專利名稱：紅細胞生成素改善化療誘導的體內(nèi)毒性的制作方法
技術領域：
本發(fā)明涉及M^器官細胞毒性，例如在服用細胞毒性劑(如棚中瘤劑)試 驗膽體內(nèi)的肺部毒性的施。
技術背景紅細胞生成素(EPO)是一種在腎臟中產(chǎn)生的糖蛋白，劍賺紅細,生 (紅細JK生)的主要激素。EPO刺激骨髓中定型紅細胞祖細胞的分裂和分化。 正常的血漿紅細胞生成素7jC平的范圍從0.01至0.03單位/斬，在^f(^貧 JW可働Q到高達100—1000倍。參見Graber和Krantz,醫(yī)f^述(AraiRevMed) 29: 51 (1978); Eschbach和Adamson,國際腎Jt^志(Ki—M.) 28: 1 (1985)。 重組的人紅細胞生成素(rHuEpo或epoetin a )可以Epogen (Amgen公司， Thousand Oaks， CA)和Procrit (Ortho生,術公司，Raritan, NJ)的形式 商購獲得。EPO常常用于增加由于其疾病或由于^ffl化療藥物進行治療而貧血 的癌癥患者的血細胞比容。EPO棚來治療貧血，包括與癌癥化療、慢性腎衰 竭、惡'鵬中瘤、離和幼^IWS性關節(jié)炎、血紅蛋白合成障礙、早熟以及HIV 感染的齊多夫定(zidovudine)治療相關的貧血。肺纖維化是由于化療藥物弓胞的肺部毒性的最普遍彭見。肺纖維化是間質(zhì) 腔中聚合纖維蛋白的病理沉積。其精確的病理生理學還不能完全理解，但是由 于暴M^外原因子中，在慢性炎癥情況下常?？梢钥吹竭@種癥狀。盡管肺部的 損害與許多拗中瘤劑有關，博來霉素、亞硝基脲、絲裂霉素、白消安、P彌胞 苷(ara—C)、白細胞介素-2和氨甲蝶呤是與肺部毒性最常相關的棚中瘤劑。
所以，需對湘U—種新的方法以減少與細胞毒性劑給藥相關的器官毒性。 發(fā)明內(nèi)容依據(jù)本發(fā)明的 方案，本發(fā)明是一種M^月師細胞毒性布K^im體內(nèi)器官毒性的方法，i^^跑括同時纟好細胞毒性劑和紅細lfe^素(EPO;"活 性劑")，EPO的給藥量足以有效減少由于細胞毒性劑弓胞的器官毒性。 一般 來說，細胞毒性劑的給藥敏育噠到其治療艦，例如^中瘤量的拋中瘤劑。依據(jù)本發(fā)明的 方案，采用本發(fā)明的方法進行治療或保護的器官包括肝 臟、腦、腎臟和肺，特別^ 。依據(jù)本發(fā)明的其它的實施方案，棚中瘤劑，i^^的肺產(chǎn)生細胞毒性 的試劑。依賺定的實施方案，棚中瘤劑敏生素、亞硝基脲、^S磺離、胞苷 類似物、長春花生物堿、表鬼臼毒素、白細胞介素、葉^^似物或它們的組合。臓依據(jù)本發(fā)明的其它魏方案，本發(fā)明包括娜口上臓的活性劑制備 藥物以實施如J^M的方法。在本文的附圖和如下所述的詳述中更加詳細iW釋本發(fā)明的前述內(nèi)容和其 它實施方案和方面。


圖1用圖說明治療兩個翻之后EPO和博來霉素對肺功能的影響；和 圖2用圖說明治療四個翻之后EPO和博來霉素對肺功能的影響。
具體實施方式
