專利名稱：禽霍亂微膠囊疫苗的制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明為一種禽霍亂微膠囊疫苗的制備方法，屬于生物工程技術(shù)領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
禽霍亂是由多殺性巴氏桿菌引起的一種主要侵害家禽(雞、鴨、鵝)和野禽的接觸性敗血性傳染病，發(fā)病率和死亡率都很高。在預防禽霍亂的措施中，除了保持養(yǎng)殖環(huán)境的清潔衛(wèi)生外，疫苗預防一直是防控禽霍亂疫病的主要方法。雖然我國目前具有預防禽霍亂的疫苗產(chǎn)品如“禽霍亂蜂膠滅活疫苗”和“G190凍干活疫苗”等，但這些疫苗仍有許多不足之處一是滅活疫苗注射后引起各種應(yīng)激反應(yīng)(注射局部炎癥，肌肉壞死，減食減蛋，生長受抑等)；二是由于滅活疫苗中部分藥殘會造成食品污染，既不能用于生長快速型肉禽或者6周內(nèi)準備上市的禽類使用，也不適宜口服；三是活疫苗也必須經(jīng)注射途徑免疫，而且不具有緩釋功能，免疫保護期短(3個月左右)，保護率低(75％左右)，導致養(yǎng)殖者不得不在產(chǎn)蛋階段反復用苗免疫，既影響了動物生產(chǎn)性能的充分發(fā)揮，也給養(yǎng)殖者造成了一定的經(jīng)濟損失。綜上所述，這些問題的存在不但制約了禽霍亂疫苗預防效力的充分發(fā)揮，影響家禽生產(chǎn)性能、生長速度和經(jīng)濟效益，而且對人類的身體健康構(gòu)成威脅。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是針對現(xiàn)有禽霍亂疫苗所存在的缺點，提供一種禽霍亂微膠囊疫苗的制備方法，引入微膠囊技術(shù)，解決禽霍亂疫苗在生產(chǎn)實踐中所出現(xiàn)的問題。
本發(fā)明的目的是通過以下技術(shù)途徑實現(xiàn)的，禽霍亂微膠囊疫苗的制備方法，包括如下步驟(1)將A型多殺性巴氏桿菌凍干菌種經(jīng)復蘇傳代后制成種子菌液，通過培養(yǎng)增殖獲得含菌數(shù)90億/ml以上的半成品；(2)半成品菌液經(jīng)滅活檢驗合格后與等體積2％的海藻酸鈉溶液經(jīng)分散儀均質(zhì)，進行初次乳化；(3)將上述乳液與等體積5％的殼聚糖溶液經(jīng)高壓乳化機進行二次乳化；(4)將最終制得的乳液經(jīng)噴霧干燥器脫水，制成微膠囊疫苗干粉。
所述的制成禽霍亂微膠囊疫苗干粉粒徑范圍在1-15um，每克含菌體2000-4000億。
種子菌液培養(yǎng)增殖菌數(shù)是采用扁瓶固體培養(yǎng)法或深層通氣發(fā)酵培養(yǎng)法。
本發(fā)明方法科學，簡單合理，生產(chǎn)穩(wěn)定可靠，產(chǎn)品收率達85％以上。成品具有抗原含量高、緩釋時間長、毒副作用低、成本低廉，使用方便、保存期長等優(yōu)點。制成的疫苗除了能刺激機體產(chǎn)生體液免疫的抗體IgG和IgM外，還能刺激機體產(chǎn)生較高的粘膜局部免疫抗體sIgA，以及在粘膜表面誘導有效的細胞毒性T細胞(CTL)應(yīng)答，因此可同時產(chǎn)生細胞免疫、體液免疫和粘膜免疫。用本方法生產(chǎn)的禽霍亂微膠囊疫苗干粉每克可含菌體2000-4000億。產(chǎn)品不加任何防腐劑，在常溫密封條件下可保存2年不變質(zhì)。


