專利名稱：乙酰膽堿酯酶抑制劑,其制備方法和其應用的制作方法
技術領域：
本發(fā)明屬于藥物技術領域，具體地，涉及一種乙酰膽堿酯酶抑制劑，其制備方法，以及該藥物活性化合物在制備抗乙酰膽堿酯酶抑制劑藥物中、在制備治療早老性疾呆癥藥物中、和制備抗中老年記憶和認知能力減退疾病藥物中的應用。
背景技術：
隨著世界人口平均壽命的逐年增加，老年性癡呆癥的發(fā)病率也隨著迅速上升，老年癡呆癥中有50％-70％為阿爾茨海默氏病(AD)，阿爾茨海默氏癥又稱早老年性癡呆癥，患者的腦功能逐漸率退，出現(xiàn)記憶力、抽象思維能力和語言表達能力減退、行動不便和其它功能性障礙，影響神經(jīng)系統(tǒng)功能，最終導致死亡。AD是一種以進行性認知和記憶力損傷為主的中樞神經(jīng)系統(tǒng)退行性疾病，估計全球世界阿爾茨海默氏病發(fā)病人數(shù)高達1200多萬。在發(fā)達國家此病是繼心血管病和腫瘤之后引起死亡的主要疾病。治療AD的藥物主要有膽堿能類藥物、神經(jīng)細胞代謝增強劑、抗氧化劑、鈣離子拮抗劑、神經(jīng)生長因子、雌激素、抗炎藥、抗β淀粉樣蛋白藥物等。目前臨床上治療該病最成功的方法就是通過提高中樞神經(jīng)系統(tǒng)內(nèi)膽堿能神經(jīng)遞質(zhì)——乙酰膽堿的水平，改善AD病人的癥狀。其中針對的通過抑制AChE對乙酰膽堿的降解作用而提高腦內(nèi)的乙酰膽堿的水平，是改善癥狀的有效途徑。臨床上有效的藥物如他克林(Cognex，tacrine)，安理申(Aricept，donepezil)，艾斯能(Exelon，rivastigmine)，加蘭他敏(Reminyl，galantamine)和石杉堿甲(Hup A)均為乙酰膽堿酯酶抑制劑，它們能有效升高腦內(nèi)乙酰膽堿水平，使人的認知功能得以改善。而作為乙酰膽堿酯酶抑制劑的著名天然產(chǎn)物石杉堿甲，其藥效得到了臨床的充分肯定，在此基礎上中國科學院上海藥物研究所合成一系列石杉堿甲的衍生物，發(fā)現(xiàn)了一個新型的抗老年癡呆的治療藥物“希普林”，目前在歐洲進入了三期臨床，預計2-3年以后可以得到批準上市。希普林是作為前藥，對AChE抑制劑活性和石杉堿甲相當，選擇性略高，但生物利用度明顯提高。
迄今為止，現(xiàn)有技術中未有化合物茴香醛-石杉堿甲縮醛亞胺或香蘭素-石杉堿甲縮醛亞胺或肉桂醛-石杉堿甲縮醛亞胺的乙酰膽堿酯酶的抑制活性相關的報道。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一種以化合物茴香醛-石杉堿甲縮醛亞胺或香蘭素-石杉堿甲縮醛亞胺或肉桂醛-石杉堿甲縮醛亞胺為活性化合物的乙酰膽堿酯酶抑制劑，它們的制備方法，以及它們在制備抗乙酰膽堿酯酶抑制劑藥物中、在制備治療早老性疾呆癥藥物中、和制備抗中老年記憶和認知能力減退疾病藥物中的應用。
為了實現(xiàn)本發(fā)明的目的，本發(fā)明提供了如下的技術方案乙酰膽堿酯酶抑制劑，含有化合物茴香醛-石杉堿甲縮醛亞胺或香蘭素-石杉堿甲縮醛亞胺或肉桂醛-石杉堿甲縮醛亞胺及可藥用載體和/或賦形劑。
