專利名稱：一種姜黃有效組分的制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及天然藥物的分離，具體的說是姜黃有效組分提取制備方法， 該組分的主要的活性成分是姜黃素，去甲氧基姜黃素和二去甲氧基姜黃素 三個(gè)化合物。
背景技術(shù)：
姜黃為姜科姜黃屬植物0^c"ma/o"g"L.的干燥根莖，為常用中藥。始 載于《唐本草》，具有破血行氣、通經(jīng)止痛的功能,傳統(tǒng)中醫(yī)用于血瘀氣滯、 胸脅刺痛、經(jīng)閉腹痛、產(chǎn)后瘀阻、腹中腫塊、跌打腫痛、風(fēng)痹臂痛(《中華 人民共和國藥典》，2005年版一部)。主產(chǎn)于四川、湖北、廣東、廣西、福 建、臺(tái)灣等地。目前，國內(nèi)外競相研制、開發(fā)姜黃藥品和食品。WHO與FDA 已批準(zhǔn)姜黃為天然食品添加劑，美國衛(wèi)生部門擬在最新版《美國藥典》中 收載姜黃提取物等二十余種植物制劑的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。
姜黃的主要有效成分為姜黃素、去甲氧基姜黃素、二去甲氧基姜黃素3 個(gè)組分,合稱為姜黃素類化合物?，F(xiàn)代藥理研究證明,姜黃素類物質(zhì)具有多種 藥理作用,包括抗腫瘤、抗炎、抗氧化、抗凝、降血脂、抗動(dòng)脈粥樣硬化、 利膽及抗肝細(xì)胞毒性作用(陳敏娟，海峽藥學(xué)，2003， 15 (1) ， 4-6;韓婷， 宓鶴鳴，解放軍藥學(xué)學(xué)報(bào)，17 (2) ， 95-97;李劍明,楊和平等，中國新醫(yī) 藥，2004 ，3(5)， 21-23;劉碩謙，劉仲華等，分析化學(xué)，2005(3) ，309-312 )。 文獻(xiàn)有關(guān)姜黃素類化合物的提取分離制備的報(bào)道，基本上都是采取傳統(tǒng)的 溶劑萃取、硅膠層析等方法(王平，陳小龍等，中國現(xiàn)代應(yīng)用藥學(xué)雜志，2005， 22 (4) ， 328-330;農(nóng)克良,韋良興等，化工技術(shù)與開發(fā)，2006， 35 (2) 3-5; Apichart S etc.,Phychemistry, 1996,36(6)，1505-1508; So-Young Park ect" JNat Prod,2002,65(9),1227-1231)，這些方法存在產(chǎn)品純度低、重現(xiàn)性差、耗時(shí) 長、有機(jī)殘留嚴(yán)重、無法大規(guī)模生產(chǎn)等缺點(diǎn)。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種重現(xiàn)性好，可以大規(guī)模生產(chǎn)的姜黃有效組分 的制備工藝，其中主要的活性成分為姜黃素、去甲氧基姜黃素、二去甲氧 基姜黃素三個(gè)主要的化合物。本發(fā)明提供方法獲得的姜黃有效組分，通過 高效液相色譜分析，主要成分得含量達(dá)到97. 3%，姜黃素的含量為16. 18%， 去甲氧基姜黃素的含量為29. 02%和二去甲氧基姜黃素含量為52. 12%。
為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用的技術(shù)方案為
1) 提取稱取姜黃原藥材，加入其重量8-12倍的70%—95%乙醇室溫 浸提，重復(fù)上述提取過程2-3次，每次l-3天，將提取液濃縮至相對密度為 1.0-1.1的浸膏，得到姜黃醇提物組分；
2) 非極性大孔樹脂分離將姜黃醇提物干法上樣于非極性大孔樹脂柱，醇提物的上樣量與分離材料非極性大孔樹脂的質(zhì)量比為1: 100-500，分別
采用流動(dòng)相體積濃度40-60%乙醇和80-95%乙醇循環(huán)洗脫二次，每次洗脫的 體積為3-6個(gè)柱體積，流速為1-3個(gè)柱體積/小時(shí)；洗脫液濃縮，濃縮至固 含量為0.2-0.6克/毫升，過0.2-0.45微米濾膜，即為姜黃大孔樹脂分離組分;
