專利名稱：：決明屬植物提取物及其提取方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及一種用于減肥的藥物組合物及其制備方法，該組合物含有一種以上蒽醌類化合物，具體地說，本發(fā)明涉及含有蒽醌苷和蒽醌苷元的植物提取物，即豆科植物決明子有效部位提取物及其提取方法。所述提取物可以制成用于治療肥胖的各種劑型的藥物、食物補(bǔ)充劑、功能食品或飲料以及化妝品等。
背景技術(shù)：
：肥胖是當(dāng)今世界上危害健康的重大問題之一，西方國家有20%的人口患有肥胖癥。美囯成人中65%超重，減肥及與肥胖相關(guān)保健及藥品的開支已達(dá)近千億美元。歐洲國家肥胖問題也日趨嚴(yán)重，在英國，43%的男人和34%的婦女超重，其中22%的男人和23%婦女需要治療。未成年人和發(fā)展中國家人口中肥胖病人也呈增長趨勢?，F(xiàn)有技術(shù)中，有關(guān)治療肥胖的藥物按其作用機(jī)理分類如下(1)通過其對腦的作用抑制能量(食物)攝取(或減少食欲)降低饑餓感；(2)通過脂肪末梢、胃腸作用機(jī)理抑制脂肪吸收，減低能量攝入；(3)經(jīng)末梢機(jī)理增大能量消耗；(4)刺激脂肪末梢代謝作用，降低脂肪質(zhì)量或減少甘油三酯合成。西布曲明(Sibutramine)和奧利司他(Orlistat)是美國食物藥品管理局(FDA)批準(zhǔn)治療肥胖的兩種藥物，目前占世界減肥藥物巿場份額最大。至于治療肥胖癥的天然產(chǎn)物，盡管楊氏等觀察到?jīng)Q明子水提取物能抑制大鼠體重增加(中國臨床康復(fù)雜志，2005，19:31),但其活性成分或組分未經(jīng)鑒別。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明要解決的技術(shù)問題在于提供一種治療肥胖癥的決明屬植物提取物及其提取方法本發(fā)明所述植物提取物，來源于一種豆科植物，按重量比含有i)至少1%的橙黃決明素(aurantio-obtusin)(高效液相測定)；ii)至少0.1%的鈍葉素(obtusifolin)(髙效液相測定)；以及iii)至少25《總蒽醌(比色法測定)所述植物優(yōu)選決明屬的1、鈍葉決明(Cassiaobtusifolia);或2、決明(Cassiatora)，以其種子為原料。所述提取物以橙黃決明素和鈍葉素為對照品進(jìn)行標(biāo)定。提取物中游離的橙黃決明素含量應(yīng)不少于1W高效液相測定)，如果進(jìn)行了水解處理，可以測得游離型和結(jié)合型橙黃決明素總量，該總量應(yīng)不少于2%，按1%遞增的話，橙黃決明素的含量可以是3%，4%，最好是不少于5%或更高，如6%，7%，8%,9%并可髙達(dá)10%或更高。提取物中游離的鈍葉素含量應(yīng)不少于O.1%(高效液相測定)，如果進(jìn)行了水解處理，可以測得游離型和結(jié)合型鈍葉素總量，該總量應(yīng)不少于0.2%,按0.1%遞增的話，橙黃決明素的含量可以是0.3%,0.4%,最好是不少于0.5%或更高，如0.6%,0.7%，并可高達(dá)0.8%或更高。含量測定采用髙效液相法，有關(guān)測定方法將會(huì)詳述。提取物中橙黃決明素和鈍葉素兩個(gè)對照品的含量應(yīng)具有一定的比例。按重量計(jì)，通常二者的比例可以是5:1至30:1,較為優(yōu)選的比例是5:1至16:1，更為優(yōu)選的比例是8:1和16:1,最優(yōu)選的比例是8:1。這些比例有可能與實(shí)例1中從乙醇浸裔中分離對照品時(shí)所得到的化合物比例有差異.分離對照品時(shí)將浸裔分成了A、B兩個(gè)部分，分別從A部分得到橙黃決明素，從B部分得到鈍葉素。而本發(fā)明只采用含有一定比例橙黃決明素和鈍葉素的一個(gè)部分提取物。