釆用本發(fā)明方法治療的^ 包括人和動物(例如狗、貓、牛、馬)試 且雌哺乳動物^mo如本文所采用的，至i!^種化合物與至少一種第二化合物的同時給藥意味 著兩種化合物的給藥時間足，近，以便一種化^tl的存在改變另一種的生物 作用。至少兩種化合物可以同時或依次給藥。依次給藥使得化糊的給藥作為 一種在引入細胞毒性劑之前的預防性治療，有效減少了化療誘導的毒性，作為 治療以^^由于事先鄉(xiāng)好至^>~種細胞毒性劑弓胞的化療誘導的毒性。細胞毒性劑 一般來說，可與本發(fā)明結合使用的細胞毒性劑JitJtl中瘤劑。 如本文所采用的，術語棚中瘤劑或化療劑是是指優(yōu)先殺^l中瘤細胞或使ffl3I增 殖細胞的細胞周期中斷的試劑，治療上用來dlh或斷RI中瘤細胞的生長。如本
文所釆用的，化療包括單一JOT—種化療劑，化療劑的^S行治療。在需要治療的試驗對象中，化療可與外科治療或放療或與其它抗腫瘤治療方法聯(lián)合。拋嫩O^S那些本領^^:人員么A卩的物質(zhì)。作為范例,嫩i鵬， 但不限于，長春花生tffii、表鬼臼毒素、蒽環(huán)抗生素(anthracycline antibiotic)、 放線菌素D、普卡霉素、卩I^霉素、短桿菌肽D、鄉(xiāng)醇(T欲o鵬，Bristol Myets Squibb)、 ^MllM、細胞松弛素B、 fi^淀、，素、安叮啶(或"mAMSA") 和亞硝基脲。長春花生物^tt Goodman和Gilman的治療學的藥理學基礎， 1227—1280 (第7版，1985)(下文為"Goodman和Gilman")中有描述。長 春花生物堿的范例包括，但不限于，長春新堿、長# 0長春地辛。表鬼臼毒 素類在上文Goodman和Gilman， 1280—1281上文。表鬼臼毒素的范例包括，但 不限于，依托泊式、依托泊式正醌和替尼泊式。H^抗生素類在上文Goodman 和Gilman， 1283—1285中有描述。蒽環(huán)抗生素的范例包括，但不限于，柔紅 霉素、阿霉素、米托蒽醌和比生群。鵬菌素D，也稱為更生菌素在上文Goodman 和Gilman, 1281 — 1283中有描述。普卡霉素，也稱為光神霉素，在上文Goodman 和Gilman, 1287—1288中有皿。亞石tt^括，但不限于，環(huán)BM硝脲[CCNU] (CeeNU , Bristol Myers Squibb),憤芥[BCNU] (BiCNU , Bristol Myers Squibb),司莫司汀[甲基一CCNU]和 霉素。其它的化療劑包括，但不限于，鵬(Platino膨，Bristol Myers Squibb); 卡鉑(Paraplatin , Bristol Myers Squibb):絲裂霉素(Mutamycin , Bristol Myers Squibb);六甲蜜胺(Hexalen , U.S.Bioscience, Inc.);環(huán)磷酰胺(Cytoxan , Bristol Myers Squibb);白消安(MYLERAN , Gl欲oSmithKline); P^J^胞苷， 如ara—C，白細胞介素一2和氨甲蝶呤。正如本領,術人員所知，化療藥物的給藥方法^所使用的具體的化療 齊靦^^變化。IHg所J鯛的化^^，化^W的給藥例如可ii^湖(靜脈內(nèi)、 肌肉內(nèi)、腹膜內(nèi)、皮下、鞘內(nèi)、腫瘤內(nèi)、胸膜內(nèi))或口服。紅細胞生成素如本文所釆用的，人紅細胞M素(EPO)是指天然存在 的人紅細胞生成素糖蛋白以及重組的人紅細胞生成素(rHu^x)或epoetin a ， 可以Epogen⑧(Amgen公司，Thousand Oaks， CA)和Procritd) (Ortho生^/^ 術公司，Baritan, NJ)的形式商購獲得)。