3)工業(yè)色譜柱分離以粒徑5-20微米的C18硅膠鍵合固定相為色譜填 料，以甲醇和水為流動(dòng)相，將姜黃大孔樹脂分離組分進(jìn)行梯度洗脫，甲醇 的體積濃度從0-100%變化，收集目標(biāo)組分，干燥處理即為姜黃有效組分； 將樣品進(jìn)行高效液相分析確定主要成分的含量其主要成分為姜黃素，去甲 氧基姜黃素和二去甲氧基姜黃素。
所述色譜柱效為5000-20000塔板/米，色譜柱長為200毫米一800毫米， 色譜柱內(nèi)徑為20毫米一300毫米；所述收集目標(biāo)組分是指收集甲醇的體積 濃度從74%-77.6%變化的目標(biāo)組分。
本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)
1. 主要成分的含量高。本發(fā)明制備的姜黃有效組分去除了雜質(zhì)，提高 了主要活性成分的含量。由于本發(fā)明采用了最先進(jìn)的工業(yè)色譜分離制備技 術(shù)，色譜填料為高分離能力的ODS (C18健合固定相)分離材料，利用工業(yè) 色譜的高分離能力，可以保證主要成分的純度達(dá)到95%以上。
2. 重現(xiàn)性高和可操作性好。本發(fā)明利用工業(yè)色譜系統(tǒng)和ODS穩(wěn)定的性 能，可以保證分離制備的重現(xiàn)性和穩(wěn)定性。
3. 周期短。本發(fā)明從原藥材的粉碎提取到制備得到姜黃有效組分的產(chǎn) 品，只需要10天的時(shí)間。
4. 有機(jī)殘留低。由于本發(fā)明摒棄了傳統(tǒng)工藝中溶劑萃取、硅膠柱層析 等工藝，采用了有機(jī)溶劑使用量較少的工業(yè)色譜方法，而且最終產(chǎn)品采用 干燥處理，所以最終產(chǎn)品的有機(jī)溶劑殘留特別小。
5. 能夠?qū)崿F(xiàn)大規(guī)模工業(yè)生產(chǎn)。本發(fā)明所采用工藝非常容易實(shí)現(xiàn)標(biāo)準(zhǔn)化， 自動(dòng)化，適于進(jìn)行產(chǎn)業(yè)化大規(guī)模生產(chǎn)。


圖l本發(fā)明實(shí)施例l工業(yè)色譜制備姜黃有效組分的制備色譜圖；a、b、 c、 d分別為實(shí)施例1條件下重復(fù)4次進(jìn)樣的工業(yè)色譜制備色譜圖。
圖2為本發(fā)明中姜黃有效組分的HPLC色譜圖a二254nm)，其中l(wèi).姜 黃素2.去甲氧基姜黃素3.二去甲氧基姜黃素。
具體實(shí)施方式
實(shí)施例l
將姜黃原藥材粉碎，定量稱取1千克，置于20升提取罐中，加入10 升95%乙醇浸泡1天，過濾，濾液保存?zhèn)溆茫瑸V渣中再加入10升95%乙醇 浸泡1天，過濾，濾液與第一次合并，濾渣棄去。將提取液旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮 至150毫升，得到姜黃醇提組分。
在大孔樹脂層析系統(tǒng)中裝入處理好的羅門哈斯XAD-4型大孔樹脂IOL，將姜黃醇提組分干法上樣于大孔樹脂層析柱。首先用4倍柱體積40L 50%乙醇洗脫柱體，洗脫液棄去，再用4倍柱體積40L80。/。乙醇洗脫，洗脫 液保存，并濃縮至固含量為0.3克/毫升，過0.22微米濾膜，得到姜黃大孔 樹脂組分50毫升。
工業(yè)色譜柱柱長400毫米，內(nèi)徑80毫米，色譜填料為10-20微米的C18 鍵合固定相，柱效為15000塔板/米，設(shè)定紫外檢測波長為300nm，流速200 毫升/分鐘，設(shè)定洗脫梯度(見表l)，初始流動(dòng)相(30%甲醇水)平衡色譜 柱20分鐘，取姜黃大孔樹脂組分樣品10ml，進(jìn)樣，按設(shè)定梯度洗脫，收集 50分鐘至56分鐘組分。洗脫結(jié)束，再次平衡柱子，進(jìn)樣，收集洗脫組分(見 圖l)。將收集得到的洗脫組分，合并，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮至20毫升，再通過室 溫旋轉(zhuǎn)干燥得到姜黃有效組分產(chǎn)品2.9克，經(jīng)高效液相色譜分析(圖2)， 其有效組分的總含量>97% 。