本發(fā)明所述提取物中總蒽醌的含量應(yīng)不少于25%(重量比)，較為優(yōu)選的方案是不少于30%,如35%，40%，45%，50%或更髙(比色法測定)。所述提取物須經(jīng)過精制，提取物不超過原料重量的10%，比較優(yōu)選的得率是不超過4%至2%，最優(yōu)選的得率是不超過1%.該提取物可以制成各種劑型的藥物、保健食品或化妝品。本專利發(fā)明人經(jīng)解決如下問題后獲得本發(fā)明所述的獨(dú)特提取物。1建立系統(tǒng)的原材料的質(zhì)量控制方法；2探索出新的提取純化工藝；3確定提取物的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)；4建立原料和提取物中對照品的測定方法；5建立指紋圖譜；6制備對照品；7確定活性部位及其特性；8活性及制劑研究9毒理學(xué)研究所述劑型可以是散劑、沖劑、顆粒劑、溶液劑、懸浮液、片劑、膠囊、噴鼻劑、滴眼劑、注射劑，其中膠囊劑最為優(yōu)選。本品提取物干燥粉末的日服用量可以是50-5000邁g,最佳劑量為每日500mg。所用原料為決明屬植物鈍葉決明和決明。本專利發(fā)明人發(fā)現(xiàn)湖北產(chǎn)鈍葉決明為最優(yōu)原料，其中橙黃決明素的含量高于其他地區(qū)產(chǎn)品，達(dá)到0.08%。湖北周邊地區(qū)如陜西、安徽等地產(chǎn)鈍葉決明也可以作為原料。最佳藥用部位是種子。最佳提取方法是乙醇回流提取，然后用離心或熔劑如石油醚、氯仿等祛除油脂和樹脂或髙濃度乙醇祛除水溶性膠質(zhì).優(yōu)選樹脂吸附分離法對提取物進(jìn)行精制。采用天津農(nóng)藥廠生產(chǎn)的D101型樹脂。技術(shù)資料詳述項(xiàng)已明確最佳制備工藝條件，包括以下工序1.50-8054乙醇為溶劑提??；2.回流提取方法篩選；3.純化樹脂床的預(yù)處理；4.樹脂床參數(shù)篩選，如樹脂床徑髙比為l:5-1:50;5.洗脫除雜條件篩選，如體積/濃度/速度。先用2倍樹脂床體積的蒸餾水洗，繼以1-8倍樹脂床體積的20%乙醇洗，速度為1-5倍樹脂床體積/小時(shí)。6.蒽醌類成分分離條件控制，即用1-10倍樹脂床體積的70%乙醇洗脫，速度為l-5倍樹脂床體積/小時(shí)。本發(fā)明提取物可進(jìn)一步應(yīng)用于藥品、食品和化妝品生產(chǎn)，其中優(yōu)選的制劑是提取物粉末直接裝入膠囊。本發(fā)明進(jìn)一步說明該豆科植物提取物在制備減肥藥劑、化妝品和保健品等產(chǎn)品方面的應(yīng)用。本專利發(fā)明人對決明子進(jìn)行了以下系統(tǒng)研究1、資源調(diào)查和生藥學(xué)研究；2、有效成分分離鑒定及活性測試；3、藥理和毒理研究；4、藥學(xué)研究；5、質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究；6、制劑研究，確證了中國產(chǎn)決明子在治療肥胖癥方面的有效性。圖1是從決明子中分離對照品橙黃決明素(aurantio-obtusin)和鈍葉素(obtusifolin)的流程圖；圖2是對照品高效液相圖；圖3是本發(fā)明的一種提取工藝流程圖；圖4是提取物高效液相圖；'圖5是提取物薄層層析圖(365nm)，其中l(wèi)橙黃決明素，2鈍葉素，3樣品1，4樣品2，5樣品3，6樣品4，7橙黃決明素，8鈍葉素；圖6是提取物薄層層析圖(254nm)，其中l(wèi)橙黃決明素，2鈍葉素，3樣品1,4樣品2，5樣品3，6樣品4，7橙黃決明素，8鈍葉素。具體實(shí)施方式以下結(jié)合附圖對有關(guān)的實(shí)施例作進(jìn)一步詳述。1.0藥材原料1.1背景資料決明子(包括鈍葉決明和決明)含蒽醌、內(nèi)酯、氨基酸和微量元素。主要有效成分是蒽醌類，含有0.8-1.6%蒽醌苷和0.06-0.2%的苷元。決明子通常指鈍葉決明(Cassiaobtusifolia)和決明(Cassiatora)的成熟種子，資源豐富。