EPO的肽類似物也可用于本發(fā)明的 方法中。如本文所采用的，肽類似物為雖然不具有與EPO相同的錢,列， 但具有與，似的三維結構的那，合物。在與受體相互作用的蛋白分子中，相互作用發(fā)生在穩(wěn)定的三維肝的表麗到達位點。M:以適宜構像排列關鍵 的結合位點殘基，可根據(jù)已有的技術設計和合^i擬epo結合區(qū)必要的表面特征的肽。具有與EPO結合表面的分子拓撲結構基本相同的表面區(qū)域的分子 將會辦模擬EPO與EPO受體的相互作用。確定I太三維結構以及，似物的方 法已被A^f知，有時被稱為'合理的藥物設計技術'。參見例如Geysen的美國 專利號4， 833, 092; Nestor的美國專利號4， 859, 765; Pantoliano的美國專 利號4, 853, 871; Blalock的美國專利號4， 863， 857 (申請人特別說明本文 所弓l用的所有美國專利公開的內(nèi)容被全文弓I A^發(fā)明作為參考)。在本發(fā)明的方法中，模擬紅細胞生成素生物活性的肽(EPO受體肽配體) 可替代EPO。這些肽的序列可j樣錄EPO蛋白序列的片段，該片段能結合 和活化EPO受體。財卜，具有與EPO序列不相似的肽可用于本發(fā)明的方法， 這些欣模擬EPO的生物活性。Wrighton ^it了結合并活化M胞表面上的 紅細胞生成素受體的小分子肽的鑒定和表征，雖然這些肽序列不相似于EPO 的一 列(Wrighton等，科學273 : 458 (1996年7月26日))。這^ffit激動 劑用具有已鑒定的最小共有序列的14一氨基酸二硫鍵鍵合環(huán)肽表示。Livnah 等，科學273: 464 (1996年7月26日)描述了一種這樣的S太模擬物與,胞 生成素受體的復合物的結構。根據(jù)本發(fā)明方法所使用的EPO可M31本領^^:人員顯而易見的樹可適 宜的方式給藥。EPO可全身(例如靜脈內(nèi))鵬部(例如激到中瘤、緊圍繞 腫瘤的組織中^lt至含有腫瘤的解剖學區(qū)室中)給藥。其中全身性Mm化 療劑時，例如全身m^好內(nèi)皮做量的EPO時，可艦靜脈鄉(xiāng)。與化療劑結合^ffl的EPO的齊糧和給藥時間^lt^k取決于M望蹈lJ 的效果。本發(fā)明人發(fā)現(xiàn)根據(jù)EPO的給藥時間(在化療劑給藥的同時、之前或 之后)以及EPO的劑量，EPO能微內(nèi)皮免受化療劑的生長抑制的影響，或 能增強4柳化療劑所見到的內(nèi)皮生長抑制。如何艦常規(guī)實驗確定與特定化療 劑結合以獲得所需效果的EPO的給藥劑量和給藥時間對于本領域技術人員來 講皿而易見的。單次或者多次給藥的EPO的最大量還未確定。在三辛四周中給與髙達1， 500 單位/kg的齊懂而沒有由于EPO本身弓胞的毒性作用。參見Eschbach等，慢 ',毒癥的預防(Prevention of Chronic Uremia) (Friedman等旭)，F(xiàn)ield和 Wood Inc., Philadelphia, pp.148—155 (1989)。適宜的劑量可為約1，10或100 單位/kg (U/kg)到約200, 1000或2000U/kg。藥辦擠U依據(jù)已矢nfe術，±^活性化^/可以配制到藥 ;體中而給藥。參見例如Remington^ The Science And Practice of Pharmacy (第9版，1995)。