制備上述藥物的方法，取石杉堿甲置于帶有冷凝管的三頸瓶中，加入無水甲醇攪拌并溶解，茴香醛或香蘭素或肉桂醛溶于無水甲醇中，滴入三頸瓶中，攪拌，50℃-55℃中加熱1小時，冷卻至室溫后，減壓濃縮，殘余物用CHCl3/CH3OH 40∶1，20∶1硅膠柱層析得活性化合物茴香醛-石杉堿甲縮醛亞胺或香蘭素-石杉堿甲縮醛亞胺或肉桂醛-石杉堿甲縮醛亞胺，再加入可藥用載體和/或賦形劑即可。
本發(fā)明化合物茴香醛-石杉堿甲縮醛亞胺或香蘭素-石杉堿甲縮醛亞胺或肉桂醛-石杉堿甲縮醛亞胺在制備抗乙酰膽堿酯酶抑制劑藥物中的應用，在制備治療早老性疾呆癥藥物中的應用，以及在制備抗中老年記憶和認知能力減退疾病藥物中的應用。
本發(fā)明技術方案的提出是受到希普林化學結(jié)構(gòu)的啟發(fā)，憑借對天然化合物的結(jié)構(gòu)及活性特點，試圖制備豆腐果苷的石杉堿甲衍生物，預期應該具有顯著的乙酰膽堿酯酶抑制活性，以及更加廣泛的對神經(jīng)系統(tǒng)的活性。試驗結(jié)果符合預期期望。
本發(fā)明化合物用作藥物時，可以加賦形劑以適當制劑直接使用，或與其他藥物組成復方制劑使用。其余為藥物學上可接受的對人和動物無毒和惰性的可藥用載體和/或賦形劑。藥用載體或賦形劑是藥物學上可接受的對人和動物無毒和惰性的固體、半固體和液體稀釋劑、填料以及藥物制品輔劑。將本發(fā)明的藥物組合物以單位體重服用量的形式使用。本發(fā)明的藥物可經(jīng)注射(靜注、肌注)和口服兩種形式給藥。使用量可根據(jù)用藥途徑、患者的年齡、體重、所治療的疾病的類型和嚴重程度等變化進行一次或多次使用。對成人來說，給藥量每天1～100mg比較合適。
本發(fā)明活性化合物茴香醛-石杉堿甲縮醛亞胺或香蘭素-石杉堿甲縮醛亞胺或肉桂醛-石杉堿甲縮醛亞胺的結(jié)構(gòu)式如下 化合物1(茴香醛-石杉堿甲縮醛亞胺) 化合物2(香蘭素-石杉堿甲縮醛亞胺) 化合物3(肉桂醛-石杉堿甲縮醛亞胺)
本發(fā)明涉及的原料化合物石杉堿甲的(HupA)的藥理及應用石杉堿甲[(-)Huperzine A]是20世紀80年代我國學者從民間草藥蛇足石杉(千層塔)(Huperzia serrata)發(fā)現(xiàn)的一種新型石松生物堿類有效成分單體；并于90年代一些學者成功開發(fā)成為治療阿爾茨海默病(Alzheimer’s disease，AD)的天然藥物，商品名為“雙益平”。與國際上同類AD治療藥物相比，石杉堿甲的化學結(jié)構(gòu)具有特異性，具有非常顯著的抑制腦內(nèi)乙酰膽堿酯酶和增強腦內(nèi)膽堿能神經(jīng)元的功能。同位素H3-石杉堿甲183ug/ml靜脈注射到小鼠15分鐘后，自顯影實驗結(jié)果顯示在外周及各腦區(qū)均有放射性藥物分布，3個小時后，主要分布在額、頂、顳葉皮質(zhì)，海馬，伏隔核，第四腦室基底部及腺垂體等區(qū)域，更加明顯。表明石杉堿甲十分易于進入中樞，并選擇性分布在與學習、記憶有關的神經(jīng)通路區(qū)域，對腦內(nèi)乙酰膽堿酯酶具有較高的選擇性抑制活性。