望江南.(Cassiaoccidentalis)的種子在南方個(gè)別地區(qū)作為決明子藥用。通常決明分布于南方，野生為主。決明在長江以北沒有分布，即使有也不會(huì)開花結(jié)果。鈍葉決明全國都有分布，南、北方都有種植。文獻(xiàn)記載上述3個(gè)品種古時(shí)候都作決明子用。早期決明子化學(xué)成分研究都是曰本科學(xué)家做的，采用日本產(chǎn)決明子為原料。從曰本決明子中分離到的一些主要成分，如大黃酸(rhein)，蘆薈大黃素(aloe-emodin)，在中國產(chǎn)決明子中未能檢出。除少數(shù)測定決明子中大黃蒽醌類成分含量研究外，至今對中國產(chǎn)決明子化學(xué)成分分離和鑒別的研究還很少。包括中國藥典和當(dāng)前新藥研究中有關(guān)決明子藥材和制劑的質(zhì)量控制指標(biāo)都停留在測定大黃酚和總蒽醌這個(gè)層面，沒有特徑性和專一性。本專利發(fā)明人對決明子化學(xué)成分進(jìn)行了系統(tǒng)研究，發(fā)現(xiàn)決明子主要含有大黃酚(chrysophanol)、大黃素甲醚(physcion)、鈍葉素(obtusifolin)、大黃素(eraodin)、橙黃決明素(aruantio-obtusin)等成分。其中鈍葉素和橙黃決明素這兩種成分是中囯產(chǎn)決明子的特徑成分，而橙黃決明素是主要成分，并且具有很好的減肥作用。1.2藥材選擇本專利發(fā)明人研究發(fā)現(xiàn)，鈍葉決明中有效成分比決明中的有效成分含量高，所以選擇鈍葉決明作為研究用藥材。不同地區(qū)產(chǎn)決明子有效成分橙黃決明素及總蒽醌含量差異很大。選擇廣西、安徽和湖北產(chǎn)決明子做比較研究，篩選藥材產(chǎn)區(qū)。結(jié)果如表3所示。表3不同產(chǎn)地決明子有效成分含量測定結(jié)果<table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table>如表3所示，不同產(chǎn)地原料中有效成分有差異，湖北產(chǎn)決明子有效成分含量較高。2.0化合物所用對照品i)橙黃決明素<formula>formulaseeoriginaldocumentpage7</formula>OHnOCH3化學(xué)文摘登記號碼(RegistryNumber):67979-25-3ii)鈍葉素化學(xué)文摘登記號碼(RegistryNumber):477-85-03.0提取3.1橙黃決明素和鈍葉素的提取分離參照圖l,取lkg決明子用乙醇提取，過濾，回收乙醇，得浸貴(190g)。繼以氯仿萃取，得氯仿萃取物A和母液B。A(20g)以硅膠柱層析，氯仿甲醇梯度洗脫，甲醇結(jié)晶，得O.lg鈍葉素。B經(jīng)大孔樹脂吸附，乙酵洗脫，洗出物進(jìn)一步硅膠柱層析，氯仿曱醇梯度洗脫，甲醇結(jié)晶，得0.8g橙黃決明素。3.1.1定量分析3.1.2儀器試劑安捷倫1100型髙效液相儀(HPLCAgilent1100),二極管陣列檢測器(DAD)。甲醇、乙氟(色譜純)，去離子水、.磷酸(分析純)。3.1.3方法與結(jié)果梯度洗脫，見表4。表4流動(dòng)相梯度<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>色譜柱碳18鍵合相層析柱(lunarC18)柱溫25°C運(yùn)行時(shí)間25mins.3.1.4對照品溶液制備精密稱取橙黃決明素和鈍葉素，分別置于10ml容量瓶中，加甲醇至刻度并溶解,即得。鈍葉素保留時(shí)間為14.51分，橙黃決明素保留時(shí)間為11.48分(圖2)。