表1實(shí)施例1姜黃有效組分的工業(yè)色譜制備梯度設(shè)置表
序號(hào)時(shí)間(min)流量(ml/min)A:甲醇(％)B:水(％)
102003070
2102005050
3602008020
4652001000
姜黃素的結(jié)構(gòu)式
實(shí)施例2
將姜黃原藥材粉碎，定量稱取0.5千克，置于10升提取罐中，加入6 升70%乙醇浸泡2天，過濾，濾液保存?zhèn)溆?，濾渣中再加入6升70%乙醇 浸泡1天，過濾，濾液與第一次合并，濾渣棄去。將提取液旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮 至70毫升，得到姜黃醇提組分。在大孔樹脂層析系統(tǒng)中裝入處理好的羅門哈斯XAD-4型大孔樹脂5L， 將姜黃醇提組分干法上樣于大孔樹脂層析柱。首先用6倍柱體積30L 40% 乙醇洗脫柱體，洗脫液棄去，再用6倍柱體積30L 85%乙醇洗脫，洗脫液 保存，并濃縮至固含量為0.2克/毫升，過0.22微米濾膜，得到姜黃大孔樹 脂組分35毫升。
工業(yè)色譜柱柱長250毫米，內(nèi)徑70毫米，色譜填料為5-10微米的C18 鍵合固定相，柱效為24000塔板/米，設(shè)定紫外檢測波長為300nm，流速100 毫升/分鐘，設(shè)定洗脫梯度，初始流動(dòng)相平衡色譜柱20分鐘，取姜黃大孔樹 脂組分樣品5ml，進(jìn)樣，按設(shè)定梯度洗脫，收集目標(biāo)組分。洗脫結(jié)束，再次 平衡柱子，進(jìn)樣，收集洗脫組分。將收集得到的洗脫組分，合并，旋轉(zhuǎn)蒸 發(fā)濃縮至10毫升，再通過室溫旋轉(zhuǎn)干燥得到姜黃有效組分產(chǎn)品1.4克，經(jīng) 高效液相色譜分析，其有效組分的總含量>97%。
實(shí)施例3
將姜黃原藥材粉碎，定量稱取5千克，置于100升提取罐中，加入60 升80%乙醇浸泡2天，過濾，濾液保存?zhèn)溆?，濾渣中再加入60升80%乙醇 浸泡2天，過濾，濾液與第一次合并，濾渣棄去。將提取液旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮 至700毫升，得到姜黃醇提組分。
在大孔樹脂層析系統(tǒng)中裝入處理好的羅門哈斯XAD-4型大孔樹脂 50L，將姜黃醇提組分干法上樣于大孔樹脂層析柱。首先用3倍柱體積150 L 60%乙醇洗脫柱體，洗脫液棄去，再用3倍柱體積150L 95%乙醇洗脫，洗 脫液保存，并濃縮至固含量為0.5克/毫升，過0.45微米濾膜，得到姜黃大 孔樹脂組分170毫升。
工業(yè)色譜柱柱長600毫米，內(nèi)徑100毫米，色譜填料為10-20微米的 C18鍵合固定相，柱效為14000塔板/米，設(shè)定紫外檢測波長為300nm，流 速400毫升/分鐘，設(shè)定洗脫梯度，初始流動(dòng)相平衡色譜柱30分鐘，取姜黃 大孔樹脂組分樣品20ml，進(jìn)樣，按設(shè)定梯度洗脫，收集目標(biāo)組分。洗脫結(jié) 束，再次平衡柱子，進(jìn)樣，收集洗脫組分。將收集得到的洗脫組分，合并， 旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮至100毫升，再通過室溫旋轉(zhuǎn)干燥得到姜黃有效組分產(chǎn)品23.6 克，經(jīng)高效液相色譜分析，其有效組分的總含量>98%。
實(shí)施例4
將姜黃原藥材粉碎，定量稱取10千克，置于100升燒瓶中，加入80 升90%乙醇浸泡3天，過濾，濾液保存?zhèn)溆?，濾渣中再加入80升90%乙醇 浸泡1天，過濾，濾液與第一次合并，濾渣棄去。將提取液旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮 至1.5升，得到姜黃醇提組分。