而石杉堿甲的神經(jīng)保護作用也十分明顯，研究表明細胞凋亡和氧化應激參與了AD和VD的病理過程，自由基引起的氧化損傷被認為是不同原因誘發(fā)神經(jīng)退行性變的最后通路，除了AD和VD之外，動脈粥樣硬化、腦缺血、癲癇、肌肉萎縮側(cè)索硬化、帕氏金森綜合癥等，都提示對抗細胞凋亡和氧化應激藥物可能阻止這些疾病的發(fā)展。石杉堿甲是通過提高抗氧化酶活力，具有顯著抗β-淀粉樣蛋白(β-amyloid，Aβ)毒性作用，能夠明顯改善老年大鼠衰老導致的氧化應激，其抗氧化作用有助于延緩、阻止AD發(fā)展。石杉堿甲不但可以提高超氧化歧化酶(SOD)的活力加速體內(nèi)自由基的清除，減少氧自由基導致的損傷。提示石杉堿甲不但與抑制乙酰膽堿酯酶活性有關，還與其改善抗氧自由基功能、減少自由基導致的損傷有關。說明石杉堿甲抗老年癡呆作用不但與抑制乙酰膽堿酯酶活性有關，與改善抗氧自由基功能、減少自由基導致的損傷有關。Aβ前體蛋白APP(分泌型APP)被認為具有神經(jīng)保護作用，大鼠側(cè)腦室內(nèi)注射Aβ后能夠?qū)е路置谛虯PP與PKC水平下降。石杉堿甲能夠明顯上調(diào)PKC水平，增加分泌型APP的表達，而起到神經(jīng)元保護作用，改善由于Aβ引起的學習、記憶障礙。
石杉堿甲對成年、老年猴有促智作用，對東莨菪堿、電擊、還己酰亞胺、亞硝酸鈉或二氧化碳誘發(fā)的認知障礙，腦內(nèi)注射膽堿能選擇性毒劑AF64A誘發(fā)的記憶障礙，側(cè)腦室內(nèi)注射Aβ1-40片段后誘發(fā)的大腦空間學習、記憶障礙，石杉堿甲均有改善作用。
石杉堿甲1994年應用于臨床之后，在改善中老年良性衰老性記憶減退和早老性癡呆導致的記憶和認知能力減退，及提高青少年記憶和學習成績提高取得明顯效果。
石杉堿甲(HupA)的結(jié)構(gòu)表征石杉堿甲，為白色或微黃色結(jié)晶性粉末，無臭，味微苦；C15H18N2O，分子量242.32；易溶于甲醇、氯仿，溶于乙醇，不溶于水；熔點224-229℃比旋光度[α]24.5D-150.4°(c＝0.498甲醇)；UVλmax231，313nm石杉堿甲的NMR數(shù)據(jù)1H NMRδ6.41(1H，d，J＝9.4，2-H)，7.86(1H，d，J＝9.4，3-H)，2.71(2H，ddd，J6α，6β＝16.8，J6α，7＝1.16，J6β，7＝0.52，6-H)，3.60(1H，brs，7-H)，5.39(1H，J＝4.6，8-H)，1.66(3H，d，J＝6.7，10-H)，5.47(3H，d，J＝6.7，11-H)，2.11(2H，s，14-H)，1.54(3H，s，16-H)，13.15(1H，s，NH).
13C NMRδ165.4(s，C-1)，116.9(d，C-2)，140.2(d，C-3)，122.8(s，C-4)，142.5(s，C-5)，35.2(t，C-6)，32.8(d，C-7)，124.2(d，C-8)，12.3(q，C-10)，111.2(d，C-11)，143.1(s，C-12)，54.3(s，C-13)，49.1(t，C-14)，134.1(s，C-15)，22.6(q，C-16).