在依據(jù)本發(fā)明的藥物制劑的制備中，活性化^t/ (包括其生ah可接受的鹽)一 般與一種可接受的載,混合。當然，載體必須是在一定意義上能與制劑中的 其它成分相容，^a^i^im無害。載體可以是固^^喊兩^tpw,且雌與化^tf己制鵬位劑量的帝躋!j，例如片劑，其可以含有0.01或0.5錢％到 95重量％或99龍％的活性化糊。在本發(fā)明的制劑中可以摻入一種鞭多種活性化合物，其可以利用《琉一種已知的主要由混合各成分(任選包括一種或更多種輔助成分)纟賊的制藥技術來制備。本發(fā)明的制劑包括那頓用于口服、艦、局部、頰(例如舌下)、陰道、 腸胃外(例如皮下，肌肉內(nèi)，皮內(nèi)或靜脈內(nèi))、局部(即皮膚和粘膜表面，包括氣道表面)和經(jīng)皮給藥，盡管在特定情況下;SiS宜的途徑?jīng)Q定于需要治療狀 況的IM和嚴重性以及所用的特定活性化合物的性質(zhì)。適用于口鵬合藥的制劑可以離散的單位形式存在，例如膠囊、扁囊劑、錠 齊蜮片劑，每種含有預定量的活性化，；作為粉^^粒；作為含7jC^E水 液體中的溶液^l懸浮液；或作為水包油或油包水乳狀液。這些制劑可采用任何 適當?shù)闹扑幏椒ㄖ苽?，該方魏縱到活性化合物和適當載體(其可以含有一 種或更多種如上戶腿的輔助成分)締合的步驟。 一皿說，本發(fā)明的制劑可以 ，均勻和緊密 活性化^1與液，細分的固^^#^兩者混賴恪，然 后，如果需要，使所得混合物成型。例如，片劑可il3i壓縮或模塑含有活性化 合物且任選具有一種或更多種輔助成分的粉^^粒來制備。壓制片劑在適當 的機器中艦壓縮流動形式的化合物例如任選與粘合劑、潤滑劑、惰性繊液 和/或表面活性齊lJ/分散劑混合的粉末或顆粒制備。模制片在適當?shù)臋C器中通過模,惰性液懶占合齊鵬濕的粉末化合物制備。適用于腸胃外給藥的本發(fā)明制劑包括活性化合物的無菌的含7jOR^7jC注射溶液，這種制劑皿與預定，者的血等滲。這種制劑可以包括抗氧化劑、緩
沖液、抑菌劑和使得制劑與預定接受者的血等滲的溶質(zhì)。含7K或^7JC無菌懸浮液可包,浮劑和增稠劑。制劑可存在于單位劑量或多劑量容器中，例如密封 的安瓿和管形瓶，可以儲存在冷凍f嫩凍千的)剝牛下，其僅僅需要在j柳之 前立即添加無菌的液體載體(例如含鹽的或注射用水)。臨時的注射溶液和懸 浮液可由先前描述的各種無菌粉末、顆粒和片劑制備。例如，本發(fā)明的一個方 面是皿一種在密封容器中以單位劑量形式存在的含有活性化^l或其鹽的可 alt的、穩(wěn)定的無菌組合物。,以凍干產(chǎn)物形式存在的化^t/或鹽，其可與 適宜的藥效可接受的載體重配以形皿于&^到 ^中的液體組合物。單位劑型^^^^勺io毫憩喲io克的化^ &。當化^KSk^s^t于水 時，可采用足量病理生理學上可接受的乳化劑以乳化含水載體中的化合物或 鹽。這種有用的乳化劑中的其中一種是磷脂醐旦堿。除了活性劑鄉(xiāng)鹽之外，藥物組^ti可以含有其它添加抓例如pH調(diào)節(jié) 劑。特別是，有用的pH調(diào)節(jié)劑包括，但不限于，酸(例如鹽酸)，鵬緩沖溶 液(例如乳,、醋,、磷,、擰檬,、硼,或葡萄糖,)。而且， 組合物可以含貧^^物防腐劑。有用的1t^物防腐齊抱括，但不限于，灘逮苯 甲酸甲酯、對羥基苯甲酸丙酯和苯甲醇。當制劑放置在設計用于多次劑量的管 形瓶中時，一般4頓微生物防腐劑。