圖1是本發(fā)明采用扁瓶固體培養(yǎng)法制成的禽霍亂微膠囊疫苗掃描電鏡圖片；圖2是本發(fā)明采用深層通氣發(fā)酵培養(yǎng)法制成的禽霍亂微膠囊疫苗掃描電鏡圖片；具體實施方式
實施例一將A型多殺性巴氏桿菌凍干菌種經(jīng)復壯后，選取典型菌落培養(yǎng)后制成種子菌液，采用扁瓶固體培養(yǎng)法獲得含菌數(shù)120億/ml以上的半成品，經(jīng)滅活檢驗后與海藻酸鈉溶液混合進行初次乳化，再將此乳液與殼聚糖溶液混合進行二次乳化，將最終制得的乳液經(jīng)噴霧干燥器脫水，制成微膠囊疫苗干粉，每克疫苗含菌體3500億，疫苗粒徑范圍在2-9um(見附圖1)。試驗雞接種此疫苗后3天產(chǎn)生免疫應(yīng)答，免疫6個月內(nèi)，平均保護率在80.67％。
實施例二將A型多殺性巴氏桿菌凍干菌種經(jīng)復壯后，選取典型菌落培養(yǎng)后制成種子菌液，采用深層通氣發(fā)酵培養(yǎng)法獲得含菌數(shù)90億/ml以上的半成品，經(jīng)滅活檢驗后與海藻酸鈉溶液混合進行初次乳化，再將此乳液與殼聚糖溶液混合進行二次乳化，將最終制得的乳液經(jīng)噴霧干燥器脫水，制成微膠囊疫苗干粉，每克疫苗含菌體3000億，疫苗粒徑范圍在1-12um(見附圖2)。試驗雞接種此疫苗后3天產(chǎn)生免疫應(yīng)答，免疫6個月內(nèi)，平均保護率在76.32％。
權(quán)利要求
1.一種禽霍亂微膠囊疫苗的制備方法，其特征是包括如下步驟(1)將A型多殺性巴氏桿菌凍干菌種經(jīng)復蘇傳代后制成種子菌液，通過培養(yǎng)增殖獲得含菌數(shù)90億/ml以上的半成品；(2)半成品菌液經(jīng)滅活檢驗合格后與等體積2％的海藻酸鈉溶液經(jīng)分散儀均質(zhì)，進行初次乳化；(3)將上述乳液與等體積5％的殼聚糖溶液經(jīng)高壓乳化機進行二次乳化；(4)將最終制得的乳液經(jīng)噴霧干燥器脫水，制成微膠囊疫苗干粉。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的禽霍亂微膠囊疫苗的制備方法，其特征是所述的禽霍亂微膠囊疫苗干粉粒徑范圍在1-15um。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的禽霍亂微膠囊疫苗的制備方法，其特征是所述的禽霍亂微膠囊疫苗干粉每克含菌體2000-4000億。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種禽霍亂微膠囊疫苗的制備方法。該疫苗的制備方法是將A型多殺性巴氏桿菌凍干菌種經(jīng)復蘇傳代后制成種子菌液，通過培養(yǎng)增殖獲得含菌數(shù)90億/ml以上的半成品；將半成品菌液經(jīng)滅活檢驗合格后與等體積2％的海藻酸鈉溶液經(jīng)分散儀均質(zhì)，進行初次乳化；將上述乳液與等體積5％的殼聚糖溶液經(jīng)高壓乳化機進行二次乳化；將最終制得的乳液經(jīng)噴霧干燥器脫水，制成微膠囊疫苗干粉。該制備方法科學，簡單合理，生產(chǎn)穩(wěn)定可靠，產(chǎn)品收率達85％以上。采用了微囊化技術(shù)，成品具有抗原含量高、緩釋時間長、毒副作用低、成本低廉，使用方便、保存期長等優(yōu)點。
文檔編號A61K9/50GK101062409SQ20071002279
公開日2007年10月31日 申請日期2007年5月29日 優(yōu)先權(quán)日2007年5月29日
發(fā)明者劉學賢, 龔建森, 呂曉娟 申請人:江蘇省家禽科學研究所