化學結(jié)構(gòu)
化學名(5R，9R，11E)-5-氨基-11-亞乙基-5，6，9，10-四氫-7-甲基-5，9-亞甲環(huán)芳辛并-2(1H)-吡啶酮，(英文[5R-(5α，9β，11E)]-5-amino-11-ethylid-ene-5，6，9，10-tetrahydro-7-methyl-5，9-Methanocycloocta[b]pyridine-2(1H)-one)
具體實施例方式下面的實施例可以使本專業(yè)人員更全面地理解本發(fā)明，但不以任何方式限制本發(fā)明。
實施例1本發(fā)明化合物均通過希夫堿制備石杉堿甲(HupA)衍生物?；衔飿悠返姆治鰯?shù)據(jù)由以下儀器測定紅外光譜用Shimadzu IR-450型儀紅外光譜儀側(cè)定；核磁共振譜用Bruker AV-400型和DRX-500核磁共振儀測定；質(zhì)譜用VG-AUTOSPEC-3000型質(zhì)譜儀測定。層析硅膠(200-300目)及TLC硅膠板為青島海洋化工廠產(chǎn)品。
試驗中用的石杉堿甲(95％)購自長沙拓康生物技術有限公司。其余試劑購自百靈威化學試劑有限公司。
茴香醛與石杉堿甲縮醛反應制備茴香醛-石杉堿甲縮醛亞胺(1) 取48.4mg(0.2mmol)石杉堿甲(HupA)置于帶有冷凝管的三頸瓶中，加入4ml的無水甲醇攪拌并溶解。茴香醛54.4mg(0.4mmol)溶于4ml的無甲醇中，緩慢滴入三頸瓶中?；旌弦捍帕嚢璨⒓訜?，溫度維持在55℃左右，通過TLC檢測，表明反應已經(jīng)結(jié)束。反應物冷卻至室溫后，減壓濃縮，殘余物硅膠柱層析(CHCl3/CH3OH 40∶1，20∶1)，得到茴香醛-石杉堿甲縮醛亞胺(化合物1)(57.6mg)，收率80.0％。
茴香醛-石杉堿甲縮醛亞胺(化合物1)的表征化合物1為白色固體，分子式C23H24N2O2；熔點mp154-156℃；比旋光[α]20D2.90(c＝1.55，CHCl3)；(Positive)FABMS m/z(％)361[M+H]+(30)，341(5)，281(11)，147(40)，73(100)；1H NMRδ(500MHz，CDCl3)6.37(1H，d，J＝9.4，2-H)，7.14(1H，d，J＝9.4，3-H)，2.83(2H，m，6-H)，3.68(1H，brs，7-H)，5.48(1H，d，J＝7.3，8-H)，1.63(3H，d，J＝6.8，10-H)，5.19(1H，q，J＝6.7，11-H)，2.21(2H，d，J＝16.1，14-H)，1.26(3H，s，16-H)，7.81(d，1H，J＝8.7，2’-H)，6.97(d，1H，J＝8.7，5’-H)，7.73(d，1H，J＝8.7，6’-H)，8.35(1H，s，7’-H)，3.90(3H，s，4’-OCH3).
13C NMRδ(125MHz，CDCl3)165.3(s，C-1)，117.2(d，C-2)，141.2(d，C-3)，121.1(s，C-4)，143.4(s，C-5)，35.2(t，C-6)，32.8(d，C-7)，124.4(d，C-8)，12.5(q，C-10)，114.6(d，C-11)，139.0(s，C-12)，64.1(s，C-13)，45.9(t，C-14)，133.9(s，C-15)，22.9(q，C-16)；129.1(s，C-1’)，130.0(d，C-2’)，114.1(d，C-3’)，160.56(s，C-4’)，114.1(d，C-5’)，130.0(d，C-6’)，162.0(d，C-7’)，55.4(q，4’-CCH3).
根據(jù)起始原料的反應過程，及以上波譜數(shù)據(jù)化合物1的結(jié)構(gòu)可以被確定。
化合物1的化學名稱由于系統(tǒng)命名比較復雜，按天然產(chǎn)物習慣，命名化合物1為茴香醛-石杉堿甲縮醛亞胺。
實施例2香蘭素-石杉堿甲縮醛亞胺(化合物2)的制備所用原料和試劑同實施例1。
香蘭素與石杉堿甲縮醛反應制備香蘭素-石杉堿甲縮醛亞胺(2) 取24.2mg(0.1mmol)HupA置于帶有冷凝管的三頸瓶中，加入4ml的無水乙醇攪拌并溶解。香蘭素30.2mg(0.2mmol)溶于4ml的無水乙醇中，并加入0.25ml的三乙胺混合均勻后，緩慢滴入三頸瓶中?；旌弦捍帕嚢璨⒓訜幔瑴囟染S持在55℃左右，1小時后通過TLC檢測，表明反應已經(jīng)結(jié)束。反應物冷卻至室溫后，減壓濃縮，殘余物硅膠柱層析(CHCl3/CH3OH 40∶1，20∶1)，得到產(chǎn)物2(30.0mg)，收率79.0％。
香蘭素-石杉堿甲縮醛亞胺(2)的表征化合物2，黃色固體；分子式C23H24N2O3；熔點mp133-135℃；比旋光[α]20D-5.00(c＝1.20，CHCl3)；(Positive)FABMS m/z(％)377[M+H]+(40)，243(23)；1H NMRδ(400MHz，CDCl3)6.37(1H，d，J＝9.4，2-H)，7.14(1H，d，J＝9.4，3-H)，2.83(2H，dd，J1＝6.7，9.8，6-H)，3.70(1H，brs，7-H)，5.50(1H，d，J＝5.8，8-H)，1.64(3H，d，J＝7.1，10-H)，5.22(1H，q，J＝6.8，11-H)，2.24(2H，d，J＝16.1，14-H)，1.27(3H，s，16-H)；7.02(1H，d，J＝2.3，2’-H)，6.59(1H，d，J＝2.3，4’-H)，7.02(1H，d，J＝2.3，6’-H)，8.35(1H，s，7’-H)，3.86(6H，s，3′，5′-OCH3).