表5對照品線性范圍考察化合物線性關(guān)系相關(guān)系數(shù)范圍(fig)橙黃決明素Y=93.3885334x-15.3283630.999990.092-1.580鈍葉素Y=123.192564x-3.48917020.999950.008~0.5803.2提取物制備(最佳工藝)參照圖3本發(fā)明提取物的制備方法，包括如下步驟3.2.1決明子(25Kg)粉碎成粗粉；3.2.2用4-20倍50-80%乙醇回流提取0.5-3小時(shí)；3.2.3重復(fù)2-4次；3.2.4過濾,減壓回收乙醇，得粗提取物；3.2.5離心，除去雜質(zhì)和上層油脂；3.2.6加蒸餾水調(diào)節(jié)濃度至1:1-1:10(藥材溶液)；3.2.7上D101大孔樹脂柱，樹脂柱徑高比為1:2-20;3.2.8上樣量不超過l-4倍樹脂床體積，流速為l-2倍樹脂床體積/小時(shí)；3.2.9先用1-8倍樹脂床體積蒸餾水洗脫，然后以20%乙醇洗脫，流速均為1-5倍樹脂床體積；3.2.10最后以l-10倍樹脂床體積的70%乙醇洗脫，流速為l-5倍樹脂床體積；3.2.11收集70%乙醇洗脫液，減壓回收乙醇，千燥；3.2.12將所得干浸裔用95%乙醇溶解，過濾，回收乙醇至稠裔狀；3.2.13真空千燥，粉碎，即得精致提取物。所得提取物為深棕褐色粉末，味苦。溶于水、乙醇、甲醇。該最佳工藝是經(jīng)以下篩選實(shí)驗(yàn)研究而得出的。3.3.乙醉濃度選擇試驗(yàn)按10%梯度用0%-80%乙醇提取，篩選最佳條件。方法稱取50g決明子粗粉分別加300ml試驗(yàn)濃度的乙醇，回流提取1.5小時(shí),重復(fù)3次，過濾，調(diào)節(jié)體積為1000ml。測定測定橙黃決明素、總蒽醌的含量和浸貴重量。結(jié)果見表6。表6.乙醇濃度對決明子提取效率的影響<table>tableseeoriginaldocumentpage10</column></row><table>表6結(jié)果顯示，隨著乙酵濃度增加，橙黃決明素和總蒽醌含量增加，浸貴重量降低。綜合最佳條件為60%乙醇。3.4乙醇提取方法篩選對常用3種乙醇提取方法，即滲漉法、冷浸法和回流法進(jìn)行比較^f究。滲漉法稱取50g決明子粗粉，加100ml60%乙醇，放置12小時(shí)，以500ml乙醇滲漉，收集乙醇滲漉液，用乙醇調(diào)節(jié)至1000ml。冷浸法稱取50g決明子粗粉，加100ml60%乙醇，放置12小時(shí)，過濾；再以500ml乙醇分兩次浸泡，每次12小時(shí)，過濾，合并所有濾液，用乙醇調(diào)節(jié)至1000ml?；亓鞣ǚQ取50g決明子粗粉，加300ml60%乙醇，回流提取1.5小時(shí)，過濾，殘?jiān)儆?00ml60%乙醇，回流提取l小時(shí)，過濾，合并兩次濾液，用乙醇調(diào)節(jié)至1000ml。結(jié)果見表7。表7不同提取方法對決明子提取效率的影響<table>tableseeoriginaldocumentpage11</column></row><table>可見，回流提取法所得浸有及有效成分含量均高于其他提取法。3.5溶劑用量、回流時(shí)間和提取次數(shù)分析經(jīng)正交試驗(yàn)研究，只有提取次數(shù)對提取效率有顯著影響。最佳提取工藝是用8倍量乙醇，回流1小時(shí)，提取3次。3.6純化除去油脂后，粗浸裔用下述方法純化3.6.1用D101型大孔樹脂柱對粗浸裔進(jìn)行分離純化；3.6.2樹脂柱徑高比為1:20;3.6.3以l倍樹脂床體積/小時(shí)的速度加入1.4倍樹脂床體積的提取液，動(dòng)態(tài)吸附；3.6.4先用2倍樹脂床體積(2BV)的蒸餾水洗脫，繼以4倍樹脂床體積20%乙醇以2倍樹脂床體積/小時(shí)的速度洗脫。(除去水溶性膠質(zhì))；3.6.5以4倍樹脂床體積(4BV)70%乙醇以2倍樹脂床體積/小時(shí)的速度洗脫，收集7(W乙醇洗脫液；3.6.6回收乙醇并將殘余物真空干燥；3.6.7所得干浸裔以95%乙醇溶解，過濾，減壓回收乙醇；3.6.860°C條件下真空干燥，粉碎成適當(dāng)大小的顆粒。