，也是中藥現(xiàn)代化的重要發(fā)展方向。

發(fā)明內(nèi)容
在對丹參酮類成分的基礎(chǔ)研究中，我們意外地發(fā)現(xiàn)，將其制成可供注射的注射劑靜脈給藥時，其療效顯著提高，與口服給藥途徑相比，具有療效高、劑量低等優(yōu)點。該效應(yīng)在數(shù)個冠心病、心絞痛模型中得到驗證。
本發(fā)明的目的在于提供一種質(zhì)量可控、療效穩(wěn)定的注射劑及其制備方法。
本發(fā)明內(nèi)容通過以下技術(shù)方案實現(xiàn)一、丹參酮類成分的提取、純化工藝研究根據(jù)相關(guān)文獻及藥理預(yù)試結(jié)果，制訂出如下提取、純化工藝將丹參根粉碎成粗粉，用醇/水混合溶媒溶媒提取(優(yōu)選甲醇、乙醇，醇濃度可以選擇介于60～95％)，提取方法優(yōu)選滲漉法，合并滲漉液，減壓濃縮，得到粗提取物。將粗提取物溶于100％甲醇，去除不溶物，減壓濃縮得到總丹參酮粗品。采用葡聚糖凝膠柱色譜法精制總丹參酮，葡聚糖凝膠柱優(yōu)選Sephedex LH-20；將上步總丹參酮粗品以適當溶媒溶解，通過葡聚糖凝膠柱，以2-3倍柱床體積的10～30％甲醇洗去雜質(zhì)，再以40～60％的甲醇洗脫，收集2～4倍柱床體積的醇溶液，減壓濃縮，得提取物I；再用60～80％的甲醇洗脫，收集2～4倍柱床體積的醇溶液，減壓濃縮，得提取物II。
總丹參酮的制備，按照下述比例，配制，即得提取物I10～100份提取物II5～100份以適當溶媒溶解，搖勻，揮干，即得。
其中各組分含量(重量比)丹參酮IIA20％～99.8％。
其他成分0.2％～80％。
二、制劑工藝研究在上述提取物的基礎(chǔ)上，通過制劑處方工藝研究，優(yōu)選出制劑成型必須的藥學(xué)上可以接受的一種或多種藥用輔料，這些藥用輔料可以是溶劑、助溶劑、抗氧化劑和穩(wěn)定劑中的一種或者幾種。
上述各組分的含量為丹參酮類提取物 0.2～40％溶劑0～99.8％助溶劑 0～99.8％抗氧化劑和穩(wěn)定劑0～5％以上均為重量比優(yōu)選各組分的含量為丹參酮類提取物 0.2～20％溶劑和助溶劑80～99.8％抗氧化劑和穩(wěn)定劑0～1％以上均為重量比其中溶劑可以是水、乙醇、丙二醇、大豆油、甘油、聚乙二醇中的一種或幾種。
其中助溶劑可以是聚山梨醇酯-20、聚山梨醇酯-40、聚山梨醇酯-60、聚山梨醇酯-65、聚山梨醇酯-80、聚山梨醇酯-85、聚乙二醇、聚丙二醇、聚維酮、泊洛沙姆、聚氧乙烯蓖麻油、聚氧乙烯單油酸酯、聚氧乙烯氫化蓖麻油、環(huán)糊精、甲基環(huán)糊精、丙基環(huán)糊精、羥乙基環(huán)糊精、環(huán)糊精聚合物、乙基環(huán)糊精、支鏈環(huán)糊精、卵磷脂、聚乙二醇、聚乙烯吡咯烷酮中的一種或幾種。
其中抗氧化劑和穩(wěn)定劑可以是亞硫酸鈉、亞硫酸氫鈉、焦亞硫酸鈉、半胱氨酸及其鹽、抗壞血酸及其衍生物、谷胱甘肽、維生素E及其衍生物、二硫代甘醇酸、乙二胺四乙酸及其鹽、硫代甘油中的一種或幾種。
一般地，本發(fā)明注射用濃溶液的體積為0.5～10ml，每瓶總丹參酮的含量為5～200mg，優(yōu)選20～80mg。
制劑處方

制法稱取上述提取物，加適量的無水乙醇溶解，加入丙二醇中，攪拌均勻，加入乙醇至1000ml，混勻，精濾除菌，無菌分裝，壓塞，軋蓋，包裝，即得。
三、藥效學(xué)研究1、對家兔動脈粥樣硬化模型血液流變學(xué)的影響試驗?zāi)Ｐ筒捎梦癸暩咧暳?80％基礎(chǔ)飼料中加入15％蛋黃粉、0.5％膽固醇和4.5％豬油)6周，復(fù)制家兔動脈粥樣硬化模型，隨機分為4組，分別(1)丹參酮有效部位組靜脈注射丹參酮類提取物(2、4、8mg/kg)(2)丹參酮IIA磺酸鈉組靜脈注射丹參酮IIA磺酸鈉注射液(4mg/kg，約相當于臨床用藥劑量的4倍)(3)正常對照組正常動物(不造模)，靜脈給予生理鹽水(4)模型對照組不給任何藥物以上各組給藥1次/日，給藥1周，末次給藥后2h取血，采用全自動血流變快測儀測血液粘度(ηb)，毛細管粘度法測定(ηp)，文氏管法測紅細胞壓積(Hct)，微量毛細管高速血球壓積離心機測定纖維蛋白原含量(Fg)，結(jié)果如下