13C NMRδ(100MHz，CDCl3)165.3(s，C-1)，117.2(d，C-2)，141.0(d，C-3)，120.8(s，C-4)，143.5(s，C-5)，35.3(t，C-6)，32.8(t，C-7)，124.4(d，C-8)，12.5(q，C-10)，114.7(d，C-11)，138.2(s，C-12)，64.5(s，C-13)，45.9(t，C-14)，133.7(s，C-15)，22.9(q，C-16)；138.7(s，C-1’)，106.1(d，C-2’)，161.5(s，C-3’)，103.8(d，C-4’)，161.5(s，C-5’)，106.1(d，C-6’)，161.1(d，C-7’)，55.5(q，2xOCH3).
根據(jù)起始原料的反應過程，及以上波譜數(shù)據(jù)化合物2的結(jié)構(gòu)可以被確定。
化合物2的化學名稱由于系統(tǒng)命名比較復雜，按天然產(chǎn)物習慣，命名化合物2為香蘭素-石杉堿甲縮醛亞胺。
實施例3肉桂醛-石杉堿甲縮醛亞胺(化合物3)的制備所用原料和試劑同實施例1。
肉桂醛-與石杉堿甲縮醛反應制備肉桂醛-石杉堿甲縮醛亞胺(3) 取48.4mg(0.2mmol)HupA置于帶有冷凝管的三頸瓶中，加入4ml的無水甲醇攪拌并溶解。肉桂醛29.0mg(0.21mmol)，實際上60mg左右。溶于4ml的無甲醇中，緩慢滴入三頸瓶中。混合液磁力攪拌并加熱，溫度維持在55℃左右，通過TLC檢測，表明反應已經(jīng)結(jié)束。反應物冷卻至室溫后，減壓濃縮，殘余物硅膠柱層析(CHCl3/CH3OH 40∶1)，得到產(chǎn)物3(50.0mg)，收率70.0％。肉桂醛-石杉堿甲縮醛亞胺(3)的表征化合物3，白色固體；分子式C24H24N2O；熔點mp156-158℃；旋光比[α]20D8.12(c＝1.17，CHCl3)；(Positive)FABMS m/z(％)357[M+H]+(55)，226(8)，97(53)；1H NMRδ(400MHz，CDCl3)6.40(1H，d，J＝11.8，2-H)，7.13(1H，d，J＝11.8，3-H)，2.80(2H，m，6-H)，3.67(1H，brs，7-H)，5.46(1H，d，J＝4.2，8-H)，1.64(3H，d，J＝6.6，10-H)，5.14(1H，q，J＝6.8，11-H)，2.23(2H，d，J＝16.1，14-H)，1.33(3H，s，16-H)；7.45(1H，m，2’-H)，7.11(1H，m，3’-H)，7.35(1H，m，4’-H)，7.11(1H，m，5’-H)，7.45(1H，m，6’-H)，8.12(1H，d，J＝8.0，7’-H)，7.35(1H，overlap，8’-H)，9.71(1H，d，J＝4.6，9’-H).
13C NMRδ(100MHz，CDCl3)165.2(s，C-1)，117.3(d，C-2)，142.9(d，C-3)，122.7(s，C-4)，144.7(s，C-5)，36.0(t，C-6)，34.2(d，C-7)，125.3(d，C-8)，12.6(q，C-10)，115.6(d，C-11)，140.8(s，C-12)，65.7(s，C-13)，46.7(t，C-14)，135.5(s，C-15)，23.0(q，C-16)；135.5(s，C-1’)，128.8(d，C-2’)，127.9(d，C-3’)，129.4(d，C-4’)，127.9(d，C-5’)，128.8(d，C-6’)，143.1(d，C-7’)，128.4(s，C-8’)，163.8(d，C-9’).