詳細(xì)的工藝參數(shù)篩選研究資料如下3.7樹脂選擇比較幾種樹脂在動(dòng)態(tài)和靜態(tài)條件下的吸附能力，以吸附和解吸附效率為考察指標(biāo)。3.7.1樹脂前處理洗凈樹脂以祛除樹脂中的殘留物。先加1/2樹脂體積量的95W乙醇于層析柱中，然后加入大孔樹脂，調(diào)節(jié)乙醇量至高出樹脂頂端O.3米，浸泡24小時(shí)。用2BV(BV，即BEDVOLUME的縮寫，樹脂床體積，下同)95。/。乙醇以2BV/h速度沖洗樹脂，然后再用95%乙醇浸泡樹脂4-5小時(shí)，95y。乙醇以2BV/h速度沖洗，直至洗出液用5倍量水稀釋時(shí)不變渾濁為止。繼以蒸餾水洗至洗出液無醇味。再用2BV5%HC1以4-6BV/h沖洗，放置2-4小時(shí)后，用蒸館水沖洗至中性。再用2BV2%NaOHHC1以4-6BV/h沖洗，放置2-4小時(shí)后，用蒸餾水沖洗至中性。3.7.2靜態(tài)吸附試驗(yàn)方法將所選擇的實(shí)驗(yàn)用5種樹脂進(jìn)行處理并除去表面水分。稱取一定量的樹脂于具塞燒瓶中，加入過量試驗(yàn)溶液，充分振搖24小時(shí)，使蒽醌類成分在樹脂上充分吸附。過濾，得濾液1。加80ml95y。乙醇，充分振搖24小時(shí)使之解吸附，然后過濾，得濾液2。測定濾液1和濾液2中蒽醌的含量，計(jì)算吸附率和解吸附率。結(jié)果見表8。表8.樹脂對蒽醌的靜態(tài)吸附和解吸附試驗(yàn)結(jié)果<table>tableseeoriginaldocumentpage12</column></row><table>表8結(jié)果顯示，靜態(tài)吸附試驗(yàn)中D101樹脂具有最佳吸附能力和解吸附性能。3.7.3動(dòng)態(tài)吸附試驗(yàn)方法樹脂柱洗脫液以HPLC方法檢測。將試驗(yàn)液加入樹脂柱至流出液檢出橙黃決明素為止。紀(jì)錄加入試驗(yàn)液的體積。先用蒸餾水洗脫至洗出液顏色淺，收集洗出液；繼以95%乙醇洗脫至洗出液顏色淺，收集乙醇洗脫液。測定以上兩種洗脫液中蒽醌類成分的含量，分別計(jì)算吸附率和解吸附率。結(jié)果見表9。表9樹脂對蒽醌的動(dòng)態(tài)吸附和解吸附試驗(yàn)結(jié)果<table>tableseeoriginaldocumentpage13</column></row><table>表9結(jié)果顯示，動(dòng)態(tài)吸附試驗(yàn)中D101樹脂具有最佳吸附能力和解吸附性能。動(dòng)態(tài)和靜態(tài)試驗(yàn)結(jié)果均表明D101型大孔吸附樹脂比其他樹脂具有更好的吸附和解吸附性能，適合用于分離純化初提取物,，3.8柱分離純化技術(shù)參數(shù)篩選上柱樣品溶液濃度于裝有50g處理好的樹脂柱中加入不同濃度的樣品溶液(藥材溶液)使其進(jìn)行動(dòng)態(tài)吸附，測定吸附蒽醌的量。結(jié)果見表IO。表10不同樣品溶液濃度DIOI大孔樹脂對決明子蒽靦吸附作用的影響<table>tableseeoriginaldocumentpage13</column></row><table>上表結(jié)果表明隨著濃度比例增加樹脂吸附率提高，當(dāng)濃度比達(dá)l:5(藥材溶液)時(shí)吸附率不再增加。3.9.1流速的影響將樣品溶液分別以l，2，3BV/h的速度通過裝有50g處理好的D101樹脂柱，進(jìn)行動(dòng)態(tài)吸附。以蒸餾水洗脫后繼以95%乙醇洗脫，收集乙醇洗脫液并測定蒽醌的含量，結(jié)果見表11。表11.流速對DIOI大孔樹脂吸附?jīng)Q明慈醌效率的影響<table>tableseeoriginaldocumentpage14</column></row><table>結(jié)果顯示速度越慢吸附率越高。選擇1BV速度。