注*P＜0.05，**P＜0.01與正常對照組比較；▲P＜0.05，▲▲P＜0.01與模型組比較；#P＜0.05，##P＜0.01與丹參酮IIA磺酸鈉注射液組比較。
結(jié)果表明模型組與對照組比較，ηb、ηp和Hct顯著升高，血液呈高粘狀態(tài)，紅細胞壓積顯著降低(P＜0.01)；與模型組比較，丹參酮類提取物組(2、4、8mg/kg)，丹參酮IIA磺酸鈉注射液(4mg/kg)組均能顯著抑制模型所致的ηb、ηp、Hct的異常升高，并能顯著提高紅細胞壓積的異常降低；與丹參酮IIA磺酸鈉注射液(4mg/kg)組比較，丹參酮類提取物(8mg/kg)組對模型所致各項指標的異常變化的改善作用顯著優(yōu)于該組(P＜0.01)，丹參酮類提取物(4mg/kg)組在改善ηb和紅細胞壓積方面與該組無顯著性差異，在改善ηp和Fg方面差異顯著(P＜0.05)。
2、對缺血再灌注心肌局部血流量的影響試驗?zāi)Ｐ陀?％戊巴比妥鈉(30mg/kg)靜脈麻醉犬，氣管插管，控制呼吸，使血氣維持正常。右側(cè)股動、靜脈插管，經(jīng)胸骨正中線開胸，剪開心包，暴露心臟，在冠狀動脈左前降支(LAD)中段，分離冠脈，穿線備結(jié)扎。對照組結(jié)扎40min，然后松開結(jié)扎線，再灌注30min。其余四組相同，分別于結(jié)扎前10min靜注生理鹽水2.5ml·kg-1，丹參酮IIA磺酸鈉10mg·kg-1，丹參酮類提取物(5、10、20mg/kg)(容量相同)。術(shù)中監(jiān)測心率和平均動脈壓。
血流量測定將50μm銅絲鉑電極(氫電極)用自制銀絲懸浮裝置植入測定部位(結(jié)扎線上0.5cm、結(jié)扎線下0.5cm、1.0cm和1.5cm，沿LAD排列，以A、B、C、D表示)，深度0.5cm(相當于中層心肌)，參比電極放在胸前切口皮下，然后將電極接到末梢組織血流儀上。測定時給動物吸入0.10的氫氣(0.90空氣)，待氫氣飽和后，中斷吸氫，記錄氫氣清除曲線，繪制半對數(shù)-靜脈分布曲線，求出T1/2(為氫清除半衰期)，按公式F/W＝0.639/T1/2計算血流量值(式中F/W為單位重量的血流量，單位為ml·g-1)。分別于缺血、再灌注中測A、B、C、D的血流量兩次，取均值作為A、B、C、D的血流量。

注*P＜0.05，**P＜0.01與對照組比較。
結(jié)果表明缺血期間，靜脈注射丹參酮類提取物與丹參酮IIA磺酸鈉注射液均能顯著增加A、D區(qū)血流量，再灌注后，對照組B、C、D區(qū)血流有所恢復(fù)，丹參酮類提取物與丹參酮IIA磺酸鈉注射液均能顯著增加A、C、D區(qū)血流量。
具體實施例方式實施例1丹參酮類提取物的制備1取丹參藥材1000g，粉碎成粗粉，置滲漉器中，用10倍量95％乙醇浸泡24小時，再以48倍量的95％乙醇緩緩滲漉，流速為3ml/min，收集滲漉液，減壓濃縮至干，加入5倍量的甲醇，超聲使充分溶解，濾過，將濾液濃縮至約20ml，加至葡聚糖凝膠柱Sephedex LH20上，以3倍柱床體積的10％甲醇洗脫，棄去洗脫液，再以50％甲醇洗脫，收集洗脫液，蒸干，得提取物I，以80％甲醇洗脫，收集洗脫也，蒸干，得提取物II，將上述提取物以提取物I∶提取物II＝2∶1混合，得到丹參酮類提取物。
實施例2注射用丹參酮濃溶液的制備(2ml40mg)處方丹參酮類提取物 40g異丙醇 1000ml乙醇 1000ml制成1000支制備方法(1)在無菌操作室內(nèi)精密稱取處方量的丹參酮類提取物40g，加入1000ml經(jīng)脫熱原處理的丙二醇和1000ml經(jīng)脫熱原處理的乙醇置于適當?shù)臒o菌、無熱原容器內(nèi)，攪拌使混合均勻；
(2)上述溶液，精濾除菌(0.22μm)，濾過后加無水乙醇補足全量(2000ml/1000瓶)；(3)溶液送檢(含量測定)；(4)無菌分裝于西林瓶中，每瓶裝2.0ml；(5)扎蓋、封口。
(6)質(zhì)檢，包裝。
實施例3注射用丹參酮濃溶液的制備(2ml40mg)處方丹參酮類提取物 40g 乙醇600ml吐溫-80 400ml異丙醇 1000ml制成1000支制備方法同實施例1，其中步驟(1)為取經(jīng)脫熱原處理的乙醇600ml、吐溫-80 400ml和異丙醇1000ml，置于適當?shù)臒o菌、無熱原容器內(nèi)，攪拌使混合均勻。