根據(jù)起始原料的反應過程，及以上波譜數(shù)據(jù)化合物3的結(jié)構(gòu)可以被確定。
化合物3的化學名稱由于系統(tǒng)命名比較復雜，按天然產(chǎn)物習慣，命名化合物3為肉桂醛-石杉堿甲縮醛亞胺。
下述的制劑實施例是按實施例1的方法先制得化合物1和2和3，按常規(guī)制成注射液、粉針劑、口服液以及加入賦形劑的粉劑、制粒壓片、膠囊。
片劑按照本領域已知的方法制備片劑，每片含有下述成分化合物1或2或3 50mg乳糖 70mg硬脂酸鎂 3mg聚乙烯吡咯烷酮 7mg合計 130mg如果需要，片劑可用羥丙基甲基纖維素、滑石和著色劑進行膜包覆。
膠囊按照本領域已知的方法制備膠囊劑，每個膠囊中含有下述成分化合物1或2或3 50mg乳糖 70mg玉米淀粉 25mg硬脂酸鎂 1mg聚乙烯吡咯烷酮 4mg合計 150mg[制劑實施例3]注射劑按實施例1或2或3的方法先制得本發(fā)明化合物1或2或3，按本領域已知的方法制備注射劑，加注射用水，精濾，灌封滅菌制成注射液。
下述的試驗例可進一步說明本發(fā)明所述藥物化合物1和2和3及其藥物的有益效果，試驗例包括了本發(fā)明的藥效學試驗等。
試驗例1化合物1、2、3的乙酰膽堿酯酶抑制實驗實驗原理乙酰膽堿酯酶(acetylcholinesterase，AChE)的主要生理功能為通過快速水解神經(jīng)傳遞介質(zhì)乙酰膽堿(ACh)，中止膽堿能突觸中的脈沖傳遞，故AChE又稱乙酰膽堿水解酶(acetylcholine hydrolase)[2]。
CH3COOCH2CH2N+(CH3)3+ACh E→CH3CO-ACh E+HOCH2CH2N+(CH3)3→CH3COO-+H++ACh E乙酰膽堿酯酶與碘化硫代乙酰膽堿生成的產(chǎn)物，與5，5-二硫雙硝基苯甲酸生成一種黃色物質(zhì)，本模型利用該顏色反應，來測定待測樣品對乙酰膽堿酯酶的抑制程度。
材料乙酰膽堿酯酶(AChE)、陽性對照他克林(Tacrine)購于SIGMA公司，碘化硫代乙酰膽堿購于FLUKA公司，5，5-二硫雙硝基苯甲酸購于ACROS公司，其它均為國產(chǎn)分析純。
化合物1-3對乙酰膽堿酯酶的抑制活性測定取5支磷酸鹽緩沖溶液的梨型管，依次加入不同的1.0mM的樣品DMSO溶液，使其用DMSO補齊至刻度體積后，將濃度控制為50.0，25.0，12.5，6.25，3.13(×10-9M)。分別加入一定量的4mg/mL 5，5-二硫代雙(2-硝基苯甲酸)和乙酰膽堿酯酶溶液(0.1mg/ml)，并在37℃保溫15min后。立即加入一定量2mg/mL硫代乙酰膽堿溶液，搖勻后測其在λ＝412nm處的A值(An)。參比用0.1M pH 8.0磷酸鹽緩沖溶液。以未加樣品所測得的Acontrol值作為100個活力單位
相對酶活力＝(An/Acontrol)×100然后以酶的相對活力對抑制劑濃度作圖，根據(jù)抑制曲線求得各種化合物的IC50值(抑制酶活力50％時的抑制劑濃度)?；衔?-3對乙酰膽堿酯酶的抑制活性(表1)表1 化合物1-3的初步篩選活性結(jié)果

他克林為陽性對照，具體的濃度和抑制率為濃度1×10-3M，抑制率97.36％％；濃度1×10-4M，抑制率94.46％；濃度1×10-5M，抑制率90.93％；濃度1×10-6M，抑制率71.91％；濃度1×10-7M，抑制率17.25％；濃度1×10-8M，抑制率0。