3.9.2泄漏曲線測定同動(dòng)態(tài)吸附條件，將樣品溶液加入裝有50g處理好的D101大孔樹脂柱，以10ml/組分量收集洗出液，共收魚10份，用0.2,薄膜過濾，用HPLC方法測定橙黃決明素的含量，結(jié)果見表12。表12.決明子提取物在DIOI大孔樹脂吸附過程中的泄漏曲線<table>tableseeoriginaldocumentpage14</column></row><table>從上表結(jié)果可知，當(dāng)加入樣品溶液超過1.4BV時(shí)開始出現(xiàn)泄漏。3.10洗脫液濃度篩選同動(dòng)態(tài)吸附條件，將樣品溶液加入裝有50g處理好的4根D101大孔樹脂柱，先以蒸餾水分別洗脫至顏色淺，繼分別以30%，50%，70%和90%洗脫至顏色淺，收集乙醇洗脫液，測定蒽靦含量。結(jié)果見表13。表13不同乙醇濃度對蒽醌的洗脫效果<table>tableseeoriginaldocumentpage14</column></row><table>結(jié)果顯示75%乙醇最佳。3.11洗脫速度篩選在裝有50g處理好的3根樹脂柱中動(dòng)態(tài)吸附樣品溶液，然后用70%乙醇分別以1、2、3BV/h速度洗脫，測定洗脫液中蒽醌的量。結(jié)果見表14。表14.不同洗脫速度對蒽醌洗脫效率的影響<table>tableseeoriginaldocumentpage15</column></row><table>上表結(jié)果顯示，洗脫速度越慢洗脫效率越髙，但lBV/小時(shí)和2BV/小時(shí)速度的洗脫效率差異不大，從生產(chǎn)實(shí)際需要考慮，2BV/小時(shí)為最佳洗脫速度。3.12解吸附曲線以上述優(yōu)選條件，將樣品溶液加入到裝有50g處理好的D101樹脂柱中，水洗后，乙醇洗脫。收集乙醇洗脫液，每份10m，第15份之后，每份20ml。用HPLC方法測定橙黃決明素的含量，結(jié)果見表15。表15決明子提取物中橙黃決明素在DIOI大孔樹脂上界吸附曲線測定<table>tableseeoriginaldocumentpage15</column></row><table>上表可知，第18組分洗脫液中橙黃決明素的含量已經(jīng)很低，所以確定18號(200ml)為洗脫終點(diǎn)，即用4BV7094乙醇洗脫。3.13pH對葸醌收率的影響將試驗(yàn)溶液分別調(diào)節(jié)pH4，5，and6(初提取液為pH5),考察PH對蒽醌含量的影響，結(jié)果見表16。表16pH對蒽醌收率的影響<table>tableseeoriginaldocumentpage15</column></row><table>從上表可知pH4和5產(chǎn)生效果沒有明顯差別，都比pH6效果更好，因此，不需要調(diào)節(jié)pH。3.14樹脂床徑高比對蒽醌收率的影響基于上述吸附和洗脫條件，取3根柱分別裝載17ml、34ml、50ml處理好的大孔樹脂使徑高比分別為1:5、1:10、1:20。分別加入1.4BV樣品溶液，照以上選擇的方法洗脫和測定，結(jié)果見表17。-表17.樹脂床徑高比對蒽醌收率的影響<table>tableseeoriginaldocumentpage16</column></row><table>結(jié)果顯示徑高比達(dá)l:20時(shí)蒽醌收率高。3.15再純化決明子含有水溶性膠質(zhì)。這些膠質(zhì)可以用水或20%乙醇預(yù)先沖洗吸附了提取液的樹脂床而除去，蒽醌類成分在這種條件下得以保留。此外，用95%乙醇復(fù)溶浸奢可以除去殘余的水溶性膠質(zhì)。3.16中試提取試驗(yàn)基于上述條件進(jìn)行3批中試實(shí)驗(yàn)，考察所選參數(shù)及規(guī)?；a(chǎn)的適應(yīng)性。結(jié)果見表18。表18決明子提取物中試試驗(yàn)結(jié)果<table>tableseeoriginaldocumentpage16</column></row><table>以上工藝條件可以生產(chǎn)出含總蒽醌大于45%和橙黃決明素含量髙于4.5%的提取物。