實施例4注射用丹參酮濃溶液的制備(5ml50mg)處方丹參酮類提取物 50g 異丙醇 1000ml甘油 2000ml硫代甘油 2g乙醇 加至5000ml制成1000支制法按照制劑處方稱取丹參酮類提取物及硫代甘油，加入異丙醇1000ml、甘油2000ml，混合均勻，加入乙醇至5000ml，加入活性炭10g，水浴加熱15min，濾過除炭，加入乙醇至全量；0.22μm微孔濾膜過濾，測定含量，分裝，每支5ml，蓋塞，軋蓋，即得。
權(quán)利要求
1.一種注射用丹參酮濃溶液，其特征是含有丹參酮類成分(丹參酮I、丹參酮IIA、丹參酮IIB等二萜醌類化合物)，并至少含有一種藥學(xué)上可以接受的載體，載體包括溶劑、助溶劑、抗氧化劑和穩(wěn)定劑。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的注射用丹參酮濃溶液，其特征在于其中含有丹參酮IIA、丹參酮I、丹參酮IIA、丹參酮IIB、隱丹參酮、異丹參酮、15，16-二氫丹參酮I、丹參新酮、脫氫丹參新酮、羥基丹參酮A、1，2-二氫丹參酮I、亞甲基丹參醌中的一種或幾種。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的注射用丹參酮濃溶液，其特征在于其中含有的溶劑可以是水、乙醇、丙二醇、大豆油、甘油、聚乙二醇中的一種或幾種。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的注射用丹參酮濃溶液，其特征在于其中含有的助溶劑可以是聚山梨醇酯-20、聚山梨醇酯-40、聚山梨醇酯-60、聚山梨醇酯-65、聚山梨醇酯-80、聚山梨醇酯-85、聚乙二醇、聚丙二醇、聚維酮、泊洛沙姆、聚氧乙烯蓖麻油、聚氧乙烯單油酸酯、聚氧乙烯氫化蓖麻油、環(huán)糊精、甲基環(huán)糊精、丙基環(huán)糊精、羥乙基環(huán)糊精、環(huán)糊精聚合物、乙基環(huán)糊精、支鏈環(huán)糊精、卵磷脂、聚乙二醇、聚乙烯吡咯烷酮一種或幾種。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的注射用丹參酮濃溶液，其特征在于其中含有的抗氧化劑和穩(wěn)定劑可以是亞硫酸鈉、亞硫酸氫鈉、焦亞硫酸鈉、半胱氨酸及其鹽、抗壞血酸及其衍生物、谷胱甘肽、維生素E及其衍生物、二硫代甘醇酸、乙二胺四乙酸及其鹽、硫代甘油中的一種或幾種。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的注射用丹參酮濃溶液，其特征在于其中含有的主藥、溶劑、助溶劑、抗氧化劑和穩(wěn)定劑的比例為丹參酮類化合物 0.2～50％溶劑 0～99.8％助溶劑 0～99.8％抗氧化劑和穩(wěn)定劑 0～10％以上均為重量比
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的注射用丹參酮濃溶液，其特征在于其中含有的主藥、溶劑和助溶劑、抗氧化劑和穩(wěn)定劑的比例為丹參酮類化合物 0.2～20％溶劑和助溶劑 80～99.8％抗氧化劑和穩(wěn)定劑 0～1％以上均為重量比。
8.一種如權(quán)利要求1所述的注射用丹參酮濃溶液的制備方法，其特征在于取丹參藥材，用適當?shù)姆椒ㄌ崛?、純化得丹參酮類提取物后，測定含量，稱取處方量的丹參酮類提取物、溶劑、助溶劑、抗氧化劑和穩(wěn)定劑，混合均勻，精濾除菌，無菌分裝，壓塞，軋蓋，質(zhì)檢，包裝，即得。
9.如權(quán)利要求1所述的注射用丹參酮濃溶液的使用方法，其特征在于將其用臨床常用的葡萄糖或氯化鈉注射液20～1000ml稀釋給藥。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種以丹參為原料制備的丹參酮類有效成分制成的注射用濃溶液，本發(fā)明還涉及該注射用濃溶液的制備方法和臨床使用方法。
文檔編號A61P9/10GK101073566SQ20061008144
公開日2007年11月21日 申請日期2006年5月19日 優(yōu)先權(quán)日2006年5月19日
發(fā)明者秦長青 申請人:秦長青