可見，化合物1-3在1×10-5mol/L的濃度下，對乙酰膽堿酯酶的抑制率到達95.70％-87.84％，而在同一實驗中同一濃度下，石杉堿甲(HupA)對乙酰膽堿酯酶的抑制率到達81.9％，說明化合物1-3在此濃度下，對乙酰膽堿酯酶的抑制活性超過石杉堿甲(HupA)。鑒于化合物1-3對乙酰膽堿酯酶的抑制活性較強，進一步重復實驗測定了IC50(表2)
表2 化合物1-3對乙酰膽堿酯酶的抑制活性(IC50)

說明陽性對照用較他克林活性更強的p0407(乙酰水楊酸毒扁豆堿)。
篩選結(jié)果表明化合物1-3均具有顯著的乙酰膽堿酯酶的抑制活性；陽性對照p0407(乙酰水楊酸毒扁豆堿)和母體化合物石杉堿甲(HupA)的IC50(M)分別為2.13×10-8和1.14×10-8；而化合物1，2，3的IC50(M)分別為2.46×10-11，6.70×10-9和1.81×10-9；對乙酰膽堿酯酶的抑制活性要比臨床天然藥物石杉堿甲(HupA)明顯地更高。由于化合物1-3均以石杉堿甲(HupA)為母體化合物衍生而成的形成亞胺結(jié)構(gòu)的類似物，縮合配體分別為茴香醛、香蘭醛、肉桂醛這3個極為常見的天然有機化合物，化合物1-3的結(jié)構(gòu)上與乙酰膽堿酯酶更為匹配，抑制活性更強；而在生物體內(nèi)或酶體系中，化合物1-3能分解出活性臨床藥物石杉堿甲，形成前藥(潛藥)，因而是很有價值的活性結(jié)構(gòu)。
權(quán)利要求
1.乙酰膽堿酯酶抑制劑，含有化合物茴香醛-石杉堿甲縮醛亞胺或香蘭素-石杉堿甲縮醛亞胺或肉桂醛-石杉堿甲縮醛亞胺及可藥用載體和/或賦形劑。
2.制備權(quán)利要求1藥物的方法，其特征在于取石杉堿甲置于帶有冷凝管的三頸瓶中，加入無水甲醇攪拌并溶解，茴香醛或香蘭素或肉桂醛溶于無水甲醇中，滴入三頸瓶中，攪拌，50℃-55℃中加熱1小時，冷卻至室溫后，減壓濃縮，殘余物用CHCl3/CH3OH 40∶1，20∶1硅膠柱層析得活性化合物茴香醛-石杉堿甲縮醛亞胺或香蘭素-石杉堿甲縮醛亞胺或肉桂醛-石杉堿甲縮醛亞胺，再加入可藥用載體和/或賦形劑即可。
3.化合物茴香醛-石杉堿甲縮醛亞胺或香蘭素-石杉堿甲縮醛亞胺或肉桂醛-石杉堿甲縮醛亞胺在制備抗乙酰膽堿酯酶抑制劑藥物中的應用。
4.化合物茴香醛-石杉堿甲縮醛亞胺或香蘭素-石杉堿甲縮醛亞胺或肉桂醛-石杉堿甲縮醛亞胺在制備治療早老性疾呆癥藥物中的應用。
5.化合物茴香醛-石杉堿甲縮醛亞胺或香蘭素-石杉堿甲縮醛亞胺或肉桂醛-石杉堿甲縮醛亞胺在制備抗中老年記憶和認知能力減退疾病藥物中的應用。
全文摘要
提供一種以化合物茴香醛－石杉堿甲縮醛亞胺或香蘭素－石杉堿甲縮醛亞胺或肉桂醛－石杉堿甲縮醛亞胺為活性化合物的乙酰膽堿酯酶抑制劑，它們的制備方法，以及它們在制備抗乙酰膽堿酯酶抑制劑藥物中、在制備治療早老性疾呆癥藥物中、和制備抗中老年記憶和認知能力減退疾病藥物中的應用。
文檔編號A61P25/00GK101053567SQ20071006586
公開日2007年10月17日 申請日期2007年5月11日 優(yōu)先權(quán)日2007年5月11日
發(fā)明者邱明華, 顏健, 楊付梅, 易平, 周琳, 楊小生 申請人:中國科學院昆明植物研究所