詳細(xì)的質(zhì)量技術(shù)指標(biāo)如以下4.0項(xiàng)所述。4.0質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)本品是鈍葉決明種子提取物，制備方法如上所述，含橙黃決明素不少于4.5%,鈍葉素不少于0.25%,總蒽醌不少于50%。中試產(chǎn)品顯示其中總蒽醌達(dá)50%,橙黃決明素含量達(dá)5.2%,鈍葉素含量達(dá)O.6%。.本品可依據(jù)3.1.1—3.1.4所述HPLC方法鑒別。稱取10mg樣品，加20ml甲醇和1()ml5仰Cl，回流30分鐘，以30ml乙醚萃取，揮干乙醚，殘?jiān)约状既芙猓ㄈ苤?5ral，0.22pm膜過濾。注入20nl樣品溶液于HPLC儀，測定峰面積，計(jì)算，結(jié)果如下(mg/g)。表19提取物含量測定結(jié)果樣品號.橙黃決明素鈍葉素157.5996.785245.1785.231352.4336.189平均51.7376.068HPLC圖譜見圖4.亦可用TLC鑒別.方法4批樣品，各取10mg加10ml甲酵超聲60分鐘溶解，過濾，得樣品溶液。取橙黃決明素和鈍葉素各適量，用甲醇溶解，得對照品溶液。將樣品溶液和對照品溶液各lnl點(diǎn)于同一薄層板上，以石油醚(30。C-60。C):正己烷甲酸乙酯甲酸(1:3:1.5:0.01)為展開劑展開，取出，晾干，分別于紫外光365nm和254nm下檢示。更詳細(xì)的技術(shù)指標(biāo)如下1.外觀深棕褐色粉末，味苦2.橙黃決明素含量>5%(HPLC)3.鈍葉素含量>0.5%(HPLC)4.干燥失重<9.0%(lg，105。C，2h)5.重金屬檢查17(1)重金屬(2)砷6.細(xì)菌總數(shù)7.霉菌8.致病菌9.組分<10ppm<1ppm<3xl03cfu/g<1xl03cfu/g未檢出100%鈍葉決明子提取物本品為干浸奢粉，可直接用于填充膠囊。每粒膠囊含250mg提取物，每曰服用500mg，便于服用。，動(dòng)物試驗(yàn)結(jié)果顯示本品具有減肥作用。5.0藥效試驗(yàn)(減肥)材料與方法樣品樣品按以上所述制備方法制備，為深棕褐色粉末.實(shí)驗(yàn)動(dòng)物和飼料SD大鼠75只，雄性，體重140g士10g。由華西實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。實(shí)驗(yàn)環(huán)境為溫度22-，相對濕度65-70%。兩種飼料i)基礎(chǔ)飼料大麥粉20%、脫水蔬菜10%、豆粉20%、酵母1%、骨粉1%、玉米粉15%、麩皮16%、魚粉10%、食鹽2%。ii)高脂高營養(yǎng)伺料在100g基礎(chǔ)飼料中再加入；奶粉10g、豬油10g、雞蛋1只、濃魚肝油10滴、新鮮黃豆芽50g。劑量選擇根據(jù)人體推薦攝入劑量0.5-0.6g/人/日的5倍、15倍和30倍設(shè)三劑量組即0.05g/kg.bw/d(即克/公斤體重/天，下同)組、0.15g/kg.bw/d組和0.30g/kg.bw/d組。主要儀器與試劑電子天平(賽多利斯，BL610)實(shí)驗(yàn)方法隨機(jī)將大鼠分成5組1、正常對照組；2、高脂飼料組；和3、3個(gè)試驗(yàn)組。試驗(yàn)組分別給予0.05g/kg.bw/d,0.15g/kg.bw/d和0.30g/kg.bw/d的提取物。正常組給于基礎(chǔ)伺料；其他組給于髙脂高營養(yǎng)飼料。各組動(dòng)物均自由進(jìn)食和飲水。試驗(yàn)組每天灌胃給藥l次，其他組灌胃給水l次，持續(xù)36天，然后處死動(dòng)物。觀察指標(biāo)體重、體內(nèi)脂肪重量(睪丸及腎周圍脂肪墊)、體脂/體重比和副作用。