在大孔樹脂層析系統(tǒng)中裝入處理好的羅門哈斯XAD-4型大孔樹脂 80L，將姜黃醇提組分干法上樣于大孔樹脂層析柱。首先用3倍柱體積240L 60%乙醇洗脫柱體，洗脫液棄去，再用3倍柱體積240L95。/。乙醇洗脫，洗 脫液保存，并濃縮至固含量為0.6克/毫升，過0.45微米濾膜，得到姜黃大孔樹脂組分300毫升。
工業(yè)色譜柱柱長800毫米，內(nèi)徑150毫米，色譜填料為10-20微米的 C18鍵合固定相，柱效為12000塔板/米，設(shè)定紫外檢測波長為300nm，流 速800毫升/分鐘，設(shè)定洗脫梯度，初始流動(dòng)相平衡色譜柱30分鐘，取姜黃 大孔樹脂組分樣品40ml，進(jìn)樣，按設(shè)定梯度洗脫，收集目標(biāo)組分。洗脫結(jié) 束，再次平衡柱子，進(jìn)樣，收集洗脫組分。將收集得到的洗脫組分，合并， 旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮至200毫升，再通過室溫旋轉(zhuǎn)干燥得到姜黃有效組分產(chǎn)品51.2 克，經(jīng)高效液相色譜分析，其有效組分的總含量>98%。
權(quán)利要求
1.一種姜黃有效組分的制備方法，其特征在于1)提取稱取姜黃原藥材，加入其重量8-12倍的70％-95％乙醇室溫浸提，重復(fù)上述提取過程2-3次，每次1-3天，將提取液濃縮至相對密度為1.0-1.1的浸膏，得到醇提物；2)非極性大孔樹脂分離將醇提物干法上樣于非極性大孔樹脂柱，醇提物的上樣量與分離材料非極性大孔樹脂的質(zhì)量比為1∶100-500，分別采用流動(dòng)相體積濃度40-60％乙醇和80-95％乙醇循環(huán)洗脫二次，每次洗脫的體積為3-6個(gè)柱體積，流速為1-3個(gè)柱體積/小時(shí)；洗脫液濃縮，濃縮至固含量為0.2-0.6克/毫升，過0.2-0.45微米濾膜，即為姜黃大孔樹脂分離組分；3)工業(yè)色譜柱分離以粒徑5-20微米的C18硅膠鍵合固定相為色譜填料，以甲醇和水為流動(dòng)相，將姜黃大孔樹脂分離組分進(jìn)行梯度洗脫，甲醇的體積濃度從0-100％變化，收集目標(biāo)組分，干燥處理即為姜黃有效組分，其主要成分為姜黃素，去甲氧基姜黃素和二去甲氧基姜黃素。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述姜黃有效組分的制備方法，其特征在于所述 色譜柱效為5000-20000塔板/米。
3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述姜黃有效組分的制備方法，其特征在于所述 色譜柱長為200毫米-800毫米，色譜柱內(nèi)徑為20毫米-300毫米。
4. 根據(jù)權(quán)利要求1所述姜黃有效組分的制備方法，其特征在于所述 收集目標(biāo)組分是指收集甲醇的體積濃度從74%-77. 6%變化的目標(biāo)組分。
全文摘要
本發(fā)明提供了一種姜黃有效組分的制備方法，將姜黃藥材粉碎后加70-95％乙醇提取，在非極性大孔吸附樹脂上樣，乙醇/水洗脫，收集洗脫液并濃縮干燥后得到姜黃大孔樹脂組分，再通過工業(yè)制備色譜分離，甲醇水作流動(dòng)相，獲得姜黃有效組分，其主要的活性成分是姜黃素，去甲氧基姜黃素和二去甲氧基姜黃素，其總含量達(dá)到97.3％。本發(fā)明制備的姜黃有效組分去除了雜質(zhì)，提高了主要活性成分的含量。制備過程重復(fù)性高和可操作性好，易于實(shí)現(xiàn)標(biāo)準(zhǔn)化和產(chǎn)業(yè)化，同時(shí)對于姜黃藥材的質(zhì)量控制也有一定的指導(dǎo)意義。
文檔編號(hào)A61P3/00GK101317997SQ20071001163
公開日2008年12月10日 申請日期2007年6月8日 優(yōu)先權(quán)日2007年6月8日
發(fā)明者豐加濤, 慧 張, 青 徐, 偉 李, 梁鑫淼 申請人:中國科學(xué)院大連化學(xué)物理研究所