當然，正如所指出的，可以i頓本領域已 知的技術凍干本發(fā)明的藥物組^J。用下面非P艮定性的實施例詳細說明本發(fā)明。實施例i治療方案用各種劑量的單獨的EPO以及與博來霉素的^來治療年齡在7和12個 星期之間，重約20克的C57B16雌鼠。用安慰劑、^^f蟲的EPO(540 ug/鼠，i. p.)、與蟲的博來霉素(0,25-0.75 u g/鼠，i,p,)、或EPO和博來霉素的^^h 星期醫(yī)治動物兩次。在2周，4周和6周對動 行分等級(048毫效新) 的甲基膽繊l微。 時，4頓全身^f只描記鄉(xiāng)uxco， Niskayuna^ NY)測定肺 功能。這是一種非介入性的方法，其利用一個配有兩個呼吸速率計 (pneumotachs)和一個與計OTl^接的傳感器的透明塑料動物室。iM分析儀 器評價肺部的阻抗和動力順應性，該分析儀翻懂在吸氣和Bfn過程中，在相 等的肺容積下的、 ^卩壓力微("等容量法")。動物運動和非典型性呼吸(例
如，"用力吸氣(sniffing)")產(chǎn)生的偽M過鵬可調(diào)整為適合單個動物的潮 氣量和吸氣時間的參數(shù)的計靴的分析而忽略。研究全身^f只描記法后發(fā)現(xiàn)它 是小鼠S市部功能的有鵬標。(Hamelmann等，Am. J.Respir.Crit. CareMed.156) 3 Ptl) 776-75(1997)。實施例2試驗結果已發(fā)現(xiàn)博來霉素會斷gl市功能，這一點艦增加的間歇(Tenh"，氣道阻力 的替代物)改變可以反映出來。用博來霉素治療兩周，每周兩次，并進行分等級 (0—48毫3^iO的甲基膽繊臓的糊與對照^I相t傲(參見圖l), Penh 值惡化了2,6倍。無博來霉素的EPO給藥促働市功倉鵬,加。但是，纟Si博 來霉素和紅細胞生成素的聯(lián)合治療的小鼠比單多OT博來霉素治療的小鼠的肺功 能好60%。當治療4周賺査肺部功能，可以觀察到Penh值有相似歡(參 見圖2)。前面的內(nèi)容是對本發(fā)明的說明，不應認為m它的限定。本發(fā)明用下述權 禾腰求來限定，權利要求的等同內(nèi)容應被包括在其中。
權利要求
1.紅細胞生成素在制備用于與對試驗對象的肺產(chǎn)生細胞毒性的抗腫瘤劑或化療劑聯(lián)合給藥而減少服用所述抗腫瘤劑或化療劑的試驗對象體內(nèi)化療誘導的肺毒性的藥物中的用途。
2. 依據(jù)權利要求1的用途，其中戶; ^中瘤劑是博來霉素。
3. 依據(jù)權利要求l的用途，其中所述藥物含約1U/kg到約2000 U/kg紅細胞 素。
4. 依據(jù)權利要求1的用途，其中戶腿藥物含約1U/kg到約200 U/kg紅細胞生成素。
5. 依據(jù)權利要求l的用途，其中戶腿藥物制備為口服、飾、局部、頰、 陰道、腸胃外、局部離5皮制劑及其組合。
全文摘要
本發(fā)明涉及紅細胞生成素改善化療誘導的體內(nèi)毒性。本發(fā)明描述了一種減少服用細胞毒性劑的試驗對象的器官毒性的方法，該方法包括同時給予細胞毒性劑紅細胞生成素(EPO)，給予的EPO量能有效減少由于細胞毒性劑引起的肺部毒性。
文檔編號A61K38/22GK101152565SQ20071015338
公開日2008年4月2日 申請日期2002年4月8日 優(yōu)先權日2001年4月9日
發(fā)明者G·西古納斯, P·梅爾霍普 申請人:東卡羅萊娜大學