數(shù)據(jù)分析采用《中國醫(yī)學(xué)百科全書-醫(yī)學(xué)統(tǒng)計(jì)學(xué)》統(tǒng)計(jì)軟件包。進(jìn)行方差分析。結(jié)果對體重的影響見表20。表20對大鼠體重的影響(X+SD)<table>tableseeoriginaldocumentpage19</column></row><table>與正常對照組比具有顯著性差異，"P〈0.01;*:P<0.05。與肥胖對照組比具有顯著性差異，:P<0.01;:P<0.05。從表20可見，實(shí)驗(yàn)中期以后，喂飼髙脂肪高營養(yǎng)飼料的大鼠，其體重顯著髙于正常對照組(P<0.01或P<0.05)，說明肥胖動(dòng)力模型成功；各實(shí)驗(yàn)組灌胃不同劑量的受試物36天后，0.05g/kg.bw/d和0.15g/kg.bw/d兩個(gè)劑量組動(dòng)物體重和體重增加量顯著低于肥胖對照組(P<0.05)。未見腹瀉、脫毛等副作用，說明該受試物可降低動(dòng)物的體重。對大鼠物理脂標(biāo)的影響見表21。表21對大鼠物理指標(biāo)的影響(X+SD)<table>tableseeoriginaldocumentpage20</column></row><table>與正常對照組比具有顯著性差異，**:P<0.01。與肥胖對照組比具有顯著性差異，:P<0.01;P<0.05。表21可見，試驗(yàn)結(jié)束后，肥胖對照組的體脂重量和體脂/體重比顯著高于正常對照組(P〈0.01),說明肥胖動(dòng)物模型成功；試驗(yàn)結(jié)果結(jié)東后，0.05g/kg.bw/d和0.15g/kg.bw/d兩個(gè)劑量組動(dòng)物的體脂重量和三個(gè)劑量組動(dòng)物的體脂/體重比顯著低于肥胖對照組(P<0.01或P<0.05)。說明該受試物可降低動(dòng)物的體脂重量。結(jié)論肥胖對照組動(dòng)物的體重、體脂重和體脂/體重比均顯著高于正常對照組(P<0.01或P<0.05);0.05g/kg.bw/d和0.15g/kg.bw/d兩個(gè)試驗(yàn)組動(dòng)物的體重和體脂重、三個(gè)試驗(yàn)組動(dòng)物的體脂/體重比均顯著低于肥胖對照組(P〈0.01或P〈0.05),說明本品在動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中具有減肥作用。6.0毒理學(xué)研究6.1急性毒性試驗(yàn)小鼠灌胃提取物每次最大耐受量為16.50g/kg，兩次灌胃(間隔4小時(shí))LD50為20.84g/kg,相當(dāng)于2511臨床劑量(公斤/體重)。因此，成人每天服用0.5g提取物是安全的。6.2長期毒性試驗(yàn)大鼠灌胃提取物26周，并分別于第4、16、26周藥后處死部分試驗(yàn)鼠進(jìn)行生化、器官指數(shù)和病理學(xué)檢查。結(jié)果顯示試驗(yàn)鼠與正常鼠之間各項(xiàng)組織病理學(xué)檢查結(jié)果沒有差異。權(quán)利要求1.一種決明屬植物提取物，其特征是按重量比含有i)至少1％的橙黃決明素；ii)至少0.05％的鈍葉素；和iii)至少10％的總蒽醌。全文摘要本發(fā)明涉及一種用于治療肥胖的決明屬植物提取物及其提取方法，該提取物由一種或多種蒽醌組成，按重量比含有i)至少1％橙黃決明素；ii)至少0.05％鈍葉素；和iii)至少10％總蒽醌)。此外，本發(fā)明還公開了從決明屬植物中提取藥用活性組分的方法。本發(fā)明的提取物是一種天然的減肥組合物，可制成各種劑型的藥物、食物補(bǔ)充劑、功能食品或飲料以及化妝品等，具有很好的減肥作用。文檔編號A61K36/482GK101224233SQ20071007289公開日2008年7月23日申請日期2007年1月19日優(yōu)先權(quán)日2007年1月19日發(fā)明者陳南明,黃本東申請人:重慶生態(tài)藥物研究所